Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«Тихоокеанский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения Российской Федерации
Кафедра Микробиологии и вирусологии
|
УТВЕРЖДЕНО на заседании кафедры протокол №___ от «___»__________20__г Заведующая кафедрой Шаркова В.А. д.м.н., профессор |
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВ
к практическому занятию
на тему: «Культивирование прочих микроорганизмов – грибов, простейших, риккетсий, хламидий. Определение чувствительности микробов к лекарственным веществам.
Основы химиопрофилактики и химиотерапии»
Модуль ________Общая микробиология________________________________________
учебной дисциплины (модуля) _____микробиология, вирусология__________________
для специальности___ 060101 Лечебное дело_____________________________
(шифр-наименование специальности)
курс ___2_______ семестр ____4_____
|
Составитель: Зайцева Е.А., д.м.н., профессор (Ф.И.О., ученая степень, звание, должность) Рецензент: Шаркова В.А., д.м.н., профессор (Ф.И.О., ученая степень, звание, должность) |
Владивосток - 2013г.
В результате использования для лечения и предупреждения инфекционных заболеваний и их рецидивов различных химиотерапевтических средств, в том числе и антибиотиков, резко сократилась смертность от инфекционных болезней, снизилась тяжесть их течения, уменьшилось количество постинфекционных осложнений и хронизация болезней. Но это имеет место только в случаях адекватного назначения лекарственных препаратов, для чего необходимы знания основных принципов химиотерапии и химиопрофилактики, умение подобрать больному препарат оптимальной концентрации и вида при обязательном определении чувствительности к нему выделенных от больного возбудителей. Знакомству с ними и посвящена вторая часть темы настоящего занятия.
Общая цель: изучение темы направлено на формирование компетенций по ФГОС-03 по специальности 060101 – Лечебное дело - познакомиться с принципами культивирования и выделения чистых культур прочих возбудителей инфекций: спирохет, лептоспир, грибов, хламидий, простейших, риккетсий (ПК-6); с основами химиотерапии и химиопрофилактики, с механизмами формирования лекарственной устойчивости и знакомство с методами ее определения (ПК-6).
Сформировать способность и готовность использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности (ОК-1, ПК-31, ПК-32), формировать умение работать с научной литературой, анализировать информацию, вести поиск, выделять основные положения, делать выводы, развивать личностные качества (ОК-3, ОК-5, ПК-31, ПК-32).
Конкретные цели и задачи.
После изучения темы студент должен:
«Знать» особенности культивирования и выделения чистых культур спирохет, лептоспир, грибов, хламидий, микоплазм, простейших, риккетсий; физиологию этих микроорганизмов; основные механизмы действия химиотерапевтических средств и механизмы формирования лекарственной устойчивости.
«Уметь» - выбрать методы диагностики и оценивать их результаты; проводить медицинские манипуляции в асептических условиях.
«Владеть» методами определения чувствительности к антимикробным препаратам (с помощью дисков, серийных разведений); методами работы с лабораторным оборудованием, интерпретацией результатов исследования.
4. Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:
4.1. Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний.
I раздел:
1. Особенности культивирования спирохет (питательные среды, температурный оптимум, энергия роста, индикация).
2. Культивирование микоплазм, хламидий, риккетсий (основные принципы).
3. Культивирование грибов (среды, температурный режим, индикация).
4. Культивирование простейших (общие принципы).
II раздел
1. Понятие и основные принципы химиотерапии и химиопрофилактики.
2. Требования к химиопрепаратам:
3. Факторы, влияющие на эффективность антимикробной терапии:
4. Бактериостатическая и бактерицидная активность препаратов.
5. Оценка эффективности антимикробных препаратов: методы.
6. Классификация антибактериальных средств по разным критериям.
7. Противогрибковые, противопротозойные, противовирусные препараты.
8. Основные механизмы действия химиотерапевтических средств.
9. Механизмы формирования лекарственной устойчивости.
10. Методы определения микробов к антимикробным агентам (метод дисков, серийных разведений, бороздки, лунок, импрегнации). Принципы ускоренных методов и их примеры.
11. Методы определения концентрации лекарственных средств в биосубстратах крови: моче и других жидкостях, тканях организма.
12. Понятие о дез. средствах, антисептиках.
При подготовке к практическому занятию студенту необходимо в рабочей тетради заполнить протокол практического занятия по теме (зарисовать препараты, составить комплексные таблицы, развернутые схемы, заключения и т.д.):
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ВЫПОЛНЕНИЮ ПРАКТИЧЕСКОЙ РАБОТЫ С ПОЛНЫМ РЕГЛАМЕНТОМ ПРОТОКОЛА ЗАНЯТИЯ И ЕГО ОФОРМЛЕНИЕМ
|
№ п/п |
Наименование учебного элемента (задания) |
Методическое решение |
Регламент протокола |
|
1. |
Требования к антимикробным препаратам |
Медицинская микробиология. Под ред. Покровского В.И., Поздеева O.K., M., 1999. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология. М., 2005 |
Записать формулу химиотерапевтическою индекса, его значения для противомикробных веществ при самоподготовке дома. Зафиксировать отличия от дезосредств |
|
2. |
Классификация антибактериальных средств |
Поздеев O.K. Медицинская микробиология. M., 2006. С. 165. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология. М., 2005 |
При самоподготовке дома и зафиксировать в протоколе: 1. Перечень антибиотиков животного, микробного и растительного происхождения. 2. Систематику антибиотиков по группам. 3. Составить перечень примеров фитонцидоактивных растений |
|
3. |
Препараты противогрибковые, противопротозойные, химиотерапия вирусных инфекций |
Поздеев O.K. Медицинская микробиология. M., 2006. С. 166-174. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология. М., 2005. С.180-182 |
При самоподготовке дома 1. Составить классификаторхимиопрепаратов, применяемых в терапии указанных инфекций |
|
4. |
Механизм действия антибиотиков |
Поздеев O.K. Медицинская микробиология. M., 2006. С. 160-165 |
Составить классификацию |
|
5. |
Механизмы формирования лекарственной устойчивости |
Поздеев O.K., Медицинская микробиология. M., 2006. С. 174 - 176. |
Составить перечень возможных механизмов лекарственной устойчивости микробов |
|
6. |
Методы определения чувствительности микробов к антимикробным агентам
|
Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. Биргера М.О. М., 1982. С. 180 - 181. Приложение 1. |
При самоподготовке дома: 1. Составить принципиальную схему методов определения чувствительности к антибиотикам. На занятии: 1. Поставить методики, оценить, дать заключение, зарисовать. 2. Зарисовать по готовым результатам рост антибиотикорезистентных и зависимых культур при испытании чувствительности к лекарственному препарату. |
|
7. |
Определение концентрации антибиотиков в крови, моче, и других биожидкостях, тканях организма |
Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. Биргера М.О. М., 1982. С.172 – 180. |
Составить схему и зарисовать результаты определения концентрации антибиотиков в жидких субстратах принимавшего их человека на примере пенициллина с использованием индикаторной культуры стафилококка S. aureus № 209Р |
|
8. |
Особенности культивирования: а) спирохет, б) лептоспир, в) грибов |
Приложение 2 - 6. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. M., 2005. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методикам исследования. М., 1982. |
Составить схему микробиологического исследования со списком используемых средств при самоподготовке дома с коррекцией на занятии: - гнойного отделяемого твердого шанкра; - воды из озера; - волоса, пораженного грибом дерматофитом: - мокроты больного с предварительным диагнозом кандидоза. |
|
9. |
Общие принципы культивирования: - микоплазм, - хламидий, - риккетсий, - простейших |
Приложение 2 - 6 |
Составить таблицу методов культивирования риккетсий и хламидий, список питательных сред, условий для роста микоплазм. Зарисовагь характер их роста. |
|
10. |
Тест-контроль усвоения темы |
На занятии выбрать правильный ответ (письменно). |
|
№ п/п |
Название этапа |
Цель этапа |
Время |
|
1 |
2 |
3 |
4 |
|
5-10 % |
||
|
|
Организация занятия |
Мобилизовать внимание студентов на данное занятие |
|
|
|
Определение темы, мотивации, цели, задач занятия |
Раскрыть практическую значимость занятия в системе подготовки к профессиональной деятельности, сформировать мотив и, как следствие, активизировать познавательную деятельность студентов |
|
|
|
||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
|
|
Контроль исходных знаний, умений и навыков |
Проверка готовности студентов к занятию, выявление исходного уровня знаний, умений и навыков |
|
|
|
Общие и индивидуальные задания на СРС в учебное время |
Дифференцированное ориентирование студентов к предстоящей самостоятельной их работе |
|
|
|
Демонстрация методики |
Показать ориентировочную основу действия (ООД) |
|
|
|
Управляемая СРС в учебное время |
Овладение необходимыми общекультурными, профессиональными компетенциями, исходя из конкретных целей занятия |
|
|
|
Реализация планируемой формы занятия (семинар, практическая работа) |
Контроль результатов обучения и оценка с помощью дескрипторов |
|
|
|
Итоговый контроль |
Оценивание индивидуальных достижений студента, выявление индивидуальных и типичных ошибок и их корректировка |
|
|
5-10 % |
||
|
|
Подведение итогов занятия |
Оценка деятельности студентов, определение достижения цели занятия |
|
|
|
Общие и индивидуальные задания на СРС во внеучебное время |
Указание на самоподготовку студентов, ее содержание и характер |
Работа с контрольно-обучающими тестами
Выбрать правильный ответ:
1. Что определяет резистентность микроорганизмов к лекарственным препаратам?
а) наличие плазмид лекарственной устойчивости
б) уменьшение числа, либо отсутствие рецепторов на поверхности клетки для
взаимодействия препарата с микробом
в) индуцирована применением антимикробных препаратов, селекция
устойчивых штаммов, с удалением чувствительных
г) спонтанные мутации генома бактерии и/или хозяина
д) возможны все механизмы
2. Что такое диско-диффузионный метод (метод Кирби-Баэура)?
а) тест определения концентрации препарата в сыворотке, ингибирующей рост
микроорганизмов
б) простой метод определения чувствительности клинически значимых
микроорганизмов к антимикробным агентам
в) стандартный тест определения антимикробной чувствительности, зависящей от
качества и РН среды, температуры, концентрации препарата и свойств тест-культуры
г) тест определения чувствительности или резистентности микроорганизмов к
препаратам
3. На какой день определяют характер антимикробного бактерицидного действия?
а) через 18 - 24 часа
б) через 4 - 6 суток
в) через 6 -8 часов
г) через 2 – 3 суток
4. На какой день определяют характер антимикробного бактериостатического действия?
а) через 18 - 24 часа
б) через 4 - 6 суток
в) через 4 – 6 часов
г) через 2- 3 суток
5. Что необходимо для определения концентрации антибиотика в биосубстрате:
а) контрольный ряд с разведенным антибиотиком, равным искомому
б) физиологический раствор
в) все перечисленное
г) дистиллированная вода
6. Какие культуральные свойства характерны для представителей семейства Mycoplasmataceae?
а) образуют видимые колонии на простых питательных средах
б) для роста требуют сложных сред, дополненных внесением холестерина
в) образуют характерные колонии желтого цвета
г) нет правильного ответа
7. Какие из упомянутых микроорганизмов способны репродуцироваться во внеклеточной среде?
а) Rickettsia rickettsii
б) Chlamidia psittaci
в) Chlamidia trachomatis
г) Coxiella burnettii
д) S. аureus
8. Каким методом идентифицируют дрожжи?
а) микроскопия окрашенного мазка
б) визуализация роста культуры
в) определение углеводолитической активности
г) все вышеперечисленное
9. Преимущественно каким методом определяют гифальные грибы?
а) микроскопия окрашенного мазка
б) определение культуральных свойств
в) микроскопия мазка в ультрафиолетовом свете
г) определения чувствительности к антимикробным препаратам
10. При каком значении химиотерапевтического индекса (ХТИ) лекарственный препарат считается эффективным:
а) ХТИ > 3
б) ХТИ < 1
в) ХТИ = 1
г) ХТИ = 0
11. При учете результатов диско-диффузионного метода обнаружены чувствительные к антибиотику бактерии. Это значит:
а) зона подавления роста бактерий вокруг диска большая
б) зона подавления роста вокруг диска отсутствует
в) наиболее интенсивный рост вблизи диска с антибиотиком и на нем
г) нет правильного ответа
12. Каким методом культивируют спирохеты:
а) на искусственных питательных средах
б) интротестикулярно
в) в развивающемся курином эмбрионе
г) все вышеперечисленное
13. Каким методом можно определить присутствие в объекте культивирования лептоспир
а) метод темного поля
б) окраска по Здродовскому
в) стереомикроскопия
г) по Граму
14. Каким методом культивируют хламидии:
а) на искусственных питательных средах
б) интротестикулярно
в) в культуре клеток
г) нет правильного ответа
15. Каким методом можно определить присутствие в объекте культивирования риккетсии
а) окраска по Граму
б) окраска по Романовскому-Гимзе
в) метод темного поля
г) метод люминесценции
д) окраска по Здродовскому
е) стереомикроскопия
16. Основной механизм действия β-лактамных антибиотиков сводится:
а) к подавлению синтеза клеточных стенок
б) к нарушению синтеза белка
в) к нарушению синтеза ДНК
г) к нарушению функций рибосом
17. Наиболее частым механизмом устойчивости к антибиотикам является:
б) выведение антибиотика из клетки
в) модификация мишени
г) энзиматическая инактивация антибиотика
18. Что определяет резистентность микроорганизмов к лекарственным препаратам
а) наличие плазмид лекарственной устойчивости
б) уменьшение числа, либо отсутствие рецепторов на поверхности клетки для
взаимодействия препарата с микробом
в) применение антимикробных препаратов с селекцией устойчивых штаммов,
удалением чувствительных
г) возможны все механизмы
19. Антибиотиком, выделенным из грибов, является
а) тетрациклин
б) полимиксин
в) пенициллин
г) грамицидин
20. В состав пенициллинов входит
а) бета-лактамное кольцо
б) макролактоновое кольцо
в) углеводные остатки
г) пептиды
Источники информации:
Список рекомендуемой литературы:
Основная:
1. Лекция по теме.
2. Методическая разработка по теме.
3. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2006. С.160 - 182.
4. O.K. Поздеев. Медицинская микробиология. Под ред. В.И. Покровского. М., 2006. С. 155 - 181.
Дополнительная:
1. Красильников А.П., Романовская Т.Р. Микробиологический словарь-справочник. Минск, 1999.
2. Машковский М.Д. Справочник лекарственных средств. М., 1999.
3. Медицинская микробиология. Под ред. Королюка А.М., Сбойчакова В.Б. С-Пб, 2002. С. 58 - 67.
4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Воробьева А.А. М., 2006.
5. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования под ред. М.О. Биргера. М., 1982. С. 170-182.
6. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания. МУК 4.2.1890-04 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 04.03.2004).
а) наглядные пособия (таблицы, схемы, слайды и т.п.)
б) приборы, аппараты, оборудование и др.
в) технические средства обучения (проектор, компьютер и т.п.)
Оценивание уровня сформированности компетенций обучающихся проводится по балльно – рейтинговой системе.
Приложение 1
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К
АНТИБИОТИКАМ МЕТОДОМ ДИСКОВ
В настоящее время вместо классического используют тест Кирби-Бауэра. Диски из фильтрованной бумаги, пропитанные препаратами в известной концентрации, наносят на поверхность плотной питательной среды (2% агар, на переваре Хоттингера с 0,11-0,13% аминного азота; чаще - среда АГВ), предварительно засеянной исследуемой культурой.
Инкубируют при +370С в течение времени, необходимого для роста испытуемого микроба (обычно 18 -24часа). Измеряют диаметры подавления роста культур вокруг каждого диска, включая диаметр самого диска. Сравнивают со шкалой активности каждого препарата и дают заключение о высокой чувствительности, умеренной чувствительности и устойчивости микроорганизмов к тому или иному антимикробному агенту. Штаммы, зависимые от антибиотика, растут к диску вплотную, иногда особенно густо и забираясь на него.
1. Составить список и схематически зарисовать прочие методы определения чувствительности микробов к лекарственным веществам.
2. Составить схему ускоренных методов устойчивости к антибиотикам на биохимической, гемолитической и химической основах.
3. Составить схему определения концентрации антибиотиков в биосубстратах.
Приложение 2
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ СПИРОХЕТ
1. Культивирование спирохет на питательных средах
Трепонемы с большим трудом культивируются на сложных питательных средах. При длительном выращивании на искусственных питательных средах они теряют вирулентность. Такие штаммы трепонем называются культуральными.
2. Культивирование в развивающемся 7-8 дневном курином эмбрионе.
3. Интратестикулярное заражение кролика-самца и культивирование трепонем в яичках.
Питательные среды для культивирования лептоспир
Приложение 3
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ГРИБОВ
Питательные среды для культивирования грибов:
1. Неселективные среды:
а) сусло жидкое (разводят водой),
б) среда Сабуро жидкая (вода, глюкоза, пептон),
в) сусло-агар (добавляют 2-3% агар-агара);
- картофельно-глюкозный агар (отваренный в течение 1 часа картофель растирают, разбавляют водой, процеживают, добавляют глюкозу и агар),
2. Селективные среды, дополненные одним или комплексом антибиотиков: пенициллином (20 ЕД/мл), стрептомицином (40 ЕД/мл) или гентамицином (0,5 мкг/мл), левомицитином (16 мг/мл).
Приложение 4
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОПЛАЗМ
1. 2% сердечно-мозговой агар.
2. Мясо-пептонный бульон с 30% сывороткой крови или асцитической жидкости.
В среды добавляют нативную сыворотку, углеводы, витамины, соли, а для угнетения роста сопутствующих бактерий - пенициллин и ацетат калия.
Для культивирования уреаплазм используют среды, содержащие гидролизат бычьего сердца, гидролизат казеина, пекарские дрожжи и красители: кристаллический и бромтимоловый синий. Среды дополняют 10% лошадиной сывороткой, 0,05% мочевины, 2% а-цистеина и антибиотиков (пенициллин).
Рост в виде яичницы-глазуньи.
Приложение 5
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ПРОСТЕЙШИХ
Затем засевают материал на одну из сред:
Приложение 6
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ РИККЕТСИЙ
1. В развивающихся 7 - 11 дневных куриных эмбрионах: заражение производят в желточный мешок, температура и продолжительность выращивания зависят от вида риккетсий.
2. В культуре клеток:
- первичные однослойные культуры клеток (чаще – трипсинированные культуры) куриных, мышиных, крысиных, человеческих фибробластов;
- перевиваемые культуры клеток (опухолевых или нормальных тканей);
- трипсинизированные культуры клеток почечного эпителия; первичные культуры ретикулярных клеток макрофагов (из костного мозга, селезенки).
3. В организме чувствительных животных:
- легочный реккетсиоз у мышей (интраназальное введение материала молодым мышам);
- легочный риккетсиоз у кроликов (введение в трахею);
- перитониальный риккетсиоз у морских свинок и кроликов (внутрибрюшное введение);
4. Заражение вшей микроинъекциями: per rectum методом Вейгеля (введение заразного материала через стеклянный капилляр в кишечник членистоногих под контролем через бинокулярную лупу с увеличителем в 10-15 раз или per os (на кормилках);
- методами непосредственного кормления насекомых на больных добровольцах.