Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Занятие 24
Витамины
Цель занятия: изучить специфические биохимические функции витаминов, их роль в метаболизме.
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
Задачи
1 Какие вещества могут полностью заменить пищевой метионин:
а) бетаин; б) цистеин; в) гомоцистеин; г) витамин B6; д) орнитин; е) карни тин; ж) карнозин; и) креатин?
2 Действие яичного белка авидина связано с тем, что он:
а) растворяет сгустки фибрина; б) препятствует всасыванию биотина; в) блокирует образование холина из бетаина; г) действует как ингибитор трипсина; д) является антивитамином Н; е) является антивитамином А; ж) является антивитамином Е; з) является антивитамином К?
3 Какой метаболический путь страдает от дефицита биотина:
а) синтез кетоновых тел из ПВК; б) образование лактата из глюкозы; в) образование глюкозы из лактата; г) синтез ЖК; д) окисление ЖК; е) элон гация ЖК; ж) синтез кетоновых тел из ЖК?
4 В какие превращения включается аденозин-кобаламин:
а) малонил-КоА ацетил-КоА; б) -кетоглутарат сукцинил-КоА; в) ацетил-КоА ОМГ-КоА; г) пропионил-КоА метилмалонил-КоА; д) метилмалонил-КоА сукцинил-КоА; е) сукцинил-КоА порфобилиноген; ж) ПВК ацетил-КоА?
5 1,25-дигидрохолекальциферол (кальцитриол) является активной фор мой:
а) витамина А; б) витамина B1; в) витамина С; г) витамина D; д) витамина К; е) витамина В2; ж) витамина Н; з) витамина U?
6 Триада «Д» – деменция, диарея, дерматит – связана с дефицитом:
а) витамина А; б) витамина B12; в) витамина C; г) биотина; д) ниацина; е) тиамина; ж) холекальциферола; з) пиридоксаля?
7 Какие соединения имеют структурное сходство с витамином К:
а) коэнзим Q; б) викасол; в) тироксин; г) салицилаты; д) витамин Е; е) гистидин; ж) дикумарол; з) фактор Кристмаса?
8 Какие из кофакторов не нуждаются в специфических витаминах-пред шественниках:
а) FAD; б) NAD; в) АТФ; г) гем; д) АПБ; е) NAD; ж) FМN; з) HS KоА?
9 Кальцитриол увеличивает в крови уровень:
а) Mg2+; б) Cu2+; в) Ca2+; г) Fe2+; д) Na+; е) К+; ж) Н2РО42-; з) Сl-?
10 В животных тканях триптофан является предшественником:
а) HS KоА; б) никотинамида; в) SAM; г) FAD; д) АТФ; е) NADР; ж) FМN; з) NAD?
11 Какие из витаминов необходимы при окислении пропионата:
а) B12; б) пантотеновая кислота; в) биотин; г) фолиевая кислота; д) ти амин; е) рибофлавин; ж) ниацин; з) пиридоксин?
12 Производные фолиевой кислоты являются коферментами в реакциях:
а) сер гли; б) образования мочевины; в) образования пиримидинов; г) ЦТК; д) образования пуринов; е) сер креатин; ж) сер холин; з) сер гем?
13 Для реакций гидроксилирования необходимы:
а) NADPH; б) тетрагидрофолиевая кислота; в) O2; г) H2O2; д) АТФ; е) ас корбат; ж) HS KоА; з) тиамин?
14 Длительная закупорка желчных протоков является причиной развития:
а) остеомаляции; б) синдрома бери-бери; в) куриной слепоты; г) мегалобластической анемии; д) синдрома трех "Д"; е) геморрагий; ж) хейлоза; з) диареи?
15 Найдите соответствие: дефицит витаминов – проявления:
|
А) аскорбиновой кислоты; |
а) пеллагра; |
|
Б) никотиновой кислоты; |
б) бери-бери; |
|
В) тиамина; |
в) геморрагии новорожденных; |
|
Г) D; |
г) гипопротромбинемия; |
|
Д) K; |
д) гипокальциемия? |
16 Найдите соответствие: витамин – реакции:
|
А) тиамин; |
а) карбоксилирования пропионата; |
|
Б) пантотеновая кислота; |
б) трансаминирования аминокислот; |
|
В) никотиновая кислота; |
в) транскетолазные; |
|
Г) пиридоксин; |
г) активации пальмитата; |
|
Д) биотин; |
д) окисления лактата? |
17 Найдите соответствие: дефицит соединения – состояние:
|
А) витамина А; |
а) мегалобластическая анемия; |
|
Б) рибофлавина; |
б) гипохромная анемия; |
|
В) железа; |
в) эндемический зоб; |
|
Г) фолата; |
г) ксерофтальмия; |
|
Д) иода; |
д) хейлоз? |
18 Найдите соответствие: метаболические пути – витамин:
|
А) ЦТК; |
а) В1; |
|
Б) пентозный цикл; |
б) РР; |
|
В) ГНГ из пирувата; |
в) В2; |
|
Г) ГНГ из аминокислот; |
г) В6; |
|
Д) анаэробный гликолиз; |
д) Н? |
19 Найдите соответствие: фермент – кофактор:
|
А) трансальдолаза; |
а) биотин; |
|
Б) метилмалонил КоА-мутаза; |
б) аденозилкобаламин; |
|
В) -кетоглутаратдегидрогеназа; |
в) Fe и Cu.; |
|
Г) цитохромоксидаза; |
г) тиамин; |
|
Д) ацетил коа карбоксилаза; |
д) ниацин? |
20 Найдите соответствие: кофактор – фермент:
|
А) пиридоксальфосфат; |
а) трансаминаза; |
|
Б) биотин; |
б) сукцинатдегидрогеназа; |
|
В) тиаминпирофосфат; |
в) пируваткарбоксилаза; |
|
Г) витамин B2; |
г) трансформилаза; |
|
Д) ТГФК; |
д) пируватдегидрогеназа? |
Лабораторные работы
Лабораторная работа № 1. Качественные реакции на витамин B1
Витамин B1 состоит из пиримидинового и тиазольного колец. Он получил название тиамина, поскольку содержит серу и азот:
Тиаминпирофосфат, а в некоторых тканях – тиаминтрифосфат (соответственно ТПФ или ТТФ), является коферментной формой тиамина и синтезируется в печени путем прямого переноса фосфата от АТФ:
ТПФ в составе ферментов углеводного обмена участвует в окислитель ном декарбоксилировании -кетокислот и в транскетолазной реакции. Его недостаток вызывает поражение периферической нервной системы, сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечного тракта. При этом в крови накапливаются пировиноградная кислота и другие -кетокислоты.
Реакция окисления
Принцип метода. В щелочной среде тиамин окисляется феррицианидом калия в тиохром, обладающий при ультрафиолетовом облучении синей флюоресценцией. Реакция протекает по следующей схеме:
Ход работы. К 1 капле 5 %-го раствора тиамина прибавляют 5–10 капель 10 %-го раствора едкого натра, 1–2 капли 5 %-го раствора феррицианида калия и взбалтывают. Прогрев флюороскоп в течение 10 минут, наблюдают синюю флюоресценцию при облучении раствора ультрафиолетовыми лучами.
Диазореакция
Принцип метода. В щелочной среде тиамин с диазореактивом образует сложное комплексное соединение оранжевого цвета.
Ход работы. К диазореактиву, состоящему из 5 капель 1 %-го раствора сульфаниловой кислоты и 5 капель 5 %-го раствора нитрата натрия добавляют 1–2 капли 5 %-го раствора тиамина и затем по стенке, наклонив пробирку, осторожно добавляют 5–7 капель 10 %-го раствора бикарбоната натрия. На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжевого цвета.
Выводы по результатам работы.
Лабораторная работа №2. Качественная реакция на витамин B2
Рибофлавин состоит из изоаллоксазинового ядра и спирта рибитола:
Рибофлавин входит в состав простетической группы флавиновых ферментов (флавопротеидов – FP) в виде коферментов флавинадениндинуклеотида (FAD) и флавинаденинмонодинуклеоитда (FMN). Флавопротеиды катализируют окислительно-восстановительные реакции. Они участвуют в окислении D-аминокислот, -окислении жирных кислот, в работе дыхательных цепей митохондрий и микросом и др. Биологическое действие флавиновых ферментов связано с наличием окислительно-восстановительных свойств изоаллоксазинового кольца.
При недостатке в организме В2 возникают поражения слизистых в виде хейлита, глоссита и др.
Принцип метода. Окисленная форма витамина В2 представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В2 основана на способности его легко восстанавливаться, при этом раствор витамина В2, обладающий желтой окраской, приобретает сначала розовый цвет за счет образования промежуточных соединений, а затем обесцвечивается, так как восстановленная форма витамина В2 бесцветна.
Ход работы. В пробирку наливают 10 капель раствора витамина В2, добавляют 5 капель концентрированной HCl, опускают зернышко металличес кого цинка. Начинается выделение пузырьков водорода, восстанавливающего рибофлавин, жидкость при этом постепенно розовеет и обесцвечивается. Сравнивают обе формы витамина В2 по флюоресценции, поместив каждую пробирку под освещение флюороскопа.
Выводы по результатам работы.
Лабораторная работа №3. Качественная реакция на витамин В6
Группа витамина В6: пиридоксол, пиридоксаль, пиридоксамин – являются производными 3-оксипиридина, носят общее название пиридоксина и обладают активностью витамина В6.
В организме эти соединения подвергаются фосфорилированию при участии АТФ с образованием коферментов фосфопиридоксаля, фосфопиридоксамина, которые входят в состав ферментов, участвующих в белковом обмене, в реакциях трансаминирования, декарбоксилирования аминокислот, десульфинирования, дегидратирования аминокислот, в образовании витамина PP из триптофана и в некоторых других реакциях.
При недостатке витамина В6 у животных прежде всего нарушается обмен белков, у человека недостаточность этого витамина встречается редко.
Принцип метода. Витамин В6 при взаимодействии с раствором хлорного железа образует комплексную соль типа фенолята железа красного цвета.
Ход работы. К 5 каплям 1 %-го раствора витамина В6 приливают равное количество 1 %-го раствора хлорного железа и перемешивают. Развивается красное окрашивание.
Выводы по результатам работы.
Лабораторная работа №4. Качественная реакция на витамин E
Витамин E существует в виде нескольких изомеров: , и -токоферо лов, которые отличаются друг от друга порядком расположения метильных групп в бензольном кольце. Токоферолы – маслянистые жидкости, растворимые в растительных маслах и жировых растворителях.
Витамин E является мощным антиоксидантом. Некоторые производные витамина E участвуют в окислительно-восстановительных реакциях, связанных с окислительным фосфорилированием.
Витамин E может депонироваться в мышцах и поджелудочной железе.
Принцип метода. Спиртовой раствор -токоферола окисляется хлоридом железа (Fe3+) в токоферилхинон красного цвета:
Ход работы. В сухую пробирку берут 4–5 капель 0,1 %-го спиртового раствора -токоферола, прибавляют 0,5 мл 1 %-го раствора хлорида железа, тщательно перемешивают. Содержимое пробирки приобретает красное окрашивание.
Выводы по результатам работы.
Лабораторная работа № 5. Количественное определение витамина C
Биологическая роль аскорбиновой кислоты в организме исключительно важна и многообразна. Она участвует в окислительно-восстановительных процессах и связана с системой глутатиона.
Аскорбиновая кислота участвует в синтезе стероидных гормонов в коре надпочечников и катехоламинов в мозговом слое надпочечников и необходима для процесса гидроксилирования как кофактор ферментов гидроксилаз, например дофамингидроксилазы и др. Она участвует в образовании тетрагидрофолиевой кислоты из фолиевой кислоты, процессинге коллагена (гидроксилировании лизина в оксилизин, пролина в оксипролин), ускоряет всасывание железа, а также активирует фермент желудочного сока пепсиноген, что особенно важно при недостатке соляной кислоты в желудочном соке.
Принцип метода. Метод основан на способности витамина C восстанав ливать 2,6-дихлорфенолиндофенол (2,6 ДХФИФ – краска Тильманса), который в кислой среде имеет красную окраску, при восстановлении – обесцвечивается, а в щелочной среде окраска синяя. Для предохранения витамина C от разрушения исследуемый раствор титруют в кислой среде щелочным раствором 2,6 ДХФИФ до появления розового окрашивания.
Для расчета содержания аскорбиновой кислоты в продуктах (капуста, картофель, хвоя, шиповник и др.), используют формулу
|
где X |
– содержание аскорбата в 100 г продукта, мг; |
|
0,088 |
– коэффициент пересчета; |
|
А |
– результат титрования 0,001 н раствором 2,6 ДХФИФ, мл; |
|
Б |
– объем экстракта, взятый для титрования, мл; |
|
В |
– количество продукта, взятое для анализа, мг; |
|
Г |
– общее количество экстракта, мл; |
|
100 |
– пересчет на 100 г продукта. |
Ход работы.
1 Определение содержания витамина C в капусте.
Навеску капусты – 1 г тщательно растирают в ступке с 2 мл 10 %-го раствора соляной кислоты, объем доводят до 10 мл и фильтруют. Отмеривают для титрования 2 мл фильтрата, добавляют 10 капель 10 %-го раствора соляной кислоты и титруют 2,6 ДХФИФ до розовой окраски, сохраняющейся в течение 30 с.
По формуле, указанной выше, рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты в 100 г продукта (в мг). По норме их должно быть (в мг): капуста – 25–60; хвоя – 200–400; шиповник – 500–1500.
2 Определение содержания витамина C в картофеле.
Взвешивают 5 г картофеля, тщательно растирают в ступке с 20 каплями 10 %-го раствора соляной кислоты (для того, чтобы картофель не темнел). Постепенно приливают дистиллированную воду – 15 мл. Полученную массу сливают в стаканчик, ополаскивают ступку водой, сливают ее по стеклянной палочке в стаканчик и титруют 0,001н раствором 2,6 ДХФИФ до розового окрашивания. В 100 г картофеля содержится 1–5 мг витамина C.
3 Определение содержания витамина C в моче.
Определение содержания витамина C в моче дает представление о запасах этого витамина в организме, так как наблюдается соответствие между концентрацией витамина C в крови и количеством этого витамина, выделяемым с мочой. Однако при гиповитаминозе С содержание аскорбиновой кислоты в моче не всегда понижено. Часто оно бывает нормальным, несмотря на большой недостаток этого витамина в тканях и органах.
У здоровых людей введение per os 100 мг витамина C быстро приводит к повышению его концентрации в крови и моче. При гиповитаминозе C ткани, испытывающие недостаток в витамине, задерживают принятый витамин C, и его концентрация в моче не повышается. C мочой у здорового человека экскретируется 20–30 мг/сут или 113–170 мкмоль/сут витамина C. У детей уровень экскреции этого витамина понижается при многих острых и хронических инфекционных и соматических заболеваниях.
Ход работы. В стаканчик или колбочку отмеривают 10 мл мочи и 10 мл дистиллированной воды, перемешивают, подкисляют 20 каплями 10 %-го раствора соляной кислоты и титруют 0,001н раствором 2,6 ДХФИФ до розового окрашивания.
Расчет содержания аскорбиновой кислоты в моче проводят по формуле
|
где X |
– содержание аскорбиновой кислоты в суточной моче, мг/сут; |
|
0,088 |
– коэффициент пересчета; |
|
А |
– результат титрования 0,001н раствором 2,6-ДХФИФ, мл; |
|
Б |
– объем мочи, взятый для титрования, мл; |
|
В |
– среднее суточное количество мочи (для мужчин – 1500 мл, для женщин – 1200 мл). |
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Рекомендуемая литература
Основная
Дополнительная
Занятие 25
Общая эндокринология. Механизм действия гормонов
Цель занятия: изучить химическое строение, классификации, механизмы действия гормонов, принципы и уровни организации нейро-эндокринной системы. Изучить механизмы регуляции Ca-P обмена.
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
Задачи
1 Какие гормоны вырабатываются в нейрогипофизе:
а) окситоцин; б) АДГ; в) рилизинг-факторы; г) инсулин; д) гонадотропи ны; е) катехоламины; ж) гестагены; з) альдостерон?
2 Какие гормоны активируют ГНГ:
а) кортикостероиды; б) инсулин; в) глюкагон; г) соматотропин; д) тиро ксин; е) соматостатин; ж) адреналин; з) прогестерон?
3 Гиперкальциемия наблюдается при:
а) гиперпаратиреозе; б) гипервитаминозе D; в) лейкозах; г) гипопарати ре озе; д) рахите; е) спазмофилии; ж) холецистите; з) инфаркте миокарда?
4 Гипокальциемия обнаруживается при:
а) рахите; б) хронических нефритах; в) закупорке желчных путей; г) ги перпаратиреозе; д) гипопаратиреозе; е) метастазах рака в кости; ж) гиповита минозе D; з) атеросклерозе?
5 Какие системы участвуют в регуляции объема внеклеточной жидкости:
а) ренин – ангиотензин – альдостерон;
б) гипоталамус – нейрогипофиз;
в) гипоталамус – гипофиз – кора надпочечников;
г) калликреин – кининовая система;
д) симпато – адреналовая система;
е) аденилатциклазная?
6 Гиперфосфатемия отмечается при:
а) нарушении выделительной функции почек; б) гипопаратиреозе; в) ги перпаратиреозе; г) гипервитаминозе D; д) гиповитаминозе D; е) гипотиреозе; ж) гипертиреозе; з) гиперкортицизме?
7 Концентрация гистамина в крови возрастает при:
а) переохлаждении; б) перегревании; в) аллергических отеках; г) брон хи альной астме; д) переутомлении; е) ожирении?
8 Концентрация серотонина в крови возрастает при:
а) карциноидном синдроме;
б) опухоли хроматаффинной ткани (феохромоцитоме);
в) злокачественных новообразованиях простаты;
г) неоперабельных опухолях прямой кишки;
д) тромбоцитопении;
е) аллергических состояниях?
9 Какие факторы способствуют минерализации костной ткани:
а) низкий уровень витамина C; б) высокий уровень Ca2+ в плазме; в) па рат гормон; г) 24, 25-дигидроксихолекальциферол; д) эстрогены; е) ацидоз; ж) кальцитонин; з) кальцитриол?
10 Как изменяются показатели сыворотки крови при гиперпаратиреозе:
а) повышается содержание тироксина;
б) повышается содержание паратгормона;
в) повышается содержание Ca2+;
г) снижается содержание Ca 2+;
д) снижается концентрация фосфата;
е) повышается концентрация фосфата;
ж) повышается судорожная активность;
з) повышается нейромышечная возбудимость?
11 Кальцитриол является активной формой:
а) витамина K; б) витамина E; в) витамина D; г) витамина B1; д) витамина B12; е) витамина H; ж) витамина U; з) витамина B2?
12 Какие соединения активируют синтез кальцийсвязывающего белка в энтероцитах:
а) кальций; б) 1,25-дигидрохолекальциферол; в) -токоферол; г) кальци тонин; д) паратгормон; е) витамин D3; ж) андрогены; з) инсулин?
13 Что включает механизм действия прогестерона:
а) взаимодействие с рецепторами мембраны;
б) проникновение гормона в клетку;
в) активацию аденилатциклазы;
г) синтез "полового" белка;
д) взаимодействие с внутриклеточными рецепторами;
е) взаимодействие с хроматином?
Лабораторные работы
Лабораторная работа № 1. Определение кальция в моче по методу Сулковича
При гиперпаратиреозе, передозировке витамина D, опухолях костей и некоторых других заболеваниях наблюдается гиперкальциемия, которая исключительно опасна для здоровья. В связи с этим необходим длительный контроль за содержанием кальция в сыворотке крови. Определение уровня кальция в моче может быть использовано для ориентировочной оценки его содержание в сыворотке крови.
Принцип метода. В кислой среде в присутствии реактива Сулковича (состав: щавелевая кислота 2,5 мг, оксалат аммония 2,5 г, ледяная уксусная кислота 5 мл, дистиллированная вода до 150 мл) кальций выпадает в осадок в виде оксалата кальция.
Ход работы. В пробирку с 1 мл мочи прибавляют 0,5 мл реактива Сулковича. Отмечают прозрачность раствора.
Оценка. Отсутствие помутнения означает, что содержание кальция в моче ниже нормы. При этом в крови отмечается гипокальциемия (содержание в сыворотке менее 1,8–2 ммоль/л).
Легкое помутнение указывает на нормальный уровень кальция 2,25–2,6 ммоль/л. Резкое (молочного вида) помутнение характерно для гиперкальциемии при условии, что последующая проба с кипячением не обусловлена присутствием уратов или белка.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Лабораторная работа № 2. Качественные реакции, подтверждающие белковую природу инсулина
Принцип метода (см. раздел "Химия белка").
Ход работы.
1 Биуретовая реакция. В пробирку с 1 мл раствора инсулина добавляют 5–6 капель раствора гидроксида натрия и 1–2 капли раствора сульфата меди (II). После перемешивания жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет.
2 Реакция Милона. К 5–10 каплям раствора инсулина добавляют 2–3 капли реактива Милона и осторожно нагревают. Образуется осадок в виде сгустка красного цвета.
3 Реакция Фоля. К 5–10 каплям раствора инсулина (использовать неразбавленный препарат) добавляют 2–3 мл раствора гидроксида натрия и кипятят 10 мин на маленьком пламени горелки. После охлаждения добавляют 1–2 капли раствора Pb(ONa)2. Появляется бурое окрашивание.
Примечание – Раствор Pb(ONa)2 приготовить в отдельной пробирке. Для этого к одной капле раствора ацетата свинца добавляют по каплям раствор 10 %-го гидроксида натрия до растворения образовавшегося осадка гидроксида свинца. При стоянии или нагревании бурое окрашивание может усилиться до черного и может выпасть черный осадок.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Рекомендуемая литература
Основная
Дополнительная
Занятие 26
Частная эндокринология.
Гормоны периферических желез
Цель занятия: изучить механизмы действия гормонов, участвующих в регуляции метаболизма.
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
Задачи
1 Эстрогены выделяется с мочой в виде конъюгата:
а) с глюкуроновой кислотой; б) цистеином; в) глицином; г) глутамином; д) белком; е) сульфатом?
2 Какие превращения не характерны для животной клетки:
а) эстрон эстриол; б) эстрон эстрадиол;
в) эстрон дигидротестостерон;
г) 17-дегидроксипрегненолон тестостерон;
д) прогестерон эстрогены; е) холестерол эстрогены?
3 Чем можно объяснить вирилизацию при синдроме Кушинга:
а) усилением глюкокортикоидных эффектов; б) слабыми минералокорти коидными и сильными глюкокортикоидными эффектами; в) сильными ми нералокортикоидными и слабыми глюкокортикоидными эффектами; г) дей ствием андрогенов надпочечников; д) действием эстрогенов надпочечников; е) действием гестагенов надпочечников?
4 Холестерин превращается:
а) в инозитолтрифосфат; б) кортикостероиды; в) желчные кислоты; г) полиеновые жирные кислоты; д) эндорфины и энкефалины; е) кальцитриол?
5 Как метаболизирует холестерин у человека:
а) переходит в гликохолевую кислоту; б) является компонентом мембраны; в) превращается в ацетил-КоА; г) превращается в кортизол; д) превращается в CO2 и воду; е) экскретируется с мочой?
6 Гиперкортицизм сопровождается:
а) увеличением содержания гликогена в печени; б) уменьшением содержания гликогена в печени; в) увеличением массы скелетной мускулату ры; г) уменьшением массы скелетной мускулатуры; д) атрофией надпочечников; е) гипертрофией надпочечников; ж) увеличением уровня АКТГ в крови; з) уменьшением уровня АКТГ в крови?
7 Какие метаболиты включает биосинтез тестостерона:
а) изопентенилпирофосфат; б) прегненолон; в) ланостерин; г) фитосте рин; д) кортизол; е) прогестерон; ж) эстриол; з) ДОФА?
8 При каких болезнях отмечается повышение уровня кортизола в крови:
а) болезнь Хартнупа; б) синдром Иценко-Кушинга; в) болезнь Аддисона; г) Базедова болезнь; д) микседема; е) гипофизарная кахексия; ж) сахарный диабет; з) синдром Леша-Нихана?
9 Назовите причины гипернатриемии:
а) полиурия; б) олигурия; в) некомпенсированный сахарный диабет; г) ограниченный прием жидкости; д) гиперкортицизм; е) болезнь Аддисона; ж) болезнь Гирке; з) синдром Иценко-Кушинга?
10 Какие гормоны синтезируются в сетчатой зоне коры надпочечников:
а) андрогены; б) катехоламины; в) дезоксикортикостерон; г) сомато тропин; д) альдостерон; е) эстрогены; ж) гестагены; з) соматостатин?
11 Для феохромоцитомы характерна:
а) гипергликемия; б) кетонемия; в) гиперкатехоламинемия; г) ацидоз; д) азотемия; е) кетонурия; ж) гипогликемия; з) гипертензия?
12 Какие гормоны синтезируются в клубочковом слое коры надпочечников:
а) АДГ; б) глюкокортикоиды; в) андрогены; г) эстрогены; д) минерало кортикоиды; е) катехоламины?
13 При хроническом гипокортицизме (болезни Аддисона) наблюдается недостаточность:
а) андрогенов; б) катехоламинов; в) глюкокортикоидов; г) минерало кортикоидов; д) эстрогенов; е) катехоламинов?
14 Для акромегалии характерно повышение уровня:
а) глюкагона; б) СТГ; в) инсулина; г) эстрогенов; д) тироксина; е) адрена лина; ж) АКТГ; з) андрогенов?
15 Повышение экскреции катехоламинов с мочой встречается при:
а) феохромоцитоме; б) бронхиальной астме; в) гипертермии; г) стенокардии покоя; д) инфаркте миокарда; е) шоке?
16 Когда снижается экскреция с мочой 17-кетостероидов:
а) адреногенитальный синдром; б) гиперплазия коры надпочечников; в) опухоли коры надпочечников; г) болезнь Иценко-Кушинга; д) болезнь Ад дисона?
Лабораторные работы
Лабораторная работа № 1. Обнаружение иода в препарате щитовидной железы
Принцип метода. При щелочном гидролизе тироксина образуется иодид калия, из которого иод вытесняется иодатом калия. Выделившийся свободный йод дает с крахмалом синее окрашивание.
В лаборатории кафедры (!) проводят гидролиз аптечного тиреоидина по следующей методике. В фарфоровой ступке растирают 10 таблеток тиреоидина. Полученный порошок пересыпают в колбу для гидролиза и заливают 25 мл 10 %-го раствора NaHCO3. Перемешивают, закрывают пробкой с обратным холодильником и ставят на песчаную баню. Содержимое пробирок кипятят 10–15 мин и охлаждают.
Ход работы. К 1 мл гидролизата, полученного в лаборатории, помещают в фарфоровую чашку и нейтрализуют 10 %-м раствором серной кислоты, добавляя ее по каплям до слабокислой реакции на лакмус. Затем добавляют 2 капли раствора крахмала и 2-3 капли раствора KIO3. Выделившийся йод окрашивает жидкость в синий цвет.
Лабораторная работа № 2. Качественные реакции на адреналин
Принцип метода. Адреналин и норадреналин образуются из аминокислоты тирозина и являются производными пирокатехина. Присутствие в их структуре пирокатехинового кольца определяет химические свойства этих гормонов. Они легко окисляются в нейтральных растворах с образованием красного пигмента – адренохрома, который при последующей полимеризации образует меланины.
Ход работы.
1 Реакция с хлоридом железа (III).
В пробирку вносят 3 капли раствора адреналина и 1 каплю 1 %-го раствора хлорида железа (III). Проявляется изумрудно-зеленое окрашивание, которое затем при добавлении 1 капли раствора гидроксида натрия приобретает вишнево-красный цвет. Реакция обусловлена тем, что пирокатехиновое ядро образует с ионами железа (III) соединения типа фенолятов.
2 Диазореакция на адреналин.
В пробирку вносят 2–3 капли раствора адреналина, 2 капли 10 %-го раствора KIO3 и 2 капли раствора уксусной кислоты. Перемешивают и слегка нагревают. Жидкость окрашивается в красно-фиолетовый цвет. Окраска обусловлена тем, что при взаимодействии адреналина с диазореактивом образуется азокраситель.
Лабораторная работа № 3. Обнаружение 17-кетостероидов в моче
Принцип метода. Метод основан на взаимодействии 17-кетостероидов с м-динитробензолом в щелочной среде с образованием продуктов конденсации розово-фиолетового цвета.
Ход работы. В пробирку вносят 20 капель мочи и 30 капель раствора м динитробензола, который добавляют медленно, так, чтобы он стекал по стенке пробирки. Пробирку не встряхивать. Затем по стенке пробирки добавляют 6 капель раствора гидроксида натрия.
Верхний слой жидкости окрашивается в розово-фиолетовый цвет.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Рекомендуемая литература
Основная
Дополнительная
Занятие 27
Контрольное по разделу
«Биохимия витаминов и гормонов»
Цель занятия: контроль усвоения вопросов пройденного раздела “Биохимия витаминов и гормонов”.
Контрольные вопросы
Занятие 28
Основы регуляции КОС. Белки крови
Цель занятия: изучить механизмы изменения физико-химических констант крови в норме и при патологии. Научиться определять содержания кальция в плазме крови и щелочной резерв крови.
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
Задачи
1 Главным соединением в крови, содержащим азот небелкового проис хождения, является:
а) мочевина; б) аммиак; в) пурины; г) карнитин; д) аминокислоты; е) мочевая кислота; ж) билирубин; з) эрготионеин?
2 Назовите типичные представители белков острой фазы:
а) церулоплазмин; б) трансферрин; в) гаптоглобин; г) фибриноген; д) оро зомукоид; е) C-реактивный белок; ж) гемоглобин; з) альбумин; и) транскор тин; к) 1 антитрипсин?
3 Какой из иммуноглобулинов является секреторным?
а) Ig А; б) Ig G; в) Ig Е; г) Ig D; е) Ig M?
4 Вязкость крови зависит от содержания в крови:
а) мочевины; б) количества клеток; в) фибриногена; г) белков “острой” фазы; д) холестерина; е) ЛП; ж) альбумина; з) гормонов?
5 Чем обусловлен гиперосмолярный синдром:
а) избытком глюкозы; б) увеличением уровня мочевины; в) гипернатриемией; г) повышения уровня альбумина; д) гиперкетонемией?
6 Слабощелочная реакция плазмы крови поддерживается:
а) анионами хлора; б) ионами HCO3-; в) ионами HPO42-; г) протеинат-ионами; д) катионами металлов?
7 Содержание ферритина в сыворотке крови снижается при:
а) железодефицитных анемиях; б) анемиях, связанных с беременностью; в) острых воспалительных процессах; г) коллагенозах; д) онкологических заболеваниях; е) травмах; ж) послеоперационном периоде?
8 Беременность сопровождается увеличением:
а) содержания сывороточного железа; б) общей железосвязывающей способности сыворотки крови; в) процента насыщения трансферрина железом; г) уровня ферритина; д) содержания свободных протопорфиринов в эритроцитах; е) уровня трансферрина; ж) уровня гемоглобина?
9 Метаболический ацидоз развивается:
а) при накоплении в организме кетоновых тел; б) накоплении лактата и др. органических кислот; в) гиперпродукции кетокислот и органических кислот; г) длительном приеме кислой пищи; д) приеме мочегонных средств – ингибиторов карбангидразы (дикарб); е) гиповентиляции; ж) гипервентиля ции; з) рвоте; и) диарее?
10 Основными причинами развития метаболического ацидоза являются:
а) увеличенное введение в организм H+ ионов; б) повышенное образова ние кетоновых тел, лактата и др.; в) повышенная потеря HCO3-; г) потеря ионов K+; д) потеря ионов Сl-; е) введение ионов Сl-; ж) введение ионов HCO3-; з) дефицит инсулина?
11 Изменение pH крови при метаболическом ацидозе сопровождается:
а) усилением диссоциации HbO2; б) гиперкалиемией; в) снижением содержания K+ в клетках паренхиматозных органов; г) увеличением pCO2; д) стимуляцией симпато-адреналовой системы; е) снижением pCO2?
12 Для коррекции метаболического ацидоза применяют:
а) кислородотерапию; б) введение растворов HCO3-; в) введение трис-буфера; г) переливание свежей крови; д) введение солей калия с добавлени ем глюкозы и инсулина; е) введение гипертонического раствора глюкозы; ж) введение физраствора (хлорида натрия)?
13 В каких случаях развивается метаболический ацидоз:
а) сахарный диабет; б) стеноз привратника; в) гипокалиемия; г) отек лег ких; д) почечная недостаточность; е) острый ринит; ж) острая пневмония; з) переломах костей?
14 В каких случаях развивается метаболический алкалоз:
а) задержка H2CO3; б) задержка органических кислот; в) образование ке тоновых тел в организме; г) гиповентиляция легких; д) гипервентиляция легких; е) лечение кортикостероидами без препаратов калия; ж) рвота; з) диарея?
15 Выделительный негазовый алкалоз вызывается:
а) задержкой в организме оснований; б) потерей натрия; в) потерей калия; г) усилением мочевой экскреции хлоридов; д) введением растворов HCO3-; ж) длительным приемом "щелочной" пищи; з) рвота; и) диарея?
16 При активном ревматическом процессе возрастает уровень:
а) альбуминов; б) 1-глобулинов; в) 2-глобулинов; г) -глобулинов; д) глобулинов; е) церулоплазмина; ж) гаптоглобина; з) С-реактивного белка?
17 В состав каких белковых фракций входит трансферрин:
а) альбуминов; б) 1-глобулинов; в) 2-глобулинов; г) -глобулинов; д) глобулинов; е) ЛП; ж) гаптоглобина; з) С-реактивного белка?
18 В состав каких белковых фракций входит C-реактивный белок:
а) альбуминов; б) 1-глобулинов; в) 2-глобулинов; г) -глобулинов; д) глобулинов; е) пре--глобулинов?
19 В состав каких белковых фракций входят криоглобулины:
а) альбуминов; б) 1-глобулинов; в) 2-глобулинов; г) -глобулинов; д) глобулинов; е) пре--глобулинов?
20 -фетопротеин обнаруживается в сыворотке крови при:
а) норме у взрослых; б) острой пневмонии; в) паренхиматозном гепатите; г) первичном раке печени; д) тератобластомах с элементами эмбрионального рака; е) метастазах в печень; ж) у беременных женщин; з) у новорожденных?
21 Наиболее ранний белок острой фазы воспаления:
а) C-реактивный белок; б) гаптоглобин; в) альфа-кислый-гликопротеин (орозомукоид); г) антипротеазный ингибитор (1 антитрипсин); д) фибриноген; е) трансферрин; ж) транскортин?
22 При каком патологическом состоянии возникает абсолютная гипопротеинемия:
а) тяжелый тиреотоксикоз; б) цирроз печени; в) неспецифический язвенный колит; г) нефротический синдром; д) плазмоцитома; е) ожоговая болезнь; ж) сахарный диабет?
23 При каких состояниях снижен синтез Ig G:
а) туберкулез легких; б) бактериальный эндокардит; в) ожоговая болезнь; г) нефротический синдром; д) хронические энтероколиты; е) злокачественная опухоль; ж) сахарный диабет?
24 При какой патологии повышается уровень сиаловых кислот в сыворотке крови:
а) инфаркт миокарда; б) туберкулез легких; в) цирроз печени; г) острая фаза ревматизма; д) язвенная болезнь желудка; е) острая пневмония; ж) ожоговая болезнь; з) нефротический синдром; и) хронические энтероколиты; к) злокачественная опухоль?
Лабораторные работы
Лабораторная работа № 1. Определение кальция в сыворотке крови (метод Мойдина и Зака)
Принцип метода. Метод основан на способности органических соединений-комплексонов взаимодействовать с ионами кальция. В качестве комплексона используется трилон Б (ЭДТА, или динатриевая соль этилендиаминтетраацетата). Трилоном Б титруют ионы кальция, предварительно связанные с индикатором-мурексидом. Момент полного связывания кальция с трилоном Б определяется по изменению цвета мурексида (в комплексе с ионами кальция мурексид красно-оранжевого цвета, свободный от кальция мурексид окрашивается в сине-фиолетовый цвет). Комплекс кальция с трилоном Б более прочен, чем комплекс с мурексидом. Зная концентрацию и объем раствора трилона Б, пошедшего на титрование, находят содержание кальция.
Нормальное содержание кальция в сыворотке крови 2,25–2,64 ммоль/л (9–11 мг%). Состояние гипокальциемии наблюдается при авитаминозе D (рахите), у беременных, при недостаточной функции паращитовидной железы, заболеваниях почек, отравлениях фторидами. Гиперкальциемия встречается реже (гиперпаратиреоз, опухоли, деструктивные процессы в костной ткани, лейкозы).
Ход работы.
В два стаканчика (опытная и контрольная пробы) наливают по 5 мл раствора мурексида. В стаканчик для опытной пробы вносят 0,2 мл исследуемой сыворотки крови (раствор становится розовым). Титруют из пипетки или бюретки раствором трилона Б до исчезновения розовой окраски и восстановления фиолетового цвета (сравнивать с окраской контроля).
Расчет. Исходя из того, что 1 мл 0,1 моль/л раствор трилона Б эквивалентен 0,12 мг Ca, рассчитывают содержание кальция в сыворотке крови, в мг%:
X = V 0,12 100,
где V – объем трилона Б, пошедший на титрование опытной пробы, мл.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Лабораторная работа № 2. Титрометрический метод определения "щелочного" запаса крови
Принцип метода. Количество всех оснований цельной крови составляет ее щелочной запас. К цельной крови добавляют для нейтрализации всех оснований заведомо большее количество соляной кислоты. Избыток кислоты оттитровывают щелочью до значения pH (pH = 5,0), равного изоэлектрической точке основных белков крови, которые выпадают в осадок, при этом появляется легкое белесоватое помутнение. Щелочной запас выражается в МЭКВ щелочи, соответствующих количеству связанной основаниями крови соляной кислоты, в перерасчете на 1 л крови.
Ход работы. В стаканчик вносят 10 мл 0,01н раствора соляной кислоты, добавляют 0,2 мл крови, тщательно перемешивают. Прозрачный бурый раствор титруют из пипетки 0,1н раствором NaOH до появления легкого белесоватого помутнения.
Расчет производят по формуле
(1 – а) 0,1 1000
мэкв/л NaOH = ,
0,2
или
(1 – а) 4 100
мг% NaOH = ,
0,2
|
где 1 |
– |
1 мл 0,1н раствора HCl, взятой для нейтрализации; |
|
а |
– |
количество щелочи, пошедшей на титрование, мл; |
|
0,1 |
– |
количество мэкв в 1 мл щелочи; |
|
0,2 |
– |
количество крови, мл; |
|
1000 |
– |
коэффициент пересчета на 1 л крови; |
|
4 |
– |
количество NaOH в 1 мл 0,1н раствора, мг. |
В норме щелочной запас составляет 100–115 мэкв/л, или 400–460 мг% NaOH.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Рекомендуемая литература
Основная
Дополнительная
Занятие 29
Обмен гемоглобина
Цель занятия: изучить особенности метаболизма железа и основных форменных элементов крови, изучить биохимию гемоглобина в норме и при патологии. Научиться определять в крови содержание гемоглобина и билирубина.
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
Задачи
1 Какие из указанных соединений могут превращаться в желчные пигменты:
а) холевая кислота; б) гем; в) триглицериды; г) холестерин; д) фосфоли пиды; е) миоглобин; ж) ДНК; з) цитохромы?
2 Производными чего являются порфирины:
а) лизина и пролина; б) аланина и глутамина; в) янтарной кислоты и глицина; г) ацетил-КоА и оксалоацетата; д) глицерина и ЖК; е) карбамоилфосфата и орнитина; ж) нуклеотидов?
3 Уробилиноген не может быть производным от:
а) гемоглобина; б) каталазы; в) флавопротеида; г) цитохрома С; д) пероксидазы; е) хлорофилла; ж) ДНК; з) пиридиннуклеотида?
4 Назовите белки сыворотки крови:
а) фибриноген; б) альбумины; в) криоглобулины; г) глобулины; д) C ре активный белок; е) проконвертин; ж) проакселерин; з) ЛДГ?
5 Где синтезируется альфа и бета-глобулины:
а) костный мозг; б) селезенка; в) кишечник; г) лимфоузлы; д) печень; е) почки; ж) кишечник; з) мышцы?
6 Предшественниками гема гемоглобина являются:
а) уропорфириноген-III; б) протопорфириноген-IX; в) копропорфирино ген-III; г) копропорфириноген-I; д) вердоглобин; е) протопорфирин; ж) били вердин; з) уропорфириноген-I?
7 Порфирия связана с дефицитом активности:
а) фенилаланин-аминолиазы; б) гипоксантин-гуанин-фосфорибозил тран сферазы; в) гем-синтетазы; г) ДАЛК-синтетазы; д) энтерокиназы; е) АРС-азы; ж) метилтрансферазы; з) карбамоилфосфатсинтетазы?
8 При биосинтезе порфирина первой стадией является реакция:
а) конденсации двух молекул порфобилиногена; б) конденсации гли и сукцинил-CoA; в) образования протопорфирина; г) конденсации двух молекул ДАЛК; д) образования уропорфириногена-III; е) образования протопорфириногена-IX?
9 Билирубин глюкуронид характеризуется тем, что он:
а) возрастает при неонатальной гипербилирубинемии; б) обычно нахо дится в желчных протоках; в) жирорастворим; г) водорастворим; д) свето чувствителен; е) токсичен; ж) не токсичен?
10 При обструкции желчных протоков отмечается:
а) значительное увеличение содержания конъюгированного билирубина в крови; б) снижение содержания конъюгированного билирубина в крови; в) увеличение содержания неконъюгированного билирубина в крови; г) снижение содержания неконъюгированного билирубина в крови; д) низкая экскреция холестерина; е) снижение уровня билирубин-глюкуронида в фекалиях; ж) увеличение уровня билирубин-глюкуронида в фекалиях; з) увеличение содержания липидов в фекалиях; и) снижение содержания липидов в фекалиях?
11 Когда уменьшается содержание железа в крови:
а) железодефицитная анемия; б) уремия; в) маточные кровотечения; г) онкозаболевания; д) диарея; е) рвота?
12 Для какой из желтух характерно повышение конъюгированного билирубина в крови:
а) гемолитическая; б) болезнь Жильбера; в) обтурационная; г) паренхи матозная; д) болезнь Криглера-Найяра; е) болезнь Ротора; ж) болезнь Дубина-Джонса; з) физиологической желтухе?
13 Содержание ферритина в сыворотке крови снижается при:
а) железодефицитных анемиях; б) анемиях беременных; в) воспа лительных процессах; г) коллагенозах; д) онкозаболеваниях; е) желтухах?
14 Когда возрастает содержание железа в сыворотке крови:
а) гемохроматоз; б) гемолитическая анемия; в) талассемия; г) гепатит; д) эмфиземе легких; е) онкозаболевания; ж) инфаркт миокарда; з) гиповита миноз В12?
15 Патологическое действие высоких концентраций билирубина сводится:
а) к активации процесса свертывания крови; б) угнетению процесса свер тывания крови; в) разобщению окисления и фосфорилирования; г) повыше нию проницаемости биологических мембран; д) инициации гемолиза; е) деструкции гепатоцитов; ж) инициации перекисных процессов?
16 Наибольшей токсичностью обладает:
а) неконъюгированный билирубин; б) свободный билирубин, связанный с альбумином; в) конъюгированный билирубин; г) билирубин конъюгирован ный, связанный с фосфолипидами?
17 Печень здорового человека не пропускает в общий круг кровообращения поступающие из кишечника:
а) мезобилиноген; б) желчные кислоты; в) фосфолипиды; г) триацилглицерины; д) холестерин и его эфиры; е) глюкозу; ж) стеркобилиноген; з) индол?
18 Водорастворимыми и обнаруживаемыми в моче фракциями билирубина и его производных являются:
а) бета-, гамма- и дельта-изомеры свободного билирубина; б) альфа-изо мер свободного билирубина; в) глюкурониды билирубина; г) стеркобилино ген; д) мезобилиноген (уробилиноген)?
19 Глюкуронидированию в печени подвергаются:
а) билирубин; б) стероидные гормоны; в) катехоламины; г) холестерин; д) желчные кислоты; е) НЭЖК?
20 Основными органами синтеза порфиринов являются:
а) костный мозг; б) печень; в) почки; г) легкие; д) тонкий кишечник; е) миокард; ж) головной мозг; з) кишечник?
21 Накопление при порфириях уропорфириногена I и копропорфирино гена I вызывает:
а) поражение кожи; б) гемолиз эритроцитов; в) увеличение селезенки; г) выделение мочи красного цвета; д) воспалительный процесс в почках; е) остеопороз?
22 Для надпеченочной желтухи характерно повышение:
а) неконъюгированного билирубина в крови; б) конъюгированного билирубина в крови; в) уробилиногена в моче; г) стеркобилиногена в кале; д) желчных пигментов в моче; е) желчных пигментов в крови?
23 Для обтурационной желтухи характерно повышение уровня:
а) общего и свободного билирубина крови; б) стеркобилиногена мочи; в) общего и связанного билирубина крови; г) мезобилиногена в моче; д) общего и связанного билирубина в крови, ахоличном стуле; е) свободного билирубина в крови?
24 Для паренхиматозной желтухи характерно увеличение содержания:
а) общего и свободного билирубина крови; б) стеркобилиногена в моче; в) общего и связанного билирубина в крови; г) уробилиногена в моче; д) общего, связанного билирубина крови; е) свободного билирубина крови; ж) билирубина в моче?
25 При печеночной порфирии наблюдается:
а) повышение чувствительности кожи к свету; б) поражение нервной системы в виде полиневритов; в) поражение мышечной системы; г) желтушная окраска слизистых оболочек и склер; д) зуд кожных покровов?
26 Всасыванию железа в кишечнике способствует:
а) воздействие HCl желудочного сока; б) гастроферрин; в) лактоферрин; г) аскорбиновая кислота; д) танин?
27 Где депонируется железо:
а) в миоглобине; б) в гемоглобине; в) в трансферрине; г) в ферритине; д) в протопорфиринах эритроцитов?
28 При каких состояниях повышается в крови содержание IgG:
а) хронические заболевания печени; б) подострые и хронические инфекции; в) коллагенозы; г) гастроэнтеропатии; д) ожоги (начальная стадия); е) онкозаболевания; ж) паразитарные заболевания; з) ожоги (восстановительная стадия)?
29 Какой белок плазмы крови является транспортной формой железа в организме:
а) транскортин; б) трансферрин; в) ферритин; г) лактоферрин; д) церуло плазмин; е) апоферритин; ж) гаптоглобин; з) гемоглобин?
30 Какой белок плазмы крови специфичен для злокачественных опухолей печени:
а) гаптоглобин; б) церулоплазмин; в) трансферрин; г) 1-фетопротеин; д) 2-макроглобулин; е) антитрипсин; ж) факторы роста; з) проконвертин?
31 При каких заболеваниях увеличивается концентрация общих глико протеидов в сыворотке крови:
а) туберкулез легких; б) острые неспецифические пневмонии; в) инфаркт миокарда; г) инфекционный гепатит; д) микседема; е) болезнь Иценко-Кушинга; ж) ожоговая болезнь; з) онкозаболевания?
32 Какой из анионов плазмы является доминирующим по своему количественному содержанию:
а) хлорид-ион; б) HCO3-; в) H2PO4-; г) HPO42-; д) протеинат-ион; е) SO42-; ж) нитраты; з) карбонаты?
33 Гипернатриемия обусловливается:
а) резким ограничением введения жидкости (водный голод); б) увеличе нием введения внутрь или парэнтерально натрия; в) гиперфункцией коры надпочечников; г) синдромом усталости клеток; д) длительным приемом мочегонных средств; е) отравлением солями тяжелых металлов; ж) гипофунк цией коры надпочечников?
Лабораторные работы
Лабораторная работа № 1. Определение содержания гемоглобина
в крови
Принцип метода. Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), образующий с ацетон-циангидрином окрашенный комплекс гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина.
Ход работы. Опытная проба: 0,02 мл крови приливают к 5 мл трансформирующего раствора (разведение крови в 251 раз), хорошо перемешивают, оставляют стоять 10 минут, после чего измеряют на колориметре при длине волны 500–560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против холостой пробы (трансформирующий раствор или вода).
Экстинкцию стандартного раствора измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу.
Расчет содержания гемоглобина (в мг%) производят по калибровочному графику, построенному по стандартному раствору гемиглобинцианида, или по формуле
Hb = (Еоп / Ест)КС 0,01,
где Еоп – экстинкция опытной пробы;
Ест – экстинкция стандартного раствора;
С – концентрация гемиглобинцианида в стандартном растворе, равная 59,75 мг%;
К – коэффициент разведения крови;
0,01 – коэффициент для пересчета мг% в г/л (в СИ).
Содержание гемоглобина в крови по норме: у женщин – 12–14 г% (120–140 г/л); у мужчин – 13–16 г% (130–160 г/л).
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Лабораторная работа № 2. Определение общего билирубина в сыворотке крови (метод Иендрашика и Клеггорна)
Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом малиново-красного цвета. Неконъюгированный билирубин вступает в "непрямую" реакцию с диазосмесью – после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива. При этом определяется концентрация "общего" билирубина. По разности концентраций "общего" и "прямого" билирубина определяют содержание "непрямого".
Ход работы. Готовят две пробирки (контрольную и опытную). Составляют реакционную смесь по схеме:
|
Проба |
Сыворотка крови, мл |
Кофеиновый реактив, мл |
Дистиллир. вода, мл |
Диазосмесь, мл |
|
Опытная |
1 |
3,5 |
– |
0,5 |
|
Контрольная |
– |
3,5 |
1 |
0,5 |
Диазосмесь готовят (в количестве, достаточном для всей учебной группы), смешивая 10 мл диазореактива II (0,5 %-го раствора нитрата натрия) с 0,3 мл диазореактивом I (готовится в лаборатории кафедры).
Содержимое опытной и контрольной проб хорошо перемешивают, ставят на 20 мин в темноту, затем колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром (длина волны 500–560 нм) против контроля. Если в пробах развивается слабая окраска, то перед колориметрией содержимое обеих пробирок подщелачивают, добавляя в них по 3 капли 30 %-го раствора NaOH. При этом цвет раствора переходит в зеленый, а при большой концентрации билирубина – в синий; часто наблюдается исчезновение мути.
Расчет производят по калибровочному графику.
При оформлении работы в протокол вносят принцип метода, результат колориметрии и расчет. Отмечают пределы колебаний концентрации билирубина в норме.
Клинико-диагностическое значение. Билирубин образуется в организме в результате естественного распада в клетках ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенка) гемоглобина и других гемопротеидов (цитохромы, каталаза и др.). Билирубин относится к группе желчных пигментов, является токсическим веществом и обезвреживается в гепатоцитах. Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком. В печени происходит процесс обезвреживания по схеме
УДФ-глюкуроновая кислота
Билирубин Билирубин-глюкуронид.
глюкуронилтрансфераза
Образующиеся при этом глюкурониды билирубина хорошо растворимы в воде, секретируются в просвет желчного капилляра и выводятся из организма по желчевыводящим путям.
В сыворотке крови содержится две фракции билирубина, вместе составляющие "общий" билирубин:
неконъюгированный (непрямой, токсичный, свободный, водонерастворимый, существует в виде комплекса с альбумином),
конъюгированный (билирубин глюкуронид, прямой, нетоксичный, связанный, водорастворимый).
Содержание билирубина в крови в норме составляет 0,5–1,2 мг% (8,5–20,5 мкмоль/л в единицах СИ), причем 75 % приходится на долю неконъюгированного. Определение его уровня в крови является важным диагностическим тестом. Так, при различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия – увеличение концентрации билирубина до 30–35 мг% (512,5 – 600,0 мкмоль/л) и более.
Дифференциальная диагностика различных видов желтух осуществляется на основании исследования содержания фракций билирубина в крови, а также особенностей клинического течения заболевания и др.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Рекомендуемая литература
Основная
Дополнительная
Занятие 30
Биохимия почек в норме и при патологии
Цель занятия: изучить особенности метаболизма почек и биохимическую основу их основных функций в норме и при патологии. Научиться определять основные физико-химические параметры мочи в норме и при патологии.
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
а) объема циркулирующей крови, внеклеточной жидкости, артериального давления. Ренин-ангиотензиновая система. Вазопрессин. Механизмы действия диуретиков;
б) баланса электролитов. Роль альдостерона в регуляции работы Na/K-АТФазы. Механизмы транспорта H+, Na+, K+, Ca++, Cl-, HCO3-. Почки и метаболизм витамина D. Почечные камни;
в) кислотно-основного состояния. Механизмы ацидогенеза, аммониогенеза;
г) уровня глюкозы в крови. Особенности глюконеогенеза в почках;
д) эритропоэза.
Задачи
1 Определение клиренса характеризует:
а) концентрационную способность почек; б) клубочковую фильтрацию; в) транспорт электролитов; г) канальцевую секрецию; д) кислотно-основное состояние; е) количество функционирующих клубочков; ж) объем циркулирующей крови; з) интенсивность метаболизма почки?
2 Содержание каких компонентов сыворотки крови характеризует нару шение выделительной функции почек:
а) электролитов; б) мочевины; в) креатинина; г) гамма-глобулина; д) “сред них” молекул; е) глюкозы; ж) кетоновых тел; з) жирных кислот; и) С-пептида; к) альбумина; л) адреналина; м) гаптоглобина?
3 При каких заболеваниях наблюдается внепочечная ретенционная азотемия:
а) гломерулонефрит; б) почечная недостаточность; в) пиелонефрит; г) не фротический синдром; д) опухоли простаты; е) инфаркт миокарда; ж) тирео токсикоз; з) атеросклероз; и) гепатит; к) кариес; л) цирроз печени; м) анемия?
4 При каких заболеваниях наблюдается гиперурикемия:
а) острый гломерулонефрит; б) хронический гломерулонефрит; в) лейке мия; г) почечно-каменная болезнь; д) подагра; е) рахит; ж) инфаркт миокарда; з) анемия?
5 В каких случаях наблюдается продукционная азотемия:
а) тяжелые инфекционные заболевания; б) гломерулонефрит; в) почечная недостаточность; г) нефролитиаз; д) злокачественные опухоли; е) инфаркт миокарда?
6 При каких заболеваниях наблюдается абсолютная ретенционная внепо чечная азотемия:
а) опухоли мочевого пузыря; б) почечной недостаточности; в) гломеруло нефрите; г) острой желтой атрофии печени; д) перитоните; е) пневмонии; ж) перелом костей?
7 Глюкозурия наблюдается при:
а) сахарном диабете; б) почечном диабете; в) стрессовых состояниях; д) ги перинсулинизме; е) синдроме Иценко-Кушинга; ж) почечной недостаточности; з) гломерулонефрите; и) острой атрофии печени; к) перитоните; л) пневмонии?
8 Когда отмечается повышение экскреции катехоламинов с мочой:
а) феохромоцитома; б) бронхиальная астма; в) гипертермия; г) стенокар дия покоя; д) гиподинамия; е) гломерулонефрит; ж) почечная недостаточность; з) нефролитиаз; и) злокачественные опухоли; к) инфаркт миокарда?
9 Когда снижается экскреция с мочой 17-кетостероидов:
а) болезнь Аддисона; б) адреногенитальный синдром; в) гиперплазия коры надпочечников; г) опухоли коры надпочечников; д) болезнь Иценко-Кушинга; е) стрессовые состояния; ж) инфаркт миокарда; з) сахарный диабет?
10 Способностью растворяться в воде и выделяться через почечный фильтр с мочой обладают:
а) глюкурониды билирубина; б) -изомер билирубина; в) -изомер билирубина; г) -изомер билирубина; д) -изомер билирубина?
11 При каких заболеваниях (состояниях) отмечается относительная азотемия:
а) холера; б) тяжелые инфекционные заболевания; в) камни мочевых путей; г) гломерулонефрит; д) почечная недостаточность; е) хроническая сердечная недостаточность; ж) глистная инвазия; з) неукротимая рвота?
12 При каких состояниях наблюдается ретенционная почечная азотемия:
а) почечная недостаточность; б) камни мочевыводящих путей; в) нефротический синдром; г) опухоли мочевого пузыря; д) цирроз печени; е) инфаркт миокарда; ж) полиартрит?
13 В каких случаях наблюдается увеличение содержания индикана в крови и моче:
а) начальные стадии развития почечной недостаточности; б) длительные запоры; в) непроходимость кишечника; г) гангрена легких; д) гипертоническая болезнь; е) почечно-каменная болезнь; ж) сахарный диабет; з) дерматит?
14 В каких случаях возникает резко выраженная миоглобинурия:
а) краш-синдром (разможжение тканей); б) тромбоэмболии легочной артерии; в) гипоксия; г) цирроз печени; д) болезнь Аддисона; е) инфаркт миокарда; ж) полиартрит?
15 Какие изменения выявляются при краш-синдроме (длительном раздавливании тканей):
а) снижение диуреза; б) азотемия; в) миоглобинурия; г) увеличение активности в сыворотке крови КФК; д) увеличение активности в сыворотке крови АСТ; е) увеличение активности в сыворотке крови ЛДГ; ж) снижение уровня мочевины?
16 С каким состоянием проводят дифференциальную диагностику мио глобинурий:
а) гемоглобинурия; б) билирубинемия; в) железодефицитная анемия; г) про теинурия; д) азотемия; е) гематурия?
17 Появление миоглобинурии при инфаркте миокарда наблюдается:
а) через 2,5–3 часа; б) через 8 часов; в) на следующие сутки; г) через неделю; д) на 2–3-ю неделю; е) не появляется?
18 В регуляции объема внеклеточной жидкости участвуют системы:
а) ренин-ангиотензин-альдостероновая; б) гипоталамус-вазопрессин; в) гипоталамус-гипофиз-кора надпочечников; г) калликреин-кининовая; д) симпато-адреналовая; е) гемостаза?
19 Гипоосмолярный синдром обусловлен наличием:
а) гипонатриемии; б) гипоальбуминемии; в) избыточной секреции АДГ; г) гиперсекрецией альдостерона; д) голодании; е) сахарного диабета; ж) гипертиреоза; з) гиперпаратиреоидизма; и) рвоты; к) диареи?
20 Ацидогенез в почках активируется при:
а) алкалозе; б) гиперосмолярности крови; в) гиперхлоремии; г) гиперкап нии; д) гипокалиемии; е) гиперкалиемии; ж) пневмонии; з) рвоте; и) диарее; к) гиперкортицизме?
21 Диуретики тиазидового ряда, действуют путем: а) увеличения выведе ния хлоридов; б) увеличения выведения бикарбонатов; в) уменьшения выведения бикарбонатов; г) усиления реабсорбции калия; д) увеличения выведения натрия; е) ингибирования реабсорбции натрия; ж) ингибирования реабсорбции хлоридов?
22 Диуретики – ингибиторы карбангидразы могут вызвать развитие мета болического ацидоза вследствие увеличения:
а) выведения хлоридов; б) выведения сульфатов; в) выведения бикарбо натов; г) реабсорбции натрия; д) активности ГНГ; е) реабсорбции калия; ж) выведения натрия; з) реабсорбции хлоридов?
Лабораторная работа. Анализ мочи с помощью тест-полосок корпорации "Байер"
Данные тест-полоски позволяют определить в одной пробе исследуемой мочи 10 показателей: pH мочи, содержание глюкозы, билирубина, уробили ногена, белка, кетоновых тел, нитритов, эритроцитов, лейкоцитов и удельный вес (плотность) мочи.
Реактивы и оборудование: химический стакан, моча, тест-полоска, индикаторная цветная шкала (стандарт), лист белой бумаги, часы с секундной стрелкой.
Ход работы. В сухой чистый химический стакан набирают свежую (находящуюся при комнатной температуре не более одного часа после сбора пробы), хорошо перемешанную нецентрифугированную мочу. Затем быстро опускают в него тест-полоску таким образом, чтобы все реагентные зоны были полностью погружены в мочу. Через 2 с тест-полоску вынимают, удаляя избыток мочи путем соприкосновения полоски с краем стакана и протягиванием ее в таком положении снизу вверх под углом приблизительно 45 градусов.
Примечание – не прикасаться к аналитической зоне тест-полоски руками и не допускать попадания на нее прямых солнечных лучей, влаги и т. п.
Затем помещают тест-полоску на лист белой бумаги в горизонтальное положение и визуально сравнивают цвет реагентных зон на тест-полоске с цветной шкалой стандарта.
Временные границы полуколичественного анализа мочи с помощью тест-полосок
|
Показатель |
Время определения, c |
|
Содержание глюкозы ” билирубина ” кетоновых тел Удельный вес (плотность) pH Содержание белка ” эритроцитов ” уробилиногена ” нитритов ” лейкоцитов |
30 30 40 45 До 60 ” 60 60 60 60 120 |
|
Примечание – Возможное изменение окраски реагентных зон, происходящие после 2 мин от начала анализа, не имеет диагностического значения. |
Качественный результат тестирования по всем параметрам тест-полоски, за исключением содержания лейкоцитов, можно получить через 1–2 мин. Для получения полуколичественного результата анализа следует точно соблюдать время по каждому параметру.
Можно провести исследование пригодных для тестирования полосок при помощи анализатора мочи "КЛИНИТЕК" (в случае наличия такового), строго соблюдая инструкцию по эксплуатации данного прибора (количественный анализ).
Определение индивидуальных показателей
Вначале целесообразно определить цвет, прозрачность и запах мочи.
1 Определение pH мочи
Принцип метода. Реагентная зона содержит 2 индикатора кислотности, которые способны изменять свою окраску при определенной pH среды: 0,2 % метилового красного; 2,8 % бромтимолового синего и 97 % нереактивных элементов. Диапазон чувствительности лежит в пределах pH = 5,0 … 8,5.
Метиловый красный – основной индикатор [интервал pH перехода окраски красной (более кислая среда) в желтую (более основная среда) – 4,2–6,3]:
Бромтимоловый голубой – кислый индикатор [интервал pH перехода окраски желтой (более кислая среда) в синюю (более основная среда) – 6,0–7,6]:
Клинико-диагностическое значение. В норме кислотность мочи зависит от пищи. При обычной диете она имеет слабокислую реакцию (pH = 5 … 7). Это обусловлено тем, что в процессе обмена образуются преимущественно кислые вещества (нелетучих кислот), удаление которых происходит через почки. Причем для сохранения щелочного резерва плазмы крови (NaHCO3) в основном выделяются эпителием канальцев более кислые соли (NaH2PO4, KH2PO4, NH4Cl и т. п.) и кислоты (H2CO3, молочная, ацетоуксусная, гидр оксимасляная). Обычно за сутки с мочой выделяется от 40 до 75 мэкв кислот. При преобладании в рационе мясной пищи реакция мочи сдвигается в кислую сторону, при преобладании растительной (овощная диета) или приема соды, щелочных минеральных вод – в щелочную. В щелочной моче преобладают Na2HPO4, K2HPO4, NaHCO3, KHCO3.
Реакция мочи изменяется при патологических состояниях. Кислая моча отмечается при голодании, сахарном диабете (в основном за счет кетоацидоза), лихорадочных состояниях, подагре (гиперурикурия). Щелочная моча бывает при рвоте (потеря Н+ с содержимым желудка), приеме некоторых препаратов (питьевая сода и т. п.), воспалении мочевого пузыря (цистит), пиелите, что связано с повышением уреазной активности патологической микрофлоры:
Карбамидамидогидролаза
|
СО(NН2)2 + Н2О |
СО2 + 2NН3 |
|
|
Мочевина |
Уреаза, КФ 3.5.1.5 |
Защелачивание мочи |
2 Определение содержания глюкозы в моче
Принцип метода. Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы (КФ 1.1.3.4) окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода.
Перекись водорода при участии фермента пероксидазы тут же реагирует с иодидом калия, вызывая коричневое окрашивание:
2KJ + H2O2 J2 + KOH.
Состав реагентной зоны: глюкозооксидаза – 2,2 %; пероксидаза хрена – 1,0 % (сопряженные ферментные системы); иодид калия (хромоген) – 8,1 %; буфер (для создания оптимума pH действия ферментов) – 69,8 %; нереактивные элементы – 18,9 %. Границы чувствительности, т. е. минимально определяемая концентрация – 75–125 мг/дл (4–7 ммоль/л). Физиологические концентрации не учитываются – проба отрицательна. Положительна при концентрации глюкозы в моче выше 5,5 ммоль/л. Цвет реагентной зоны изменяется от зеленого до коричневого. Диапазон чувствительности: 5,5 – больше или равен 111 ммоль/л, 1 – больше или равен 20 г/л.
Примечание – При высокой концентрации в моче глюкозы окрашивание реагентной зоны может быть неравномерным. В этом случае оценку следует проводить по наиболее темному тону. Чувствительность реакции снижается при увеличении удельного веса мочи и может зависеть от колебания температуры. Высокая концентрация аскорбиновой кислоты (и других восстанавливающих веществ) и/или кетоновых тел при низкой концентрации глюкозы может привести к неправильному (ложноотрицательному) результату, а присутствие производных фенолфталеина и сульфофталеина – к ложноположительному.
Клинико-диагностическое значение. В моче здорового человека глюкоза присутствует в виде следов (не более 0,4 г/л) и не определяется обычными химическими реакциями, так как она практически полностью реабсорбируется в проксимальных канальцах нефронов. В этом процессе принимают участие ферменты Е1 гексокиназа (глюкокиназа) и E2 щелочная фосфатаза:
Повышение концентрации глюкозы в моче – глюкозурия. Различают 2 группы глюкозурий: гипергликемические и нормогликемические. В случае гипергликемических глюкозурий увеличение содержания глюкозы в моче связано с повышением ее концентрации в плазме крови. Почечный порог для глюкозы составляет приблизительно 9,9 ммоль/л. Среди гипергликемиче ских глюкозурий выделяют физиологические и патологические.
Физиологические:
Патологические:
Нормогликемическая глюкозурия связана в основном с нарушением реабсорбции глюкозы в почечных канальцах. Причины:
3 Определение содержания билирубина в моче
Принцип метода. Диазониевая соль 2,4-дихлоранилина образует с билирубином азобилирубин – комплекс, окрашенный в лиловый цвет.
Состав реагентной зоны: 0,4 % диазониевой соли 2,4-дихлоранилина; 37,3 % – буфер; 62,3 % – нереактивные элементы. Границы чувствительности – 0,4–0,8 мг/дл (7–14 мкмоль/л).
Примечание – большое количество аскорбиновой кислоты в моче может привести к неправильному негативному результату.
Клинико-диагностическое значение. В норме моча содержит минимальные количества билирубина, не выявляемые обычными качественными пробами. Моча, содержащая желчные пигменты, будет иметь желтовато-коричневый или зеленый цвет. Незначительная билирубинурия (в виде щелочных солей) указывает на раннюю стадию заболевания печени. Значительное увеличение билирубина в моче связано с обтурационными желтухами ( например, закупорке желчного протока), а также с прогрессирующими паренхиматозными желтухами. Увеличение идет в основном за счет прямого билирубина. Непрямой билирубин появляется в моче при значительных поражениях почек.
4 Определение уробилиногена в моче
Принцип метода. Уробилиноген при взаимодействии с пара-диметил ами нобензальдегидом образует комплексное соединение розового цвета – уробилиногенальдегид.
Состав реагентной зоны: 0,2 % пара-диметиламинобензальдегида; 99,8 % – нереактивные элементы.
Границы чувствительности – 0,2 мг/дл (3,2 мкмоль/л). Диапазон чувстви тельности: 0,2–8 мг/дл (3,2–131 мкмоль/л).
Примечание – Ложный позитивный результат может быть вызван реакцией с аминосалициловой кислотой и сульфанил-мочевиной; ложное окрашивание наблюдается и в присутствии бензойной кислоты. Ложный негативный результат может быть вызван формалином. Реактивность теста увеличивается с повышением температуры. Оптимум температуры 22 … 26 °C.
Клинико-диагностическое значение. У здоровых людей концентрация уробилиногена в моче составляет от 0,2 до 1,8 мг/дл. С 2 мг/дл начинается область патологии.
Уробилиноидурия наблюдается при:
Отсутствие в моче уробилиногена при повышенном содержании билирубина указывает на обтурационную желтуху.
5 Определение содержания белка в моче
Принцип метода. При взаимодействии альбумина с бромфеноловым голубым образуется комплекс зелено-голубого цвета, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна содержанию альбумина.
Состав реагентной зоны: 0,3 % тетрабромфенолового голубого; 97,3 % – буфера; 2,4 % – нереактивных элементов.
Границы чувствительности – 15–30 мг/дл.
Диапазон чувствительности – 30 и больше или равно 2000 мг/дл (0,30 –больше или равно 20 г/л).
Примечание – Данный тест характеризует в основном содержание в моче альбумина. Глобулин, тела Бенс-Джонса, микропротеины выявляются слабее. Негативный результат наличия белка не исключает его присутствия. Сильно щелочная моча или растворение в моче антисептиков и средств дезинфекции, например хлоргексидина, может вызвать неправильный позитивный результат.
Клинико-диагностическое значение: В нормальной моче содержатся лишь следы белка (представлен главным образом уромукоидом – продуктом функционирования почечной ткани), не выявляющиеся обычными химическими методами. Появление белка в моче – протеинурия – свидетельствует о нарушении баланса между процессами его фильтрации и реабсорбции.
Виды протеинурий: преренальная, ренальная (клубочковая и канальцевая), постренальная, смешанная.
Причины протеинурий:
а) усиленным распадом белков тканей при физической нагрузке, психо-эмоциональном напряжении, стрессорном состоянии;
б) повышенным гемодиализом, связанным с увеличением активности ренина в плазме.
6 Определение содержания кетоновых тел в моче
Принцип метода. Кетоновые тела образуют с нитропруссидом натрия комплексные соединения оранжево-красного (щелочная среда) и вишневого (при подкислении) цвета:
Состав реагентной зоны: 7,1 % – нитропруссида натрия; 92,9 % – буфера (ацетатного).
Граница чувствительности – 5–10 мг/дл (0,5–1,0 ммоль/л). Диапазон чувствительности – 0,05–1,6 г/л (0,5–16 ммоль/л).
Примечание – Неправильный позитивный результат может возникнуть в сильнопиг ментированных пробах мочи или при наличии L-дофа-продуктов обмена в моче.
Клинико-диагностическое значение. Кетоновые тела в нормальной моче встречаются в самых ничтожных количествах. Появление небольшой концентрации кетонов в моче может быть вызвано физическими нагрузками, голоданием, недостаточным углеводным питанием (кетогенная диета), во время беременности или при занятии профессиональным спортом. Часто кетоны можно определить в моче до того, как повысится их концентрация в сыворотке крови (из-за действия физико-химических и физиологических механизмов коррекции нарушений кислотно-основного состояния) – ранняя диагностика. Значительная кетонурия наблюдается при сахарном диабете (недостаточность потребления глюкозы тканями приводит к активации альтернативных энергопродуцирующих метаболических путей: липолиза, бета-окисления жирных кислот; и синтеза других транспортных форм субстратов энергообмена – кетоновых тел); увеличении концентрации контринсулярных гормонов (акромегалия, стероидный диабет и т. п.); тиреотоксикозе (повышение расхода углеводов); подпаутинных кровоизлияниях в мозг; черепно-мозговых травмах; возбуждении ЦНС; болезни Гирке. В раннем детском возрасте продолжительные заболевания желудочно-кишечного тракта (дизентерия, токсикоз) могут привести к кетонурии в результате голодания и истощения.
7 Определение содержания нитритов в моче
Принцип метода и клинико-диагностическое значение. Принцип тестирования основан на том, что при патологии мочевыводящих путей находящиеся в них бактерии (граммотрицательные микробы) превращают нитраты мочи в нитриты. Розовые пятна или уголки не стоит воспринимать как позитивный результат. Если же возникает легкое окрашивание всей реагентной зоны в розовый цвет, то это указывает на существование характерных бактерий (более 106 микробов/мл). Интенсивность окрашивания не пропорциональна количеству бактерий, и негативный результат не является показателем полного отсутствия бактерий.
Состав реагентной зоны: 1,4 % пара-арсаниловой кислоты; 1,3 % 1,2,3,4-тетрагидробензохинолин-3-ола; 10,8 % буфера; 86,5 % нереактивных элементов.
Границы чувствительности – 0,06–0,10 мг/дл (13–22 мкмоль/л) NO2-.
Примечание – Ложный негативный результат может возникнуть если: 1) время нахождения мочи в мочевом пузыре менее 4 часов (поэтому для анализа рекомендуется брать утреннюю мочу, т. к. чем больше время нахождения мочи в мочевом пузыре, тем точнее результат анализа); 2) возбудитель инфекции мочевыводящих путей действует непроизводительно; 3) в силу особенностей питания в моче мало нитратов. Ложнонегативный результат также может быть при высоких концентрациях в моче аскорбиновой кислоты и одновременном низком содержании нитритов.
8 Определение содержания эритроцитов в моче
Принцип метода. Основан на том, что гемоглобин эритроцитов, обладая пероксидазной активностью, разлагает диизопропиленбензона дигидропероксид с выделением атомарного кислорода, который окисляет 3,5,3',5'-тетраметилбензидин в соединение зеленого цвета:
Состав реагентной зоны: 6,8 % диизопропиленбензона дигидропероксида, 4 % – 3,5,3',5'-тетраметилбензидина, 48 % – буфера; 41,2 % – нереактивных элементов.
Границы чувствительности – 0,015–0,062 мг/дл Hb.
Диапазон чувствительности – 10–200 эритроцитов/мкл.
Для свободного гемоглобина реагентная зона окрашивается равномерно в зеленый цвет. Целые (неповрежденные) эритроциты появляются на реагентной зоне в виде зеленых точек.
Примечание – Повышенный удельный вес или повышенная концентрация белка может снизить реактивность теста.
Клинико-диагностическое значение: В норме кровь в моче отсутствует. Появление крови с форменными элементами в моче – гематурия; появление в моче кровяных пигментов (гемоглобина и метгемоглобина) – гемоглобинурия. При гематурии моча непрозрачна, имеет красноватый оттенок; при гемоглобинурии моча чаще окрашена в кофейно-бурый цвет. В случае гематурии и гемоглобинурии в моче содержится белок. Гематурии подразделяются на почечные и внепочечные. Почечная гематурия – основной симптом острого нефрита (сопровождается гемоглобинурией). Внепочечные гематурии связаны с воспалительными процессами и травмами мочевых путей (мочевые камни, рак мочевого пузыря, цистит). Гемоглобинурия отмечается при отравлении гемолитическими ядами, тяжелых инфекциях, ожогах, при которых происходит разрушение (гемолиз и связанная с ним гемоглобинемия) эритроцитов.
9 Определение содержания лейкоцитов в моче
Принцип метода. Переход окраски индикаторной зоны от бежевой через серую к сиреневой и далее фиолетовой свидетельствует о пропорциональном увеличении числа лейкоцитов в моче, соответствующим шкале [15 (следы) – 70 – 125 – 500 лейкоцитов/мкл].
Состав реагентной зоны: 0,4 % производного пиррола аминокислотного; 0,2 % соли диазония; 40,9 % буфера; 58,5 % нереактивных элементов.
Границы чувствительности – 5–15 лейкоцитов/поле.
Диапазон чувствительности – 15–500 лейкоцитов/мкл.
Примечание – Повышенная концентрация глюкозы, щавелевой кислоты, медикаментов (цефалексин, цефалотин, тетрациклин) приводит к ослаблению реакции. Сильно окрашенные пробы мочи могут повлиять на цвет реагентной зоны. Иногда у пациентов женского пола позитивный результат может быть вызван примесями вагинальных выделений в моче.
Клинико-диагностическое значение. В норме моча не содержит лейкоцитов (до 10 в одном микролитре). Лейкоциты мочи представлены главным образом нейтрофилами, но могут быть обнаружены эозинофилы и лимфоциты. Увеличение числа лейкоцитов в моче (лейкоцитурия) до очень больших количеств (пиурия) свидетельствует о воспалительных процессах в почках и мочевыводящих путях (туберкулез почки, пиелиты, циститы, пиелонефриты).
10 Определение плотности мочи
Принцип метода. Тест основан на pKs (показатель эмпирической константы высаливания) – изменении различных электролитов в зависимости от концентрации (определяющей ионную силу) ионов в моче.
Состав реагентной зоны: 2,8 % бромотимолового голубого; 97,2 % поли-(метил-, винил-, эфир-малеиновой кислоты натриевая соль).
Диапазон чувствительности – 1,000–1,030 г/л. Изменение окраски от сине-зеленой через морскую, зеленую, защитную, травяную, хаки до охристой.
Примечание – При уровне pH мочи выше 6,5 результат увеличивается на 0,005. Повышенное значение плотности может быть вызвано присутствием небольшого количества (1–7,5 г/л) белка в моче.
Клинико-диагностическое значение: Плотность мочи в норме колеблется в широких пределах (1,002–1,035 г/л). Она зависит от количества растворенных в ней веществ и количества выделяемой мочи, с одной стороны, и от соотношения количества жидкости, поступившей в организм и выведенной из организма внепочечными путями (потоотделение, диарея и т. п.) – с другой.
Плотность мочи дает представление о приблизительном количестве о растворенных в ней веществ. Ориентировочно расчет плотного остатка (в г/л) получают, умножив 2 последние цифры (сотые и тысячные доли единицы) относительной плотности на коэффициент 2,6. В норме с мочой выделяется 50–75 г/сут плотных веществ. (В норме чем больше объем выделяемой мочи, тем меньше ее плотность и наоборот).
Изостенурия – выделение мочи с постоянной плотностью, равной плотности первичной мочи (1,010 г/л) – свидетельствует о почечной недостаточности. Постоянно низкое значение плотности мочи – гипоизостенурия – указывает на нарушения концентрационной функции почек (хронический нефрит, первично или вторично сморщенная почка). При несахарном диабете резко снижается плотность мочи, что связано с нарушением обратной реабсорбции воды.
При лихорадочных состояниях, общем венозном застое отмечается увеличение плотности и уменьшение объема выделяемой мочи. Сахарный диабет приводит к несоответствию между количеством мочи (наблюдается полиурия) и ее плотностью, повышенной из-за присутствия больших концен траций глюкозы и кетоновых тел.
РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ. Оформление результатов исследования проводится по следующей форме:
Клинический анализ мочи.
Ф. И. О. исследуемого ________________________ Пол______ Дата анализа____________
|
Показатель |
Результат анализа |
Вывод |
|
|
качественного |
(полу) количественного |
||
|
Оценка цвета |
Насыщенность |
В данной графе результат анализа сравнивается с нормаль ными величинами, и в случае несоответствия норме на основе клинико-диагности ческого значения дается предварительная оценка воз можных причин патологии |
|
Оценка прозрачности |
Степень прозрачности |
|
|
Наличие / отсутствие |
Характер запаха |
|
|
- |
г/л |
|
|
Кисл./нейтр./осн. |
pH |
|
|
+, – |
Здесь указываются конкретные величины содержания вещества в случае положительной пробы и нижняя граница чувствительности в случае отрицательной пробы |
|
|
+, – |
||
|
+,– |
||
|
Норма или выше нормы |
||
|
+, – |
||
|
+, – |
||
|
+, – |
||
|
+, – |
Общий вывод. Делается запись об освоении данного метода анализа и предположительный диагноз, поставленный на основе полученных результатов анализа мочи.
Рекомендуемая литература
Основная
Дополнительная
Занятие 31
Биохимия печени. Обмен ксенобиотиков
Цель занятия: изучить особенности метаболизма печени и биохимическую основу ее основных функций в норме и при патологии. Научиться определять активность щелочной фосфатазы сыворотки (плазмы) крови.
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
а) транспорт в крови и через мембраны;
б) гидроксилирование и микросомальная ДЦ и др. реакции;
в) конъюгация (роль ФАФС, УДФГК, АМ, ацетил КоА и др.).
а) гепатоцеллюлярных – альдолаза, ЛДГ, АСТ, АЛТ, ГДГ;
б) холестатических – ЩФ, 5-нуклеотидаза, холинэстераза, ГГТП, ЛАП.
Задачи
1 При каких заболеваниях отмечается повышение тимоловой пробы:
а) острый ревматизм; б) хронический гепатит в стадии обострения; в) хронический гепатит вне стадии обострения; г) желчно-каменная болезнь; д) цирроз печени; е) хронический гастрит; ж) инфаркт миокарда; з) острая пневмония?
2 При каких заболеваниях наблюдается снижение уровня мочевины в крови:
а) острая желтая атрофия печени; б) подагра; в) обтурационная кишечная непроходимость; г) гемолитическая желтуха; д) брюшной тиф; е) гломерулонефрит; ж) гипертоническая болезнь?
3 Какие биохимические параметры характеризуют воспалительный про цесс при заболеваниях печени:
|
а) белковые фракции; |
д) содержание мочевины; |
|
б) активность трансаминаз; |
е) содержание электролитов; |
|
в) тимоловая проба; |
ж) содержание билирубина? |
|
г) содержание холестерина; |
4 Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови повышается при:
а) рахите; б) остеомаляции; в) остеопорозе; г) мышечной дистрофии; д) панкреатите; е) раке простаты; ж) регенерации кости; з) инфаркте миокарда?
5 Активность кислой фосфатазы сыворотки крови повышается при:
а) остеосаркомах; б) инфаркте миокарда; в) лейкозах; г) язвенной болезни желудка; д) костном туберкулезе; е) пневмонии; е) раке простаты; з) пере ломах кости?
6 Активность АЛТ сыворотки крови повышается при:
а) механической желтухе; б) холангите; в) остром гепатите; г) инфаркте миокарда; д) мышечной дистрофии; е) рахите; ж) пневмонии; з) панкреатите; и) раке печени; к) язве желудка?
7 При каких заболеваниях возрастает активность фруктозо-1,6-дифосфат альдолазы сыворотки крови:
а) острый гепатит; б) мышечная дистрофия; в) дерматомикоз; г) инфаркт миокарда; д) острые респираторные инфекции; е) пневмония; ж) атероскле роз; з) ларингит; и) холангит; к) пиелонефрит?
8 Активность фруктозо-1-фосфатальдолазы сыворотки крови повышается при:
а) гемолитической анемии; б) функциональной гипербилирубинемии; в) циррозе печени (неактивная фаза); г) вирусном гепатите; в) циррозе печени (активная фаза); д) уремии?
9 Какие тесты характеризуют антиоксидантную систему организма:
а) уровень -токоферола; б) уровень C-реактивного белка; в) уровень гамма-глобулинов; г) уровень общих липидов; д) уровень церулоплазмина; е) активность АЛТ; ж) активность АСТ?
10 Основными антиоксидантами организма являются:
а) -токоферол; б) убихиноны; в) витамин K; г) холестерин; д) НЭЖК; е) аскорбат; ж) ионы Са++; з) витамин А; и) стеркобилиноген; к) гамма-глобулины?
11 Ферментами, ингибирующими процесс ПОЛ являются:
а) липоксигеназа; б) ксантиноксидаза; в) NADРH-зависимая микросомальная диоксигеназа; г) супероксиддисмутаза; д) глутатионпероксидаза; е) каталаза?
12 Для надпеченочных желтух характерно увеличение в плазме крови:
а) уровня неконъюгированного билирубина;
б) уровня билирубин-глюкуронидов;
в) уровня желчных кислот; г) активности трансаминаз; д) уровня липидов; е) уровня лактата?
13 Для печеночной желтухи характерно повышение уровня:
|
а) неконъюгированного билирубина; |
д) стеркобилиногена в кале; |
|
б) билирубин-глюкуронидов; |
е) стеркобилиногена в крови; |
|
в) уробилиногена в моче; |
ж) желчных кислот в моче? |
|
г) уробилиногена в крови; |
14 Какой из синдромов поражения печени характеризуется одновремен ным увеличением активности щелочной фосфатазы и гамма-глутамилтранс пептидазы, повышением уровня холестерина, ЛПОНП, ЛПНП и общего билирубина:
|
а) цитолиза; |
г) печеночно-клеточной недостаточности; |
|
б) холестаза; |
д) тотальной печеночной недостаточности? |
|
в) воспалительный; |
15 Какой из синдромов поражения печени характеризуется увеличением активности АЛТ, фруктозо-1 фосфатальдолазы, ЛДГ и содержания билирубина:
|
а) цитолиза; |
г) печеночно-клеточной недостаточности; |
|
б) холестаза; |
д) тотальной печеночной недостаточности? |
|
в) воспалительный; |
16 Какой из синдромов патологии печени характеризуется уменьшением активности холинэстеразы, содержания холестерина, протромбина и увеличением концентрации билирубина:
|
а) цитолиза; |
г) печеночно-клеточной недостаточности; |
|
б) холестаза; |
д) тотальной печеночной недостаточности? |
|
в) воспалительный; |
17 Какой из синдромов патологии печени характеризуется положитель ной тимоловой пробой, умеренной гиперпротеинемией, гиперглобулинемией, увеличением уровня фибриногена:
|
а) цитолиза; |
г) печеночно-клеточной недостаточности; |
|
б) холестаза; |
д) тотальной печеночной недостаточности? |
|
в) воспалительный; |
18 Где синтезируется альфа-глобулины и белки гемостаза:
а) костный мозг; б) селезенка; в) кишечник; г) лимфоузлы; д) печень; е) тимус?
19 Где синтезируются часть бета- и гамма-глобулины:
а) костный мозг; б) селезенка; в) кишечник; г) лимфоузлы; д) печень; е) тимус?
20 При каких состояниях увеличивается активность гамма-глутамил транспептидазы:
а) гемолиз; б) обтурация желчевыводящих путей; в) отравление барбитуратами; г) острые инфекции; д) хронический гастрит; е) реактивные гепатиты алкоголиков; ж) язвенная болезнь желудка?
21 Активность холинэстеразы крови понижается при:
а) хронических гепатитах; б) циррозе печени; в) вирусном гепатите; г) остром панкреатите; д) механической желтухе; е) инфаркте миокарда?
22 При патологии каких органов наблюдается снижение уровня факторов свертывающей системы крови:
а) заболевания почек; б) болезни печени; в) заболевания легких; г) болезни суставов; д) болезни поджелудочной железы; е) диарея; ж) сердечная недостаточность?
23 При каких заболеваниях становится положительным показатель тимо ловой пробы:
|
а) паренхиматозный гепатит; |
д) острая пневмония; |
|
б) острая желтая атрофия печени; |
е) острые вирусные инфекции; |
|
в) острый панкреатит; |
ж) инфаркт миокарда; |
|
г) гемолитическая анемия; |
з) желтушный цирроз печени? |
24 Какие изменения характерными для печеночной комы:
а) гипопротеинемия; б) повышение уровня аммиака в крови; в) наруше ние синтеза мочевины; г) увеличение количества альбумина; д) уменьшение количества альбумина; е) повышение уровня фибриногена; ж) гиперглике мия; з) гипогликемия?
25 Синдром холестаза характеризуют такие показатели, как:
а) активность трансаминаз; б) активность холинэстеразы; в) активность щелочной фосфатазы; г) уровень билирубина; д) уровень общего белка; е) активность кислой фосфатазы; ж) активность лейцинаминопептидазы (ЛАП); з) билирубин мочи; и) активность гаммаглутамилтранспептидазы (ГГТП)?
Лабораторная работа Определение активности щелочной фосфатазы сыворотки крови
Принцип метода: щелочная фосфатаза расщепляет в глициновом буфере п-нитрофенилфосфат с образованием п-нитрофенола и фосфата. Мерой каталитической концентрации фермента является количество освобожденного п-нитрофенола.
Ход работы.
Вносят реагенты в пробирки согласно таблице.
|
Отмерить |
Опытная проба |
Контрольный раствор |
|
Рабочий реагент |
1,00 |
1,00 |
|
Нагревать при температуре 37C в течение 5 минут |
||
|
Сыворотка или плазма |
0,02 |
- |
|
Тщательно перемешать и инкубировать при температуре 37C в течение 15 минут |
||
|
Раствор ингибитора |
5,00 |
5,00 |
|
Сыворотка или плазма |
- |
0,02 |
Тщательно перемешать и измерить величину экстинкции опытной пробы против контрольной пробы на фотоэлектроколориметре в интервале длин волн 400-420 нм в кюветах с длиной оптического пути 1 см. Окраска раствора устойчива в течение 30 минут.
Расчет активности ЩФ произвести по калибровочному графику.
Клинико-диагностическое значение.
Нормальные величины для взрослых: 30-90 Ед/л (0,5-1,5 мккат/л).
Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови увеличивается при костных заболеваниях, связанными с пролиферацией остеобластов, и заболеваниями, сопровождающимися явлениями холестаза (механическая желтуха, холангит, лекарственные и алкогольные гепатиты, первичный билиарный цирроз печени, абсцесс печени, опухоли и метастазы). У детей активность щелочной фосфатазы резко возрастает при рахите. Снижение активности ЩФ наблюдается при гипофосфатемии, нарушении роста костей, накоплении радиоактивных веществ в костях.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Рекомендуемая литература
Основная
Дополнительная
Занятие 32
Контрольное по разделу «Биохимия крови, почек
и печени»
Цель занятия: контроль усвоения вопросов пройденного раздела “Биохимия крови, почек и печени”.
Контрольные вопросы
- объема циркулирующей крови (ОЦК) и артериального давления;
- баланса электролитов;
- КОС (механизмы ацидо- и аммониогенеза);
- уровня глюкозы в крови (особенности глюконеогенеза в почках);
- уровня биологически активных веществ;
- эритропоэза.
Занятие 33
Биохимия мышечной ткани и миокарда
Цель занятия: изучить особенности метаболизма мышечной ткани и миокарда, биохимическую основу мышечного сокращения. Изучить биохимическую основу острой и хронической сердечной недостаточности. Научиться определять содержание макроэргических соединений мышечной ткани (АТФ и креатинфосфата).
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
а) препараты, увеличивающие сократимость миокарда (сердечные гликозиды, их механизм действия, ингибиторы фосфодиэстеразы, Са-сенситезато ры и др.)
б) препараты, уменьшающие нагрузку на миокард (вазодилятаторы и др.)
в) препараты, блокирующие нейро-эндокринную регуляцию миокарда (бета-адреноблокаторы и др.)
г) препараты, улучшающие метаболизм миокарда (коронаролитики, субстраты энергетического обмена, рибоксин, фосфокреатин, антигипоксанты, антиоксиданты, анаболики, Ca2+ антагонистов и др.).
Задачи
1 Диагностическим критерием заболеваний мышечной системы является уровень выделения с мочой:
а) аминокислот; б) мочевины; в) мочевой кислоты; г) аммонийных солей; д) креатина; е) креатинина; ж) глютатиона; з) тионеина?
2 При каких заболеваниях увеличивается экскреция креатина с мочой:
а) обтурационная желтуха; б) острый гепатит; в) закупорка мочевых путей; г) значительные оперативные вмешательства; д) прогрессирующая мышечная дистрофия; е) инфаркт миокарда; ж) пневмония; з) акромегалия; и) сахарный диабет; к) гипертиреоз?
3 При каких состояниях увеличивается концентрация креатинина в сыворотке крови:
а) прогрессирующая мышечная дистрофия; б) опухоли мочевых путей; в) кишечная непроходимость; г) гломерулонефрит; д) острый панкреатит; е) цирроз печени; ж) диарея; з) акромегалия; и) сахарный диабет; к) гипертиреоз?
4. Гипокальциемия обнаруживается у больных, страдающих:
а) рахитом; б) хронической почечной недостаточностью; в) закупоркой желчевыводящих путей; г) гипопаратиреоидизмом; д) метастазами рака в костную ткань; е) гипотиреозом; ж) сахарным диабетом; з) дефицитом магния; и) циррозом печени; к) алкоголизмом?
5 Гипокалиемия клинически проявляется в виде:
а) снижения тонуса гладкой и скелетной мускулатуры; б) усиления рефлексов; в) появления вялых параличей; г) расширения сердца; д) усиления перистальтики кишечника; е) общей слабости; ж) гиперкинезов; з) пареза кишечника; и) тахикардии; к) брадикардии?
6 Накопление молочной кислоты в организме происходит при:
а) полном прекращении кровообращения (клиническая смерть); б) сердечно-сосудистой недостаточности; в) кровопотере; г) гипоксии; д) усиленной мышечной работе; е) гипероксии; ж) диарее; з) гиповитаминозе В1?
7 Что является характерным для мышечной дистрофии:
а) креатинемия; б) кетонурия; в) глюкозурия; г) креатинурия; д) креати нинурия; е) аминацидурия; ж) фосфатурия; з) гипераммонемия?
8 При каких заболеваниях повышается концентрация миоглобина в крови:
а) хроническом гепатите; б) инфаркте миокарда; в) пневмонии; г) тубер кулезе легких; д) остром панкреатите; д) остром холецистите; е) краш-син дроме; ж) пиелонефрите?
9 Для диагностики инфаркта миокарда в первые 6–8 часов после приступа целесообразно исследовать плазму крови на:
а) содержание тропонина; б) уровень миоглобина; в) активность креатинкиназы; г) активность АСТ; д) активность гамма-глутамилтранспептидазы; е) активность АЛТ; ж) активность амилазы; з) активность аргиназы?
10 Для диагностики инфаркта миокарда в первые сутки после приступа целесообразно исследовать плазму крови на:
а) изоферменты ЛДГ; б) миоглобин; в) альдолазу; г) АСТ; д) аргиназу; е) изоферменты КФК; ж) АЛТ; з) щелочную фосфатазу; и) кислую фосфатазу; к) тропонин Т?
11 Какие тесты целесообразно исследовать на 2–3-е сутки после инфаркта миокарда:
а) креатинфосфокиназа (КФК); б) бета-оксибутират ДГ; в) гамма-глутамилтрансфераза; г) изоферменты АСТ; д) изоферменты ЛДГ; е) церулоплазмин; ж) изоферменты КФК; з) АСТ; и) АЛТ; к) амилаза?
12 Активность каких ферментов информативна на 4–6-е сутки после инфаркта миокарда:
а) креатинфосфокиназы; б) холинэстеразы; в) гамма-глутамилтрансфера зы; г) изоферментов АСТ; д) изоферментов ЛДГ; е) церулоплазмина; ж) изо ферментов КФК; з) АСТ; и) ЛДГ; к) бета-оксибутират ДГ?
13 При каких заболеваниях увеличивается концентрация креатинина в крови:
а) остром бронхите; б) значительных оперативных вмешательств; в) сахарном диабете; г) обширных травмах; д) хроническом гастрите; е) инфаркте миокарда; ж) хроническом гломерулонефрите?
14 Специфичными для скелетной мышечной ткани ферментами являются:
а) фруктозомонофосфат-альдолаза; б) аргиназа; в) алкогольдегидрогена за; г) креатинфосфокиназа; д) бета-оксибутират ДГ; е) BB изоформы КФК; ж) MВ изоформы КФК; з) MM изоформы КФК; и) амилаза; к) ЛДГ1 и ЛДГ2; л) ЛДГ4 и ЛДГ5?
15 Специфичными для миокарда ферментами являются:
а) фруктозомонофосфат-альдолаза; б) аргиназа; в) алкогольдегидрогена за; г) креатинфосфокиназа; д) бета-оксибутират ДГ; е) BB изоформы КФК; ж) MВ изоформы КФК; з) MM изоформы КФК; и) амилаза; к) ЛДГ1 и ЛДГ2; л) ЛДГ4 и ЛДГ5?
16 Какой из ферментных тестов отражает процессы репарации после инфаркта миокарда:
а) креатинкиназа; б) АСТ; в) гамма-глутамилтранспептидаза; г) холинэстераза; д) церулоплазмин; е) лейцинаминопептидаза; ж) амилаза; з) ЛДГ?
17 Появление миоглобина в крови при инфаркте миокарда отмечается через:
а) 2,5–3 часа; б) 8 часов; в) 24 часа; г) 48 часов; д) неделю; е) 0,5–1 час?
18 Наиболее ранний срок появления миоглобина в моче при инфаркте миокарда (через):
а) 1,5–3 часа; б) 8 часов; в) 24 часа; г) 48 часов; д) неделю; е) 2–3 недели?
19 Для диагностики каких заболеваний исследуют содержание миоглоби на в сыворотке крови:
а) инфаркта миокарда; б) вирусного гепатита; в) гемолитической анемии; г) патологии костной ткани; д) пневмонии; е) язвы желудка; ж) постгеморра гической анемии; з) ожоговой болезни; и) сахарного диабета I типа; к) краш-синдрома?
20 Фосфорилированная форма креатина в мышцах является:
а) источником неорганического фосфата для образования АТФ; б) компонен том цикла Фелига; в) одним из факторов электромеханического сопряжения; г) важным источником макроэргов; д) компонентом цикла Кори; е) переносчиком цитрата через мембрану митохондрий; ж) транспортной формой макроэргов в кардиомиоците?
21 Что из указанного включается в биосинтез креатинфосфата:
а) пиридоксальфосфат; б) АТФ; в) метионин; г) цистеин; д) валин; е) NADP; ж) аргинин; з) триптофан; и) АМФ; к) глицин; л) биотин; м) аскорбат?
22 Мышечные клетки, инкубированные с 3H-тимидином, быстрее акку мулируют радиоактивную метку:
а) в митохондриях; б) рибосомах; в) гяРНК; г) гладком ЭПР; д) ядре; е) аппарате Гольджи; ж) лизосомах; з) шероховатом ЭПР?
Лабораторные работы
Лабораторная работа №1. Количественное определение макроэргических соединений мышц (АТФ и креатинфосфата)
В мышечной ткани содержится два основных макроэргических соединения – АТФ и креатинфосфат. Основным путем образования АТФ в тканях является окислительное фосфорилирование, осуществляемое в процессе тканевого дыхания. Креатинфосфат образуется в мышце при участии АТФ в состоянии покоя (см. уравнение) и является транспортной и резервной формой макроэргического фосфата при активной мышечной работе.
Принцип метода. Метод основан на количественном определении (по цветной реакции с молибдатом аммония в присутствии аскорбиновой кислоты) макроэргического фосфата в молекулах АТФ и креатинфосфата, который легко отщепляется при непродолжительном гидролизе в кислой среде (так называемый лабильно связанный фосфор).
Определение содержания неорганического фосфора в пробах мышечного экстракта, до гидролиза и после него, дает представление о количестве лабильно связанного фосфора, макроэргических соединений мышцы.
Ход работы. Работа состоит из 5 этапов:
1 Экстракция органического фосфата. 0,5 г мышечной кашицы помещают в пробирку, стоящую в ледяной бане, и добавляют в нее 5 мл охлажденного 3 %-го раствора ТХУ. Содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой для экстрагирования АТФ и креатинфосфата в течение 5 мин. Экстракт фильтруют в мерную пробирку, стоящую в ледяной бане. Остаток мышечной кашицы в пробирке заливают 5 мл дистиллированной воды, продолжают экстракцию в течение 5 мин на холоде. Полученный экстракт фильтруют в ту же мерную пробирку и доводят общий объем до 10 мл дистиллированной водой.
2 Гидролиз органического фосфата. В две пробирки отбирают по 0,5 мл безбелкового фильтрата. Первая пробирка – контрольная, вторая – опытная. В опытную пробирку добавляют 1 мл 1 М раствора HCl. Закрывают фольгой и помещают в кипящую баню на 10 мин для гидролиза фосфорных связей. Затем раствор охлаждают и добавляют 1 мл 1 М раствора NaOH. В контрольную пробирку (без предварительного кипячения) добавляют 1 мл 1 М раствора NaOH и 1 мл 1 М раствора HCl. В опытную и контрольную пробирки добавляют из бюретки по 7,5 мл дистиллированной воды для получения объема 10 мл.
3 Проведение качественной реакции. Дальнейшие процедуры обязательно проводят одновременно с опытной и контрольной пробами. Из обеих пробирок отбирают по 0,8 мл жидкости, переносят в две другие пробирки, содержащие по 5 мл активного буфера, затем добавляют по 0,5 мл 1 М раствора молибдата аммония, 0,5 мл 1 %-го раствора аскорбиновой кислоты. Содержимое каждой пробирки быстро перемешивают и оставляют стоять при комнатной температуре точно 10 мин.
4 Фотометрия окрашенного комплекса. Контрольную и опытную пробы колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром (длина волны 670 нм) против воды. В опытной пробе (после гидролиза) определяемый неорганический фосфор представляет собой сумму лабильно связанного фосфора и фосфатных солей, присутствующих в тканях. В контрольной пробе – только фосфатные соли.
5 Расчет содержания макроэргических фосфорных соединений. Из величины оптической плотности, найденной для опытной пробы, вычитают величину оптической плотности, полученную для контрольной пробы. Концентрацию лабильно связанного неорганического фосфора в пробе находят по калибровочному графику.
Расчет. Рассчитывают количество лабильно связанного фосфора (в мг) на 100 г сырой ткани, учитывая разведение:
x = А 3,3 400 100,
где x – содержание (мг/100 г) макроэргических соединений в перерасчете на 1 мг АТФ в 100 г сырой ткани;
А – содержание АТФ в пробе, мг;
3,3 и 400 – коэффициенты перерасчета на 1 г ткани с учетом разведения растворов.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Рекомендуемая литература
Основная
Дополнительная
Занятие 34
Биохимия нервной системы
Цель занятия: изучить особенности метаболизма нервной ткани, биохимическую основу ее функционирования в норме и при различных патологических состояниях. Научиться определять активность холинэстеразы сыворотки крови.
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
а) углеводов (гликолиз, пентозный цикл, ЦТК), роль инсулина в метаболизме мозга;
б) макроэргов (АТФ и креатинфосфата);
в) белков, их состав, специфические белки нервной ткани S-100, белки миэлина, тубулин, факторы роста нервов и др. Олиго- и полипептиды нервной ткани – ансерин, карнозин, гомокарнозин, либерины, статины, вещество P, кальцийнейрин и др., их функции. Энкефалины, эндорфины, их природа, механизм действия и физиологическая роль;
г) аминокислот, роль дикарбоновых аминокислот – глу и асп в метаболизме мозга (цикл Робертса, цикл пуриновых нуклеотидов – реакции, ферменты, субстраты, физиологическая роль);
д) нуклеиновых кислот;
е) липидов – липиды миэлина, особенности биосинтеза и роль холестерина.
а) электрогенез (механизм электрогенеза);
б) метаболизм (синтез и распад) медиаторов, типы медиаторов. Краткая характеристика (синтез, биохимические и физиологические эффекты, распад) – ацетилхолин, катехоламины, серотонин, дофамин, ГАМК, ГОМК, аминокислоты, гистамин. Состояние медиаторного обмена в норме и при некоторых патологических состояниях (паркинсонизм, шизофрения, маниакальные состояния, депрессии и др.);
в) строение синапса, механизмы синаптической и аксональной передачи. Понятие об аксональном транспорте и его физиологической роли;
г) биохимические механизмы памяти.
Задачи
1 Основным источником аммиака в ткани мозга является реакция (напишите реакции):
а) дезаминирования асп; б) дезаминирования глу; в) дезамидирования асн; г) дезамидирования глн; д) дезаминирования АМФ; е) дезаминирования АТФ; ж) трансаминирования; з) распада нуклеиновых кислот?
2 В каких случаях увеличивается активность холинэстеразы в сыворотке крови:
а) нефротический синдром; б) инфекционный гепатит; в) бронхиальная астма; г) миома матки; д) инфаркт миокарда; е) отравление фосфорорганическими веществами; ж) травма мозга; з) отек мозга; и) гипертоническая болезнь?
3 Активность холинэстеразы сыворотки крови понижается при:
а) инфаркте миокарда; б) отравлении фосфорорганическими инсектици дами; в) отравлении боевыми фосфорорганическими веществам; г) панкреатите; д) язвенной болезни желудка; е) вирусном гепатите; ж) токсическом гепатите; з) отравлении миорелаксантами; и) гемолитической анемии?
4 Развитие печеночной комы при тяжелом вирусном гепатите связано главным образом:
а) с нарушением синтеза альбумина; б) дисглобулинемией; в) увеличени ем содержание в крови аммиака; г) снижением содержание в крови глюкозы; д) увеличением содержание в крови билирубина; е) повышением осмолярности крови; ж) кетоацидозом?
5 Какие из указанных реакций обезвреживания аммиака характерны для ткани мозга (напишите реакции):
а) восстановительное аминирование -кетоглутарата; б) амидирование глу; в) амидирование асп; г) аминирование ИМФ; д) дезаминирование АМФ; е) амидирование белков; ж) орнитиновый цикл?
6 Какие из указанных ферментов участвуют в реакциях инактивации биогенных аминов:
а) холинэстераза; б) моноаминооксидаза; в) оксидазы D-аминокислот; г) оксидазы L-аминокислот; д) цитохром Р450; е) катехол-o-метилтранс фераза; ж) глютатионпероксидаза; з) супероксиддисмутаза?
7 Наркотическое действие алкоголя связано:
а) с ингибированием Са каналов; б) гиперпродукцией NADH; в) торможе нием первого комплекса дыхательной цепи; г) торможением третьего комплекса дыхательной цепи; д) ингибированием сукцинатдегидрогеназы; е) продукцией эндогенных медиаторов торможения; ж) дефицитом эндоген ных медиаторов торможения; з) ингибированием цитохромоксидазы; и) ак тивацией сукцинатдегидрогеназы?
8 Наркотическое действие гидрофобных веществ связано:
а) с ингибированием Са каналов; б) гиперпродукцией NADH; в) торможе нием первого комплекса дыхательной цепи; г) торможением третьего комплекса дыхательной цепи; д) ингибированием сукцинатдегидрогеназы; е) продукцией эндогенных медиаторов торможения; ж) дефицитом эндоген ных медиаторов торможения; з) ингибированием цитохромоксидазы; и) ак тивацией сукцинатдегидрогеназы?
9 Тормозным медиатором нейронов спинного мозга и ствола мозга является:
а) ГАМК; б) ГОМК; в) глу; г) глн; д) гли; е) таурин; ж) гистамин; з) эн дорфины; и) серотонин; к) белок S-100?
10 Главным тормозным медиатором нейронов головного мозга является:
а) ГАМК; б) ГОМК; в) глу; г) глн; д) гли; е) таурин; ж) гистамин; з) эн дорфины; и) серотонин; к) белок S-100?
11 Антагонистом серотониновых рецепторов мозга является:
а) ЛСД-25; б) алкоголь; в) кокаин; г) теофиллин; д) резерпин; е) новока ин; ж) стрихнин; з) аммиак?
12. Антагонистом рецепторов норадреналина в мозге является:
а) ЛСД-25; б) алкоголь; в) кокаин; г) теофиллин; д) резерпин; е) новока ин; ж) стрихнин; з) аммиак?
13 В везикулах пресинаптических адренэргических нервных окончаний находятся:
а) связанный норадреналин; б) серотонин; в) АТФ; г) свободный норадреналин; д) хромогранин; е) дофамингидроксилаза; ж) ГАМК; з) моноаминооксидаза?
14 Антагонистом глициновых рецепторов спинного мозга является:
а) ЛСД-25; б) алкоголь; в) кокаин; г) теофиллин; д) резерпин; е) новока ин; ж) стрихнин; з) аммиак?
15 Для паркинсонизма характерно:
а) увеличение содержания в мозге дофамина;
б) резкое снижение содержания в мозге дофамина;
в) резкое снижение содержания в мозге норадреналина;
г) резкое увеличение содержания в мозге норадреналина;
д) ингибирование сукцинатдегидрогеназы;
е) увеличение содержания в мозге серотонина?
16 Тормозное действие медиатора ГАМК связано:
а) с ингибированием Са каналов;
б) гиперпродукцией NADH;
в) торможением первого комплекса дыхательной цепи;
г) торможением третьего комплекса дыхательной цепи;
д) ингибированием сукцинатдегидрогеназы;
е) продукцией эндогенных медиаторов торможения;
ж) гиперполяризацией постсинаптической мембраны;
з) ингибированием цитохромоксидазы;
и) увеличением проводимости для ионов Сl-?
Лабораторная работа Ингибирование активности холинэстеразы сыворотки крови прозерином
Принцип метода. Основан на том, что при гидролизе ацетилхолина холинэстеразой происходит подкисление среды за счет накопления уксусной кислоты:
Холинэстераза
СН3-СO-О-СН2-СН2-N(СН3)3 + H2O НО-СН2-СН2-N(СН3)3+ СН3-СОO- + Н+,
которую можно обнаружить по изменению окраски в присутствии индикатора – бромтимолового синего. В нейтральной среде этот индикатор сине-зеленый, а в кислой он имеет красную окраску. В присутствии антихолинэстеразного препарата – прозерина, а также инсектицидов или других фосфорорганических соединений, которые ингибируют активность холинэстеразы, расщепления ацетилхолина не происходит, и индикатор не меняет своей окраски.
Ход работы. В две пробирки вносят по 0,2 мл 0,1 %-го раствора бромтимолового синего и по 0,2 мл 0,1 %-го раствора ацетилхолина (предварительно нейтрализованного NaOH). В одну из пробирок (контрольную) добавляют 3 капли 0,05 %-го раствора прозерина.
В каждую пробирку вносят по 0,02 мл крови, содержимое пробирок перемешивают и ставят в термостат при температуре 38 °C на 15–20 мин. По истечении этого времени наблюдают изменение окраски в опытной пробе и сохранение исходной окраски в контрольной.
Клинико-диагностическое значение. В организме человека существует два типа холинэстераз:
а) ацетилхолинэстераза (АХЭ), которая встречается преимущественно в мозге, эритроцитах, мышцах, нервах; это высокоспецифический фермент, катализирующий гидролитическое расщепление ацетилхолина на холин и уксусную кислоту;
б) холинэстераза (ХЭ), которая содержится в основном в печени, поджелудочной железе и плазме крови. ХЭ обладает более широкой субстратной специфичностью, т. е. расщепляет ацетилхолин и другие эфиры холина.
Определение активности АХЭ сыворотки и тканей имеет большое клинико-диагностическое значение.
Сывороточная ХЭ представляет собой высокомолекулярный гликопротеид, связанный в крови с альбумином. Функция этого фермента выяснена недостаточно. Предполагают, что ХЭ плазмы крови выполняет защитную функцию, предотвращая накопление и распространение ацетилхолина по тканям, при попадании его в кровяное русло.
В норме активность ХЭ сыворотки крови колеблется в широких пределах – 160–340 мкмоль/(мл ∙ ч). При патологических состояниях ее активность ча ще всего снижается. Значительное снижение активности ХЭ сыворотки крови отмечается при заболеваниях печени, гипотиреозе, суставном ревматизме, инфаркте миокарда, ожогах, а также отравлениях различными фосфорорганическими соединениями.
Угнетение активности ХЭ в сыворотке крови наблюдается значительно раньше проявления других симптомов интоксикации.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Рекомендуемая литература
Основная
Дополнительная
Занятие 35
Биохимия соединительной ткани
Цель занятия: изучить особенности метаболизма соединительной ткани, биохимическую основу ее функционирования в норме и при различных патологических состояниях.
Исходный уровень знаний и навыков
Студент должен знать:
Студент должен уметь:
Структура занятия
Задачи
1 Выберите признаки, характерные для соединительной ткани:
а) преобладание глобулярных белков;
б) преобладание фибриллярных белков;
в) наличие большого количества липопротеидов;
г) преобладание межклеточного вещества над клеточными элементами;
д) наличие большого количества протеогликанов;
е) преобладание клеточных элементов над межклеточным веществом?
2 Выберите аминокислоты, преобладающие в коллагене:
а) пролин; б) метионин; в) оксипролин; г) аспартат; д) глицин; е) лизин; ж) глутамин; з) оксилизин; и) десмозин; к) валин?
3 Какие из перечисленных ниже особенностей правильно характеризуют коллаген:
а) полноценный пищевой белок;
б) частично гидролизуется протеазами желудочно-кишечного тракта;
в) составляет до 50 % общего количества белка в организме;
г) является основным структурным белком организма;
д) при старении уменьшается его количество;
е) в коже и костях, стенках сосудов, базальных мембранах содержатся различные типы коллагеновых молекул;
ж) в составе коллагена отсутствует лиз, оксилиз, гли;
з) в составе коллагена преобладают ала, сер, три, цис;
и) при старении увеличивается его количество?
4 Укажите правильный порядок этапов биосинтеза и процессинга коллагена (например, а б … и т. д.):
а) фибриллогенез (формирование фибрилл);
б) гидроксилирование про и лиз;
в) образование альдегидов и поперечных связей;
г) образование проколлагена (образование спирали, прекращение гидро ксилирования);
д) гликозилирование;
е) образование коллагеновых волокон;
ж) отщепление N- и C-концевых фрагментов;
з) трансляция?
5 Чем обусловлена высокая прочность коллагеновых волокон:
а) множеством ковалентных связей внутри молекулы тропоколлагена;
б) формированием третичной структуры коллагена;
в) взаимодействием протеогликанов с коллагеновыми фибриллами;
г) гидрофобными связями между молекулами тропоколлагена;
д) особым расположением пептидных цепей в тропоколлагене;
е) наличием гидратной оболочки;
д) гликозилированием коллагена?
6 Напишите реакции гидроксилирования цепи препроколлагена. Укажите фермент и кофакторы.
7 Как и почему изменится с возрастом суточная экскреция с мочой о-про?
8 Какие последствия может иметь недостаток витамина С в организме:
а) снижение активности пролилгидроксилазы фибробластов;
б) уменьшение прочности структуры коллагена;
в) повышение количества оксипролина в коллагене;
г) снижение количества оксипролина в коллагене;
д) уменьшение скорости гликозилирования коллагена;
е) увеличение количества водородных связей между полипептидными цепями коллагена;
ж) уменьшение количества водородных связей между полипептидными цепями коллагена;
з) увеличение количества ковалентных связей внутри молекулы тропоколлагена;
и) уменьшение количества ковалентных связей внутри молекулы тропо коллагена?
9 При синдроме Элера-Данлоса (тип VII) отмечается деформация суставов и искривление позвоночника, что обусловлено недостаточностью N кон цевой проколлагенпептидазы, в связи с чем:
а) изобразите схему строения проколлагена;
б) на схеме укажите место действия проколлагенпептидаз;
в) какой из этапов процессинга коллагена нарушен при этом заболевании?
10 Возникающая при гипервитаминозе D3 деструкция костной ткани обусловлена и сопровождается:
а) усиленным образованием в печени 25-ОН D3;
б) усиленным образованием в почках 1,25-ОН D3;
в) усиленным образованием в почках 25-ОН D3;
г) усиленным образованием в печени 1,25-ОН D3;
д) гиперкальциемией;
е) гипокальциемией;
ж) гиперкальциурией и образованием почечных камней;
з) гипокальциурией и образованием почечных камней;
ж) гиперфосфатемией;
з) гипофосфатемией;
и) гиперфосфатурией и образованием почечных камней;
к) гипофосфатурией и образованием почечных камней?
11 Возникающая при гипервитаминозе D3 деструкция костной ткани обусловлена и сопровождается:
а) усилением катаболизма коллагена; б) усилением биосинтеза коллагена; в) усилением катаболизма эластина; г) гиперэкскрецией с мочой оксипролинсодержащих пептидов; д) усилением биосинтеза эластина; е) усилением катаболизма альбумина; ж) усилением биосинтеза альбумина; з) гиперэкскрецией оксипролина с мочой?
12 При гиперпаратиреозе отмечается:
а) увеличение экскреции с мочой оксипролина; б) гиперкальциемия; в) уве личение экскреция с мочой кальция; г) нарушение функции почек; д) гипер тензия; е) одышка; ж) язвенная болезнь; з) гипертонус мышц; и) гиперсекре ция гастрина; к) мышечная слабость?
13 При старении возрастает ригидность связок, сухожилий, уменьшается тургор тканей. Укажите возможные причины этого явления:
а) увеличение числа поперечных связей между молекулами тропоколлагена; б) уменьшение числа поперечных связей между молекулами тропоколлагена; в) уменьшение соотношения основное вещество/волокна; г) снижение способности межклеточного вещества связывать воду; д) увеличение количества протеогликанов в межклеточном матриксе; ж) увеличение соотношения основное вещество/волокна; з) увеличение количества эластина; и) уменьшение количества эластина?
14 Кортикостероиды угнетают склерозирование тканей за счет:
а) ингибирования деления фибробластов; б) активации деления фибробластов; в) торможения образования мРНК проколлагена; г) активации синтеза гликозамингликанов; д) нарушения утилизации глюкозы фибробластами; е) ингибирования синтеза ДНК; ж) активации липолиза; з) активации глюконеогенеза?
15 Системная склеродермия – заболевание, при котором увеличивается синтез коллагена, развивается фиброз кожи и внутренних органов.
А. По какому компоненту мочи можно судить об интенсивности обмена коллагена и как он изменяется при этом заболевании?
Б. Как изменится этот показатель при лечении такого больного кортикостероидами?
16 Подберите соответствующие пары для объяснения причин изменения структуры коллагена:
а) изменение первичной структуры коллагена; б) нарушение четвертичной структуры коллагена; в) снижение активности пролилгидроксилазы; г) снижение активности лизиламинооксидзы; д) гиповитаминоз С; е) мутации ДНК фибробластов; ж) дефицит Cu2+; з) гиповитаминоз А?
17 Выберите положения, правильно характеризующие эластин:
а) является фибриллярным белком; б) способен к обратимому растяжению; в) является глобулярным белком; г) располагается в стенках крупных сосудов, обеспечивая их упругие свойства; д) преобладает в структуре крупных сухожилий; е) основной белок белой соединительной ткани; ж) расщепляется протеазами желудочно-кишечного тракта; з) основной белок желтой соединительной ткани; и) участвует в образовании рубцовой ткани; к) богат оксипролином и оксилизином?
18 В составе эластина преобладают следующие аминокислоты:
а) ала; б) гли; в) вал; г) глу; д) о-про; е) норлейцин; ж) и-лей; з) про; и) цис; к) лей?
19 Покажите преимущественное распределение коллагена и эластина в следующих структурах:
а) коллаген; б) эластин; в) сухожилия; г) желтая затылочная связка; д) стенка аорты; е) кости?
20 Какие компоненты необходимы для проявления активности пролингидроксилазы:
а) кислород; б) витамин B6; в) Fe2+; г) витамин С; д) NADP+; е) -кето глутарат; ж) цитохром Р-450; з) Cu2+?
21 Какие из компонентов необходимы для проявления активности лизил оксидазы:
а) кислород; б) витамин B6; в) Fe2+; г) витамин С; д) NADP+; е) -кето глутарат; ж) цитохром Р-450; з) Cu2+?
22 Из предложенных утверждений выберите те, которые правильно характеризуют последствия недостаточности лизилоксидазы:
а) нарушается синтез десмозина; б) увеличивается количество растворимого коллагена; в) уменьшается прочность эластина; г) уменьшается прочность аорты; д) в эластине увеличивается количество лизина и снижается количество десмозина; е) увеличивается количество растворимого эластина; ж) возрастает экскреция с мочой оксипролинсодержащих пептидов?
23 Выберите положения, правильно характеризующие фибронектин:
а) является липопротеидом; б) является гликопротеидом; в) имеет доменную структуру; г) является простым белком; д) имеет несколько центров свя зывания; е) является металлопротеидом; ж) связывается с проколлагеновыми фибриллами и гликозаминогликанами; з) находится в митохондриальном ма триксе и на рибосомах; и) регулирует сродство гемоглобина к кислороду?
24 Фибронектин является фактором, связывающим коллагеновые волокна, протеогликаны, клетки. Какими свойствами это объясняется:
а) располагается внутри клеток; б) располагается в межклеточном пространстве; в) является простым белком; г) является поливалентным белком; д) имеет центры связывания фибробластов, коллагена и протеогликанов; е) располагается на поверхности клеток; ж) находится в крови; з) депонирует часть железа?
25 Какие свойства злокачественных клеток изменятся из-за снижения на их поверхности количества фибронектина?
26 Выберите положения, правильно характеризующие структуру и биологическую роль протеогликанов:
а) основным компонентом являются гликозаминогликаны; б) белок составляет 5–10 % от массы протеогликанов; в) белок составляет 20–30 % от массы протеогликанов; г) составляют основную массу межклеточного мат рикса соединительной ткани; д) регулируют сродство гемоглобина к кислороду; е) связаны со структурными белками соединительной ткани; ж) образуют гелеобразные структуры?
27 Изобразите схему строения протеогликановых агрегатов. Укажите со ставные компоненты.
28 Укажите, какие компоненты образуются при гидролизе:
а) хондроитин-4-сульфата; б) гиалуроновой кислоты; в) гепарина; г) глюкуроновая кислота; д) глюкуронат-2-сульфат; е) N-ацетилглюкозамин; ж) N-ацетилгалактозамин-4-сульфат; з) N-ацетилглюкозамин-6-сульфат?
29 Как повлияет длительное введение кортизона экспериментальным жи вотным на выведение оксипролина с мочой?
30 Изменится ли скорость потребления кислорода (тканевого дыхания) кости в фазу ее активной регенерации? Аргументируйте свой ответ.
Лабораторная работа Модифицированный метод количественного определения сиаловых кислот в сыворотке крови
Принцип метода. Метод основан на том, что при добавлении ТХУ к сыворотке крови происходит мягкий гидролиз гликопротеидов, приводящий к отщеплению сиаловых кислот, которые вступают в реакцию с уксусно-сернокислым реактивом с образованием окрашенного соединения буровато-розового цвета. Интенсивность окраски раствора прямо пропорциональна концентрации сиаловых кислот.
Ход работы.
1-й этап – гидролиз гликопротеидов. В сухую центрифужную пробирку отмеривают 1 мл сыворотки крови и прибавляют 1 мл 10 %-го раствора ТХУ. Смесь перемешивают, пробирку закрывают фольгой и помещают в кипящую баню точно на 5 мин для выделения сиаловых кислот в свободном виде. Вынув из бани, пробирку охлаждают в холодной воде со льдом. Смесь центрифугируют или очень аккуратно фильтруют, сливая раствор по стеклянной палочке на маленький бумажный фильтр. Если проводили центрифугирование, то надосадочную жидкость сливают в сухую пробирку.
2-й этап – проведение цветной реакции. В одну пробирку (опытную) отмеривают 0,4 мл супернатанта или фильтрата, в другую (контрольную) – 0,4 мл дистиллированной воды. В обе пробирки добавляют по 5 мл уксусно-сернокислого реактива, закрывают фольгой и помещают на 30 мин в кипящую баню. После этого пробирки охлаждают и колориметрируют на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (длина волны – 540 нм) в кюветах толщиной слоя 10 мм против контрольной пробы. Зная оптическую плотность испытуемого раствора, по калибровочной кривой определяют концентрацию сиаловых кислот.
Калибровочную кривую строят с пробами, содержащими 0,05; 0,1; 0,2 и 0,3 мл стандартного раствора сиаловой кислоты (0,5 мг в 1 мл).
Общий объем пробы при построении калибровочного графика доводят дистиллированной водой до 0,4 мл. Затем добавляют во все пробирки по 5 мл уксусно-сернокислого реактива, перемешивают и проделывают все операции, описанные выше. При построении графика на оси ординат откладывают значения оптической плотности, а на оси абцисс – содержание сиаловых кислот в пробах.
Клинико-диагностическое значение. Сиаловые кислоты, или N-ацетил производные нейраминовой кислоты, играют важную роль в организме, прежде всего, как структурные блоки гликопротеидов, являясь концевыми остатками их полисахаридных цепей. Гликопротеины выполняют в организме также опорную, защитную, рецепторную и иммунную функции.
При патологических состояниях организма содержание гликопротеинов существенно изменяется. Особенно заметны эти изменения при воспалительных процессах, сопровождающихся разрушением соединительной ткани, – ревматизме, коллагенозах, некоторых формах новообразований и др. В этих случаях уровень сиаловых кислот в тканях и сыворотке крови резко возрастает и может служить диагностическим тестом для оценки активности патологического процесса.
В норме содержание сиаловых кислот в сыворотке крови составляет в среднем 0,62–0,73 г/л (62–73 мг/дл).
Оформление работы. Дают клиническо-диагностическую оценку полученных результатов, отмечают клиническое значение определения сиаловых кислот.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности ческую оценку.
Рекомендуемая литература
Основная
Дополнительная
Занятие 36
Контрольное по разделу «Биохимия нервной, мышечной и соединительной тканей,
миокарда и легких»
Цель занятия: контроль усвоения вопросов пройденного раздела “Биохимия нервной, мышечной и соединительной тканей, миокарда и легких”.
Контрольные вопросы
Контрольные вопросы по практическим навыкам по курсу биохимии
Содержание
6 Биохимия витаминов и гормонов 3
Занятие 24. Витамины 3
Занятие 25. Общая эндокринология. Механизм действия гормонов 13
Занятие 26. Частная эндокринология. Гормоны периферических желез 17
Занятие 27. Контрольное по разделу «Биохимия витаминов и гормонов» 22
7 Биохимия крови, почек и печени 25
Занятие 28. Основы регуляции КОС. Белки крови 25
Занятие 29. Обмен гемоглобина 30
Занятие 30. Биохимия почек в норме и при патологии 38
Занятие 31. Биохимия печени. Обмен ксенобиотиков 54
Занятие 32. Контрольное по разделу «Биохимия крови, почек и печени» 59
8 Биохимия нервной, мышечной и соединительной тканей, миокарда и легких 63
Занятие 33. Биохимия мышечной ткани и миокарда 63
Занятие 34. Биохимия нервной системы 69
Занятие 35. Биохимия соединительной ткани 74
Занятие 36. Контрольное по разделу «Биохимия нервной, мышечной
и соединительной тканей, миокарда и легких». 82
Оглавление
84
Красный
Желтый
Жёлтый
Синий
Синий
Глюкозооксидаза
Глюконовая кислота
Пероксидаза
Коричневый
каневая
жидкость
Клетка канальца
Просвет
почечного
канальца
Глюкоза
Глюкоза
Глюкозо-6-фосфат
H2O
H3PO4
АТФ
АДФ
E1
E2
Ацетон
Оранжево-красный комплекс
Нитропруссид натрия
Вишневый комплекс
зеленый
Фосфатаза
-глицерофосфат
Глицерин