Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
PAGE \* MERGEFORMAT 4
Родина аденовірусів (Adenoviridae)
Родина аденовірусів поділяється на два роди: Mastadenovirus (понад 90 серологічних типів) і Aviadenovirus (14 серологічних типів). Рід Mastadenovirus включає в себе віруси людини, мавп, коней, свиней тощо.
Аденовіруси не мають ліпопротеїнової оболонки. За своєю формою нагадують ікосаедр діаметром 65-80 нм кубічного типу симетрії. Мають 12 вершин, від яких відходить по одному відростку з булавоподібними потовщеннями на вільному кінці. Капсид складається з 252 субодиниць (капсомерів).
Аденовірус в порівнянні з іншими вірусами
Аденовіруси відносно стійкі до дії фізико-хімічних факторів, не інактивуються ефіром, хлороформом. При прогріванні (56 °С) активність вірусів різко знижується за декілька хвилин.
Особливістю аденовірусів є те, що вони культивуються тільки в тканинах господаря: аденовіруси людини - в різноманітних первинних і перещеплюваних культурах людських клітин, аденовіруси мавп репродукуються в клітинах мавп і т.д.
Найчастіше для виділення аденовірусів людини використовують перещеплювані культури клітин HeLa, KB, Hep-2, первинну культуру тканин нирок ембріона людини. Репродукція вірусів супроводжується розвитком внутрішньоядерних включень.
Біологічною особливістю аденовірусів людини є їх апатогенність для лабораторних тварин.
Аденовіруси людини - перші патогенні віруси людини, для яких була доведена здатність трансформувати клітини ссавців та індукувати утворення пухлин у сирійських ховрахів.
Аденовіруси здатні викликати гемаглютинацію еритроцитів. За здатністю аглютинувати еритроцити білих щурів і мавп побудована класифікація аденовірусів людини.
Аденовірусна інфекція - широко поширене респіраторне захворювання людини. Основний механізм зараження - повітряно-краплинний.
При виділенні вірусів із фекаліями можливий і фекально-оральний механізм зараження. Аденовірусні інфекції частіше виникають серед дітей у віці від 6 міс. до 2 років, особливо в холодні пори року. В організмі людини аденовіруси розмножуються в епітеліальних клітинах дихальних шляхів, кишечника, кон’юнктиві очей, мигдаликах і лімфатичних вузлах. Аденовіруси викликають гострі респіраторні захворювання (фарингіти, ларингіти, трахеобронхіти), кон’юнктивіти, пневмонії, геморагічні цистити. Окремі серотипи мають онкогенні властивості й зумовлюють появу пухлин у деяких гризунів. Вони можуть також проникати через плаценту, викликаючи каліцтво і смертельні пневмонії новонароджених. У дорослих аденовірусні інфекції виникають рідше і мають більш легкий перебіг. Імунітет після хвороби слабкий, типоспецифічний, недовготривалий. Певну роль у захисті від аденовірусів мають SIgA, які розташовані на слизовій оболонці дихальних шляхів і в носовому секреті.
АДЕНОВІРУСИ ЛЮДИНИ
Морфологія
Віріони форми икосаедра d 70-90 нм, який складається з 252 капсомірів з діаметром 7-9 нм. З них 240 капсомірів утворюють 20 рівносторонніх трикутників, кожен має шість сусідніх капсомірів і тому називається гексоном.
Гексон побудований з 3-6 молекул білка II, що становить близько 50% від всіх білків віріона. Групи з дев'яти гексонів пов'язані з двома додатковими мінорними білками (VIII і IX). На дванадцяти вершинах икосаедра є шпилькоподібні виступи довжиною від 8 до 30 нм з голівкою на кінці величиною 4 нм. Вони відходять від вершин дванадцяти капсомірів, що мають п'ять сусідніх. Ці капсоміри разом з виступами називаються пентонами, капсоміри - підставою пентонов, нитки - фібрами. Всередині капсида знаходиться серцевина діаметром 66 нм, що представляє правильно організовану структуру з 12 петель. Вершини петель збігаються з вершинами капсида, і на зрізі віріона серцевина утворює фігуру, подібну квітці. Петлі утворені дезоксирибонуклеопротеидом, що складається з ДНК і асоційованим з ним білком VII. Другий внутрішній білок V знаходиться на зовнішній поверхні петель. У серцевині локалізуються також білки VI, X.
Хімічний склад і физико-хімічні властивості
Віріони містять ДНК і білки. Серед білків є глікопротеїди у складі фібр. ДНК становить 12-13 % від сухої маси, капсидні білки - 60%, внутрішні білки - 12-20. Віріони не містять ліпідів. Плавуча щільність їх у хлориді цезію 1,328-1,340 м/мл, коефіцієнт седиментації 560-800S, молекулярна маса 170- 103-175- 106.
Геном аденовірусів представляє двухнитчату лінійну ДНК з молекулярною масою 20 * 106-25* 106 (частіше 22' 106). ДНК містить термінальні інвертовані повтори довжиною 100-140 нуклеотидних пар, що дозволяють утворювати кільцеві молекули. На 5'-кінці обох ниток ДНК знаходиться ковалентно пов'язаний з залишком дезоксицитидиловой кислоти термінальний білок, який необхідний для ініціації реплікації ДНК: його видалення призводить до значного зниження інфекційної активності. Аденовіруси, що володіють онкогенними властивостями для тварин, за нуклеотидним складом ДНК відрізняються від неонкогенних вірусів. Для найбільш онкогенних вірусів зміст ГЦ-пар дорівнює 48-49 %, у менш онкогенных - 49-52 %, у неонкогенних - 56-59 %. За функцію трансформації клітин відповідає ген, що становить 12-14 вірусного генома з лівого боку.
Білки, антигени
Білки складають 86-88 % маси віріона, кількість їх більше 20. У складі віріона містяться як мажорні, так і мінорні білки. У віріоні є не менш 7 антигенів. Чотири комплементзв'язуючих антигена позначені літерами А, В, С і Р . А-антиген пов'язаний з гексоном, В-антиген - з основою пентона, С-антиген - з фібрами, Р-антиген є внутрішнім антигеном, який звільняється при руйнуванні віріона; цей антиген відрізняється нестабільністю. А-антиген є групоспецифічним, загальним для всіх аденовірусів людини. Однак у гексонів є і типоспецифічні детермінанти. Р-антиген є також групоспецифічним. По В-антигену, який є підгруповим антигеном, всі аденовіруси людини розділені на 3 підгрупи. С-антиген є типоспецифічним антигеном.
Віруси мають гемагтлютинуючу активність, яка обумовлена пентоном. "За особливості аглютинувати різні види еритроцитів аденовіруси діляться на 3 підгрупи. Віруси підгрупи А аглютинують еритроцити макак резусів, але не щурів (типи 3, 7, 11, 14, 16, 20, 21, 25, 28). Віруси підгрупи В аглютинують еритроцити щурів, але не мавп (типи 8, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 22, 24, 26, 27, 29, 30). Нарешті, підгрупа З слабо аглютинує еритроцити щурів і не аглютинує еритроцити мавп (типи 1, 2, 4, 5, 6). Типи 12, 18 і 31 не мають гемагтлютинуючу активність. РТГА використовується для типоспецифічної ідентифікації вірусів.
Стійкість до фізичним і хімічним антигенів
Аденовіруси більш стійкі у зовнішньому середовищі, ніж інші віруси людини. Вони стійкі в межах рН 5,0-9,0, витримують прогрівання при температурі 50° С до 70 днів зберігають активність при температурі 4° С, зберігаються без втрати активності в замороженому стані і при ліофілізації. Оскільки віруси не містять ліпіди, вони стійкі до дії ефіру, хлороформу, детергентів.
Репродукція
Віріони прикріплюються фібрами до специфічних рецепторів клітини і проникають в них шляхом рецепторного эндоцитоза. Роздягання їх починається в цитоплазмі і завершується в ядрі. Кінцевим продуктом роздягання є ДНК, асоційована на 5'-кінці з термінальними білками. Транскрипція генома здійснюється клітинною ДНК-залежною РНК-полімеразою. У ранній стадії відбувається лише обмежена транскрипція, яка йде на чотирьох окремих ділянках генома, продуктами її в основному є іРНК для неструктурних білків. Пізня транскрипція йде в напрямку, протилежному ранньої транскрипції з утворенням близько 13 класів іРНК. Пізня транскрипція відбувається після синтезу вірусної ДНК і її продуктами в основному є іРНК для структурних білків.
Реплікація ДНК відбувається в ядрах і забезпечується клітинними системами синтезу ДНК, а також вірусопецифічними ферментами - продуктами ранньої транскрипції.
Зборка віріонів відбувається в ядрах і є багатоступінчастим процесом. Спочатку поліпептиди утворюють мультимірні білкові структури - фібри і гексони, потім утворюються капсиди і більш великі структури - незрілі віріони. Віріони утворюють в ядрі кришталевоподібні укладання. В ядрі накопичуються і порожні капсиди, в яких немає серцевини, а також віріони з меншою кількістю ДНК (неповні форми). Вихід віріонів відбувається при руйнуванні клітини. Кожна клітина здатна продукувати близько мільйона вірусних частинок, проте лише невелика їх кількість виходить з клітки, а інші залишаються пов'язаними з клітинним ядром. В ядрах скупчуються вірусопецифічні продукти, які порушують функцію ядра. В ураженій клітині з'являються внутрішньоядерні включення, вона округлюється і дегенерує. Інфекційний цикл триває 14-24 год.
Аденовіруси людини за онкогенними властивостями поділяють на три групи: А - високоонкогенні, Б - слабоонкогенні і В - неонкогенні. У людини аденовіруси навіть при тривалій персистенції не викликають неопластичних процесів, що трансформують властивості виявлені в дослідах на культурах клітин і лабораторних тварин - хом'яків, щурів, мишей, кроликів. При трансформації відбувається інтеграція генома аденовірусів з клітинним геномом. Аденовіруси (за винятком серотипов 38-41) добре розмножуються в первинних і перетравлених культурах клітин різного походження, викликаючи два типи цитопатичних змін: округлення клітин та їх скупчення, що нагадують грона винограду, які незабаром відстають від скла, і дрібноклітинну дегенерацію з утворенням дрібних круглих клітин, дифузно розташованих по всьому шару культури. У культурах фібробластів цитопатогенна дія виражена набагато слабкіше, ніж у культурах епітеліальних клітин. В заражених клітинах з'являються внутрішньоядерні включення.
Патогенез
Аденовіруси розмножуються в епітелії слизової оболонки верхніх дихальних шляхів; в клітинах епітелію з'являються характерні внутрішньоядерні базофільні включення й скупчення специфічних антигенів. Вірус може проникати в легені, розмножуватися в епітелії слизової оболонки бронхів і альвеол і викликати важкі пневмонії. Аденовіруси можуть потрапляти в кишечник і розмножуватися в епітелії слизової оболонки кишківника, викликаючи гастроентерити (серотипи 40 і 41); при цьому вони у великій кількості виділяються з фекаліями хворих. В кишківник віруси потрапляють фекально-оральномим шляхом або заносяться кров'ю.
Аденовіруси вражають лімфоїдну тканину: мигдалини, аденоїди, регіонарні лімфатичні вузли. Часто зустрічається вірусемія.
Клініка
Аденовіруси вражають дихальний тракт, очі, лімфоїдне кільце глотки, кишківник, сечовий міхур, викликаючи різною мірою виражену загальну реакцію (лихоманку, інтоксикацію), пов'язану з вірусімією. Найбільш часті ураження дихального тракту: риніти, ларингіти, бронхіти, пневмонії, описані як фарингоконъюнктивальна лихоманка. При захворюваннях, викликаних типами 3 і 7, рідше типами 1, 2, 5 і 6, основним симптомом є кон'юнктивіт. Типи 8 і 19 викликають епідемічний кератокон’юнктивіт, типи 11 і 21 - гострі геморагічні цистити у дітей, типи 40 і 41 - гастроентерити. Характерною рисою аденовірусних захворювань є більш тривалий інкубаційний період порівняно з таким інших респіраторних інфекцій (6-9 днів), повільний розвиток і тривалий перебіг. Респіраторний, кон'юнктивальний і кишковий синдроми захворювання можуть поєднуватися з домінуванням одного з них або зустрічатися порізно. Вірус здатний тривало персистувати в тканині мигдалин і аденоїдів, періодично викликаючи ангіни або призводячи до розвитку хронічного тонзиліту.
Дослідження проб на наявність аденовірусів 40-41 типів
Мiнiстерство охорони здоров'я україни з метою науково-методичного забезпечення державного санітарно-епідеміологічного нагляду у 2007 році затвердило методичні вказівки "Санітарно-вірусологічний контроль водних об'єктів"
Методичні вказівки призначені для використання при
здійсненні контролю якості води (питної, господарсько-побутового
призначення, відкритих водойм, стічної, води для зрошення
сільськогосподарських угідь тощо) за вірусологічними показниками
під час проведення державного санітарно-епідеміологічного нагляду
та можуть бути використані для проведення відомчого та всіх інших
видів контролю, незалежно від підпорядкованості і форм власності
лабораторій.
Санітарно-вірусологічне дослідження води складається з етапів:
- відбір проб для дослідження;
- підготовка проб для дослідження (первинна обробка
матеріалу);
- концентрація вірусів у пробах води;
- деконтамінація вірусного концентрату;
- вірусологічне дослідження (виділення вірусу або виявлення
його антигенів та фрагменту геному).
Відбір проб води здійснюють, дотримуючись загальних вимог, що
забезпечують збереження вірусів у пробі та не допускають забруднення вторинною мікрофлорою. Відбір проб води здійснюють, дотримуючись загальних вимог, що забезпечують збереження вірусів у пробі та не допускають забруднення вторинною мікрофлорою.
Iндикацію аденовірусів людини в елюатах, отриманих після
концентрування, проводять методами електронної мікроскопії, в РНГА
із специфічним рідким діагностикумом "Аденотест", ПЛР, IХА.
Виділення та ідентифікацію аденовірусів з проб води
здійснюють у культурі клітин.
Електронна мікроскопія
Для приготування препарату на предметну сітку, вкриту
вуглецево-формваровою плівкою-підкладкою, наносять концентрат
(елюат). Після негативного контрастування фосфорно-вольфрамовою
кислотою препарати досліджують при інструментальному збільшенні
у 30-50 тисяч разів Належність виявлених
часток до аденовірусів визначають за характерною морфологією та
розміром.
Реакція непрямої гемаглютинації
Використовують еритроцитарний аденовірусний імуноглобуліновий
рідкий діагностикум для РНГА "АДЕНОТЕСТ" для виявлення і
кількісного визначення титрів аденовірусів 40-41 типів.
До складу тест-системи "АДЕНОТЕСТ" входять три компоненти:
1) діагностикум еритроцитарний аденовірусний
імуноглобуліновий рідкий (ЕД);
2) імунна асцитна рідина (IАР);
3) антиген аденовірусів (АГ).
Реакцію проводять у мікропланшетах для імунологічних реакцій
в об'ємі 75 мкл. В кожну лунку двох рядів мікропланшета вносять по
25 мкл стабілізованого 0,9% розчину NaCl. По 25 мкл концентрату,
додають в перші лунки вказаних рядів, після чого готують його
послідовні дворазові розведення (від 1:2 до 1:256). Далі в лунки
першого ряду додають по 25 мкл 0,9% розчину NaCl, а в лунки
другого ряду - по 25 мкл IАР.
Планшет струшують та залишають при кімнатній температурі на
20 хв. для утворення комплексу антиген-антитіло в лунках другого
ряду. Після цього в усі лунки вносять по 25 мкл ЕД. Планшет знову
струшують і залишають на 1,5-2 годин для специфічної взаємодії АГ
аденовірусу з антиаденовірусними імуноглобулінами ЕД.
Реакція супроводжується такими контролями:
- контроль неспецифічної аглютинації ЕД (в 3 лунки вносять по
50 мкл 0,9% розчину NaCl та додають по 25 мкл ЕД в кожну);
- контроль специфічної взаємодії ЕД та IАР. Його виконують за
вищеописаною методикою РНГА, використовуючи замість досліджуваної
проби АГ аденовірусу, який титрують від 1:64 до 1:2048. Антиген
входить до складу тест-системи у розведенні 1:32. Цей контроль
проводять після отримання комплекту, а потім - за необхідністю.
Облік результатів у контролях: у першому контролі спонтанна
аглютинація ЕД повинна бути відсутня. УВ контролі специфічної
взаємодії ЕД та IАР в першому ряду ЕД повинен реагувати з
антигеном в розведенні не менш ніж 1:256, а в другому ряду IАР
повинна знижувати титр АГ не менше ніж в 4 рази.
Позитивний результат на наявність аденовірусу дають у випадку
повного гальмування аглютинації в другому ряду РНГА не менше ніж
на 2 розведення (в 4 рази) в порівнянні з першим рядом.
Постановка контролів є обов'язковою при одержанні нової
тест-системи. В разі їх невідповідності тест-система вважається
непридатною для застосування.
Полімеразна ланцюгова реакція
ПЛР призначена для виявлення в пробах води або в концентраті
(елюаті) фрагментів послідовностей ДНК-геному аденовірусу при
багаторазовому збільшенні (ампліфікації) кількості цих фрагментів
з подальшим ідентифікуванням їх відомими методами - молекулярною
гібридизацією, електрофорезом у агарозному чи поліакриламідному
гелі (ПААГ). Принцип реакції полягає у багаторазовому повторенні
циклів синтезу вірусспецифічної послідовності ДНК за допомогою
термостабільного ферменту Tag ДНК-полімерази та двох специфічних
затравок (праймерів).
Виявленння ДНК аденовірусів в пробах води методом
полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР)
Для проведення аналізу використовуються проби води без етапу
концентрації вірусу та концентрат (елюат), отриманий після
концентрування (див. Розділ 6). Цей зразок в кількості 0,5-1 мл
переносять в пробірки типу "еппендорф", що вільні від РНКаз та
ДНКаз.
Зберігають проби при 2-8 град. С не більше 1 доби, тривало -
при мінус 70 град. С. Допускається тільки одноразове
заморожування-відтаювання матеріалу.
Доставка проб здійснюється в спеціальному термоконтейнері
з охолоджуючими елементами.
Проведення аналізу
Опис етапів ПЛР-аналізу
ПЛР-аналіз складається з трьох етапів:
- виділення ДНК;
- ампліфікація ділянки ДНК - полімеразная ланцюгова реакція
(ПЛР);
- електрофоретичний аналіз продуктів ПЛР та облік результатів
ПЛР-аналізу.
Облік результатів
Облік результатів ПЛР-аналізу проводиться по наявності або
відсутності на електрофореграмі специфічних смуг амплифікованої
кДНК ( va284282-07 ).
Електрофореграмма результатів тестування зразків на
наявність ДНК Adenovirus ( va284282-07 )
Довжина специфічних смуг амплифікованих фрагментів кДНК:
аденовірусу - 462 п.н.
Позитивними вважаються зразки, які містять специфічну
смугу, що світиться, на рівні 462 п.н. більшої або меншої
інтенсивності. Негативними вважаються зразки, які не містять ніяких смуг
Iмунохроматографічний аналіз
IХА-тести засновані на тих самих принципах імунологічних
реакцій, застосуванні таких самих імунобіологічних продуктів, що і
добре відомі класичні IФА тест-системи. Але твердим носієм
імунокомпонентів є НЦМ. Їм притаманна висока чутливість та
специфічність.
Принцип комбінованого тесту "CITO TEST ROTA-ADENO". Тест
побудований на використанні унікальної комбінації кон'югатів
моноклональних антитіл проти аденовірусу та ротавірусу з частками
барвника - колоїдного золота. В тесті використовуються також
антиаденовірусні та антиротавірусні поліклональні антитіла, які
вибірково зв'язуються з вірусами у пробі.
Механізм тестування полягає у наступному: під час проходження
досліджуваної проби крізь адсорбуючу зону тестового приладу
мічений кон'югат зв'язуються з аденовірусами у пробі, утворюючи
синю смугу у тест-зоні. За наявності у пробі ротавірусів
формується рожева або червна смуга. Компоненти тесту, які
не вступили в реакцію, забезпечують виявлення зеленої смуги у
контрольній зоні, що свідчить про функціонально активний стан
реагентів та правильне проведення тесту. Процедура тесту: IХА-тест
в упаковці та досліджувані проби води або концентрат перед
початком тестуванням витримують при кімнатній температурі. Тест
виконують методом занурення - тримаючи тест на вертикально,
занурюють білим кінцем тесту в зразок, не перевищуючи обмеження
занурення, вказаного на тесті стрілками. Облік результату тесту
проводиться через 10 хв. без подальшого втручання
( va284282-07 ).
Iнтерпретація результату
Негативний результат: лише одна смуга зеленого кольору
(контрольна лінія) з'являється на білій центральній ділянці тесту
(контрольна ділянка тесту).
Позитивний результат: в доповнення до зеленої контрольної
смуги також з'являється одна чітка червона смуга або одна чітка
синя смуга або обидві смуги одночасно (лінія результату) на білій
центральній зоні тесту (ділянка результату тесту). Наявність
червоної і зеленої смуги свідчать про виявлення ротавірусів.
Наявність синьої та зеленої смуги - про виявлення аденовірусів.
Наявність трьох смуг (червоної, синьої та зеленої) - про одночасне
виявлення двох збудників (ротавірусу та аденовірусу).
Тест недійсний: відсутність контрольної зеленої смуги
незалежно від появи чи відсутності результативної лінії (червоної
або синьої). Недостатня кількість зразку, неправильна техніка
виконання тесту чи псування реагентів є вірогіднішими причинами
відсутності контрольної лінії.
Iнтенсивність синьої та червоної лінії на тестовій ділянці
тесту залежить від концентрації вірусів, присутніх
в досліджуваному зразку.
Виділення та ідентифікація виділеного агенту
в культурі клітин
Аденовіруси можуть культивуватися на багатьох типах культур
клітин. Для їх виділення у лабораторній практиці частіше
використовуються перещеплювані лінії клітин епітелію людини (HeLa,
HEp-2, КВ, L-41) і рідше - клітини приматів (Vero та інші).
Найбільшу чутливість до аденовірусів мають первинні або диплоїдні
культури клітин нирок ембріону людини. При їх використанні
цитопатогенний ефект (ЦПД) проявляється набагато швидше, ніж у
перщеплюваних культур клітин, тобто на 2-4 добу після інфікування.
Час появи ЦПД залежить від типу вірусу та його концентрації.
Ознаками ЦПД, що вказують на наявність аденовірусів у інфікованих
чутливих культурах клітин, є округлення клітин, збільшення
зернистості у цитоплазмі, формування скупчень клітин різних
розмірів, які іноді нагадують виноградні грона. Моношар також може
нагадувати сітку з розтягнутими вічками.
Для вирощування культур клітин використовують середовище
росту, яке складається з 90% мінімального середовища Iгла (на
розчині Ерла) і 10% телячої ембріональної сироватки.
Для підтримки культур клітин використовують мінімальне
середовище Iгла (на розчині Ерла) з 2% телячої ембріональної
сироватки. Проте, при спостеріганні за інфікованими клітинами
кожні 4-5 діб потрібна заміна середовища на нове.
При необхідності зберігання матеріалів до двох тижнів для
виділення аденовірусів їх поміщають у транспортне середовище
Лейбовиця (NaCl - 4 г; KCl - 0,2 г; K HPO - 1,7 г; деревне
(бактеріологічне) вугілля - 10 г; агар - 4 г). Сольові компоненти
розчиняють у 500,0 мл дистильованої води і додають вугілля. Агар
також розчиняють у 500,0 мл дистильованої води. Змішують обидва
розчини і автоклавують при 121 град. С (1 атм.). Суміш переносять
в стерильну колбу з магнітом і перемішують на магнітному змішувачі
поки температура не знизиться до 40 град. С, далі розливають по
8,0 мл в пробірки з нагвинчуючимися пробками.
При тривалому зберіганні зразків проб (більше двох тижнів) їх
заморожують при температурі 15-30 град. С.
Вищезазначене транспортне середовище слід використовувати при
зберіганні матеріалів при температурі + 2 - +8 град. С.
При виділенні аденовірусів із проб, відібраних із об'єктів
довкілля, проводять роботу у такій послідовності:
- змінюють середовище росту на підтримуючи у пробірочній
культурі клітин з суцільним моношаром;
- проби матеріалів вносять по 0,2 мл в 2-3 пробірки, в яких
попередньо замінили середовище росту на середовище підтримки;
- після інфікування пробірки з культурою клітин поміщають в
термостат при температурі 37 град. С, витримують протягом 7 діб та
мікроскопують з однодобовим інтервалом.
При відсутності ЦПД при інфікуванні культур клітин доцільне
проведення двох "сліпих" пасажів.
Iдентифікують та типують виділені у культурі клітин
аденовіруси за допомогою типоспецифічних сироваток у реакції
нейтралізації (РН) та реакції гальмування гемаглютинації (РГГА)
згідно з інструкцією виробника щодо використання.
Iндикацію аденовірусного антигену в культурах інфікованих
клітин можна здійснювати одним з вищенаведених методів.
Лабораторія в кишені
Аденовіруси є основними збудниками інфекційних гастроентеритів як у дітей (в тому числі і немовлят), так і у дорослих. Основним механізмом передачі інфекції є фекально-оральний.
Симптомами вірусного гастроентериту є секреторна діарея, блювота, головний біль, лихоманка, кишкові кольки. Взагалі, при аденовірусному гастроентериті симптоми розвиваються протягом 1-2 днів і продовжуються до 5-8 днів.
Блістер-тест на аденовіруси є якісним імунохроматографічним аналізом для виявлення антигенів аденовірусів у зразках фекалій.
Під час тестування зразок вступає в реакцію із фарбованим комплексом (анти-аденовірусні моноклональні антитіла – блакитні мікросфери), який був заздалегідь нанесений та висушений на мембрані тесту. Суміш мігрує вздовж мембрани під дією капілярної сили. У випадку позитивного результату, специфічні антитіла, які присутні на мембрані, будуть захвачувати фарбоване сполучення. Суміш продовжує просовуватися вздовж мембрани до імобілізованих антитіл, розміщених на контрольній ділянці тесту і лінія зеленого кольору завжди буде з’являтися. Наявність цієї зеленої лінії служить підтвердженням достатньої кількості використаного зразку, заповнення капілярів мембрани, а також як внутрішній контроль якості для реагентів.
Зразки фекалій слід збирати в чисту ємкість. Тестування повинно бути проведено відразу після забору зразку.
Доведіть тест, зразки фекалій до кімнатної температури (15-30ºC) перед тестуванням. Не відкривати пакет поки Ви не готові до проведення аналізу. Перед відкриванням упаковки необхідно довести до кімнатної температури необхідну для проведення аналізу кількість тестів. Існує два можливих варіанти виконання тесту:
A) Використання однієї упаковки блістер-тесту як тест-картки:
B) Використання однієї упаковки блістер-тесту як тест-смужки методом занурення:
В залежності від концентрації антигенів аденовірусів у зразку, позитивний результат може бути виявлений через 3 хвилини. Однак, остаточний результат слід інтерпретувати через 10 хвилин.
Негативний: лише одна лінія зеленого кольору (контрольна лінія) з’явиться на білій центральній ділянці тесту (контрольна ділянка тесту)
Позитивний: в доповнення до зеленої контрольної лінії також з’являється чітка блакитна лінія (лінія результату) на білій центральній зоні тесту (ділянка результату тесту)
Недійсний: відсутність контрольної лінії (зеленої) незалежно від появи чи відсутності результативної лінії (блакитної). Недостатня кількість зразку, неправильна техніка виконання тесту чи псування реагентів є вірогіднішими причинами відсутності контрольної лінії. Перегляньте техніку виконання та повторіть процедуру тестування з новим тестом. Якщо проблема залишається, припиніть тестування та зв’яжіться з вашим місцевим дистриб’ютором.
Примітка до інтерпретації результату тесту
Інтенсивність блакитної лінії на тестовій ділянці тесту буде залежати від концентрації антигенів, присутніх в зразку. Однак ні кількісний вміст, ні ступінь підвищення антигенів не можливо визначити даним якісним тестом.
За допомогою даного тесту можна встановити припустимий діагноз аденовірусної інфекції. Остаточний діагноз повинен бути встановлений лікарем після всіх клінічних та лабораторних досліджень.