Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
СТРОЕНИЕ И СВОЙСТВА БЕЛКОВ И УГЛЕВОДОВ
Обнаружение пептидных связей в молекулах белков
(биуретовая реакция)
Реактивы: раствор белка, 30% раствор NaOH, 1% раствор CuSO4
Оборудование: мерный цилиндр, пробирка, пипетка
К 1 – 2 мл разбавленного белка прибавляют двойной объем 30%-ного раствора гидроксида натрия, хорошо перемешивают и добавляют 2 – 3 капли 1%-ного раствора сульфата меди. Снова тщательно перемешивают.
Развивается красно-фиолетовое окрашивание. При малом содержании белка чувствительность реакции можно повысить, наслаивая на раствор белка в щелочи 1 мл 1%-ного раствора сульфата меди. При стоянии на границе двух слоев появляется фиолетовое кольцо.
Нингидриновая реакция
Реактивы: раствор белка, 1% раствор нингидрина в ацетоне (95% р-р)
Оборудование: мерный цилиндр, пробирка, пипетка, водяная баня.
К 2 – 3 мл разбавленного раствора белка приливают 3 – 4 капли раствора нингидрина. Раствор перемешивают и ставят в водяную баню при 70°С на несколько минут.
Развивается сине-фиолетовое окрашивание.
Реактивы: раствор белка, 10% раствор NaOH, 1% и 10% раствор CH3COOH, насыщ. раствор NaCl
Оборудование: мерный цилиндр, 5 пробирок, держатель для пробирок, пипетка
В пять пробирок наливают по 2 мл раствора белка,
а) Нагревают содержимое первой пробирки.
Осадок белка появляется еще до того, как жидкость закипит.
б) Добавляют во вторую пробирку одну каплю 1%-ного раствора уксусной кислоты и нагревают.
Хлопьевидный осадок белка выпадает скорее и полнее вследствие того, что в результате подкисления pH раствора приблизился к изоэлектрической точке белка.
в) Добавляют в третью пробирку около 0,5 мл 10%-кого раствора уксусной кислоты и нагревают.
Осадок белка не образуется даже при кипячении.
г) Добавляют в четвертую пробирку около 0,5 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты, несколько капель насыщенного раствора хлорида натрия и нагревают.
Образуется осадок белка.
д) Добавляют в пятую пробирку около 0,5 мл раствора гидроксида натрия и нагревают. Осадок белка не образуется даже при кипячении.
Выпадение белков в осадок при нагревании - свертывание - характерно почти для всех белков (исключение составляет желатина, не свертывающаяся при нагревании). Особенно легко и более полно происходит осаждение белка в слабокислой среде, вблизи от изоэлектрической точки (п. б). В нейтральной и сильнокислой средах осаждение белков идет значительно хуже, а в щелочной среде вовсе не наблюдается.
В состав белков входят разнообразные аминокислотные радикалы, поэтому белки вступают во взаимодействие со многими соединениями (кислотами, ионами металлов, спиртами и т. п.), а также конкурируют с ними за молекулы растворителя (воды). Во многих случаях результатом указанных процессов является выпадение белков в осадок.
Высаливание белков сульфатом аммония
Реактивы: раствор белка, насыщ. раствор (NH4)2SO4
Оборудование: мерный цилиндр, 3 пробирки, коническая воронка, фильтровальная бумага, держатель для пробирок, спиртовка
Наливают в пробирки 1 - 1,5 мл раствора белка, добавляют равный объем насыщенного раствора сульфата аммония и слегка встряхивают смесь.
Появляется муть от выпадающего осадка глобулинов.
Мутную жидкость фильтруют через сухой складчатый фильтр. Часть прозрачного фильтрата нагревают до кипения.
Наблюдается свертывание альбуминов, находящихся в растворе.
К другой части фильтрата добавляют при перемешивании избыток сульфата аммония в порошке до прекращения его растворения.
Появляется муть или хлопья выпадающего в осадок альбумина (сравните с исходным фильтратом). Осаждение белков солями является обратимым процессом, и при добавлении воды белки снова растворяются.
В водном растворе белков их частицы заряжены и гидратированы, что обусловливает устойчивость белковых растворов. Но при высокой концентрации солей, ионы которых тоже гидратированы, происходит разрушение водных оболочек белковых молекул и снимается заряд с белковой молекулы адсорбирующимися на ней ионами соли. В результате этих двух процессов белковые растворы теряют устойчивость, частицы белка слипаются друг с другом, укрупняются и, наконец, выпадают в осадок.
Использованный в опыте сульфат аммония обладает резко выраженной высаливающей способностью и осаждает белки в нейтральной среде, а еще лучше в слабокислой среде. Другие, соли, например, хлорид натрия, вызывают полное осаждение белков только при подкислении раствора белка. Из приведенного опыта следует, что для высаливания различных белков требуется разная концентрация одних и тех же солей.
Реактивы: раствор белка, раствор CuSO4, раствор Pb(CH3COO)2
Оборудование: мерный цилиндр, 2 пробирки, пипетка
В две пробирки наливают 1 - 1,5 мл исследуемого раствора белка и медленно, по каплям при встряхивании прибавляют в одну из них раствор сульфата меди, а в другую - раствор ацетата свинца.
Выпадает хлопьевидный осадок вследствие образования малорастворимого солеобразного соединения (с солью меди – голубого цвета, с солью свинца – белого цвета). При избытке реактива осадок снова растворяется.
Соли тяжелых металлов (Hg, Ag, Cu, Pb и др.) вызывают необратимое осаждение белков, образуя с ними нерастворимые в воде соединения. Поэтому белки применяют в качестве противоядия при отравлении, например, ртутными солями (сулема). Но некоторые из таких осадков (например, с солями меди, свинца, цинка) растворяются в избытке осадителя вследствие адсорбции ионов поверхностью белковых частиц: в результате этого белковые частицы приобретают заряд и вновь растворяются. Растворение осадков денатурированных белков в избытке солей тяжелых металлов называется адсорбционной пептизацией.
Осаждение белков фенолом и формалином
Реактивы: раствор белка, насыщ. водный раствор фенола, раствор формалина
Оборудование: мерный цилиндр, 2 пробирки, пипетка
В две пробирки, содержащие по 1 – 2 мл раствора белка, добавляют: в первую – равный объем насыщенного водного раствора фенола, а во вторую – равный объем формалина.
В обеих пробирках выпадает осадок белка. От действия фенола осадок выпадает быстрее.
Осаждение белков спиртом
Реактивы: раствор белка, NaСl крист., этиловый спирт
Оборудование: мерный цилиндр, пробирка, пипетка
В пробирку наливают 1 – 1,5 мл раствора белка и добавляют немного кристаллического хлорида натрия. Приливают постепенно туда же 5 – 6 мл этилового спирта.
Выпадает хлопьевидный осадок белка вследствие дегидратации белковых молекул при добавлении спирта.
Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
Реактивы: раствор белка, конц. растворы HNO3, Н2SO4, НСl
Оборудование: мерный цилиндр, 3 пробирки, пипетка
В три сухие пробирки наливают по 1 – 2 мл концентрированной азотной, серной и соляной кислот. Затем, наклонив каждую пробирку, осторожно по стенке приливают в нее из пипетки по 0,5 мл исследуемого раствора белка так, чтобы он не смешивался с кислотой. В месте соприкосновения двух жидкостей появляется белый аморфный осадок белка. При встряхивании осадок, выпавший при действии азотной кислоты, увеличивается, а осадки, выпавшие при действии соляной и серной кислот, растворяются в их избытке.
Концентрированные минеральные кислоты вызывают необратимое осаждение белков. Это связано как с дегидратацией, белковых молекул, так и с денатурацией белка.
Качественная реакция на крахмал
Реактивы: 0,5% р-р крахмального клейстера, раствор йода в иодиде калия
Оборудование: мерный цилиндр, пробирка, пипетка, держатель для пробирок, спиртовка
В пробирку поместите 5 капель 0,5%-го крахмального клейстера и 1 каплю раствора иода в иодиде калия, разбавленного водой до светло-желтой окраски. Раствор приобретает синюю окраску. Нагрейте раствор – окраска исчезает; при охлаждении раствора окраска появляется вновь.
Реактивы: 0,5% р-р крахмального клейстера, раствор йода в иодиде калия, 10% р-р Н2SO4, 10% раствор NaOH, 1% раствор CuSO4
Оборудование: мерный цилиндр, 2 пробирки, пипетка, держатель для пробирок, водяная баня
В пробирку поместите 10 мл 0,5%-го раствора крахмального клейстера. Добавьте 1 мл 10%-го раствора серной кислоты и поместите пробирку в кипящую водяную баню. Смесь становится прозрачной примерно через 20 мин. Пипеткой отберите 0.5 мл гидролизата в чистую пробирку и добавьте 1 каплю раствора иода в иодиде калия, разбавленного водой до светло-желтой окраски.
Если проба не дает положительной иодкрахмальной реакции, в чистую пробирку отберите 1 мл гидролизата, добавьте в пробирку 8 капель 10%-го раствора гидроксида натрия до создания щелочной среды. Затем добавьте 1 каплю 1%-го раствора сульфата меди (II) и осторожно нагрейте пробирку до кипения. Окраска раствора изменяется на желто-красную.
Взаимодействие целлюлозы со щелочью.
Реактивы: фильтровальная бумага, конц. раствор NaOH, разб. раствор НСl
Оборудование: 3 пробирки, линейка
1. Установите в штативе 2 пробирки и заполните их почти до верха, одну – водой, другую – концентрированным раствором щелочи. Опустите в каждую пробирку полоску фильтровальной бумаги так, чтобы она касалась дна пробирки, на 5 – 7 мин.
2. Подготовьте третью пробирку – с раствором разбавленной соляной кислоты.
3. Вынув бумажную полоску из воды, отожмите ее на фильтровальной бумаге и оставьте сохнуть.
4. Достаньте полоску фильтровальной бумаги из раствора щелочи, аккуратно стряхните капли и промойте ее последовательно в воде, растворе соляной кислоты и снова в воде, отожмите.
5. Дайте обеим полоскам высохнуть, затем сравните их длину, плотность и характер поверхности.
Растворение целлюлозы в медноаммиачном реактиве (реактиве Швейцера)
Реактивы: реактив Швецера (медноаммиачный реактив), вата или фильтровальная бумага, разб. раствор НСl, 10% раствор NaOH, 1% раствор CuSO4
Оборудование: мерный цилиндр, 3 пробирки, пипетка, держатель для пробирок, стакан (50 мл), спиртовка.
1. Налейте в пробирку 3 мл медноаммиачного реактива и поместите кусочки ваты или фильтровальной бумаги.
Волокна целлюлозы при встряхивании быстро разъединяются и растворяются, образуя вязкую жидкость.
2. 1 мл полученного раствора отлейте в другую пробирку, добавьте в нее 4 мл воды и вылейте смесь в стаканчик или широкую пробирку с 10 мл разбавленной соляной кислоты.
Смесь сразу обесцвечивается и выделяется свободная целлюлоза в виде белого студенистого осадка.
3. Отберите в чистую пробирку 1 мл кислого раствора, добавьте в пробирку 8 капель 10%-го раствора гидроксида натрия до создания щелочной среды. Затем добавьте 1 каплю 1%-го раствора сульфата меди (II) и осторожно нагрейте пробирку до кипения. Отметьте, происходят ли изменения.
Превращение целлюлозы в амилоид
Реактивы: фильтровальная бумага, 70% раствор Н2SO4, раствор йода
Оборудование: пробирка, мерный цилиндр
1. В пробирку налейте 8 мл 70% серной кислоты, погрузите в нее до половины полоску фильтровальной бумаги.
2. Через 10 мин достаньте полоску бумаги и тщательно промойте ее под струей проточной воды. Отметьте различие в плотности и прочности мокрой бумаги и после подсушивания в обработанной и необработанной кислотой частях полоски.
3. Нанесите каплю раствора иода на границу двух участков бумаги. Отметьте различие их окраски.