Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Реакция связывания комплемента (РСК) относится к сложным серологическим реакциям. Для ее проведения необходимы 5 ингредиентов, а именно: АГ, AT и комплемент (первая система), эритроциты барана и гемолитическая сыворотка (вторая система).
Антигеном для РСК могут быть культуры различных убитых микроорганизмов, их лизаты, компоненты бактерий, патологически измененных и нормальных органов, тканевых липидов, вирусы и вирусосодержащие материалы.
В качестве комплемента используют свежую или сухую сыворотку морской свинки.
Определение гемолитической активности комплемента . Для исследования компонентов классического пути активации комплемента определяют его гемолитическую активность. Суть метода заключается в следующем:
- разные разведения сыворотки больного и нормальной сыворотки добавляют к эритроцитам барана, покрытым антителами;
- степень гемолиза оценивают фотометрически по выходу гемоглобина в раствор.
За единицу гемолитической активности комплемента принимают величину, обратную тому разведению сыворотки, при котором разрушаются 50% эритроцитов.
Существуют модификации метода, основанные на применении небольших объемов исследуемой сыворотки. Определение гемолитической активности комплемента по 100% гемолизу основано на гемолизе в геле. Суть этого метода заключается в следующем:
- в геле, содержащем покрытые антителами эритроциты барана, делают лунки;
- в лунки вносят разные разведения исследуемой и нормальной сывороток;
- гемолитическую активность комплемента оценивают по диаметру зон гемолиза.
Активность комплемента зависит от целого ряда факторов, поэтому нарушение правил забора и хранения сыворотки обычно приводит к ошибочным результатам исследования.
Определение гемолитической активности комплемента позволяет обнаружитьнедостаточность компонентов комплемента , прежде всего участвующих в образовании мембраноатакующего комплекса. Кроме того, оценка этого показателя может использоваться для выявления активации комплемента, например при СКВ игломерулонефрите , хотя чувствительность метода для этого недостаточно высока.
Оптимальный метод выявления активации комплемента заключается в определении продуктов расщепления его компонентов.
Альтернативный путь активации комплемента исследуют редко.
Определение компонентов комплемента обычно проводят при обследовании больных с аутоиммунными заболеваниями и при подозрении на генетический дефект комплемента .
Количественное определение компонентов комплемента в большинстве лабораторий проводят с помощью простой радиальной иммунодиффузии и нефелометрии . Однако если функциональный дефект компонентов комплемента не сопровождается изменением их антигенных свойств, эти методы неинформативны. Так, у 15% больных с наследственным отеком Квинке количественные методы исследования выявляют нормальный уровень ингибитора С1-эстеразы, в то время как его активность снижена.
Функциональные исследования позволяют оценить активность отдельных компонентов комплемента в сыворотке. Оценку активности компонентов комплемента проводят следующим образом:
- к стандартной сыворотке, лишенной какого-либо компонента комплемента, добавляют исследуемую сыворотку (источник недостающего компонента комплемента);
- определяют гемолитическую активность комплемента.
Если гемолитическая активность комплемента не восстанавливается до нормы, значит активность этого компонента комплемента в исследуемой сыворотке снижена. Иногда дополнительно оценивают активность регуляторных компонентов комплемента, например ингибитора С1-эстеразы.
Исследование активности компонентов комплемента проводится только в специализированных лабораториях.