Методика заключается в выявлении рассеяния света лазерного луча при прохождении через него клетки в струе.

Работа добавлена на сайт samzan.net:

То же самое что и 18 билет!!! Одно и тоже кроме 3 вопроса

Вопрос №3

Проточная цитометрия — метод оптического измерения параметров клетки, ее органелл и происходящих в ней процессов.

Методика заключается в выявлении рассеяния света лазерного луча при прохождении через него клетки в струе жидкости, причём, степень световой дисперсии позволяет получить представление о размерах и структуре клетки. Кроме того, в ходе анализа учитывается уровень флуоресценции химических соединений, входящих в состав клетки (аутофлуоресценция) или внесённых в образец перед проведением проточной цитометрии.

[править]Образцы

1.  кровь
2.  костный мозг
3.  ликвор
4.  суставная жидкость
5.  плевральная жидкость
6.  асцитическая жидкость
7.  суспензированные клетки тканей (например, опухолей)

[править]Принцип

Клеточная суспензия, предварительно меченная флюоресцирующими моноклональными антителами или флуоресцентными красителями, попадает в поток жидкости, проходящий через проточную ячейку. Условия подобраны таким образом, что клетки выстраиваются друг за другом за счет т. н. гидродинамического фокусирования струи в струе. В момент пересечения клеткой лазерного луча детекторы фиксируют:

1.  рассеяние света под малыми углами (от 1° до 10°) (данная характеристика используется для определения размеров клеток).
2.  рассеяние света под углом 90° (позволяет судить о соотношении ядро/цитоплазма, а также о неоднородности и гранулярности клеток).
3.  интенсивность флуоресценции по нескольким каналам флуоресцентности (от 2 до 18-20)- позволяет определить субпопуляционный состав клеточной суспензии и др.

[править]Флуорохромы

1.  Флуоресцеина изотиоцианат (FITC)
2.  Фикоэритрин (PE, RD1)
3.  Перидинин-Хлорофилл Протеин (Per-CP)
4.  Алофикоцианин (APC)

Тандемные красители:

1.  Фикоэритрин — Техасский красный (ECD)
2.  Фикоэритрин — Cy5 (PC5)
3.  Фикоэритрин — Cy7 (PC7)
4.  Аллофикоцианин- Cy7 (APC-Cy7)

«Квантовые точки» QD560, QD590 и т. д.

[править]Преимущества

1.  короткое время анализа (сек) за счет высокой скорости
2.  анализ большого количества клеток (до 108 клеток)
3.  логические ограничения допускают детектирование субпопуляций клеток
4.  измерение параметров редко встречающихся клеток
5.  объективное измерение интенсивности флуоресценции

[править]Применение

[править]Иммунология

1.  иммунофенотипирование клеток периферической крови
2.  определение фагоцитарной активности (захват меченных флюорохромами бактерий или дрожжей)
3.  определение внутриклеточных цитокинов (спонтанная продукция и под действием различных специфических или неспецифических активаторов, таких как ФМА + иономицин, ЛПС, ФНО-альфа)
4.  определение внутриклеточных белков, например транскрипционных факторов GATA-3, T-bet, FoxP3 для дискриминации CD4 Т-лимфоцитов
5.  определение пролиферативной активности (выявление инкорпорированого бромдезоксиуридина)
6.  исследование клеточного цикла
7.  оценка клеточной цитотоксичности

[править]Онкология

1.  количественный анализ внутриклеточных компонентов (ДНК)
2.  анализ стадий клеточного цикла
3.  выявление анеуплоидного клона
4.  определение пролиферативной активности анеуплоидного клона
5.  определение специфических маркеров
6.  позволяет проводить наблюдение пациентов, входящих в группу риска
7.  оценка состояния иммунной системы:
8.  оценка клеточного звена иммунитета (определение субпопуляций лимфоцитов)
9.  оценка функциональной состоятельности иммунокомпетентных клеток (NK тест, фагоцитарный тест и т. п.)

[править]Цитология

1.  определение цитоморфологической принадлежности клетки размер, соотношение ядро/цитоплазма, степень асимметричности и гранулярности клеток
2.  оценка активности внутриклеточных ферментов с помощью флуорогенных субстратов
3.  определение экспрессии поверхностных антигенов
4.  анализ стадий клеточного цикла
5.  измерение физиологических параметров клетки (внутриклеточный pH, концентрация свободных ионов Ca2+, потенциал наружной клеточной мембраны)

[править]Гематология

1.  анализ субпопуляционного состава клеток периферической крови
2.  подсчет ретикулоцитов, анализ тромбоцитов по специфическим маркерам
3.  дифференциальная диагностика лимфопролиферативных заболеваний и реактивных лимфоцитозов
4.  диагностика лимфопролиферативных заболеваний
5.  диагностика острых лейкозов
6.  оценка минимальной резидуальной болезни

[править]Фармакология

1.  измерение экспрессии маркеров
2.  измерение активности внутриклеточных ферментов
3.  определений стадий клеточного цикла в рамках изучения механизмов воздействия различных биологически активных веществ на клеточном уровне

В настоящее время проточная цитометрия применяется для выявления определённых клеток в исследуемых образцах (как бактериальных и грибковых, так и собственных клеток организма человека), определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, а также мониторирования состояния вирусного процесса у ВИЧ-инфицированных пациентов.

Выявление бактериальных, грибковых, а также собственных клеток организма в биологических жидкостях крайне важно для диагностики многих заболеваний. В ходе одного из исследований было показано, что проточная цитометрия обладает в 100—1000 раз более высокой чувствительностью по сравнению с микроскопией и позволяет выявлять бактериальные клетки в количестве 10-100 в 1 мл крови. При более низкой концентрации бактерий в образце возможно проведение предварительной инкубации. Высокую чувствительность методу придает использование моноклональных антител, помеченных флуоресцирующим веществом.

Проточная цитометрия позволяет не только выявлять инфицирование микроорганизмами, но и определять спектр их чувствительности, причём, длительность исследования не превышает нескольких часов. Подвергнутые воздействию антибиотиков (in vivo или in vitro) микроорганизмы сравнивают с контрольными образцами того же штамма для установления их жизнеспособности, а также изменений в нуклеиновых кислотах, белках, оболочке клеток и т. п., что позволяет оценить как степень эффекта антибиотика, так и точку приложения его действия.

Ещё одной областью применения проточной цитометрии является мониторирование состояния вирусного процесса у ВИЧ-инфицированных лиц путём определения абсолютного количества CD4+ клеток и их доли в популяции лимфоцитов (отношение CD4+/CD8+). Методика может также использоваться для контроля эффективности проводимой терапии

1. Лабораторная работа ’5 Администрирование Unix Цель работы- изучить команды работы с учетными записями пр.html
2. На кой бес мне этот стресс Стресс это одно из проявлений адаптационного синдрома представляющего соб
3. Реферат- Философия Древнего Китая
4. на тему Графический редактор dobePhotoshop Выполнил- Давутов И.
5. Российский государственный торговоэкономический университет СПО группы 3 гост А очной формы обучен
6. Акустоэлектрические преобразователи. Принципы работы. Особенности конструкции и использования
7. на тему- КРЕДИТНОДЕНЕЖНАЯ ПОЛИТИКА Преподаватель Работа
8. При поступлении жалобы на девушку администратор сайта имеет право проконтактировать девушку для выясн
9. Здійснення впливу за допомогою технік нейролінгвістичного програмування
10. Передаточная функция дискретной системы
11. Современные методы лечения гипоспадии
12. Первое начало термодинамики
13. не более чем простое переплетение бесполезных электронных схем
14. заключают в себе особую экспрессию усиливают напряжённость речи
15. Агрессия
16. Русский марксиз
17. Непівська суспільна модель її протиріччя та причини згортання
18. Иметь ясное понятие Сельское хозяйство ~ есть один из самых обширных промыслов включающий в себя множес
19. Применение малых напряжений
20. Тихоновский Богословский Институт IV курс заочное отделение Катехизаторский Факультет ИСТОРИЯ РУСС

Материалы собраны группой SamZan и находятся в свободном доступе