Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Принцип «Как есть»
ЗАНЯТИЕ 23
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
«ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ»
Подготовка пациента
Кровь забирается утром, натощак (после 8-10 часов ночного голодания). Исключить прием алкоголя. За несколько дней до исследования по согласованию с врачом отменить антибиотики и сульфаниламиды.
Проба: сыворотка крови
.
Подготовка пробы
Венозную или капиллярную кровь, забранную в пробирку без антикоагулянтов, выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин до образования сгустка, центрифугируют для отделения сыворотки. Сыворотка не должна быть гемолизной.
Принцип метода
Под действием щелочной фосфатазы, содержащейся в пробе, n-нитрофенолфосфат превращается в n-нитрофенол и фосфат. Количество образовавшегося в единицу времени n-нитрофенола, пропорциональное активности фермента, определяется по оптической плотности раствора.
Порядок выполнения
|
Реагенты |
Объем |
|
Рабочий реагент №1 (раствор n-нитрофенолфосфата в буфере) |
0,250 мл |
|
Сыворотка |
0,050 мл (2 капли) |
|
Инкубировать 30 мин при комнатной температуре. Затем в пробирки добавить: |
|
|
Рабочий реагент №2 (раствор гидроксида натрия) |
2,500 мл |
Перемешать и измерить оптическую плотность против дистиллированной воды при длине волны 405 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Фотометр автоматически произведет расчет активности фермента по оптической плотности.
Сделать заключение по результатам исследования.
Референтные пределы
Взрослые: 325-450 нкат/л
Клиническое использование исследования и
интерпретация результатов
Щелочная фосфатаза содержится во многих тканях организма человека. Наибольшая активность фермента выявлена в остебластах и эпителиоцитах желчных протоков печени. Фермент локализован в клеточной мембране, катализирует гидролитическое отщепление фосфата от различных органических соединений (оптимум рН 8,6–10,0), что необходимо для включения фосфатов в гидроксиапатиты костной ткани, реабсорбции фосфатов из желчи. Повышение активности щелочной фосфатазы в крови наблюдается при повреждении эпителия желчных протоков (холестаз, гепатит), усилении пролиферации и повышении активности остеобластов в костной ткани (рост костей у детей, заживление переломов, остеомаляция и др.).
Вопросы
Какую реакцию катализирует щелочная фосфатаза?
катализирует гидролитическое отщепление фосфата от различных органических соединений (оптимум рН 8,6–10,0), что необходимо для включения фосфатов в гидроксиапатиты костной ткани, реабсорбции фосфатов из желчи.
Локализация щелочной фосфатазы в клетке.
Клеточная мембрана
Какие изоформы щелочной фосфатазы существуют?
Костная, печёночная, кишечная, плацентарная, почечная и др.
Маркером какого нарушения в функции печени является повышение активности щелочной фосфатазы?
Повреждение желчных протоков (холестаз, гепатит)
Какие вещества входят в состав желчи?
Вода, желчные кислоты, фосфолипиды, холестерин, желчные пигменты (билирубин)
Перечислите первичные желчные кислоты.
Тауро (глико) хенодезоксизолевая и Тауро (глико)холевая
Назовите вторичные желчные кислоты, чем они отличаются от первичных?
дезоксихолевая кислота литохолевая аллохолевая и урсодезоксихолевая кислоты. Они отличаются тем, что в кишечнике микрофлора отщепила от них таурин и глицин, а также ещё чего-нибудь по мелочи.
Из каких субстратов синтезируются желчные кислоты?
Холестерин, из которого образуется хенодезоксизолевая или холевая кислота, к которым потом присоединяется таурин или глицин, в результате чего образуются первичные желчные кислоты.
Какие вещества после обезвреживания в печени могут выводиться с желчью?
Холестерин, билирубин, некоторые лекарственные вещества
Биологическая роль гепатоэнтеральной циркуляции желчных кислот.
Суть в том, что желчные кислоты нам не придётся заново синтезировать, нужно будет только их чутка достроить в печени, что не так накладно. Или можно наоборот с помощью лекарств (секвестранты желчных кислот) уменшить обратное всасывание желчных кислот, из-за чего печени придётся синтезировать новые желчные кислоты из холестерина.
Также нашёл сведения. Что желчные кислоты к крови выделяют какие-то полезные функции, но это никому не интересно.
Роль желчных кислот в переваривание липидов.
Эмульгирование жира, что улучшает его расщепление.
Перечислите причины стеатореи.
Стеаторея – жир в кале, значит жир не расщепляется, значит он не эмульгируется, значит желчные кислоты плохо выделяютсья или образуються (ну или ферменты плохо работают, но мы та про печень говорим.)
Могут ли витамины депонироваться в печени, какие?
Могут, жирорастворимые. (A, D, E, K)
Могут ли инактивироваться гормоны в печени, какие?
Все гормоны стероидной природы, инсулин, катехоламины, антидиуритический гормон, некоторые нейромедиаторы.
Какие вещества называют ксенобиотиками?
КСЕНОБИОТИКИ чужеродные для организмов соединения (промышленные загрязнения, пестициды, препараты бытовой химии, лекарственные средства и т.п.).
Делятся на 2 группы. Продукты хоз. деятельности (промышленность, сельское хозяйство, транспорт) и бытовой химии (моющие средства, парфюмерия. Вещества для борьбы с насекомыми)
Назовите несколько экзогенных веществ, которые обезвреживаются в печени.
Этил, лекарственные вещества, ксенобиотики различные.
Назовите эндогенные вещества, которые обезвреживаются в печени.
Аммиак, Билирубин (бывший гемоглобин), гормоны стероидные.
Назовите ферменты детоксикации в печени.
Цитохром P450, цитохром b5, NADPH p450 редуктаза, NADPH цитохром b5 редуктаза, стеароил-КоА-десатураза.
Назовите белки, синтез которых происходит только в печени.
Фибриноген, Протромбин, Проконвертин, Проакцелерин, Альбумины, большая часть глобулинов, синтез гема.
Назовите процессы обмена белков, протекающие только в гепатоцитах.
Синтез заменимых аминокислот, синтез мочевины, синтез многих, почти всех, белков
Назовите причины жировой инфильтрации печени.
Увеличение поступления жира: слишком много жира и углеводов (которые в печени переходят в жиры) поступает с пищей.; голодание (липолиз в жировой ткани, жир идёт в печень.)
Уменьшение оттока жира: мало ЛПОНП, мало липотропных факторов.
Возможные причины развития холестаза.
Различают внепечёночный холестаз (нарушение оттока желчи, механическое повреждение или закупорка желчных путей) и внутрипечёночный холестаз (нарушение образования и секреции желчи – лекарства, инфекции, аутоимунные метаболические и генетические факторы)