Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВО РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
|
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» |
Кафедра инфекционных болезней
зоогигиены и ветсанэкспертизы
С2. Б.11 ВЕТЕРИНАРНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ И МИКОЛОГИЯ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Лабораторная работа.
Возбудитель зооантропонозной чумы и псевдотуберкулеза
Направление подготовки 111801 Ветеринария
Профиль подготовки
Специализация Ветеринарная фармация
Квалификация выпускника - специалист
Уфа 2013
Лабораторная работа №8
Возбудитель зооантропонозной чумы и псевдотуберкулеза
Цель занятия: Изучить морфологию, культурально-биохимические свойства возбудителей зооантропонозной чумы и псевдотуберкулеза, а также лабораторную диагностику и средства специфической профилактики данных заболеваний.
Оборудование и материалы. Культуры Y.pestis (вакцинный штамм) и Y.pseudotuberculosis на МПА и в МПБ; готовые мазки из культур Y.pestis, Y.pseudotuberculosis; биопрепараты.
1 Общие сведения
Возбудители зооангропонозной чумы (чума верблюдов и человека) и псевдотуберкулеза принадлежат к роду Yeisinia (Иерсинии), семейству Enterobacteiaceace (Энтеробактерии).
Иерсиниоз — острое инфекционное заболевание из группы зооантропонозов, характеризующееся полиморфностью клинического проявления, в первую очередь как пищевая инфекция людей с тенденцией к генерализации, септикопиеемии, а так же поражению различных органов и систем жизнедеятельности у людей и животных.
Иерсиниоз относится к числу широко распространенных в мире инфекций, что обусловлено выраженной адаптационной способностью возбудителя. Исследования последнего десятилетия позволили сформулировать заключение о повсеместном распространении данной инфекции в России.
Так как по международной классификации кишечный иерсиниоз входит в число 4, наиболее распространенных пищевых инфекций, опережая по некоторым показателям сальмонеллез, то основным путем заражения людей являются пищевые продукты и в частности мясопродукты.
1.1 Зооантропонозная чума (чума верблюдов и человека) — природно-очаговая (протекающая спорадически) инфекционная болезнь. В естественных условиях резервуаром возбудителя служат грызуны. Здоровых животных заражают переносчики, в первую очередь блохи. Из сельскохозяйственных животных наиболее чувствительны верблюды. Больные верблюды - опасный источник заражения людей. Иногда болеют ослы, свиньи, овцы, козы, кошки. Болезнь характеризуется тяжелой интоксикацией, поражением лимфатической системы, легких, тенденцией к септицемии.
Возбудитель чумы верблюдов и человека - Y.pestis (Bact.pestis).
Низкие температуры переносит хорошо - при 0°С сохраняется более 6 мес, в почве - до 7 мес; при кипячении погибает в течение нескольких секунд.
Морфология (микроскопия). Мазки окрашивают по Граму. В препаратах возбудитель обнаруживают в форме овоидной или палочковидной клетки размером (0,3...0,5) х (1...3)мкм: располагается одиночно, парами, иногда короткими цепочками. Клетки грамотрицательные, часто с биполярной окраской, без жгутиков, спор не образуют, имеет нежную капсулу.
Материал для исследования. В лабораторию направляют органы, трупы грызунов, гной из бубонов, мокроту, кровь. Чума - высококонтагиозная инфекция, поэтому работа с чумным материалом разрешена только в специализированных лабораториях с соблюдением мер предосторожности.
Определение культурально-биохимических свойств (выделение и идентификация культуры возбудителя). Возбудитель — факультативный анаэроб, температурный оптимум 28...29°С (диапазон 14...42°С), рН 7,2..7,4, хорошо растет на обычных питательных средах.
Через 24 ч инкубирования при 37°С на плотных средах образует шероховатые с фестончатым краем и желтовато-коричневым выпуклым центром колонии, напоминающие из-за прозрачного фестончатого края кружевной платок. В МПБ возбудитель образует пленку на поверхности среды, от которой спускаются нити, напоминающие сталактиты, на дне пробирки хлопьевидный осадок.
Возбудитель расщепляет глюкозу, мальтозу, маннит, галактозу, арабинозу, ксилозу до кислоты; желатину не разжижает, индол не образует, выделяет каталазу.
При исследовании материала от грызунов необходимо дифференцировать от Y. pseudotubenculosis, который в отличие от Y. Pestis образует уреазу и ферментирует рамнозу.
Патогенность (биопроба). Метод применяют для выделения чистой культуры из материала, контаминированного посторонней микрофлорой. Для этого используют морских свинок, которым материал вводят подкожно. Не загрязненный другими бактериями материал вводят внутрибрюшинно. Загнивший нативный материал втирают морским свинкам в предварительно выбритый участок кожи на животе. После гибели (на 3...7-е сутки) проводят вскрытие с последующим бактериологическим исследованием внутренних органов.
Кроме того, существуют ускоренные методы обнаружения возбудителя и его антигенов в исследуемом материале: иммунофлуоресценция, реакция торможения, пассивная гемагглютинация (РТГА), реакция нарастания титра фага, РДП и др.
Лабораторная диагностика. Включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии (разработаны и другие методы), выделение чистой культуры посевом на питательные среды и методом биопробы, идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и серологическим свойствам. Для дифференциации микроба ставят пробу с бактериофагом; разработана реакция нарастания титра фага (РНФ), которую используют для постановки ускоренного ориентировочного диагноза.
Биопрепараты. Чумная живая сухая вакцина из штамма EV, химическая чумная вакцина; чумной бактериофаг. Возбудитель чувствителен к стрептомицину и тетрациклину.
1.2 Псевдотуберкулез (родентиоз) — хроническая инфекционная болезнь преимущественно грызунов, овец и птиц, (редко крупного рогатого скота, лошадей, свиней), характеризуется узелковым поражением паренхиматозных органов, сходным с изменениями при туберкулезе, а также поражением кишечника, прогрессирующим истощением и диареей.
Возбудитель псевдотуберкулеза (Y.pseudotuberculosis). Сохраняется в навозе до 8 мес, в воде 5 мес, при нагревании до 100°С до 3 мин.
Морфология (микроскопия). По морфологии и типкториальным свойствам Y. pseudotuberculosis практически неотличим от Y. pestis.
Материал для исследования. В лабораторию направляют паренхиматозные органы, лимфатические узлы, трупы грызунов и птиц.
Определение культурально-биохимических свойств. Y. Pseudotuberculosis - факультативный анаэроб; температурный оптимум 28...30°С, рН 7,2...7,4.
Свойства возбудителя варьируют в зависимости от температурного режима культивирования. К питательным средам нетребователен.
На плотных средах при 22...28°С через 24 ч образует мелкие (диаметр 0,1...0,5 мм), круглые, выпуклые, прозрачные, серовато-желтоватые, блестящие колонии с приподнятым центром. При 37°С может проявляться полиморфизм колоний, связанный с формированием Д-колоний, выпуклых, с коричневатым центром и волокнистыми истонченными краями. При низких температурах (22°С и ниже) образует жгутики, чем отличается от
Y. pestis, при 37°С неподвижен. В МПБ растет с равномерным помутнением среды и последующим выпадением хлопьевидного или вязкого осадка.
С целью видовой идентификации исследуют ферментативные свойства. Y. pseudotuberculosis образует уреазу, расщепляет рамнозу, мелибиозу, не обладает лизинорнитиндекарбоксилазами, не гидролизует желатин, не образует индол, не утилизирует цитрат Симмонса. Реакцию Фогеса - Проскауера при 25°С отрицательная.
Патогенность (биопроба). Тканевым гомогенатом или выделенной культурой заражают подкожно или внутрибрюшинно белых мышей, морских свинок, кроликов. Мыши погибают через 2...4 сут., морские свинки и кролики — через 2...35 сут. в зависимости от вирулентности культуры. Из органов павших подопытных животных делают посевы на питательные среды для выделения культуры возбудителя, готовят и м икроскопируют окрашенные мазки и отпечатки.
Для серовариантной идентификации выделенных культур возбудителя применяют серологические реакции. Y. Pseudotuberculosis подразделяют на 6 серологических групп по термостабильным антигенам и 5 вариантов — по жгутиковым антигенам.
Бактериологическая диагностика. Включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале (прежде всего методом биопробы), выделение чистой культуры посевом на питательные среды и биопробой, идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным свойствам.
Возбудитель чувствителен in vitro хлорамфениколу, стрептомицину, пенициллину и тетрациклину.