Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Работа 7.
Выделение белков из растительного сырья
Цель работы: выделение и изучение белков растительного происхождения (пшеничная и гороховая мука).
Материалы: пшеничная мука, гороховая мука, биуретовый реактив, хлорид натрия, спирт этиловый.
Ход работы
Выделение альбуминов. В пробирку вносят 1 г пшеничной муки, добавляют 10 мл воды и содержимое перемешивают. Пробирку ставят в термостат или в стакан с теплой водой при 30 – 35 °С на 30 мин. Содержимое пробирки периодически перемешивают. Через 30 мин надосадочную жидкость, содержащую альбумины, отфильтровывают.
Часть фильтрата (1 – 3 мл) используют для биуретовой реакции на белок, а к другой части раствора добавляют примерно равный объем насыщенного раствора хлорида натрия. При этом раствор мутнеет, так как альбумины в присутствии солей теряют растворимость.
Выделение глобулинов. В пробирку вносят 1 г гороховой муки, 10 мл 10 %-го раствора хлорида натрия и содержимое пробирки перемешивают. Извлечение глобулинов проводят при температуре 30 – 35оС в течении 30 мин. Через 30 мин жидкость отфильтровывают или центрифугируют и проводят пробу на присутствие белка биуретовой реакцией.
Глобулины не растворяются в чистой воде, поэтому если из раствора удалить соль, то глобулины выпадут в осадок. В холщовый или полиэтиленовый мешочек наливают отфильтрованный раствор и помещают его в стакан с проточной водой. Диализ длится 1,5 – 2 часа. По мере обессоливания раствора белки выпадают в осадок.
Выделение проламинов. В пробирку вносят 1 г пшеничной муки и 10 мл 70%-го этилового спирта. Экстракцию белков ведут при 30 – 35 °С в течении 30 мин при периодическом перемешивании. Через 30 мин надосадочную жидкость отфильтровывают. Фильтрат разбавляют в два раза водой, при этом концентрация спирта резко падает, и спирторастворимые белки – проламины теряют растворимость. Раствор мутнеет [16].
Работа 8.
Выделение белков куриного яйца
Цель работы: выделение и изучение белков куриного яйца.
Материалы: белок куриного яйца, раствор сульфата натрия насыщенный, кислота серная, сульфат натрия, биуретовый реактив.
Ход работы
5 мл свежего куриного белка смешивают с равным объемом 36,7%-ного раствора сульфата натрия. Выпавшие в осадок глобулины отфильтровывают, к фильтрату прибавляют 1 н серную кислоту до рН 4,7 и безводный сульфат натрия до появления легкой опалесценции.
При хранении раствора в холодильнике образуются кристаллы яичного альбумина, которые оседают на дно [16].
С полученными белками проводят биуретовую реакцию.
Работа 9.
Выделение белков молока
Цель работы: выделение и изучение белков молока.
Материалы: молоко сырое, кислота уксусная, биуретовый реактив, сульфат аммония, бура.
Ход работы
50 мл сырого молока нагревают до 40-50 °С и вносят при помощи пипетки несколько капель концентрированной уксусной кислоты. Выпавший осадок казеина отфильтровывают. Фильтрат используют для выделения других белков, а осадок осторожно снимают стеклянной палочкой с фильтра в пробирку и проделывают с ним биуретовую реакцию.
2 - 3 мл фильтрата кипятят до появления хлопьев лактоальбумина и лактоглобулина.
К 5 мл фильтрата в другой пробирке добавляют сульфат аммония до полунасыщения. Выпадают хлопья глобулина, который отфильтровывают.
Лактоальбумин выпадает в осадок в виде хлопьев при добавлении к
5 мл фильтрата в третьей пробирке сульфата натрия до полного насыщения. Хлопья альбумина также отфильтровывают. Полученные осадки снимают с фильтра и проделывают с ними биуретовую реакцию.
Казеин, полученный путем осаждения кислотами, называют кислотным (в отличие от сычужного, получаемого ферментированием). Для кислотного казеина характерна растворимость в 3%-ном растворе буры. Для этого в химический стакан на 100 мл отвешивают 5 г полученного кислотного казеина, приливают 25 мл 3%-ного раствора буры, тщательно перемешивают и оставляют для растворения на 1 час на водяной бане при температуре 50°С. Содержимое стаканчика перемешивают стеклянной палочкой через каждые 10 мин. Наблюдения заносят в журнал [16].
Работа 10.
Выделение и изучение крахмала
Цель работы: выделение и изучение картофельного крахмала.
Материалы: картофель сырой, раствор натрия хлорида, раствор нитрата серебра, кислота серная, раствор йода.
Ход работы
Клубни картофеля растирают в фарфоровой ступке и заливают водой, после чего смесь отжимают через марлю. Обработку повторяют три раза. В полученном фильтрате содержится крахмал.
Крахмалу дают отстояться. Для удаления белков крахмал заливают небольшим количеством 10%-ного раствора хлорида натрия и дают отстояться 1 час. Затем жидкость сливают, а крахмал отмывают от хлорида натрия сначала просто холодной водой, а затем дистиллированной путем поочередного взмучивания и отстаивания до отрицательной реакции на анион хлора в промывных водах с 1%-ным раствором нитрата серебра.
Полученный крахмал используют для приготовления 1%-ного клейстера.
В колбочку вносят 10 мл 1%-ного крахмального клейстера и добавляют 4 мл 10%-ной серной кислоты. Колбу нагревают на сетке, периодически (через каждые 5 – 7 мин) отбирая пробы в пробирки, в которые добавляют сильно разбавленный раствор иода. Отмечают окраску раствора. Вначале окраска еще будет иметь синий цвет, затем переходит в фиолетовую (амилодекстрины), далее в красную (эритродекстрины), и наконец желтая окраска йода перестает изменяться (ахродекстрины). Декстрины в конечном итоге расщепляются до глюкозы (с промежуточным образованием мальтозы) /16/.
Работа 11.
Выделение растворимого пектина
Цель работы: выделение растворимого пектина и изучение желеобразующей способности.
Материалы: яблоки, свекла, сахароза, кислота винная.
Ход работы
25 г свежего продукта (яблок, свеклы) растирают с измельченным стеклом в ступке до совершенно однородной массы и переносят в коническую колбу, заливают 100 мл воды, нагретой до 45оС (не выше) и выдерживают при периодическом взбалтывании 30 мин при этой же температуре на водяной бане. Затем колбу закрывают пробкой и энергично взбалтывают 15 – 20 мин. После этого содержимому колбы дают отстояться и собирают прозрачный раствор пектина, который затем испытывают на желеобразующую способность. 20 мл полученного растворимого пектина нагревают в химическом стаканчике на водяной бане до 75 °С. Отдельно в другом стакане готовят сахарный сироп, для чего смешивают 30 г сахара со 100 мл воды, 0,4 г винной кислоты и нагревают на кипящей водяной бане до полного растворения сахара.
В горячий (70 – 80 °С) пектиновый препарат прибавляют свежеприготовленный сахарный сироп. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 3 ч. Если в растворе содержится достаточное количество пектина, то образуется плотный студень, напоминающий мармелад, по плотности которого судят о желеобразующей способности препарата /16/.
Работа 12.
Выделение арабинозы из камеди
Цель работы: выделение арабинозы из древесной камеди.
Материалы: камедь, кислота серная, мел, спирт бутиловый, спирт этиловый, уголь активированный.
Ход работы
Сухую тонкоизмельченную камедь (15 г) помещают в колбу на 500 мл, заливают 150 мл воды. После набухания добавляют 3,6 мл концентрированной серной кислоты, предварительно разбавленной 10 мл воды, перемешивают и нагревают на кипящей водяной бане 6 ч. К гидролизату осторожно добавляют мел до нейтральной реакции и продолжают нагревать еще 1 ч. Для предотвращения вспенивания можно добавить несколько капель бутанола.
Осадок отфильтровывают и промывают 50 мл горячей воды. Фильтрат упаривают до объема 60 – 70 мл в фарфоровой чашке, охлаждают, отделяют от выпавшего гипса и продолжают упаривать до густого сиропа. В чашку с сиропом добавляют 3 объема спирта, перемешивают и выпавший осадок сырого продукта отфильтровывают.
Чтобы получить чистую арабинозу осадок смешивают с 10 мл воды и 20 мл спирта и снова фильтруют. Объединенные водно-спиртовые растворы и промывные жидкости встряхивают с 0,5 г активного угля, фильтруют и упаривают до сиропа. Заканчивают упаривание в вакууме. Сироп охлаждают заражают кристалликом арабинозы и оставляют стоять. Как только начнется выпадение кристаллов, добавляют 10 мл спирта, смесь перемешивают и ставят в холодильник. Выделившуюся арабинозу фильтруют и перекристаллизовывают из 15 мл ледяной уксусной кислоты [16].
Работа 13.
Тирозин из шелка
Цель работы: выделение тирозина из натурального шелка.
Материалы: шелк натуральный, кислота серная, раствор гидроксида бария, реактив Миллона, кислота соляная, раствор нитрита натрия, формалин.
Ход работы
В круглодонную колбу наливают раствор 22 мл концентрированной серной кислоты в 80 мл воды и вносят, перемешивая, натуральный шелк (100 г). Колбу закрывают пробкой с длинным обратным воздушным холодильником, и начинают гидролиз, нагревая реакционную смесь на водяной бане. Когда основная часть шелка растворится, в колбу бросают несколько кусочков пористого фарфора и продолжают нагревать на сетке 15 час.
Охлажденный раствор фильтруют. В фильтрат прибавляют горячий 20%-ный раствор гидрата окиси бария (до слабощелочной реакции на фенолфталеин). Осадок сульфата бария отфильтровывают и кипятят его еще раз с 25 мл чистой воды – для извлечения тирозина, увлеченного осадком. Операцию повторяют до тех пор, пока новая проба фильтрата станет давать лишь слабую реакцию на тирозин с реактивом Миллона.
Объединенный фильтрат концентрируют в фарфоровой чашке на водяной бане до начала кристаллизации. Упаренный раствор оставляют на холоде и отфильтровывают выпавший тирозин. Чтобы очистить продукт, осадок растворяют в горячей воде, кипятят 15 мин с активным углем, фильтруют горячим и вновь ставят на кристаллизацию.
Качественные реакции
1. Тирозин дает характерное, цвета красного мяса окрашивание с реактивом Миллона.
2. Несколько мл раствора тирозина обрабатывают 0,5 мл 0,04 н раствора HCl и 0,2 мл 2%-ного раствора нитрита натрия. Смесь нагревают 10 минут на водяной бане. Появляется желтая окраска, переходящая постепенно через розовую и фиолетовую в зеленую. Окрашенный в фиолетовый цвет нитрозамин может быть извлечен амиловым спиртом.
3. Проба Мернера. Реактив приготавливают, смешивая 0,1 объема 40%-ного раствора формалина с 4,5 объемами воды и 5,5 объемами концентрированной HCl. Несколько миллилитров реактива нагревают до кипения с тирозином или его раствором – появляется устойчивая зеленая окраска [16].
Работа 14.
Цистин из шерсти
Цель работы: выделение цистина из шерсти.
Материалы: шерсть овечья сырая, кислота соляная, биуретовый реактив, ацетат натрия, индикатор конго.
Ход работы
Сырую овечью шерсть (200 г) освобождают от механических загрязнений, промывают слегка теплым мыльным раствором, тщательно прополаскивают дистиллированной водой и просушивают.
Подготовленную шерсть помещают в двухлитровую круглодонную колбу, заливают 400 мл 20%-ной HCl и, снабдив колбу обратным холодильником, проводят гидролиз, нагревая смесь 5 – 6 час на сетке. Процесс считают законченным, когда проба гидролизата покажет отрицательную биуретовую реакцию.
Горячую массу фильтруют, промывают дистиллированной водой. В фильтрат, объединенный с промывными водами, добавляют кристаллический ацетат натрия до тех пор, пока проба на минеральную кислоту (по конго) не станет отрицательной. Уксуснокислый раствор оставляют на двое суток в холодильнике для кристаллизации цистина. Выпавшие кристаллы отсасывают. Чтобы очистить сырой цистин от пигментов, его растворяют в возможно малом количестве кипящей 3%-ной HCl и повторным кипячением с новыми порциями активного угля полностью обесцвечивают (требуется от 2 до 5 обработок каждый раз с 2 г угля).
Бесцветный или слегка желтоватый раствор фильтруют горячим через складчатый фильтр и добавляют профильтрованный насыщенный раствор ацетата натрия (40 - 50 г) до отрицательной реакции на конго. По мере охлаждения начинает кристаллизоваться цистин. Через 5 – 6 часов его отфильтровывают и дважды промывают горячей водой (для удаления остатков тирозина) [16].
Работа 15.
Ванилин из лигнина
Цель работы: получение ванилина из лигнина.
Материалы: древесные опилки или подсолнечная лузга, спирт этиловый, бензол, кислота серная, раствор натрия гидроксида, нитробензол, раствор бисульфита натрия.
Ход работы
Измельченную подсолнечную лузгу или древесные опилки (50 г) настаивают в смеси спирта и бензола (1:1) в течение суток для удаления жиро - восковых примесей. Раствор отделяют на фильтре и промывают небольшим количеством чистого растворителя. Высушенный на воздухе остаток переносят в коническую колбу, заливают 50 мл 72%-ной серной кислоты и оставляют стоять 48 час. Затем в колбу наливают 400 мл воды и кипятят около часа для завершения гидролиза полисахаридов. После охлаждения осадок лигнина отсасывают, промывают большим количеством воды и высушивают.
10 г полученного лигнина загружают в автоклав из нержавеющей стали, добавляют 300 мл 2 н раствора гидроксида натрия и 40 мл нитробензола. Автоклав нагревают 3 часа, поддерживая температуру 170оС.
После охлаждения, содержимое автоклава переносят в фарфоровую чашку и упаривают на водяной бане до половины объема. Раствор ванилата натрия отфильтровывают от примесей и нейтрализуют слегка разбавленной серной кислотой до рН 4,5 – 5. Чтобы отделить коллоидные примеси, способствующие образованию эмульсии, нейтрализованный раствор центрифугируют (или отстаивают 10 – 12 час). Проводят извлечение бензолом. Для этого в колбу наливают 25 мл бензола, присоединяют обратный холодильник и нагревают на водяной бане. Слегка охлажденную смесь переносят в делительную воронку и после встряхивания и отслаивания нижний водный слой сливают. Этот слой повторно обрабатывают бензолом.
Объединенную после трех обработок бензольную вытяжку отгоняют досуха, а остаток, содержащий загрязненный ванилин, смешивают с насыщенным раствором бисульфита натрия. Ванилин дает хорошо растворимое в воде бисульфитное соединение. Далее раствор подкисляют 10%-ной серной кислотой и удаляют сернистый газ продуванием воздуха. Ванилин выпадает в осадок, который после подсушивания перегоняют при 13 мм рт. ст.(т. кип. 163 – 166).
Чтобы окончательно очистить ванилин, его растворяют в минимальном количестве воды, нагревая до 50°С. По охлаждении выпадают кристаллы [16]
Работа 16.
Специфичность действия амилазы слюны
Цель работы: изучение специфичности действия амилазы слюны человека на ди- и полисахариды.
Материалы: амилаза слюны (слюна разведена дистиллированной водой 1:10), раствор крахмала, раствор сахарозы, раствор йода, реактив Троммера.
Ход работы
Амилаза относится к гидролитическим ферментам, действующим на гликозиды. Она содержится в панкреатическом и кишечном соке, а у некоторых животных и человека – в слюне.
Под влиянием амилазы крахмал расщепляется до дисахарида мальтозы через ряд промежуточных продуктов различной сложности - декстринов.
Готовят две инкубационные пробы, как указано в таблице, используя в качестве субстратов для амилазы два вещества: крахмал (1%-ный) и сахар (1%-ный).
|
№ пробы |
Амилаза слюны, мл |
Раствор крахмала, мл |
Раствор сахарозы, мл |
Проба Троммера (+ или -) |
Реакция раствором йода |
|
1 2 |
1 1 |
1 - |
- 1 |
Пробы выдерживают в термостате 15 мин при 37 °С. Затем с первой пробой (субстрат - крахмал) проделывают две реакции: пробу Троммера (10 капель 10%-ного NaOН и 2 капли 1%-ного CuSO4) и реакцию с раствором йода (к 5 каплям инкубационной смеси добавляют 1 - 2 капли раствора йода). Со второй пробой проделывают реакцию Троммера. Вносят в таблицу результаты реакций.