Поможем написать учебную работу
Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.

Предоплата всего

Подписываем
Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Министерство образования и науки Российской Федерации
_____________________________________
Государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
Санкт-Петербургский государственный технологический институт
(Технический университет)
__________________________________________________________
Кафедра технологии микробиологического синтеза
А.В. Анкудинова, В.Г. Шмелева,
Е.И. Помешалкин
Лабораторный практикум
по химии белка
Методические указания
Санкт-Петербург
2010
УДК 577.112
Анкудинова А.В. Лабораторный практикум по химии белка [текст]: методические указания / А.В. Анкудинова, В.Г. Шмелева, Е.И. Помешалкин. СПб.: СПбГТИ(ТУ), 2010. 42 с.
В методических указаниях представлены основные лабораторные работы необходимые для практического изучения биохимических процессов в клетке.
Методические указания предназначены для студентов 3 курса факультета тонкого органического и микробиологического синтеза и соответствуют рабочей программе по дисциплине «Биологическая химия».
Табл. 6. Ил. 1. Библиогр. 4 назв.
Рецензент:
Д.О. Виноходов, д-р биол. наук, профессор кафедры молекулярной биотехнологии СПбГТИ(ТУ)
Утверждены на заседании учебно-методической комиссии факультета тонкого органического и микробиологического синтеза 21.09 .2010
Рекомендованы к изданию РИСо СПбГТИ (ТУ)
Биологическая химия является одной из наиболее важных теоретических дисциплин в системе биологического образования инженеров-технологов микробиологических производств.
Настоящие методические указания включают цикл лабораторных работ по разделу «Химия белка». Описанию каждой работы предшествует краткий теоретический материал с описанием механизмов протекания реакций. В конце даны контрольные вопросы, которые могут использоваться студентами для подготовки к контрольным работам, а также для самостоятельной работы.
Среди органических соединений, встречающихся в клетке, первое место занимают белки на их долю приходится не менее 50% сухого веса клетки. По химической природе белки представляют собой высокомолекулярные соединения, построенные из сотен или тысяч аминокислотных остатков. В белковых молекулах аминокислоты располагаются таким образом, что карбоксильная группа одной аминокислоты связана с α-аминогруппой другой пептидной связью.
У аминокислот, имеющих две аминогруппы (лизин, аргинин) или две карбоксильные группы (аспарагиновая, глютаминовая), в реакцию образования пептидов вступают только те карбоксильные и аминогруппы, которые стоят у α-углеродного атома.
Молекула белка состоит из одной или нескольких полипептидных цепей, соединенных между собой главным образом водородными связями. Кроме водородных связей в молекуле белка между полипептидными цепочками возникают и другие связи (например, эфирные, дисульфидные и др.), образованные за счет фенольных (тирозин), спиртовых (серин), сульфгидрильных (цистеин) и других групп, имеющихся в полипептидных цепочках.
Каждый тип белка обладает особым, свойственным только ему химическим составом, определенным молекулярным весом и специфической последовательностью аминокислотных остатков. Это и определяет разнообразие существующих в природе белков (табл. 1).
Присутствие белка в биологических объектах или растворах можно обнаружить с помощью цветных реакций, которые обусловлены наличием аминокислот в белке, их специфическими группами или пептидными связями.
Ряд химических веществ дает окраску продуктов реакции при взаимодействии с белками. Эти реакции применяются для качественного и количественного определения белка и присутствующих в нем аминокислот.
Таблица 1 Аминокислоты, встречающиеся в белках
Аминокислота |
Формула |
Сокра- щенное обозначение |
I Алифатические аминокислоты 1 Моноаминомонокарбоновые кислоты |
||
1 |
2 |
3 |
Глицин (α-аминоуксусная кислота) |
гли |
|
Аланин (α-аминопропионовая кислота) |
ала |
|
Валин (α-аминоизовалериановая кислота) |
вал |
|
Лейцин (α-аминоизокапроновая кислота) |
лей |
|
Изолейцин (α-амино-β-метил-валериановая кислота) |
илей |
|
Серин (α-амино-β-окси-пропионовая кислота) |
сер |
|
Треонин (α-амино-β-оксимасляная кислота) |
тре |
|
2 Диаминомонокарбоновые кислоты |
||
Лизин (α,ε-диаминокапрновая кислота) |
лиз |
|
Аргинин (α-амино-β-гуанидин-валериановая кислота) |
арг |
|
|
||
1 |
2 |
3 |
3 Моноаминодикарбоновые кислоты |
||
Аспарагиновая (аминоянтарная кислота) |
асп |
|
Аспарагин (амид аспарагиновой кислоты) |
асн |
|
Глутаминовая (α-аминоглутаровая кислота) |
глу |
|
Глутамин (амид глутаминовой кислоты) |
глн |
|
4 Серосодержащие аминокислоты |
||
Цистеин (α-амино-β-тио-пропионовая кислота) |
цис |
|
Метионин (α-амино-γ-метил-тиомасляная кислота) |
мет |
|
II Ароматические аминокислоты |
||
Фенилаланин (α-амино-β-фенил-пропионовая кислота) |
фен |
|
Тирозин (α-амино-β-гидрокси-фенилпропионовая кислота) |
тир |
|
Продолжение табл.1 |
||
III Гетероциклические аминокислоты |
||
Пролин (пирролидин-α-карбоновая кислота) |
про |
|
Триптофан (α-амино-β-индолил-пропионовая кислота) |
три |
|
Гистидин (α-амино-β-имидазолил-пропионовая кислота) |
гис |
Существуют универсальные цветные реакции, которые дают все белки (биуретовая и нингидриновая). Кроме того, имеются специфические реакции, которые обусловлены наличием только определенных аминокислот в молекуле белка (ксантопротеиновая, Миллона, Фоля и др.); многие из них весьма чувствительны и высокоспецифичны, что позволяет открывать ничтожные количества той или иной индивидуальной аминокислоты в составе сложных смесей, биологических жидкостях, гидролизатах белков и т.п. На основании некоторых цветных реакций разработаны методы количественного определения белков и аминокислот.
Биуретовая реакция получила свое название от производного мочевины биурета, образующегося при нагревании мочевины с отщеплением от нее аммиака:
Биуретовая реакция открывает в белке пептидную связь
(она имеется и в биурете). Однако эту реакцию способны давать вещества, содержащие не менее двух пептидных связей.
При добавлении к сильно щелочному раствору белка или продукту его неполного гидролиза сульфата меди, образуются комплексные соединения меди, окрашенные в красно-фиолетовый или сине-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски зависит от длины пептида.
Биуретовую реакцию дают аспарагин (амид аспарагиновой кислоты) и аминокислоты гистидин, треонин и серии.
Группа, образующая пептидную связь в щелочной среде, присутствует в своей таутомерной енольной форме:
При избытке щелочи происходит диссоциация ОН-группы, появляется отрицательный заряд, с помощью которого кислород взаимодействует с медью; кроме того, медь образует дополнительные координационные связи с атомами азота, участвующими в пептидной связи, путем использования их неподеленных электронных пар. Возникающий таким образом комплекс очень стабилен.
1 Цель работы - провести биуретовую реакцию, которая обнаруживает пептидные связи в белке
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Едкий натр 10 %
Сернокислая медь 1 %
3 Описание работы
К пяти каплям 1 % раствора белка прибавляют три капли 10 % раствора едкого натра, одну каплю 1 % раствора сернокислой меди и перемешивают. Содержимое пробирки приобретает сине-фиолетовый цвет.
Нельзя добавлять избыток сернокислой меди, поскольку синий осадок меди маскирует характерное фиолетовое окрашивание биуретового комплекса белка.
4 Контрольные вопросы
Растворы белка, пептидов и аминокислот дают синее или фиолетовое окрашивание с нингидрином при нагревании. Все аминокислоты можно рассматривать как С-замещенные производные аминоуксусной кислоты. При окислении они расщепляются:
В качестве окислителей можно применить органическое соединение - нингидрин (трикетогидринденгидрат):
Трикетогидринден Нингидрин
Сначала нингидрин восстанавливается аминокислотой до ендиола:
1. Декарбоксилирование
2. Дезаминирование
3. Окисление
Ендиол
Затем конденсируется с аммиаком и второй молекулой нингидрина, образуя краситель типа мурексида (пурпурный Руэмана), который в нейтральных и слабощелочных растворах существует в виде окрашенного иона (аниона). Окраска обусловлена наличием в сине-фиолетовом Руэмана цепи конъюгации с ионными зарядами по концам цепи:
В настоящее время нингидриновая реакция исключительно широко используется как для открытия отдельных аминокислот, так и для их количественного определения.
Сине-фиолетовый Руэмана на хроматограмме довольно быстро (в течение нескольких дней) разрушается. Чтобы избежать обесцвечивания пятен на хроматограмме, ее протаскивают через насыщенный раствор азотнокислой меди в 90 % ацетоне. При этом сине-фиолетовый Руэмана превращается в комплексную медную соль красного цвета. В таком виде, хроматограмма может храниться несколько месяцев.
1 Цель работы - провести качественную реакцию с нингидриновым реактивом на α-аминокислоты
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Белок 1 %
Гидролизат белка
Аминокислота 2 %
Нингидрин 0,1 %
3 Описание работы
В 1-ю пробирку наливают пять капель 1 % раствора белка, во 2-ю пять капель гидролизата белка, в 3-ю 2 мл 2 % раствора аминокислоты. Во все три пробирки наливают пять капель 0,1 % водного раствора нингидрина и кипятят 1 2 мин. Наблюдают появление розово-фиолетового или сине-фиолетового окрашивания. Затем раствор синеет.
4 Контрольные вопросы
Эта реакция основана на способности аминокислот образовывать с азотистой кислотой неустойчивое диазосоединение, разлагающееся с образованием свободного азота:
1 Цель работы провести реакцию на первичную аминогруппу аминокислот
2 Приборы и материалы
Аминокислота 1 %
Нитрит натрия 3 %
Уксусная кислота 10 %
3 Описание работы
В пробирку наливают 2 мл 1 % раствора аминокислоты, прибавляют 2 мл 3 % раствора нитрита натрия, 0,5 мл 10 % раствора уксусной кислоты и перемешивают. Выделяются пузырьки газообразного азота.
4 Контрольные вопросы
На чем основана реакция на первичную аминогруппу?
Реактив Миллона (смесь азотнокислых и азотистокислых солей оксида ргути (I) в концентрированной азотной кислоте) открывает в белке циклическую аминокислоту тирозин, имеющую фенольную группу, которая при взаимодействии с реактивом Миллона дает ртутную соль, окрашенную в розово-красный цвет.
Реакцию Миллона дают все белки, за исключением тех, молекулы которых не содержат тирозина (желатина, клупеин и др.):
Свободный тирозин реагирует с реактивом Миллона аналогично, но при этом не образуется осадка, а раствор приобретает красный цвет.
1 Цель работы провести качественную реакцию на тирозин
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Тирозин 1 %
Белок 1 %
Гидролизат белка
Реактив Миллона
3 Описание работы
Берут три пробирки. В 1-ю отмеряют 2 мл 1 % раствора тирозина, во 2-ю пять капель 1 % раствора белка, в 3-ю пять капель гидролизата белка. Во все пробирки добавляют по три капли реактива Миллона. Пробирки осторожно нагревают. Происходит красное окрашивание.
4 Контрольные вопросы
Ксантопротеиновая реакция открывает наличие в белках циклических аминокислот фенилаланина, тирозина, триптофана, содержащих в своем составе бензольное кольцо.
Большинство белков при нагревании с концентрированной азотной кислотой дает желтое окрашивание, переходящее в оранжевое при подщелачивании. Например:
Примечание. В зависимости от количества прибавленной азотной кислоты может образовываться и смесь динитро- и нитротирозина.
Реакция обусловлена нитрованием бензольного кольца этих аминокислот с образованием нитросоединений желтого цвета.
Далее продукты нитрования реагируют с едким натром или гидроксидом аммония с образованием натриевой соли или аммонийной соли, имеющей желто-оранжевую окраску.
Ксантопротеиновую реакцию, кроме белков, пептидов и циклических аминокислот, дают также многие простые ароматические соединения (бензол).
1 Цель работы провести качественную реакцию на циклические аминокислоты
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Белок 1 %
Гидролизат белка
Триптофан
Фенол
Азотная кислота (конц.)
Едкий натр 10 %
3 Порядок проведения работы
В 1-ю пробирку наливают пять капель 1 % раствора белка. В следующие три пробирки соответственно по пять капель гидролизата белка, пять капель фенола и две капли раствора триптофана. Во все пробирки добавляют по три капли концентрированной азотной кислоты. Все пробирки нагревают на водяной бане, появляется желтое окрашивание. После охлаждения в 1-ю, 2-ю и 4-ю пробирки приливают по каплям 10 % раствор едкого натра (10 капель) до появления оранжевого окрашивания.
4 Контрольные вопросы
При взаимодействии кислого раствора сульфаниловой кислоты с нитритом натрия осуществляется реакция диазотировапия и образуется диазобензолсульфоновая кислота:
сульфаниловая п-сульфобензол
кислота диазоний
Последний, взаимодействуя с гистидином, дает соединение вишнево-красного цвета:
гистидин
2,5-бис-п-сульфобензолазогистидин
1 Цель работы провести качественную реакцию на гистидин
2 Приборы и материалы
Сульфаниловая кислота 1 %
Соляная кислота 5 %
Нитрит натрия 0,5 %
Гистидин 0,01 %
Белок 1 %
Гидролизат белка
Карбонат натрия 10 %
3 Порядок проведения работы
В три пробирки наливают по 1 мл 1 % раствора сульфаниловой кислоты в 5 % растворе соляной кислоты. Затем приливают по 2 мл 0,5 % нитрита натрия, сильно встряхивают и немедленно приливают в 1-ю пробирку 2 мл 0,01 % раствора гистидина, во 2-ю 2 мл 1 % раствора белка, в 3-ю 2 мл гидролизата белка.
После перемешивания содержимого в пробирках сразу приливают по 6 мл 10 % раствора соды (карбонат натрия). Развивается интенсивная вишнево-красная окраска.
4 Контрольные вопросы
Сера в цистеине содержится в виде SН-групп, легко отщепляющихся при нагревании со щелочами в виде сероводорода. Сероводород со свинцом дает PbS осадок черного цвета. Серосодержащих аминокислот особенно много в керотинах (белки волос, ногтей и т. п.):
Цистеин Серин
Плюмбит Черный осадок
1 Цель работы провести качественную реакцию на серосодержащие аминокислоты
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Волос
Гидроксид натрия 10 %
Уксуснокислый свинец
3 Описание работы
В пробирку поместить свернутый волос (лучше светлый). Налить 10 капель 10% гидроксида натрия и 5 капель раствора уксуснокислого свинца. Пробирку нагреть на водяной бане в течение минуты. За это время волос утолщится и покроется черным налетом. По прошествии длительного времени волос растворяется, а на дне пробирки скапливается черный осадок.
4 Контрольные вопросы
Триптофан, реагируя в кислой среде с альдегидами, образует окрашенные продукты конденсаций. Например, с глиоксиловой кислотой, которая является примесью к концентрированной уксусной кислоте, реакция протекает по уравнению:
1 Цель работы провести качественную реакцию на триптофан
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Триптофан
Белок 1 %
Гидролизат белка
Уксусная кислота (конц.)
Серная кислота (конц.)
3 Описание работы
В три пробирки наливают: в 1-ю 2 мл раствора триптофана, во 2-ю 10 капель 1% раствора белка, в 3-ю 10 капель гидролизата белка. Во все пробирки приливают около 2 мл концентрированной уксусной кислоты. 2-ю и 3-ю пробирки нагревают. После охлаждения во все три пробирки наслаивают по 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе двух жидкостей наблюдается образование красно-фиолетового окрашивания. При встряхивании вся жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.
4 Контрольные вопросы
Белки в присутствии щелочи дают красное окрашивание с гипобромидом и α-нафтолом. Реакция обусловлена наличием в белке аминокислоты аргинина, имеющей в своем составе гуанидиновую группировку. Механизм реакции аргинина с α-нафтолом в присутствии окислителя еще полностью не выяснен. Вероятно, гуанидиновая группировка окисляется гипобромидом, и окисленный аргинин, соединяясь с α-нафтолом, образует продукт конденсации красного цвета:
1 Цель работы провести качественную реакцию на аргинин
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Гидролизат белка
Аргинин
Гидроксид натрия 10 %
α-нафтол спиртовой раствор 0,1 %
Гипобромид натрия 2 %
3 Описание работы
В три пробирки наливают по пять капель 1 % раствора белка, по пять капель гидролизата белка и по пять капель раствора аргинина. Затем в каждую пробирку добавляют но пять капель 10% раствора гидроксида натрия, три капли 0,1 % спиртового раствора α-нафтола и по каплям (всего 1 5 капель) 2 % раствор гипобромида натрия. Жидкость в пробирках становится красного цвета.
4 Контрольные вопросы
В чем состоит принцип метода?
5 Оформление результатов
Результаты девяти описанных лабораторных работ необходимо записать в виде таблицы (табл. 2), которая помогает систематизировать материал и делает его более наглядным.
Таблица 2 Цветные реакции на белки
Название реакции |
Материал исследова-ния |
Используемые реактивы |
Чем обусловлена реакция (принцип метода) |
Результат (наблюда-емая окраска) |
Что откры-вает данная реакция |
Существует несколько разновидностей хроматографического метода анализа. Для разделения аминокислот наиболее доступным и сравнительно точным является метод распределительной хроматографии на бумаге.
Метод основан на различной растворимости отдельных аминокислот в двух частично смешивающихся жидкостях, одной из которых является вода, другой водонасыщенный органический растворитель (фенол, смесь бутилового спирта с уксусной кислотой и др.).
Сущность метода заключается в том, что каплю смеси аминокислот или гидролизата белка наносят на полоску хроматографической бумаги, конец которой опускают в подходящий органический растворитель. Растворитель всасывается хроматографической бумагой и увлекает за собой нанесенные на бумагу аминокислоты. Скорость перемещения аминокислот на бумаге зависит от химического строения аминокислот и их способности растворяться в подвижном и неподвижном растворителе. В качестве подвижного растворителя употребляют, например, водонасыщенный раствор фенола, бутиловый спирт, амиловый спирт и др. Неподвижным растворителем является вода, пары которой насыщают хроматографическую бумагу (внешне бумага остается сухой). Чем меньше растворимость аминокислот в воде и чем больше их растворимость в органическом растворителе, тем быстрее они движутся вслед за его фронтом.
Положение аминокислот на бумаге можно обнаружить при помощи цветной реакции с нингидрином. Реакцию проводят путем опрыскивания из пульверизатора высушенной полоски бумаги 0,5 % спиртовым раствором нингидрина и последующим нагреванием в сушильном шкафу. Отдельные аминокислоты обнаруживаются в виде пятен, окрашенных в голубой, фиолетовый или оранжевый цвета (в зависимости от химической структуры аминокислоты). Основной физико-химической характеристикой хроматографического процесса является коэффициент распределения Kd.
Коэффициент распределения (Kd) характеризует распределение вещества между подвижной и неподвижной фазами при достижении равновесия в хроматографическом процессе. Определить Kd непосредственно из эксперимента (т.е. найти концентрацию соединения в подвижной и неподвижной фазе) довольно сложно. Поэтому в качестве основной характеристики удерживания вещества, определяющей положение его зоны на бумаге используется фактор Rf. Фактором Rf называют отношение расстояния (в мм) от места нанесения аминокислоты до середины ее пятна а к расстоянию (в мм) от места нанесения аминокислоты до фронта растворителя (в):
Rf=а/в
Фактор Rf является характерной величиной для каждой аминокислоты и постоянен при данных условиях опыта (растворитель, температура, сорт бумаги и т. д.). Идентификация аминокислот на хроматограммах проводится путем использования чистых аминокислот - «свидетелей», наносимых на ту же хроматограмму.
Исследуемые растворы аминокислот наносят вблизи центра бумажного диска, зажатого по краям. Смесь растворителей подводят к центру диска при помощи «ножек» из бумаги. Проводят разделение смеси, состоящей из трех аминокислот.
1 Цель работы провести разделение и идентификацию аминокислот методом бумажной хроматографии
2 Приборы и материалы
Хроматографическая камера
Хроматографическая бумага
Электроплитка
Система растворителя - бутанол:уксусная кислота (конц.):вода в соотношении 3:1:1,4
Задача (раствор, содержащий смесь аминокислот)
Растворы аминокислот «свидетелей» (глицин, лейцин, триптофан)
Раствор нингидрина в ацетоне 0,5 %.
3 Описание работы
Из хроматографической бумаги вырезают диск диаметром 14 см. Диск перегибают по диаметрам, перпендикулярным друг к другу, и от центра круга чертят квадрат со стороной 2 см, далее делают надрез по диагоналям квадрата; полученные в виде уголков «ножки» отгибают. На расстоянии 0,5 см от линий сгиба «ножек» простым карандашом чертят еще один квадрат, на середине каждой стороны отмечают точки. В одну точку при помощи капилляра наносят небольшую каплю исследуемого раствора смеси аминокислот. Диаметр полученного пятна не должен превышать 3 4 мм. В три другие точки наносят растворы аминокислот-«свидетелей», входящих в исследуемую смесь. Рядом с точкой нанесения необходимо обозначить объект нанесения (задача, название аминокислоты-«свидетеля») простым карандашом. На одну и ту же точку следует наносить по 2 3 капли раствора, при этом после нанесения каждой капли бумагу слегка просушивают на воздухе и лишь затем наносят следующую каплю.
Просушенную на воздухе хроматограмму помещают между двумя половинами чашек Петри с одинаковыми диаметрами, образующими хроматографическую камеру, так, чтобы «ножки» хроматограммы были погружены в органический растворитель бутанол вода уксусная кислота (3:1,4:1), который наливают в нижнюю чашку. Хроматографическое разделение проводят при комнатной температуре около 40 минут. Необходимо следить за линией фронта растворителя.
Насыщенный водой бутиловый спирт в уксусной кислоте впитывается бумажным диском и движется по нему, увлекая нанесенные вещества. Дальнейшее продвижение растворителя вызывает разделение исследуемой смеси на отдельные аминокислоты, движущиеся с разной скоростью соответственно коэффициентам их распределения между водой и органическим растворителем.
После того как фронт растворителя пройдет 4/5 длины хроматограммы, хроматограмму извлекают из камеры, отмечают карандашом фронт растворителя и сушат на воздухе под тягой до удаления растворителя. После этого хроматограмму проявляют, опуская в 0,5 % раствор нингидрина в ацетоне, и помещают в сушильный шкаф на 5 мин при температуре 80 100°С, также можно проявить хроматограмму, нагревая ее над электроплиткой. На хроматограмме появляются пятна сине-фиолетового цвета. С помощью линейки измеряют расстояния а от места нанесения капли до середины каждого пятна и в от места нанесения капли до фронта растворителя. Проявившиеся пятна обводят карандашом и вычисляют фактор Rf для каждой аминокислоты. Сопоставляя положения пятен исследуемого раствора с положением пятен «свидетелей», определяют наличие тех или иных аминокислот в исследуемой смеси.
4 Оформление результатов работы
Приводят значения R f для аминокислот свидетелей и аминокислот в задаче. Делают заключение о составе аминокислот в задаче.
5 Контрольные вопросы
Самым распространенным химическим методом количественного определения белка является колориметрический метод. Он основан на измерении интенсивности цветных реакций, развивающихся при взаимодействии белков со специфическим реагентом.
Биуретовая реакция белков (см. лабораторную работу 1) не отличается высокой чувствительностью. Поэтому она применяется в тех случаях, когда содержание белка в исследуемом образце достаточно велико (не ниже нескольких мг/мл). Чтобы рассчитать концентрацию белка строят калибровочный график.
1 Цель работы определить концентрацию белка колорометрическим методом с использованием биуретовой реакции
2 Приборы и материалы
Фотоэлектроколориметр КФК-2УХЛ 4.2
Стандартный раствор белка с концентрацией 10 мг/мл
Биуретовый реактив
Дистиллированная вода для приготовления разведений
Раствор белка с неизвестной концентрацией (задача)
3 Описание работы
3.1 Построение калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой в десять пронумерованных пробирок наливают стандартный раствор белка от 0,1 до 1 мл, в девяти пробирках доводят объем до 1 мл добавлением дистиллированной воды. Во все пробирки приливают по 8 мл биуретового реактива, перемешивают. Выдерживают 30 мин при комнатной температуре и фотометрируют при длине волны 540 нм против контроля (вместо раствора белка берут 1 мл дистиллированной воды).
Таблица 3 - Схема приготовления проб для построения калибровочной кривой
Номер пробы |
Дист. вода, мл |
Стандартный раствор белка, мл |
Биуретовый реактив, мл |
Концентрация белка, мг/мл |
D540 |
1 |
0,9 |
0,1 |
8 |
1 |
|
2 |
0,8 |
0,2 |
8 |
2 |
|
3 |
0,7 |
0,3 |
8 |
3 |
|
4 |
0,6 |
0,4 |
8 |
4 |
|
5 |
0,5 |
0,5 |
8 |
5 |
|
6 |
0,4 |
0,6 |
8 |
6 |
|
7 |
0,3 |
0,7 |
8 |
7 |
|
8 |
0,2 |
0,8 |
8 |
8 |
|
9 |
0,1 |
0,9 |
8 |
9 |
|
10 |
- |
1,0 |
8 |
10 |
Схема приготовления проб для построения калибровочной кривой представлена в табл. 3. По полученным значениям оптических плотностей строят калибровочную кривую (рисунок 1).
3.2 Определение количества белка
Для определения количества белка в исследуемом образце к 1 мл исследуемого раствора приливают 8 мл биуретового реактива. Оставляют на 30 мин при комнатной температуре и фотометрируют в кюветах при 540 им против контроля.
4 Оформление результатов работы
По калибровочному графику (график зависимости оптической плотности раствора от концентрации белка в нем), представленному на рисунке 1, определяют содержание белка в пробе.
Рисунок 1 Калибровочная кривая по белку
Белки высокомолекулярные соединения (их молекулярный вес колеблется от нескольких тысяч до десятков миллионов). Большинство белков обладает гидрофильными свойствами. Коллоидные растворы белка достаточно устойчивы. Такая стабильность белковых растворов обусловлена двумя основными факторами: во-первых, белковая частица несет электрический заряд, и, во-вторых, вокруг белковой молекулы образуется плотная водная оболочка, состоящая из нескольких слоев, что препятствует объединению белковых молекул и выпадению их в осадок.
Для осаждения белка нужно лишить его факторов, удерживающих его в растворе, используя различные агенты, снижающие заряд или разрушающие гидратную оболочку белковой молекулы.
Реакции осаждения белков весьма разнообразны, однако их можно разделить на две группы:
Добавление нейтральных солей аммония, солей щелочных в щелочноземельных металлов Na2SO4, (NH4)2SO4, MgSO4, NaCl и др. к растворам белков вызывает разрушение гидратной оболочки белковых молекул и снятие заряда, что приводит к выпадению белка в осадок. Такой способ осаждения белков называют высаливанием. Высаливание - обратимый процесс. Осажденный белок можно вновь растворить в воде, при этом наблюдается восстановление нативных свойств белка (например, ферментативной активности, антигенных свойств и др.). Метод высаливания используют для разделения белковых фракций, очистки белков я получения их в кристаллическом состоянии.
1 Цель работы провести высаливание белка солями щелочных и щелочноземельных металлов
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Сернокислый аммоний (измельченный порошок)
3 Описание работы
В пробирку наливают 20 капель раствора белка и прибавляют тонко измельченный порошок сернокислого аммония до полного насыщения раствора, т.е. до тех пор, пока новая порция порошка останется нерастворенной. Через несколько минут появляется осадок.
4 Оформление результатов работы
Используя ответы на контрольные вопросы, сформулируйте выводы по данной работе.
5 Контрольные вопросы
Белки нерастворимы во многих органических растворителях (спирт, ацетон, эфир). При добавлении к раствору белка больших количеств спирта или ацетона выпадает осадок белка.
Реакция обусловлена обезвоживанием (дегидратацией) коллоидных частиц белка. Осаждение происходит только из нейтральных или слабокислых растворов и лучше в присутствии электролитов, например, хлористого натрия, кратковременное воздействие органических растворителей при низкой температуре от 0 до -15 °С сохраняет белок в нативном состоянии, длительное воздействие приводит к денатурации белка.
1 Цель работы провести осаждение белка органическими растворителями
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Этиловый спирт или ацетон
Сульфат аммония (насыщенный раствор)
3 Описание работы
К пяти каплям 1% раствора белка приливают 15 20 капель этилового спирта (или ацетона) - раствор мутнеет. Добавляют одну каплю насыщенного раствора сульфата аммония. Через некоторое время выпадает осадок белка.
4 Контрольные вопросы
За счет чего происходит осаждение белков органическими растворителями?
Белки осаждаются солями меди, цинка, свинца, ртути, серебра и др., при этом происходит денатурация белковой молекулы.
Ионы тяжелых металлов образуют довольно прочные соединения с полярными группами белков, искажая систему ионных и водородных связей нативной белковой молекулы и образуя нерастворимые комплексы.
При осаждении белков некоторыми солями тяжелых металлов, например, уксуснокислым свинцом и сульфатом меди, избыток этих солей ведет к растворению (пептизации) осадка. Ионы металла, адсорбируясь на поверхности белковых мицелл, придают им положительные заряды. Одноименно заряженные мицеллы отталкиваются, что способствует их переходу из осадка в раствор. При избытке солей серебра и ртути пептизации не наблюдается.
1 Цель работы провести осаждение белков солями тяжелых металлов
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Сульфат меди 7 %
Уксуснокислый свинец 5 %
3 Описание работы
В две пробирки вносят по пять капель 1 % раствора белка и по две капли: в 1-ю пробирку 7 % раствора сульфата меди, во 2-ю пробирку 5 % раствора уксусного свинца. Наблюдают образование осадка. Затем в обе пробирки добавляют еще 5 10 капель осадителя и наблюдают растворение осадка.
4 Контрольные вопросы
За счет чего происходит осаждение белков тяжелыми металлами?
Концентрированные минеральные кислоты (азотная, серная, соляная) вызывают дегидратацию белковых частиц и нейтрализацию их заряда, при этом происходит образование комплексных соединений. Все это приводит к необратимой денатурации белка. В избытке серной или соляной кислот, а также при их длительном воздействии, выпавший осадок денатурированного белка растворяется, по-видимому, за счет перезарядки белка и частичного гидролиза. В избытке азотной кислоты этого растворения не происходит.
1 Цель работы провести осаждение белка минеральными кислотами
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Азотная кислота (конц.)
Серная кислота (конц.)
3 Описание работы
В две пробирки наливают по пять капель концентрированной азотной и серной кислот. Затем, наклонив пробирки под углом 45°, осторожно по стенке пробирки (чтобы жидкости не смешивались) наливают такой же объем раствора белка. На границе двух слоев жидкости появляется осадок белка в виде тонкого белого кольца. Осторожно встряхивают пробирки, обнаруживают растворение осадка белка при осаждении серной кислотой, в пробирке с азотной кислотой белок не растворяется.
4 Контрольные вопросы
За счет чего происходит осаждение белков неорганическими кислотами?
Белки из растворов могут осаждаться органическими кислотами. Трихлоруксусная и сульфосалициловая кислоты являются очень чувствительными и специфическими реактивами на белок.
Под действием органических кислот происходит дегидратация белковой молекулы и снятие заряда.
Трихлоруксусная кислота осаждает только белки и не осаждает продукты распада белка и аминокислоты, поэтому ею пользуются часто для полного удаления белков из биологических жидкостей. В этих условиях продукты распада белков остаются в растворе.
1 Цель работы провести осаждение белков органическими кислотами
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Сульфосалициловая кислота 10 %
Трихлоруксусная кислота 10 % (ТХУ)
3 Описание работы
В две пробирки наливают по 5 капель 1 % раствора белка, в одну пробирку добавляют 1 2 капли 10 % раствора сульфосалициловой кислоты, в другую 1 2 капли 10 % раствора трихлоруксусной кислоты. В пробирках образуется осадок белка.
4 Контрольные вопросы
За счет чего происходит осаждение белков органическими растворителями?
5 Оформление результатов работы
Результаты лабораторных работ 11-16 заносят в таблицу 4.
.
Таблица 4 Реакции осаждения белков
Название групп осадителей |
Употребляемые реактивы |
Результат реакции |
Чем обусловлена реакция |
Соли щелочных и щелочноземельных металлов |
|||
Органические растворители |
|||
Соли тяжелых металлов |
|||
Концентрированные минеральные кислоты |
|||
Органические кислоты |
Почти все белки денатурируют при нагревании (50 - 55 °С и выше), при этом белок теряет свои нативные свойства, уменьшается его растворимость (уменьшение гидрофильных свойств ведет к нарушению гидратной оболочки). Важную роль в выпадении в осадок денатурированного при нагревании белка играет концентрация водородных ионов и присутствие солей. Наиболее полное и быстрое осаждение происходит в изоэлектрической точке белка. В сильнокислых и щелочных растворах белок не выпадает в осадок при кипячении; так как он приобретает соответственно сильно положительный или отрицательный заряд:
NH3+ NH3+
R + H+Cl- R Cl-
COO- COOH
амфион катион
NH3+ NH2
R + Na+OH- R Na+
COO- COO-
амфион анион
1 Цель работы провести тепловое осаждение белка
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Белок 1 %
3 Описание работы
В пробирку наливают пять капель 1 % раствора белка. Пробирку с раствором белка нагревают до кипения. Жидкость мутнеет (наблюдается опалесценция).
4 Оформление результатов работы
Используя ответы на контрольные вопросы, сформулируйте выводы по проделанной работе.
5 Контрольные вопросы
Метод относится к числу пороговых и основан на том экспериментально установленном факте, что растворы, содержащие 0,0033 % белка, при наслаивании на концентрированную азотную кислоту в конце второй минуты образуют на поверхности раздела жидкостей едва заметную белковую пленочку. При меньших концентрациях белка в растворе осаждения белка не происходит.
Пользуясь различными разведениями исследуемой культуральной жидкости, устанавливают максимальное разведение, при котором белок может быть обнаружен при наслаивании на концентрированную азотную кислоту. Зная степень разведения, при которой концентрация белка равна 0,0033 %, вычисляют концентрацию белка в неразведенной культуральной жидкости.
1 Цель работы определить количество белка в исследуемой жидкости, используя метод осаждения белка азотной кислотой
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Азотная кислота (конц.)
Дистиллированная вода
Исследуемая культуральная жидкость (задача)
3 Описание работы
Готовят ряд последовательных разведений. В семь пробирок наливают по 2 мл дистиллированной воды. В 1-ю пробирку наливают 2 мл исследуемого раствора культуральной жидкости и перемешивают. 2 мл смеси переносят во 2-ю пробирку и т. д. Из 7-й пробирки 2 мл смеси выливают. С содержимым каждой пробирки проделывают реакцию наслаивания на азотную кислоту (см. лабораторную работу 15). Для этого в семь других пробирок наливают по 2 мл концентрированной азотной кислоты. В 1-ю пробирку осторожно из пипетки наслаивают раствор белка из 1-й пробирки с белком и т.д. Пробирки не встряхивать.
Отмечают, при каком разведении появляется едва заметное кольцо между 2-й и 3-й минутами.
4 Оформление результатов работы
Производят расчет содержания белка в 1 мл неразведенной культуральной жидкости (задачи).
5 Контрольные вопросы
На чем основан данный метод определения белка в культуральной жидкости?
Высаливанием называется процесс выделения белков из водных растворов нейтральными растворами концентрированных солей щелочных и щелочноземельных металлов: Na2S04, (NH4)2S04, MgS04, NaCl и др.
При добавлении достаточно больших концентрации этих солей к раствору белка происходит дегидратация белковых частиц и снятие заряда; при этом белки выпадают в осадок. Степень выпадания белков в осадок зависит от ионной силы раствора осадителя, размера частиц белковой молекулы, величины ее заряда, гидрофильности. Разные белки осаждаются при различных концентрациях солей. Так, например, глобулины легче выпадают в осадок, чем альбумины. Поэтому в осадках, полученных путем постепенного повышения концентрации солей, отдельные белки находятся в различных фракциях. Для разделения белков этим методом широко используют сульфат аммония. Некоторые белки выпадают в осадок уже при концентрации соли, близкой к 1/10 от насыщения, глобулины при полунасыщении, альбумины при полном насыщении. В насыщенном растворе сульфата аммония все белки выпадают в осадок.
Высаливание белков является обратимым процессом, и после удаления соли белок вновь приобретает природные свойства. Поэтому в научно-исследовательской работе высаливанием пользуются при изолировании, очистке различных белков (ферменты, гормоны, и т. д.) из биологического материала (клетки, растения, ткани), для получения некоторых белковых препаратов.
1 Цель работы с помощью метода высаливания выделить яичный глобулин и альбумин
2 Приборы и материалы
Яичный белок
Сульфат аммония (насыщенный раствор, порошок)
Едкий натр 10 %
Сернокислая медь 1 %
3 Описание работы
В пробирку наливают 20 капель яичного белка, добавляют равный объем насыщенного раствора сульфата аммония, содержимое перемешивают. Получается полунасыщенный раствор сульфата аммония, выпадает осадок яичного глобулина. Через пять минут осадок отфильтровывают, В фильтрате остается другой белок яичный альбумин.
Для высаливания альбумина к фильтрату добавляют измельченный порошок сульфата аммония до полного насыщения, т. е. до тех пор, пока не прекратится растворение соли.
Выпавший осадок альбумина отфильтровывают и с фильтратом проделывают биуретовую реакцию. Отрицательная реакция указывает на отсутствие белка.
4 Оформление результатов работы
Результаты работы заносят в табл. 6.
Таблица 6 Высаливание белков
Название белка |
Используемая соль |
Степень Насыщения |
Образование осадка |
Глобулин |
|||
Альбумин |
5 Контрольные вопросы
Каким образом можно разделить яичный альбумин и глобулин?
Сложными белками называются белки, которые кроме белковой части содержат небелковый компонент, называемый простетической группой. В зависимости от химической природы простетической группы сложные белки делятся на нуклеопротеиды, хромопротеиды, фосфопротеиды, глюкопротеиды, липопротеиды и металлопротеиды.
Нуклеопротеиды представляют собой сложные белки, состоящие из простого белка и небелковой части нуклеиновых кислот. Нуклеопротеиды являются необходимой составной частью клеток тканей, растений, микробов. Они обнаруживаются как в ядре, так и в цитоплазме.
1 Цель работы изучить химический состав сложных белков нуклеопротеидов
Для изучения химического состава нуклеопротеидов проводят гидролиз дрожжей, которые берут в качестве источника богатого нуклеопротеидами. При проведении частичного гидролиза нуклеопротеиды распадаются на белки, преимущественно основного характера (протамины и гистоны), и нуклеиновые кислоты. При более полном гидролизе белки и нуклеиновые кислоты распадаются на свои основные компоненты. Это можно представить в виде следующей схемы:
Нуклеопротеиды
Белок Нуклеиновые кислоты
(протамин или гистон) (полинуклеотиды)
Полипетиды Мононуклеотиды
Пуриновые или Фосфорная
пиримидиновые основания кислота
Рибоза или дезоксирибоза
2 Приборы и материалы
Песчаная баня
Электроплитка
Фильтр
Дрожжи
Серная кислота 10 %
Гидроксид натрия 10 %
Гидроксид натрия 30 %
Сульфат меди 1%
Сульфат меди 7 %
Молибденовый реактив
3 Описание работы
В колбу помещают 1 г дрожжей, приливают 8 мл 10 % серной кислоты, закрывают пробкой, в которую вставлена в качестве холодильника трубка длиной 25 30 см, взбалтывают и закрепляют в штативе под углом 45°.
Гидролиз проводят при нагревании около часа, считая от момента закипания. После окончания гидролиза жидкость охлаждают и фильтруют через складчатый фильтр. С фильтратом проводят следующие реакции.
1. Биуретовая реакция на полипептиды.
К пяти каплям гидролизата добавляют 10 капель 10 % раствора NaOH и 1 2 капли 1 % раствора сернокислой меди до появления сине-фиолетового окрашивания, что свидетельствует о присутствии в пробе полипептидов.
2. Проба на пуриновые основания.
К десяти каплям гидролизата прибавляют одну каплю концентрированного раствора аммиака для нейтрализации и пять капель 1 % раствора азотнокислого серебра. Постепенно образуется осадок серебряных соединений пуриновых оснований.
3. Качественная реакция на углевод (рибозу и дезоксирибозу).
Качественные реакции основаны на способности моносахаридов, имеющих свободный гликозидный гидроксил, восстанавливать металлы (медь, висмут, железо) в щелочной среде. При этом металлы восстанавливаются из окисной формы в закисную или (в случае закиси) до свободного состояния; сахара же дают различные продукты окисления.
Проба Троммера заключается в восстановлении гидроксида меди (II) в гидрооксид меди (I) в щелочной среде под влиянием рибозы и дезоксирибозы, присутствующих в гидролизате дрожжей:
CuSO4 + 2NaOH Cu(OH)2 + Na2SO4;
Рибоза рибоновая кислота + 2CuOH
Cu2O + H2O
К пяти каплям гидролизата добавляют пять капель 30 % гидроксида натрия и несколько капель 7 % раствора сульфата меди до появления неисчезающей мути гидроксида меди. При нагревании до кипения выпадает желтый осадок гидрата оксида меди (II) и красный осадок оксида меди (I).
4. Молибденовая проба на фосфорную кислоту. К пяти каплям гидролизата добавляют десять капель молибденового реактива, представляющего собой раствор молибденовокнелого аммония в азотной кислоте, и кипятят. При охлаждении пробирки под струей холодной водопроводной воды выпадает кристаллический осадок лимонно-желтого цвета, обусловленный образованием фосфорно-молибденово-кислого аммония.
4 Оформление результатов работы
Сформулируйте выводы по данной работе.
5 Контрольные вопросы
Хромопротеидами называются сложные белки, у которых простетической группой является окрашенное соединение небелкового характера, например, гем, каротиноиды, флавины. Хромопротеиды широко распространены в природе и играют важную роль в окислительно-восстановительных процессах в клетке. Особенно распространенными являются хромопротеиды геминовой природы. К ним относятся гемоглобин крови, гемоглобин мышц, ферменты каталаза, пероксидаза, цитохромы и др.
При добавлении к разбавленному раствору крови раствора бензидина и перекиси водорода жидкость окрашивается в синий или зеленый цвет. Реакция обусловлена способность гемоглобина катализировать реакцию окисления бензидина перекисью водорода в парахинондиимид, при этом жидкость приобретает синюю окраску. При стоянии окраска жидкости переходит в красную.
Реакция очень чувствительна и служит для обнаружения минимальных количеств крови в биологических объектах.
1 Цель работы провести качественную реакцию на гемопротеид гемоглобин
2 Приборы и материалы
Раствор гемоглобина
Спиртовой раствор бензидина 0,2 %
Перекись водорода 3 %
3 Описание работы
К пяти каплям раствора гемоглобина добавляют 1 2 капли 0,2 % спиртового раствора бензидина и 1 2 капли 3 % раствора перекиси водорода. Жидкость окрашивается в синий цвет.
4 Оформление результатов работы
Сформулируйте выводы по данной работе.
5 Контрольные вопросы
Строение и биологическая роль гемоглобина.
По химической природе гликопротеиды представляют собой сложные белки, состоящие из белкового компонента и полисахарида. При гидролизе белковый компонент распадается на аминокислоты, а полисахарид на гексозы, гексозамины и уроновые кислоты.
Простетическне группы некоторых гликопротеидов известны под названием мукополисахаридов. К мукополисахаридам относятся гиалуроновая кислота, хондроитинсерная кислота и гепарин. При гидролизе мукополисахариды распадаются на глюкозамин или галактозамин, ацетилглюкозамин или ацетилгалактозамин, глюкуроновую и серную кислоты. Гликопротеиды (муцины) встречается в секретах слизистых желез. Гликопротеиды нерастворимы в воде, хорошо растворяются в щелочах и осаждаются при подкислении.
1 Цель работы выделить гликопротеид из слюны
2 Приборы и материалы
Уксусная кислота (конц.)
Слюна
3 Описание метода
В пробирку собирают 2 мл слюны и по каплям (4-5 капель) прибавляют концентрированную уксусную кислоту. Образуется осадок муцина, трудно растворимый в избытке уксусной кислоты. Сгусток выделяют стеклянной палочкой, помещают в чистую пробирку и проводят реакцию Подобедова-Молиша.
Если к сгустку муцина добавить спиртовой раствор α-нафтола и смесь подслоить концентрированной серной кислотой, то на границе двух слоев жидкости появляется фиолетовое кольцо.
Реакция обусловлена присутствием в муцине углеводной простетической группы. При действии концентрированной серной кислоты из глюкозы образуется оксиметилфурфурол. Последний, конденсируясь с α-нафтолом, превращается в окрашенное соединение.
1 Цель работы подтвердить химический состав сложного белка муцина
2 Приборы и материалы
Спиртовой раствор α-нафтола 1 %
Серная кислота (конц.)
Муцин
3 Описание работы
К сгустку муцина (см. лабораторную работу 23) добавляют 1 2 капли 1 % раствора (спиртового) α-нафтола, перемешивают и по стенке осторожно спускают 1020 капель концентрированной серной кислоты. На границе двух слоев жидкости постепенно появляется фиолетово-красное кольцо, хорошо заметное на белом фоне.
4 Оформление результатов работы
Сформулируйте выводы по данной работе.
5 Контрольные вопросы
1. Филлипович Ю.В., Егорова Т.А., Севастьянова Г.А. Практикум по обшей биохимии. М.: Просвещение, 1982. 311 с.
2. Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. М.: Медицина, 1974. 424 с.
3. Добрынина Б.И., Свешникова Е.Я. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. М.: Медицина, 1967. 343 с.
4. Аналитическая химия. Физические и физико-химические методы анализа: Учебник для вузов / А.Ф. Жуков, И.Ф. Колосова, В.В. Кузнецов и др.; под ред. О.М. Петрухина. М.: Химия, 2001. 496 с.
СОДЕРЖАНИЕ
[1] ВВЕДЕНИЕ [2] ХИМИЧЕСКАЯ ПРИРОДА БЕЛКА [3] 1.1 Лабораторная работа 1. Биуретовая реакция [4] 1.2 Лабораторная работа 2. Нингидриновая реакция на α-аминокислоты [5] 1.3 Лабораторная работа 3. Реакция на первичную аминогруппу [6] 1.4 Лабораторная работа 4. Реакция на тирозин (Миллона) [7] 1.5 Лабораторная работа 5. Ксантопротеиновая реакция [8] 1.6 Лабораторная работа 6. Реакция на гистидин (Паули) [9] 1.7 Лабораторная работа 7. Реакция Фоля на серосодержащие аминокислоты [10] 1.8 Лабораторная работа 8. Реакция на триптофан [11] 1.9 Лабораторная работа 9. Реакция на аргинин (Сакагучи) [12] 1.10 Лабораторная работа 10. Хроматографический метод определения аминокислот [13] 1.11 Лабораторная работа 11. Количественное определение белка по биуретовой реакции [14] ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БЕЛКОВ [15] 2.1 Лабораторная работа 12. Осаждение белков солями щелочных и щелочноземельных металлов [16] 2.2 Лабораторная работа 13. Осаждение белков органическими растворителями [17] 2.3 Лабораторная работа 14. Осаждение белков солями тяжелых металлов [18] 2.4 Лабораторная работа 15. Осаждение белков минеральными кислотами [19] 2.5 Лабораторная работа 16. Осаждение белков органическими кислотами [20] 2.6 Лабораторная работа 17. Осаждение белков при нагревании [21] 2.7 Лабораторная работа 18. Количественное определение белка в культуральной жидкости [22] 2.8 Лабораторная работа 19. Высаливание белков [23] 3 СЛОЖНЫЕ БЕЛКИ [24] 3.1 Лабораторная работа 20. Гидролиз нуклеопротеидов дрожжей [25] 3.2 Лабораторная работа 21. Бензидиновая проба на геминовую группировку гемоглобина [26] 3.3 Лабораторная работа 22. Выделение гликопротеида из слюны [27] 3.4 Лабораторная работа 23. Нафтоловая проба на углеводную группировку гликопротеида (реакция ПодобедоваМолиша) [28] ЛИТЕРАТУРА |
Кафедра технологии микробиологического синтеза
Методические указания
Лабораторный практикум по химии белка
Анастасия Владимировна Анкудинова
Валентина Георгиевна Шмелева
Егор Игоревич Помешалкин
Отпечатано с оригинал-макета. Формат 60×90 1/16
Печ.л. 2,6. Тираж 50 экз.
Санкт-Петербургский государственный технологический институт
(Технический университет)
_____________________________________________________________________________190013, Санкт-Петербург, Московский пр., 26