Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Министерство образования и науки Российской Федерации
_____________________________________
Государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
Санкт-Петербургский государственный технологический институт
(Технический университет)
__________________________________________________________
Кафедра технологии микробиологического синтеза
А.В. Анкудинова, В.Г. Шмелева,
Е.И. Помешалкин
Лабораторный практикум
по химии белка
Методические указания
Санкт-Петербург
2010
УДК 577.112
Анкудинова А.В. Лабораторный практикум по химии белка [текст]: методические указания / А.В. Анкудинова, В.Г. Шмелева, Е.И. Помешалкин. – СПб.: СПбГТИ(ТУ), 2010. – 42 с.
В методических указаниях представлены основные лабораторные работы необходимые для практического изучения биохимических процессов в клетке.
Методические указания предназначены для студентов 3 курса факультета тонкого органического и микробиологического синтеза и соответствуют рабочей программе по дисциплине «Биологическая химия».
Табл. 6. Ил. 1. Библиогр. 4 назв.
Рецензент:
Д.О. Виноходов, д-р биол. наук, профессор кафедры молекулярной биотехнологии СПбГТИ(ТУ)
Утверждены на заседании учебно-методической комиссии факультета тонкого органического и микробиологического синтеза 21.09 .2010
Рекомендованы к изданию РИСо СПбГТИ (ТУ)
Биологическая химия является одной из наиболее важ ных теоретических дисциплин в системе биологического об разования инженеров-технологов микробиологических про изводств.
Настоящие методические указания включают цикл лабо раторных работ по разделу «Химия белка». Описанию каж дой работы предшествует краткий теоретический материал с описанием механизмов протекания реакций. В конце даны контрольные вопросы, которые могут использоваться сту дентами для подготовки к контрольным работам, а также для самостоятельной работы.
Среди органических соединений, встречающихся в клет ке, первое место занимают белки – на их долю приходится не менее 50% сухого веса клетки. По химической природе белки представляют собой высокомолекулярные соединения, построенные из сотен или тысяч аминокислотных остатков. В белковых молекулах аминокислоты располагаются таким образом, что карбоксильная группа одной аминокислоты свя зана с α-аминогруппой другой пептидной связью.
У аминокислот, имеющих две аминогруппы (лизин, арги нин) или две карбоксильные группы (аспарагиновая, глютаминовая), в реакцию образования пептидов вступают толь ко те карбоксильные и аминогруппы, которые стоят у α-углеродного атома.
Молекула белка состоит из одной или нескольких поли пептидных цепей, соединенных между собой главным обра зом водородными связями. Кроме водородных связей в моле куле белка между полипептидными цепочками возникают и другие связи (например, эфирные, дисульфидные и др.), об разованные за счет фенольных (тирозин), спиртовых (серин), сульфгидрильных (цистеин) и других групп, имеющихся в полипептидных цепочках.
Каждый тип белка обладает особым, свойственным только ему химическим составом, определенным молекулярным весом и специфической последовательностью аминокислотных остатков. Это и определяет разнообразие существующих в природе белков (табл. 1).
Присутствие белка в биологических объектах или рас творах можно обнаружить с помощью цветных реакций, ко торые обусловлены наличием аминокислот в белке, их спе цифическими группами или пептидными связями.
Ряд химических веществ дает окраску продуктов реакции при взаимодействии с белками. Эти реакции применяются для качественного и количественного определения белка и присутствующих в нем аминокислот.
Таблица 1 – Аминокислоты, встречающиеся в белках
|
Аминокислота |
Формула |
Сокра- щенное обозначение |
|
I Алифатические аминокислоты 1 Моноаминомонокарбоновые кислоты |
||
|
1 |
2 |
3 |
|
Глицин (α-аминоуксусная кислота) |
гли |
|
|
Аланин (α-аминопропионовая кислота) |
ала |
|
|
Валин (α-аминоизовалериановая кислота) |
вал |
|
|
Лейцин (α-аминоизокапроновая кислота) |
лей |
|
|
Изолейцин (α-амино-β-метил-валериановая кислота) |
илей |
|
|
Серин (α-амино-β-окси-пропионовая кислота) |
сер |
|
|
Треонин (α-амино-β-оксимасляная кислота) |
тре |
|
|
2 Диаминомонокарбоновые кислоты |
||
|
Лизин (α,ε-диаминокапрновая кислота) |
лиз |
|
|
Аргинин (α-амино-β-гуанидин-валериановая кислота) |
арг |
|
|
|
||
|
1 |
2 |
3 |
|
3 Моноаминодикарбоновые кислоты |
||
|
Аспарагиновая (аминоянтарная кислота) |
асп |
|
|
Аспарагин (амид аспарагиновой кислоты) |
асн |
|
|
Глутаминовая (α-аминоглутаровая кислота) |
глу |
|
|
Глутамин (амид глутаминовой кислоты) |
глн |
|
|
4 Серосодержащие аминокислоты |
||
|
Цистеин (α-амино-β-тио-пропионовая кислота) |
цис |
|
|
Метионин (α-амино-γ-метил-тиомасляная кислота) |
мет |
|
|
II Ароматические аминокислоты |
||
|
Фенилаланин (α-амино-β-фенил-пропионовая кислота) |
фен |
|
|
Тирозин (α-амино-β-гидрокси-фенилпропионовая кислота) |
тир |
|
|
Продолжение табл.1 |
||
|
III Гетероциклические аминокислоты |
||
|
Пролин (пирролидин-α-карбоновая кислота) |
про |
|
|
Триптофан (α-амино-β-индолил-пропионовая кислота) |
три |
|
|
Гистидин (α-амино-β-имидазолил-пропионовая кислота) |
гис |
Существуют универсальные цветные реакции, которые дают все белки (биуретовая и нингидриновая). Кроме того, имеются специфические реакции, которые обусловлены на личием только определенных аминокислот в молекуле белка (ксантопротеиновая, Миллона, Фоля и др.); многие из них весьма чувствительны и высокоспецифичны, что позволяет открывать ничтожные количества той или иной индивидуаль ной аминокислоты в составе сложных смесей, биологических жидкостях, гидролизатах белков и т.п. На основании неко торых цветных реакций разработаны методы количествен ного определения белков и аминокислот.
Биуретовая реакция получила свое название от произ водного мочевины – биурета, образующегося при нагревании мочевины с отщеплением от нее аммиака:
Биуретовая реакция открывает в белке пептидную связь
(она имеется и в биурете). Однако эту реакцию способны давать вещества, содержащие не менее двух пептидных свя зей.
При добавлении к сильно щелочному раствору белка или продукту его неполного гидролиза сульфата меди, образуются комплексные соединения меди, окрашенные в красно-фиолетовый или си не-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски зависит от дли ны пептида.
Биуретовую реакцию дают аспарагин (амид аспарагиновой кислоты) и аминокислоты гистидин, треонин и серии.
Группа, образующая пептидную связь в щелочной среде, присутствует в своей таутомерной енольной форме:
При избытке щелочи происходит диссоциация ОН-группы, появляется отрицательный заряд, с помощью которого кислород взаимодействует с медью; кроме того, медь обра зует дополнительные координационные связи с атомами азота, участвующими в пептидной связи, путем использования их неподеленных электронных пар. Возникающий таким об разом комплекс очень стабилен.
1 Цель работы - провести биуретовую реакцию, которая обнаруживает пептидные связи в белке
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Едкий натр 10 %
Сернокислая медь 1 %
3 Описание работы
К пяти каплям 1 % раствора белка прибавляют три капли 10 % раствора едкого натра, одну каплю 1 % рас твора сернокислой меди и перемешивают. Содержимое про бирки приобретает сине-фиолетовый цвет.
Нельзя добавлять избыток сернокислой меди, поскольку синий осадок меди маскирует характерное фиолетовое окра шивание биуретового комплекса белка.
4 Контрольные вопросы
Растворы белка, пептидов и аминокислот дают синее или фиолетовое окрашивание с нингидрином при нагревании. Все аминокислоты можно рассматривать как С-замещенные про изводные аминоуксусной кислоты. При окислении они рас щепляются:
В качестве окислителей можно применить органическое соединение - нингидрин (трикетогидринденгидрат):
Трикетогидринден Нингидрин
Сначала нингидрин восстанавливается аминокислотой до ендиола:
1. Декарбоксилирование
2. Дезаминирование
3. Окисление
Ендиол
Затем конденсируется с аммиаком и второй молекулой нингидрина, образуя краситель типа мурексида (пурпурный Руэмана), который в нейтральных и слабощелочных растворах существует в виде окрашенного иона (аниона). Окраска обусловлена наличием в сине-фиолетовом Руэмана цепи конъюгации с ионными зарядами по концам цепи:
В настоящее время нингидриновая реакция исключитель но широко используется как для открытия отдельных амино кислот, так и для их количественного определения.
Сине-фиолетовый Руэмана на хроматограмме довольно быстро (в течение нескольких дней) разрушается. Чтобы из бежать обесцвечивания пятен на хроматограмме, ее протас кивают через насыщенный раствор азотнокислой меди в 90 % ацетоне. При этом сине-фиолетовый Руэмана превра щается в комплексную медную соль красного цвета. В таком виде, хроматограмма может храниться несколько месяцев.
1 Цель работы - провести качественную реакцию с нингидриновым реактивом на α-аминокислоты
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Белок 1 %
Гидролизат белка
Аминокислота 2 %
Нингидрин 0,1 %
3 Описание работы
В 1-ю пробирку наливают пять капель 1 % раствора белка, во 2-ю – пять капель гидролизата белка, в 3-ю – 2 мл 2 % раствора аминокислоты. Во все три пробирки наливают пять капель 0,1 % водного раствора нингидрина и кипятят 1 – 2 мин. Наблюдают появление розово-фиолето вого или сине-фиолетового окрашивания. Затем раствор си неет.
4 Контрольные вопросы
Эта реакция основана на способности аминокислот образовывать с азотистой кислотой неустойчивое диазосоединение, разлагающееся с образованием свободного азота:
1 Цель работы – провести реакцию на первичную аминогруппу аминокислот
2 Приборы и материалы
Аминокислота 1 %
Нитрит натрия 3 %
Уксусная кислота 10 %
3 Описание работы
В пробирку наливают 2 мл 1 % раствора аминокисло ты, прибавляют 2 мл 3 % раствора нитрита натрия, 0,5 мл 10 % раствора уксусной кислоты и перемешивают. Выделяются пузырьки газообразного азота.
4 Контрольные вопросы
На чем основана реакция на первичную аминогруппу?
Реактив Миллона (смесь азотнокислых и азотистокислых солей оксида ргути (I) в концентрированной азотной кисло те) открывает в белке циклическую аминокислоту тирозин, имеющую фенольную группу, которая при взаимодействии с реактивом Миллона дает ртутную соль, окрашенную в розо во-красный цвет.
Реакцию Миллона дают все белки, за исключением тех, молекулы которых не содержат тирозина (желатина, клупеин и др.):
Свободный тирозин реагирует с реактивом Миллона ана логично, но при этом не образуется осадка, а раствор при обретает красный цвет.
1 Цель работы – провести качественную реакцию на тирозин
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Тирозин 1 %
Белок 1 %
Гидролизат белка
Реактив Миллона
3 Описание работы
Берут три пробирки. В 1-ю отмеряют 2 мл 1 % раство ра тирозина, во 2-ю пять капель 1 % раствора белка, в 3-ю – пять капель гидролизата белка. Во все пробирки до бавляют по три капли реактива Миллона. Пробирки осто рожно нагревают. Происходит красное окрашивание.
4 Контрольные вопросы
Ксантопротеиновая реакция открывает наличие в белках циклических аминокислот — фенилаланина, тирозина, трипто фана, содержащих в своем составе бензольное кольцо.
Большинство белков при нагревании с концентрирован ной азотной кислотой дает желтое окрашивание, переходя щее в оранжевое при подщелачивании. Например:
Примечание. В зависимости от количества прибавленной азотной кислоты может образовываться и смесь динитро- и нитротирозина.
Реакция обусловле на нитрованием бензольного кольца этих аминокислот с об разованием нитросоединений желтого цвета.
Далее продукты нитрования реагируют с едким натром или гидроксидом аммония с образованием натриевой со ли или аммонийной соли, имеющей желто-оранжевую окраску.
Ксантопротеиновую реакцию, кроме белков, пептидов и циклических аминокислот, дают также многие простые аро матические соединения (бензол).
1 Цель работы – провести качественную реакцию на циклические аминокислоты
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Белок 1 %
Гидролизат белка
Триптофан
Фенол
Азотная кислота (конц.)
Едкий натр 10 %
3 Порядок проведения работы
В 1-ю пробирку наливают пять капель 1 % раствора белка. В следующие три пробирки соответственно по пять капель гидролизата белка, пять капель фенола и две капли раствора триптофана. Во все пробирки добавляют по три капли концентрированной азотной кислоты. Все пробирки нагревают на водяной бане, появляется желтое окрашива ние. После охлаждения в 1-ю, 2-ю и 4-ю пробирки прили вают по каплям 10 % раствор едкого натра (10 капель) до появления оранжевого окрашивания.
4 Контрольные вопросы
При взаимодействии кислого раствора сульфаниловой кислоты с нитритом натрия осуществляется реакция диазотировапия и образуется диазобензолсульфоновая кислота:
сульфаниловая п-сульфобензол
кислота диазоний
Последний, взаимодействуя с гистидином, дает соединение вишнево-красного цвета:
гистидин
2,5-бис-п-сульфобензолазогистидин
1 Цель работы – провести качественную реакцию на гистидин
2 Приборы и материалы
Сульфаниловая кислота 1 %
Соляная кислота 5 %
Нитрит натрия 0,5 %
Гистидин 0,01 %
Белок 1 %
Гидролизат белка
Карбонат натрия 10 %
3 Порядок проведения работы
В три пробирки наливают по 1 мл 1 % раствора суль фаниловой кислоты в 5 % растворе соляной кислоты. За тем приливают по 2 мл 0,5 % нитрита натрия, сильно встряхивают и немедленно приливают в 1-ю пробирку 2 мл 0,01 % раствора гистидина, во 2-ю – 2 мл 1 % раствора белка, в 3-ю – 2 мл гидролизата белка.
После перемешива ния содержимого в пробирках сразу приливают по 6 мл 10 % раствора соды (карбонат натрия). Развивается интенсивная вишнево-красная окраска.
4 Контрольные вопросы
Сера в цистеине содержится в виде SН-групп, легко от щепляющихся при нагревании со щелочами в виде серово дорода. Сероводород со свинцом дает PbS – осадок черно го цвета. Серосодержащих аминокислот особенно много в керотинах (белки волос, ногтей и т. п.):
Цистеин Серин
Плюмбит Черный осадок
1 Цель работы – провести качественную реакцию на серосодержащие аминокислоты
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Волос
Гидроксид натрия 10 %
Уксуснокислый свинец
3 Описание работы
В пробирку поместить свернутый волос (лучше светлый). Налить 10 капель 10% гидроксида натрия и 5 ка пель раствора уксуснокислого свинца. Пробирку нагреть на водяной бане в течение минуты. За это время волос утолщится и покроется черным налетом. По прошествии дли тельного времени волос растворяется, а на дне пробирки скапливается черный осадок.
4 Контрольные вопросы
Триптофан, реагируя в кислой среде с альдегидами, об разует окрашенные продукты конденсаций. Например, с глиоксиловой кислотой, которая является примесью к кон центрированной уксусной кислоте, реакция протекает по уравнению:
1 Цель работы – провести качественную реакцию на триптофан
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Триптофан
Белок 1 %
Гидролизат белка
Уксусная кислота (конц.)
Серная кислота (конц.)
3 Описание работы
В три пробирки наливают: в 1-ю – 2 мл раствора трип тофана, во 2-ю – 10 капель 1% раствора белка, в 3-ю – 10 капель гидролизата белка. Во все пробирки приливают около 2 мл концентрированной уксусной кислоты. 2-ю и 3-ю пробирки нагревают. После охлаждения во все три пробир ки наслаивают по 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе двух жидкостей наблюдается образование крас но-фиолетового окрашивания. При встряхивании вся жид кость окрашивается в фиолетовый цвет.
4 Контрольные вопросы
Белки в присутствии щелочи дают красное окрашивание с гипобромидом и α-нафтолом. Реакция обусловлена наличием в белке аминокислоты аргинина, имеющей в своем составе гуанидиновую группировку. Механизм реакции аргинина с α-нафтолом в присутствии окислителя еще полностью не выяснен. Вероятно, гуанидиновая группировка окисляется гипобромидом, и окисленный аргинин, соединяясь с α-нафтолом, образует продукт конденсации красного цвета:
1 Цель работы – провести качественную реакцию на аргинин
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Гидролизат белка
Аргинин
Гидроксид натрия 10 %
α-нафтол спиртовой раствор 0,1 %
Гипобромид натрия 2 %
3 Описание работы
В три пробирки наливают по пять капель 1 % раство ра белка, по пять капель гидролизата белка и по пять капель раствора аргинина. Затем в каждую пробирку добав ляют но пять капель 10% раствора гидроксида натрия, три кап ли 0,1 % спиртового раствора α-нафтола и по каплям (все го 1 – 5 капель) 2 % раствор гипобромида натрия. Жид кость в пробирках становится красного цвета.
4 Контрольные вопросы
В чем состоит принцип метода?
5 Оформление результатов
Результаты девяти описанных лабораторных работ необходимо записать в виде таблицы (табл. 2), которая по могает систематизировать материал и делает его более на глядным.
Таблица 2 – Цветные реакции на белки
|
Название реакции |
Материал исследова-ния |
Используемые реактивы |
Чем обусловлена реакция (принцип метода) |
Результат (наблюда-емая окраска) |
Что откры-вает данная реакция |
Существует несколько разновидностей хроматографиче ского метода анализа. Для разделения аминокислот наибо лее доступным и сравнительно точным является метод рас пределительной хроматографии на бумаге.
Метод основан на различной растворимости отдельных аминокислот в двух частично смешивающихся жидкостях, одной из которых является вода, другой — водонасыщенный органический растворитель (фенол, смесь бутилового спирта с уксусной кислотой и др.).
Сущность метода заключается в том, что каплю смеси аминокислот или гидролизата белка наносят на полоску хроматографической бумаги, конец которой опускают в под ходящий органический растворитель. Растворитель всасыва ется хроматографической бумагой и увлекает за собой нанесенные на бумагу аминокислоты. Скорость перемещения аминокислот на бумаге зависит от химического строения аминокислот и их способности растворяться в подвижном и неподвижном растворителе. В качестве подвижного раство рителя употребляют, например, водонасыщенный раствор фе нола, бутиловый спирт, амиловый спирт и др. Неподвижным растворителем является вода, пары которой насыщают хроматографическую бумагу (внешне бумага остается сухой). Чем меньше растворимость аминокислот в воде и чем больше их растворимость в органическом растворителе, тем быстрее они движутся вслед за его фронтом.
Положение аминокислот на бумаге можно обнаружить при помощи цветной реакции с нингидрином. Реакцию про водят путем опрыскивания из пульверизатора высушенной полоски бумаги 0,5 % спиртовым раствором нингидрина и последующим нагреванием в сушильном шкафу. Отдельные аминокислоты обнаруживаются в виде пятен, окрашенных в голубой, фиолетовый или оранжевый цвета (в зависимости от химической структуры аминокислоты). Основной физико-химической характеристикой хроматографического процесса является коэффициент распределения Kd.
Коэффициент распределения (Kd) характеризует распределение вещества между подвижной и неподвижной фазами при достижении равновесия в хроматографическом процессе. Определить Kd непосредственно из эксперимента (т.е. найти концентрацию соединения в подвижной и неподвижной фазе) довольно сложно. Поэтому в качестве основной характеристики удерживания вещества, определяющей положение его зоны на бумаге используется фактор Rf. Фактором Rf называют отношение расстояния (в мм) от места нанесения аминокислоты до середины ее пятна а к расстоянию (в мм) от места нанесения аминокислоты до фронта растворителя (в):
Rf=а/в
Фактор Rf является характерной вели чиной для каждой аминокислоты и постоянен при данных условиях опыта (растворитель, температура, сорт бумаги и т. д.). Идентификация аминокислот на хроматограммах проводится путем использования чистых аминокислот - «свидетелей», наносимых на ту же хроматограмму.
Исследуемые растворы аминокислот наносят вблизи цент ра бумажного диска, зажатого по краям. Смесь растворите лей подводят к центру диска при помощи «ножек» из бума ги. Проводят разделение смеси, состоящей из трех аминокис лот.
1 Цель работы – провести разделение и идентификацию аминокислот методом бумажной хроматографии
2 Приборы и материалы
Хроматографическая камера
Хроматографическая бумага
Электроплитка
Система растворителя - бутанол:уксусная кислота (конц.):вода в соотношении 3:1:1,4
Задача (раствор, содержащий смесь аминокислот)
Растворы аминокислот – «свидетелей» (глицин, лейцин, триптофан)
Раствор нингидрина в ацетоне 0,5 %.
3 Описание работы
Из хроматографической бумаги вырезают диск диаметром 14 см. Диск перегибают по диаметрам, перпендикулярным друг к другу, и от центра круга чертят квадрат со стороной 2 см, далее делают надрез по диагоналям квадрата; полученные в виде уголков «ножки» отгибают. На расстоянии 0,5 см от линий сгиба «но жек» простым карандашом чертят еще один квадрат, на середине каждой стороны отмечают точки. В одну точку при помощи капилляра наносят небольшую каплю исследуемого раствора смеси аминокислот. Диаметр получен ного пятна не должен превышать 3 – 4 мм. В три другие точ ки наносят растворы аминокислот-«свидетелей», входящих в исследуемую смесь. Рядом с точкой нанесения необходимо обозначить объект нанесения (задача, название аминокислоты-«свидетеля») простым карандашом. На одну и ту же точку следует наносить по 2 – 3 капли раствора, при этом после нанесения каждой капли бумагу слегка просушивают на воздухе и лишь затем наносят сле дующую каплю.
Просушенную на воздухе хроматограмму помещают между двумя половинами чашек Петри с одинаковыми диа метрами, образующими хроматографическую камеру, так, чтобы «ножки» хроматограммы были погружены в органический растворитель бутанол – вода – уксусная кислота (3:1,4:1), который наливают в нижнюю чашку. Хроматографическое разделение проводят при комнатной температуре около 40 минут. Необходимо следить за линией фронта растворителя.
Насыщенный водой бутиловый спирт в уксусной кислоте впитывается бумажным диском и движется по нему, увлекая нанесенные вещества. Дальнейшее продвижение растворите ля вызывает разделение исследуемой смеси на отдельные аминокислоты, движущиеся с разной скоростью соответствен но коэффициентам их распределения между водой и органи ческим растворителем.
После того как фронт растворителя пройдет 4/5 длины хроматограммы, хроматограмму извлекают из камеры, отмечают ка рандашом фронт растворителя и сушат на воздухе под тягой до удаления растворителя. После этого хроматограмму проявляют, опус кая в 0,5 % раствор нингидрина в ацетоне, и помещают в сушильный шкаф на 5 мин при температуре 80— 100°С, также можно проявить хроматограмму, нагревая ее над электроплиткой. На хроматограмме появляются пятна сине-фиолетового цвета. С по мощью линейки измеряют расстояния а – от места нанесе ния капли до середины каждого пятна и в – от места нане сения капли до фронта растворителя. Проявившиеся пятна обводят карандашом и вычисляют фактор Rf для каждой аминокислоты. Сопостав ляя положения пятен исследуемого раствора с положением пятен «свидетелей», определяют наличие тех или иных ами нокислот в исследуемой смеси.
4 Оформление результатов работы
Приводят значения R f для аминокислот свидетелей и аминокислот в задаче. Делают заключение о составе аминокислот в задаче.
5 Контрольные вопросы
Самым распространенным химическим методом количе ственного определения белка является колориметрический метод. Он основан на измерении интенсивности цветных реакций, развивающихся при взаимодействии белков со специ фическим реагентом.
Биуретовая реакция белков (см. лабораторную работу 1) не отличает ся высокой чувствительностью. Поэтому она применяется в тех случаях, когда содержание белка в исследуемом образце достаточно велико (не ниже нескольких мг/мл). Чтобы рассчитать концентрацию белка строят калибровочный график.
1 Цель работы – определить концентрацию белка колорометрическим методом с использованием биуретовой реакции
2 Приборы и материалы
Фотоэлектроколориметр КФК-2УХЛ 4.2
Стандартный раствор белка с концентрацией 10 мг/мл
Биуретовый реактив
Дистиллированная вода для приготовления разведений
Раствор белка с неизвестной концентрацией (задача)
3 Описание работы
3.1 Построение калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой в десять пронуме рованных пробирок наливают стандартный раствор белка от 0,1 до 1 мл, в девяти пробирках доводят объем до 1 мл до бавлением дистиллированной воды. Во все про бирки приливают по 8 мл биуретового реактива, перемешивают. Выдержи вают 30 мин при комнатной температуре и фотометрируют при длине волны 540 нм против контроля (вместо раствора белка берут 1 мл дистиллированной воды).
Таблица 3 - Схема приготовления проб для построения калибровочной кривой
|
Номер пробы |
Дист. вода, мл |
Стандартный раствор белка, мл |
Биуретовый реактив, мл |
Концентрация белка, мг/мл |
D540 |
|
1 |
0,9 |
0,1 |
8 |
1 |
|
|
2 |
0,8 |
0,2 |
8 |
2 |
|
|
3 |
0,7 |
0,3 |
8 |
3 |
|
|
4 |
0,6 |
0,4 |
8 |
4 |
|
|
5 |
0,5 |
0,5 |
8 |
5 |
|
|
6 |
0,4 |
0,6 |
8 |
6 |
|
|
7 |
0,3 |
0,7 |
8 |
7 |
|
|
8 |
0,2 |
0,8 |
8 |
8 |
|
|
9 |
0,1 |
0,9 |
8 |
9 |
|
|
10 |
- |
1,0 |
8 |
10 |
Схема приготовления проб для построения калибровочной кривой представлена в табл. 3. По полученным значениям оптических плотностей строят калибровочную кривую (рису нок 1).
3.2 Определение количества белка
Для определения количества белка в исследуемом образце к 1 мл исследуемого раствора приливают 8 мл биуретового реактива. Оставляют на 30 мин при комнатной температуре и фотометрируют в кюветах при 540 им против контроля.
4 Оформление результатов работы
По калибровочному графику (график зависимости оптической плотности раствора от концентрации белка в нем), представленному на рисунке 1, определяют содержание бел ка в пробе.
Рисунок 1 – Калибровочная кривая по белку
Белки – высокомолекулярные соединения (их молекуляр ный вес колеблется от нескольких тысяч до десятков миллио нов). Большинство белков обладает гидрофильными свой ствами. Коллоидные растворы белка достаточно устойчивы. Такая стабильность белковых растворов обусловлена двумя основ ными факторами: во-первых, белковая частица несет элек трический заряд, и, во-вторых, вокруг белковой молекулы образуется плотная водная оболочка, состоящая из несколь ких слоев, что препятствует объединению белковых молекул и выпадению их в осадок.
Для осаждения белка нужно лишить его факторов, удер живающих его в растворе, используя различные агенты, сни жающие заряд или разрушающие гидратную оболочку бел ковой молекулы.
Реакции осаждения белков весьма разнообразны, однако их можно разделить на две группы:
Добавление нейтральных солей аммония, солей щелочных в щелочноземельных металлов Na2SO4, (NH4)2SO4, MgSO4, NaCl и др. к растворам белков вызывает разрушение гидратной оболочки белковых молекул и снятие заряда, что приво дит к выпадению белка в осадок. Такой способ осаждения белков называют высаливанием. Высаливание - обратимый процесс. Осажденный белок можно вновь растворить в воде, при этом наблюдается восстановление нативных свойств белка (например, ферментативной активности, антигенных свойств и др.). Метод высаливания используют для разделения белковых фракций, очистки белков я получения их в кристаллическом состоянии.
1 Цель работы – провести высаливание белка солями щелочных и щелочноземельных металлов
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Сернокислый аммоний (измельченный порошок)
3 Описание работы
В пробирку наливают 20 капель раствора белка и при бавляют тонко измельченный порошок сернокислого аммония до полного насыщения раствора, т.е. до тех пор, пока новая порция порошка останется нерастворенной. Через не сколько минут появляется осадок.
4 Оформление результатов работы
Используя ответы на контрольные вопросы, сформулируйте выводы по данной работе.
5 Контрольные вопросы
Белки нерастворимы во многих органических растворителях (спирт, ацетон, эфир). При добавлении к раствору бел ка больших количеств спирта или ацетона выпадает осадок белка.
Реакция обусловлена обезвоживанием (дегидратацией) коллоидных частиц белка. Осаждение происходит только из нейтральных или слабокислых растворов и лучше в присут ствии электролитов, например, хлористого натрия, кратко временное воздействие органических растворителей при низкой температуре – от 0 до -15 °С сохраняет белок в нативном состоянии, длительное воздействие приводит к денату рации белка.
1 Цель работы – провести осаждение белка органическими растворителями
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Этиловый спирт или ацетон
Сульфат аммония (насыщенный раствор)
3 Описание работы
К пяти каплям 1% раствора белка приливают 15 – 20 капель этилового спирта (или ацетона) - раствор мутнеет. Добавляют одну каплю насыщенного раствора сульфата ам мония. Через некоторое время выпа дает осадок белка.
4 Контрольные вопросы
За счет чего происходит осаждение белков органическими растворителями?
Белки осаждаются солями меди, цинка, свинца, ртути, се ребра и др., при этом происходит денатурация белковой мо лекулы.
Ионы тяжелых металлов образуют довольно прочные сое динения с полярными группами белков, искажая систему ионных и водородных связей нативной белковой молекулы и образуя нерастворимые комплексы.
При осаждении белков некоторыми солями тяжелых ме таллов, например, уксуснокислым свинцом и сульфатом ме ди, избыток этих солей ведет к растворению (пептизации) осадка. Ионы металла, адсорбируясь на поверхности белко вых мицелл, придают им положительные заряды. Одноимен но заряженные мицеллы отталкиваются, что способствует их переходу из осадка в раствор. При избытке солей серебра и ртути пептизации не наблюдается.
1 Цель работы – провести осаждение белков солями тяжелых металлов
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Сульфат меди 7 %
Уксуснокислый свинец 5 %
3 Описание работы
В две пробирки вносят по пять капель 1 % раствора белка и по две капли: в 1-ю пробирку 7 % раствора суль фата меди, во 2-ю пробирку – 5 % раствора уксусного свинца. Наблюдают образование осадка. Затем в обе про бирки добавляют еще 5 – 10 капель осадителя и наблюдают растворение осадка.
4 Контрольные вопросы
За счет чего происходит осаждение белков тяжелыми металлами?
Концентрированные минеральные кислоты (азотная, сер ная, соляная) вызывают дегидратацию белковых частиц и нейтрализацию их заряда, при этом происходит образование комплексных соединений. Все это приводит к необратимой денатурации белка. В избытке серной или соляной кислот, а также при их длительном воздействии, выпавший осадок денатурированного белка растворяется, по-видимому, за счет перезарядки белка и частичного гидролиза. В избытке азот ной кислоты этого растворения не происходит.
1 Цель работы – провести осаждение белка минеральными кислотами
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Азотная кислота (конц.)
Серная кислота (конц.)
3 Описание работы
В две пробирки наливают по пять капель концентриро ванной азотной и серной кислот. Затем, наклонив пробирки под углом 45°, осторожно по стенке пробирки (чтобы жидко сти не смешивались) наливают такой же объем раствора белка. На границе двух слоев жидкости появляется осадок белка в виде тонкого белого кольца. Осторожно встряхи вают пробирки, обнаруживают растворение осадка белка при осаждении серной кислотой, в пробирке с азотной кислотой белок не растворяется.
4 Контрольные вопросы
За счет чего происходит осаждение белков неорганическими кислотами?
Белки из растворов могут осаждаться органическими кис лотами. Трихлоруксусная и сульфосалициловая кислоты яв ляются очень чувствительными и специфическими реактива ми на белок.
Под действием органических кислот происходит дегидра тация белковой молекулы и снятие заряда.
Трихлоруксусная кислота осаждает только белки и не осаждает продукты распада белка и аминокислоты, поэтому ею пользуются часто для полного удаления белков из биоло гических жидкостей. В этих условиях продукты распада бел ков остаются в растворе.
1 Цель работы – провести осаждение белков органическими кислотами
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Сульфосалициловая кислота 10 %
Трихлоруксусная кислота 10 % (ТХУ)
3 Описание работы
В две пробирки наливают по 5 капель 1 % раствора белка, в одну пробирку добавляют 1 – 2 капли 10 % рас твора сульфосалициловой кислоты, в другую – 1 – 2 капли 10 % раствора трихлоруксусной кислоты. В пробирках об разуется осадок белка.
4 Контрольные вопросы
За счет чего происходит осаждение белков органическими растворителями?
5 Оформление результатов работы
Результаты лабораторных работ 11-16 заносят в таблицу 4.
.
Таблица 4 – Реакции осаждения белков
|
Название групп осадителей |
Употребляемые реактивы |
Результат реакции |
Чем обусловлена реакция |
|
Соли щелочных и щелочноземельных металлов |
|||
|
Органические растворители |
|||
|
Соли тяжелых металлов |
|||
|
Концентрированные минеральные кислоты |
|||
|
Органические кислоты |
Почти все белки денатурируют при нагревании (50 - 55 °С и выше), при этом белок теряет свои нативные свой ства, уменьшается его растворимость (уменьшение гидро фильных свойств ведет к нарушению гидратной оболочки). Важную роль в выпадении в осадок денатурированного при нагревании белка играет концентрация водородных ионов и присутствие солей. Наиболее полное и быстрое осаждение происходит в изоэлектрической точке белка. В сильнокислых и щелочных растворах белок не выпадает в осадок при ки пячении; так как он приобретает соответственно сильно по ложительный или отрицательный заряд:
NH3+ NH3+
R + H+Cl- R Cl-
COO- COOH
амфион катион
NH3+ NH2
R + Na+OH- R Na+
COO- COO-
амфион анион
1 Цель работы – провести тепловое осаждение белка
2 Приборы и материалы
Водяная баня
Электроплитка
Белок 1 %
3 Описание работы
В пробирку наливают пять капель 1 % раствора белка. Пробирку с раствором белка нагревают до кипения. Жидкость мутнеет (наблюдается опалесценция).
4 Оформление результатов работы
Используя ответы на контрольные вопросы, сформулируйте выводы по проделанной работе.
5 Контрольные вопросы
Метод относится к числу пороговых и основан на том экспериментально установленном факте, что растворы, содержащие 0,0033 % белка, при наслаивании на концентриро ванную азотную кислоту в конце второй минуты образуют на поверхности раздела жидкостей едва заметную белковую пленочку. При меньших концентрациях белка в растворе осаждения белка не происходит.
Пользуясь различными разведениями исследуемой куль туральной жидкости, устанавливают максимальное разведе ние, при котором белок может быть обнаружен при наслаи вании на концентрированную азотную кислоту. Зная степень разведения, при которой концентрация белка равна 0,0033 %, вычисляют концентрацию белка в неразведенной культураль ной жидкости.
1 Цель работы – определить количество белка в исследуемой жидкости, используя метод осаждения белка азотной кислотой
2 Приборы и материалы
Белок 1 %
Азотная кислота (конц.)
Дистиллированная вода
Исследуемая культуральная жидкость (задача)
3 Описание работы
Готовят ряд последовательных разведений. В семь про бирок наливают по 2 мл дистиллированной воды. В 1-ю про бирку наливают 2 мл исследуемого раствора культуральной жидкости и перемешивают. 2 мл смеси переносят во 2-ю пробирку и т. д. Из 7-й пробирки 2 мл смеси выливают. С со держимым каждой пробирки проделывают реакцию наслаи вания на азотную кислоту (см. лабораторную работу 15). Для этого в семь других пробирок наливают по 2 мл концен трированной азотной кислоты. В 1-ю пробирку осторожно из пипетки наслаивают раствор белка из 1-й пробирки с белком и т.д. Пробирки не встряхивать.
Отмечают, при каком разведении появляется едва за метное кольцо между 2-й и 3-й минутами.
4 Оформление результатов работы
Производят расчет содержания белка в 1 мл неразведенной культуральной жид кости (задачи).
5 Контрольные вопросы
На чем основан данный метод определения белка в культуральной жидкости?
Высаливанием называется процесс выделения белков из водных растворов нейтральными растворами концентрированных солей щелочных и щелочноземельных металлов: Na2S04, (NH4)2S04, MgS04, NaCl и др.
При добавлении достаточно больших концентрации этих солей к раствору белка происходит дегидратация белковых частиц и снятие заряда; при этом белки выпадают в осадок. Степень выпадания белков в осадок зависит от ионной силы раствора осадителя, размера частиц белковой молекулы, ве личины ее заряда, гидрофильности. Разные белки осажда ются при различных концентрациях солей. Так, например, глобулины легче выпадают в осадок, чем альбумины. По этому в осадках, полученных путем постепенного повышения концентрации солей, отдельные белки находятся в различ ных фракциях. Для разделения белков этим методом широко используют сульфат аммония. Некоторые белки выпадают в осадок уже при концентрации соли, близкой к 1/10 от насы щения, глобулины – при полунасыщении, альбумины – при полном насыщении. В насыщенном растворе сульфата аммо ния все белки выпадают в осадок.
Высаливание белков является обратимым процессом, и после удаления соли белок вновь приобретает природные свойства. Поэтому в научно-исследовательской работе выса ливанием пользуются при изолировании, очистке различных белков (ферменты, гормоны, и т. д.) из биологического ма териала (клетки, растения, ткани), для получения некоторых белковых препаратов.
1 Цель работы – с помощью метода высаливания выделить яичный глобулин и альбумин
2 Приборы и материалы
Яичный белок
Сульфат аммония (насыщенный раствор, порошок)
Едкий натр 10 %
Сернокислая медь 1 %
3 Описание работы
В пробирку наливают 20 капель яичного белка, добав ляют равный объем насыщенного раствора сульфата аммо ния, содержимое перемешивают. Получается полунасыщен ный раствор сульфата аммония, выпадает осадок яичного глобулина. Через пять минут осадок отфильтровывают, В фильтрате остается другой белок – яичный альбумин.
Для высаливания альбумина к фильтрату добавляют из мельченный порошок сульфата аммония до полного насыще ния, т. е. до тех пор, пока не прекратится растворение соли.
Выпавший осадок альбумина отфильтровывают и с фильтратом проделывают биуретовую реакцию. Отрицательная реакция указывает на отсутствие белка.
4 Оформление результатов работы
Результаты ра боты заносят в табл. 6.
Таблица 6 – Высаливание белков
|
Название белка |
Используемая соль |
Степень Насыщения |
Образование осадка |
|
Глобулин |
|||
|
Альбумин |
5 Контрольные вопросы
Каким образом можно разделить яичный альбумин и глобулин?
Сложными белками называются белки, которые кроме белковой части содержат небелковый компонент, называемый простетической группой. В зависимости от химической при роды простетической группы сложные белки делятся на нуклеопротеиды, хромопротеиды, фосфопротеиды, глюкопротеиды, липопротеиды и металлопротеиды.
Нуклеопротеиды представляют собой сложные белки, со стоящие из простого белка и небелковой части – нуклеино вых кислот. Нуклеопротеиды являются необходимой состав ной частью клеток тканей, растений, микробов. Они обнару живаются как в ядре, так и в цитоплазме.
1 Цель работы – изучить химический состав сложных белков – нуклеопротеидов
Для изучения химического состава нуклеопротеидов про водят гидролиз дрожжей, которые берут в качестве источни ка богатого нуклеопротеидами. При проведении частичного гидролиза нуклеопротеиды распадаются на белки, преиму щественно основного характера (протамины и гистоны), и нуклеиновые кислоты. При более полном гидролизе белки и нуклеиновые кислоты распадаются на свои основные компо ненты. Это можно представить в виде следующей схемы:
Нуклеопротеиды
Белок Нуклеиновые кислоты
(протамин или гистон) (полинуклеотиды)
Полипетиды Мононуклеотиды
Пуриновые или Фосфорная
пиримидиновые основания кислота
Рибоза или дезоксирибоза
2 Приборы и материалы
Песчаная баня
Электроплитка
Фильтр
Дрожжи
Серная кислота 10 %
Гидроксид натрия 10 %
Гидроксид натрия 30 %
Сульфат меди 1%
Сульфат меди 7 %
Молибденовый реактив
3 Описание работы
В колбу помещают 1 г дрожжей, приливают 8 мл 10 % серной кислоты, закрывают пробкой, в которую вставлена в качестве холодильника трубка длиной 25 – 30 см, взбалты вают и закрепляют в штативе под углом 45°.
Гидролиз проводят при нагревании около часа, считая от момента закипания. После окончания гидролиза жидкость охлаждают и фильтруют через складчатый фильтр. С фильт ратом проводят следующие реакции.
1. Биуретовая реакция на полипептиды.
К пяти каплям гидролизата добавляют 10 капель 10 % раствора NaOH и 1 – 2 капли 1 % раствора сернокислой меди до появления сине-фиолетового окрашивания, что сви детельствует о присутствии в пробе полипептидов.
2. Проба на пуриновые основания.
К десяти каплям гидролизата прибавляют одну каплю концентриро ванного раствора аммиака для нейтрализации и пять капель 1 % раствора азотнокислого серебра. Постепенно образу ется осадок серебряных соединений пуриновых оснований.
3. Качественная реакция на углевод (рибозу и дезоксирибозу).
Качественные реакции основаны на способности моносахаридов, имеющих свободный гликозидный гидроксил, восстанавливать металлы (медь, висмут, железо) в щелочной среде. При этом металлы восстанавливаются из окисной формы в закисную или (в случае закиси) до свободного состояния; сахара же дают различные продукты окисления.
Проба Троммера заключается в восстановлении гидроксида меди (II) в гидрооксид меди (I) в щелочной среде под влиянием рибозы и дезоксирибозы, присутствующих в гидролизате дрожжей:
CuSO4 + 2NaOH Cu(OH)2 + Na2SO4;
Рибоза рибоновая кислота + 2CuOH
Cu2O + H2O
К пяти каплям гидролизата добавляют пять капель 30 % гидроксида натрия и несколько капель 7 % рас твора сульфата меди до появления неисчезающей мути гидроксида меди. При нагревании до кипения выпадает желтый осадок гидрата оксида меди (II) и красный осадок оксида меди (I).
4. Молибденовая проба на фосфорную кис лоту. К пяти каплям гидролизата добавляют десять капель молибденового реактива, представляющего собой раствор молибденовокнелого аммония в азотной кислоте, и кипятят. При охлаждении пробирки под струей холодной водопровод ной воды выпадает кристаллический осадок лимонно-желтого цвета, обусловленный образованием фосфорно-молибденово-кислого аммония.
4 Оформление результатов работы
Сформулируйте выводы по данной работе.
5 Контрольные вопросы
Хромопротеидами называются сложные белки, у которых простетической группой является окрашенное соединение не белкового характера, например, гем, каротиноиды, флавины. Хромопротеиды широко распространены в природе и играют важную роль в окислительно-восстановительных процессах в клетке. Особенно распространенными являются хромопро теиды геминовой природы. К ним относятся гемоглобин кро ви, гемоглобин мышц, ферменты каталаза, пероксидаза, цитохромы и др.
При добавлении к разбавленному раствору крови раство ра бензидина и перекиси водорода жидкость окраши вается в синий или зеленый цвет. Реакция обусловлена способность гемоглобина катализировать реакцию окисления бензидина перекисью водорода в парахинондиимид, при этом жид кость приобретает синюю окраску. При стоянии окраска жидкости переходит в красную.
Реакция очень чувствительна и служит для обнару жения минимальных количеств крови в биологических объ ектах.
1 Цель работы – провести качественную реакцию на гемопротеид – гемоглобин
2 Приборы и материалы
Раствор гемоглобина
Спиртовой раствор бензидина 0,2 %
Перекись водорода 3 %
3 Описание работы
К пяти каплям раствора гемоглобина добавляют 1 – 2 кап ли 0,2 % спиртового раствора бензидина и 1 – 2 капли 3 % раствора перекиси водорода. Жидкость окрашивается в синий цвет.
4 Оформление результатов работы
Сформулируйте выводы по данной работе.
5 Контрольные вопросы
Строение и биологическая роль гемоглобина.
По химической природе гликопротеиды представляют со бой сложные белки, состоящие из белкового компонента и полисахарида. При гидролизе белковый компонент распада ется на аминокислоты, а полисахарид на гексозы, гексозамины и уроновые кислоты.
Простетическне группы некоторых гликопротеидов извест ны под названием мукополисахаридов. К мукополисахаридам относятся гиалуроновая кислота, хондроитинсерная кислота и гепарин. При гидролизе мукополисахариды распадаются на глюкозамин или галактозамин, ацетилглюкозамин или ацетилгалактозамин, глюкуроновую и серную кислоты. Гликопротеиды (муцины) встречается в секретах слизистых желез. Гликопротеиды нерастворимы в воде, хорошо растворяются в щелочах и осаждаются при подкислении.
1 Цель работы – выделить гликопротеид из слюны
2 Приборы и материалы
Уксусная кислота (конц.)
Слюна
3 Описание метода
В пробирку собирают 2 мл слюны и по каплям (4-5 капель) прибавляют концентрированную уксусную кислоту. Образуется осадок муцина, трудно растворимый в избыт ке уксусной кислоты. Сгусток выделяют стеклянной палоч кой, помещают в чистую пробирку и проводят реакцию Подобедова-Молиша.
Если к сгустку муцина добавить спиртовой раствор α-нафтола и смесь подслоить концентрированной серной кислотой, то на границе двух слоев жидкости появляется фиолетовое кольцо.
Реакция обусловлена присутствием в муцине углеводной простетической группы. При действии концентрированной серной кислоты из глюкозы образуется оксиметилфурфурол. Последний, конденсируясь с α-нафтолом, превращается в окрашенное соединение.
1 Цель работы – подтвердить химический состав сложного белка – муцина
2 Приборы и материалы
Спиртовой раствор α-нафтола 1 %
Серная кислота (конц.)
Муцин
3 Описание работы
К сгустку муцина (см. лабораторную работу 23) добавляют 1 – 2 капли 1 % раствора (спиртового) α-нафтола, перемешивают и по стенке осторожно спускают 10—20 капель концентрирован ной серной кислоты. На границе двух слоев жидкости посте пенно появляется фиолетово-красное кольцо, хорошо замет ное на белом фоне.
4 Оформление результатов работы
Сформулируйте выводы по данной работе.
5 Контрольные вопросы
1. Филлипович Ю.В., Егорова Т.А., Севастьянова Г.А. Практикум по обшей биохимии. – М.: Просвещение, 1982. – 311 с.
2. Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к практиче ским занятиям по биологической химии. – М.: Медицина, 1974. – 424 с.
3. Добрынина Б.И., Свешникова Е.Я. Руководство к прак тическим занятиям по биологической химии. – М.: Медицина, 1967. – 343 с.
4. Аналитическая химия. Физические и физико-химические методы анализа: Учебник для вузов / А.Ф. Жуков, И.Ф. Колосова, В.В. Кузнецов и др.; под ред. О.М. Петрухина. – М.: Химия, 2001. – 496 с.
СОДЕРЖАНИЕ
|
[1] ВВЕДЕНИЕ [2] ХИМИЧЕСКАЯ ПРИРОДА БЕЛКА [3] 1.1 Лабораторная работа 1. Биуретовая реакция [4] 1.2 Лабораторная работа 2. Нингидриновая реакция на α-аминокислоты [5] 1.3 Лабораторная работа 3. Реакция на первичную аминогруппу [6] 1.4 Лабораторная работа 4. Реакция на тирозин (Миллона) [7] 1.5 Лабораторная работа 5. Ксантопротеиновая реакция [8] 1.6 Лабораторная работа 6. Реакция на гистидин (Паули) [9] 1.7 Лабораторная работа 7. Реакция Фоля на серосодержащие аминокислоты [10] 1.8 Лабораторная работа 8. Реакция на триптофан [11] 1.9 Лабораторная работа 9. Реакция на аргинин (Сакагучи) [12] 1.10 Лабораторная работа 10. Хроматографический метод определения аминокислот [13] 1.11 Лабораторная работа 11. Количественное определение белка по биуретовой реакции [14] ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БЕЛКОВ [15] 2.1 Лабораторная работа 12. Осаждение белков солями щелочных и щелочноземельных металлов [16] 2.2 Лабораторная работа 13. Осаждение белков органическими растворителями [17] 2.3 Лабораторная работа 14. Осаждение белков солями тяжелых металлов [18] 2.4 Лабораторная работа 15. Осаждение белков минеральными кислотами [19] 2.5 Лабораторная работа 16. Осаждение белков органическими кислотами [20] 2.6 Лабораторная работа 17. Осаждение белков при нагревании [21] 2.7 Лабораторная работа 18. Количественное определение белка в культуральной жидкости [22] 2.8 Лабораторная работа 19. Высаливание белков [23] 3 СЛОЖНЫЕ БЕЛКИ [24] 3.1 Лабораторная работа 20. Гидролиз нуклеопротеидов дрожжей [25] 3.2 Лабораторная работа 21. Бензидиновая проба на геминовую группировку гемоглобина [26] 3.3 Лабораторная работа 22. Выделение гликопротеида из слюны [27] 3.4 Лабораторная работа 23. Нафтоловая проба на углеводную группировку гликопротеида (реакция Подобедова—Молиша) [28] ЛИТЕРАТУРА |
Кафедра технологии микробиологического синтеза
Методические указания
Лабораторный практикум по химии белка
Анастасия Владимировна Анкудинова
Валентина Георгиевна Шмелева
Егор Игоревич Помешалкин
Отпечатано с оригинал-макета. Формат 60×90 1/16
Печ.л. 2,6. Тираж 50 экз.
Санкт-Петербургский государственный технологический институт
(Технический университет)
_____________________________________________________________________________190013, Санкт-Петербург, Московский пр., 26