Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
- 9 -
ЛФ, ФИУ, ПФ. Занятие № 31
ЛФ, ФИУ, ПФ. Занятие № 31
31А. Основные положения
Ретровирусы: классификация.
Семейство Retroviridae включает в себя роды: Alpharetrovirus, Betaretrovirus, Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Epsilonretrovirus, Lentivirus и Spumavirus. Первые пять из них содержат онкогенные РНК-геномные вирусы (онкорнавирусы), а род Lentivirus – вирус иммунодефицита человека (ВИЧ).
Ретровирусы: характеристика семейства.
Ретровирусы содержат в составе вириона обратную транскриптазу и имеют диплоидный геном.
История открытия ВИЧ.
Вирус был выделен независимо друг от друга Галло (США) и Монтанье (Франция).
Вирионные белки ВИЧ.
В шипы суперкапсида ВИЧ содержат гликолизированные белки gp120 (исключительно быстро изменяющийся в результате антигенного дрейфа) и gp41, а сердцевина – структурные белки (например, капсидный р24) и ферменты (в том числе обратную транскриптазу).
Геном ВИЧ-1.
Для генома ВИЧ характерно большое количество регуляторных генов и наличие длинных концевых повторов, обеспечивающих интеграцию вируса в геном клетки-хозяина и регуляцию экспрессии генов провируса.
Отличия генома ВИЧ-1 от ВИЧ-2.
Геном ВИЧ-2 отличается от генома ВИЧ-1 геном, детерминирующим синтез поверхностных белков (шипов) и одним из генов, регулирующих процесс репликации провируса.
Типы ВИЧ.
Вирус иммунодефицита человека имеет два типа: ВИЧ-1 (основной возбудитель СПИДа) и ВИЧ-2 (эндемичный для Западной Африки и редко встречающийся в других регионах).
Классификация ВИЧ-1.
Все изоляты ВИЧ-1 классифицируется на три группы. Большинство относится в группе N, в рамках которых выделяют подтипы ВИЧ.
Фенотипы ВИЧ.
По тропизму к ко-факторам (рецепторам к хемокинам, «помогающим» вирионному белку gp120 в обеспечении адсорбции к клетке-мишени) штаммы ВИЧ классифицируются на М-тропные (макрофаготропные), Т-тропные (Т-лимфотропные) и штаммы с двойной тропностью. Прогрессирование ВИЧ-инфекции сопровождается сменой фенотипа вируса от М- к Т-.
Жизненный цикл ВИЧ в CD4-лимфоцитах.
При взаимодействии с рецепторами адсорбции (молекулой CD4 и хемокиновым рецептором) на поверхности лимфоцита прикрепительного белка ВИЧ (комплекс gp120+gp41) происходит изменение конформации gp120, что позволяет gp41 взаимодействовать к клеточной мембраной в качестве фактора слияния, что, в свою очередь, приводит к попаданию сердцевины вируса внутрь клетки. Затем, после высвобождения вирионной РНК, вирионная обратная транскриптаза ферментирует синтез на её матрице ДНК-транскрипта, который проникает в ядро лимфоцита и интегрируется в хромосомную ДНК, где – в виде репрессированного провируса – сохраняется до момента инициации своей транскрипции. РНК-транскрипт переносится в цитоплазму клетки, где формирует геномный фонд ВИЧ и служит матрицей для синтеза вирионных белков. После сборки вирионов, последние отпочковываются от клеточной мембраны, вызывая множественные нарушения её целостности, что и приводит к гибели CD4-лимфоцита.
Пути передачи ВИЧ.
Основной путь передачи ВИЧ – половой. Вирус передаётся также парентерально, возможен и трансплацентарный путь передачи.
ВИЧ-инфекция: группы повышенного риска.
В группу повышенного риска входят лица, практикующие гомосексуальные связи, наркоманы, применяющие шприцевые наркотики, проститутки, люди, часто меняющие своих половых партнёров, больные гемофилией.
Типичная модель распространения ВИЧ.
Первоначально вирус концентрируется в группах риска, а затем через половых партнёров членов этих групп распространяется на основную популяцию населения.
Биологические жидкости, содержащие ВИЧ.
Все биологические жидкости инфицированного организма содержат вирус, однако его количество, достаточное для заражения, содержится в крови, сперме, влагалищном и цервикальном секрете, грудном молоке и ликворе.
Взаимодействие ВИЧ с организмом человека.
Вирус проникает в организм через слизистую оболочку гениталий или прямой кишки, через кровь или через плаценту, после чего инфицирует клетки-мишени, как имеющие CD4 (Т-хелперы, моноциты/макрофаги), так и содержащие подобные ей молекулы (астроциты, эндотелиальные и эпителиальные клетки). После истечения инкубационного периода наступает прогрессирующая активация репликации вируса, что вызывает гибель CD4-лимфоцитов, обуславливающее не только снижение количества Т-хелперов, но и – в результате изменения синтеза цитокинов – дискоординацию других показателей иммунного статуса. Развивается выраженная дисфункция иммунной системы, а как её результат – присоединение СПИД-ассоциированных болезней, приводящих больного к гибели.
Основные СПИД-ассоциированные инфекции.
К основным СПИД-ассоциированным инфекциям относятся: пневмоцистная пневмония, МАК-инфекция, цитомегаловирусная и другая герпетическая инфекция, кандидоз.
ВИЧ-инфекция: методы лабораторной диагностики.
В лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции применяют: выявление специфических антител (с помощью ИФА и иммуноблотинга), выявление вирусного антигена (с помощью тех же реакций), детекцию вирусного генома (с помощью ПЦР), выделение вируса (т.е. – его культивирование).
ВИЧ-инфекция: косвенные показатели.
К косвенным показателям ВИЧ-инфекции относятся: количество CD4-лимфоцитов, соотношение CD4-лимфоцитов к CD8-лимфоцитам.
ВИЧ-инфекция: серологическая диагностика.
Для серологической диагностики ВИЧ-инфекции используется ИФА (для выявления общего количества специфических антител) и иммуноблотинг (для выявления антител к отдельным белкам вируса).
ВИЧ-инфекция: освидетельствования групп риска.
Освидетельствование групп риска соответствует общей стратегии диагностики ВИЧ-инфекции: с помощью ИФА выявляют специфические антитела (и в положительном и в отрицательном случае необходимо повторное исследование), в положительном случае в качестве подтверждающего теста используют иммуноблотинг. В положительном случае ставится диагноз «сероконверсия» и, в случае последующей детекции антигена вируса или выделения самого вируса – «ВИЧ-инфекция».
Выделение (культивирование) ВИЧ.
Из периферической крови пациента выделяют фракцию мононуклеарных клеток (МПК), которые сокультивируют с такими же клетками донора, обработанными фитогемагглютинином, после чего определяют маркеры репликации вируса (активность обратной транскриптазы, наличие капсидного белка, вирусной РНК, изменение клеток в результате ЦПД). В положительном случае вируссодержащим супернатантом (первичной культурой вируса) заражают, для изучения фенотипа выделенного вируса, культуру Т-лимфобластоидных клеток, экспрессирующих CD4.
31Б. Лекционный курс
31В. Теоретический материал
ХХ
Хх
31Г. Тестовые вопросы по теме занятия
Ретровирусы:
ДНК-геномные
-РНК-геномные
простые
-сложные
У ретровирусов:
-одноцепочечная нуклеиновая кислота
двухцепочечная нуклеиновая кислота
-«плюс-нить» нуклеиновой кислоты
«минус-нить» нуклеиновой кислоты
гаплоидный геном
-диплоидный геном
Какие роды семейства Retroviridae содержат онкогенные РНК-геномные вирусы (онкорнавирусы):
-Alpharetrovirus
-Betaretrovirus
-Gammaretrovirus
-Deltaretrovirus
-Epsilonretrovirus
Lentivirus
Spumavirus
Какой род семейства Retroviridae содержит вирус иммунодефицита человека (ВИЧ):
Alpharetrovirus
Betaretrovirus
Gammaretrovirus
Deltaretrovirus
Epsilonretrovirus
-Lentivirus
Spumavirus
Какой белок ВИЧ исключительно быстро изменяется в результате антигенного дрейфа:
-gp120
gp41
р24
Какие белки ВИЧ содежатся в шипах суперкапсидной оболочки:
-gp120
-gp41
р24
Капсидный белок ВИЧ:
gp120
gp41
-р24
Для генома ВИЧ-1 характерно:
-большое количество регуляторных генов
малое количество регуляторных генов
-наличие длинных концевых повторов
отсутствие длинных концевых повторов
Длинные концевые повторы генома ВИЧ обеспечивают:
адсорбцию вируса на чувствительной клетке
депротеинизацию вируса
-интеграцию вируса в геном клетки-хозяина
-регуляцию экспрессии генов провируса
сборку вирионов
отпочковывание вирионов от клетки-хозяина
Основной возбудитель СПИДа:
-ВИЧ-1
ВИЧ-2
ВИЧ-2:
встречается с одинаковой частотой во всех регионах земного шара
-эндемичен для Западной Африки
эндемичен для Южной Африки
эндемичен для Европы
эндемичен для Северной Америки
эндемичен для Южной Америки
эндемичен для Азии
Большинство изолятов ВИЧ-1 относятся к группе:
M
-N
О
Прогрессирование ВИЧ-инфекции сопровождается сменой фенотипа вируса:
-от М- к Т-
от Т- к М-
прогрессирование ВИЧ-инфекции никак не связано со сменой фенотипов вируса
Какой из белков ВИЧ при проникновении вируса в чувствительную клетку взаимодействует с клеточной мембраной в качестве фактора слияния:
gp120
-gp41
р24
Основной пусть передачи ВИЧ:
-половой
парентеральный
трансплацентарный
Количество ВИЧ, достаточное для заражения, содержится:
-в крови
-в сперме
-во влагалищном секрете
в слюне
Количество ВИЧ, достаточное для заражения, содержится:
-в цервикальном секрете
-в грудном молоке
-в ликворе
в поту
В лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции ИФА используют для:
-выявления специфических антител
-выявления вирусного антигена
детекции вирусного генома
В лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции иммуноблотинг используют для:
-выявления специфических антител
-выявления вирусного антигена
детекции вирусного генома
В лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции ПЦР используют для:
выявления специфических антител
выявления вирусного антигена
-детекции вирусного генома
К косвенным показателям ВИЧ-инфекции относятся:
-количество CD4-лимфоцитов
количество CD8-лимфоцитов
-соотношение CD4-лимфоцитов к CD8-лимфоцитам
количество макрофагов
количество В-лимфоцитов
количество NK-клеток
Для выявления общего количество антител против ВИЧ используется:
иммуноблотинг
-ИФА
Для выявления антител к отельным белкам ВИЧ используется:
-иммуноблотинг
ИФА
Подтверждающий тест при выявлении антиВИЧ-антител:
ИФА
-иммуноблотинг
РСК
ПЦР
РНГА
РГА
При выделении (культивировании) ВИЧ первичную культуру вируса получают (в случае регистрации маркеров репликации вируса) при сокультивировании:
-фракции мононуклеарных клеток периферической крови исследуемого пациента
-фракции мононуклеарных клеток периферической крови донора, обработанных фитогемагглютинином
культуры Т-лимфобластоидных клеток, экспрессирующих CD4
При выделении (культивировании) ВИЧ изучение его фенотипа осуществляют при заражении:
фракции мононуклеарных клеток периферической крови исследуемого пациента
фракции мононуклеарных клеток периферической крови донора, обработанных фитогемагглютинином
-культуры Т-лимфобластоидных клеток, экспрессирующих CD4
31Д. Практические навыки, приобретаемые на занятии