Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Лабораторная работа №3
Количественное определение белка по биуретовой реакции
В основе биуретовой реакции лежит способность пептидных связей белка реагировать в щелочной среде с катионами меди 2+ . При этом образуется комплекс фиолетового цвета. Интенсивность окраски линейно зависит от концентрации белка.
Реактивы
Стандартный раствор белка
Раствор белка неизвестной концентрации
0,9%-ный раствор хлорида натрия
Биуретовый реактив
Приготовление биуретового треактива
Сначала готовят растворы А и Б.
Раствор А: 4,5 г сегнетовой соли растворяют в 40 мл 0,2 н раствора гидроксида натрия. Затем добавляю 1,5 г кристаллогидрата сульфата меди и 0,5 г иодида калия. Доводят объем до 100 мл 0,2 н раствором гидроксида натрия.
Раствор Б: 0,5%-ный раствор иодида калия в 0,2 н растворе гидроксида натрия. Раствор хранят в посуде темного стекла не более двух недель.
Рабочий раствор биуретового реактива: 20 мл раствора А смешивают с 80 мл раствора Б. Раствор хранят в посуде темного стекла не более двух недель.
Построение калибровочного графика
Ось абцисс – известные концентрации белка, ось ординат –значения оптической плотности.
В 10 пробирок отмерить по 5 мл биуретового реактива, микропипеткой добавить раствор белка и хлорида натрия в соответсвии с таблицей. Содержимое пробирок перемешать, избегая образования пены. Инкубировать 30 мин при комнатной температуре. Оптическую плотность растворов измерить на ФЭКе, в кювете 10 мм, длина волны 540 нм (зеленый светофильтр). В качестве раствора сравнения использовать биуретовый реактив.
|
№ пробирки |
Стандартный раствор белка, мл |
0,9%-ный раствор хлорида натрия, мл |
Содержание белка в пробе, г |
Концентрация белка, % |
Оптическая плотность |
|
1 |
0,1 |
0,9 |
|||
|
2 |
0,2 |
0,8 |
|||
|
3 |
0,3 |
0,7 |
|||
|
4 |
0,4 |
0,6 |
|||
|
5 |
0,5 |
0,5 |
|||
|
6 |
0,6 |
0,4 |
|||
|
7 |
0,7 |
0,3 |
|||
|
8 |
0,8 |
0,2 |
|||
|
9 |
0,9 |
0,1 |
|||
|
10 |
1,0 |
0 |
Определение концентрации белка.
0,1 мл раствора белка неизвестной концентрации смешать с 5 мл биуретового реактива, провести реакцию, измерить оптическую плотность раствора.
Записать уравнение образования комплекса.