клиницистов и врачей профилактической службы

Работа добавлена на сайт samzan.net:

№ 1 Место микробиологии и иммунологии в современной медицине. Роль микробиологии и иммунологии в подготовке врачей-клиницистов и врачей профилактической службы.

Микробиология — наука, изучающая строение, жизнедеятельность и экологию микроорганизмов — мельчайших форм жизни растительного или животного происхождения, не видимых невооруженным глазом. Микробиология изучает всех представителей микромира (бактерии, грибы, простейшие, вирусы). По своей сути микробиология является биологической фундаментальной наукой. Для изучения микроорганизмов она использует методы других наук, прежде всего физики, биологии, биоорганической химии, молекулярной биологии, генетики, цитологии, иммунологии. Как и всякая наука, микробиология подразделяется на общую и частную. Общая микробиология изучает закономерности строения и жизнедеятельности микроорганизмов на всех уровнях — молекулярном, клеточном, популяционном; генетику и взаимоотношения их с окружающей средой. Предметом изучения частной микробиологии являются отдельные представители микромира в зависимости от проявления и влияния их на окружающую среду, живую природу, в том числе человека. К частным разделам микробиологии относятся: медицинская, ветеринарная, сельскохозяйственная, техническая (раздел биотехнологии), морская, космическая микробиология.

Многочисленные открытия в области микробиологии, изучение взаимоотношений между макро- и микроорганизмами во второй половине XIX в. способствовали началу бурного развития иммунологии. Вначале иммунология рассматривалась как наука о невосприимчивости организма к инфекционным болезням. В настоящее время она стала общемедицинской и общебиологической наукой. Доказано, что иммунная система служит для защиты организма не только от микробных агентов, но и от любых генетически чужеродных организму веществ с целью сохранения постоянства внутренней среды организма, т.е. гомеостаза.

Иммунология является основой для разработки лабораторных методов диагностики, профилактики и лечения инфекционных и многих неинфекционных болезней, а также разработки иммунобиологических препаратов (вакцин, иммуноглобулинов, иммуномодуляторов, аллергенов, диагностических препаратов). Разработкой и производством иммунобиологических препаратов занимается иммунобиотехнология — самостоятельный раздел иммунологии.

Современная медицинская микробиология и иммунология достигли больших успехов и играют огромную роль в диагностике, профилактике и лечении инфекционных и многих не инфекционных болезней, связанных с нарушением иммунной системы (онкологические, аутоиммунные болезни, трансплантация органов и тканей и др.).

2 Основные этапы развития микробиологии и иммунологии. Работы Л. Пастера, Р. Коха и их значение для развития микробиологии и иммунологии.

Основные этапы развития микробиологии и имунологии.

Историю развития микробиологии можно разделить на пять этапов: эвристический, морфологический, физиологический, иммунологический и молекулярно-генетический.

Пастер сделал ряд выдающихся открытий. За короткий период с 1857 по 1885 г. он доказал, что брожение (молочнокислое, спиртовое, уксуснокислое) не является химическим процессом, а его вызывают микроорганизмы; опроверг теорию самозарождения; открыл явление анаэробиоза, т.е. возможность жизни микроорганизмов в отсутствие кислорода; заложил основы дезинфекции, асептики и антисептики; открыл способ предохранения от инфекционных болезней с помощью вакцинации.

Многие открытия Л. Пастера принесли человечеству огромную практическую пользу. Путем прогревания (пастеризации) были побеждены болезни пива и вина, молочнокислых продуктов, вызываемые микроорганизмами; для предупреждения гнойных осложнений ран введена антисептика; на основе принципов Л. Пастера разработаны многие вакцины для борьбы с инфекционными болезнями.

Однако значение трудов Л. Пастера выходит далеко за рамки только этих практических достижений. Л. Пастер вывел микробиологию и иммунологию на принципиально новые позиции, показал роль микроорганизмов в жизни людей, экономике, промышленности, инфекционной патологии, заложил принципы, по которым развиваются микробиология и иммунология и в наше время.

Л. Пастер был, кроме того, выдающимся учителем и организатором науки.

Работы Л. Пастера по вакцинации открыли новый этап в развитии микробиологии, по праву получивший название иммунологического.

Принцип аттенуации (ослабления) микроорганизмов с помощью пассажей через восприимчивое животное или при выдерживании микроорганизмов в неблагоприятных условиях (температура, высушивание) позволил Л. Пастеру получить вакцины против бешенства, сибирской язвы, куриной холеры; этот принцип до настоящего времени используется при приготовлении вакцин. Следовательно, Л. Пастер является основоположником научной иммунологии, хотя и до него был известен метод предупреждения оспы путем заражения людей коровьей оспой, разработанный английским врачом Э. Дженнером. Однако этот метод не был распространен на профилактику других болезней. Роберт Кох. Физиологический период в развитии микробиологии связан также с именем немецкого ученого Роберта Коха, которому принадлежит разработка методов получения чистых культур бактерий, окраски бактерий при микроскопии, микрофотографии. Известна также сформулированная Р. Кохом триада Коха, которой до сих пор пользуются при установлении возбудителя болезни.

После работ Л. Пастера появилось множество исследований, в которых пытались объяснить причины и механизмы формирования иммунитета после вакцинации. Выдающуюся роль в этом сыграли работы И. И. Мечникова и П. Эрлиха.

Исследования И. И. Мечникова (1845—1916) показали, что большую роль в формировании иммунитета играют особые клетки — макро- и микрофаги. Эти клетки поглощают и переваривают чужеродные частицы, в том числе бактерии. Исследования И. И. Мечникова по фагоцитозу убедительно доказали, что, помимо гуморального, существует клеточный иммунитет. И. И. Мечников, ближайший помощник и последователь Л. Пастера, заслуженно считается одним из основоположников иммунологии. Его работы положили начало изучению иммунокомпетентных клеток как морфологической основы иммунной системы, ее единства и биологической сущности.

3. Микроорганизмы  —  это  организмы,   невидимые невооруженным глазом из-за их незначительных размеров.

Критерий размера — единственный, который их объединяет.

В остальном мир микроорганизмов еще более разнообразен, чем мир макроорганизмов.

2.  Согласно современной систематике, микроорганизмы к 3 царствам:

•  Vira — вирусы;

•  Eucariotae — простейшие и грибы;

•  Procariotae - истинные бактерии, риккетсии, хламидии, мико-плазмы, спирохеты, актиномицеты.

1 Среди основных морфологических форм бактерий различают: • шаровидные {кокковые);

•  палочковидные.

Кокковые бактерии по характеру взаиморасположения делятся:

•  на микрококки - отдельное изолированное расположение;

•  диплококки - сцепленные попарно;

•  тетракокки - сцепленные по четыре;

•  стрептококки — сцепленные в цепочку;

•  сарцины — сцепленные в пакеты по 8, 12, 16 и т. д.;

•  стафилококки — сцепленные беспорядочно в виде виноградной грозди.

Палочковидные бактерии различаются:

•  по форме:

•    правильная — энтеробактерии, псевдомонады;

•    неправильная — коринебактерии;

•  размеру.

•    мелкие - бруцеллы, бордетеллы;

.   средние - бактероиды, кишечная палочка; .   крупные — бациллы, клостридии;

•  форме концов:

•    обрубленные — бациллы;

•    закругленные — сальмонеллы, псевдомонады;

•    заостренные — фузобактерии; утолщенные — коринебактерии;

расположенные поодиночке;

диплобактерии и диплобациллы — сцепленные попарно;

•    стрептобактерии и стрептобациллы — сцепленные в цепочку;

•    извитые формы.

Извитые формы — по характеру и количеству завитков:

•  вибрионы — слегка изогнутые палочки или неполные завитки;

•  спириллы — один или несколько завитков;

•  спирохеты, которые, в свою очередь, делятся:

•    на  лептоспиры   (завитки   с   загнутыми   крючкообразными концами — S-образная форма);

•    боррелии (4—12 неправильных завитков);

•    трепонемы (14—17 равномерных мелких завитков).

4 Основные принципы классификации микробов. Микробы, или микроорганизмы (бактерии, грибы, простейшие, вирусы), систематизированы по их сходству, различиям и взаимоотношениям между собой. Этим занимается специальная наука — систематика микроорганизмов. Систематика включает три части: классификацию, таксономию и идентификацию. В основу таксономии микроорганизмов положены их морфологические, физиологические, биохимические и молекулярно-биологические свойства. Различают следующие таксономические категории: царство, подцарство, отдел, класс, порядок, семейство, род, вид, подвид и др. В рамках той или иной таксономической категории выделяют таксоны — группы организмов, объединенные по определенным однородным свойствам.

Микроорганизмы представлены доклеточными формами (вирусы — царство Vira) и клеточными формами (бактерии, архебактерии, грибы и простейшие). Различают 3 домена (или «империи»): «Bacteria», «Archaea» и «Eukarya»:

□ домен «Bacteria» — прокариоты, представленные настоящими бактериями (эубактериями);

□ домен «Archaea» — прокариоты, представленные архебактериями;

□ домен «Eukarya» — эукариоты, клетки которых имеют ядро с ядерной оболочкой и ядрышком, а цитоплазма состоит из высокоорганизованных органелл — митохондрий, аппарата Гольджи и др. Домен «Eukarya» включает: царство Fungi (грибы); царство животных Animalia (включает прстейшие – подцарство Protozoa); царство растений Plante. Домены включают царства, типы, классы, порядки, семейства, роды, виды.

Вид. Одной из основных таксономических категорий является вид (species). Вид — это совокупность особей, объединенных по близким свойствам, но отличающихся от других представителей рода.

Чистая культура. Совокупность однородных микроорганизмов, выделенных на питательной среде, характеризующихся сходными морфологическими, тинкториальными (отношение к красителям), культуральными, биохимическими и антигенными свойствами, называется чистой культурой.

Штамм. Чистая культура микроорганизмов, выделенных из определенного источника и отличающихся от других представителей вида, называется штаммом. Штамм — более узкое понятие, чем вид или подвид.

Клон. Близким к понятию штамма является понятие клона. Клон представляет собой совокупность потомков, выращенных из единственной микробной клетки.

Для обозначения некоторых совокупностей микроорганизмов, отличающихся по тем или иным свойствам, употребляется суффикс var (разновидность) вместо ранее применявшегося type.

Для бактерий рекомендованы следующие таксономические категории: класс, отдел, порядок, семейство, род, вид. Название вида соответствует бинарной номенклатуре, т. е. состоит из двух слов. Например, возбудитель сифилиса пишется как Treponema pallidum. Первое слово — название рода и пишется с прописной буквы, второе слово обозначает вид и пишется со строчной буквы. При повторном упоминании вида родовое название сокращается до начальной буквы, например: Т. pallidum.

Бактерии относятся к прокариотам, т. е. доядерным организмам, поскольку у них имеется примитивное ядро без оболочки, ядрышка, гистонов, а в цитоплазме отсутствуют высокоорганизованные органеллы (митохондрии, аппарат Гольджи, лизосомы и др.).

Бактерии делят на 2 домена: «Bacteria» и «Archaea».

В домене «Bacteria» можно выделить следующие бактерии:

1) бактерии с тонкой клеточной стенкой, грамотрицательные;

2) бактерии с толстой клеточной стенкой, грамположительные;

3) бактерии без клеточной стенки (класс Mollicutes — микоплазмы)

Архебактерии не содержат пептидогликан в клеточной стенке. Они имеют особые рибосомы и рибосомные РНК (рРНК).

Среди тонкостенных грамотрицательных эубактерий различают:

•  сферические формы, или кокки (гонококки, менингококки, вейлонеллы);

•  извитые формы — спирохеты и спириллы;

•  палочковидные формы, включая риккетсии.

К толстостенным грамположительным эубактериям относят:

•  сферические формы, или кокки (стафилококки, стрептококки, пневмококки);

• палочковидные формы, а также актиномицеты (ветвящиеся, нитевидные бактерии), коринебактерии (булавовидные бактерии), микобактерии и бифидобактерии.

Тонкостенные грамотрицательные бактерии: Менингококки, гонококки, Вейлонеллы, Палочки, Вибрионы, Кампилобактерии, Хеликобактерии, Спириллы, Спирохеты, Риккетсии, Хламидии.

Толстостенные грамположительные бактерии: Пневмококки, Стрептококки, Стафилококки, Палочки, Бациллы, Клостридии, Коринебактерии, Микобактерии, Бифидобактерии, Актиномицеты.

5. Бактериальная клетка состоит из клеточной стенки, цитоплазматической мембраны, цитоплазмы с включениями и ядра, называемого нуклеоидом. Имеются дополнительные структуры: капсула, микрокапсула, слизь, жгутики, пили. Некоторые бактерии в неблагоприятных условиях способны образовывать споры.

Клеточная стенка. В клеточной стенке грамположительных бактерий содержится небольшое количество полисахаридов, липидов, белков. Основным компонентом толстой клеточной стенки этих бактерий является многослойный пептидогликан (муреин, мукопептид), составляющий 40-90 % массы клеточной стенки. С пептидогликаном клеточной стенки грамположительных бактерий ковалентно связаны тейхоевые кислоты (от греч. teichos — стенка).

В состав клеточной стенки грамотрицательных бактерий входит наружная мембрана, связанная посредством липопротеина с подлежащим слоем пептидогликана. На ультратонких срезах бактерий наружная мембрана имеет вид волнообразной трехслойной структуры, сходной с внутренней мембраной, которую называют цитоплазматической. Основным компонентом этих мембран является бимолекулярный (двойной) слой липидов. Внутренний слой наружной мембраны представлен фосфолипидами, а в наружном слое расположен липополисахарид.

Функции клеточной стенки:
1. Обусловливает форму клетки.
2. Защищает клетку от механических повреждений извне и выдерживает значительное внутреннее давление.
3. Обладает свойством полупроницаемости, поэтому через нее избирательно проникают из среды питательные вещества.
4. Несет на своей поверхности рецепторы для бактериофагов и различных химических веществ.

Метод выявления клеточной стенки - электронная микроскопия, плазмолиз.

L-формы бактерий, их медицинское значение
L-формы - это бактерии, полностью или частично лишенные клеточной стенки (протопласт +/- остаток клеточной стенки), поэтому имеют своеобразную морфологию в виде крупных и мелких сферических клеток. Способны к размножению.

Цитоплазматическая мембрана располагается под клеточной стенкой (между ними - периплазматическое пространство). По строению является сложным липидобелковым комплексом, таким же, как у клеток эукариот (универсальная мембрана).

Функции цитоплазматической мембраны:
1. Является основным осмотическим и онкотическим барьером.
2. Участвует в энергетическом метаболизме и в активном транспорте питательных веществ в клетку, так как является местом локализации пермеаз и ферментов окислительного фосфорилирования.
3. Участвует в процессах дыхания и деления.
4. Участвует в синтезе компонентов клеточной клетки (пептидогликана).
5. Участвует в выделении из клетки токсинов и ферментов.

Цитоплазматическая мембрана выявляется только при электронной микроскопии.

6.   Многие бактерии имеют жгутики, количество и расппппжение которых у разных родов неодинаково:

•  монотрихии имеют только один жгутик (род Vibrio);

•  лофотрихии — пучок жгутиков на одном полюсе клетки (род Pseudomonas);

•  у амфитрихов жгутики (один или пучок) расположены на обоих полюсах клетки (род Spirillum);

•  у перитрихов — по всей поверхности (род Escherichia, Salmonella). По своему строению жгутики представляют собой спирально закрученные нити, состоящие из специфического белка флагелли-на, который по своей структуре относится к сократительным белкам типа миозина.

При окраске по Граму жгутики не видны. Изучать подвижность бактерии можно как с помощью микроскопических методов (фазово-контрастная микроскопия препаратов "висячая" или "раздавленная" капля), так и посевом — уколом в полужидкий агар или специальную среду (среду Пешкова).

3.  На поверхности ряда бактерий обнаружены белковые образования — ворсинки (фимбрии, пили).

Фимбрии отходят от поверхности клетки и состоят из белка, называемого пилином.

Различают более 60 видов ворсинок, из которых наиболее изучены следующие:

•  F-pili — половые пили;

•  common pili — пили, ответственные за адгезию.

4.  Капсула бактерий — это утолщенный наружный слой клеточной стенки.

Капсулы могут быть построены из полисахаридов (пневмококк) или белков (возбудитель сибирской язвы).

Большинство бактерий, особенно патогенных, образует капсулу только в организме человека или животных. Однако существует род истинно капсулъных бактерий (Klebsiella), представители которого образуют капсулу и при культивировании на искусственных питательных средах.

Некоторые бактерии могут иметь микрокапсулу, выявляемую только при электронной микроскопии (эшерихии), или неявно выраженную способность к капсулообразованию — так называемую "нежную" капсулу (золотистые стафилококки, менингококки).

Основное предназначение капсул — зашита бактерий от фагоцитоза.

При окраске мазков по Граму истинно капсульные бактерии имеют характерное взаиморасположение (на расстоянии друг от друга). При световой микроскопии капсулы четко не видны, в связи с чем наличие капсул у бактерий выявляется с помощью специальных методов окраски, например по методу Гимзе. Для выявления капсул и бактерий, образующих их в организме, используют микроскопию мазков, приготовленных из патологического материала, или мазков-отпечатков из органов погибших животных.

7  Бактериальные клетки не имеют специальных органов питания, т. е. являются голофитными.

Поступление питательных веществ в микробную клетку может происходить за счет:

•  осмоса и диффузии по градиенту концентрации без затрат энергии;

•  пассивного   транспорта,   который   также   осуществляется   по градиенту концентрации с помощью белков-переносчиков, но без затрат клеткой энергии, и отличается от диффузии большей скоростью;

•  активного транспорта, который идет против градиента концентрации с затратой энергии и возможным частичным расщеплением   субстрата,   осуществляется   белками-переносчиками или ферментами — пермеазами.

По источникам углерода, необходимого для построения биополимеров, бактерии делятся на следующие группы:

•  автотрофы — микроорганизмы, которые используют как единственный источник углерода углекислый газ и не нуждаются в сложных органических соединениях;

•  гетеротрофы — микроорганизмы, которые используют в качестве источника углерода разнообразные органические углеро-досодержащие  соединения   (углеводы,   углеводороды,   аминокислоты,  органические  кислоты)  как биологического, так и небиологического происхождения.

В зависимости от источника получения энергии микроорганизмы делятся:

•  на фототрофные, способные использовать солнечную энергию,

•  хемотрофные, получающие энергию за счет окислительно-восстановительных реакций.

В зависимости от природы доноров электронов:

•  фототрофные литотрофы;

•  хемотрофные литотрофы — использующие в качестве доноров электронов неорганические соединения;

•  фото- и хемоорганотрофы — использующие только органические соединения.   К  последним  принадлежит значительное  большинство бактерий, в том числе патогенные для человека виды. По источникам азота:

•  азотфиксирующие микроорганизмы — способны усваивать молекулярный азот атмосферы;

•  микроорганизмы, ассимилирующие неорганический азот:

•    солей аммония — аммонифицирующие;

•    нитратов — нитратредуцирующие;

•    нитритов — нитритредуцирующие.

Однако большинство патогенных для человека микроорганизмов способны ассимилировать только азот органических соединений.

Микроорганизмы, способные синтезировать все необходимые им органические соединения (углеводы, аминокислоты и др.) из указанных компонентов, называются прототрофами.

Микроорганизмы, неспособные синтезировать какое-либо из необходимых соединений и ассимилирующие их в готовом виде из окружающей среды или организма хозяина (человека, животного), называются ауксотрофами по этому соединению. Чаще всего ими являются патогенные или условно-патогенные для человека микроорганизмы.

8.

Метаболизм (обмен веществ) бактерий представляет собой совокупность 2 взаимосвязанных противоположных процессов: катаболизма и анаболизма.

Катаболизм (диссимиляция) — распад веществ в процессе ферментативных реакций и накопление выделяемой при этом энергии в молекулах АТФ.

Анаболизм (ассимиляция) — синтез веществ с затратой энергии. Особенности метаболизма у бактерий состоят в том, что:

•  его интенсивность имеет достаточно высокий уровень, что возможно обусловлено гораздо большим соотношением поверхности к единице массы, чем у многоклеточных;

•  процессы диссимиляции преобладают над процессами ассимиляции;

•  субстратный спектр потребляемых бактериями веществ очень широк — от углекислого газа, азота, нитритов, нитратов до органических соединений, включая антропогенные вещества — загрязнители окружающей среды (обеспечивая тем самым процессы ее самоочищения);

•  бактерии имеют очень широкий набор различных ферментов — это также способствует высокой интенсивности метаболических процессов и широте субстратного спектра.

Ферменты бактерий по локализации делятся на 2 группы:

•  экзоферменты — ферменты бактерий, выделяемые во внешнюю среду и действующие на субстрат вне клетки (протеазы, полисахариды, олигосахаридазы);

•  эндоферменты — ферменты бактерий, действующие на субстраты внутри клетки (расщепляющие аминокислоты, моносахара, синтетазы).

Синтез ферментов генетически детерминирован, но регуляция их синтеза идет за счет прямой и обратной связи, т. е. для одних — репрессируется, а для других — индуцируется субстратом. Ферменты, синтез которых зависит от наличия соответствующего субстрата в среде (бета-галактозидаза, бета-лактамаза), называются индуцибельными.

Другая группа ферментов, синтез которых не зависит от наличия субстрата в среде, называется конститутивными (ферменты гликолиза). Их синтез имеет место всегда, и они всегда содержатся в микробных клетках в определенных концентрациях. Изучают метаболизм бактерий с помощью физико-химических и биохимических методов исследования в процессе культивирования бактерий в определенных условиях на специальных питательных средах, содержащих то или иное соединение в качестве субстрата для трансформации.

Такой подход позволяет судить об обмене веществ путем более , детального изучения процессов различных видов обмена (белков, углеводов) у микроорганизмов.

9. Дыхание, или биологическое окисление, основано на окислительно-восстановительных реакциях, идущих с образованием АТФ-универсального аккумулятора химической энергии. Энергия необходима микробной клетке для ее жизнедеятельности. При дыхании происходят процессы окисления и восстановления: окисление — отдача донорами (молекулами или атомами) водорода или электронов; восстановление — присоединение водорода или электронов к акцептору. Акцептором водорода или электронов может быть молекулярный кислород (такое дыхание называется аэробным) или нитрат, сульфат, фумарат (такое дыхание называется анаэробным — нитратным, сульфатным, фумаратным).

Анаэробиоз (от греч. аег — воздух + bios — жизнь) — жизнедеятельность, протекающая при отсутствии свободного кислорода. Если донорами и акцепторами водорода являются органические соединения, то такой процесс называется брожением. При брожении происходит ферментативное расщепление органических соединений, преимущественно углеводов, в анаэробных условиях. С учетом конечного продукта расщепления углеводов различают спиртовое, молочнокислое, уксуснокислое и другие виды брожения.

По отношению к молекулярному кислороду бактерии можно разделить на три основные группы: облигатные, т.е. обязательные, аэробы, облигатные анаэробы и факультативные анаэробы.

Синтез биополимеров бактериальной клетки требует энергии. Она образуется в ходе биологического окисления и запасается в виде молекул макроэргов — АТФ и АДФ.

Органеллами дыхания у большинства бактерий являются производные цитоплазматической мембраны — мезосомы, на которых локализуются специальные дыхательные ферменты типа цитохромоксидаз. Тип биологического окисления является одним из ключевых признаков, позволяющих дифференцировать различные микроорганизмы. По этому признаку выделяют 3 группы бактерий:

• 1-я группа — облигатные аэробы, которые способны получать энергию только путем дыхания и нуждаются в молекулярном кислороде как конечном акцепторе электронов. Для них как тип окислительно-восстановительных процессов характерно окисление, при котором конечным акцептором электронов является кислород;

•  2-я группа - облигатные анаэробы — бактерии, способные расти только в среде, лишенной кислорода. Для них как тип окислительно-восстановительных процессов характерна ферментация, при  которой  происходит  перенос  электронов  от субстрата-донора к субстрату-акцептору;

•  3-я группа - факультативные анаэробы — бактерии, способные расти как в присутствии, так и в отсутствие кислорода и использовать в качестве терминальных акцепторов электронов как молекулярный кислород, так и органические соединения. Среди них могут быть:

•    факультативно-анаэробные   бактерии,   способные   переключаться с окисления на ферментацию (энтеробактерии);

•    аэротолерантные  факультативно-анаэробные  бактерии,  которые могут расти в присутствии атмосферного кислорода, но не используют его, а получают энергию исключительно с помощью брожения (молочнокислые бактерии).

10.Жизнедеятельность бактерий характеризуется ростом — формированием структурно-функциональных компонентов клетки и увеличением самой бактериальной клетки, а также размножением — самовоспроизведением, приводящим к увеличению количества бактериальных клеток в популяции.

Бактерии размножаются путем бинарного деления пополам, реже путем почкования. Актиномицеты, как и грибы, могут размножаться спорами. Актиномицеты, являясь ветвящимися бактериями, размножаются путем фрагментации нитевидных клеток. Грамположительные бактерии делятся путем врастания синтезирующихся перегородок деления внутрь клетки, а грамотрицательные — путем перетяжки, в результате образования гантелевид-ных фигур, из которых образуются две одинаковые клетки.

Делению клеток предшествует репликация бактериальной хромосомы по полуконсервативному типу (двуспиральная цепь ДНК раскрывается и каждая нить достраивается комплементарной нитью), приводящая к удвоению молекул ДНК бактериального ядра — нуклеоида.

Репликация ДНК происходит в три этапа: инициация, элонгация, или рост цепи, и терминация.

Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в определенный, не изменяющийся объем питательной среды, размножаясь, потребляют питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют периодическим культивированием, а культуру — периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование называется непрерывным, а культура — непрерывной.

При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный, диффузный или поверхностный (в виде пленки) рост культуры.

 Споры бактерий представляют собой бактериальные клетки в состоянии анабиоза и образуются при неблагоприятных условиях внешней среды.

Располагаются внутри клетки терминально, субтерминально или центрально.

Спорообразуюише палочки называются бациллами. В проиессе спорообразования клетка почти полностью теряет воду, сморщивается, клеточная стенка уплотняется. Появляется новое вещество — дипиколинат кальция, которое образует комплексы с биополимерами клетки, устойчивые к действию температуры и ультрафиолетовых лучей.

В окружающей среде споры бактерий могут сохраняться годами, но при попадании в благоприятные условия спора впитывает влагу, комплексы распадаются, дипиколинат разрушается, и спора превращается в вегетативную клетку. Таким образом, спору следует рассматривать не как способ размножения, а только как форму существования бактериальной клетки в неблагоприятных условиях.

Преобразования идут по следующей схеме: 1 клетка — 1 спора — 1 клетка, т. е. увеличения количества бактериальных клеток не происходит.

Спорообразование характерно в основном для грамположитель-ных бактерий.

У грамотрицателъных бактерий эквивалентом спорообразования является переход в так называемое некультивируемое состояние. В такой форме они также длительно сохраняются в окружающей среде.

При использовании окраски по Граму споры не воспринимают красителей, поэтому на окрашенном фоне они бесцветны. Окрашиваются споры с помощью специальных методов окраски, например по Ожешко или Клейну.

11,12, 14

Методы исследования в микробиологии. Принципы организации, аппаратура и режим работы бактериологической, вирусологической, иммунологической лабораторий. Общие правила взятия, хранения и пересылки материала при микробиологических исследованиях.

Бактериоскопический (микроскопический) метод исследования – совокупность способов изучения морфологических и тинкториальных свойств МБ в исследуемом материале с помощью микроскопии.

Основные цели: 1) установление этиологии болезни 2) морфологическая идентификация возбудителя 3) определение чистоты выделенной чистой культуры.

 Оценка метода: метод простой, широко доступный, быстрый, экономичный, но мало чувствителен, мало специфичен (морфология МБ разных видов часто схожа) и небезопасен.  

Культуральный (бактериологический) метод исследования - совокупность способов, направленных на выделение и идентификацию чистых культур микроорганизмов (бактерий) с помощью культивирования на питательных средах.

Биологический (экспериментальный) метод исследования - совокупность способов искусственного воспроизведения клинической картины инфекционных болезней или их синдромов на лабораторных животных.

Молекулярно-генетические методы исследования:

 Молекулярная гибридизация - процесс, в котором одноцепочечная НК исследуемого микроорганизма (мишень) при взаимодействии с комплементарным фрагментом НК., включающей метку (зонд), образует двухцепочечный комплекс.

 Назначение метода: выявление степени сходства различных ДНК.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) - что способ быстрого получения множественных копий специфической последовательности ДНК бактерий, грибов, вирусов до количества, достаточного для идентификации другими молекулярно-биологическими методами.  

ТРАНСПОРТИРОВКА:

  Образцы материала собирают в стерильную посуду, которую маркируют, помещают в специальные биксы или пеналы и направляют в лабораторию.

   В сопроводительном документе (направлении) приводят сведения о характере материала, времени его взятия, данные о больном, включающие предполагаемый клинический диагноз и перечисление антибиотиков, использованных в лечении, указывают название учреждения, отделения, направляющего материал.

   Транспортировку материала для исследования осуществляют в предельно сжатые сроки. Охлаждение материала в холодильнике при t° 4° (или на льду) позволяет увеличить время до начала исследования на 30—60 мин. Более длительное хранение может привести к гибели возбудителей или изменению количественных соотношений частей микрофлоры.     Поэтому в случаях, когда хранение и транспортировка длятся более суток, используют консервант или транспортные (поддерживающие, накопительные) среды и специальные средства, сохраняющие жизнедеятельность микроорганизмов.

БАКТЕРИОЛ. ЛАБ. при лечебно-профилактических учреждениях выполняют анализы, необходимые для постановки и уточнения диагноза инфекционного заболевания, способствуя правильному выбору специфического лечения и определению сроков выписки больного из инфекционной больницы. Предметом для исследования в бактериологических лабораториях являются:

- выделения из организма человека: моча, кал, мокрота, гной, а также кровь, спинномозговая жидкость и трупный материал;

- объекты внешней среды: вода, воздух, почва, продукты питания, смывы с предметов инвентаря, рук и т. п.

  В состав бактериологической лаборатории входят: лабораторные комнаты для бактериологических исследований и подсобные помещения; автоклавная или стерилизационная для обеззараживания отработанного материала и заражённой посуды; моечная, оборудованная для мытья посуды; средоварочная для приготовления, розлива, стерилизации и хранения питательных сред; виварий для содержания подопытных животных; материальная для хранения запасных реактивов, посуды, аппаратуры и хозяйственного инвентаря.

  В лаборатории имеется место для окраски микроскопических препаратов, где находятся растворы красок, спирт, кислоты, фильтровальная бумага и пр. Каждое рабочее место снабжено газовой горелкой или спиртовкой и банкой с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми питательными средами, химическими реактивами, диагностическими препаратами и другими лабораторными материалами.

Аппаратура для выращивания микроорганизмов, стерилизации и других микробиологических целей

1. Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоянная температура. Оптимальная температура для размножения многих микроорганизмов 37°С. Термостаты бывают суховоздушными и водяными. Используются для культивирования микроорганизмов.

2. Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях.

3. Сушильный шкаф (печь Пастера). Предназначен для стерилизации лабораторной посуды и других материалов.

4. Автоклав. Предназначен для стерилизации паром под давлением. В микробиологических лабораториях используются автоклавы разных моделей (вертикальные, горизонтальные, стационарные, переносные).

5. Холодильники. Используются в микробиологических лабораториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, вакцин, сывороток и прочих биологически активных препаратов при температуре около 4°С. Для сохранения биопрепаратов при температуре ниже 0°С используются низкотемпературные холодильники, в которых поддерживается температура -20°С и ниже.

13. Методы окраски. Окраску мазка производят простыми или сложными методами. Простые заключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение. Отношение микроорганизмов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые). Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кислые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.

Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.

Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по Ауески, Нейссера, Бури-Гинса.

Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. Основана на явлении фотолюминесценции.

Люминесценция — свечение веществ, возникающее после воздействия на них каких-либо источников энергии: световых, электронных лучей, ионизирующего излучения. Фотолюминесценция — люминесценция объекта под влиянием света. Если освещать люминесцирующий объект синим светом, то он испускает лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В результате возникает цветное изображение объекта.

Темнопольная микроскопия. Микроскопия в темном поле зрения основана на явлении дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости мельчайших частиц (эффект Тиндаля). Эффект достигается с помощью параболоид- или кардиоидконденсора, которые заменяют обычный конденсор в биологическом микроскопе .

Фазово-контрастная   микроскопия.   Фазово-контрастное  приспособление дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объекты. Они приобретают высокую контрастность изображения, которая может быть позитивной или негативной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изображение объекта в светлом поле зрения, негативным — светлое изображение объекта на темном фоне.

Для фазово-контрастной микроскопии используют обычный микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устройство, а также специальные осветители.

Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмикроскопических объектов.    И стр.9 практикум

15.    стр. 15 практикума

16.  стр. 15 практикум

17. стр. 16 ,18практикум

18. Идентификация бактерий по ферментативной активности.

Наиболее часто определяют ферменты класса гидролаз и оксидоредуктаз, используя специальные методы и среды.

Для определения протеолитической активности микроорганизмы засевают в столбик желатина уколом. Через 3—5 дней посевы просматривают и отмечают характер разжижения желатина. При разложении белка некоторыми бактериями могут выделяться специфические продукты — индол, сероводород, аммиак. Для их определения служат специальные индикаторные бумажки, которые помещают между горлышком и ватной пробкой в пробирку с МПБ или (и) пептонной водой, засеянными изучаемыми микроорганизмами. Индол (продукт разложения триптофана) окрашивает в розовый цвет полоску бумаги, пропитанной насыщенным раствором щавелевой кислоты. Бумага, пропитанная раствором ацетата свинца, в присутствии сероводорода чернеет. Для определения аммиака используют красную лакмусовую бумажку.

Для многих микроорганизмов таксономическим признаком служит способность разлагать определенные углеводы с образованием кислот и газообразных продуктов. Для выявления этого используют среды Гисса, содержащие различные углеводы (глюкозу, сахарозу, мальтозу, лактозу и др.). Для обнаружения кислот в среду добавлен реактив Андреде, который изменяет свой цвет от бледно-желтого до красного в интервале рН 7,2—6,5, поэтому набор сред Гисса с ростом микроорганизмов называют «пестрым рядом».

Для обнаружения газообразования в жидкие среды опускают поплавки или используют полужидкие среды с 0,5% агара.

Для того чтобы определить интенсивное кислотообразование, характерное для брожения смешанного типа, в среду с 1% глюкозы и 0,5% пептона (среда Кларка) добавляют индикатор метиловый красный, который имеет желтый цвет при рН 4,5 и выше, и красный —при более низких значениях рН.

Гидролиз мочевины определяют по выделению аммиака (лакмусовая бумажка) и подщелачиванию среды.

При идентификации многих микроорганизмов используют реакцию Фогеса — Проскауэра на ацетоин — промежуточное соединение при образовании бутандиола из пировиноградной кислоты. Положительная реакция свидетельствует о наличии бутандиолового брожения.

Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться сразу же после смешивания микробных клеток с 1 % раствором перекиси водорода.

Для определения цитохромоксидазы применяют реактивы: 1) 1% спиртовый раствор сс-нафтола-1; 2) 1% водный раствор N-диметил-р-фенилендиамина дигидро-хлорида. О наличии цитохромоксидазы судят по синему окрашиванию, появляющемуся через 2—5 мин.

Для определения нитритов используют реактив Грисса: Появление красного окрашивания свидетельствует о наличии нитритов.С целью выявления эпидемической цепочки заболевания, в т. ч. для обнаружения источника инфекции, осуществляют внутривидовую идентификацию бактерий, к-рая заключается в определении фаготипа (фаговара), изучении антигенных и других свойств выделенных бактерий. Определение фаготипа - фаготипирование производят при стафилококковой инфекции, брюшном тифе, паратифе В.

Фаготипирование — один из методов эпидемиологического маркирования. Применяется для выявления источника инфекции. Выделение бактерий одного фаговара от разных больных указывает на общий источник их заражения. Предварительно фаготируется.

При внутривидовой идентификации бактерий, т. е. при определении фаговара (фаготипа) бактерий с помощью фаготи-пирования, на чашку с плотной питательной средой, засеянную чистой культурой возбудителя в виде «газона», наносят капли различных диагностических типоспецифических фагов. Бактерии, чувствительные к фагу, лизируются (образуется стерильное пятно, «бляшка» или так называемая негативная колония фага).

На засеянные «газоном» стафилококки наносятся капли взвеси стафилококковых бактериофагов. Через сутки после инкубации в термостате видны стерильные зоны отсутствия роста бактерий (стерильные «бляшки») в результате размножения бактериофагов, вызывающих лизис этих бактерий.

19,20 1.Важнейшими признаками живых организмов являются изменчивость и наследственность.

Основу наследственного аппарата бактерий, как и всех других организмов, составляет ДНК (у РНК-содержащих вирусов — РНК).

Наряду с этим наследственный аппарат бактерий и возможности его изучения имеют ряд особенностей:

бактерии — гаплоидные организмы, т. е. они имеют 1 хромосому. В связи с этим при наследовании признаков отсутствует явление доминантности;

• бактерии обладают высокой скоростью размножения, в связи с чем за короткий промежуток времени (сутки) сменяется несколько десятков поколений бактерий. Это дает возможность изучать огромные по численности  популяции  и достаточно легко выявлять даже редкие по частоте мутации. Наследственный аппарат бактерий представлен хромосомой. У бактерий она одна. Если и встречаются клетки с 2, 4 хромосомами, то они одинаковые.

Хромосома бактерий — это молекула ДНК. Длина этой молекулы достигает 1,0 мм и, чтобы "уместиться" в бактериальной клетке, она не линейная, как у эукариотов, а суперспирализо-вана в петли и свернута в кольцо. Это кольцо в одной точке прикреплено к цитоплазматической мембране. На бактериальной хромосоме располагаются отдельные гены. У кишечной палочки, например, их более 2 тыс.

2. Генотип (геном) бактерий представлен не только хромосомными генами. Функциональными единицами генома бактерий, кроме хромосомных генов, являются:

•  IS-последовательности;

•  транспозоны;

•  плазмиды.

IS-последовательности — короткие фрагменты ДНК. Они не несут структурных (кодирующих тот или иной белок) генов, а содержат только гены, ответственные за транспозицию (способность IS-последовательностей перемещаться по хромосоме и встраиваться в различные ее участки). IS-последовательности одинаковы у разных бактерий. Транспозоны — это молекулы ДНК, более крупные, чем IS-последовательности.  Помимо генов,  ответственных за транспозицию, они содержат и структурный ген, кодирующий тот или иной признак.

Транспозоны легко перемещаются по хромосоме. Их положение сказывается на экспрессии как их собственных структурных генов, так и соседних хромосомных. Транспозоны могут существовать и вне хромосомы, автономно, но неспособны к автономной репликации.

Плазмиды — кольцевые суперспиралевидные молекулы ДНК. Их молекулярная масса колеблется в широких пределах и может быть в сотни раз больше, чем у транспозонов.

Плазмиды содержат структурные гены, наделяющие бактериальную клетку разными, весьма важными для нее свойствами:

•  R-плазмиды — лекарственной устойчивостью;

•  Col-плазмиды — способностью синтезировать колицины;

•  F-плазмиды — передавать генетическую информацию;

•  Шу-плазмиды — синтезировать гемолизин;

•  Тох-плазмиды — синтезировать токсин;

•  плазмиды биодеградации —  разрушать тот или  иной субстрат и т. д.

Плазмиды могут быть интегрированы в хромосому (в отличие от IS-последовательностей и транспозонов, встраиваются в строго определенные участки), а могут существовать автономно. В этом .случае они обладают способностью к автономной репликации, и именно поэтому в клетке может быть 2, 4, 8 копий такой плазмиды.

Многие плазмиды имеют в своем составе гены трансмиссивности и способны передаваться от одной клетки к другой при конъюгации (обмене генетической информацией). Такие плазмиды называются трансмиссивными.

3.  Наличие F-плазмиды (фактор фертилъности, половой фактор)

придает бактериям функции донора, и такие клетки способны передавать свою генетическую информацию другим, F-клеткам. Можно сказать, что наличие F-плазмиды является фенотипиче-ским выражением (проявлением) пола у бактерий: с F-плазмидой связана не только донорская функция, но и некоторые другие фенотипические признаки — наличие F-пилей (половых ресничек) и чувствительность к L-фагам. С помощью F-ресничек устанавливается контакт между донорскими и реципиентными клетками. Через их канал и передается донорская ДНК при рекомбинации. На половых ресничках расположены рецепторы для мужских fj-фагов. F-клетки не имеют таких рецепторов и нечувствительны к таким фагам.

4.  У бактерий различают 2 вида изменчивости — фенотипическую и генотипическую.

Фенотипическая изменчивость — модификация — не затрагивает генотип, но затрагивает большинство особей популяции. Модификации не передаются по наследству и с течением времени затухают, т. е. возвращаются к исходному фенотипу через большее (длительные модификации) или меньшее (кратковременные модификации) число поколений.

Генотипическая изменчивость затрагивает генотип. В ее основе лежат мутации и рекомбинации.

Мутации бактерий принципиально не отличаются от мутаций эукариотических клеток. Особенностью мутаций у бактерий является относительная легкость их выявления, так как имеется возможность работать с большими по численности популяциями бактерий. По происхождению мутаиии могут быть:

•  спонтанными;

•  индуцированными. По протяженности:

•  точечными;

•  генными;

•  хромосомными. По направленности:

- прямыми;

- обратными.

Рекомбинации (обмен генетическим материалом) у бактерий отличаются от рекомбинаций у эукариот:

•  у бактерий имеется несколько механизмов рекомбинаций;

•  при рекомбинациях у бактерий образуется не зигота, как у эукариот, а мерозигота (несет полностью генетическую информацию реципиента и часть генетической информации донора в виде дополнения);

•  у  бактериальной  клетки-рекомбината  изменяется   не  только качество, но и количество генетической информации. Трансформация — это обмен генетической информацией у бактерий путем введения в бактериальную клетку-реципиент готового препарата ДНК (специально приготовленного или непосредственно выделенного из клетки-до нора). Чаще всего передача генетической информации происходит при культивировании реципиента на питательной среде, содержащей ДНК донора. Для восприятия донорской ДНК при трансформации клетка-реципиент должна находиться в определенном физиологическом состоянии (компетентности), которое достигается специальными методами обработки бактериальной популяции.

При трансформации передаются единичные (чаще 1) признаки. Трансформация является самым объективным свидетельством связи ДНК или ее фрагментов с тем или иным фенотипическим признаком, поскольку в реципиентную клетку вводится чистый препарат ДНК.

Трансдукция — обмен генетической информацией у бактерий путем передачи ее от донора к реципиенту с помощью умеренных (трансдуцирующих) бактериофагов.

Трансдуцирующие фаги могут переносить 1 или более генов (признаков). Трансдукиия бывает:

•  специфической — переносится всегда один и тот же ген;

•  неспецифической — передаются разные гены.

Это связано с локализацией трансдуиируюших фагов в геноме донора:

•  в случае специфической трансдукции они располагаются всегда в одном месте хромосомы;

•  при неспецифической их локализация непостоянна. Конъюгация — обмен генетической информацией у бактерий путем передачи ее от донора к реципиенту при их прямом контакте. После образования между донором и реципиентом конъюга-ционного мостика одна нить ДНК-донора поступает по нему в клетку-реципиент. Чем дольше контакт, тем большая часть донорской ДНК может быть передана реципиенту.

Основываясь на прерывании конъюгации через определенные промежутки времени, можно определить порядок расположения генов на хромосоме бактерий — построить хромосомные карты бактерий (произвести картирование бактерий).

Донорской функцией обладают F+-клетки.

21 Молекулярно-генетические методы исследования (молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция): определение, материал для исследования, этапы проведения, области применения.

I. Молекулярная гибридизация - процесс, в котором одноцепочечная НК исследуемого микроорганизма (мишень) при взаимодействии с комплементарным фрагментом НК., включающей метку (зонд), образует двухцепочечный комплекс.

 Назначение метода: выявление степени сходства различных ДНК.

Применяется для идентификации микроорганизмов, особенно тех, которые трудно и медленно растут (микоплазмы. хламидии. вирусы )

  Материал для исследования:

гной; кровь; отделяемое из уретры: моча, испражнении, биопунктаты тканей и органов: объекты окружающей среды (вода, почта).

Методы гибридизации:

- в растворе,

- на фильтре,

- на стекле.

Зонд - это двухцепочечные или одноцепочечные фрагменты ДНК меченые затонной, флюорисцентной или ферментной.

II. ПЦР (полимеразная цепная реакция) - что способ быстрого получения множественных копий специфической последовательности ДНК бактерий, грибов, вирусов до количества, достаточного для идентификации другими молекулярно-биологическими методами  Назначение:

• индикация микроорганизмов в объектах внешней среды, пищевых продуктов, материале от больных,

• идентификация микроорганизмов.

• генетическое типирование,

• выявление генов вирулентности.

Материал для исследования: тот же.

Основные компоненты:

• исследуемая проба ДНК;

• смесь ДНТФ (дезоксинуклеотидтрифосфат),

• достраивание с помощью ДНК - полимеразы:

• праймеры - синтетические фрагменты ДНК;

• специфический буфер;

• минеральное масло;

• мембрана.

22 Экология микроорганизмов. Экологические понятия. Типы экологических связей микроорганизмов. Роль микробов в возникновении и развитии биосферы (концепция микробной доминанты). Распространение микробов в природе.  

Экология микроорганизмов - раздел общей экологии, изучающий место обитания микроорганизмов и их взаимоотношения друг с другом, c биогенными и абиогенными

факторами внешней среды.

 Понятия из области экологии:

 Популяция – совокупность особей того или иного вида, обитающих в определенном биотопе

 Биотоп – территориально ограниченный участок с одинаковыми условиями жизни  

 Биоценоз – совокупность популяций разных видов, обитающих в том или ином биотопе.

 Микробиоценоз – совокупность популяций микроорганизмов, обитающих в том или ином биотопе.

 Экосистема – система, состоящая из биотопа и биоценоза. Основная единица в экологии.

 Биосфера – сумма всех экосистем, живая оболочка планеты.

Характеристика популяций:

 Статические показатели:

-Численность

-Плотность

 Динамические показатели:

-Рождаемость (прирост в ед. времени)

-Смертность (гибель)

Взаимодействие популяций (экологические связи):

 Внутривидовые – направлены на сохранение вида, увеличение его численности и ареала и поэтому носят в основном симбиотический характер

 Межвидовые:

1. (00) – взаимодействие, или нейтрализм

2. (0+) – взаимодействие, или комменсализм

3. (0–) – взаимодействие, или аменсализм

4. (++) – взаимодействие:

  Мутуализм – не могут существовать друг без друга

  Протокооперация – не является остро необходимым

5. (+–) – взаимодействие:

 Хищничество

 Паразитизм

6. (– –) – взаимодействие, или конкуренция

Основное положение экологии микроорганизмов - концепция о доминировании

микроорганизмов в создании биосферы и её жизнедеятельности (концепция микробной доминанты).

Количество биомассы прокариотов в природных субстратах планеты – 74,5 млрд. т.,

других «живых» организмов – 57,05:

55,0 – растения

0,55 – животные

1,5 – водоросли и простейшие

Экологические среды:

- Гидросфера – водоемы

- Гео(лито)сфера – почва

- Атмосфера – воздух

- Антропогенные среды:

 -Жилище

 -Одежда

 -Продукты

 -Химические препараты, в.т. лекарственные и т.д.

23 Нормальная микрофлора тела человека, её значение и методы изучения.

Микрофлора тела человека:

- Интегральная часть организма хозяина

- Формируется в организме в процессе его развития

- Основа нормальной микрофлоры – облигатно анаэробные бактерии (более 400 видов)

- Количественный и качественный состав нормальной микрофлоры большинства биотопов специфичен и обладает тенденцией к аутостабилизации

 Микрофлора человека:

- Специфические для данного биотопа виды (аутохтонная)

- Виды – иммигранты их других биотопов хозяина (аллохтонная)

- Виды – иммигранты из биотопов среды (заносная микрофлора)

Значение норм. микрофлоры:

Эволюционно сложившиеся отношения человека и его нормальной микрофлоры играют важную роль в функционировании организма:

- Антагонистическая роль (большинство аутохтонных МИО)

- Синтез витаминов группы В и К, рибофлавина, никотиновой кислоты

- Способствует всасыванию ионов кальция, железа и витамина D из кишечника

- Участие в обмене липидов, нейтральных жиров, жирных кислот, разложении желчных кислот

- Активация перистальтики кишечника (участие в отдельных процессах сложного обмена белка с образованием индола, скатола, фенола)

- Участие в детоксикации попадающих ксенобиотиков и образующихся токсических продуктов метаболизма путем биосорбции или трансформации

- Иммунизирующие свойства – способствует организации и созреванию иммунной системы.

24-27. стр 16 практикум

28

Эволюция микроорганизмов и инфекционных заболеваний.    

  Эволюция микробов - подчиняется общим закономерностям эволюции органического мира, впервые разработанным Чарльзом Дарвином и развитым авторами современной синтетической теории эволюции. Главной особенностью Э.м является то, что они возникли тогда, когда др. органических форм на Земле не было Прямые находки ископаемых микробов относят к периоду 3,6 -3,8x10^9 лет назад. Многоклеточные организмы возникли спустя 3 млрд лет.    Предполагается, что за эти 3 млрд лет на модели микроорганизмов были «отработаны» главные условия существования и развития органических форм материи: морфологическая и хим. структура, главные пути обмена веществ и энергии, механизмы наследственности, изменчивости и эволюции, основные закономерности взаимодействия живых организмов между собой и с окружающей неживой средой.

 По современным представлениям, микробы сыграли ведущую роль в переходе Земли из восстановительного периода в окислительный, в формировании первичных экосистем и биосферы в целом и механизмов поддержания местного и глобального экологического баланса. Исследования показывают, что Э. м. подчиняется тем же законам, к-рые действуют в эволюции др. организмов, на них влияют те же эволюционные факторы: мутация, скрещивание, изоляция, мутационные и эпигенетические ограничения и отбор.

  В то же время темпы эволюции многих микроорганизмов выше, примером чего являются вирус гриппа А и СПИДа, больничные эковары бактерий.

   Эта особенность Э м. связана с малым периодом генерации и большим числом генераций в ед. времени, гаплоидностью хромосомы, большей доступностью генетического материала внешним воздействиям, возможностью передачи генетического материала особям др. видов и родов. В то же время выраженная способность к фенотипической адаптации и переходу в стадию покоя на очень длительное время, большие ареалы и численность популяций, высокие возможности к миграции на глобальном уровне оказывают консервативное влияние на Э.м.

   В некоторых биотопах биосферы существуют виды бактерий, образовавшиеся более 2x109 лет. Предполагается, что первичными микроорганизмами были формы, подобные современным микоплазмам, имеющие минимум структур, необходимых для жизни. В последующем морфологическая эволюция шла по пути совершенствования оболочек, ядерного аппарата, органоидов. Так, постепенно возникали прокариотические бактерии, эукариотические грибы и протозоа.

 Метаболическая эволюция, вероятно, началась с анаэробных гетеротрофов, которые дали 2 метаболические ветви: факультативно-анаэробных и аэробных гетеротрофов и фото- и хемосинтезирующих аутотрофов.

  Экологическая эволюция шла по пути установления экологических отношений с вновь возникающими органическими формами и адаптации к обитанию в новых средах, особенно в живых организмах и их мертвых остатках. Так появились сапрофиты, эпифиты, тканевые, внутриклеточные и внутригеномные паразиты.

  Э.м. шла периодами замедления и ускорения. Имеются основания утверждать, что XX в., особенно вторая его половина, является периодом ускоренной эволюции  микроорганизмов. Это ускорение связано с влиянием антропогенных факторов НТР.    Массовые выбросы токсических отходов производств в окружающую среду угнетают деятельность азотфиксирующих, аммонифицирующих, нитрифицирующих и др. групп микробов, принимающих участие в поддержании экологического баланса экосистем и биосферы.    Многообразные изменения отмечены у патогенных для человека микробов и вызываемых ими болезней. За последние 20 лет выявлено около 30 новых инфекционных агентов. Возросли удельный вес и количество вирусных, хронических, смешанных, вторичных, внутрибольничных инфекций.

  Резко увеличились число и тяжесть заболеваний, вызванных условно-патогенными микробами. Приобретают эпидемический характер ранее спорадические болезни. Произошло расширение ареала микробов как внутри хозяина, так и числа поражаемых видов и территорий, на которых они обитают. Широкое распространение получили устойчивые к химиопрепаратам, антисептикам и дезинфектантам варианты.

  Эволюция вирусов - подчиняется общим закономерностям эволюционного процесса органической материи. Особенностью Э.в. являются высокие темпы, тесная взаимосвязь и взаимовлияние с эволюцией хозяев. Особенно высокие темпы Э.в. отмечены у вирусов с фрагментарным геномом, РНК-вирусов, образующих ДНК-копию генома, вирусов с геномом однонитчатой РНК. В первом случае она определяется высокой частотой рекомбинаций при смешанной инфекции, во втором и третьем - частыми ошибками при транскрипции генетической информации. В современный период темпы Э.в. еще более ускорились в результате усиливающегося давления антропогенных факторов.?

29. 1. Инфекция — сумма биологических реакций, которыми макроорганизм отвечает на внедрение микробного (инфекционного) агента, вызывающего нарушение постоянства внутренней среды (гомео-стаза).

Аналогичные процессы, вызванные простейшими, называются инвазиями.

Сложный процесс взаимодействия между микроорганизмами и их продуктами, с одной стороны, клетками, тканями и органами человека — с другой, характеризуется чрезвычайно широким разнообразием своего проявления. Патогенетические и клинические проявления этого взаимодействия между микроорганизмами и макроорганизмом обозначаются термином инфекционная болезнь (заболевание).

Инфекционные болезни по-прежнему наносят огромный ущерб человечеству. Они вышли на первое место среди других болезней, составляя 70% всех заболеваний человека.

За последние годы зарегистрировано 38 новых инфекций — так называемых эмерджентных болезней, в том числе ВИЧ, геморрагические лихорадки, "болезнь легионеров", вирусные гепатиты, прионные болезни; причем в 40% случаев это нозологические формы, ранее считавшиеся неинфекционными.

Особенности инфекционных болезней состоят в следующем:

•  их этиологическим фактором является микробный агент;

•  они передаются от больного здоровому;

•  оставляют после себя ту или иную степень невосприимчивости;

•  характеризуются цикличностью течения;

•  имеют ряд общих синдромов.

2. В соответствии с этими особенностями любое инфекционное заболевание имеет определенные клинические стадии (периоды) своего течения, выраженные в той или иной степени:

•  инкубационный период —  период от момента проникновения инфекционного агента в организм человека до появления первых предвестников заболевания.  Возбудитель в этот период обычно не выделяется в окружающую среду,  и больной не представляет эпидемиологической опасности для окружающих;

•  продромальный период — проявление первых неспецифических симптомов заболевания, характерных для общей интоксикации макроорганизма продуктами жизнедеятельности микроорганизмов и возможным действием бактериальных эндотоксинов, освобождающихся при гибели возбудителя; они также не выделяются в окружающую среду (хотя при кори или коклюше больной в этот период уже эпидемиологически опасен для окружающих);

 период разгара заболевания — проявление специфических симптомов заболевания. При наличии в этом периоде развития заболевания характерного симптомокомплекса клиницисты называют такое проявление заболевания манифестной инфекцией, а в тех случаях, когда заболевание в этот период протекает без выраженных симптомов, — бессимптомной инфекцией. Этот период развития инфекционного заболевания, как правило, сопровождается выделением возбудителя из организма, вследствие чего больной представляет эпидемиологическую опасность для окружающих;  период исходов. В этот период возможны:

•    рецидив заболевания — возврат клинических проявлений болезни без повторного заражения за счет оставшихся в организме возбудителей;

•    суперинфекция   —  инфицирование   макроорганизма  тем  же возбудителем до выздоровления. Если это происходит после выздоровления, то будет называться реинфекцией, так как возникает в результате нового заражения тем же возбудителем (как это часто бывает при гриппе, дизентерии, гонорее);

. бактерионосительство, или, вернее, микробоносительство, — носительство возбудителя какого-либо инфекционного заболевания без клинических проявлений;

•    полное выздоровление (реконвалесценция) — в этот период возбудители также выделяются из организма человека в больших количествах, причем пути выделения зависят от локализации инфекционного процесса. Например, при респираторной инфекции — из носоглотки и ротовой полости со слюной и слизью; при кишечных инфекциях — с фекалиями и мочой, при гнойно-воспалительных заболеваниях — с гноем;

•    летальный исход. При этом необходимо помнить, что трупы инфекционных больных подлежат обязательной дезинфекции, так как представляют собой определенную эпидемиологическую опасность  из-за  высокого  содержания  в  них микробного агента.

В учении об инфекции существует также понятие персистент-ности (инфицированности): микроорганизмы попадают в организм человека и могут существовать в нем, не проявляя себя достаточно долгое время.

Отличие бактерионосительства от персистениии:

-  при носительстве человек выделяет возбудитель в окружающую среду и является опасным для окружающих;

- при персистенции инфицированный человек в окружающую среду микроорганизм не выделяет, следовательно, не опасен для окружающих в эпидемиологическом отношении.

Кроме перечисленных терминов, существует еще понятие "инфекционный процесс" — это ответная реакция организма на проникновение и циркуляцию в нем микробного агента.

Из определения понятия "инфекция" становятся очевидными и факторы, необходимые для ее возникновения и развития:

- микроорганизм-возбудитель;

- восприимчивый макроорганизм;

- внешняя среда, в которой они взаимодействуют.

30 Роль микроорганизмов в инфекционном процессе. Патогенность и вирулентность микробов. Внутриклеточный паразитизм микробов (кроме вирусов). Механизмы персистенции микроорганизмов.

Причины и условия развития инфекционного процесса:

1. Микроорганизм – возбудитель

2. Восприимчивый макроорганизм – хозяин

3. Условия внешней среды

Факторы, связанные с микроорганизмом:

1. Патогенность и вирулентность

2. Инфицирующая доза

3. Входные ворота

 Патогенность  - потенциальная способность того или иного микроорганизма вызывать инфекционный процесс.

 Островки патогенности - фрагменты ДНК, кодирующие функции патогенности.

- Отличаются от хромосомной ДНК по % содержанию G+C.

- Отсутствуют в геноме непатогенных бактерий

- Способны к горизонтальной внутривидовой и межвидовой передаче

- Содержат гены, кодирующие детерминанты генетического обмена (транспозоны, интегроны, Is-последовательности)

- Составляют от 10 до 30 % генома (до 300 генов)

    По патогенности микроорганизмы:

1. Облигатно-патогенные

2. Условно-патогенные

3. Непатогенные

Вирулентность –мера патогенности.

Единицы измерения: DL50, DLC, DLM, признак индивидуальный (штаммовый), динамичный и вариабельный.

 По вирулентности микроорганизмы:

- Высоковирулентные

- Умеренновирулентные

- Слабовирулентные

- Авирулентные

   Аттенуация – процесс искусственного стойкого снижения вирулентности. Лежит в основе создания живых вакцин. Разработан Л. Пастером.

Паразиты – гетеротрофные микроорганизмы, которые в процессе эволюции приобрели способность жить за счет живых тканей растений или животных, используя их аминокислоты, углеводы, витамины и другие соединения как источники питания или энергии. Паразиты могут быть облигатными, факультативными, внеклеточными и внутриклеточными.

   Паразиты облигатные – микроорганизмы, полностью утратившие способность к сапрофитическому образу жизни и живущие за счет живых клеток. Высшей ступенью облигатного паразитизма является внутриклеточный паразитизм, свойственный некоторым патогенным простейшим, риккетсиям, микоплазмам, хламидозоа и вирусам. Эти микроорганизмы характеризуются обеднением ферментных систем вплоть до полной их утраты вирусами.

   Паразиты факультативные – микроорганизмы, которые в зависимости от условий окружающей среды ведут себя как сапрофиты или как паразиты. К ним относятся возбудители ботулизма, столбняка, газовой гангрены, кишечная палочка и др.

Персистенция микробов в широком смысле слова означает способность переживать в опасном для них мире. Она обусловлена их резистентностью к защитным реакциям хозяина.

  Механизмы персистенции микроорганизмов:

1. Факторы адаптации(конкуренция с нормальной микрофлорой):

- Выделение бактериоцинов

- Синтез индуцибельных ферментов

- Локальное изменение рН

2. Адгезины – факторы прикрепления:

- Пили

- Белки и тейхоевые кислоты клеточной стенки (у грам+)

- Капсульные полисахариды, белки наружной мембраны, ЛПС

3. Инвазины – факторы проникновения:

- Механический фактор (жгутики, активная подвижность)

- Биологическое проникновение (внутри макрофагов, с помощью переносчиков)

- Химические вещества (ферменты):

а) гиалуронидаза

б) нейраминидаза

в) фибринолизин и др.

4. Факторы подавления защитных сил организма:

- Антифагоцитарные:

а) капсула

б) подавление слияния фагосомы с лизосомой

в) продукция каталазы

- Антисывороточные:

а) капсульное вещество

б) белок А стафилококков (связывает Ig)

в) ферменты, разрушающие лизоцим, комплемент, Ig G, A и др.)

- Антигенная изменчивость

- Антигенная мимикрия

5. Факторы повреждения:

- Экзотоксины

- Эндотоксины

- Ферменты-токсины

6. Белки теплового шока – синтезируются в экстремальных условиях (при воздействии температуры), предназначены для защиты бактерий in vivo.

7. Суперантигены –

белковые молекулы, которые активируют иммунокомпетентные клетки (Т-лимфоциты) к продукции цитокинов – «цитокиновый шторм», шоковый синдром.

31,32 Патогенность — видовой признак, передающийся по наследству, закрепленный в геноме микроорганизма, в процессе эволюции паразита, т. е. это генотипи-ческий признак, отражающий потенциальную возможность микроорганизма проникать в макроорганизм (инфективность) и размножаться в нем (инвазионность), вызывать комплекс патологических процессов, возникающих при заболевании.

Фенотипическим признаком патогенного микроорганизма является его вирулентность, т.е. свойство штамма, которое проявляется в определенных условиях (при изменчивости микроорганизмов, изменении восприимчивости макроорганизма и т.д.). Вирулентность можно повышать, понижать, измерять, т.е. она является мерой патогенности. Количественные показатели вирулентности могут быть выражены в DLM (минимальная летальная доза), DL« (доза, вызывающая гибель 50 % экспериментальных животных). При этом учитывают вид животных, пол, массу тела, способ заражения, срок гибели.

К факторам патогенности относят способность микроорганизмов прикрепляться к клеткам (адгезия), размещаться на их поверхности (колонизация), проникать в клетки (инвазия) и противостоять факторам защиты организма (агрессия).

Адгезия является пусковым механизмом инфекционного процесса. Под адгезией понимают способность микроорганизма адсорбироваться на чувствительных клетках с последующей колонизацией. Структуры, ответственные за связывание микроорганизма с клеткой называются адгезинами и располагаются они на его поверхности. Адгезины очень разнообразны по строению и обусловливают высокую специфичность - способность одних микроорганизмов прикрепляться к клеткам эпителия дыхательных путей, других - кишечного тракта или мочеполовой системы и т.д. На процесс адгезии могут влиять физико-химические механизмы, связанные с гидрофобностью микробных клеток, суммой энергии притяжения и отталкивания. У грамотрицательных бактерий адгезия происходит за счет пилей I и общего типов. У грамположительных бактерий адгезины представляют собой белки и тейхоевые кислоты клеточной стенки. У других микроорганизмов эту функцию выполняют различные структуры клеточной системы: поверхностные белки, липополисахариды, и др.
Инвазия. Под инвазивностью понимают способность микробов проникать через слизистые, кожу, соединительно-тканные барьеры во внутреннюю среду организма и распространятся по его тканям и органам. Проникновение микроорганизма в клетку связывается с продукцией ферментов, а также с факторами подавляющими клеточную защиту. Так фермент гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту, входящую в состав межклеточного вещества, и, таким образом, повышает проницаемость слизистых оболочек и соединительной ткани. Нейраминидаза расщепляет нейраминовую кислоту, которая входит в состав поверхностных рецепторов клеток слизистых оболочек, что способствует проникновению возбудителя в ткани.
Агрессия. Под агрессивностью понимают способность возбудителя противостоять защитным факторам макроорганизма. К факторам агрессии относятся: протеазы - ферменты, разрушающие иммуноглобулины; коагулаза - фермент, свертывающий плазму крови; фибринолизин - растворяющий сгусток фибрина; лецитиназа - фермент, действующий на фосфолипиды мембран мышечных волокон, эритроцитов и других клеток. Патогенность может быть связана и с другими ферментами микроорганизмов, при этом они действуют как местно, так и генерализовано.

Важную роль в развитии инфекционного процесса играют токсины. По биологическим свойствам бактериальные токсины делятся на экзотоксины и эндотоксины.
Экзотоксины продуцируют как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии. По своей химической структуре это белки. По механизму действия экзотоксина на клетку различают несколько типов: цитотоксины, мембранотоксины, функциональные блокаторы, эксфолианты и эритрогемины. Механизм действия белковых токсинов сводится к повреждению жизненно важных процессов в клетке: повышение проницаемости мембран, блокады синтеза белка и других биохимических процессов в клетке или нарушении взаимодействия и взаимокоординации между клетками. Экзотоксины являются сильными антигенами, которые и продуцируют образование в организме антитоксинов.

Экзотоксины обладают высокой токсичностью. Под воздействием формалина и температуры экзотоксины утрачивают свою токсичность, но сохраняют иммуногенное свойство. Такие токсины получили название анатоксины и применяются для профилактики заболевания столбняка, гангрены, ботулизма, дифтерии, а также используются в виде антигенов для иммунизации животных с целью получения анатоксических сывороток.
Эндотоксины по своей химической структуре являются липополисахаридами, которые содержатся в клеточной стенке грамотрицательных бактерий и выделяются в окружающую среду при лизисе бактерий. Эндотоксины не обладают специфичностью, термостабильны, менее токсичны, обладают слабой иммуногенностью. При поступлении в организм больших доз эндотоксины угнетают фагоцитоз, гранулоцитоз, моноцитоз, увеличивают проницаемость капилляров, оказывают разрушающее действие на клетки. Микробные липополисахариды разрушают лейкоциты крови, вызывают дегрануляцию тучных клеток с выделением вазодилататоров, активируют фактор Хагемана, что приводит к лейкопении, гипертермии, гипотонии, ацидозу, дессиминированной внутрисосудистой коагуляции (ДВК).
Эндотоксины стимулируют синтез интерферонов, активируют систему комплемента по классическому пути, обладают аллергическими свойствами.
При введении небольших доз эндотоксина повышается резистентность организма, усиливается фагоцитоз, стимулируются В-лимфоциты. Сыворотка животного иммунизированного эндотоксином обладает слабой антитоксической активностью и не нейтрализует эндотоксин.
Патогенность бактерий контролируется тремя типами генов: гены - собственной хромосомами, гены привнесенные плазмидами умеренными фагами.

33 Роль факторов внешней среды (физических и социальных) в инфекционном процессе. Способы контроля репродукции и сохранения жизнедеятельности инфекционных агентов во внешней среде.

Роль факторов внешней среды – опосредованная.

Природные факторы:

 -Температура

 -Влажность

 -Излучение (УФ и радиационное)

 -Химические соединения

 -Наличие очагов инфекционных заболеваний

 -Стихийные бедствия

Социальные факторы:

 -Уровень коммунального благоустройства и санитарной культуры

 -Материальные возможности

 -Условия быта

 -Национальные обычаи

Под противомикробными мероприятиями понимают совокупность методов уничтожения, подавления жизнедеятельности и ограничения распространения во внешней среде потенциально патогенных для человека микроорганизмов с целью предупреждения развития и лечения инфекционных болезней.

Антисептика - способов уничтожения или подавления жизнедеятельности потенциально опасных для здоровья человека организмов на интактных или поврежденных коже, слизистых оболочках и в полостях с целью профилактики (профилактическая антисептика) и лечения (терапевтическая антисептика) инфекционных процессов.

Асептика - это совокупность противомикробных мероприятий, направленных на предупреждение развития инфекционного заболевания во время медицинских вмешательств или нарушений технологического процесса при микробиологических исследованиях и производстве различных материалов.

 Дезинфекция - совокупность способов полного, частичного или селективного уничтожения потенциально патогенных для человека микроорганизмов на объектах внешней среды с целью предупреждения передачи возбудителей болезней от больных и микробоносителей здоровым людям.

Стерилизация - совокупность физических или химических способов полного освобождения объектов внешней среды от вегетативных и покоящихся форм патогенных, условнопатогенных и непатогенных микроорганизмов.

34.По природе возбудителя все инфекционные заболевания делятся на инфекиии: • на бактериальные;

•  вирусные; грибковые; протозойные.

По числу возбудителей, вызывающих инфекционное заболевание,

они делятся:

•  на моноинфекции; смешанные (ассоциированные) — микст-инфекции.

От последних надо отличать вторичную инфекцию, при которой к основной, первоначальной, уже развившейся, присоединяется другая, вызываемая новым возбудителем; хотя в некоторых случаях вторичная инфекция может превышать, и значительно, первичную инфекцию. По длительности течения инфекиионные заболевания делятся:

•  на острые;

•  хронические.

По происхождению возбудителя:

•  экзогенные   —   инфекции,   возбудителями   которых   являются микроорганизмы, поступающие из окружающей среды с пищей, водой, воздухом, почвой, выделениями больного человека или микробоносителя;

•  эндогенные   —   возбудителями   являются   микроорганизмы   — представители собственной нормальной микрофлоры человека (часто возникают на фоне иммунодефицитного состояния человека); в том числе аутоинфекция — разновидность эндогенной инфекции, которая возникает в результате саморазмножения путем переноса возбудителя из одного биотопа в другой (например, из полости рта или носа руками самого больного на раневую поверхность).

1. Деление инфекций в зависимости от источника, т. е. резервуара возбудителя, достаточно условно, однако по этому признаку можно выделить несколько групп:

-  сапронозные инфекции — заболевания, основным местом обитания и размножения возбудителей которых являются объекты окружающей среды, откуда и попадают в организм человека (заболевания,  вызванные легионеллами,  синегнойной палочкой и др.);

-  антропонозные инфекции — заболевания, при которых единственный источник возбудителя — человек (менингококковая инфекция, дизентерия, холера, дифтерия, сифилис, гепатит В, эпидемический сыпной тиф, эпидемический возвратный тиф и др.);

- зоонозные инфекции — заболевания, при которых единственный источник возбудителя — животные (туляремия, бруцеллез, бешенство);

-зооантропонозные инфекции — заболевания, при которых источником являются животное и больной человек, в том числе трупы умерших (чума, сибирская язва, туберкулез, риккетсиозы).

3. По распространенности различают:

•  эндемические заболевания — регистрируются на строго определенных территориях); тесно связаны с ареалом (местом) обитания животных — хозяев и переносчиков. К ним можно отнести:

•    эндемические риккетсиозы;

•    клещевой возвратный тиф (боррелиоз);

•    клещевые вирусные энцефалиты;

•  эпидемические заболевания — распространенные на различных территориях.

Кроме того, для характеристики распространенности того или иного инфекционного заболевания (число заболевших на 100 000 жителей) существуют следующие понятия:

•  "спорадическая заболеваемость" — когда регистрируются только единичные случаи заболевания,

•  "групповые вспышки" — ограниченные небольшим числом заболевших,

•  "эпидемия" — число заболевших измеряется несколькими сотнями или тысячами, т. е. может охватывать большое количество людей на большой территории (грипп, эпидемический вшивый сыпной тиф),

•  "пандемия" — заболевание охватывает несколько стран и даже континентов. К наиболее широко известным относятся пандемии холеры, чумы, гриппа, которые сопровождают человечество на всем протяжении его истории.

По тяжести течения все инфекционные заболевания делят: , на легкие;средней тяжести; тяжелые.

Степень тяжести инфекционного заболевания имеет прямую зависимость от вирулентности микроорганизма-возбудителя и

обратную зависимость от силы защитных механизмов макроорганизма.

Степень тяжести инфекционного заболевания также непосредственно связана с локализацией возбудителя в макроорганизме — по этому критерию все инфекции делятся:

•  на очаговые, при которых микроорганизмы локализуются в местном очаге и не распространяются по организму (ангина, фурункулез);

•  генерализованные,  при которых возбудитель распространяется по организму лимфогенным или гематогенным путем (сепсис). Наиболее тяжелой формой генерализованной инфекции является сепсис, который характеризуется размножением возбудителя в крови, как правило, тяжелым течением заболевания, так как почти всегда развивается на фоне резкого угнетения основных механизмов защиты.

35 Понятие об источнике и механизмах передачи инфекции. Зоонозы, антропонозы, сапронозы.

Механизм передачи – эволюционно сложившийся процесс перемещения возбудителя из источника инфекции в восприимчивый организм, который обеспечивает сохранение возбудителя как биологического вида в природе.

Механизмы передачи:  

- аэрозольный (через воздух)

- фекально-оральный:

  а) алиментарный путь (пищевые продукты)

  б) водный

  в) контактно-бытовой

- трансмиссивный – через насекомых-переносчиков

- контактный: а) прямой контакт (например, половой)

      б) непрямой (контактно-бытовой) – через объекты внешней среды

- трансплацентарный (вертикальный)

- парентеральный (инвазивными методами) - механизмом не является

В зависимости от источника инфекции выделяют:

 ЗООНОЗЫ - группа инфекционных и паразитарных заболеваний, возбудители которых паразитируют в организме определенных видов животных, и для которых животные являются естественным резервуаром. Источником возбудителей инфекции (или инвазии) для человека является больное животное или животное — носитель возбудителей. При определенных  условиях (санитарно-экономических) возможно передача зоонозов людям. Но циркулировать в коллективах людей возбудители зоонозов не могут, так как человек для них является биологическим тупиком, не включается в течение эпизоотического процесса и не участвует в эволюции возбудителя как паразитического вида. Лишь при некоторых зоонозах, например при чуме, жёлтой лихорадке, в определенных условиях источником возбудителей инфекции может быть больной человек.

 АНТРОПОНОЗЫ - группа инфекционных и паразитарных заболеваний, возбудители которых способны паразитировать в естественных условиях только в организме человека.

  Источником возбудителей инфекции при антропонозах являются только люди — больные или носители возбудителей инфекции (или инвазии); при некоторых антропонозах (например, при кори, ветряной оспе) источником возбудителей инфекции является только больной человек.

 САПРОНОЗЫ - группа инфекционных заболеваний, для возбудителей которых главным естественным местом обитания являются абиотические (неживые) объекты окружающей среды. Этим данная группа отличается от прочих заразных болезней, для возбудителей которых главным естественным местом обитания служит заражённый организм человека (антропонозы) или животного (зоонозы).

  Хотя среди сапронозов известны инфекции, при которых возможно выделение возбудителя из заражённого организма (например, при болезни легионеров), однако, как правило, такое выделение не имеет значения для сохранения возбудителя в природе и не играет существенной эпидемиологической роли. Обитающие в окружающей среде возбудители сапронозов, только тогда обретают эпидемиологическое значение, когда появляется возможность передачи их из естественных мест обитания человеку и становится возможным переход от сапрофитического к паразитическому способу их существования.

36 Биологический (экспериментальный) метод исследованияБиологический метод исследования - совокупность  способов искусственного воспроизведения   клинической   картины инфекционных болезней или их синдромов на лабораторных животных. Этот метод преcледует также ряд других целей:

1.  Диагностика инфекционных болезней.

2. Выделение и идентификация чистой культуры.

3. Определение вирулентности.

4. Выделение и идентификация экзотоксинов.

5. Культивирование вирусов.

6. Получение иммунопрепаратов.

7. Проверка безвредности и эффективности лечебных препаратов (в т.ч. химиопрепаратов, иммунопрепаратов) и другие.

Этапы метода:

1. Забор материала (виды материала см. Бактериоскопический метод),

2. Обработка материала.

3. Выбор лабораторного животного, исходя из его чувствительности к предполагаемому возбудителю, его стандартизация и маркировка.

4. Заражение животных одним из способов (подкожный, внутрикожный, внутрибрюшинный, внутримышечный, интрацеребральный, внутривенный, в желудок, интраназальный и др.) в зависимости от тропизма микроба.

5. Регистрация признаков болезни зараженного животного или его смерти.

6.  Прижизненный забор материала от животного и проведение бактериологического и серологического исследования, постановка аллергической пробы.

7. Вскрытие, изучение патологоанатомической и патоморфологической картины, протокольный посев органов павших или убитых животных (для выявления обсемененности и выделения чистой культуры). Приготовление мазков-отпечатков из внутренних органов.

8. Идентификация выделенной культуры.

9. Заключение по результатам исследования.

Оценка метода:

Метод высокочувствителен,   может быть использован на ранних этапах

болезни, но не всегда доступен, дорог, длителен, небезопасен.

37 Химиотерапия — специфическое антимикробное, антипаразитарное лечение при помощи химических веществ. Эти вещества обладают важнейшим свойством — избирательностью действия против болезнетворных микроорганизмов в условиях макроорганизма.

Основоположником химиотерапии является немецкий химик, лауреат Нобелевской премии П.Эрлих, который установил, что химические вещества, содержащие мышьяк, губительно действуют на спирохеты и трипаносомы, и получил в 1910 г. первый химиотерапевтический препарат — сальварсан (соединение мышьяка, убивающее возбудителя, но безвредное для микроорганизма).

В 1935 г. другой немецкий химик Г.Домагк обнаружил среди анилиновых красителей вещество — пронтозил, или красный стрептоцид, спасавший экспериментальных животных от стрептококковой инфекции, но не действующий на эти бактерии вне организма. За это открытие Г.Домагк был удостоен Нобелевской премии. Позднее было выяснено, что в организме происходит распад пронтозила с образованием сульфаниламида, обладающего антибактериальной активностью как in vivo, так и in vitro.

Механизм действия сульфаниламидов (сульфонамидов) на микроорганизмы был открыт Р.Вудсом, установившим, что сульфаниламиды являются структурными аналогами парааминобензойной кислоты (ПАБК), участвующей в биосинтезе фолиевой кислоты, необходимой для жизнедеятельности бактерий. Бактерии, используя сульфаниламид вместо ПАБК, погибают.

Первый природный антибиотик был открыт в 1929 г. английским бактериологом А.Флемингом. При изучении плесневого гриба Penicillium notatum, препятствующего росту бактериальной культуры, А. Флеминг обнаружил вещество, задерживающее рост бактерий, и назвал его пенициллином. В 1940 г. Г. Флори и Э. Чейн получили очищенный пенициллин. В 1945 г. А Флеминг, Г. Флори и Э. Чейн стали Нобелевскими лауреатами.

В настоящее время имеется огромное количество химиотерапевтических препаратов, которые применяются для лечения заболеваний, вызванных различными микроорганизмами.

1. По химическому строению выделяют несколько групп химиотерапевтических препаратов.

Производные мышьяка, сурьмы и висмута — это группа химиотерапевтических веществ ~ производных соответствующих соединений.

Эти соединения были первыми препаратами для этиотропной терапии и применялись для лечения паразитарных инфекций (сонная болезнь) и сифилиса.

В настоящее время они практически не используются, хотя эта группа по-прежнему вполне может успешно применяться для местной терапии многих заболеваний.

2.  Сульфаниламиды —  к этой группе  относятся многочисленные производные сульфаниловой кислоты. Они были открыты и используются с 30-х гг. XX в., но и к настоящему времени многие из них достаточно эффективны: сульфаметоксазол (гантанол);сульфаметизол (руфол); сульфацетамид (альбуцид);

•  сульфадиметоксин    (препарат   пролонгированного   действия) и др.

Механизм их действия состоит в том, что они представляют собой структурные аналоги парааминобензойной кислоты и нарушают синтез фолиевой кислоты, а через него — синтез ДНК, т. е. являются микробными антиметаболитами: будучи близки по структуре, заменяют то или иное соединение, принимающее участие в микробном метаболизме.

3. Диаминопиримидины — препараты этой группы также являются антиметаболитами. Но поскольку они подменяют пиримиди-новые основания, то и спектр их действия шире, чем у сульфаниламидов. К ним относятся:триметоприм;пириметамин (антипротозойный препарат); тетроксоприм.

4.  Нитрофурановые препараты — производные пятичленного гетероциклического соединения — фурана. К ним относятся: фурациллин;  фурагин; фуразолидон;нитрофурантоин (фурадонин);нитрофаразон;

Механизм их действия состоит в одновременной блокаде нескольких ферментных систем микробной клетки.

5.  Хинолоны — группа химиотерапевтических веществ, полученных на основе:

•  собственно хинолонов (препараты группы налидиксовой кислоты):

•    налидиксовая кислота (неграм, невиграмон);

•    циноксацин (цинобак);

•  производных хинолонов:

•    4-аминохинолон (оксолипиевая кислота);

•    8-аминохинолон (нитроксолин- 5-НОК);

•  фторхинолонов:

•    офлоксацин (заноцин, таривид);

•    норфлоксацин (норбактин);

•    ципрофлоксацин (цифран, ципробай, ципролет);

•    ломефлоксацин (максаквин).

Механизм действия хинолонов состоит в нарушении различных этапов (репликации, дупликации, транскрипции, репарации) синтеза ДНК микробной клетки.

38. Антибиотики — химиотерапевтические вещества, продуцируемые микроорганизмами, животными клетками, растениями, а также их производные и синтетические продукты, которые обладают избирательной способностью угнетать и задерживать рост микроорганизмов, а также подавлять развитие злокачественных новообразований.

За тот период, который прошел со времени открытия П.Эрлиха, было получено более 10 000 различных антибиотиков, поэтому важной проблемой являлась систематизация этих препаратов. В настоящее время существуют различные классификации антибиотиков, однако ни одна из них не является общепринятой.

В основу главной классификации антибиотиков положено их химическое строение.

Наиболее важными классами синтетических антибиотиков являются хинолоны и фторхинолоны (например, ципрофлоксацин), сульфаниламиды (сульфадиметоксин), имидазолы (метронидазол), нитрофураны (фурадонин, фурагин).

По спектру действия антибиотики делят на пять групп в зависимости от того, на какие микроорганизмы они оказывают воздействие. Кроме того, существуют противоопухолевые антибиотики, продуцентами которых также являются актиномицеты. Каждая из этих групп включает две подгруппы: антибиотики широкого и узкого спектра действия.

Антибактериальные   антибиотики   составляют самую многочисленную группу препаратов. Преобладают в ней антибиотики широкого спектра действия, оказывающие влияние на представителей всех трех отделов бактерий. К антибиотикам широкого спектра действия относятся аминогликозиды, тетрациклины и др. Антибиотики узкого спектра действия эффективны в отношении небольшого круга бактерий, например полет-миксины действуют на грациликутные, ванкомицин влияет на грамположительные бактерии.

В отдельные группы выделяют противотуберкулезные, противолепрозные, противосифилитические препараты.

Противогрибковые антибиотики включают значительно меньшее число препаратов. Широким спектром действия обладает, например, амфотерицин В, эффективный при кандидозах, бластомикозах, аспергиллезах; в то же время нистатин, действующий на грибы рода Candida, является антибиотиком узкого спектра действия.

Антипротозойные и антивирусные антибиотики насчитывают небольшое число препаратов.

Противоопухолевые антибиотики представлены препаратами, обладающими цитотоксическим действием. Большинство из них применяют при многих видах опухолей, например митоми-цин С.

Действие антибиотиков на микроорганизмы связано с их способностью подавлять те или иные биохимические реакции, происходящие в микробной клетке.

В зависимости от механизма действия различают пять групп антибиотиков:

1. антибиотики, нарушающие синтез клеточной стенки. К этой группе относятся, например, β-лактамы. Препараты этой группы характеризуются самой высокой избирательностью действия: они убивают бактерии и не оказывают влияния на клетки микроорганизма, так как последние не имеют главного компонента клеточной стенки бактерий — пептидогликана. В связи с этим β -лактамные антибиотики являются наименее токсичными для макроорганизма;

2.  антибиотики, нарушающие  молекулярную организацию и синтез клеточных мембран. Примерами подобных препаратов являются полимиксины, полиены;

3. антибиотики, нарушающие синтез белка; это наиболее многочисленная группа препаратов. Представителями этой группы являются аминогликозиды, тетрациклины, макроли-ды, левомицетин, вызывающие нарушение синтеза белка на разных уровнях;

4. антибиотики — ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот. Например, хинолоны нарушают синтез ДНК, рифампицин — синтез РНК;

5. антибиотики, подавляющие синтез пуринов и аминокислот. К этой группе относятся, например, сульфаниламиды.

Источники антибиотиков.

Основными продуцентами природных антибиотиков являются микроорганизмы, которые, находясь в своей естественной среде (в основном, в почве), синтезируют антибиотики в качестве средства выживания в борьбе за существование. Животные и растительные клетки также могут вырабатывать некоторые вещества с селективным антимикробным действием (например, фитонциды), однако широкого применения в медицине в качестве продуцентов антибиотиков они не получили.

Таким образом, основными источниками получения природных и полусинтетических антибиотиков стали:

•  Актиномицеты (особенно стрептомицеты) — ветвящиеся бактерии. Они синтезируют большинство природных антибиотиков (80 %).

•  Плесневые грибы — синтезируют природные бета-лактамы (грибы рода Cephalosporium и Penicillium)H фузидиевую кислоту.

•  Типичные бактерии — например, эубактерии, бациллы, псевдомонады — продуцируют бацитрацин, полимиксины и другие вещества, обладающие антибактериальным действием.

Способы получения.

Существует три основных способа получения антибиотиков:

• биологический синтез (так получают природные антибиотики — натуральные продукты ферментации, когда в оптимальных условиях культивируют микробы-продуценты, которые выделяют антибиотики в процессе своей жизнедеятельности);

• биосинтез с последующими химическими модификациями (так создают полусинтетические антибиотики). Сначала путем биосинтеза получают природный антибиотик, а затем его первоначальную молекулу видоизменяют путем химических модификаций, например присоединяют определенные радикалы, в результате чего улучшаются противомикробные и фармакологические характеристики препарата;

• химический синтез (так получают синтетические аналоги природных антибиотиков, например хлорамфеникол/левомицетин). Это вещества, которые имеют такую же структуру,

39 Осложнение химиотерапии со стороны микроорганизмов проявляется развитием лекарственной устойчивости.

В настоящее время лекарственная устойчивость микроорганизмов — возбудителей различных заболеваний — не только чисто микробиологическая, но и огромная государственная проблема (например, смертность детей от стафилококкового сепсиса находится в настоящее время примерно на том же высоком уровне, что и до появления антибиотиков). Это связано с тем, что среди стафилококков — возбудителей различных гнойно-воспалительных заболеваний — довольно часто выделяются штаммы, одновременно устойчивые ко многим препаратам (5—10 и более).

Среди микроорганизмов — возбудителей острых кишечных инфекций до 80% выделяемых возбудителей дизентерии устойчивы ко многим используемым антибиотикам.

В основе развития лекарственной устойчивости к антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам лежат мутации хромосомных генов или приобретение плазмид лекарственной устойчивости.

Существуют роды и семейства микроорганизмов, природно-устойчивыё к отдельным антибиотикам; в их геноме есть гены, контролирующие этот признак. Для рода ацинетобактер, например, устойчивость к пенициллину является таксономическим признаком. Полирезистентны к антибиотикам и многие представители псевдомонад, неклостридиальных анаэробов и другие микроорганизмы.

Такие бактерии являются природными банками (хранилищами) генов лекарственной устойчивости.

Как известно, мутации, в том числе по признаку лекарственной устойчивости, спонтанны и возникают всегда. В период массового применения антибиотиков в медицине, ветеринарии и растениеводстве микроорганизмы практически живут в среде, содержащей антибиотики, которые становятся селективным фактором, способствующим отбору устойчивых мутантов, получающим определенные преимущества.

Плазмидная устойчивость приобретается микробными клетками в результате процессов генетического обмена. Сравнительно высокая частота передачи R-плазмид обеспечивает широкое и достаточно быстрое распространение устойчивых бактерий в популяции, а селективное давление антибиотиков — отбор и закрепление их в биоценозах.

Плазмидная устойчивость может быть множественной, т. е. к нескольким лекарственным препаратам, и при этом достигать достаточно высокого уровня.

2. Биохимическую основу резистентности обеспечивают разные механизмы:

• энзиматическая инактивация антибиотиков — осуществляется с помощью синтезируемых бактериями ферментов, разрушающих активную часть антибиотиков. Одним из таких широко известных ферментов является бета-лактамаза, обеспечивающая устойчивость микроорганизмов к бета-лактамным антибиотикам за счет прямого расщепления бета-лактамного кольца этих препаратов. Другие ферменты способны не расщеплять, а модифицировать активную часть молекулы антибиотиков, как это имеет место при энзиматической инактивации аминогли-козидов и левомицетина;

•  изменение проницаемости клеточной стенки для антибиотика или подавление его транспорта в бактериальные клетки. Этот механизм лежит в основе устойчивости к тетрациклину,

•  изменение структуры компонентов микробной клетки, например изменение структуры бактериальных рибосом, сопровождается повышением устойчивости к аминогликозидам и макролидам, а изменение структуры РНК-синтетаз - к рифампицину.

У бактерий одного и того же вида могут реализовываться несколько механизмов резистентности.

В то же время развитие того или другого типа резистентности определяется не только свойствами бактерий, но и химической структурой антибиотика.

Так, цефалоспорины 1-го поколения устойчивы к действию стафилококковых бета-лактамаз, но разрушаются бета-лактамазами грамот-(рицательных микроорганизмов, тогда как цефалоспорины 4-го поколения и имипинемы высокоустойчивы к действию бета-лактамаз и 1грамположительных, и грамотрицательных микроорганизмов.

3. Для борьбы с лекарственной устойчивостью, т. е. для преодоления резистентности микроорганизмов к химиопрепаратам, cyществует несколько путей:

•  в первую очередь — соблюдение принципов рациональной химиотерапии;

•  создание новых химиотерапевтических средств,  отличающихся механизмом антимикробного действия (например созданная в последнее время группа химиопрепаратов — фторхинолоны) и мишенями;

•  постоянная ротация (замена) используемых в данном лечебном учреждении или на определенной территории химиопрепаратов (антибиотиков);

•  комбинированное применение бета-лактамных антибиотиков совместно с ингибиторами бета-лактамаз (клавулановая кислота, сульбактам, тазобактам).

40.Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам (антибиотикограммы) обычно применяют:

•  Метод диффузии в агар. На агаризованную питательную среду засевают исследуемый микроб, а затем вносят антибиотики. Обычно препараты вносят или в специальные лунки в агаре, или на поверхности посева раскладывают диски с антибиотиками («метод дисков»). Учет результатов проводят через сутки по наличию или отсутствию роста микробов вокруг лунок (дисков). Метод дисков — качественный и позволяет оценить, чувствителен или устойчив микроб к препарату.

• Методы определения минимальных ингибирующих и бактерицидных концентраций, т. е. минимального уровня антибиотика, который позволяет in vitro предотвратить видимый рост микробов в питательной среде или полностью ее стерилизует. Это количественные методы, которые позволяют рассчитать дозу препарата, так как концентрация антибиотика в крови должна быть значительно выше минимальной ингибирующей концентрации для возбудителя инфекции. Введение адекватных доз препарата необходимо для эффективного лечения и профилактики формирования устойчивых микробов.

Есть ускоренные способы, с применением автоматических анализаторов.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков. Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар или среду АГВ в чашке Петри.

Среда АГВ: сухой питательный рыбный бульон, агар-агар, натрий фосфат двузамещенный. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с инструкцией.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чувствительности к антибиотикам.

Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов. Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность микроорганизмов методом серийных разведений.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений. Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106—107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика.

Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по специальной готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков.  К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата. Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.

Определение антибиотика в крови, моче и других жидкостях организма человека. В штатив устанавливают два ряда пробирок. В одном из них готовят разведения эталонного антибиотика, в другом — исследуемой жидкости.  Затем  в  каждую  пробирку вносят   взвесь   тест-бактерий,   приготовленную   в   среде   Гисса с глюкозой. При определении в исследуемой жидкости пенициллина,   тетрациклинов,   эритромицина   в   качестве  тест-бактерий используют  стандартный  штамм   S. aureus,  а  при  определении стрептомицина — Е. coli. После инкубирования посевов при 37 °С в течение 18—20 ч отмечают результаты опыта по помутнению среды и ее окрашиванию индикатором вследствие расщепления глюкозы   тест-бактериями.   Концентрация   антибиотика   определяется умножением наибольшего разведения исследуемой жидкости,   задерживающей   рост   тест-бактерий,   на   минимальную концентрацию   эталонного   антибиотика,   задерживающего   рост тех же тест-бактерий. Например, если максимальное разведение исследуемой жидкости, задерживающее рост тест-бактерий, равно  1 :1024,  а   минимальная  концентрация  эталонного  антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий, 0,313 мкг/мл, то произведение   1024-  0,313=320 мкг/мл  составляет  концентрацию антибиотика в 1 мл.

Определение способности S. aureus продуцировать бета-лактамазу. В колбу с 0,5 мл суточной бульонной культуры стандартного штамма стафилококка, чувствительного к пенициллину, вносят 20 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С питательного агара, перемешивают и выливают в чашку Петри. После застывания агара в центр чашки на поверхность среды помещают диск, содержащий пенициллин. По радиусам диска петлей засевают исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта. О способности исследуемых бактерий продуцировать бета-лакта-мазу судят по наличию роста стандартного штамма стафилококка вокруг той или другой исследуемой культуры (вокруг диска).

41. Иммунология – наука о закономерностях иммунологической реактивности организма, о способах и методах использования иммунологических явлений в диагностике, лечении и профилактике инфекционных и неинфекционных болезней.

Задачи иммунологии:

А) Изучение строения, функций и развития иммунной системы в норме и при патологии.

Б) Изучение роли и значения иммунной системы в возникновении, развитии и течении инфекционных и неинфекционных заболеваний.

В) Разработка методов и средств иммунодиагностики, иммунотерапии и иммунопрофилактики инфекционных и неинфекционных заболеваний.

Г) Подготовка и переподготовка врачей-иммунологов.

Методы иммунологии.

1.  Иммуноморфологический.
2.  Иммунохимический.
3.  Иммунобиологические:

а) серологические

б) аллергологические

1.  Экспериментальный
2.  Иммунология (иммун[итет] + греч. logos учение) — медико-биологическая наука о защитных свойствах организма, его иммунитете. Изучает молекулярные, клеточные и физиологические реакции организма на антигены микроорганизмов и продукты животного или растительного происхождения, обладающие антигенными свойствами.
3.      Важнейшими разделами И. являются иммуногенетика (изучает генетическую обусловленность факторов иммунитета, внутривидовое разнообразие и наследование тканевых антигенов, генетические и популяционные аспекты взаимоотношений макро- и микроорганизма и тканевую несовместимость), иммунохимия (изучает химические основы иммунитета), иммунопатология. Выделяют также иммунобиологию (теоретическое направление в И., изучающее общебиологические основы иммунитета, его происхождение и эволюцию), И. эмбриогенеза (раздел И. и эмбриологии, исследующий процессы становления анти генной структуры тканей и органов в ходе эмбрионального развития и иммунологические взаимоотношения организма матери и плода), радиационную И. (изучает изменения иммунитета под влиянием ионизирующих излучений), сравнительную И. (исследует иммунный ответ у разных видов животных) и др.
4.      В клинической И. (иммунопатологии) также выделяют ряд разделов и направлений — инфекционную И., неинфекционную И., иммунофармакологию и др. Иммунология связана с биологией (микробиологией, молекулярной биологией, генетикой, эмбриологией), эндокринологией, патофизиологией, инфекционными болезнями, онкологией, гематологией (иммуногематология), эпидемиологией и другими дисциплинами.
5.      Основные проблемы и направления исследований в И. — аллергия, аутоиммунные болезни, И. злокачественных опухолей, трансплантационный иммунитет и иммунологическая толерантность (иммунные реакции реципиента на трансплантат), врожденные и приобретенные формы иммунологической недостаточности, СПИД и др. Клиническая иммунология разрабатывает методы иммунопрофилактики (см. Иммунизация), иммунодиагностики, иммунотерапии.
6.      Иммунологические методы, благодаря их уникальной специфичности и высокой чувствительности, широко применяются в биологии и медицине, в т.ч. при идентификации вирусов и бактерий, при установлении природы аллергенов, при переливании крови, трансплантации органов. В судебной медицине иммунологические методы используют для исследования вещественных доказательств, решения вопросов о спорном отцовстве, материнстве, в антропологии для решения проблем эволюции человеческих рас, их связей и происхождения.
7.  42. Структура иммунной системы. Иммунная система представлена лимфоидной тканью. Это специализированная, анатомически обособленная ткань, разбросанная по всему организму в виде различных лимфоидных образований. К лимфоидной ткани относятся вилочковая, или зобная, железа, костный мозг, селезенка, лимфатические узлы (групповые лимфатические фолликулы, или пейеровы бляшки, миндалины, подмышечные, паховые и другие лимфатические образования, разбросанные по всему организму), а также циркулирующие в крови лимфоциты. Лимфоидная ткань состоит из ретикулярных клеток, составляющих остов ткани, и лимфоцитов, находящихся между этими клетками. Основными функциональными клетками иммунной системы являются лимфоциты, подразделяющиеся на Т- и В-лимфоциты и их субпопуляции. Общее число лимфоцитов в человеческом организме достигает 1012, а общая масса лимфоидной ткани составляет примерно 1—2 % от массы тела.

Лимфоидные органы делят на центральные (первичные) и периферические (вторичные).

Функции иммунной системы. Иммунная система выполняет функцию специфической зашиты от антигенов, представляющую собой лимфоидную ткань, способную комплексом клеточных и гуморальных реакций, осуществляемых с помощью набора иммунореагентов, нейтрализовать, обезвредить, удалить, разрушить генетически чужеродный антиген, попавший в организм извне или образовавшийся в самом организме.

Специфическая функция иммунной системы в обезвреживании антигенов дополняется комплексом механизмов и реакций неспецифического характера, направленных на обеспечение резистентности организма к воздействию любых чужеродных веществ, в том числе и антигенов.

Кооперация иммунокомпетентных клеток. Иммунная реакция организма может иметь различный характер, но всегда начинается с захвата антигена макрофагами крови и тканей или же со связывания со стромой лимфоидных органов. Нередко антиген адсорбируется также на клетках паренхиматозных органов. В макрофагах он может полностью разрушаться, но чаше подвергается лишь частичной деградации. В частности, большинство антигенов в лизосомах фагоцитов в печение часа подвергается ограниченной денатурации и протеолизу. Оставшиеся от них пептиды (как правило, два-три остатка аминокислот) комплексируются с экспрессированными на внешней мембране макрофагов молекулами МНС.

Макрофаги и все другие вспомогательные клетки, несущие на внешней мембране антигены, называются антигенпрезентирующими, именно благодаря им Т- и В-лимфоциты, выполняя функцию презентации, позволяют быстро распознавать антиген.

Иммунный ответ в виде антителообразования происходит при распознавании В-клетками антигена, который индуцирует их пролиферацию и дифференциацию в плазмоцит. Прямое воздействие на В-клетку без участия Т-клеток могут оказать только тимуснезависимые антигены. В этом случае В-клетки кооперируются с Т-хелперами и макрофагами. Кооперация на тимусза-висимый антиген начинается с его презентации на макрофаге Т-хелперу. В механизме этого распознавания ключевую роль имеют молекулы МНС, так как рецепторы Т-хелперов распознают номинальный антиген как комплекс в целом или же как модифицированные номинальным антигеном молекулы МНС, приобретшие чужеродность. Распознав антиген, Т-хелперы секретируют γ-интерферон, который активирует макрофаги и способствует уничтожению захваченных ими микроорганизмов. Хелперный эффект на В-клетки проявляется пролиферацией и дифференциацией их в плазмоциты. В распознавании антигена при клеточном характере иммунного ответа, кроме Т-хелперов, участвуют также Т-киллеры, которые обнаруживают антиген на тех антигенпрезентирующих клетках, где он комплексируется с молекулами МНС. Более того, Т-киллеры, обусловливающие цитолиз, способны распознавать не только трансформированный, но и нативный антиген. Приобретая способность вызывать цитолиз, Т-киллеры связываются с комплексом антиген + молекулы МНС класса 1 на клетках-мишенях; привлекают к месту соприкосновения с ними цитоплазма-тические гранулы; повреждают мембраны мишеней после экзоцитоза их содержимого.

В результате продуцируемые Т-киллерами лимфотоксины вызывают гибель всех трансформированных клеток организма, причем особенно чувствительны к нему клетки, зараженные вирусом. При этом наряду с лимфотоксином активированные Т-киллеры синтезируют интерферон, который препятствует проникновению вирусов в окружающие клетки и индуцирует в клетках образование рецепторов лимфотоксина, тем самым повышая их чувствительность к литическому действию Т-киллеров.

Кооперируясь в распознавании и элиминации антигенов, Т-хелперы и Т-киллеры не только активируют друг друга и своих предшественников, но и макрофагов. Те же, в свою очередь, стимулируют активность различных субпопуляций лимфоцитов.

Регуляция клеточного иммунного ответа, как и гуморального, осуществляется Т-супрессорами, которые воздействуют на пролиферацию цитотоксических и антигенпрезентирующих клеток.

Цитокины. Все процессы кооперативных взаимодействий им-мунокомпетентных клеток, независимо от характера иммунного ответа, обусловливаются особыми веществами с медиаторными свойствами, которые секретируются Т-хелперами, Т-киллерами, мононуклеарными фагоцитами и некоторыми другими клетками, участвующими в реализации клеточного иммунитета. Все их многообразие принято называть цитокинами. По структуре цитокины являются протеинами, а по эффекту действия — медиаторами. Вырабатываются они при иммунных реакциях и обладают потенциирующим и аддитивным действием; быстро синтезируясь, цитокины расходуются в короткие сроки. При угасании иммунной реакции синтез цитокинов прекращается.

Иммунокомпетентные клетки - клетки, способные специфически распознавать антиген и отвечать на него иммунной реакцией. Такими клетками являются Т- и В-лимфоциты (тимусзависимые и костномозговые лимфоциты), которые под влиянием чужеродных агентов дифференцируются в сенсибилизированный лимфоцит и плазматическую клетку.

Т-лимфоциты – это сложная по составу группа клеток, которая происходит от полипотентной стволовой клетки костного мозга, а созревает и дифференцируется в тимусе из предшественников. Т-лимфоциты разделяются на две субпопуляции: иммунорегуляторы и эффекторы. Задачу регуляции иммунного ответа выполняют Т-хелперы. Эффекторную функцияю осуществляют Т-киллеры и естественные киллеры. В орагнизме Т-лимфоциты обеспечивают клеточные формы иммунного ответа, определяют силу и продолжительность иммунной реакции.

B-лимфоциты – преимущественно эффекторные иммунокомпетентные клетки. Зрелые В-лимфоциты и их потомки – плазматические клетки являются антителопродуцентами. Их основными продуктами являются иммуноглобулины. В-лимфоциты участвуют в формировании гуморального иммунитета, В-клеточной иммунологической памяти и гиперчувствительности немедленного типа.

Макрофаги - клетки соединительной ткани, способные к активному захвату и перевариванию бактерий, остатков клеток и других чужеродных для организма частиц. Основная функция макрофагов сводится к борьбе с теми бактериями, вирусами и простейшими, которые могут существовать внутри клетки-хозяина, при помощи мощных бактерицидных механизмов. Роль макрофагов в иммунитете исключительно важна - они обеспечивают фагоцитоз, переработку и представление антигена T-клеткам.

43,44  М-лы ИС – м-лы I, II, III классов НLA-системы; СD-антигены, адгезины, интегрины, молекулы суперсемейства иммуноглобулинов. Строение, функции.

А. МНС I, II, III классов (HLA, ГКГ) – молекулы главного комплекса гистосовместимости (синоним – человеческие лейкоцитарные антигены).

Гены, кодирующие их, лежат в коротком плече 6-ой хромосомы (гены А, В, С для 1-ого класса, гены С2, С4, FВ для 3-ого класса, гены DP, DQ, DR для 2-ого класса).

МНС I наиболее распространены, представлены на всех кл орг-ма, кроме безъядерных, важны для трансплантации органов и тканей, по ним человек генетически индивидуален. Строение: 1) надмембранная часть -, 3 и м-лы 2-микроглобулина 2) мембранная часть 3) цитоплазматический хвост. Распознавание чужеродных пептидов происходит в пространстве между доменами 1 и 2.

МНС II есть только на ИК (иммунокомпетентных) кл и АПК, меньше на Т-л. Строение: 1) надмембранная часть - -цепь, состоящая из двух доменов 1, 2 и -цепь, состоящая из двух доменов 1, 2) трансмембранная часть 3) цитоплазматический хвост. Участок распознавания и связывания пептида – между 1- и 1-доменами.

МНС III менее значимы в трансплантологии, не представлены на поверхности клеток, а циркулируют в сыворотке крови.

Система МНС включает Ir-гены (силы ИО) и Is-гены (силы супрессии ИО), связанные с локусом D. Определение МНС ч-ка имеет главное значение при пересадке тканей ч-ка. Имеется также корреляция между наличием АГ МНС и наклонностью лиц к некоторым заболеваниям: HLA A10 – пузырчатка, HLA B8 – системная красная волчанка, HLA C6 – псориаз, HLA DR2 – рассеянный склероз и т.д.).

B. Дифференцировочные АГ (CD-антигены) – молекулы, появляющиеся на кл на различных стадиях дифференцировки, более 170, к ним всем получены моноклональные АТ, с помощью которых их можно выявить. Примеры: CD3+ - Т-л, CD22+ - В-л, CD 4+ - Т-л-х, CD8+ - Т-л-к, CD16+ - моноциты, CD56+ - ЕК, CD45RO+ - Т-кл памяти.

С. Адгезины. Включают семейства  1) селектинов – белковые структуры на поверхности кл, L-, P-, E- типы. Появляются на поверхности кл под действием цитокинов, связываются с муциноподобными рецепторами. 2) интегринов – 30 близких белков, обеспечивающих межклеточное и межматриксное взаимодействие. Связывают коллаген, фибринолектин, белки системы комплемента. Функция: модуляция активности клеток. Три семейства интегринов: -1 (VLA), -2 – лейкоцитарные АГ, -3 – цитоадгезины.

В общем суперсемейство Ig включает ряд молекул иммуноглобулинподобной структуры:

1) 5 классов Ig 2) молекулы МНС I и МНС II 3) TCR и BCR 4) ряд адгезивных и костимуляторных молекул.

45. Цитокины – группа растворимых межклеточных сигнальных или коммуникативных молекул пептидной природы, обладающих регуляторными и эффекторными свойствами и действующие локально. Продуцируются ИК кл (сначала кл-продуцент получает сигнал-стимулятор, воспринимает его, а затем продуцирует цитокин во внешнюю среду). Цитокины обладают плейотропностью (могут связываться со многими мишенями), один и тот же цитокин взаимодействует с несколькими рецепторами, могут дублировать друг друга, усиливая или снижая действие др. цитокинов.

Основные группы: 1) ИЛ 2) КСФ 3) ИФ 4) ростовые факторы 5) факторы некроза опухолей.

Монокины – цитокины, синтезируемые моноцитами и макрофагами, лимфокины – лимфоцитами.

А) ИЛ – низкомолекулярные пептиды (21 молекула). Важнейшие ИЛ: ИЛ-1 активирует Т-х, важнейший эндогенный пироген, играет важную роль в воспалении; ИЛ-2 продуцируется Т-л и является для них ростовым фактором; ИЛ-3 – гемопоэтический фактор; ИЛ-4, 5, 6 участвуют в ГИО, в росте и дифференцировке В-л, в переключении синтеза класса АТ; ИЛ-8 – важнейший хемокин, ИЛ-10 – антагонист ИФН, ИЛ-16 – стимулирующий фактор для лимфоцитов и т.д.

Б) Хемокины – вещества, являющиеся хемоаттрактантами и цитокинами одновременно, цитокины, обладающие хемоаттрактантной активностью. Включают СС- и СХС-семейства. Продуцируются моноцитами, макрофагами и Т-л. Примеры: 3 типа белков моноцитов, макрофагальный воспалительный белок, ИЛ-8, гр. белков RANTES.

В) ИФН – белки, обладающие противовирусными, противоопухолевыми и иммуномодулирующими свойствами (более 20, объединены в три группы: , , ). -ИФН (лейкоцитарный, синтезируется лейкоцитами) и  -ИФН (фибробластический, синтезируется фибробластами) обладают противовирусными свойствами. -ИФН (иммунный, продуцируется активными Т-л) – обладает противоопухолевой активностью, активирует ЕК, Т-К, и макрофаги

Г) КСФ – факторы роста: 1) моноцитарный КСФ – способствует созреванию моноцитов и макрофагов 2) гранулоцитарный КСФ – способствует созреванию нейтрофилов. 3) трансформирующий ростовой фактор (ТGF)   подавляет воспалительное действие ЕК и продукцию АТ плазматическими кл.

Д) ФНО – продуцируются макрофагами, ЕК, лимфоцитами, нейтрофилами, тучными кл: 1) ФНО  - повышает активность АПК, усиливает воспаление и некроз опухолевых кл 2) ФНО  - участвует в цитотоксическом действии Т-л, в том числе и на опухолевые кл.

46. Иммунитет – совокупность защитных и приспособительных реакций организма, направленных на сохранение постоянства его антигенного состава, на защиту от инфекций, а также генетически чужеродных веществ. Древняя и универсальная для всех живых организмов реакция, встречается на всех уровнях развития, является многокомпонентной.

Основные виды иммунитета: естественный и приобретенный.

Естественный иммунитет – видовая невосприимчивость организма к возбудителям инфекционных заболеваний, в основе которой лежат неспецифические естественные механизма. Факторы естественного иммунитета: 1) иммунной природы – гуморальные и клеточные 2) не иммунной природы.

Факторы естественного иммунитета не иммунной природы:

1.  барьерные свойства кожи и слизистой
2.  антимикробные свойства секретов кожи и слизистых (сало – содержит ЖК и пероксид водорода, пот – молочную и муравьиную к-ту, слезы, слюна – лизоцим, желудок – НСl, 12-перстная кишка – желчь, нижние отделы дыхательных путей – сурфактант, фиксирующий и убивающий МБ)
3.  нормальная микрофлора тела ч-ка: препятствует адгезии МБ, убивает их, выделяя бактериоциды
4.  реактивность кл и тканей
5.  температурная реакция, выделительная реакция (чихание, диарея, потливость), местный ацидоз и гипоксия

Гуморальные факторы естественного иммунитета:

1.  комплемент – главная многокомпонентная и многофункциональная система антимикробных белков
2.  лизоцим – препятствует образованию связей между ацетилмурамовой кислотой и N-ацетилглюкозамином, действуя на клеточную стенку Грам+ бактерий, разрушает ПГ (муреин). Также активирует фагоцитоз, усиливает действие антибиотиков. Продуцируется моноцитами и тканевыми макрофагами.
3.   -лизин – обладает бактерицидной способностью по отношению к Грам+ спороносным бактериям. Вырабатывается тромбоцитами, нарушает проницаемость мембраны бактерий.
4.  Лейкины – синтезируются гранулоцитами или выделяются при их распаде. Оказывают бактерицидное действие на Грам+ бактерии.
5.  Лакто- и трансферрины – конкурируют с МБ за железо и железосодержащие факторы роста. Оказывают бактериостатическое действие. Связывают свободные радикалы, продуцируемые нейтрофилами.
6.  ИФН – противоопухолевые и противовирусные белки.
7.  Естественные (нормальные) АТ – возникают в результате бытовой иммунизации, результат которой – спонтанный синтез АТ.
8.  Медиаторы воспалительных реакций:

а) гистамин – расширяет поверхностные венулы кожи и слизистых, увеличивает проницаемость сосудов, стимулирует высвобождение анафилатаксинов С3а и С5а

б) кинины – увеличивают проницаемость сосудов

в) лейкотриены – повышают проницаемость сосудов, вызывают сокращения ГМК

г) простагландины – действуя на гипоталамус, повышают тем-ру тела

д) белки острой фазы воспаления – высвобождаются из печени, выполняют медиаторные функции (С-реактивный белок, ЛПС-связывающий белок, фактор комплемента В)

е) ИЛ-1 – стимулирует развитие лихорадочных реакций, повышает проницаемость сосудов и адгезивные свойства эндотелия, активирует фагоцитоз.

Клеточные факторы естественного иммунитета:

1.  естественные киллеры – образуются в костном мозге, имеют форму больших лимфоцитов, являются тимус независимыми. Основной CD57+. Функция: 1) иммунный надзор за клеточным составом организма 2) удаление измененных, опухолевых, инфицированных МБ клеток. Для уничтожения одной клетки необходимо 5-40 ЕК. Действуют совместно с ИЛ-2 и -ИФН, усиливающими их активность. Уничтожение кл-мишени происходит после установления с ней прямого контакта при помощи перфорина несколькими способами: 1) АТзависимая цитотоксичность: к измененной кл присоединяется Ig G + ЕК-кл 2) цитолитически 3) выделение грамзинов, проникающих в клетку-мишень и активирующих эндонуклеазы  разрушение нуклеиновой кислоты  индукция апоптоза.
2.  эффекторные клетки фагоцитоза (микрофаги и макрофаги).

47.48. Природа и характеристика комплемента. Комплемент является одним из важных факторов гуморального иммунитета, играющим роль в защите организма от антигенов. Комплемент представляет собой сложный комплекс белков сыворотки крови, находящийся обычно в неактивном состоянии и активирующийся при соединении антигена с антителом или при агрегации антигена. В состав комплемента входят 20 взаимодействующих между собой белков, девять из которых являются основными компонентами комплемента; их обозначают цифрами: С1, С2, СЗ, С4... С9. Важную роль играют также факторы В, D и Р (пропердин). Белки комплемента относятся к глобулинам и отличаются между собой по ряду физико-химических свойств. В частности, они существенно различаются по молекулярной массе, а также имеют сложный субъединичный состав: Cl-Clq, Clr, Cls; СЗ-СЗа, СЗЬ; С5-С5а, С5b и т. д. Компоненты комплемента синтезируются в большом количестве (составляют 5—10% от всех белков крови), часть из них образуют фагоциты.

Функции комплемента многообразны: а) участвует в лизисе микробных и других клеток (цитотоксическое действие); б) обладает хемотаксической активностью; в) принимает участие в анафилаксии; г) участвует в фагоцитозе. Следовательно, комплемент является компонентом многих иммунологических реакций, направленных на освобождение организма от микробов и других чужеродных клеток и антигенов (например, опухолевых клеток, трансплантата).

Механизм активации комплемента очень сложен и представляет собой каскад ферментативных протеолитических реакций, в результате которого образуется активный цитолитический комплекс, разрушающий стенку бактерии и других клеток. Известны три пути активации комплемента: классический, альтернативный и лектиновый.

По классическому пути комплемент активируется комплексом антиген-антитело. Для этого достаточно участия в связывании антигена одной молекулы IgM или двух молекул IgG. Процесс начинается с присоединения к комплексу АГ+АТ компонента С1, который распадается на субъединицы Clq, Clr и С Is. Далее в реакции участвуют последовательно активированные «ранние» компоненты комплемента в такой последовательности: С4, С2, СЗ. Эта реакция имеет характер усиливающегося каскада, т. е. когда одна молекула предыдущего компонента активирует несколько молекул последующего. «Ранний» компонент комплемента С3 активирует компонент С5, который обладает свойством прикрепляться к мембране клетки. На компоненте С5 путем последовательного присоединения «поздних» компонентов С6, С7, С8, С9 образуется литический или мембраноатакующий комплекс который нарушает целостность мембраны (образует в ней отверстие), и клетка погибает в результате осмотического лизиса.

Альтернативный путь активации комплемента проходит без участия антител. Этот путь характерен для защиты от грамотрицательных микробов. Каскадная цепная реакция при альтернативном пути начинается с взаимодействия антигена (например, полисахарида) с протеинами В, D и пропердином (Р) с последующей активацией компонента СЗ. Далее реакция идет так же, как и при классическом пути — образуется мембраноатакующий комплекс.

Лектиновыи путь активации комплемента также происходит без участия антител. Он инициируется особым маннозосвязывающим белком сыворотки крови, который после взаимодействия с остатками маннозы на поверхности микробных клеток катализирует С4. Дальнейший каскад реакций сходен с классическим путем.

В процессе активации комплемента образуются продукты протеолиза его компонентов — субъединицы СЗа и СЗb, С5а и С5b и другие, которые обладают высокой биологической активностью. Например, СЗа и С5а принимают участие в анафилактических реакциях, являются хемоаттрактантами, СЗb — играет роль в опсонизации объектов фагоцитоза, и т. д. Сложная каскадная реакция комплемента происходит с участием ионов Са2+ и Mg2+.

49. Фагоцитоз - поглощение фагоцитом крупных макромолекулярных комплексов, бактерий. Клетки-фагоциты нейтрофилы и моноциты/макрофаги. Фагоцитировать могут также эозинофилы (наиболее эффективны при антительминтном иммунитете). Процесс фагоцитоза усиливают, обволакивающие объект фагоцитоза.

Опсонины - белки, усиливающие фагоцитоз: IgG, белки острой фазы (С-реакгивный протеин, маннансвязывающий лектин); липополисахаридсвязывающий протеин, компоненты комплемента -СЗЬ, С4Ь; сурфактантные протеины легких SP-A, SP-D.

Моноциты составляют 5-10 %, а нейтрофилы 60-70 % лейкоцитов крови. Поступая в ткань моноциты формируют популяцию тканевых макрофагов: купферовские клетки (или звездчатые ретикулоэндотелиоциты печени), микроглия ЦНС, остеокласты костной ткани, альвеолярные и интерстициальные макрофаги. Фагоциты направленно перемещаются к объекту фагоцитоза, реагируя на хемоатграктанты: вещества микробов, активированные компоненты комплемемента (С5а, СЗа) и цитокины. Плазмалемма фагоцита обхватывает бактерии или другие корпускулы и собственные поврежденные клетки. Затем объект фагоцитоза окружается плазмалеммой и мембранная везикула (фагосома), погружается в цитоплазму фагоцита. Мембрана фагосомы сливается с лизосомой, рН закисляется до 4,5; активируются ферменты лизосомы. Фагоцитированный микроб разрушается под действием ферментов лизосом, катионных белков дефензинов, катепсина G, лизоцима и др. факторов. При окислительном (дыхательном) взрыве в фагоците образуются токсичные антимикробные формы кислорода - перекись водорода Н202, супероксиданион 02-, гидроксильный радикал ОН-, синглетный кислород. Кроме этого антимикробным действием обладают окись азота и радикал NO-. Макрофаги выполняют защитную функцию еще до взаимодействия с другими иммунокомпетентными клетками (неспецифическая резистентность). Активация макрофага происходит после разрушения фагоцитируемого микроба, его процессинга (переработки) и презентации (представлении) антигена Т-лимфоцитам. Фагоцитоз может быть завершенным, завершающимся гибелью захваченного микроба, и незавершенным, при котором микробы не погибают. Примером незавершенного фагоцитоза является фагоцитоз гонококков, туберкулезных палочек и лейшманий.

 Фагоцитоз – процесс узнавания, поглощения и разрушения паразитов и корпускулярных частиц специализированными клетками ИС организма.

Для фагоцитов характерно: 1) способность распознавать чужеродный для ИС материал 2) способность к целенаправленному передвижению 3) способность к пино- и фагоцитозу 4) способность к синтезу веществ, регулирующих ИО – монокинов (ИЛ-1, ФНО и ) 5) наличие рецепторов на поверхности к С3b и С5b фракциям комплемента и к Fc-субъединице IgG 6) наличие на поверхности антигенов МНС I и II.

Группы фагоцитов:

1) полиморфноядерные лейкоциты (микрофаги) – циркулируют в крови, быстро фагоцитируют частицы, убитые микробы, непатогенные и патогенные бактерии, гноеродные бактерии и погибшие клетки собственного организма (санитары). Захватывают, но не убивают высоко вирулентные бактерии.

В ходе развития воспаления реализуется еще один универсальный тканевой механизм неспецифической защиты — фагоцитоз.

Явление фагоцитоза было открыто и изучено великим русским ученым И. И. Мечниковым.

Итогом этих многолетних работ стала фагоцитарная теория иммунитета, за создание которой Мечников был удостоен Нобелевской премии.

Фагоцитарный механизм защиты слагается из нескольких последовательных фаз:

•  узнавание;

•  таксис;

•  аттракция;

•  поглощение;

•  киллинг;

•  внутриклеточное переваривание.

Фагоцитоз со всеми стадиями называется завершенным. Если фазы киллинга и внутриклеточного переваривания не наступают, то фагоцитоз становится незавершенным. При незавершенном фагоцитозе микроорганизмы сохраняются внутри лейкоцитов и вместе с ними разносятся по организму. Таким образом, незавершенный фагоцитоз вместо механизма защиты превращается в его противоположность, помогая микроорганизмам защищаться от воздействия макроорганизма и распространяться в нем.

50. ИССЛЕДОВАНИЕ ФАГОЦИТАРНЫХ КЛЕТОК Изучение фагоцитарных клеток осуществляется несколькими методами:     А. Прямым морфологическим методом. Микробы смешиваются с фагоцитами в пробирке или в организме лабораторных животных, через 15—120 минут из смеси приготавливаются микропрепараты на предметных стеклах, окрашиваются по Романовскому-Гимзе и подсчитываются число фагоцитирующих фагоцитов и число фагоцитированных микробов. По ним производят расчет следующих показателей:   ФАГОЦИТАРНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЕЛЬ = 100%*(число фагоцитирующих фагоцитов/общее число фагоцитов)

ФАГОЦИТАРНОЕ ЧИСЛО= (число фагоцитированных микробов/число активных фагоцитов)

ПОКАЗАТЕЛЬ ЗАВЕРШЕННОСТИ ФАГОЦИТОЗА=

(ФЧ(через 15мин)-ФЧ(через 120мин))/ФЧ(через15мин)*100%

Б. Непрямыми методами

Они основаны на определении функциональной активности различных стадий фагоцитарного процесса:

определение хемотаксического индекса позволяет установить способность фагоцитов к направленному передвижению в сторону хемоаттрактанта -активированного комплемента, экстракта микробов, казеината натрия и др. Подсчитывается отношение количества фагоцитов, проникающих через микропористые фильтры в опыте и в контроле;

аттракция фагоцитирующегося объекта к поверхности фагоцита определяется по изменению степени метаболизма фагоцита, которая суммарно определяется в тесте хемилюминесценцищбактерицидность, фагоцитов определяется по активности бактерицидных систем, заключенных в гранулах клеток:

перекиси водорода - пероксидазы, супероксидных ионов -супероксиддесмутазы, лизоцима и др. Переваривающая способность фагоцитов оценивается по активности

лизосомальных ферментов, кислой и щелочной фосфатаз, катепсина и др.

51 Антигенпрезентирующие клетки (АПК).

1. Назначение:           а) обработка АГ                б) презентация АГ Т-хелперам.

2. Состав: макрофаги, дендритные клетки, В-лимфоциты.

Моноциты и макрофаги.

1. Происхождение: красный костный мозг, СКК® моноциты. Моноциты находятся в кровотоке 2-4 сут, затем мигрируют в ткани и превращаются в макрофаги.

Развитие опосредовано факторами микроокружения: а) контактными б) гуморальными.

               + пролиферацию: ИЛ-3, ИЛ-6, ГМ-КСФ, М-КСФ.

               - пролиферацию: TGFb

2. Продолжительность жизни моноцитов 2-4 сут, макрофагов 20 сут – 7 мес. Средний срок обновления популяции тканевых макрофагов 20-40 дней.

3. Морфология клеток: крупные (15-25 мкм), ядро неправильной формы с тонкой структурой хроматина. Макрофаги крупнее моноцитов, имеют неправильные очертания, крайне полиморфны.

4. Макрофаги:а) резидентные – стабильная локализация в определенных тканях:

               1) звездчатые ретикулоциты (кл. Купфера) – 50% популяции всех макрофагов

               2) альвеолярные и перитонеальные макрофаги

               3) микроглия

               4) мезангиальные клетки почек и т.п.

б) подвижные – мобилизуются в очаг воспаления.

Рецепторный состав поверхностной мембраны.

а) рецепторы для Fc-порции Ig: для Fc-IgG — FcgRI (CD64), FcgRII (CD32), FcgRIII (CD16), для Fc-IgM, Fc-IgA, Fc-IgE — FcsRII (CD23).

Механизм: Ig + рецептор ® перераспределение рецепторов на поверхности кл с образованием «шляпки» ® поглощение комплекса клеткой ® ответная реакция в виде: 1) активации макрофагов 2) синтеза цитокинов и др. БАВ 3) повышения плотности экспрессии Fc-рецепторов на поверхности макрофага.

б) рецепторы для компонентов комплемента: C1q, C3a, C3e/C3d, C5a, фактора H.

Распознают опсонизированные кл, иммунные комплексы, необходимы для активации фагоцитоза.

в) адгезивные молекулы и рецепторы: интегрины (b-интегрины) и лектины. Необходимы для взаимодействия с окружающими клетками и межклеточным матриксом.

г) рецепторы для бактериальных липополисахаридов (СD14 – основной маркер миелоидных клеток)

д) рецепторы для БАВ: цитокинов, гормонов, нейромедиаторов.

е) продукты экспрессии генов MHCI (на всех моноцитах и макрофагах) и MHCII (только на активированных

ж) рецепторы для хемокинов подкласса b

Интердигитальные (дендритные) кл тимуса.

1. Локализация: кортикомедулярная зона и мозговой слой тимуса.

2. Функция: отрицательная селекция аутоспецифических клонов Т-лимфоцитов, вызывают их апоптоз.

3. Происхождение: по генезу близки Т-л, развиваются из общего предшественника, мигрирующего из костного мозга в тимус.

Возможно, в коже человека содержатся кл Гранштейна [кл Гранштейна + АГ ® активация супрессорных кл ® развитие неотвечаемости на АГ].

NB!         Все разновидности дендритных клеток имеют костномозговое происхождение и являются представителями миелоидного ряда.

При действии на моноциты цитокинов (ГМ-КСФ, ИЛ-4, ФНОa), а также при повышении внутриклеточного уровня цАМФ, часть моноцитов способна дифференцироваться в дендритные клетки.

52 Иммунный ответ - это сложная многокомпонентная кооперативная реакция ИС организма, индуцированная антигеном и направленная на его элиминацию. Явление иммунного ответа лежит в основе иммунитета. Иммунный ответ зависит от:

1 Антигена - свойства, состав, молекулярная масса, доза, кратность попадания, длкгеганость контакта;

2 Состояния организма - иммунологическая реактивность;

3 Условий внешней среды.

Для иммунного ответа характерно:

1 Клональность - есть клоны Т- и В-лимфоцитов, которые специфичны по отношению к определенным эпитопам (их совокупность называется детерминантной группой);

2 Специфичность;

3 Разнообразие AT и TCR;

4 Формирование в клетках и молекулах эффекторов и клеток памяти;

5 Специфические механизмы действия совместимы с неспецифичными;

6 Контролирование геномом,

7 Деление на естественный и искусственный;

Компоненты иммунного ответа:

1 Антигены;

2 Антигенперерабатывающие и антигенпрезентирующие клетки (имакрофаги);

3 Антигенраспознающие клетки (В- и Т-лимфоциты и их субпопуляции),

4 Антигенраспознающие молекулы (ВЦР, молекулы главного комплекса гистосовместимости);

5 Цитокины - гемопоэтические, ростовые, регуляторные, рецепторные.

Иммунный ответ развивается в периферических лимфоидных органах. ВИО участвуют макрофаги, Т- и В-лимфоциты, фибробласты, ретикулярные клетки.

Макрофаги. Зрелые макрофаги имеют рецепторы к антигенам (Fc), СЗЬ-рецепторы, антигены гистосовместимости. Макрофаги участвуют как в естественном, так и в специфическом ИО. На ранней стадии ИО макрофаги выполняют функцию презентации антигена - в результате фагоцитоза антиген расщепляется, а его эпитоп выносится на мембрану в комплексе с белком МНСП. На конечной стадии ИО макрофаг активируется лимфокинами. В-лимфоциты - распознают антигены, участвуют в гуморальном ИО, имеют рецепторы к эритроцитам мышей, Fc, СЗЬ, к антигенам гистосовместимости.

Они не имеют специфичных антигенраспознающих рецепторов, разделяются на огромное количество клонов. Антиген-распознающим рецептором является молекула иммуноглобулина.

Т- лимфоциты - разделяются на четыре основные субпопуляции - Т-хелперы,

Т-супрессоры, Т-киллеры, и Т -эффекторы. Все они имеют рецепторы к эритроцитам барана, к иммуноглобулинам, белкам системы комплемента (но не имеют рецепторов к СЗЬ), к интерферонам, к антигенам, имеют антигены MHCI и МНСП. Субпопуляции Т-лимфоцитов неоднородны, так, Т-хелперы разделяются на две группы - Т-хелперы 1 и, Т-хелперы 2 . Первые являются активаторами КИО, а вторые - ГИО. Т-лимфоциты

обеспечивают клеточный, антивирусный, антибактериальный иммунитет, ГЗТ.

В зависимости от путей реализации иммунный ответ разделяется на гуморальный (ГИО) и клеточный (КИО), однако в чистом виде ни один из них не проявляется

ГИО контролируется красным костным мозгом, а КИО - тимусом.

53. Антиген - Генетически чужеродные вещества, которые при внедрении в организм способны стимулировать иммунный ответ (клеточную реакцию, образование антител, аллергию, толерантность) и специфически реагировать с образовавшимися антителами как in vivo, так in vitro, называют антигенами.

Эпитоп (антигенная детерминанта) - отличительная часть молекулы антигена, обусловливающая специфичность антител и эффекторных Т- лимфоцитов при иммунном ответе. Эпитоп комплементарен активному центру антител или Т-клеточному рецептору. Аллергенами называются антигены, вызывающие аллергию,

Толерогенами называются антигены, вызывающие иммунологическую толерантность. Аутоантигены. Иногда белки собственных тканей (сердца, печени, почек и др.) при соединении с бактериальным белком, токсинами и ферментами бактерий, лекарственными веществами, под влиянием физических факторов (облучение, ожог и др.) изменяют свои физико-химические свойства и становятся чужеродными для собственного организма. На эти антигены организм вырабатывает антитела, возникают аутоиммунные болезни.

Антигены бактерий по локализации подразделяют на капсульные (К), соматические (О), жгутиковые (Н) и антигены экзопродуктов. В свою очередь К - антигены разделяют на (L, В) термолабильные и (А, М) термостабильные антигены.

Соматические антигены. Расположены не только в цитоплазме, а в основном на поверхности микробной клетки, имеют разнообразный химический состав, отличаются термостабильностю. В практике для обнаружения О-антигенов микроорганизмы подвергают температурной обработке. Жгутиковые антигены. Представляют собой термолабильные белковые комплексы жгутиков, обладающих у многих энтеробактерий специфической и неспецифической (групповой) фазой. Капсульные антигены представлены белками, полисахаридами

Среди бактериальных антигенов выделяют так называемые протективные или антигены главного действия, защитные антигены. Выработанные ка них антитела защищают организм от данного микроба. Очищенные протективные антигены могут быть "идеальными" вакцинными препаратами. Гаптен - неполноценный антиген в виде небольшой химической группы; обуславливает специфичность антител при иммунизации комплексом белок-таптен. Самостоятельно гаптен не вызывает образования антител, но может взаимодействовать с антителами.

Бактериальные антигены:

группоспецифические (встречаются у разных видов одного рода или семейства)

видоспецифические (у различных представителей одного вида);

типоспецифические (определяют серологические варианты - серовары, антигеновары внутри одного вида).

В зависимости от локализации в бактериальной клетке различают К-, Н-, О-антигены (обозначают буквами латинского алфавита).

О-АГ - липополисахарид клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Состоит из полисахаридной цепочки (собственно О-Аг) и липида А.

Полисахарид термостабилен (выдерживает кипячение в течение 1-2 часов), химически устойчив (выдерживает обработку формалином и этанолом). Чистый О-АГ слабо иммуногенен. Проявляет вариабельность структуры и по нему различают много серовариантов бактерий одного вида. Например, для каждой группы сальмонелл характерно наличие определенного О-АГ (полисахарида) - у группы А

- это фактор 2, у группы В - фактор 4 и т.д. У R-форм бактерий О-АГ теряет боковые цепи

полисахарида и типоспецифичность.

Липид А - содержит глюкозамин и жирные кислоты. Он обладает сильной адьювантной, неспецифической иммуностимулирующей активностью и токсичностью. В целом ЛПС является эндотоксином. Уже в небольших дозах вызывает лихорадку из-за активации макрофагов и выделения ими ИЛ1, ФНО и других цитокинов, дегрануляцию гранулоцитов, агрегацию тромбоцитов. Он может связываться с любыми клетками организма, но особенно с макрофагами. В больших дозах угнетает фагоцитоз, вызывает токсикоз, нарушение функции сердечнососудистой системы, тромбозы, эндотоксический шок. ЛПС некоторых бактерий входит в состав иммуностимуляторов (продигиозан,

пирогенал). Пептидогликаны клеточной стенки бактерий обладают сильным адьювантным эффектом на клетки СИ.

Н-АГ входит в состав бактериальных жгутиков, основа его - белок флагеллин. Термолабилен.

К-АГ - это гетерогенная группа поверхностных, капсульных АГ бактерий.

Они находится в капсуле. Содержат главным образом кислые полисахариды, в состав которых входят галактуроновая, глюкуроновая и идуроновая кислоты. Встречаются вариации в строении этих антигенов, на основании чего, например, различают 75 типов (серотипов) пневмококков, 80 типов клебсиелл и т.д. Капсульные антигены используются для приготовления вакцин менингококков, пневмококков, клебсиелл. Однако, введение высоких доз полисахаридных антигенов может вызвать толерантность.

Антигенами бактерий являются также их токсины, рибосомы и ферменты.

Некоторые микроорганизмы содержат перекрестнореагируюшие - антигенные детерминанты встречающиеся у микроорганизмов и человека/животных.

У микробов различных видов и у человека встречаются общие, сходные по строению АГ. Эти явления называются антигенной мимикрией. Часто перекрестнореагируюшие антигены отражают филогенетическую общность данных представителей, иногда являются результатом случайного сходства конформации и зарядов - молекул АГ.

Например, АГ Форсмана содержится в эритроцитах барача, сальмонеллах и у морских свинок.

Гемолитические стрептококки группы А содержат перекрестно реагирующие АГ (в частности, М-протеин), общие с АГ эндокарда и клубочков почек человека. Такие бактериальные антигены вызывают образование антител, перекрестно реагирующих с клетками человека, что приводит к развитию ревматизма и постстрептококкового гломерулонефрита.

У возбудителя сифилиса есть фосфолипиды, сходные по строению с теми, которые имеются в сердце животных и человека. Поэтому кардиолипиновый антиген сердца животных используется для выявления антител к спирохете у больных людей (реакция Вассермана).

Среди бактериальных антигенов выделяют гак называемые протективные или антигены главного действия, защитные антигены. Выработанные на них антитела защищают организм от данного микроба. Очищенные протективные антигены могут быть "идеальными" вакцинными препаратами.

54. В-лимфоциты называются так потому, что они впервые выявлены у птиц в специальном центральном органе иммунитета, который называется "сумка Фабрициуса" (bursa of Fabricius) и в котором они проходят стадию созревания. У животных данный орган отсутствует, и ранние стадии созревания В-лимфоциты проходят в костном мозге (bone marrow). Таким образом, термин "В- лимфоцит" обусловлен названием сумки Фабрициуса или костного мозга.

В- лимфоцитами являются лимфоциты, способные синтезировать антитела. Большинство образованных в костном мозге пре-В- лимфоцитов (> 95%) погибают там же в результате процесса селекции клеток. Зрелые В-лимфоциты из костного мозга мигрируют в кровь, а затем во вторичные лимфоидные органы (селезенку, лимфатические узлы, лимфоидные ткани желудочно-кишечного тракта и слизистых). Они имеют антигенспецифический В-клеточкый рецептор (ВКР) в виде мембраносвязанных молекул антител, а также ряд поверхностных CD антигенов и рецепторов.

В-лимфоциты могут узнавать нативный антиген в свободном состоянии. Взаимодействие антигена с В-клеточным антигенспецифическим рецептором приводит к активации В-лимфоцитов и их развитию(дифференцировке) в эффекторные клетки, специализирующиеся в биосинтезе антител. Большинство В-лимфоцитов периферической крови экспрессирует на поверхности клетки два изотипа иммуноглобулинов- IgM и IgD. Очень небольшое количество циркулирующих клеток экспрессирует иммуноглобулины G, А или Е изотопов.

Характеристика CD антигенов В- лимфоцитов

CD 19]

CD20 | основные дифференцировочные и идентификационные маркеры

CD22J 

CD21 рецептор для СЗд фрагмента системы комплемента

CD 23 рецептор для Fc фрагмента lgE 

CD25 рецептор для ИЛ 2

CD32 рецептор для Fc фрагмента IgG 

CD35 рецептор для СЗб и С4б белков комплемента

CD 45RB + участие в трансдукции сигнала

CD 49d + рецептор для связывания молекул адгезии -VCAM-1

CD 71 + рецептор для трансферрина

CD 74 + антиген II класса гистосовместимости

CD антигены выполняют три основные функции: а) рецепция молекул цитокинов и адгезинов; б) передача внутриклеточного сигнала; в) осуществление клеточно-клеточных взаимодействий. В-лимфоциты человека способны связывать эритроциты мыши и образовывать с ними розетки (Вм-розетки), а также формировать розетки с эритроцитами, сенсибилизированными молекулами антител (IgG) и молекулами СЗб фрагмента системы комплемента, что используется в лабораторной практике. Эти свойства совместно с экспрессией CD 5 молекул позволяют выявить субпопуляцию В-лимфоцитов, иммуноглобулиновый репертуар которых комплементарен аутоантигенам, включая ДНК, Fc фрагмент IgG, фосфолипиды и компоненты цитоскелета, и они играют существенную роль в развитии аутоиммунных процессов. В периферической крови процент В-лимфоцитов составляет 10 -15, в лимфатических узлах - 20-25 и в селезенке - 40-45.

Антигекраспознающий В-клеточный рецептор В-линфоцитов (BcR - англ. B-cel I Receptor) построен из молекулы мембранного иммуноглобулина (mlg, состоящий из двух одинаковых тяжелых Н- и двух одинаковых легких - L-цепеи) и двух молекул CD79 (Iga, IgP) - BcR имеет трансмембранные и внутрицитоплазматические сегменты, передающие внутриклеточные сигналы. Исследование количества и функционального состояния В-лимфоцитов В-клетки обнаруживаются в периферической крови по их рецепторному аппарату, а именно:

а) по наличию рецепторов к иммуноглобулинам и 3-ей фракции комплемента - реакция ЕАС-розеткообразования;

б) по наличию иммуноглобулиновых рецепторов - реакция иммунофлюоресценцяи ;

в) по наличию рецепторов к эритроцитам мыши - реакция МЕ-розеткообразования. а) Реакция ЕАС-роэеткообразования ставится в 2 этапа: вначале

готовят реагент, состоящий из эритроцитов быка, антител к ним и комплемента, затем этот образовавшийся комплекс добавляют к лимфоцитамкрови человека. Образуется розетка, которая внешне ничем не отличается от Е-розеток, но метод получения указывает на выявление именноВ-лимфоцитов.

б) Реакция иммунофлюоресценции позволяет обнаружить на поверхности В-лимфоцита иммуноглобулиновые рецепторы. Для этого используются антиглобулиновые сыворотки, меченые люминофорами.

в) Реакция роэеткообразования с мышиными эритроцитами появляется в результате смешивания последних с лимфоцитами периферической крови.

Функциональная характеристика В-лимфоцитов и количества иммуноглобулинов различных классов.Чаще других используется метод радиальной иммунодиффузии в агаре: на стеклянную пластину наливают расплавленный агар, содержаций антитела к даннному классу иммуноглобулинов. В агаре выбивают лунки, в которые вносят образцы изучаемых сывороток. В результате иммунонреципитации, образуются радиальные полоски, диаметр которых зависит от концентрации соответствующего иммуноглобулина. -Определение антител к аутоантигенам или к микробам нормальной микрофлоры.

-Определение титра специфических антител, выраоатывающихся в организме человека после

иммунизации его вакцинами (АВДСДС и др.)

55. Гуморальный иммунный ответ контролируется красным костным мозгом, развивается на растворимые агенты - белки, ЛПС, экзотоксины, на внеклеточных паразитов.     Ответ иммунный первичный (ПИО) — реакция иммунной системы организма на первое поступление (введение) антигена, вакцины. Отличается непродолжительностью и низкой специфичностью. Сопровождается биосинтезом преимущественно специфических антител IgM класса. При этом антитела IgM и IgA классов продуцируются значительно быстрее, нежели антитела IgG изотипа. Этот тип иммунитета можно рассматривать как экстренное реагирование иммунной системы на воздействие инфекции. В динамике его развития различают три фазы — индуктивную (латентную), продуктивную и затухания. Первая длится 6-7 дней. В этот период антиген подвергается переработке в фагоцитарных и других АПК и презентируется клонам Т- и В- лимфоцитов. Последние затем трансформируются в лимфобласты, пролиферируют, дифференцируются и превращаются в плазматические клетки, эффекторные и регуляторные Т-клетки, синтезирующие антитела и клетки памяти, специфичные к данному антигену. Во время продуктивной фазы осуществляются биосинтез антигенспецифических антител, цитокинов и накопление их в биологических жидкостях (в сыворотке крови, слюне, секретах, цереброспинальной жидкости). При этом уровень специфических антител возрастает экспоненциально и после того как он достигнет максимума, формируется плато. Данный процесс длится от 4 дней до 4 недель. Обычно его пик приходится на 14—21-й день. Максимальное продуцирование антител к белковым антигенам (анатоксинам) длится 3 недели. После этого наступает фаза затухания, а продуктивный период постепенно завершается. Причем процесс снижения уровеня антител вначале идет быстро, затем замедляется.   Ответ иммунный вторичный (ВИО) — иммунный ответ на повторное введение антигена в организм. В его основе лежат механизмы иммунологической памяти и прогрессивная клональная селекция антигенспецифических клонов В- и Г- лимфоцитов. В отличие от первичного, возникает на действие антигена в меньшей дозе, развивается быстрее (короче индуктивная фаза) и, как правило, интенсивнее. Кроме того, он более специфичный (синтезируются преимущественно антитела IgG), более напряженный и более зрелый (выше аффинность антител); а вызываемый им протективный эффект сохраняется дольше. Причем динамика процесса антителообразования также носит экспоненциальный характер, но развивается он быстрее, а затухает значительно медленнее. Повторное введение антигена в, организм с высоким уровнем антител к нему может не дать эффекта усиления иммунного ответа. Существует два варианта ГИО. Если ответ происходит на Т - независимые антигены, то это т. н. простой ответ, он возможен потому, что некоторые антигены способны сами активировать Т-лимфоциты. В этом случае синтез IgM не сопровождается образованием клеток памяти. В случае, если ответ формируется в ответ на Т- зависимые антигены, происходит кооперация Т- и В-лимфоцитов. Выделяют следующие стадии: распознавание антигена; презентация антигена - макрофаг поглощает антиген, расщепляет, соединяет с белками МНС I и МКС II и переносит на мембрану; передача информации на Т- хелпер; бласттрансформация В- лимфоцитов, дифференцировка бластов в плазмациты и В- клетки памати; синтез антител и элиминация антигена.

Функция антител: активация системы комплемента, нейтрализация токсинов, опсонизация антигенов, преципитация мелких антигенов.

56Антитела: структура, свойства. Классификация антител: классы, субклассы, изотипы, аллотипы, идиотипы. Закономерности биосинтеза. Методы определения концентрации иммуноглобулинов.

Антитела - иммуноглобулины, продуцируемые В-лимфоцитами (плазматическими клетками). Мономеры иммуноглобулинов состоят из двух тяжелых (Н-цепи) и двух легких (L-цепи) полипептидных цепей, связанных дисульфидной связью. Эти цепи имеют константные (С) и вариабельные (V) участки. Папаин расщепляет молекулу иммуноглобулина на два одинаковых антигенсвязывающих фрагмента - Fab (Fragment anligen binding) и Fc (Fragmenl crislalhzable).

  Иммуноглобулины подразделяют на классы в зависимости от структуры, свойств и антигенных особенностей их легких и тяжелых цепей:

-   Легкие цепи в молекулах иммуноглобулинов представлены двумя изотипами—ламбда (λ) и каппа (κ), которые различаются по химическому составу как вариабельных, так и константных участков.

-   Тяжелые цепи иммуноглобулинов подразделены на 5 изотипов (γ, μ, α, β, ε), которые определяют их принадлежность к одному из 5 классов иммуноглобулинов: G, M, A, D, Е соответственно. Они отличаются друг от друга физико-химическими особенностями и биологическими свойствами.

  Аллотипы – генетически обусловленные внутривидовые варианты константных доменов или каркасных фрагментов вариабельных доменов молекулы Ig (контролируются аллельными генами).

Выделяют 3 типа: Gm, Km, Am.

 Каждая плазматическая клетка продуцирует антитела одного аллотипа.

Идиотип - участок гипервариабельной области, распознающий чужеродный антиген.

 -Является чужеродным для иммунной системы.

 -Развивается иммунный ответ. Появляются антиидиотипические антитела, которые специфически реагируют с этим участком

Антиидиотипические антитела - образуются в результате индукции иммунного ответа в ответ на накопление любых антител, несущих в структуре своих активных центров новые для организма антигенные эпитопы (идиотипы).

Антиидиотипические антитела:

- взаимодействуют с антителами и снижают иммунный ответ (регулируют его). На них тоже образуются антитела и т.д. (антиидиотипическая сеть).

- соответствуют конфигурации антигена. Могут быть использованы для создания вакцин.

Иммуноглобулины:

Иммуноглобулины М:

имеют две формы:

     Мономерная форма - первый класс антител, продуцируемый развивающимся В-лимфоцитом. Впоследствии многие В-клетки переключаются на выработку других классов антител, но с тем же ан-тигенсвязывающим участком. IgM встраивается в мембрану и выполняет роль антигенраспознающего рецептора. Встраивание IgM в мембрану клеток возможно благодаря наличию в хвостовой части участка 25 гидрофобных аминокислотных остатков. Секреторная форма IgM содержит 5 мономерных субъединиц, связанных друг с другом дисульфидными связями и дополнительной полипептидной J-цепью. Секреторная форма IgM — основной класс антител, секретируемых в кровь при первичном иммунном ответе.

Иммуноглобулины G:

В количественном отношении этот класс иммуноглобулинов доминирует в крови (75% от всех Ig). IgG — мономеры, основной класс антител, секретируемый в кровь при вторичном иммунном ответе.

  После взаимодействия IgG с поверхностными антигенами микроорганизмов комплекс антиген—антитело:

— способен связывать и активировать белки системы комплемента;

— может взаимодействовать со специфическими рецепторами макрофагов и нейтрофилов, что приводит к фагоцитозу комплексов антиген—антитело и разрушению их в фагосомах;

— IgG — единственный класс Ig, способный проникать через плацентарный барьер и обеспечивать внутриутробную защиту плода от инфекций.

 Субклассы Ig G: G1- G4 (G2 – важен для детей. АТ против полисахарида гемофилов.

G4 – близок по свойствам к Ig E определяет аллергию).

Иммуноглобулины А:

Основной класс антител, присутствующий в секретах (молоке, слюне, секретах дыхательных путей и кишечного тракта).

 IgA секретируются в основном в димерной форме, где мономеры связаны друг с другом через дополнительную J-цепь.

   IgA не взаимодействуют с системой комплемента и фагоцитирующими клетками, но, связываясь с микроорганизмами антитела, препятствуют их присоединению к эпителиальным клеткам и проникновению в организм.

Иммуноглобулины Е:

Иммуноглобулины Е представлены мономерами, в которых тяжелые е-цепи содержат 1 вариабельный и 4 константных домена.

   После присоединения антигена к соответствующим антигенсвязывающим участкам IgE клетки получают сигнал к секреции биологически активных веществ (гистамина, серотонина), которые в большой мере ответственны за развитие воспалительной реакции и проявление таких аллергических реакций, как астма, крапивница, сенная лихорадка.

Иммуноглобулины D:

Иммуноглобулины D обнаружены в сыворотке в очень небольшом количестве, являются мономерами. В тяжелых 8-цепях имеют 1 вариабельный и 3 константных домена. Выполняют роль рецепторов В-лимфоцитов; другие функции пока неизвестны.

Методы определения Ig:

- радиальная иммунодиффузия: расплавл. агар, содержащий АТ к даннному классу иммуноглобулинов + вносят образцы сывороток >> иммунонреципитация,  радиальные полоски, диаметр кот. зависит от конц. иммуноглобулина.

- радиоиммуноэлектродиффузия.

57     При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини) иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр которых пропорционален концентрации антигена. Метод используют для определения классов иммуноглобулинов, а модификации метода можно применять для определения противомикробных антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов.   Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченных флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченное флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген — антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. Так, для диагностики бешенства отпечатки кусочков мозга животных, подозреваемых на вирусоносительство, обрабатывают люминесцирующей антирабической сывороткой. При положительном результате в цитоплазме нервных клеток выявляются глыбки ярко-зеленого цвета. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.

    Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции. основанный на выявлении комплекса антиген — антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса. Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при t° 37° для образования иммунных комплексов, а затем после отмывания несвязавшихся реагентов выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.

    Иммунофлюоресценцию широко используют не только в бактериологии, вирусологии, паразитологии, но и в иммунопатологии для обнаружения антител к тканевым антигенам человека.

58   Контроль биосинтеза иммуноглобулинов. Гены иммуноглобулинов. Механизм взаимодействия антител с антигенами: специфичность, фазы, проявления, аффинность и авидность.

Контроль разнообразия Ig - на генетическом уровне:

- первичное разнообразие 10^11-10^13

- реаранжировка генов (перестройка, рекомбинации)

- соматические мутации (точечные), которые происходят в ходе иммунного ответа и в процессе пролиферации клеток протекают с высокой частотой и носят индивидуальный характер.

Гены иммуноглобулинов:

- имеют фрагментарную организацию. Их сегменты находятся на расстоянии друг от друга.

- Любые клетки содержат весь набор генов, но только у В-Лф эти гены являются - актуальными (т.е. реально работающими).

- Легкие и тяжелые цепи кодируются разными генами и разным количеством генов.

- Эти гены расположены в разных хромосомах,  V и С домены кодируются отдельно.

 За синтез легкой каппа-цепи ответственны три группы генов, локализованые во 2-й хромосоме: 200 V-генов, 5 J-генов (joining), 1 С-ген

 Гены лямбда-цепи – в 22-й хромосоме: 100 V-генов, 6  J-генов, 1 С-ген

 Н-цепи кодируются генами 14 хромосомы:

V-домены кодируются 3 группами генов (V, D, J):

 - 200 V-генов,

 - 50 D-генов (diversity)

 - 5  J-генов

С-домены – 5 генов (по типу тяжелых цепей).

Взаимодействие Ат и Аг:

 1 фаза – случайное столкновение. Это неспецифическая фаза, легко подается обратному процессу.

 2 фаза – специфическая, если Аг и Ат комплементарны. Более сильное взаимодействие на атамарном уровне:

- кулоновские силы,

- электростатические,

- водородные,

- Ван-дер-Ваальса.

Образуется иммунный  комплекс (ИК), который элиминируется системой комплемента и фагоцитами.

Ковалентные силы между Аг и Ат отсутствуют, поэтому ИК может диссоциировать:

- при изменении рН,

- in vitro в растворе соли

Авидность («жадность»): качество, от которого зависит прочность комплекса антиген-антитело.

Слагаемые:

- Аффинность (сродство), определяется комплементарностью антигена и антитела

- Валентность (число активных центров молекулы антитела, а также их расположение)

59. Серологическим называют метод исследования, в основе которого лежит реакция специфического взаимодействия антигенов и антител. На основе ее специфичности возможно определение неизвестных антител при взаимодействии с известным антигеном или неизвестного антигена по связыванию с известным антителом. Метод решает следующие задачи:

I. Серологическая диагностика инфекционных и иммунных заболеваний, основанная на обнаружении в сыворотке крови больных антител. Обоснованием для постановки диагноза является:

а) обнаружение антител к возбудителю болезни ц диагностическом титое. т.е. в таком разведении сыворотки, в котором реакция может бытьположительна только у больных и отрицательна у здоровых;

б) нарастание титра антител при повторном исследовании в динамикеболезни, что позволяет отличить заболевание от поствакцинального илипостинфекционного иммунитета. 2/Серологическая диагностика инфекционных заболеваний, основанная на обнаружении в биологических жидкостях или тканях антигенов патогенных микробов.

3. Серологическая идентификация неизвестных микробов, выделенных при бактериологическом методе диагностики инфекционных болезней. Обоснованием для отнесения микроба к определенной серофуппе, сёроварианту или виду является:

а) взаимодействие микроба с адсорбированной моноспецифической сывороткой, содержащей антитела только к-специфическим для микроба антигенам (из таких сывороток в процессе их производства сорбируются антитела к групповым антигенам);

б) взаимодействие микроба с моноклональными антителами, полученными методом гибридомной техники, т.е. метода культивирования гибрада из плазматической клетки, синтезирующей антитела одной специфичности, с опухолевой клеткой, способной к длительному размножению в культуре ;

в) взаимодействие микроба с диагностической сывороткой в разведении, составляющем не менее половины титра этой сыворотки.

Определение активности поствакцинального или постинфекционного индивидуального или коллективного иммунитета.

Получение и определение титров иммунных диагностических, лечебных и профилактических сывороток, поли- и гамма-глобулинов.

Терминология.

Диагностическая сыворотка - иммунная сыворотка, содержащая антитела известной специфичностити в известном титре, и предназначенная для серологической идентификации микроба или для обнаружения антигенов в организме больного,

Диагностикум - взвесь известных микробов или антигенов, предназначенных для серологической диагностики заболеваний по обнаружениюантител в сыворотке больного.

Серологический метод исследования включает ряд реакций: агглютинации, преципитации, связывания комплемента, иммунофлюоресценции, иммуиоферментного и радиоиммунологического анализа.

ОЦЕНКА МЕТОДА

Достоинства: высокая специфичность, относительная простота, доступность, безопасность, быстрота (от 10 мин. до 4 часов) получения результатов.

Недостатки: при острых инфекционных заболеваниях обнаружение антител часто бывает

ретроспективным диагнозом, т.к. они появляются в достаточных титрах к 7-8 дню от начала болезни, и к этому сроку болезнь может закончиться.

60. Реакция агглютинации (от лат. agglutinatio - склеивание) - склеивание корпускул (бактерий, эритроцитов и др.) антителами в присутствии электролитов - натрия хлорида.

Реакция агглютинации проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например,

бактерий), "склеенных" антителами.

РА используют для:

Определения возбудителя, *1;

Определения антител в сыворотке крови больного

Методы постановки:

Реакция агглютинации на стекле. К капле агглютинирующей сыворотки (разведение 1 : 20) добавляют взвесь бактерии, выделенных от больного. Образуется хлопьевидный осадок.

Развернутая реакция агглютинации с сывороткой крови. К разведениям сыворотки добавляют диагностикум. 

61. В РПГА выявляют антитела сыворотки крови с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который представляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами. Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде пуговки. В РОПГА применяют антительный эритроцитарный диагностикум - эритроциты, на которых адсорбированы антитела.

Эти реакции называются непрямыми (пассивными), так как при их проведении используют Аг (или AT), искусственно сорбированные на поверхности различных корпускулярных частиц.

Реакция непрямой, или пассивной, гемагглютинации (РНГА, РПГА) — одна из наиболее чувствительных серологических реакций. Основана на способности AT взаимодействовать с Аг, фиксированными на различных эритроцитах, которые при этом агглютинируют. Для большей стабильности диагностикумов эритроциты формалинизируют. РПГА ставят в пластиковых планшетках или в пробирках с разведениями сыворотки крови больного, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум

Обратная РНГА применяется для выявления Аг в сыворотке крови; для этого на эритроцитах фиксируются не Аг, a AT. Реакции этого типа широко применяют для диагностики инфекционных болезней, установления беременности, выявления повышенной чувствительности к лекарствам и т.д.

Реакция латексагглютинации: основан на взаимодействии Аг (или AT) в образце с частицами латекса, нагруженными специфическими моноклональными AT (или Аг), что ведёт к быстрому образованию видимых агрегатов. В качестве диагностикумов используются суспензионные Аг и AT, сорбированные на различных инертных корпускулярных носителях.

  Разработаны коммерческие диагностикумы для выявления Аг Streptococcus pneumoniae, стрептококков группы В, Haemophilus influenzae типа b и капсулированных штаммов менингококка в различных тканевых жидкостях (СМЖ, сыворотке крови, моче). Также имеются наборы для выявления Аг стрептококков группы А в мазках из зева; для первичной экспресс-идентификации колоний стрептококков групп А, В, С, F, энтерококков, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae типов a-f, золотистого стафилококка, Neisseria meningitidis и Neisseria gonorrhoeae.

62. Реакция преципитации - РП (от лат praecipilo осаждать) - это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах, избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.

Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. Широкое распространение получили разновидности реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэпектрофорез и др.

Реакция кольцепреципитации. Реакцию проводят в узких преципитационных пробирках: на иммунную сыворотку наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата.

Реакция двойной иммунофиффузиии по Оухтерлони. для постановки реакции растопленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку и после затвердевания в нем вырезают лунки. В лунки геля раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу. В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы. У многокомпонентных систем между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата; у идентичных АГ линии преципитата сливаются; у неидентичных АГ - . пересекаются.

Реакция радиальной иммунодиффузии. Иммунную сыворотку с расплавленным агаровым гелем равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген в различных разведениях. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др. Иммуноэлектрофорез - сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации: смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза, затем в канавку параллельно )

зонам электрофореза вносят иммуннук сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитации.

63. Реакция связывания комплемента (РСК) заключается в том, что при соответствии друг другу антигенов и антител они образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), те происходит связывание комплемента комплексом антиген - антитело. Если же комплекс антиген - антитело не образуется, то комплемент остается свободным. РСК проводят в две фазы 1 -я фаза - инкубация смеси, содержащей антиген + антитело + комплемент, 2-я фаза (индикаторная) - выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген - антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная). Если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит - антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция отрицательная).

64. I Радиоиммунный анализ.

Радиоиммунный метод, или анализ (РИА), - высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген - антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом (125J, 14С, ЗН, 51Сг и др.). После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение). Интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

Иммуиоферментный анализ, или метод (ИФА) - выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазной и или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции - интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики сальмонеллеза, микоплазмозов и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях-1010 -1012 г/л. Твердофазный ИФА - вариант теста, когда один из компонентов иммунной -реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют не связавшиеся реагенты путем промывания.

добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом и субстрат/хромоген для фермента.

II. При определении антигена в лунки с сорбированными антителами вносят антиген (напр., сыворотку крови с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыворотку против него и вторичные антитела (против диагностической сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хромоген для фермента.

Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса).Различают три разновидности метода прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител. 

Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью

антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной

флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела +антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном

микроскопе, как и при прямом методе.

65, 66 Т-лимфоциты представляют вторую важную популяцию лимфоцитов, предшественники которых образуются в костном мозге и затем мигрируют для дальнейшего созревания и

дифференцировки в тимус (название "Т-лимфоцит" отражает тимусзависимость, как основное место раннего этапа созревания).

По спектру биологической активности Т-лимфоциты являются регуляторными и эффекторными клетками, обеспечивающими адаптационную функцию Т-системы иммунитета. Они не продуцируют молекул антител. ТКР является мембранной молекулой, отличающейся от ВКР, но структурно и функционально близкой к антителам.

TCR – АГ-специф. рецептор. Это главная молекула, относящаяся к суперсемейству Ig. Она имеет 3 части: надмембранную, мембранную и цитоплазматическую. Хвост TCR формируют 2-е глобулярные молекулы альфа и бета, которые имеют вариабульные и константные домены (Vα и Vβ, Сα и Сβ).

Vα и Vβ формируют активный комплекс TCR. Там есть 3 гипервариабельных участка – константнодетерминированные области (КДО). Функция КДО - распознавание и связывание Т-клеточных пептидов, т.е. детерминантных групп АГ. TCR плотно сидит на клетке и его цитоплазматический хвост, его цитоплазматическая часть, учавствует в проведении инф. В ядро при его взаимодействии с АГ. Примерно 90 % TCR. Несут цепи альфа и бета, а примерно 10% несут цепи гамма и дельта.

TCR кодируется генетически. α и γ цепи по аналогии с легкими цепями ИГ кодируются V,G и C – генами, а β и δ по аналогии с тяжелыми цепями ИГ - V,G,E. α и γ в 7-й хромосоме, а β и δ в 14.

CD-3 рецептор – это комплементарная структура, Ig молекула. Она образована 3-мя трансмембранными белками: εδ, εγ и димер-дзета., надмембранный, vембранный и цитозолный хвост. Они с TCR представляют единый комплекс, Который обеспечивает проведение АГ –специфических сигналов в ядро клетки

СD4 и СD8. Они экспрессируют или одновременно с TCR или отдельно от него. Играют функцию ко-рецепторов. Они усиливают адгезию с АГ-презентирующей клеткой. Обеспечивают проведение АГ-специфического сигнала в ядро клетки.

Т-лимфоциты разделены по типу разпозн, МОЛЕКУЛ:

СD4 распозн. Пептид ГКГ 2-го класса

СD8 пептид + ГКГ 1-го класса

СD2

Характеристика основных субпопуляций Т-лимфоцитов: популяцию Т-лимфоцитов можно классифицировать на три класса:

A. Хелперы, эффекторы ГЗТ (CD 4+) и Супрессоры-цитотоксические (CD 8+);

B. Нестимулированные (CD 45 RA+) и клетки памяти (CD 45 RO+);

C. Тип 1 - (ИЛ-2, ИНФ-гамма, ТНФ-бэта продуцирующие);
Тип 2 - (ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ9, ИЛ 10 продуцирующие).

Активация Т-лимфоцинтов. Костимуляция. Модель двух сигналов. Анергия. Апоптоз

1. Мембранные процессы, связ. с разпозн. Т-лимф. Пептид+ГКГ Iили II.

2. Цитозольные хвосты связаны с протеинкиназами. Сигнал при расп. АГ с мембр. клетки усиливается, запускается каскад протеинкиназ, вовлекается фосфолипаза С, идет активация белкв, которые связаны с ДНК Т-лимфоцита.

3. Клетки вырабатывают ИЛ-2 под действием которого примерно через 12 часов клетки трансформируются в бласты. Пролиферация идет дальше и бласты дифференцируются в зрелые Т-лимфоцитные клетки.

Анергия — полная или частичная утрата организмом специфической иммунологической реактивности (обычно в форме гиперчувствительности замедленного типа). Выявляется с помощью внутрикожных тестов на анамнестические антигены. Дает отрицательные результаты, к примеру, при ВИЧ-инфекции, у больных туберкулезом, лепрой, у онкобольных. При анергии отмечается отрицательный или сниженный пролиферативный ответ CD4+ Т-лимфоцитов на специфические антигены и митогены in vitro и in vivo. Различают центральную и периферическую анергию. Последняя выражается полной или частичной утратой способности ИКК к активации вследствие блокирования антигенспецифических рецепторов, повреждения механизмов костимуляции

Апоптоз —механизм запрограммированной гибели одной клетки или группы клеток многоклеточного организма. Сигналы, запускающие механизмы апоптоза, активируют ферменты, которые вызывают фрагментацию ДНК на участки 50-300 п.н. и разрушение клетки. После этого начинаются фагоцитоз и элиминация апоптозных телец макрофагами. Признаками апоптоза являются уменьшение размеров клетки, уплотнение и фрагментация хроматина, скопление его возле ядерной мембраны, уменьшение объема цитоплазмы. При этом гибель клеток не сопровождается воспалением и повреждением тканей. Апоптоз индуцируется большинством веществ (в малых концентрациях), вызывающих некроз, а также сигналами, поступающими от регуляторных клеточных молекул (гормонов, цитокинов, антигенов, суперантигенов, моноклонштьных антител).

Противоположным апоптозу процессом является некроз — повреждение нормальных тканей

66 вместе с 65

Методы определения количества и функциональной активности Т-лимфоцитов 

1. определение Е-розеток основано на наличии на мембране Т-лимфорецепторов к эритроцитам барана При смешивании лимфоцитов крови человека и эритроцитов барана образуются "розетки" - лимфоцит с прилипшими к нему 3 и более эритроцитами

2. кожно-аллергические пробы с соответствующими антигенами или веществами, имитирующими антигены (фитогемагглютинин), которые названы мутагенами;

3. реакция бластной трансформации лимфоцитов с фитогешгглютинлном или соответствующими антигенам проявляется в превращении лимфоцитов в более крупные молодые клетки - бласты, число которых подсчитывается в препарате на 200 лимфоцитов.

4. реакция подавления миграции макрофагов или гранулоцитов под действием фактора, продуцируемого Т-лямфоцитами при взаимодействии со специфическим антигеном. Лимфоциты человека смешивают с предполагаемым антигеном, а через 18 часов в каплю полученной культуральной жидкости опускают капилляр, наполненный подвижными макрофагами или гранулоцитами и через, сутки измеряют степень их миграции из опытного и контрольного (без антигена) капилляров. Их отношение называется индексом подавления миграции.

5. определение цитотоксичности Т-киллеров выявляется при взаимодействии лимфоцитов больного с клетками-мишенями, т.е. клетками, выдавшими их образование. Подсчитывается количество погибших клеток.

67. Ответ иммунный клеточный (КИО) — сложная, многокомпонентная кооперативная реакция иммунной системмы, индуцированная чужеродным антигеном (Т-клеточными эпитопами). Реализуется Т-системой иммунитета. Этапы КИО

1. захват антигена АПК

2. Процессир. АГ в протеосомах.

3. Образование комплекса пептид+ ГКГ I и II класса.

4. Транспортировка комплемента на мембрану АПК.

5. Распознавание комплемента АГ-специфическими Т-хелперами 1

6. активация АПК и Т-хелперов 1, выделение Е-хелперами1 ИЛ-2 и гамма – интерферона. Пролиферация и дифференцировка в области АГ-зависимых Т-лимфоцитов.

7. Образование зрелых Т-лимфоцитов разных популяций и Т-лимфоцитов памяти.

8. Взаимодействие зрелых Т-лимфоцитов с АГ и реализация конечного эффектора.

Проявления КИО:

противоинфекционный ИО:

противовирусный,

противопаразитарный,

противобактериальный (внутриклеточно расположенные бактерии);,

аллергии IV и I типов;

противоопухолевый ИО;

трансплантационный ИО;

иммунологическая толерантность;

иммунологическая память;

аутоиммунные процессы.

68. Трансплантационный иммунитет — состояние повышенной иммунной реактивности организма, возникающее в ответ на пересадку органа или ткани, взятых от другой, генетически отличающейся особи. Реакции трансплантационною иммунитета тем сильнее, чем больше выражены генетические различия между донором и реципиентом. Развитие Т. и. приводит к гибели пересаженной ткани. Состояние иммунитета при аллотрансплантации развивается в основном по типу гиперчувствительности замедленного типа. Повышенная чувствительность к пересаженной ткани

возникает примерно через 1—2 нед. после трансплантации и сохраняется в течение от 1 мес. до нескольких лет. На протяжении этого периода повторная трансплантация сопровождается отторжением пересаженной ткани в более короткий срок. Сенсибилизация обусловлена в первую очередь реакцией регионарных к трансплантату лимфатических узлов, через которые происходит отток лимфы от пересаженной ткани: далее включаются другие участки лимфоидной ткани хозяина. Иммунитет при_ аллотрансплантациях не обладает органной специфичностью, реакция имеет индивидуально специфический характер. Она направлена как против той ткани, которая пересаживалась, так и против других тканей того же донора. Основным клеточным компонентом при этом является Т-популяция стимулированных лимфоцитов, хотя гуморальные факторы реципиента также принимают участие в формировании трансплантационного иммунитета. В период реакции тканевой несовместимости установлено появление в крови реципиента антител, оказывающих комплементзависимое цитотоксическое, а также агглютинирующее действие на клетки донорской антигенной принадлежности. Антитела обнаружены также в трансплантате во время его гибели Полной ясности в механизме отторжения трансплантатов еще нет. Полагают, что генетически чужеродный трансплантат отторгается в результате инфильтрации пересаженной ткани лимфоцитами — Т-киллерами, которые оказывают разрушающее действие на клетки-мишени, выделяя биологически активное вещество — лимфотоксин. Разрушение лимфоцитами усиливается при воздействии иммунных антител (антителозависимый цитолиз).

В результате клеточной инфильтрации местно (в области трансплантата) достигается высокая концентрация иммунологических эффекторов, приводящая к его гибели. Иммунологическая реакция при пересадке аллогенных клеток может иметь прямо противоположную форму и исходить со стороны иммунокомпетентных клеток пересаженной ткани против организма реципиента — реакция трансплантата против хозяина (РТПХ). Эта реакция наблюдается преимущественно при трансплантации костного мозга, когда иммунная реактивность реципиента понижена.

Реакции Т. и. к пересаженным тканям и РТПХ могут быть ослаблены путем подбора донора по антигенам гистосовместимости, в результате облучения организма реципиента, применения адренокортикотропных гормонов, антиметаболитов, антилимфоцитарной сыворотки, ингибирующих различные стороны обменных процессов и оказывающих иммунодепрессивное действие.

Антигены главного комплекса гистосовместимости (МНС - Major histocompatibility complex). МНС у человека называются HLA (англ. Human leucocyte antigene). Молекулы гистосовместимости I и II классов кодируются генами системы гистосовместимости локусов А, В, С и D, которые располагаются в коротком плече 7 хромосомы. Они характеризуются выраженным разнообразием. Молекулы 1 класса состоят из тяжелой цепи (45 кДа) нековалентно связанной с В-2 микроглобулином (12 кДа). Они могут быть фиксированы на мембране клеток, так и обнаруживаться в сыворотке и других жидкостях организма. Тяжелая цепь молекулы состоит из 3-х внеклеточных доменов, обозначенных - al (N-терминальный), а2 и аЗ, трансмембранной области и цитоплаэматического хвоста. Они экспедированы как на иммунокомпетентных, так и на соматических клетках.

Выявлено участие растворимых молекул I класса в различных этапах иммунного ответа: а) связывании антиНЬАантител; б) ингибиции цитотоксичности аутореактивных Т-лимфоцитов; с) формировании иммунологической толерантности.

Молекулы II класса распознавания являются продуктами DR, DQ и DP генов, гетеродимеры тяжелой (а) и легкой (в) гликопротеидных цепей. Молекулярная масса альфа цепи 30-34 кДа, а бэта - 26-29 кда. Внеклеточная часть молекулы представлена al и а2, или в1 и в2 и соединена небольшой трансиенбранной областью (30 аминокислот) и коротким цитоплазматическин доменом (15 аминокислот). Они экспрессированы преимущественно на мембране иммунокомпетентных клеток. Антигены МНС I класса имеют все ядросодержащие клетки, а МНС II класса - только антигенпрезентирующие клетки. Антигены МНС I и II классов участвуют в презентации (представлении) клетками антигенного пептида Т-лимфоцитам: продукты МНС I класса презентируют (представляют) антигенный пептид CD8+ Т-лимфоцитам, а МНС II класса CD4+ Т-лимфоцитам. Имеются неклассические молекулы МНС, или МНС-подобные (например, CD1). Виды и механизмы реакций отторжения: раннее отторжение трансплантата

Основной механизм отторжения - клеточно опосредованный. Иммунный ответ похож на таковой при туберкулиновой пробе, вызывает разрушение трансплантата в течение дней - месяцев. Гистологически характеризуется мононуклеарной клеточной инфильтрацией трансплантата, кровоизлияниями и отеком. Из - за гипоксии нередко развивается фиброз. Такой вид отторжения можно затормозить с помощью иммуносупрессоров.

позднее отторжение трансплантата. Проявляется в основном у пациентов с ИДС. Патологическая картина отличается от (1.) тем, что вовлекается эндотелий сосудов, происходит его пролиферация с последующим сужением просвета сосудов, что приводит к ишемии и некрозу трансплантата. гипериммунное отторжение трансплантата

Проявляется в случаях, если антигены трансплантата раньше уже попадали в организм реципиента до текущей пересадки (при беременности, переливании крови, предыдущей трансплантации). Отторжение и деструкция развиваются в течение часов и даже минут. Реакция опосредована гуморально, характеризуется тромбозом мелких сосудов, инфарктом трансплантата, лизисом клеток на границе "трансплантат - хозяин". Процесс необратим и не предотвращается ни одним из известных методов иммуносупрессии.

Для предупреждения развития реакций отторжения необходимо:

типирование тканей по МНС, ABO, Rh; исключить "специфическую презентацию" – предыдущее попадание антигена трансплантата в организм хозяина; проводить иммуносупрессивную терапию до приживания трансплантата.

69 Иммунитет – это способ защиты организма от генетически чужеродных веществ – антигенов экзогенного и эндогенного происхождения, направленный на поддержание и сохранение гомеостаза, структурной и функциональной целостности организма, биологической (антигенной)индивидуальности каждого организма и вида в целом.

Различают несколько основных видов иммунитета.   

Врожденный, иди видовой, иммунитет, он же наследственный, генетический, конституциональный — это выработанная в процессе филогенеза генетически закрепленная, передающаяся по наследству невосприимчивость данного вида и его индивидов к какому-либо антигену (или микроорганизму), обусловленная биологическими особенностями самого организма, свойствами данного антигена, а также особенностями их взаимодействия.

Примером может служить невосприимчивость человека к некоторым возбудителям, в том числе к особо опасным для сельскохозяйственных животных (чума крупного рогатого скота, болезнь Ньюкасла, поражающая птиц, оспа лошадей и др.), нечувствительность человека к бактериофагам, поражающим клетки бактерий. К генетическому иммунитету можно также отнести отсутствие взаимных иммунных реакций на тканевые антигены у однояйцовых близнецов; различают чувствительность к одним и тем же антигенам у различных линий животных, т. е. животных с различным генотипом.

Видовой иммунитет может быть абсолютным и относительным. Например, нечувствительные к столбнячному токсину лягушки могут реагировать на его введение, если повысить температуру их тела. Белые мыши, не чувствительные к какому-либо антигену, приобретают способность реагировать на него, если воздействовать на них иммунодепрессантами или удалить у них центральный орган иммунитета — тимус.

Приобретенный иммунитет — это невосприимчивость к антигену чувствительного к нему организма человека, животных и пр., приобретаемая в процессе онтогенеза в результате естественной встречи с этим антигеном организма, например, при вакцинации.

Примером естественного приобретенного иммунитета у человека может служить невосприимчивость к инфекции, возникающая после перенесенного заболевания, так называемый постинфекционный иммунитет (например, после брюшного тифа, дифтерии и других инфекций), а также «проиммуниция», т. е. приобретение невосприимчивости к ряду микроорганизмов, обитающих в окружающей среде и в организме человека и постепенно воздействующих на иммунную систему своими антигенами.

В отличие от приобретенного иммунитета в результате перенесенного инфекционного заболевания или «скрытной» иммунизации, на практике широко используют преднамеренную иммунизацию антигенами для создания к ним невосприимчивости организма. С этой целью применяют вакцинацию, а также введение специфических иммуноглобулинов, сывороточных препаратов или иммунокомпетентных клеток. Приобретаемый при этом иммунитет называют поствакцинальным, и служит он для защиты от возбудителей инфекционных болезней, а также других чужеродных антигенов.

Приобретенный иммунитет может быть активным и пассивным. Активный иммунитет обусловлен активной реакцией, активным вовлечением в процесс иммунной системы при встрече с данным антигеном (например, поствакцинальный, постинфекционный иммунитет), а пассивный иммунитет формируется за счет введения в организм уже готовых иммунореагентов, способных обеспечить защиту от антигена. К таким иммунореагентам относятся антитела, т. е. специфические иммуноглобулины и иммунные сыворотки, а также иммунные лимфоциты. Иммуноглобулины широко используют для пассивной иммунизации, а также для специфического лечения при многих инфекциях (дифтерия, ботулизм, бешенство, корь и др.). Пассивный иммунитет у новорожденных детей создается иммуноглобулинами при плацентарной внутриутробной передаче антител от матери ребенку ииграет существенную роль в защите от многих детских инфекций в первые месяцы жизни ребенка.

Поскольку в формировании иммунитета принимают участие клетки иммунной системы и гуморальные факторы, принято активный иммунитет дифференцировать в зависимости от того, какой из компонентов иммунных реакций играет ведущую роль в формировании защиты от антигена. В связи с этим различают клеточный, гуморальный, клеточно-гуморальный и гуморально-клеточ-ный иммунитет.

Примером клеточного иммунитета может служить противоопухолевый, а также трансплантационный иммунитет, когда ведущую роль в иммунитете играют цитотоксические Т-лимфоциты-киллеры; иммунитет при ток-синемических инфекциях (столбняк, ботулизм, дифтерия) обусловлен в основном антителами (антитоксинами); при туберкулезе ведущую роль играют иммунокомпетентные клетки (лимфоциты, фагоциты) с участием специфических антител; при некоторых вирусных инфекциях (натуральная оспа, корь и др.) роль в защите играют специфические антитела, а также клетки иммунной системы.

В инфекционной и неинфекционной патологии и иммунологии для уточнения характера иммунитета в зависимости от природы и свойств антигена пользуются также такой терминологией: антитоксический, противовирусный, противогрибковый, противобактериальный, противопротозойный, трансплантационный, противоопухолевый и другие виды иммунитета.

Наконец, иммунное состояние, т. е. активный иммунитет, может поддерживаться, сохраняться либо в отсутствие, либо только в присутствии антигена в организме. В первом случае антиген играет роль пускового фактора, а иммунитет называют стерильным. Во втором случае иммунитет трактуют как нестерильный. Примером стерильного иммунитета является поствакцинальный иммунитет при введении убитых вакцин, а нестерильного— иммунитет при туберкулезе, который сохраняется только в присутствии в организме микобактерий туберкулеза.

Иммунитет (резистентность к антигену) может быть системным, т. е. генерализованным, и местным, при котором наблюдается более выраженная резистентность отдельных органов и тканей, например слизистых верхних дыхательных путей (поэтому иногда его называют мукозальным).Иммунный ответ —  совокупность процессов,  происходящих в иммунной системе в ответ на введение антигена. Клетки, участвующие в иммунном ответе (Т- и В-лимфоциты и макрофаги), называются иммунекомпетентными. Иммунный ответ может быть:

•  первичным — при первой встрече с антигеном. Его выраженность достигает максимума к 7—8-му дню, сохраняется в течение 2 недель, а затем снижается;

•  вторичным — при повторной встрече с антигеном. Вторичный иммунный ответ развивается быстрее и достигает большей (в 3—4 раза) интенсивности.

По типу взаимодействия клеток и образовавшихся клеток-эффекторов (по конечному результату) принято различать 3 типа иммунного ответа:

•  гуморальный иммунный ответ;

•  клеточный иммунный ответ;

•  иммунологическую толерантность.

При гуморальном иммунном ответе эффекторными являются потомки В-лимфоцитов — плазматические клетки, точнее, продукты их жизнедеятельности — антитела.

При клеточном иммунном ответе эффекторными клетками являются   потомки   Th1   —   Т-киллеры.   Они   убивают   клетки-мишени, несущие соответствующие антигены. Иммунологическая толерантность — это специфическая иммунологическая инертность, терпимость к антигену. Он распознается,  но не формируются эффекторные механизмы, способные его элиминировать. Иммунный ответ любого типа проходит 2 фазы:

•  1-я, непродуктивная, — распознавание антигенов и взаимодействие иммунокомпетентных клеток;

•  2-я,  продуктивная,  —  пролиферация  клеток-эффекторов или продукция антител.

Иммунный ответ развивается при контакте иммунной системы с любым антигеном. Иммунный ответ на антигены микробного происхождения лежит в основе инфекционного иммунитета. Инфекционный иммунитет — это способ защиты организма от микроорганизмов и их токсинов. Его основные механизмы:

•  гуморальный — продукция эффекторных молекул — антител;

•  клеточный — образование клеток-эффекторов.

По своей направленности инфекционный иммунитет может быть:

•  антибактериальным;

•  антитоксическим;

•  противовирусным;

•  противогрибковым;

•  противопротозойным.

2. Различают несколько видов иммунитета:

•  врожденный — обнаруживается уже при рождении. Это генотипический признак, который передается по наследству. Если он присущ всем особям данного вида, его называют видовым, если отдельным особям данного вида — индивидуальным. Примером такого иммунитета может быть невосприимчивость человека к возбудителю чумы собак или животных к гонококку;

•  приобретенный — приобретаемый в течение жизни данного индивидуума. Это фенотипический признак, он не передается по наследству.

Различают естественный и искусственный приобретенный иммунитет. И тот и другой может быть активным или пассивным:

•  естественный активный возникает после  перенесенной инфекции;

•  естественный пассивный обеспечивается за счет антител, передаваемых от матери через плаценту или с грудным молоком;

•  искусственный активный — после введения вакцин или анатоксинов, на которые организм вырабатывает иммунитет;

• искусственный пассивный — после введения извне готовых антител или клеток-эффекторов.

Иммунитет может быть стерильным, когда организм свободен от соответствующего возбудителя, и нестерильным, при котором возбудитель соответствующего заболевания сохраняется в организме, и только при этом условии поддерживается иммунитет. Таков иммунитет при туберкулезе, сифилисе и некоторых других заболеваниях.

70. Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных болезней Достижения и проблемы.

Иммунопрофилактика - метод индивидуальной или массовой защиты населения от инфекционных

заболеваний путем создания или усиления искусственного иммунитета.

Иммунопрофилактика бывает:

1 специфическая - против конкретного возбудителя

а) активная - создание иммунитета путем введения вакцин

б)пассивная - создание иммунитета путем введения сывороточных препаратов и гамма-глобулина;

2. неспецифическая - активизация иммунной системы в общем.

Иммунотерапия — терапевтическо воздействие на имунную систему; лечение заболеваний или

нормализация физиологических состояний путем применения иммунобиологических и

химиотерапевтических препаратов и методов.

Вакцины, требования к вакцинам. Виды вакцин, характеристика, методы приготовления. Новые подходы к созданию вакцин.

требования к вакцинам.

•Безопасность- наиболее важное свойство вакцины, тщательно исследуется и контролируется в

процессе производства и применения вакцин. Вакцина является безопасной, если при введении людям

не вызывает развитие серьезных осложнений и заболеваний;

•Протективность - способность индуцировать специфическую защиту организма против

определенного инфекционного заболевания;

•Длительность сохранения протективности;

•Стимуляция образования нейтрализующих антител;

•Стимуляция эффекторных Т-лимфоцитов;

•Длительность сохранения иммунологической памяти;

•Низкая стоимость;

•Биологическая стабильность при транспортировке и хранении;

•Низкая реактогенность;

•Простота введения.

Виды вакцин:

Живые вакцины изготовляют на основе ослабленных штаммов микроорганизма с генетически закрепленной авирулентностью. Вакцинный штамм, после введения, размножается в организме привитого и вызывает вакцинальный инфекционный процесс. У большинства привитых вакцинальная инфекция протекает без выраженных клинических симптомов и приводит к формированию, как правило, стойкого иммунитета. Примером живых вакцин могут служить вакцины для профилактики полиомиелита (живая вакцина Сэбина), туберкулеза (БЦЖ), эпидемического паротита, чумы, сибирской язвы, туляремии. Живые вакцины выпускаются в лиофилизированном (порошкообразном)

виде (кроме полиомиелитной). Убитые вакцины представляют собой бактерии или вирусы, инактивированные химическим (формалин, спирт, фенол) или физическим (тепло, ультрафиолетовое облучение) воздействием. Примерами инактивированных вакцин являются: коклюшная (как компонент АКДС), лептоспирозная, гриппозные цельновирионные, вакцина против клещевого энцефалита, против инактивированная полиовакцина (вакцина Солка).

Химические вакцины получают путем механического или химического разрушения микроорганизмов и выделения протективных, т. е. вызывающих формирование защитных иммунных реакций, антигенов. Например вакцина против брюшного тифа, вакцина против менингококковой инфекции.

Анатоксины. Эти препараты представляют собой бактериальные токсины, обезвреженные

воздействием формалина при повышенной температуре (400) в течение 30 дней с последующей очисткой и концентрацией. Анатоксины сорбируют на различных минеральных адсорбентах, например на гидроокиси алюминия (адъюванты). Адсорбция значительно повышает иммуногенную активность анатоксинов. Это связано как с созданием "депо" препарата в месте введения, так и с адъювантным

действием сорбента, вызывающего местное воспаление, усиление плазмоцитарной реакции в регионарных лимфатических узлах Анатоксины применяют для профилактики столбняка, дифтерии, стафилокакковых инфекций.

Синтетические вакцины представляют собой искусственно созданные антигенные детерминанты микроорганизмов.

В состав ассоциированных вакцин входят препараты из предыдущих групп и против нескольких инфекций. Пример: АКДС - состоит из дифтерийного и столбнячного анатоксина, адсорбированных на гидроокиси алюминия и убитой коклюшной вакцины.

Вакцины, полученные методами генной инженерии. Суть метода: гены вирулентного микроорганизма, отвечающий за синтез протективных антигенов, встраивают в геном какого - либо безвредного микроорганизма, который при культивировании продуцирует и накапливает соответствующий антиген. Примером может служить рекомбинантная вакцина против вирусного гепатита В, вакцина против ротавирусной инфекции.

В перспективе предполагается использовать векторы, в которые встроены не только гены,

контролирующие синтез антигенов возбудителя, но и гены, кодирующие различные медиаторы (белки) иммунного ответа (интерфероны, интерлейкины и т.д

В настоящее время интенсивно разрабатываются вакцины из плазмидных (внеядерных) ДНК, кодирующих антигены возбудителей инфекционных заболеваний. Идея таких вакцин состоит в том, чтобы встроить гены микроорганизма, отвественные за синтез микробного белка, в геном человека. При этом клетки человека ничинают продукцию этого чужеродного для них белка, а иммунная система станет вырабатывать антитела к нему. Эти антитела и будут нейтрализовать возбудителя в случае попадания его в организм.

71 Поетвакцинальный иммунитет. Факторы, влияющие на его развитие Методы определения

напряжённости поствакцинального иммунитета. Значение коллективного иммунитета, методы его оценки.

Поствакцинальный иммунитет - иммунитет, который развивается после введения вакцины. На развитие поствакцинального иммунШ«ПЯрЮОТ<эдду»ОЩ)Кф|КТОры: Зависящие от самой вакцины

- качество препарата,

-доза,

- наличие протективных антигенов,

- кратность введения

зависящие от организма

состояние индивидуальной иммунной реагппност; возраст,

наличие иммунодефицита, состояние организма в целом зависянше-от внешней среды питание,

условия труда и быта, флора и фауна,

физико- химические факторы среды 

 

Методы контроля эффективности поствакцинального иммунитета

Для оценки состояния искусственного поствакцинального иммунитета испольЗДОТСЯ следующие методы

-постановка серологических реакций с сыворотками вакцинированных, кожные иммунологические пробы, кожно-аллергические пробы

Оценка состояния иммунитета у населения производится в основном к инфекциям, управляемым, средствами специфической профилактики - коклюш, корь, паратит, дифтерия и столбняк Против этих инфекций имеются эффективные вакцины Кроме того выборочно осуществляют контроль эффективности иммунопрофилактики и состояния коллективного иммунитета к гриппу, полиомиелиту, туберкулезу, туляремии, бруцеллезу и другим инфекциям

Для контроля состояния иммунитета используются доступные для массового обследования, высокоспецифичные и, вместе с тем, безвредные методы Чаще всего применяют серологический метод - постановку РПГА с сывороткой привитых Взятие сывороток производится выборочно у городских и сельских жителей разных возрастных групп (по 50 человек) Кровь берут из пальца по 1,5 мл - 0,75 мл сыворотки Каждая проба сы-° воротки исследуется на наличие антител к различным возбудителям Показателями оценки иммунологической защищенности являются титры антител к дифтерии и столбняку 1 20 к кори -1 4

Для выявления иммунитета к коклюшу ставится РА, защитный титр антител 1 100 Данные о серонегативных лицах, не имеющих защитного титра антител, передаются в поликлинику для разработки индивидуальных схем иммунизации

Постоянно контролируется и состояние иммунитета к вирусам гриппа РТГА (реакция торможения гемогглютинации) Защитный титр антител 1 20 в PITA Проводится также выборочный контроль иммунитета к полиомиелиту-у детей, с помощью реакции нейтрализации (рН) вируса имеющими ея в сыворотке антителами на культуре клеток При титре антител 1 16 - иммунитет напряженный Для контроля иммунитета-к дифтерии в детских коллективах (по эпидемиологическим показателям или сомнительном качестве прививок), используют также иммунологическую пробу Шика - внутрикожиое введение минимальной дозы разведенного дифтерийного токсина При наличии в крови достаточного титра антител (антитоксина) введенный токсин нейтрализуется и кожная реакция отсутствует Осуществляется также контроль эффективности вакцинопрофилактики туляремии путем постановки кожно-аллергической пробы о тулярином, при отрицательной пробе-иммунитет отсутствует Постановка кожно-аллергической пробы с туберкулином позволяет выявить наличие нестерильного иммунитета к туберкулезу С 1984 года используется также новый аллерген-тетанин для постановки кожно-аллергической пробы с целью контроля состояния иммунитета к столбняку Проведение иммунологического контроля эффективности вакцинопрофилактики позволяет оценить фактическую защищенность к данной инфекции и качество прививочной работы и в необходимых случаях

72. Пассивная иммунопрофилактика - создание иммунитета путем введения сывороточных препаратов и

гамма-глобулина;

Сывороточные препараты - содержат готовые антитела. В зависимости от назначения они делятся на

лечебно-профилактические и диагностические, от степени очистки - на сывороточные,

полиглобулиновые и гамма-глобулиновые препараты, по происхождению - от животных и

человеческие; последние подразделяются на донорские и плацентарные.

Для изготовления сывороточных препаратов в настоящее время используют три метода:

1. Иммунизация животных с целью получения поливалентных сывороток, т.е. содержащих антитела как к специфическим, так и к групповым антигенам иммунизирующего микроба. Такие сыворотки часто дают т.н. групповые серологические реакции. Поэтому для уоиления их специфичности проводят адсорбцию из них антител к групповым антигенам:

2. Получение моноклональных антител, продуцируемых после имунизации животного отдельными плазматическими клетками, "слитыми" с клетками определенных опухолевых линий. Такая гибридома имеет объединенный геном: от плазматической клетки она наследует способность к продукции определенных антител, от опухолевой - способность к длительному размножению. Назначение гибридом - длительная продукция антител одной специфичности.

3. Получение сыворотки людей, ранее переболевших или вакцинированных и потому имеющих определенные титры антител, как правило, к возбудителям различных инфекционных болезней Сыворотки получают либо от доноров, либо из смеси плацентарной крови. В них, как правило, содержатся антитела к вирусу кори, и в разных количествах антитела к стафилококкам,стрептококкам, эшерихиям, протею, псевдомонас, возбудителям гриппа, коклюша, полиомиелита, инфекционного гепатита.

Лечебно-профилактические сывороточные препараты используют для создания искусственного

пассивного иммунитета при экстренной профилактике и иммунотерапии следующих заболеваний:

стафилококковых инфекций - антистафилококковая человеческая плазма или антистафилококковый

человеческий иммуноглобулин;

коклюша - нормальный человеческий иммуноглобулин ;

гриппа - донорский гаммаглобулин; 

кори - нормальный человеческий иммуноглобулин; 

полиомиелита - нормальный человеческий иммуноглобулин; 

гепатита А - нормальный человеческий иммуноглобулин;

столбняка - антитоксическая лошадиная сыворотка или (у лиц с аллергией к лошадиному белку) -

провостолбнячный антитоксический человеческий иммуноглобулин (от вакцинированных доноров);

раневых анаэробных инфекций - противогангренозные (антиперфрингенс А, антиэдематиено,

антисептикум) лошадиные сыворотки ;

ботулизма -антиботулинистические А,В,С. лошадиные сыворотки;

дифтерии - антитоксическая лошадиная сыворотка;

бешенства - антирабический лошадиный гамма-глобулин и иммуноглобулин из сыворотки людей,

вакцинированных против бешенства

73 Коллективный иммунитет – иммунитет популяции

Определяется:

1.  Числом переболевших
2.  Числом привитых против данной инфекции
3.  
4.  Иммунная прослойка количество лиц (%) в популяции,
5.  иммунных к данному заболеванию.
6.  Чем выше этот показатель, тем выше
7.  уровень коллективного иммунитета.
8.  Имеет значение для:
9.  Прогнозирования эпидпроцесса
10.  Планирования иммунопрофилактики
11.  Оценки качества иммунопрофилактики

74. АЛЛЕРГИЯ (от греч. аllos - другой) - форма иммунного ответа, специфическая повышенная чувствительность организма к аллергену (антигену) в результате неадекватной реакции иммунной системы на повторный контакт с аллергеном, что приводит к повреждению тканей.

СТАДИИ АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ

1.  СЕНСИБИЛИЗАЦИЯ – переход от нормальной реактивности к повышенной к какому-либо аллергену. Формируется около 2-х недель. Сохраняется от дней до многих лет и даже всю жизнь. Может формироваться активно и создаваться пассивно.
2.  РАЗРЕШЕНИЕ – стадия клинических проявлений. Развивается в основном на повторное попадание аллергена или (реже) на аллерген, который сохраняется в организме более 2-х недель. Стадия клинических проявлений: два типа – гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ) и гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ).
3.  ДЕСЕНСИБИЛИЗАЦИЯ – возврат к нормальной реактивности, который может произойти: спонтанно – после устранения действия аллергена и искусственно – после курса введения аллергена в малых дозах.
4.  ГНТ - гиперчувствительность, обусловленная антителами (IgЕ,IgG,IgM) против аллергенов. Развивается через несколько минут или часов после повторного воздействия аллергена: расширяются сосуды, повышается их проницаемость, развиваются зуд, бронхоспазм, сыпь, отеки. Поздняя фаза ГНТ дополняется действием продуктов эозинофилов и нейтрофилов.
5.  К ГНТ относятся следующие типы реакций :
6.  I тип — медиаторный (анафилактический)
7.  II тип — цитотоксический
8.  III тип – иммунокомплексный

ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ЗАМЕДЛЕННОГО ТИПА (IV ТИП)

1.  Развивается по механизму клеточного иммунного ответа. Обусловлена (фаза сенсибилизации) взаимодействием аллергена с макрофагами и Тh1-лимфоцитами, стимулирующими клеточный иммунитет, заканчивающийся образова-нием Т-эффекторов и Т-киллеров.
2.  Аллергенами чаще всего являются: простые химические в-ва (гаптены), микробные аллергены, лекарства, аутоаллергены.
3.  Фаза разрешения развивается через 1—3 суток после повторного попадания аллергена.

Аллергены, определение, классификация, характеристика.

АЛЛЕРГЕНЫ – химические в-ва любой природы, которые при попадании в организм вызывают сенсибилизацию к ним.

 I. Экзоаллергены

По механизму проникновения:

1.Контактный

2.Игаляторный

3.Алиментарный

4.Парентеральный

По происхождению

1.Бытовые

2.Эпидермальные

3.Пыльцевые

4.Химические в-ва

5.Лекарственные

6.Пищевые

7.Микробные

II. Эндоаллергены

Характеристика.

Ингаляционные	а) растительного происхождения (пыльца растений) б) животного происхождения (эпидермальные антигены, антигены клещей и др) в) бытовые аллергены (пыль и др.)
Пищевые	яйца, молоко, сыр, рыба, мясо, шоколад, ракообразные, моллюски, рыба, бобовые, орехи, ягоды, зелень, пряности, овощи, грибы, пищевые добавки и смеси
Лекарственные	антибиотики, сульфаниламиды, гормоны (инсулин, АКТГ, сыворотки, витамины (тиамин и др.), ферменты и др.
Микробные	вирусы, бактерии, грибы, простейшие

75. ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ НЕМЕДЛЕННОГО ТИПА

1.  ГНТ - гиперчувствительность, обусловленная антителами (IgЕ,IgG,IgM) против аллергенов. Развивается через несколько минут или часов после повторного воздействия аллергена: расширяются сосуды, повышается их проницаемость, развиваются зуд, бронхоспазм, сыпь, отеки. Поздняя фаза ГНТ дополняется действием продуктов эозинофилов и нейтрофилов.
2.  К ГНТ относятся следующие типы реакций :
3.  I тип — медиаторный (анафилактический)
4.  II тип — цитотоксический
5.  III тип – иммунокомплексный

I ТИП ГНТ (МЕДИАТОРНЫЙ)

1.  Возникает на экзогенные Т-зависимые аллергены (лекарственные, пищевые, пыльцевые, микробные).
2.  При первичном контакте с аллергеном образуются IgE, концентрация которого превышает в 20-40 раз норму. IgE прикрепляются Fс-фрагментом к тучным клеткам и базофилам шоковых органов (слизистые оболочки, соединительная ткань разных органов).
3.  Повторно введенный антиген перекрестно связывается с IgЕ на клетках, вызывая их дегрануляцию, выброс гистамина и других медиаторов аллергии.

II ТИП ГНТ (ЦИТОТОКСИЧЕСКИЙ)

1.  Развивается на простые химические вещества, лекарства, бактериальные, вирусные антигены, которые сорбируются или связываются мембранами клеток, а также аутоантигены.
2.  При первичном контакте с аллергеном образуются антитела классов IgG и IgM, способные активировать систему комплемента по классическому пути.
3.  На стадии разрешения аллерген, расположенный на клетке «узнается» указанными антителами. При взаимодействии «клетка-антиген-антитело» происходит активация комплемента и разрушение клетки (комплементзависимый цитолиз).
4.  Помимо комплементзависимого цитолиза лизис клеток-мишеней может так же быть вызван фагоцитами и естественными киллерами, несущими на мембране рецепторы к Fc фрагменты антитела

III ТИП ГНТ (ИММУНОКОМПЛЕКСНЫЙ)

1.  Развивается на многие гетеро-, алло-, и аутоаллергены, длительно и в больших количествах циркулирующих в организме. Может быть обусловлена многими микроорганизмами и имеет место при хронических бактериальных, вирусных, грибковых, протозойных инфекциях.
2.  При первичном контакте с аллергеном синтезируются антитела классов IgG, IgM, IgA.
3.   На стадии разрешения антитела образуют с растворимыми антигенами иммунные комплексы, которые активируют комплемент. При избытке антигенов или недостатке комплемента иммунные комплексы откладываются на стенке сосудов, базальных мембранах, т. е. структурах, имеющих Fс-рецепторы. Развивается воспалительная реакция.

I ТИП ГНТ (МЕДИАТОРНЫЙ)

1.  Возникает на экзогенные Т-зависимые аллергены (лекарственные, пищевые, пыльцевые, микробные).
2.  При первичном контакте с аллергеном образуются IgE, концентрация которого превышает в 20-40 раз норму. IgE прикрепляются Fс-фрагментом к тучным клеткам и базофилам шоковых органов (слизистые оболочки, соединительная ткань разных органов).
3.  Повторно введенный антиген перекрестно связывается с IgЕ на клетках, вызывая их дегрануляцию, выброс гистамина и других медиаторов аллергии.

СТАДИЯ РАЗРЕШЕНИЯ I ТИПА ГНТ

1.  Иммунологическая фаза - При повторном поступлении аллергена на тучных клетках и базофилах образуются комплексы аллерген-IgE, вызывающие изменения свойств ЦПМ.
2.  Патохимическая фаза – наступает после дегрануляции базофилов и тучных клеток. Из гранул в ткани выбрасы-ваются биологически активные медиаторы: гистамин, серотонин, ацетилхолин, гепарин, лейкотриены, простагландины, ферменты и цитокины (ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-13, ФНО-альфа).
3.  Патофизиологическая фаза – Перечисленные компоненты вызывают сокращение гладких мышц, ослабление сердечной деятельности, развитие коллапса, повышение сосудистой проницаемости, отек, зуд и т. д.

Клинические проявления гиперчувствительности 1 типа

1.  Атопия — наследственная предрасположенность к развитию ГНТ, обусловленная повышенной выработкой IgЕ-антител к аллергену, повышенным количеством Fс-рецепторов для этих антител на тучных клетках, особенностями распределения тучных клеток и повышенной проницаемостью тканевых барьеров. Формы атопий – бронхиальная астма, крапивница, сенная лихорадка (аллергический ринит), отек Квинке, детская экзема.
2.  Анафилактический шок – алергенами чаще выступают лекарства, яд пчел. Протекает остро с развитием коллапса, отеков, спазма гладкой мускулатуры, потерей сознания, часто заканчивается смертью.
3.  1 тип гиперчувствительности можно пассивно перенести с помощью антител.

 КОЖНЫЕ ПРОБЫ С АТОПИЧЕСКИМИ АЛЛЕРГЕНАМИ

1.  Скарификационная кожная проба. Аллергены – пыльцевые, бытовые, пищевые, эпидермальные и др.
2.  Реакцию учитывают через 15—20 мин после внесе-ния в царапину аллергена: при положительной реакции появляется волдырь (от 2 до 10 мм и более) с гиперемией; при отрицательной реакции — волдырь, выраженная гиперемия отсутствуют.

76. II ТИП ГНТ (ЦИТОТОКСИЧЕСКИЙ)

1.  Развивается на простые химические вещества, лекарства, бактериальные, вирусные антигены, которые сорбируются или связываются мембранами клеток, а также аутоантигены.
2.  При первичном контакте с аллергеном образуются антитела классов IgG и IgM, способные активировать систему комплемента по классическому пути.
3.  На стадии разрешения аллерген, расположенный на клетке «узнается» указанными антителами. При взаимодействии «клетка-антиген-антитело» происходит активация комплемента и разрушение клетки (комплементзависимый цитолиз).
4.  Помимо комплементзависимого цитолиза лизис клеток-мишеней может так же быть вызван фагоцитами и естественными киллерами, несущими на мембране рецепторы к Fc фрагменты антитела

СТАДИЯ РАЗРЕШЕНИЯ II ТИПА ГНТ

1.  Иммунологическая фаза – специфические антитела классов IgG и IgM связываются своими Fab- фрагментами с аллергеном, находящимся на мембранах клеток (клетки крови, гепатоциты, клетки эндотелия сосудов, эпителия почек)
2.  Патохимическая фаза – Fc-фрагменты антител активируют систему комплемента с образованием мембраноатакующего комплекса. Указанный процесс приводит к образованию С3а, с5а (анафилатоксины), Ва, перфорина и др.
3.  Патофизиологическая фаза – разрушение клеток-мишеней различных органов, развитием воспаления, определенных клинических синдромов.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ II ТИПА

1.  Некоторые аутоиммунные болезни, обусловленные появлением аутоантител к антигенам собственных тканей: злокачественная миастения, аутоиммунная гемолитическая анемия, вульгарная пузырчатка, нефрит, аутоиммунный гипертиреоидизм, инсулинозависимый диабет II типа.
2.  Лекарственно-индуцируемые гемолитическая анемия, гранулоцитопения и тромбоцитопения сопровождаются появлением антител против лекарства — гаптена и цитолизом клеток, содержащих этот антиген.

III ТИП ГНТ (ИММУНОКОМПЛЕКСНЫЙ)

1.  Развивается на многие гетеро-, алло-, и аутоаллергены, длительно и в больших количествах циркулирующих в организме. Может быть обусловлена многими микроорганизмами и имеет место при хронических бактериальных, вирусных, грибковых, протозойных инфекциях.
2.  При первичном контакте с аллергеном синтезируются антитела классов IgG, IgM, IgA.
3.   На стадии разрешения антитела образуют с растворимыми антигенами иммунные комплексы, которые активируют комплемент. При избытке антигенов или недостатке комплемента иммунные комплексы откладываются на стенке сосудов, базальных мембранах, т. е. структурах, имеющих Fс-рецепторы. Развивается воспалительная реакция.

СТАДИЯ РАЗРЕШЕНИЯ III ТИПА ГНТ

1.  Иммунологическая фаза – специфические антите-ла классов IgG, IgM, IgA образуют с циркулирующими аллергенами растворимые иммунные комплексы с осаждением последних в тканях под базальной мембраной эпителия и субэндотелиально.
2.  Патохимическая фаза – активация системы комплемента по классическому и альтернативному путям, образование анафилатоксинов (С3а, С5а). Накапливаются цитокины (ИЛ-1, ИЛ-2, ФНО)
3.  Патофизиологическая фаза – анафилатоксины расширяют сосуды, повышают их проницаемость, индуцируют образование на эндотелии молекул адгезии для лейкоцитов, макрофагов, которые выс-вобождают цитокины и повреждают ткани. Фиксированные иммунные комплексы вызывают воспаление.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ III ТИПА

1.  Реакция может быть общей (например, сывороточная болезнь) или вовлекать отдельные органы, ткани, включая кожу ( системная эритематозная волчанка, реакция Артюса), почки ( нефрит), легкие (например, аспергиллез) или другие органы.
2.  Поскольку место фиксации иммунных комплексов внутренняя оболочка сосудов, то основной клинический синдром – васкулиты различной локализации.
3.  Когда аллергеном являются чужеродные сыворотки, некоторые лекарства развивается сывороточная болезнь. Иммунные комплексы, откладываются в стенках кровеносных сосудов и тканях. Развиваются системные васкулиты, артриты (отложение комплексов в суставах), нефрит (отложение комплексов в почках).
4.  Реакция Артюса развивается при повторном введении антигена, который локально образует иммунные комплексы с ранее накопившимися антителами. Проявляется отеком, геморрагическим воспалением и некрозом.

77. ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ЗАМЕДЛЕННОГО ТИПА (IV ТИП)

1.  Развивается по механизму клеточного иммунного ответа. Обусловлена (фаза сенсибилизации) взаимодействием аллергена с макрофагами и Тh1-лимфоцитами, стимулирующими клеточный иммунитет, заканчивающийся образова-нием Т-эффекторов и Т-киллеров.
2.  Аллергенами чаще всего являются: простые химические в-ва (гаптены), микробные аллергены, лекарства, аутоаллергены.
3.  Фаза разрешения развивается через 1—3 суток после повторного попадания аллергена.

Форма ГЗТ	аллерген	гистология	клиника
Контактная	Простые химв-ва (гаптены)	Лимфоциты, макрофаги	Контактный дерматит, экзема, отеки
Инфекционная	Туберку-линовая	Микробные (туберкулез, проказа, бруцеллез)	Лимфоциты, моноциты, макрофаги	Местный инфильтрат
Гранулема-тозная	Микробные (туберкулез, проказа, сифилис)	Макрофаги, эпителиоидные клетки, гигантские клетки, фиброз	Гранулема, уплотнение в легких, коже и др.

КОНТАКТНАЯ ФОРМА ГЗТ

1.  Контактная форма - лекарства, косметические препараты в эпидермисе кожи соединяются с белками тканей и образуют комплексный антиген. В региональных лимфоузлах происходит антигенспецифическая дифференцировка Т-лимфоцитов, их миграция в кожу и на повторное воздействие аллергена они индуцируют контактный дерматит.

ИНФЕКЦИОННАЯ ФОРМА ГЗТ

1.  Туберкулиновая форма – микробные антигены индуцируют в месте нахождения микроба специфическую дифференцировку Т-лимфоцитов с дальнейшим формированием воспалительного очага, инфильтрата с преобладанием мононуклеаров. В диагностической практике используют кожноаллергические пробы с аллергенами возбудителей: туберкулином, бруцеллином и др.
2.  Гранулематозная форма – развивается как продолжение туберкулиновой формы при длительном нахождении микроба в организме. Образуются гранулемы – крупные очаги инфильтративного воспаления, отграниченные от окружающей ткани. В центре гранулемы микробы, макрофаги, эпителиоидные и гигантские многоядерные клетки. По периферии пролиферируют фибробласты, секретирующие коллаген. В дальнейшем гранулема подвергается фиброзу (благоприятный исход) или распаду, некрозу (прогрессирование инфекции).

1.  78 ЛЕКАРСТВЕННАЯ АЛЛЕРГИЯ
2.  Развивается на лекарственные препараты или их метаболиты.
3.  Механизм – I, II, III, IV типы гиперчувстви-тельности.
4.  Выявляется у 4% больных аллергией.
5.  Основные аллергены – поливитамины, антибиотики, сульфаниламиды, анальге-тики, сердечно-сосудистые, инсулин, сыворотки, вакцины.  
6.  ПРОФИЛАКТИКА ЛЕКАРСТВЕННОЙ АЛЛЕРГИИ
7.  ИНДИВИДУАЛЬНАЯ:
8.  Собрать анамнез
9.  Поставить кожную пробу
10.  Медленное введение препарата
11.  Выбрать менее опасный способ введения
12.  Использовать менее аллергенные препараты
13.  Применять антиаллергические препараты
14.  КОЛЛЕКТИВНАЯ:
15.  Ограничение применения антибиотиков
16.  Не применять одни и те же антибиотики у человека и животных

Лекарственная аллергия: основные аллергены, механизмы и типы аллергических реакций, способы диагностики и предупреждения.

 АЛЛЕРГИЯ - форма иммунного ответа, специфическая повышенная чувствительность организма к аллергену (антигену) в результате неадекватной реакции иммунной системы на повторный контакт с аллергеном, что приводит к повреждению тканей.

ЛЕКАРСТВЕННАЯ АЛЛЕРГИЯ:

- Развивается на лекарственные препараты или их метаболиты.

- Механизм – I, II, III, IV типы гиперчувствительности.

- Выявляется у 4% больных аллергией.

- Основные аллергены – поливитамины, антибиотики, сульфаниламиды, анальгетики, сердечно-сосудистые, инсулин, сыворотки, вакцины.  

Выделяют два типа реакций А и В:

А – наиболее общие и предполагаемые, дозозависимые реакции (80%).

В – необычные, непредполагаемые и дозонезависимые

  Лекарства с большей мол. массой более аллергенны (сыворотка, инсулин). Низкомолекулярные должны предварительно соединиться с носителем, представляющим структуры пациента.

  Клиническая картина характеризуется развитием аллергических реакций немедленного или замедленного типа: анафилактического шока, острой аллергической крапивницы или ангионевротического отека, бронхоспазма, картины, напоминающей сывороточную болезнь, контактных аллергических дерматитов.

79 Пищевая аллергия. Пищевые продукты, обладающие повышенным сенсибилизирующим действием. Меры профилактики пищевой аллергии. Парааллергия. Идиосинкразия.

 АЛЛЕРГИЯ - форма иммунного ответа, специфическая повышенная чувствительность организма к аллергену (антигену) в результате неадекватной реакции иммунной системы на повторный контакт с аллергеном, что приводит к повреждению тканей.

ПИЩЕВАЯ АЛЛЕРГИЯ:

- Развивается на пищевые аллергены (белки, углеводы, жиры, витамины). Наиболее распространенные – коровье и козье молоко, куриное яйцо, рыба, морепродукты, бобовые, орехи, овощи.

- Встречается у 20-40% детей и 10% взрослых.

- Механизм – I, II, III, IV типы гиперчувствительности. Основной механизм I тип – IgE зависимый.

- Аллергенные компоненты – гликопротеиды с мол.массой 10000-67000 кD, обычно термостабильны и устойчивы к протеолизу в ЖКТ.

- Адсорбируются на слизистой ЖКТ и транспортируются внутрь организма.

- Поскольку редкие больные реагируют более чем на один аллерген лучшим терапевтическим и профилактическим средством будет исключение употребления аллергенного продукт Парааллергия - вид аллергии, при которой специфически сенсибилизированный организм дает аллергическую реакцию на неспецифические раздражители.

  Идиосинкразия - болезненная реакция, возникающая у некоторых людей в ответ на определённые неспецифические (в отличие от аллергии) раздражители. В основе идиосинкразии лежит врождённая повышенная реактивность и чувствительность к определённым раздражителям, или реакция, возникающая в организме в результате повторных слабых воздействий некоторых веществ, не сопровождающаяся выработкой антител. современное значение близко к понятию ферментопатия, т.к. болезненные проявления часто связаны с недостаточностью определённых звеньев обмена веществ в условиях той или иной внешней нагрузки. 

80Методы диагностики аллергических заболеваний in vivo и in vitro.

Методы диагностики ГНТ (in vivo и in vitro).

1. ГНТ медиаторного механизма (анафилаксия, атопия):

 а) сбор аллергологического анамнеза ;

 б) Кожно-аллергические пробы разрешены строго ограниченно и только в лечебных учреждения> Аллерген вводится цельный или разведенный в количестве 0,1 мл строго внутрикожно. Учет реак течение 0-4 часов. Реакция считается положительной, если:

на месте введения образуется везикула и эритема;

на месте введения только эритема, но с диаметром более 20 мм

имеются признаки общей реакции: головокружение, тошнота и т.д.

 в) повышение количества иммуноглобулина Е в сыворотке крови;

 г) повышение концентрации в сыворотке крови гистамина и др.аминов ;

 д) реакция дегрануляции тучных клеток (тест Шелли): если к нормальным тучным клеткам добавить смесь сыворотки больного и аллергена то в результате фиксации иммунного комплекса + аллерген" на

рецепторах мембраны тучной клеткой наблюдается повышенная проницаемостьмембран и выбро клетки гранул с биологически активными аминами.

2. ГНТ цитоксического типа (аутоиммунные болезни, анемии, агранулоцитоз и др.);

 а) обор аллергического анамнеза;

 б) кожно-аллергические пробы;

 г) реакция повреждения нейтрофилов: к нейтрофилам больногодобавляем аллерген. Если на мембране нейтрофилов локализованы аллергические иммуноглобулины, то образовавшийся на мембране иммунный

комплекс "Jg G + аллерген" вызывает разрушение ее целостности.

3. ГНТ иммунокомплексного типа:

 а) сбор аллергического анамнеза;

 б) определение фиксированных имглунных комплексов методом непрямой иммунофлюоресценции;

 в) определение циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови: они осаждаются из сыворотки при воздействии раствора полиэтиленгликоля Ш 6000. В осадке определяется количество белка и по калибровочному графику производится расчет количества ЦИК.

Методы диагностики ГЗТ (in vivo и in vitro).

 а)сбор аллерголоческого анамнеза;

 б)кожно-аллергические пробы отличаются временем- и критериями оценки при учете: максимум их развития наблюдается через 24-48-72 часа. Реакция считается положительной при наличии инфильтрата на месте введения размером более 5 мм;

 в)реакция подавления миграции макрофагов. Лимфоциты человека смешивают с предполагаемым антигеном, а через 18 часов в каплю полученной культуральной жидкости опускают капилляр, наполненный подвижными макрофагами или гранулоцитами и через, сутки измеряют степень их миграции из опытного и контрольного (без антигена) капилляров. Их отношение называется индексом подавления миграции.

 г)реакция бластной трансформации лимфоцитов с фитогешгглютинлном или соответствующими антигенам проявляется в превращении лимфоцитов в более крупные молодые клетки - бласты, число которых подсчитывается в препарате на 200 лимфоцитов.

81. Клиническая иммунология — раздел иммунологии, изучающий функционирование иммунной системы у здоровых и больных неинфекционными заболеваниями людей. Объектами исследования в клинической иммунологии являются люди разных возрастов, лица с врожденными или приобретенными иммунодефицитами, больные аллергическими, аутоиммунными и лимфопролиферативными заболеваниями. Важными объектами клинической иммунологии являются больные, страдающие заболеваниями сердечно-сосудистой и бронхо-легочной систем, кожными болезнями, почечной и урогенитальной патологией, лица с новообразованиями и пренесшие трансплантацию органов.    Экологическая иммунология направление иммунологии, изучающе влияние иммунотропных экологически факторов среды (ИЭФ) на иммунную систему индивидуума в процессе онтогенеза. Иммунная система человека является цен тральной мишенью для воздействия ЙЭФ. Они относятся к факторам физической (излучение, температура, инсоляция), химической (производственные и бытовые химические вещества, лекарства), биологической (лечебные и профилактические иммунобиологические препараты, вирусы, бактерии, грибы, простейшие, гельминты) и социальной (стресс, недостаточность питания) природы. Главными экологической иммунологии являются:

а) изучение влияния иммунотропных экологических факторов на иммунную систему;

б) разработка методов и подходов донозологической диагностики нарушений иммунной системы;

в) диагностика развивающихся на этой основе иммунопатологических состояний; г) поиск причинно-следственных связей между градиентом действующих на организм ИЭФ и развивающимися иммунопатологическими процессами;

д) разработка препаратов и методов иммунокоррекции с целью профилактики и лечения экологозависимых ммунопатологических процессов;

е) организация иммуноэкологического монитоинга на экологически неблагополучных территориях и промышленных предприятиях.

82. Иммунвдефицитньве состояния: врождённые и приобретённые. Структура первичных иммунодефнцитов.

1. Первичные, или врожденные ИД

2. Вторичные, или приобретенные ИД

ИД сопровождаются отсутствием (гипореактивность или ареактивность) или недостаточностью/неэффективностью реакции на ВСЕ поступающие антигены. При развитии толерантности отсутствует ответ на определенный антиген (толероген). Реактивность в отношении иных антигенов сохраняется.

А) Иммунодефициты не имеют специфичных, или патогномоннчных симптомов. Б) Заподозрить иммунодефициты можно при наличии: 1. Частой заболеваемости (более 4 раз в год)

2. Рецидивирующих, хронических инфекции!»порюшющих различные органы и ткани и,

как правило, вызываемых оппортунистическими или условно-патогенными микроорганизмами;

3. Опухолевых процессов;

4. Аллергий;

5. Аутоиммунных процессов

В) Диагностируют путем определения иммунного статуса с использованием тестов 1-го и 2-го уровней.

Первичные иммунодефициты (ПИД) — это врожденные нарушения иммунной системы, связанные с генетическими дефектами одного или нескольких компонентов иммунной системы. Классифицируются в зависимости от поражаемого звена:

ПИД с нарушением ГИО (преимущественно антительные деффекты) Причина некоторых первичных иммунодефицитов ограничивается нарушением антителообразования. или задержкой развития В-лимфоцитов, или неэффективным ответом В-лимфоцитов па сигналы I -лимфоцитов. Клинические проявления этой группы заболеваний, представлены повторными гнойными инфекциями.

- ПИД с нарушением КИО (первичный дефицит CD4, первичный дефицит CD7, дефицит IL-2)

Комбинированные ПИД (ГИО + КИО) Эта группа заболеваний клинически и иммунологически характеризуется дефектом как Т, гак и В лимфоцитов. Диагностические критерии обычно включают' начало заболевания в раннем возрасте в виде тяжелых, потенциально смертельных инфекций, глубокое нарушение клеточного иммунитета и дефицит антител, лимфопению, в основном за счет Г лимфоцитов. Клинические проявления обычно включают задержку и отсутствие прогресса физического и моторного развития - failure to thrive, персистируюшие, вяло текущие и необычно упорные инфекции, вызванные низковирулентными оппортунистическими микроорганизмами

- ПИД с нарушением системы комплемента (чаше всего проявляется повторными гнойными инфекциями, иейссернальными инфекциями, СКВ)

- ПИД с нарушением фагоцитоза(дефицит миелопероксидазы, дефицит вторичных гранул, синдром Швахмана, дефицит адгезии лейкоцитов)

Проявляются в раннем возрасте. Связаны с генетическими дефектами и потому часто ассоциированы с анатомическими и функциональными нарушениями других, систем организма. Лечение: трансплантация, переливание крови, компонентов крови.

Вторичные иммунодефициты (ВИД). Нарушения иммунной системы, которые развиваются в позднем постнатальном периоде или у взрослых и, как ПРАВИЛО, не являются результатом генетических дефектов, развиваются в ответ на индуцирующий фактор, удаление которого приводи к восстановлению функций (транзиторный характер). Для терапии используют иммуномодуляторы (иммуностимуляторы).

Классифицируются в зависимости от индуцирующего агента:

1. Постинфекционные ВИД:

A) В результате бактериальных инфекций: туберкулез. Б) В результате вирусных инфекций: ВИЧ, герпес, корь

B) В результате грибковых инфекций, паразитарных инвазий

2. Возникающие в результате других воздействий:

А) радиоактивные воздействия; Б) Прием кортикостероидов и цитостатиков; Г) Стрессы; Д) Травмы и обширные хирургические операции; Ж) Гормональные, хронические заболевания, опухоли (диабет, заболевания почек и печени, злокачественные процессы и т. д.).

83. Аутоиммунное заболевание - это заболевание, обусловленное аутоантителами (антителами к собственным антигенам) и цитотоксическими Т-лимфоцитами , направленными против собственных антигенов.

Множество различных аутоиммунных заболеваний можно представить в виде единого спектра. На одном его краю находятся органоспецифические болезни, связанные с образованием органоспецифических аутоантител. В этом случае мишенью аутоиммунопатологии становится какой-то определенный орган (например, болезнь Хасимото со специфическим поражением щитовидной железы). На другом краю спектра располагаются органонеспецифические заболевания, например системная красная волчанка (СКВ ), при которой и поражения и аутоантитела не обладают органной

специфичностью. Ближе к центру этого спектра находятся болезни, при которых имеется тенденция к локальному поражению одного определенного органа, хотя образующиеся при этом аутоантитела не являются органоспецифическими, например, первичный билиарный цирроз печени. Органоспецифические заболевания имеют тенденцию встречаться в сочетаниях – сочетанная аутоиммунная патология.

Аутоантитела при заболеваниях человека

84. Противоопухолевый иммунитет основан на Th1-зависимом клеточном иммунном ответе, активирующем цитотоксические Т-лимфоциты, макрофаги и NK-клетки. Роль гуморального (антительного) иммунного ответа невелика, поскольку антитела, соединяясь с антигенными детерминантами на опухолевых клетках, экранируют их от цитопатогенного действиях иммунных лимфоцитов. Опухолевый антиген распознается антигенпрезентирующими клетками (дендритными клетками и макрофагами) и непосредственно или через Т-хелперы (Th1) представляется цитотоксическим Т-лимфоцитам, разрушающим опухолевую клетку-мишень.

Кроме специфического противоопухолевого иммунитета, иммунный надзор за нормальным составом тканей реализуется за счет неспецифических факторов. Неспецифические факторы, повреждающие опухолевые клетки: 1) NK-клетки, система мононуклеарных клеток, противоопухолевая активность которых усиливается под воздействием интерлейкина-2 (ИЛ-2) и α-, β-интерферонов; 2) ЛАК-клетки (мононуклеарные клетки и NK-клетки, активированные ИЛ-2); 3) цитокины (α - и β -интерфероны, ФНО- α и ИЛ-2).

85. Иммунокоррекция — терапевтические, хирургические или генетические способы восстановления нормальной функции иммунной системы. Иммуносупрессия — терапевтическо ингибирование функциональной активно™ В- и Т-лимфоцитов, биосинтеза и процесса продуцирования антител, цитокинов, регуляторной и эффекторной активности последних путем направленного применения иммунодепрессивных препаратов. Проводится при лечении аутоиммунных аллергических, лимфопролиферативных заболеваний, при трансплантации органов и тканей.

Иммунодепрессанты — вещества, которые в терапевтических концентрациях частично или полностью подавляют специфический иммунный ответ на действие антигена. К первым относятся алкилирующие соединения (циклофосфан, хлорбу-тин), кортикостероиды (преднизолон, дексаметазон), антибиотики (актиномицин D и С, циклоспорин А), антиметаболиты (меркаптопурин, азатиоприн), алкалоиды (винкристин, винбластин), антагонисты фолиевой кислоты (метотрексат), монокло-нальные антилимфоцитарные антитела и др. Циклоспорин А и такролимус (FK-506) оказывают супрессивный

эффект на уровне активации Т-лимфоцитов, синтеза цитокинов посредством ингибиции лимфоцитарной кальциневриновой (КН) фосфатазы. Микофенолат мофетил (ММФ) ингибирует инозин монофосфат дегидрогеназу, сиролимус (srl) и лифлуномид (LFM) — активацию Т-лимфоцитов Используются для лечения аллергических, аутоиммунных, инфекционных заболеваний, подавления трансплантационной реакции. 

Иммуностимуляторы — лекарственные вещества, повышающие функциональную активность, содержание клеток и молекул иммунной системы и восстанавливающие иммунологическую компетентность организма. Могут быть естественного и синтетического присхождения. Иммуностимуляторами естественного происхождения являются пирогенал (ЛПС, полученный из псевдоманас); продигиозан (полисахарид, полученный из грибков); зимозан (полисахарид, полученный из дрожжей); натрия нуклеинат (натриевая соль РНК дрожжей); вакцина БЦЖ (микобактерии бычьего вида); мурамиддипептид (препарат из нокардий); рибомунил (рибосомальные белки стрептококков, клебси-елл, гемофильных бактерий); ликопид, пицибанил (препарат из стрептококков); лентинан (получен из грибов); биостим (препарат из клебсиелл); крестин (препарат из мицелия бластомицетов); бестатин (ингибитор аминолептидазы); паспат (лизат стрептококов, стафилококков, гемофильной палочки), пептидогликаны и др. К иммуностимуляторам растительного происхождения относятся адаптогены (препараты элеутерококка, лимонника, женьшеня, иммунал и др.) Иммуностимуляторы животного происхождения представляют собой препараты, полученные из селезенки (спленин), плаценты, тимуса (тактивин, тимактид, тималин, тимозин, тимоптин, тимостимулин, тимический сывороточный фактор, тимоген), костного мозга (миелопид). К иммуностимуляторам синтетического происхождения относятся дибазол, диуцифон, левамизол, ликопид, пентоксил, полудан, метилурацил, изопринозин, ке-мантан, тимулин, тимопептиды (4,5), им-мунофан, и др.

Иммуномодуляция — способ лекарственного воздействия на иммунокомпетентные клетки или имунную систему в целом для востановления сбалансированного нормального функционирования ее.

86.   Стафилококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых стафилококками. Специфическая профилактика и лечение.

Таксономия: относятся к отделу Firmicutes, семейству Мicrococcacae, роду Staphylococcus. К данному роду относятся 3 вида: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus.

Морфологические свойства: Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются несимметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы.

Культуральные свойства: Стафилококки — факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не имеющим таксономического значения.  Могут расти  на агаре с высоким содержанием NaCl. Обладают сахаролитичес-

кими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу.

Стафилококки пластичны, быстро приобретают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы.

Антигенная структура. Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этом Fab-фрагмент остается свободным и может соединяться со специфическим антигеном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена поверхностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков являются лизогенными(образование некоторых токсинов происходит с участием профага).

Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков.

Резистентность. Устойчивость в окружающей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная.

Патогенез. Источником инфекции стафилококков  -  человек и некоторые виды животных (больные или носители). Механизмы передачи — респираторный, контактно-бытовой, алиментарный.

Иммунитет: Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненажряженный.

Клиника. Около 120 клинических форм проявления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гнойно-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглотки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (интоксикации).

Микробиологическая диагностика. Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения.

Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие  грам «+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.

Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течении суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, летициназы. Ферментация:глк, миннита, образование а-токсина.

Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры.

Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте( компонент клеточной стенки).

Лечение и профилактика. Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитоксическая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизированный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой  и адсорбцией на гидрате оксида алюминия.

Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний.

Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый: гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.  

87. 1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, гр. I. Кокки, с. Micrococaceae, р. Streptococcus, в. Str. pyogenus, Str. pneumoniae, Str. faecalis, Str.facium, Str. agalactica, Str. mutans, Str. mitis, Str. salitarius, Str. sanguis.

2. Морфология: Гр+, кокки, шаровидные или овальные, расположены попарно или в виде цепочек.

3. Тип питания: хемоорганотроф, аэробы

4. Биологические свойства:

1) требовательны к питательному субстрату

2) размножаются на кровяных и сахарных средах

5. АГ структура:

а) полисахаридный группоспецифический АГ(17 серогрупп: А, В, С и т.д.)

б) протеиновый типоспецифический АГ (M, T, R)

в) перекрестно реагирующие АГ (с кардиомиоцитами, тканью почки ч-ка)

6. Классификация по экологическому признаку:

а) 1-ая группа – стрептококки серогруппы А, патогенные только для ч-ка (S. pyogenes)

б) 2-ая группа – патогенные и УПН стрептококки серогруппы В и D, патогенные для ч-ка и животных (S. agalactia, S. faccalis)

в) 3-ая группа – УПН оральные срептококки (S. mutans, S.mitis).

7. Место обитания у ч-ка: полость рта и верхние дыхательные пути, кожа, кишечник. Источник инфекции – бактерионоситель, рековалесценты, больные. ОПЗ – аэрозольный, реже контактный. Во внешней среде сохраняются несколько дней.

8. Профилактика: специфическая не разработана. Разрабатывается противокариесная вакцина.

9. Иммунитет: типоспецифичен и непрочен, поэтому возможны повторные заболевания, кроме скарлатины, при которой обычно вырабатывается пожизненный антитоксический иммунитет.

10. Лечение: АБ (β-лактамы, цефалоспорины 1 и 2 поколений, аминогликозиды, макролиды)

Этиология и патогенез ангины.

Возбудитель: β-гемолитические стрептококки гр.А Str. pyogenes.

Факторы патогенности:

1) капсула, М-белок

2) стрептолизины  - кардиотоксическое действие

3) стрептокиназа - превращает плазмин крови в плазминоген, повышает проницаемость антимикробных барьеров

4) токсин-эритрогенин

Патогенез: фиксация МБ на л.у.  кольца Пирогова  инвазия  подавление фагоцитоза  стрептококковыми токсинами  бактериемия и продолжительная  антигенемии, продукция токсинов, вызывающих воспалительную реакцию тканей миндалин.

Этиология и патогенез скарлатины.

Возбудитель: β-гемолитические стрептококки гр.А.

Патогенез: инвазия в слизистую небных миндалин и других отделов глотки, через раневую и ожоговую поверхности  

а) токсины -гемолитического стрептококка  симптомы интоксикации: повышение температуры тела, сыпь, нарушение функций центральной нервной, сердечно-сосудистой и эндокринной систем.

б) воздействие стрептококка на ткани  развитием катарального гнойного или некротического воспаления в области входных ворот, гнойных осложнений.

в) сенсибилизация организма к -гемолитическому стрептококку и антигенам разрушенных тканей.

Этиология и патогенез рожи, стрептодермии, ревматизма, гломерулонефрита.

Возбудитель: β-гемолитические стрептококки гр.А.

Патогенез: инфицирование  поврежденной кожа  местные и общие изменения в организме (серозным или серозногеморрагическим воспалением,  гнойная инфильтрация соединительной ткани) распространение по лимфатическим и кровесносным сосудам  вторичные гнойные осложнения.

88. 1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, гр. I. Кокки, с. Micrococaceae, р. Streptococcus, Str. pneumoniae.

2. Морфология: Гр+, диплококки, ланцетовидная форма, выраженная капсула

3. Тип питания: хемоорганотроф

4. Биологические свойства:

а) требовательны к питательным средам

б) растет на кровяных средах (α-гемолиз)

5. АГ структура: поверхностный полисахарндный К-АГ, полисахаридный АГ КС, М-протеиновый АГ.

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) адгезины (капсульные полисахариды, М-белок)

б) гемолизины

в) ферменты: пептидаза – расщепляет sIgA, гиалуронидаза – обеспечивает распространение в тканях, агрессины – подавляют фагоцитоз (протеин М), нейраминидаза

Нарушение целостности слизистых респираторного тракта вирусами  колонизация клеточной поверхности отдельных областей респираторного тракта аспирация МБ при дыхании в дистальные отделы респираторного тракта  интенсивно репродукция и активизация  выделению  гемолизинов, гиалуронидазы, лейкоцидина.

7. Клинические проявления: бронхиты, пневмония, реже бактериемия, септицемия, менингит.

8. Иммунитет: малонапряженный и типоспецифический.

9. Эпидемиология. Антропонозная инфекция. ОПЗ – аэрозольный. Источник – человек.

10. Профилактика: вакцинопрофилактика не разработана

11. Лечение: различные АБ (β-лактамы, макролиды)

12. Диагностика:

Материал для исследования  в зависимости от формы инфекции: при пневмонии- мокроту, при сепсисе -кровь, при гнойном заболевании- гной, при отите - отделяемое из слухового прохода и т.д. Материал важно забрать до начала этиотропного лечения. Для обнаружения антител исследуют сыворотку крови.

I. Экспресс-методы   (обнаружение   возбудителя в патологическом материале):

1. Микроскопия - мазок из патологического материала с окраской по Граму. Обнаружение грамположительных капсульных диплококков.

2. Определение антигена капсулы в реакции "Набухание капсулы" (по Нейфельду - феномен увеличения размеров капсулы в присутствии поливалентной противокапсульной сыворотки). Последняя наносится на мазок исследуемого материала, учет с помощью фазово-контрастного микроскопа.

3. Обнаружение антигена в   сыворотке   или   ликворе   (РСК,   латекс-агглютинация, встречный иммуноэлектрофорез).

Экспресс-методы чаще являются ориентировочными, так как:

а) не    всегда   обнаружение    пневмококка    свидетельствует о его этиологической роли (часто носительство);

б) возбудитель не обнаруживается с началом этиотропного лечения.

II. Культуральный (бактериологический) метод:

1 этап: материал (не позднее 1-2 часов с момента забора) засевают на  кровяной агар,  и культивируют сутки при температуре 37°С;

2 этап: отбор подозрительных колонии, дающих а-гемолиз, микроскопирование (окраска по Граму, на капсулу), отсев в сывороточный бульон;

3 этап: определяют чистоту культуры (окраска по Гр).

Идентификация по морфологическим, серологическим (РА на стекле с поливалентной противокапсульной сывороткой), культуральным, биологическим свойствам. Последние проводят путем посева в среду с оптохином (нет роста), в  желчный бульон (лизис), внутрибрюшинного заражения мышей (гибель). При необходимости  доказывают этиологическую значимость пневмококка. Определяют также чувствительность к антибиотикам.

Культуральный метод является ведущим методом диагностики, так как он ранний, точный, чувствительный и позволяет выбрать адекватное этиотропное лечение.

III. Серологический метод: определение противокапсульных АТ и их динамики в сыворотке крови с помощью РНИФ (с аутоштаммами), РСК и РИГА (с эталонными штаммами пневмококка). Чаще используют при хронических формах инфекции. Применение метода ограничивается более поздними сроками получения результата и отсутствием готовых диагностикумов.

IV. Биологический метод: внутрибрюшинное заражение белых мышей исследуемым материалом (чаще мокротой). Погибших мышей вскрывают, делают мазки-отпечатки, посевы крови и органов на кровяной агар с последующей идентификацией возбудителя. Метод вспомогательный, ограничивается трудоемкостью, наличием в материале других видов микроорганизмов, патогенных для мышей, низкой чувствительностью мышей к некоторым сероварам пневмококка.

89. Возбудитель менингококковых инфекций.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, гр. I. Кокки, c. Neisseriaceae,  р. Neisseria, N. gonorrhoeae, N. meningitidis, N Sicca, N. flava.

2. Морфология: Гр-, диплококки, сферическая или овоидная форма, есть микрокапсула, жгутиков нет, спор не образует, неподвижен.

3. Тип питания: хемоорганотроф, аэроб.

4. Биологические свойства:

а) требовательны к питательным средам

б) растет на нормальной сыворотке или дефибринированнной крови

в) рост стимулируется повышенной концентрацией СО2 и повышенной влажностью

г) слабая сахаролитическая активность, расщепляют гл и мальтозу до кислоты

5. АГ структура: К-АГ, белки наружной мембраны КС.

6. Факторы патогенности и патогенез:

1) адгезины (пили, белки наружной мембраны КС)

2) инвазины (нейраминидаза, гиалуронидаза)

3) антифагоцитарные (капсульные полисахариды)

4) эндотоксин (ЛПС) – вызывает эндотоксический шок, снижает фракцию комплемента.

Попадание на слизистые  носоглотки  развитию воспаления (10-15%)  массивная бактериемия с интенсивным распадом микробов и токсинемией (эндотоксиновый удар   расстройства гемодинамики) проникновение  в мозговые оболочки  развитие  менингита или менингоэнцефалита.

7. Клинические проявления: выделяют: локализованные формы (менингококконосительство и острый назофарингит); генерализованные формы (менингококкемия, менингит, менингоэнцефалит и смешанная);редкие формы (эндокардит, полиартрит, пневмония, иридоциклит).
8. Иммунитет: при генерализованных формах напряженный, в основном ГИО (АТ от иммунизированной матери передаются плоду)

9. Эпидемиология. Антропонозная инфекция. Источник – больной или носитель. ОПЗ – аэрозольно.

10. Профилактика: менингококковая химическая вакцина

11. Лечение: АБ (пенициллины, цефалоспорины)

12. Диагностика:

Материалы для исследования: ликвор, слизь, из зева и носа, кровь, гной, экссудат.

1. Бактериоскопия: Мазок по Гр. Люминесцентная микроскопия мазков, обработанных флюоресцирующей сыворотка.

2. Бактериологическое исследование:

1-ый этап: посев на сывороточный питательный агар, оценка характера колоний, мазок по Гр.

2-ой этап: посев на сывороточный питательный агар для выделения чистой культуры. Идентификация МБ: посев на «пестрый ряд», серотипирование, определение чувствительности к АБ.

Материал: ликвор. Обнаружение АГ в реакции встречного иммуноэлектрофореза с преципитирующими антименингококковыми сыворотками.

Материал: кровь. Серодиагностика в РПГА с парными сыворотками.

90. 1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, гр. I. Кокки, c. Neisseriaceae,  р. Neisseria, N. gonorrhoeae.

2. Морфология: Гр-, диплококки, бобовидная форма (кофейные зерна), есть микрокапсула, есть пили, жгутиков не имеют, спор не образуют.

3. Тип питания: хемоорганотроф

4. Биологические свойства:

а) культивируются на средах с белком, лучше при повышенном содержании СО2.

б) ферментируют только гл

5. АГ структура: белки наружной мембраны, АГ пилей

6. Факторы патогенности и патогенез:

1) адгезины (пили и белки наружной мембраны КС)

2) эндотоксин (липоолигосахарид)

3) антифагоцитарные факторы (капсулярные полисахариды)

  Адгезия на эпителии уретры, шейке матки, прямой кишке, коньюктиве глаза, сперматозоидах, простейших   размножение на поверхности эпителия и его деструкция  (инвазия в эпителий)  попадание в поверхностные лимфатические и кровеносные сосуды, выделение эндотоксина.

7. Клинические проявления: от бессимптомного воспалительного процесса на слизистых оболочках до гонорейного сепсиса и гнойного менингита. Острый уретрит, цервицит, поражение у женщин труб и яичников, у мужчин – семенных пузырьков и предстательной железы. Возможно поражение прямой кишки, миндалин, бленнорея новорожденных.

8. Иммунитет: ГИО (АТ не протективны). Возможны реинфекции, рецидивы, переходы заболевания в хроническую форму.

9. Эпидемиология. Источник – ч-к, больной или носитель. ОПЗ – половой, возможен контактно-бытовой, вертикальный (от матери плоду)

10. Профилактика: вакцинопрофилактика не проводится. Для предупреждения бленнореи новорожденным закапывают раствор  АБ на коньюктиву глаза

11. Лечение: АБ (пенициллины, цефалоспорины)

12. Диагностика:

Материал: гной из мочеполовых органов, осадок мочи, гной из конъюктивы глаза при бленнорее.

1. Бактериоскопия: мазок по Гр и метиленовым синим.

2. Бактериологическое исследование:

1-ый этап: посев на сывороточный питательный агар и КДС в чашку Петри. Учет характера колоний, мазок по Гр.

2-ой этап: пересев на сывороточный питательный агар для выделения чистой культуры. Идентификация МБ: посев на «пестрый ряд», определение чувствительности к АБ.

Материал: сыворотка крови. Серодиагностика в реакциях РСК.

91. Общая характеристика ОКИ. Классификация и общая характеристика семейства энтеробактерий.

ОКИ – многочисленная полиэтиологическая группа острых заболеваний человека с преимущественной локализацией патологического процесса в кишечнике.

Возбудители ОКИ:

1. Бактерии: представители энтеробактерий, семейства вибрионов (холерный), кампилобактерий, микрококков, неспорообразующих анаэробных бактерий.

2. Вирусы: ротавирусы, вирус гепатита А.

3. Простейшие: дизенерийная амеба, балантидий, лямблия.

4. Грибы: род Кандида.

Основные черты ОКИ:

1. Повсеместное распространение.

2. Высокая заболеваемость.

3. Высокая смертность.

4. ОКИ мало регулируются человеком.

5. Заболеваемость ОКИ и смертность связана с социальными условиями жизни.

6. Большие экономические потери.

Классификация энтеробактерий:

1.  p. Escherichia, в. E. coli
2.  p. Salmonella, в. S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B, S. enteritidis, S. typhimurium, S. anatum, S. infantis, S. Haifa, S.panama
3.  p. Shigella, в. S. dysenteriae, S. sonnei, S. flexneri, S. boydii
4.  p. Klebsiella, в. K. pneumoniae, K. rhinoscuromatis, K. ozaenae
5.  p. Proteus, в. P. vulgaris, P. mirabilis
6.  p. Yersinea, Y. pestis, Y. enterocolitica, Y. psevdotuberculosis

условно-патогенные токсико-пищевые инфекции:

1.  p. Citrobacter
2.  p. Enterobacter
3.  p. Hafnia

Общая характеристика энтеробактерий.

1. Главное место обитания – кишечник человека и животных. При определенных условиях могут покидать данный биотоп и вызывать другие заболевания.

2. Сохраняют жизнеспособность во внешней среде на протяжении определенного срока.

3. Гр-, ФАН, мезофиллы, оптимум роста 37°С. Хорошо растут на простых питательных средах. Формируют R- или S-формы колоний.

4. Биохимические свойства вариабельны у разных родов и видов. Различия используются для классификации энтеробактерий. Чем менее выражены биохимические свойства, тем более патогенен.

5. АГ структура:

а) О-АГ – ЛПС КС, термостабилен, имеется у всех представителей семейства (эндотоксин)

б) Н-АГ – есть у подвижных видов, белковый, термолабильный, обладает высокой иммуногенностью, но не токсичен.

в) К-АГ – гетерополисахарид, АГ структура используется для систематики энтеробактерий для выделения родов, видов, сероваров, субсероваров.

6. Патогенность: 1) облигатно-патогенные – способны вызывать заболевания у здорового человека 2) условно-патогенные – вызывают заболевания при попадании в большом количестве в нехарактерный для них биотоп и у лиц со сниженным иммунитетом 3) непатогенные.

Общие принципы диагностики острых кишечных инфекций.

К ОКИ относятся: эшерихиозы, вызываемые условно-патогенными и патогенными (энтеропатогенными, энтерогеморрагическими, энтероинвазивными и энтеротоксигенными) кишечными палочками, брюшной тиф, паратифы А и Б, сальмонеллезы, дизентерия, кишечные клебсиеллезы и кишечные иерсиниозы.

Методы их микробиологической диагностики включают следующие принципы:

1. Микроскопический метод диагностики, как правило, не приемлем, так как патогенные и непатогенные энтеробактерии имеют общие морфологические характеристики.

2. Для диагностики применяют бактериологический и серологический методы. Выбор метода диагностики зависит от клинических проявлений, места локализации возбудителя и фазы патогенеза болезни

Бактериологическая диагностика.

1. Забор материала. Характер материала зависит от первичной или вторичной локализации микроба-возбудителя. Если материалом служат испражнения, что чаще всего бывает, то их берут до начала или после суточного перерыва в антибактериальной терапии. Материал лучше забирать ректальной трубкой, тампоном со стерильной пеленки или стерильной пергаментной бумаги, специальным устройством для забора фекалий (ни в коем случае не допуская его контакта с дезинфектантами). Если материалом служит кровь, то забирают 10,0 мл крови из вены локтевого сгиба.

2. Транспортировка материала осуществляется медицинским работником в системе "стекло, металл" в течение не более трех часов после его забора или в консерванте с сопровождающими документами.

3. Питательные среды, используемые для бактериологического исследования, можно подразделить на три группы:

а) среды обогащения, создающие условия преимущественного размножения выделяемого возбудителя и основанные либо на принципе наличия в среде факторов активации роста данного микроба, либо на принципе подавления роста сопутствующих микробов-антагонистов. Первой группе соответствует среда Рапопорт, второй - селенитовая, магниевая, Мюллера, с пенициллином и т.д.;

б) средь/ дифференциально-диагностические - плотные питательные среды, содержащие дифференцирующий углевод - лактозу и индикатор. Кишечные палочки, разлагающие лактозу (лактозоположительные), растут в виде окрашенных колоний в зависимости от типа среды - в малиново-красный и розовый (среда Эндо, Плоскирева) или темно-синий (среда Левина) цвет. Клебсиеллы пневмонии разлагают лактозу в среде с индикатором бромтимоловым синим и образуют колонии желтого цвета, в то время как колонии лактозоотрицательных биоваров формируют колонии цвета среды. Сальмонеллы и шигеллы на средах Эндо, Левина, Плоскирева также не разлагают лактозу и дают бесцветные колонии;

в) среды накопления чистой культуры. Чаще применяется среда Олькеницкого (трехсахарный агар). Она состоит из столбика, скошенной части и включает лактозу, глюкозу и сахарозу, индикатор, реагенты для определения сероводорода и уреазы. Посев производят уколом в столбик и штрихом по поверхности скошенной части. При росте микробов глюкоза лучше разлагается в столбике, лактоза - на скосе, в результате чего дифференцированно меняется цвет среды. При образовании газа - формируются пузырьки и разрывы в среде, при продукции сероводорода - наблюдается почернение по ходу укола, при продукции уреазы - изменение цвета среды на оранжевый.

4. Идентификация выделенных культур основана на определении:

1.  общего для семейства признака - грам- палочки;
2.  наличия капсулы (у клебсиелл);
3.  цвета колоний на чашечных средах;
4.  подвижности (сальмонеллы и эшерихии подвижны, шигеллы и клебсиеллы
5.  неподвижны);
6.  биохимических свойств;
7.  антигенной структуры;
8.  чувствительности к антибактериальным препаратам;
9.  чувствительности к бактериофагам.

Антигенную   структуру определяют по предварительному установлению

серогруппы, чаще с монорецепторными адсорбированными сыворотками,

а затем серовара тоже с адсорбированными сыворотками.

Серологическая диагностика: начинается с получения сывороток от

больных.    В них обнаруживаются антитела в реакции агглютинации,

гемагглютинации,   латекс-агглютинации или РСК. Диагноз основан на

обнаружении антител в диагностическом титре или нарастании титра антител

в динамике болезни.

92. 1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, семейство Enterobacteriaceae, р. Escherichia, E.coli

2. Морфология: Гр-, палочка, иногда капсула или микрокапсула, иногда есть перитрихии, подвижна или неподвижна, споронеобразующая

3. Тип питания: хемоорганотроф.

4. Биологические свойства:

а) хорошо растут на простых питательных средах

б) ферментируют гл и лактозу до кислоты и газа

5. АГ структура: О-антиген, К-антиген и Н-антиген.

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) адгезины (капсула – также угнетает фагоцитоз, пили)

б) третья секреторная система

в) ферменты инвазии

г) эндотоксин (ЛПС)

д) энтеротоксин  - активирует аденилатциклазу, приводит к водянистой диарее.

е) экзотоксины (шигоподобный, холероподобный)

ж)нуклеопротеиды – вызывают повышенную чувствительность к МБ

Адгезия на энтероцитах  активный захват энтероцитами и их колонизация, фагоцитоз пейеровыми бляшками и разрушение лимфоцитов   изменению функции энтероцитов, продукция гемолизинов,  энтеротоксинов  увеличение кол-ва цАМФ (водянистая диарея), иногда развитие колитов.

7. Клинические проявления:

а) эндогенные инфекции – гнойно-воспалительные процессов различных локализации (пиелиты, циститы, холециститы).

б) ОКИ: ЭПКП – сальмонеллоподобные инфекции, ЭТКП – холероподобные инфекции, ЭИКП – дизентериеподобные инфекции, ЭГКП – геморрагический колит.

8. Иммунитет: ГИО (АТ не обладает протективным действием).

9. Эпидемиология. Источник – больные люди или бактерионосители. ОПЗ – алиментарный. Используется как санитарный показатель для оценки загрязнений (коли-титр, коли-индекс). Устойчивы во внешней среде, месяцами сохраняются в почве, воде, испражнениях.

10. Профилактика: специфической нет. Неспецифическая: выявление больных и носителей, их изоляция, лечение.

11. Лечение: бифидобактерин, лактобактерин – для детей раннего возраста, АБ (хлорамфеникол, цефалоспорины, фторхинолон).

12. Диагностика:

Цель:  выделение чистой  культуры  и  отличие ее от УПН.

Материал для исследования: фекальные массы.

Бактериологический метод:

1-й этап - посев на среду Эндо (Левина);

2-й этап:

а) обнаружение окрашенных колоний, микроскопия их по Граму;

   б) РА на стекле со смесью сывороток к патогенным серогруппам (предварительная дифференциация патогенных эшерихии от условнопатогенных)

в) отсев положительно    реагирующей в РА колонии на среду Олькеницкого;

3-й этап:

а) учет изменения среды Олькеницкого (посинение и разрыв всей среды);

б) определение чистоты выделенной культуры;

в) определение серовара патогенной эшерихии (путем постановки РА с отдельными ОК-сыворотками на стекле и в пробирках с живой (определение К-антигена) и убитой кипячением (определение О-антигена) культурой;

г) проба на индол, подвижность и чувствительность к антибиотикам.

Серологический метод - постановка РА с сывороткой больного (на 2-ой неделе заболевания).

93. 1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, семейство Enterobacteriaceae, р. Salmonella, в. S. typhi, S. parathyphi A, S. parathyphi B, S. typhimurium, S. enteritis, S. haifa, S. panama, S. anatuma

2. Морфология: Гр-, палочка, мелкая, есть микрокапсула, перитрихии, споронеобразующая, подвижна

3. Тип питания: хемоорганотроф

4. Биологические свойства:

а) лактозоотрицательные (диагностический признак)

б) ферментируют сахара до кислоты и газа (кроме S. thyphi)

в) протеолитические свойства слабо выражены

5. АГ структура: О- (ЛПС), Н- (в двух фазах – специфической и не специфической), иногда Vi-AГ (особый К-АГ).

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) капсула, пили

б) третья секреторная система – препятствует слиянию фагосом и лизосом в макрофагах

в) эндотоксин (ЛПС) – индукция лихорадки, нарушение микроциркуляции

г) холероподобный энтеротоксин – активация аденилатциклазы, водянистая диарея

Адгезия на энтероцитах и их колонизация  проникают в макрофаги  размножение  бактериемия (возможно интенсивное разрушение бактерий с высвобождением энтеротоксина и эндотоксина).

Возбудитель внутрибольничных инфекций.

7. Клинические особенности: короткий инкубационный период, тяжелое состояние, бурное внезапное начало, короткое течение, доброкачественный исход.

8. Иммунитет: ИО в виде местного (кишечного) иммунитета (sIgA), КИО слабовыражен. 9. Особенности эпидемиологии:

а) вспышки в детских послеродовых учреждениях, носят постепенный характер

б) источник – человек, инфекция контагиозна

в) ОПЗ – контактно-бытовой, воздушно-пылевой

г) у детей протекает как септическая инфекция

10. Профилактика: специфическая: поливалентный сальмонеллезный фаг

94. 1. Классификация: р. Salmonella, в. S. typhi, S. paratyphi.

2. Морфология: Гр-, палочка, есть микрокапсула, перитрихии, подвижны.

3. Биологические свойства:

1) лактозоотрицательны, ферментируют гл и мальтозу до кислоты или кислоты и газа

2) протеолитические свойства мало выражены

4. АГ структура: К-АГ, О-АГ, Н-АГ (две фазы – специфическая и групповая).

5. Факторы патогенности:

а) капсульный полисахарид (Vi-АГ) – защищает от фагоцитоза, подавляет комплемент

б) адгезины (микрокапсула, пили)

в) третья секреторная система – отвечает за проникновение в кл, предотвращает переваривание МБ внутри кл.

г) эндотоксин (ЛПС) – лихорадка, сыпь

6. Патогенез

Адгезия на энтероцитах тонкой кишки → колонизация слизистой → в пейеровы бляшки, фагоцитоз макрофагами и активное размножение в них → общий ток лимфы → бактериемия → костный мозг, селезенка, желчный пузырь → размножение в желчном пузыре (элективная среда) → 12-перстная кишка → вторичное попадание в тонкую кишку и пейеровы бляшки → иммунное воспаление, интоксикация организма эндотоксином.

7 Клинические проявления: интоксикация, лихорадка, розеолезная сыпь и гепатолиенальный синдромом.

8 Иммунитет: напряженный постинфекционный гуморальный иммунитет, местный иммунитет (sIgA), КИО в виде образования эффекторов ГЗТ в пейеровых бляшках.

9 Экология и эпидемиология. Антропонозная инфекция. Источник – больные люди и бактерионосители. ОПЗ – алиментарный. Устойчивы к факторам окружающей среды, гибнут при действии дезинфектантов.

10. Профилактика: специфическая – химическая адсорбированная тифопраратифозно-столбнячная вакцина (TABte), вакцина, содержащая Vi-АГ S. typhi.

11 Лечение: хлорамфеникол.

95. Диагностика брюшного тифа, паратифов А и В, сальмонеллезов.

Выбор метода диагностики зависит от  а) клинических проявлений б) места локализации возбудителя в) фазы патогенеза болезни.

При брюшном тифе самый ранний метод диагностики - бактериологическое выделение возбудителя из крови – гемокультура (соответствует бактеримии - первой неделе клинических проявлений болезни). Начиная со второй недели возможно обнаружение АТ (в организме формируется ГИО): постановка РА по Видалю, РПГА, латексагглютинации. Начиная с третьей недели заболевания возбудитель вновь оказывается в кишечнике и может быть обнаружен бактериологически в испражнениях больного - "метод копрокультуры". На 6-8-й неделе болезни и в период реконвалесценции, для диагностики бактерионосительства следует использовать как бактериологическое, так и серологическое исследования (многократное исследование копрокультуры, холекультуры, иногда миелокультуры и обнаружение Vi-АТ в сыворотке или копрофильтратах).

Бактериологический метод.

Материал для исследования: кровь, фекальные массы. Кровь берется из локтевой вены в количестве 10-15 мл до начала антибактериальной терапии.

1-й этап: посев венозной крови на среду обогащения Рапопорта (МПБ, глюкоза, желчь) + индикатор.

2-й этап:

а) учет среды Рапопорта (покраснение среды без газа в поплавке -возбудитель брюшного тифа, покраснение с газом в поплавке -возбудители паратифов или сальмонеллезов);

б) микроскопия роста;

в) пересев на дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина или Плоскирева;

3-й этап:

а) обнаружение бесцветных колоний на этих средах;

б) микроскопия подозрительных колоний (бесцветные, т.к. не ферментируют лактозу)

в) пересев на среду Олькеницкого или Кливлера.

4-й этап:

а) учет роста на среде Олькеницкого или Кливлера;

б) определение чистоты выделенной культуры;

в) установление антигенной структуры. Сначала в РА на стекле с монорецепторными сыворотками к О-антигенам, затем в такой же реакции с сыворотками к специфическим антигенам (в пределах данной группы);

г) определение дополнительных биохимических и морфологических свойств (разложение индола, подвижность);

д) определение чувствительности к поливалентным видоспецифическим бактериофагам;

е) определение чувствительности к антибиотикам (методом бумажных дисков, серийных разведений или Е-тестом – аналогом диско-диффузионного метода)

Серологическая диагностика.

Иммунитет стойкий, повторные заболевания редки. Появляются сначала IgM, затем IgG, на 5-6-ой день – геммаглютинины.

В начале болезни в сыворотке определяются О-АТ. В разгар много О-АТ и Н-АТ диагностического титра. Можно выявить Vi-АТ. В конце болезни много Н-АТ и мало О-АТ.  К выздоровлению титр О-АТ падает. Если человек переболел брюшным тифом, в сыворотке остаются Н-АТ.

Реакция Видаля.

Ставится с четырьмя диагностикумами. Готовят разведения сыворотки от 1/50 до 1/800, контроль сыворотки и АГ. В 1-й ряд добавляют тифозный диагностикум для выявления О-АТ, во 2-й – тифозный НD- диагностикум, в 3-й – паратифозный А диагностикум, в 4-й – паратифозный В диагностикум. Учет РА. Диагностический титр 1:200.

96. Возбудитель дизентерии.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, семейство Enterobacteriaceae, р. Shigella, в. S. dysenteriae, S. flexieri, S. boydii, S. sonnei.

2. Морфология: Гр-, палочка, нет жгутиков, есть пили, есть капсула, споронеобразующие, подвижны.  

3. Тип питания: хемоорганотроф, ФАН.

4. Биологические свойства:

а) нетребовательны к питательным средам

б) колонии двух типов (R- и S-)

в) ферментируют сахара до кислот.

5. АГ структура: О-АГ, К-АГ (шигеллы Флекснера). Есть перекрестно-реагирующие АГ с другими энтеробактериями.

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) адгезины (микрокапсула, пили)

б) инвазины (муциназа, третья секреторная система – также предотвращает переваривание шигелл внутри клеток)

в) эндотоксин (ЛПС) – диарея, поражение НС и ССС.

г) цитотоксин – поражает энтероциты, нейроны, кл миокарда.

Адгезия на энтероцитах толстой кишки  инвазия в энтероциты  фагоцитоз макрофагами в подслизистом слое  гибель макрофагов, выделение цитокинов  воспалительный процесс в подслизистой  нарушение межклеточных контактов  попадание МБ в активированные ими энтероциты  распространение по соседним клеткам  разрушение слизистой с образованием язв, продукция токсинов.

7. Клинические проявления: диарея с примесью крови и гноя, общие признаки интоксикации.

8. Иммунитет: местный (микрофаги, Т—лимфоциты, sIgA) и общий. Постинфекционный иммунитет непродолжительный видо- и типоспецифический.

9. Эпидемиология. Источник – больные люди и бактерионосители. ОПЗ – алиментарный, иногда контактно-бытовой. Быстро изменяют чувствительность к разным антибактериальным средствам в зависимости от частоты их применения в том или ином регионе

10. Профилактика: специфическая – гретые, формалинизированные, химические вакцины – не решили проблему.

11. Лечение: Фторхинолоны, реже АБ.

12. Диагностика:

Материал для исследования: испражнения, сыворотка крови.

Бактериологический метод.

1-ый этап: посев на дифференциально-диагностические среды (Плоскирева и т.д.). Оценка характера и цвета колоний, мазок по Гр, РА на стекле со смесями дизентерийных сывороток.

2-ой этап: пересев бесцветных колоний на среду Ресселя или трехсахарную среду. Мазок по Гр, регистрация изменений цвета среды. Посев на пестрый ряд. РА со смесями дизентерийных сывороток, затем – с видовыми и типовыми сыворотками.

Серодиагностика.

РА по типу реакции Видаля с дизентерийными диагностикумами, РПГА с эритроцитарными диагностикумами.

97. Возбудители клебсиеллезов.

1.  Классификация: ФАН палочки, с.Enterobacteriaceae, р. Klebsiella, в. K.pneumoniae, K. rhinoscleromatis, K.ozaenae
2.  Морфология: Гр-, короткие толстые  палочки, жгутиков нет, имеют выраженную капсулу, споронеобразующие, неподвижны
3.  Тип питания: хемоорганотрофы
4.  Биологические свойства:

а) растут на простых средах

б) ферментируют гл с кислотой и газом, сорбит.  

1.  АГ структура: К-АГ, О-АГ.
2.  Факторы патогенности и патогенез:

а) полисахаридная капсула

б) адгезины (пили, поверхностные белки адгезии)

в) инвазины (белки-порины)

г) сидерофорная система (хелаторы железа аэробактин, энтеробактин) – связывает ионы железа

д) система секреции 3-его типа

е) термо- и кислотостабильный токсин – активирует гуанилатциклазу

ж) термолабильный токсин (цитотоксин) – опосредует проникновение в кровоток

з) β-лактамаза – устойчивость к лактамным АБ

Адгезия, размножение и колонизация энтероцитов  секреция токсинов, обеспечивающих разнообразные патологии.

1.  Клинические проявления:

I. К.pneumoniae: долевые пневмонии (деструкция легочной паренхимы с формированием абсцессов, эмпием и плевральных спаек), госпитальные бронхиты, бронхопневмонии. Возможны вторичные поражения мочевыводящих путей, мозговых оболочек, суставов, глаз, бактериемии и септикопиемии.

II. K.ozaenae: озена (хронический атрофический зловонный насморк): атрофия слизистой носа и подлежащего костного скелета, образование плотных корок, неприятный запах из носа, потеря обоняния.

III. K. rhinoscleromatis: риносклерома (хроническое гранулематозное заболевание дыхательных путей): нарушение дыхания  истощение.  

1.  Иммунитет: ГИО (АТ не обладают протективными свойствами), КИО, ГЗТ.
2.  Эпидемиология. Источник – больные и носители. ОПЗ – аэрозольно. Резистентны к факторам окружающей среды, размножаются в холодильнике, чувствительны к растворам обычных дезинфектантов.
3.  Профилактика: специфическая вакцинопрофилактика не разработана.
4.  Лечение: цефалоспорины третьего поколения.
5.  Диагностика:

Лабораторная диагностика проводится двумя методами: бактериологический

и серологический.

Питательные среды:

1.   Дифференциально-диагностическая среда - ЛБТА (лактозобромтимоловый агар с пенициллином). Содержит МПА+ лактоза+бромтимоловый синий. К.склеромы, не разлагающая лактозу, дает колонии цвета среды, К.пневмонии - желтые, К.озены - либо желтые, либо цвета среды.

2. Модифицированная среда Ресселя кроме глюкозы (в столбике) и лактозы (в скосе) содержит индикатор бромтимоловый синий, соль Мора и гипосульфит (на H2S). К. склеромы дает пожелтение только столбика, К. пневмонии - пожелтение и разрыв всей среды, К. озены - различные варианты.

3.   Среда Симмонса для утилизации цитрата натрия (индикатор бромтимоловый синий). В положительных случаях появляется рост и среда синеет, в отрицательных случаях роста нет и среда не изменяется.

4. Среда с малонатом натрия (индикатор бромтимоловый синий). При утилизации малоната - среда интенсивно синего цвета, отрицательная реакция - среда желтая.

Бактериологическая диагностика.

Материал для исследования: содержимое носа, глотки, носоглотки.

Схема исследования:

1-й этап - посев материала петлей или тампоном на ЛБТА, или на пенициллиновый агар;

2-й этап:

а) учет роста на чашках. Колонии клебсиелл - крупные, выпуклые, влажные, блестящие. На ЛБТА цвет колоний зависит от вида клебсиелл;

б) посев колоний на модифицированную среду Ресселя или косой агар;

3-й этап - идентификация выделенной культуры:

а) мазок по Граму;

б) препарат по Гинса-Бурри;

в) определение биохимических свойств (см. таблицу); г) определение антигенной формулы с помощью клебсиеллезных сывороток О и К (р. агглютинации на стекле, РА в пробирках, РИФ).

Серологическая диагностика: используют РСК и РПГА со склеромным и

озенозным диагностикумами.

98. Возбудитель кишечного иерсиниоза.

1.  Классификация: ФАН палочки, с.Enterobacteriaceae, р. Yersinia, в. Y.enterocolitica.
2.  Морфология: Гр-, палочки, имеет перитрихии и пили, микрокапсулу, споронеобразующие,  подвижны, окрашиваются биполярно
3.  Тип питания: хемоорганотрофы
4.  Биологические свойства:

а) хорошо растут на простых питательных средах

б) ферментируют гл, сахарозу, проявляют пектиназную активность

1.  АГ структура: О-АГ, Н-АГ.
2.  Факторы патогенности и патогенез:

а) адгезины (пили – соединяются с фибронектином, белки наружной мембраны)

б) инвазины – облегчают взаимодействие с кишечным эпителием

в) фосфатаза и протеинкиназа – нарушают функцию макрофагов

г) энтеротоксин и эндотоксин (ЛПС)

Проникновение в слизистую дистального отделе тонкой кишки  размножение в пейеровых бляшках   проникновение в брыжеечные л. у. (мезентериальный лимфаденит)   бактериемия (генерализация инфекции)  проникновение в органы и ткани (печень, селезенка, лимфатические узлы). В случае незавершенного фагоцитоза возможна длительная персистенция МБ. Вследствие этого может развиться вторично-очаговая форма с поражением любого органа (сердца, печени, суставов, легких) либо возникновение обострений и рецидивов. Большое значение имеют аллергический компонент и аутоиммунные процессы.

1.  Клинические проявления:
2.  Инкубационный период около 3 дней. Заболевание начинается остро. Симптомы общей интоксикации. Температура тела субфебрильная. Часто на первый план выступают признаки поражения желудочно-кишечного тракта (боли в животе, тошнота, рвота, понос). На коже иногда появляется сыпь. Проявляются симптомы вторичного поражения органов.
3.  Иммунитет: изучен недостаточно, вначале заболевания преобладает ГИО.
4.  Эпидемиология. Источник – больные люди и животные, носители. ОПЗ – алиментарно. Устойчивы к низкой температуре (размножаются даже в холодильнике). Погибают при высыхании, воздействии солнечного света и различных химических веществ (хлорамина, спирта), при кипячении.
5.  Профилактика: специфическая не разработана.  
6.  Лечение: АБ широкого спектра действия.
7.  Диагностика:

Метод: бактериологический.

Материал для исследования: при кишечной форме возбудитель выделяют из испражнений; при аппендикулярной - из мезентериальных лимфатических узлов и крови; при септической - из испражнений и крови.

1-й этап: материал засевают петлей или тампоном на одну из плотных элективных сред (Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитагар). Посевы инкубируют в течение 24 часов при 37°С, а затем дополнительно 24 часа при 20-22°С.

Одновременно испражнения засевают в одну из сред накопления (МПБ или пептоннуюводу). Кровь засевают в соотношении 1:10 только в среды накопления. Посевы помещают при 4-5°С и выдерживают до 30 суток, периодически высевая через каждые 3-5 дней на плотные элективные среды. Y.enterocolitica при низкой температуре размножаются в этих средах, в то время как сальмонеллы, шигеллы, кишечная палочка, протей не размножаются.

2-й этап: просматривают посевы на плотных средах и отбирают подозрительные колонии (округлые, сероватого цвета на Эндо и Плоскирева и коричневого на висмут-сульфитагаре), Из колоний делают мазки по Граму и при наличии грам/- палочек отсевают на среду Ресселя.

3-й этап: при изменении цвета столбика на среде Ресселя из роста на ней делают мазок по Граму на чистоту культуры и изучают следующие тесты:

4-й этап: учет результатов и выдача окончательного ответа. При серологическом методе исследования кровь берут в конце первой и начале третьей недели.  Ставят развернутую реакцию агглютинации с аутоштаммами и парными   сыворотками больного. При положительном результате отмечается значительное нарастание титра антител.

99.  Диагностика пищевых отравлений бактериальной природы

Пищевые отравления - острые системные заболевания, возникающие в результате приема в пищу продуктов, массивно обсемененных микроорганизмами или содержащих микробные экзотоксины. Пищевые отравления бактериальной природы подразделяются на пищевые токсикоинфекции и пищевые токсикозы (интоксикации), а также отравления смешанной этиологии.

Пищевые токсикоинфекции (ПТИ): острые кишечные заболевания с инфекционным воспалением кишечника, возникающие в результате употребления в пищу массивно обсемененных некоторыми бактериями продуктов.

Возбудители:

1. Условно-патогенные МБ:

1.  семейства Enterobacteriaceae - E.coli, Proteus (P.vulgaris, P.mirabilis, Morganella morganii), Citrobacter, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella pneumoniae;
2.  семейство Vibrionaceae - V.parahaemolyticus;
3.  семейство Bacillaceae - B.cereus, C.perfringens серотипа А;
4.  семейство Streptococcaceae - S.faecalis;
5.  семейство Pseudomonadaceae - P.aeruginosa и др.

2. Энтеропатогены: энтеропатогенные эшерихии, сальмонеллы, шигеллы (S.sonnei) и иерсинии (Y.enterocolitica)

Патогенез:

Прием пищи  размножение МБ в тонком кишечнике  проникновение в лимфоидный аппарат  массовая гибель МБ с выделением эндотоксина  поражение  нервного аппарата кишечника и клеток ЦНС, сосудов,  воспалительный процесс в кишечнике.

Клинические проявления:

Заболевание начинается внезапно с тошноты, рвоты, поноса, болей в животе и общих симптомов (головная боль, падение сердечной деятельности, вплоть до коллапса). По типу ПТИ могут протекать заболевания, вызываемые.

Диагноз устанавливается после выделения из исследуемого материала (испражнения, моча, рвотные массы, остатки пищи) соответствующего возбудителя.

Пищевые микробные токсикозы (интоксикации): острые заболевания, возникающие при употреблении в пищу продуктов, в которых в результате массивного размножения микробов содержится большое количество экзотоксина.

К ним относят ботулизм, токсикозы, вызванные стафилококковым энтеротоксином и токсинами микроскопических грибов.

Патогенез:

Обусловлен действием микробного экзотоксина, который не разрушается при кипячении, пищеварительными ферментами и кислым содержимым желудка.

Принципы диагностики:

1. Отравления часто носят групповой характер. Каждый случай подлежит обязательному санитарно-эпидемиологическому расследованию с целью установления причин заболевания и разработки мер ликвидации вспышки и профилактики. Расследование пищевых отравлений производится немедленно с участием санитарного врача по гигиене питания или главврача СЭС и врача-бактериолога.

2. Материал для исследования: рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, мочу, кровь, а также секционный материал (в случае летального исхода). Одновременно производят отбор остатков подозреваемой пищи.

3. Бактериологический метод: для постановки этиологического диагноза бактериологическое исследование одновременно ведут в нескольких направлениях: на облигатно-патогенные и условно-патогенные энтеробактерии и вибрионы, стафилококки, стрептококки, бациллы, а также (по показаниям) - на обнаружение возбудителей и токсинов ботулизма.

При бактериологической диагностике ПТИ, вызванной условно-патогенными микробами, применяют количественный метод. Разведение материала засевают на чашки с дифференциально-диагностическими средами: Плоскирева, Эндо (Левина) - на энтеробактерии; ЖСА с полимиксином и триметилтетразолий хлоридом - на B.cereus; МПА с фурагином - на псевдомонады; щелочной агар - на вибрионы. При стафилококковом токсикозе производят посев на ЖСА.

При наличии роста колоний, подозрительных на патогенные энтеробактерии  дальнейшие исследования ведут по их выделению и идентификации. При отсутствии роста облигатнопатогенных микробов изучают характер колоний УПМ на указанных средах. Определяют количество бактерий в 1 г материала. Выделяют чистые культуры и подвергают их идентификации и внутривидовому типированию.

Оценка результатов: выделение из материалов сальмонелл, шигелл, энтеропатогенных кишечных палочек, иерсиний или других облигатнопатогенных микробов, независимо от количества, подтверждает соответствующее заболевание или носительство. Для оценки этиологической роли УПМ главным критерием является количественный. Этиологически значимо присутствие в материалах от больных и пищевых продуктах микробов в большом количестве (105-106 и более КОЕ в 1 г). При пищевых отравлениях диагноз становится более достоверным при одновременном обнаружении тех же микробов в больших количествах в пищевых продуктах, явившихся причиной заболевания. Этиологическую роль микроба подтверждает его повторное выделение из материала больного, идентичность штаммов возбудителя (по фаго- и сероварам) у большого числа больных при групповом пищевом отравлении, а также нарастание титра антител в динамике болезни.

Для диагностики пищевых токсикозов используют методы обнаружения в материалах от больных (рвотных массах, промывных водах) и в пищевых продуктах экзотоксинов микробов. При ботулизме с этой целью применяют биологическую пробу нейтрализации на белых мышах с антисыворотками к ботулотоксинам различных типов. При стафилококковом токсикозе используют РПГА с эритроцитами, обработанными содержащими экзотоксин материалами и типовыми стафилококковыми антисыворотками.

100. Актиномикоз.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Actinomycetalis, гр. VI. Актиномицеты и родственные микробы, с. Actynomycetaceae, р. Actynomyces, A. israelei, A. viscosus, A.bovis

2. Морфология: Гр+, палочки, тонкие, прямые или слегка изогнутые нити с настоящим ветвлением, часто булавовидные концы, неподвижные, неспорообразующие.

3. Тип питания: хемоорганотроф, ФАН

4. Биологические свойства:

а) ферментируют глюкозу с образованием кислоты

б) слабая протеолитическая активность

5. АГ структура: видоспецифические АГ КС

6. Факторы патогенности и патогенез:

1) летучие ЖК (масляная, пропионовая, капроновая)

2) миколовые кислоты КС

3) ферменты

Локализация на эпителии глотки и других полостей и органов, кл кожи  образование актиномиком (первичный очаг) и друз  контактное или лимфогенное распространение  образование вторичных очагов в легких, печени и т.д. Часто к основному заболеванию присоединяется вторичная бактериальная инфекция.

7. Клинические проявления: гнойно- септические процессы в ассоциации с другими МБ

8. Иммунитет: постинфекционный слабо напряжен. Отмечается формирование ГЗТ.

9. Эпидемиология. Антропонозная инфекция. ОПЗ – эндогенно или аэрозольно.

10. Профилактика: вакцина отсутствует.

11. Лечение: АБ (пенициллин, хлорамфеникол)

101. Классификация и общая характеристика микобактерий.

Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Actinomycetalis, гр. VI. Актиномицеты и родственные микробы, с. Mycobacteriaceae, р. Mycobacterium, M.tuberculosos, M.bovis, M. africanum, M. avium, M. leprae, M. kansasii.

Возбудитель лепры.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Actinomycetalis, гр. VI. Актиномицеты и родственные микробы, Mycobacteriaceae, р. Mycobacterium,  M. leprae.

2. Морфология: Гр+, палочка, прямая или слегка изогнутая. Внутри клеток образуют лепрозные шары («пачка сигарет»). Кислотоустойчивые.

3. Тип питания: хемоорганотроф, АЭР

4. Биологические свойства:

а) на искусственных питательных средах не культивируются

5. АГ структура: группоспецифический полисахаридный и белковый АГ

6. Факторы патогенности и патогенез:

Структуры клеточных оболочек обеспечивают кислотоустойчивость, антифагоцитарные свойства, адъювантные свойства, вызывают ГЗТ (миколовые к-ты, воска КС, арабиногалактан, миколат трегалозы – корд-фактор).

Внедрение в  кожу и слизистую ВДП  попадают в нервные окончания, лимфатическую и кровеносную системы  медленно диссеминируют.

7. Клинические проявления: Формы: лепроматозная (наиболее тяжелая), туберкулоидная. Гипопигментация или очаги покраснения (леприды) с потерей чувствительности, невриты с неравномерным утолщением нервных стволов, положительные кожные мазки на кислотоустойчивость МБ.

8. Иммунитет: У больных лепрой выявляется дефект КИО. Степень его поражения отражает реакция Мицуды (с лепромином).

9. Эпидемиология. Антропонозная инфекция. Источник – больной человек. ОПЗ – длительный контакт с больным.

10. Профилактика: вакцина отсутствует.

11. Лечение: сульфоновые препараты, противотуберкулезные препараты (рифампицин), десенсибилизирующие средства и биостимуляторы.

12. Диагностика:

Материал: соскобы с пораженных участков кожи и слизистых.

1. Бактериоскопия: мазок по Цилю-Нильсену. В положительном случае – внутриклеточное расположение микобактерии в виде скоплений красных палочек («пачка сигар»), коккобацилл и шаров.

2. Биопроба: на броненосцах (в тканях образуются лепромы – множественные узелки)

3. Постановка аллергической пробы с лепромином. Через двое суток после введения – эритема и небольшая папула. Характерна для больных туберкулоидной формой лепры.

102. Возбудитель дифтерии.

1. Классификация: р. Corynebacterium, C. diphtheriae

2. Морфология: Гр+, палочка, булавовидные утолщения на концах за счет зерен волютина, неспорообразующие, располагаются под углом друг к другу в виде римских пятерок, есть микрокапсула и пили.

3. Биологические свойства:

1) требовательны к питательному субстрату.

2) культивируются на свернутой сыворотке крови и на кровяном агаре с теллуритом калия

3) образуют два типа колоний (gravis, mitis, intermedius)

4) ферментируют глюкозу с образованием кислоты, восстанавливают нитраты.

4. АГ структура: типоспецифический К-АГ, группоспецифический полисахаридный АГ КС.

5. Факторы патогенности:

1) адгезины (пили, микрокапсула)

2) инвазины (гиалуронидаза, фибринолизин, нейраминидаза)

3) гистотоксин (две субъединицы – токсический полипептид и транспортный полипептид)- блокирует синтез белка на рибосомах, действуя на фактор элонгации-2, вызывает некроз клеток.

6. Патогенез

Адгезия на эпителиоцитах миндалин, верхних дыхательных путей, коньюктивы → колонизация эпителиоцитов и возникновение воспалительного процесса → секреция гистотоксина на рецепторах мышечных кл сердца, почек, надпочечников, нервных ганглиях → блокада синтеза белка и гибель кл.

7 Клинические проявления: дифтерия дыхательных путей: а) воспаление слизистой ротоглотки с образованием пленок, плотно спаянных с подслизистой б) крупозное воспаление трахеи с образованием фибринозных пленок, слабо спаянных с подслизистой, отеком и истинных крупом. Возможны миокардиты, нефриты, периферические нефриты, дифтерия кожи, глаз, наружных половых органов.

8 Иммунитет: постинфекционный иммунитет напряжен за счет антитоксина, антибактериальные АТ (агглютинины, преципитины) не обладают протективными свойствами.

Определение антитоксического иммунитета – реакция Шика – нейтрализация токсина антитоксином. При введении 1/40 DLM дифтерийного токсина в кожу предплечья появляется покраснение и припухание, если в крови нет антитоксина.

9 Экология и эпидемиология. Источник – больные люди, чаще дети. ОПЗ – аэрозольно, реже контактно. Хорошо переносят высушивание.

10. Профилактика: специфическая – введение дифтерийного анатоксина (АКДС)

11. Лечение: антитоксическая сыворотка, АБ (пенициллин, ванкомицин, эритромицин).

12. Диагностика:

Материал: из зева и носа, ватным тампоном на границе пораженной и здоровой части. Тампон помещают в пробирку с несколькими каплями физ. раствора или глицерина, чтобы не высох при транспортировке.

1. Бактериоскопия. В первый день – мазки по Леффлеру или Нейсеру. При наличии характерных палочек (расположенных в виде буквы «V» с зернами воллютина) делают заключение о выделении палочки, морфологически сходной с дифтерией. Ложно дифтерийные палочки Гофмана располагаются параллельно, не имеют зерен воллютина, окрашиваются равномерно. Окончательный ответ – только после получения чистой культуры.

2. Бактериологический.

Посев на среду обогащения РУ и сывороточно-теллуритовый агар. Если на чашках с сывороточно-теллуритовым агаром нет роста, делают мазок со среды обогащения и повторный высев на сывороточно-теллуритовый агар. Подозрительными на дифтерию являются колонии  у биовара gravis (R-типа, темно-серые), mitis (S-типа, черные), остальные биовары – промежуточные варианты.

Из подозрительных колоний готовят мазок, посев на среды Гиса, отсев на среду Ру для накопления чистой культуры, проба на токсигенность методом двойной диффузии в агар. Учет результатов.

3. Серологическая диагностика: для определения противодифтерийного антитоксического или поствакцинального иммунитета. РПГА с эритроцитами, нагруженными дифтерийным анатоксином. Если человек иммунный, РПГА + (зонтик) в титре 1/80 и >, если нет – РПГА – (пуговка), необходима ревакцинация.

103. Возбудитель коклюша и паракоклюша.

1. Классификация: с. Legionellaceae, р.Bordetella, B. Pertussis

2. Морфология: кокки, располагаются поодиночно или попарно, имеют капсулу, пили, споронеобразующие, неподвижны.

3. Тип питания: хемоорганотроф, строгий аэроб.

4. Биологические свойства:

а) не растет на простых питательных средах (рост ингибируется ВЖК, которые сам и образует – «суицидальное поведение»)

б) факторы роста: некоторые АК

в) обладает гемолитическими свойствами, не расщепляет протеины и сахара

5. АГ: агглютиногены.

6. Патогенность и патогенез.

а) адгезины (пили, филаментозный гемагглютинин)

б) белковые токсины, связанные с цитоплазмой:

1) трахеальный токсин – функциональный блокатор, вызывает раздражение рецепторов слизистой дыхательных путей, сужает мелкие бронхи, воздействует на дыхательный и сосудодвигательный центры, активирует аденилатциклазу и нарушает водно-солевой обмен.

2) дермонекротоксин – действует на кл миокарда, вызывает их поражение.

в) капсульный полисахарид – защита от фагоцитоза

7. Иммунитет: напряженный постинфекционный ГИО.

8. Экология и  эпидемиология: Источник – больные люди и бактерионосители. ОПЗ – аэрозольно. Быстро погибают в воздухе.

9. Профилактика: АКДС (с убитыми коклюшными МБ S-формы).

10. Лечение: противококклюшный иммуноглобулин, АБ (тетрациклины, макролиды).

11. Диагностика:

1. Материал: берут так, чтобы не спровоцировать кашель методом «кашлевых пластинок» или изогнутым тампоном.

2. Бактериологический: посев на КУА или картофельно-глицериновый агар (среда Борде-Жангу). Если материал берется тампоном, готовят мазок по Гр (большое кол-во Гр- МБ). Для экспресс диагностики возможна РИФ. Посевы инкубируют в термостате. Рост паракоклюша 2 суток, коклюша 3-4 сут. Колонии мелкие, при боковом освещении в стерескопическом микроскопе сбоку виден светящийся конус («парашутик»). Мазок по Гр, РА с сывороткой против бордетелл, агглютинирующиеся МБ отсеивают для накопления на скошенный КУА. Идентификация МБ.

3. Серологическая диагностика: имеет вспомогательное значение в основном для диагностики атипичных стертых форм (РПГА или РСК)

104. Гемоглобинофильные бактерии.

1. Классификация: с. Pasterellaceae, р. Haemophilus, в. H. influenza, H. duckreyi.

2. Морфология: Гр-, палочка, мелка, иногда нитевидная, есть капсула, пили, споронеобразующая

3. Биологические свойства:

а) требовательны к питательным средам

б) нуждаются в присутствии гемина и НАД

в) расшепляют гл и сахарозу до кислоты

4. АГ структура: К-АГ, О-АГ

5. Патогенность и патогенез:

а) антифагоцитарный фактор (капсульный полисахарид)

б) токсины (ЛПС, мембранотоксин(гемолизин)

в) протеаза – разрушает sIgA.

6. Клинические проявления: H. influenza: фарингит, отит, пневмония, менингит у детей до 5 лет. H.duckreyi: мягкий шанкр.

7. Экология и эпидемиология. Источник – человек. ОПЗ – аэрозольно.

8. Лечение: АБ

105. Легионеллы.

1. Классификация: с. Legionellaceae, р. Legionella, в. L. pneumophilia.

2. Морфология: Гр-, палочка, капсул не образуют, один или два жгутика, споронеобразующие, подвижные.

3. Биологические свойства:

1) аэробы, микроаэрофилы.

2) размножаются на сложных средах (АК, железо)

3) не ферментируют углеводы.

4. Патогенность:

1) капсулярное вещество – фактор агрессии, подавляющий фагоцитоз

2) белок наружной мембраны – связывает с3b – фракцию комплемента и инактивирует его.

2) эндотоксин (ЛПС)

5. Клинические проявления: пневмония.

6. Иммунитет: ГИО

7. Экология и эпидемиология. Источник – больные люди. ОПЗ – аэрозольный.

8. Профилактика: вакцинопрофилактика отсутствует.

9. Лечение: макролиды, тетрациклины, рифампицин, фторхинолон.

106. Экологическая группа анаэробных бактерий.

Общее – получение энергии путем субстратного фосфорилирования.

По отношению к О2:

а) облигатные анаэробы – не переносят О2,

б) умеренно строгие анаэробы – выживают, но не размножаются в присутствии О2,

в) аэротолерантные – размножаются и в отсутствии, и в присутствии  О2.

Для человека наиболее важны:

1) спорообразующие Гр+ МБ рода Clostridium (C. perfringens, C. novyi, C. hystolyticum – возбудители анаэробной раневой инфекции, С. tetani – возбудитель столбняка, С. botulinum – возбудитель ботулизма)

2) неспорообразующие Гр- МБ родов Bacteroides, Fusobacterium

3) неспорообразующие Гр+ анаэробные кокки родов Peptococcus, Peptostreptococcus и др.

4) Гр- кокки рода Veilonella

Возбудитель столбняка.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, гр. V. Палочки, образующие эндоспоры, с. Bacillaceae, р. Clostridium, C.tetani.

2. Морфология: Гр+, крупная палочка, прямая, перитрихии, капсулы нет, спорообразующая, подвижная. Споры крупные, располагаются терминально.

3. Тип питания: хемоорганотроф, анаэробы.

4. Биологические свойства:

а) не ферментируют углеводы, слабая протеолитическая активность

б) колонии окружены зоной гемолизина

5. АГ структура: О-АГ и Н-АГ

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) экзотоксин – термолабильный белок, из двух фракций – тетаноспазмин (нарушает передачу импульса) и тетанотоксин (гемолиз, некроз, разрушение фагоцитов).

Дефекты кожных покровов  попадание спор в анаэробные условия и их прорастание  выделение экзотоксина  распространение гематогенным, лимфогенным и по периневральным путям по организму  прочно фиксируется в нервной ткани  избирательно блокирует тормозящее действие вставочных нейронов на мотонейроны

7. Клинические проявления: начинается всегда остро. Тоническое напряжение (тризм) жевательных мышц с затруднением открывания рта. «Сардоническая улыбка» вследствие спазма мимической мускулатуры, дисфагия в результате сокращения мышц глотки. Ригидность затылочных мышц, запрокидывание головы назад, переразгибание позвоночника (опистотонус), выпрямление конечностей. Смерть от асфиксии и поражения жизненно важных нервных центров. Приступы опистотонуса вызывают любые раздражители.

8. Иммунитет: постинфекционный иммунитет отсутствует.

9. Эпидемиология. Существуют в виде спор во внешней среде. Среда обитания – кишечник животных и человека.  Входные ворота - мелкие бытовые травмы. Чрезвычайно устойчивы к физико-химическим факторам, антисептическим и дезинфицирующим средствам. Больные эпидемиологической опасности не представляют.

10. Профилактика: вакцина со столбнячным анатоксином (АКДС)

11. Лечение: антитоксическая сыворотка и противостолбнячный анатоксин.

107. Возбудитель анаэробной газовой инфекции.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, гр. V. Палочки, образующие эндоспоры, с. Bacillaceae, р. Clostridium, C.perfringes, С.novyi, C. hystoliticum

2. Морфология: C. perfringens, C. hystoliticum: Гр+, палочка, крупная, утолщенная, спорообразующая, перитрихии, подвижная, капсула in vivo. C.novyi: бескапсульные.

3. Тип питания: хемоорганотроф, ФАН.

4. Биологические свойства:

C. perfringens: обладает гемолитическими и протеолитическими свойствами, в столбике агара имеют вид чечевичных зерен, ферментируют углеводы до газа. C. novyi: гемолитическим свойством не обладают, ферментируют углеводы до газа, обладают протеолитическими свойствами, образуют аммиак и сероводород. C.hystoliticum: не ферментируют углеводы, обладают протеолитической активностью, образуют сероводород.

5. АГ структура: О-АГ, К-АГ, мембранотоксины (6 сероваров у C.perfringes)

6. Факторы патогенности и патогенез:

1) α-токсин (мембранотоксин) – гидролиз фосфолипидов

2) тета-токсин – кардиотоксические и гемолитические свойства

3) ферменты деструкции тканей (гиалуронидаза, коллагеназа, ДНК-аза)

4) энтеротоксин (C. perfringens) – вызывает диффузную диарею.

Обсеменение раневой поверхности МБ  образование токсинов.

7. Клинические проявления: Постепенно усиливающиеся боли в области поражения, раннее лихорадочное состояние, интоксикация. Выражены признаки расстройства кровообращения. Важный признак - скопление газа в очаге поражения и пограничных зонах. Мышцы имеют вид варенного мяса.

8. Иммунитет: антитоксический, мало напряженный.

9. Эпидемиология. Источник – внешняя среда (почва). Входные ворота – раневая поверхность. Споры сохраняются десятки лет.

10. Профилактика: хирургическая обработка ран. Специфическая профилактика не разработана. Мероприятия в очаге не проводятся.

11. Лечение: большие дозы АБ (пенициллины).

12. Диагностика:

Материал для исследования: раневое отделяемое,   некротизированная ткань, кровь.

1. Микроскопический метод исследования: материал плотный измельчают, центрифугируют и из осадка готовят препараты с окраской по Граму и по Гинса-Бурри. Можно поставить пробу на подвижность (придавленная капля). Возбудители газовой гангрены подвижные (кроме Cl.perfringens), не имеют капсулы (кроме Cl.perfringens), спорообразования в животном организме не происходит.

2. Бактериологический метод исследования:

1-й этап: обработанный материал в нативном состоянии засевают на питательные среды (Китт-Тароцци, обезжиренное молоко, Вильсон-Блера, агар Цейсслера). Жидкие среды регенерируют (кипятят) и заливают вазелиновым маслом. Чашки выращивают в анаэростате. Посевы просматривают ежедневно в течение 7 дней.

2-й этап - изучение роста на средах: наиболее характерны изменения сред при росте Cl.perfringens. Помутнение и образование пузырьков газа на среде Китт-Тароцци наступает через 6 часов, молоко свертывается через 2-3 часа. К этому же времени наступает почернение с разрывами среды Вильсон-Блера. Другие возбудители указанные среды изменяют позже и менее типично.

На среде Цейсслера  Cl.perfringens образуют серые крупные дисковидные колонии с зоной гемолиза. На среде Вильсон-Блера - колонии черного цвета. Из отдельных колоний делают мазки по Граму и их отсевают на среду Китт-Тароцци (для накопления чистой культуры).

Можно выделять культуру и другими методами (метод Фортнера, Вейнберга, трубочки Вейона).

3-й этап - изучение выделенной культуры:

а) мазок по Граму;

б) мазок по Ожешко;

в) проба на подвижность;

г) определение ферментативных свойств (в том числе лецитиназной активности);

д) реакция нейтрализации на белых мышах для определения типа токсина; е) антибиотикограмма.

3. Биологический метод исследования: заражают подкожно морских свинок. Животные погибают при картине экспериментальной газовой гангрены (местный отек с газообразованием, расплавление подкожно-жировой клетчатки). Посевом органов можно выделить культуру.

4. Экспресс-метод диагностики проводится с использованием: а) данных микроскопии препаратов; б) реакции иммунофлюоресценции; в) учета роста на средах с посевом нативного материала через 3-6 часов (для определения Cl.perfringens); г) определения антигена в материале методом встречного иммуноэлектрофореза или иммуноферментным методом.

108. Возбудитель ботулизма.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, гр. V. Палочки, образующие эндоспоры, с. Bacillaceae, р. Clostridium, C. botulinum

2. Морфология: Гр+, палочки, есть перитрихии, образуют споры (вид теннисной ракетки), капсулы нет, подвижны

3. Тип питания: хемоорганотроф, ОАН

4. Биологические свойства:

а) обладает выраженными протеолитическими свойствами

б) размножаются на глюкозо-кровяном агаре, образуют зоны гемолиза

5. АГ структура: токсинный АГ (7 сероваров).

6. Факторы патогенности и патогенез:

1)специфический летальный нейротоксин: из двух субъединиц, одна отвечает за адсорбцию на рецепторах нейронов, другая – за проникновение в них путем эндоцитоза.

Нейротоксин попадает в организм вместе с пищей и вегетативными формами возбудителя  попадает в лимфу  в  кровь  разносится по организму  прочно связывается нервными клетками  поражение  нервных окончаний и мотонейронов   избирательно воздействует на холинэргические отделы НС прекращение  выделения АХ в синаптическую щель  нарушается нервно-мышечной передачи возбуждения

7. Клинические проявления:

Поражение бульбарных нервных центров, нарушение походки, зрения, асфиксия.

8. Иммунитет: постинфекционный отсутствует.

9. Эпидемиология. Источник – кишечник травоядных, рыб, ракообразных. Споры могут быть в воде, почве. ОПЗ – алиментарный. Резистентны к высокой температуре.

10. Профилактика: вакцинопрофилактика не проводится.

11. Лечение: противоботулиническая сыворотка.

12. Диагностика:

Основную роль играют серовары А, В, Е.

Материал для исследования: кровь, рвотные массы, промывные воды желудка, моча, испражнения, подозрительные на заражение пищевые продукты.

Микробиологическая диагностика аналогично для других клостридиозов. Наиболее информативный метод  - РН на белых мышах с использованием противоботулинических сывороток. Ставят ее непосредственно с исследуемым материалом, либо с выделенной культурой. Животные, не защищенные сыворотками, погибают при явлениях общей слабости, одышки, порезов и параличей конечностей, западения мышц живота ("осиная талия").

109. Неспорообразующие анаэробы.

Гр+:	Гр-:
1. Peptococcus 2. Bifidobacterium 3. Lactobacterium 4. Actinomyces 5. Propionobacterium	1. Bacteroides 2. Porphyromonas 3. Fusobacterium 4. Prevotella 5. Veilonella

Бактероиды и их роль в патологии человека.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Eubacteriales, гр. IV. Облигатно-анаэробные палочки, с. Bacterioidaceae, р. Bacteroides, B. fragilis, B. melaninogenicus, B. gingivalis.

2. Морфология: Г-, палочка, биполярно окрашивается,  иногда есть перитрихии и капсула, иногда подвижная

3. Тип питания: хемоорганотроф, ОАН

4. Биологические свойства:

1) обладает сахаролитическими и протеолитическими свойствами

2) размножение стимулируется гемином и витамином К

5. АГ структура: для идентификации не используются.

6. Факторы патогенности и патогенез:

1) антифагоцитарный (капсульный полисахарид)

2) адгезины (пили, белки наружной мембраны)

3) инвазины (нейраминидаза, фибринолизин, гепариназа)

4) -лактамазы  -  разрушают пенициллин

5) короткоцепочечные ЖК, биогенные амины – нарушают активность макрофагов, лейкоцитов

7. Клинические проявления: перитониты, абсцесс брюшной полости, легких, гнойно-воспалительные процессы другой локализации.

8. Эпидемиология. Обитатели толстой кишки человека.

9. Лечение: АБ широкого спектра действия (производные имидазола)

Принципы диагностики неклостридиальных  анаэробных инфекций.

1. Исследуемый материал: отделяемое ран, содержимое абсцессов, трахеобронхиальный аспират и др.

2. Транспортировка в лабораторию в киприце, в специальной транспортной среде. Материал помещают в среду немедленно.

3. Бактериоскопический: микроскопия материала с окраской по Гр.

4. Бактериологический метод: среды кровяные с неомицином и налидиксовой кислотой, Кита-Тароцци, тиогликолевая. Культивируют в анаэростатах, анаэробных камерах при повышенном содержании CO2.

5. Критерии идентификация:

а) Окраска по Гр и Ожешко для выявления спор

б) Морфология колоний

в) Связь типа колонии с кислородом

г) Предварительная дифференциация по чувствительности к АБ

д) Биохимические тесты

6. Определение чувствительности к АБ (метод разведения в агаре или бульоне и метод бумажных дисков)

110. Кампилобактерии.

1.  Классификация: извитые и гибкие кл, порядок Spirochaetales, с. Leptospiraceae, p. Campylobacter, C. jejuni, C. laridis, C. coli, C. fetus.
2.  Морфология: Гр-, палочка, спиральная, жгутик на одном или двух полюсах, споронеобразующая, подвижная.
3.  Тип питания: хемоорганотроф
4.  Биологические свойства:

а) хорошо растет на простых питательных средах

б) не сбраживает углеводы, источник энергии – АК.

1.  АГ структура: О-, К- и Н-АГ.
2.  Факторы патогенности и патогенез:

а) поверхностные специфические адгезины

б) инвазины (жгутики и муциназа)

в) энтеротоксины (функциональные блокаторы) – нарушает водно-солевой обмен

г) эндотоксин, цитотоксины

Адгезия на энтероцитах  при помощи жгутика повреждает клеточную мембрану  инвазия в кл   бактериемия  высвобождение токсина общая интоксикация   гематогенное обсеменение органов.

1.  Клинические проявления: заболевание начинается остро. Появляется лихорадка, симптомы общей интоксикации и синдром гастроэнтерита(тошноту, боли в эпигастральной области, нередко рвота). Стул обильный, жидкий, пенистый, примеси слизи и крови у взрослых обычно не отмечается. Могут развиться симптомы обезвоживания.
2.  Иммунитет: ГИО, АТ выраженными протективными свойствами не обладают.
3.  Эпидемиология. Источник – больные животные и люди. ОПЗ – алиментарно, возможен контактно-бытовой. Быстро инактивируются при нагревании.
4.  Профилактика: вакцинопрофилактики нет
5.  Лечение: эритромицин и гентамицин

Хеликобактер.

1.  Классификация: извитые и гибкие кл, порядок Spirochaetales, с. Leptospiraceae, p. Campylobacter, C. pyloridis (Helicobacter pylori).
2.  Морфология: Гр-, палочка, лофотрихи, споронеобразующая, подвижная.
3.  Тип питания: хемоорганотроф.
4.  Биологические свойства:

а) растут на сложных питательных средах

б) продуцируют каталазу и оксидазу

в) микроаэрофил, капнофил.

1.  АГ структура: О-, К- и Н-АГ.
2.  Факторы патогенности и патогенез:

а) уреаза – образование газовой оболочки, защищающей от кишечного сока

б) фосфолипаза – разрушает фосфолипиды

в) цитотоксин – действует на эпителиальные клетки

г) токсин, нарушающий межклеточные контакты

ж) эндотоксин (ЛПС)

з) белки теплового шока – приводит к аутоиммунному воспалению и образованию язв.

Адгезия  пенетрация через слизистую  разрушение слоя слизи и облегчение доступа к слизистой HCl с образованием эрозий  инвазия, разрушение эритроцитов с высвобождением гемина – хемоаттрактанта МБ  выделение уреазы и др. ферментов. Гибель МБ  высвобождение эндотоксина.

1.  Клинические проявления: язвы, гастриты, предраковые состояния.
2.  Эпидемиология. Представитель нормальной микрофлоры животных. ОПЗ –алиментарно.
3.  Профилактика: вакцинопрофилактики нет

Классические	Ускоренные
	Индикация	Идентификация
возбудителя	его АГ
а) микроскопия (Гр, капсула, подвижность) б) ПЦР в) РА г) РИФ д) проба с бактериофагом е) биопроба на животном со сниженным искусственно иммунитетом	а) РОПГА б) реакция коаглютинации со стафилококковым АТ диагностикумом в) ИФА	Проводится по ускоренному плану, определение МБ – до уровня вида.

1.  Лечение: полусинтетические пенициллины, аминогликозиды, фторхинолоны.

112. Особо опасные инфекции.

ООИ – группа острых заразных заболеваний ч-ка, для которых характерно:

1) высокая контагиозность и быстрое распространение

2) развитие эпидемий и пандемий

3) тяжелое клиническое течение

4) высокая летальность (иногда в первые часы болезни)

Классификация ООИ:

1. Конвенционные – на эти инфекции распространяется действие международных санитарных правил: а) бактериальные: чума (инфекционная доза 6-10 МБ), холера, б) вирусные: оспа обезьян, геморрагические вирусные лихорадки

2. Инфекции, подлежащие международному надзору, но не требующие проведения совместных мероприятий: а) бактериальные: сыпной и возвратный тифы, ботулизм, столбняк б) вирусные: ВИЧ, полиомиелит, грипп, бешенство, ящур в) протозойные (малярия)

3. Не подлежат надзору ВОЗ, контроль регионарный: а) бактериальные: сибирская язва, туляремия, бруцеллез

Тактика врача при ООИ:

1. Строгая изоляция в месте обнаружения патогена.

2. Текущая дезинфекция.

3. Сообщить: в санэпидемстанцию, больницу, скорую помощь.

4. Транспортируются специальным транспортом, все подвергается заключительной дезинфекции. Взятие материала и транспортировка в более жестких условиях (система стекло-металл-металл). Осуществляется только медицинскими работниками, не более 3,5 часов.  

5. Место нахождения больного объявляется в карантине. Запрещаются потоки больных (не принимают и не выписывают), везде устанавливаются посты наблюдения, берут материал для исследования у всех лиц в очаге инфекции, выявляют всех контактных лиц, контактных лиц изолируют на время максимального инкубационного периода, проводится профилактика.

6. Обработка сред обитания МБ, обеззараживание трупов и их захоронение.

При подозрении на чуму (первая группа): работает специально обученный персонал, строгий изоляционный режим, соблюдение техники безопасности, специальный скафандр, персонал по возможности вакцинирован и т.п. Необходимо исключить вынос инфекции за пределы лаборатории и очага заражения.

Методы диагностики ООИ.

113. . Возбудитель холеры.

1.  Классификация: факультативные анаэробные палочки,  с.Vibrionaceae, p. Vibrio, V. cholerae.
2.  Морфология: Гр-, слегка изогнутая палочка, монотрих,  спор и капсул не образует, подвижна
3.   Тип питания: хемоорганотроф.
4.  Биологические свойства:

а) хорошо растут на простых средах со щелочной реакцией

б) ферментируют гл, сахарозу, мальтозу с образованием кислоты

5. АГ структура: Н-АГ (видоспецифический) и О-АГ (типоспецифический). По О-АГ – три серотипа (компоненты А, В и С).

6. Факторы патогенности:

1) факторы проникновения (жгутик, муциназа)

2) фактор адгезии (филаментоподобное вещество)

3) белковые токсины:

а) холероген (экзотоксин) – функциональный блокатор (нарушает водно-солевой обмен, внутриклеточный транспорт, межклеточные контакты)

б) нейраминидаза – усиливает действие холерогена

в) эндотоксин (ЛПС) – защита от фагоцитоза.

Проникновение в слизистую тонкой кишки  адгезия на энтероцитах  колонизация слизистой кишки  секреция белковых токсинов. Холероген связывается со специфическим рецептором энтероцитов — ганглиозидом. Нейраминидаза усиливает  действие холерогена. Комплекс холероген-специфический рецептор активирует аденилатциклазу. цАМФ регулирует посредством ионного насоса секрецию воды и электролитов из клетки в просвет кишечника. В результате слизистая  тонкой кишки начинает секретировать огромное количество изотонической жидкости, которую не успевает всасывать толстая кишка. Начинается профузный понос изотонической жидкостью.

7. Клинические проявления: инкубационный период 2-3 дня. Болезнь обычно начинается остро. Первым клинически выраженным признаком является профузный понос. Испражнения напоминают рисовый отвар. Рвота обычно появляется внезапно вслед за поносом без предшествующей тошноты, по виду рвотные массы также похожи на рисовый отвар. Болей в животе нет. Больные ощущают нарастающую слабость, сухость во рту, боли и судорожные подергивания в мышцах. Тяжесть течения болезни определяется степенью обезвоживания организма.

8. Иммунитет: непродолжительный, ГИО (антитоксические и антибактериальные АТ).

9. Эпидемиология. Источник – больной человек или носитель, ОПЗ – алиментарно, иногда контактно. Чувствителен к дезинфектантам и АБ.

10. Профилактика: а) неспецифическая: выявление больных, носителей, людей, контактировавших с ними, санитарно-гигиенический контроль за питанием и водоснабжением б) специфическая: холерная вакцина (убитая) и холероген-анатоксин.

11. Лечение: тетрациклины.

12. Диагностика:

Обследованию подлежат не только больные, но обязательно все люди в очаге для выявления скрытых форм и бактерионосителей. Забор материала проводится в условиях, обеспечивающих полную безопасность персонала и внешней среды, обязательно медицинским работником. Материал от больного берется индивидуально, от подозреваемых лиц - можно объединять по несколько проб.

Материал для исследования: испражнения, кусочки кишечника от трупов, пищевые продукты, вода, объекты внешней среды. Пересылка материала осуществляется медицинским работником  в течение не более 3,5 часов в системе  стекло-впитывающий  материал-металл   с  приложением сопроводительного письма, в котором указаны паспортные данные больного, предполагаемый диагноз,  время  взятия  материала,  и  пометкой "бактериологическое загрязнение".

1. Бактериологическая диагностика: классическая и ускоренная.

Классическое исследование: проводят поэтапно, через каждые 6 часов.

1-й этап:

а) посев материала для обогащения на 1% пептонную воду;

б) микроскопия материала (окраска по Граму и фуксином);

в) посев материала на щелочной агар и среду TCBS (тиосульфатцитрат-

бромтимоловый синий, сахароза). Посевы помещают в термостат;

2-й этап (через 6 часов):

а) вырастает пленка на пептонной воде, делают пересев на вторую пептонную воду для дальнейшего обогащения;

б) пересев из первой пептонной воды на щелочной агар и среду TCBS;

3-й этап (через 12 часов):

а) исследование роста на второй пептонной воде (аналогично первой);

б) изучение чашек первичного посева: - описание колоний (желтые на TCBS, прозрачные голубоватые на щелочном агаре; - микроскопия; -определение подвижности; - постановка РА на стекле с 0-1, Инаба и Огава сыворотками; - просмотр колоний в стереоскопическом микроскопе (голубоватый цвет); - пересев на двухсахарную лактозо-сахарозную среду. На этом этапе может быть дан предварительный ответ;

4-й этап (через 18 часов) - изучение выросшей культуры:

а) учет изменения лактозо-сахарозной среды (разложение сахарозы в столбике без газа);

б) мазок по Граму;

в) идентификация по ряду признаков.

Ускоренное исследование подразделяется на ускоренный метод индикации микроба, антигена и ускоренную идентификацию.

1. Ускоренная   индикация - поиск микроба непосредственно в материале или после подращивания в пептонной воде следующими методами:

а) микроскопия (по Граму и фуксином и на подвижность);

б) прямая РИФ;

в) р. иммобилизации под действием сыворотки 0-1;

г) РА растущих культур (материал засевается в 2 пробирки с пептонной водой, в одну из них добавляют диагностическую сыворотку, отмечается рост и одновременно склеивание микробов в пробирке с сывороткой);

д) проба с бактериофагами.

2. Поиск антигена в материале серологическими методами:

а) ИФА;

б) РОПГА;

в) РТПГА.

3. Ускоренная идентификация осуществляется на 3-м этапе бактериологического исследования путем изучения свойств выросших колоний.

2. Серологическая диагностика: чаще носит ретроспективный характер, помогает в неясных случаях, для выявления переболевших и вибриононосителей. Используют РА, РПГА, а также определение вибриоцидных антител. Рекомендуют использовать парные сыворотки. Положительный ответ получают при наличии высокого титра (в РА-1:180-1:3200) или при нарастании его в парных сыворотках.

114. . Возбудитель чумы.

1.  Классификация: ФАН палочки, с. Enterobacteriaceae, p. Yersinia, в. Y. pestis
2.  Морфология: Гр-, короткие палочки, бочкообразные, спор не образуют, жгутиков не имеют, есть капсула, неподвижны, концы палочек окрашиваются гораздо интенсивнее средней части (биполярность).
3.  Тип питания: хемоорганотрофы.
4.  Биологические свойства:

а) хорошо растут на простых питательных средах

б) ферментируют гл, сахарозу с образованием кислоты

1.  АГ структура: FI (K-АГ),  V-АГ (белок), W-АГ (липопротеид). Есть перекрестные АГ (с Е. Coli, Salmonella, эритроцитами человека О-группы)
2.  Факторы патогенности и патогенез:

а) факторы резистентности к фагоцитозу (V-, W- и F1-АГ, ферменты и токсины)

б) факторы адгезии (капсулы и поверхностные структуры КС)

в) «мышиный» токсин – блокирует функцию митохондрий печени и сердца, вызывает образование тромба

г) плазмокоагулаза и фибринолизин – нарушает активацию комплемента, вызывает некроз в л.у.

Проникновение возбудителя  миграция регионарные л. у.   захватывается мононуклеарными клетками  подавление внутриклеточного фагоцитоза и размножение в макрофагах л.у.  геморрагический некроз л.у.бактериемия и высвобождение эндотоксинов, обусловливающие интоксикацию возбудитель разносится по всему организму (генерализация инфекции)  поражение внутренних органов и формированием вторичных бубонов.

1.  Клинические проявления: Инкубационный период 3-6 сут. Клинические формы: кожную, бубонную, легочную и т.д. Обычно начинается внезапно. Быстрое повышение температуры и нарастание интоксикации.  В ряде случаев в рвотных массах появляется примесь крови в виде кровавой или кофейной гущи. Кожа горячая и сухая, лицо и конъюнктивы гиперемированы, нередко цианотичны. Слизистая  ротоглотки и мягкого неба гиперемированы. Миндалины часто увеличены в размерах, отечны. Язык покрывается  белым налетом («натертый мелом»), утолщен. У некоторых больных с тяжелой формой присоединяется диарея с примесью крови и слизи.
2.  Иммунитет: стойкий, высоко напряженный, ГИО и КИО.
3.  Эпидемиология. Зоонозная инфекция, резервуар – грызуны, переносчики – блоки. ОПЗ – трансмиссивно, иногда аэрозольно от ч-ка к ч-ку при легочной форме. МБ устойчив к высыханию и холодным влажным условиям.
4.  Профилактика: специфическая: живая или химическая вакцина
5.  Лечение: стрептомицин и др. АБ.

115. Возбудитель туляремии.

1.  Классификация: аэробные палочки и кокки, роды с неясным систематическим положением, р. Francisella, в. F. tularensis
2.  Морфология: Гр-, кокки, спор не образуют, жгутиков не имеют, есть слабовыраженная капсула.
3.  Тип питания: хемоорганотрофы.
4.  Биологические свойства:

а) аэробы, требовательны к питательному субстрату

б) ферментируют гл, мальтозу с образованием кислоты и глицерин

1.  АГ структура: Vi-АГ и О-АГ.
2.  Факторы патогенности и патогенез:

а) адгезивные факторы ( капсула и белки КС)

б) эндотоксин (ЛПС) – вызывает общую интоксикацию

Адгезия на кл респираторного и кишечного трактов   воспалительный процесс, массивное размножение микробов  проникают в регионарные л. у., вызывая воспаление  размножение и  частичная гибель МБ, выделение эндотоксина. При бактериемии происходит расселение в различные органы и ткани. Возникает множественное увеличение л.у., могут развиваться гранулемы в разных органах (печень, селезенка, легкие).

1.  Клинические проявления: инкубационный период  3-7 дней. Заболевание начинается остро или даже внезапно, больные могут нередко указать даже час начала болезни. Температура тела повышается до 38—40°С. В зависимости от клинической формы наблюдаются боли в глазах, боли при глотании, боли за грудиной, боли в области развивающегося бубона. Клинические формы болезни определяются воротами инфекции.  
2.  Иммунитет: стойкий, ГИО (напряженный), КИО, ГЗТ.
3.  Эпидемиология. Зоонозная инфекция. Резервуары – грызуны. ОПЗ – контактное, иногда алиментарно или трансмиссивно. МБ устойчив во внешней среде.
4.  Профилактика: живая вакцина Гайского-Эльберта.
5.  Лечение: антибиотики широкого спектра действия.

116. Возбудитель бруцеллеза.

1.  Классификация: аэробные палочки и кокки, роды с неясным систематическим положением, р. Brucella, B. melitensis, B.abortus, B.suis
2.  Морфология: Гр-, кокки, не образуют спор, не имеют жгутиков, есть капсула.
3.  Тип питания: хемоорганотрофы.
4.  Биологические свойства:

а) требовательны к питательным средам

б) размножаются медленно

1.  Факторы патогенности и патогенез:

а) инвазивные факторы (капсула, гиалуронидаза)

б) эндотоксин

Проникновение различными путями в организм  инвазия и проникновение в лимфу и кровь  разносятся по всему организму  достигают  л. у. (генерализованная лимфоаденопатия), где размножаются и  накапливаются, образуют гранулемы в печени и селезенки  периодическое поступление в кровь.

1.  Клинические проявления: инкубационный период от нескольких недель до нескольких месяцев. Выраженная легко переносимая лихорадка, умеренная интоксикация. Лимфатические узлы мягкоэластической консистенции чаще безболезненные. Аппетит у больных снижен, отмечается сухость во рту, жажда, склонность к запорам. Язык умеренно обложен, печень (реже селезенка) увеличена.
2.  Иммунитет: стойкий, напряженный ГИО (IgM и IgG) и КИО (в форме ГЗТ)
3.  Эпидемиология. Зоонозное заболевание. Источник – домашние животные. ОПЗ – алиментарный. Устойчивы к факторам окружающей среды, высокочувствительны к дезинфектантам, высокой температуре.
4.  Профилактика:  специфическая: живая вакцина, предупреждение рецидивов: инактивированная вакцина, специфический иммуноглобулин
5.  Лечение: антибиотики широкого спектра действия
6.  Диагностика:

Материал: кровь, реже грудное молоко, желчь, костный мозг.

а) Бактериологическое исследование.

1-ый этап: посев на печеночный бульон.

2-ой этап: пересев на печеночный агар. Оценка характера колоний. Мазок по Гр. РА с противобруцеллезными сыворотками.

3-ий этап: пересев в пробирку со скошенным агаром для получения тонкой культуры. Дифференцирование трех видов бруцелл по следующим признакам: по образованию сероводорода, чувствительности к тионину, фуксину и фагам, в РА с монорецепторными сыворотками.

б) Биопроба: заражение морский свинок или белых мышей. Вскрытие трупов через 20-30 дней после заражения. Мазки-отпечатки из органов по Гр, посевы на среды выделения.

в) Кожно-аллергическая проба по Бюрне для выявления ГЗТ к бруцеллам. Положительна у больных и вакцинированных людей.

Материал: сыворотка крови. Серодиагностика: реакция Райта (развернутая РА), реакция Хедльсона (пластинчатая РА), РСК, опсонофагоцитарная реакция.

117. Возбудитель сибирской язвы.

1.  Классификация: палочки, образующие эндоспоры, с. Bacillaceae, р. Bacillus, в. B. anthracis
2.  Морфология: Гр+, палочки с обрубленными концами, располагаются длинными цепочками, образуют эндоспоры, не имеет жгутиков, есть капсула, неподвижна.
3.  Тип питания: хемоорганотроф.
4.  Биологические свойства:

а) растут на простых питательных средах

б) обладает сахаролитическими свойствами, разжижают желатин «елочкой»

1.  АГ структура: О-АГ (группоспецифический) и К-АГ (видоспецифический), протективный АГ, связанный с белковым токсином.
2.  Факторы патогенности и патогенез:

а) капсульный полипептид (адгезин, антифагоцитарный)

б) протеазы широкого спектра (инвазины)

в) белковый токсин – летальный и отечный фактор (функциональный блокатор)

Ворота – кожа. Размножение в месте инвазии  образование  капсулы и выделение экзотоксина (вызывает плотный отек и некроз с образованием карбункула)  миграция в регионарные л. у. и их воспаление, в дальнейшем  гематогенное распространение по различным органам.

1.  Клинические проявления: инкубационный период  2—3 дня. В месте внедрения возбудителя инфекции появляется красное пятно, превращающееся затем в пустулу. Ощущается зуд и жжение, при расчесывании на месте пустулы образуется язва, покрытая черным струпом с западением в центре (сибиреязвенный карбункул), окруженная венчиком гиперемии. В подкожной клетчатке наблюдается массивный студневидный отек, далеко выходящий за пределы карбункула. Характерно снижение или полное отсутствие чувствительности в области язвы и отека. Регионарные лимфатические узлы увеличены, слегка болезненны, может быть лимфангиит. По мере развития карбункула ухудшается состояние больного.
2.  Иммунитет: стойкий,  напряженный ГИО (антитоксины к протективному АГ) и ГЗТ.
3.  Эпидемиология. Источник – домашние животные, ОПЗ – алиментарный, реже – трансмиссивный или контактный.  
4.  Профилактика: живая вакцина «СТИ», для поздней профилактики и лечения – специфический противосибиреязвенный иммуноглобулин.
5.  Лечение: беталактамы, аминогликозиды, тетрациклины и др.

118. Классификация спирохет:

надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Spirochetales, группа VII Извитые и гибкие клетки, семейство Spirochetaceae.

Общая характеристика спирохет.

1.  Подвижные Гр- спиральные бактерии с периплазматическими жгутиками, локализованными внутри кл и обвитыми вокруг нее.
2.  Семь родов, три патогенных: Treponema, Borrelia, Leptospira.
3.  Плохо окрашиваются по Грамму, окрашиваются методом импрегнации серебром или  по Романовскому-Гимзе, изучаются с использованием темнопольной и фазово-контрастной микроскопии.
4.  Три типа подвижности в жидкой среде: перемещение, вращение вокруг продольной оси, изгибание.
5.  Аэробы или факультативные анаэробы, хемоорганотрофы. Источники С и энергии – углеводы, АК и ЖК.

Патогенные лептоспиры.

1. Классификация: р. Leptospira, в. L. interrogans.

2. Морфология: Гр-, палочка, спиралевидная, концы загнуты в виде крючков, два периплазматических жгутика, споронеобразующая, подвижная

3. Тип питания: хемоорганотроф

4. Биологические свойства:  

а) для роста в среде необходима сыворотка крови

б) источник углерода и энергии – ЖК, не используют углеводы и АК.

5. Факторы патогенности и патогенез:

гликопротеид КС – включается в цитоплазматическую мембрану кл-хозяина

Повреждение кожи и слизистых  проникновение возбудителя без первичных эффектов   по лимфатическим сосудам  кровь и паренхиматозные органы  (преимущественно в печень, селезенку, легкие, почки, ЦНС)  размножение и накопление.

6. Клинические проявления: Инкубационный период 4-14 дней. Начало болезни обычно острое, связано с массивным поступлением лептоспир и их токсинов в кровь. Вторичная массивная бактериемия приводит к обсеменению различных органов, где продолжается размножение возбудителей. Отмечаются многочисленные кровоизлияния, выраженная интоксикация, гемолиз эритроцитов, в тяжелых случаях развивается тромбогеморрагический синдром. В печени: отек  ткани,  некротические изменения паренхимы. В почках: олигурия, уремическая кома. В ЦНС: менингиты. В мышцах: фокальные некротические изменения.

7. Иммунитет: ГИО,  типоспецифический длительный гуморальный постинфекционный иммунитет.

8. Эпидемиология. Зоонозная инфекция. Источники инфекции - различные животные (лесная мышь,  крысы, собаки, свиньи, крупный рогатый скот и др.), но не человек, больной лептоспирозом. ОПЗ – контактный (при контакте кожи и слизистых  с водой, загрязненной выделениями животных) и алиментарный. В воде и почве сохраняются несколько недель.

9. Профилактика: вакцинопрофилактика не разработана.

10. Лечение: АБ (пенициллин), Ig против лептоспир наиболее распространенных сероваров.

11. Диагностика:

Материалы: кровь, моча, сп/м жидкость, вода, пищевые продукты

а) бактериоскопический метод: микроскопия в темном поле зрения, «раздавленная» капля

б) бактериологический метод: выделение гемокультур путем посева на водно-сывороточную среду, затем темнопольная микроскопия + РА с типовыми сыворотками

в) биопроба с заражением кроликов-сосунков и морских свинок с последующей микроскопией и бактериологическим исследованием.

г) серодиагностика: АТ в сыворотке крови в РА, реакции лизиса лептоспир.

119. Классификация трепонем и трепонематозов.

надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок, Spirochetales, группа VII Извитые и гибкие клетки, семейство Spirochetaceae, р. Treponema

1) T. pallidum – возбудитель сифилиса 2) T. pertenue – возбудитель фрамбезии.  3) T. carateum – возбудитель пинты.

4) T. Bejel – возбудитель беджеля – хронический трепанематоз (эндемический сифилис).

Возбудитель сифилиса.

1. Классификация: р.Treponema, в. T.pallidum

2. Морфология: Гр-, палочка, спиральная форма, жгутики, споронеобразующая, подвижная

3. Тип питания: хемоорганотроф, ОАН.

4. Биологические свойства:

а) микроаэрофил.

б) на искусственных питательных средах не растет, культивируется в ткани яичка кролика.

5. АГ структура: белки наружной мембраны, липопротеиды (перекрестно-реагирующие АГ)

6. Факторы патогенности и патогенез:

1.  эндотоксины (белки наружной мембраны и ЛПС)
2.  образующиеся фрагменты, проникающие внутрь клетки

Попадание на кожу или слизистую с  микротрещинами в глубь тканей интенсивное размножение с формированием  твердого шанкра (первая стадия) распространение по лимфатическим сосудам  размножение и накопление в регионарных л.у. (регионарный аденит)  через грудной проток попадают в левую подключичную вену   током крови разносятся по органам и тканям (генерализация инфекции – вторая стадия)  формирование в  органах и тканях инфекционных гранулем (гумм и бугорков, склонных к распаду)  дегенеративные изменения коры головного мозга (прогрессивный паралич) и задних столбов и корешков спинного мозга (спинная сухотка)

7. Клинические проявления: твердый шанкр, регионарный аденит, сыпь, инфекционные гранулемы, параличи. Седловидный нос и саблевидные конечности.

8. Иммунитет: ГИО (АТ не обладают протективными свойствами), КИО, ГЗТ. Истинный постинфекционный иммунитет не развивается. Образуют цисты и L-формы.

9. Эпидемиология. Типично антропонозная инфекция. Источник – больные люди. ОПЗ – половой, вертикальный,  реже контактно-бытовой или трансфузионный. Быстро погибают во внешней среде (на воздухе)

10. Профилактика: вакцинопрофилактика не разработана.

11. Лечение: АБ (пенициллин и др.). Антибиотикорезистентных штаммов нет.

12. Диагностика:

Материалы: отделяемое твердого шанкра, пунктат л.у., отделяемое слизистых и кожных поражений. Бактериоскопия: раздавленная капля, микроскопия в темном поле. Окрашивание по Романовскому-Гимзе 1-2 ч горячей краской.

Материалы: сыворотка крови, плазма, сп/м жидкость. Серодиагностика: КСР (комплекс серологических реакций):

1) реакция микропреципитации

2) РСК (реакция Вассермана). Ставится со специфическим трепонемным и неспецифическим кардиолипидным АГ

3) реакция иммобилизации бледных трепонем: утрата подвижности после добавления АТ.

4) непрямая РИФ 5) ИФА

120. Общая характеристика боррелий.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Spirochetales, группа VII Извитые и гибкие клетки, семейство Spirochetaceae, р.Borrelia, в. В.recurentis (вшивый тиф), B.persica, B.caucasica, B.duttoni, B.burdorferi (клещевой тиф).

2. Морфология: Гр-, палочка, спиральная, три крупных завитка на заостренном конце, споронеобразующая, подвижна

3. Тип питания: хемоорганотроф

4. Биологические свойства:

а) строгие анаэробы

б) культивируются на средах с животными белками, хорошо размножаются в куриных эмбрионах

5. АГ структура: поверхностные АГ чрезвычайно вариабельны.

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) инвазин – белок наружной мембраны

б) эндотоксины (компоненты КС, освобождаемые при лизисе МБ)

Патогенез эпидемического вшивого энцефалита.

Проникновения в организм путем попадания гемолимфы раздавленных инфицированных вшей на мелкие повреждения кожи  размножение в эндотелии сосудов и в клетках ретикуло-эндотелиальной системы бактериемия (первый лихорадочный приступа  накопление в крови спирохетолизинов  лизис боррелий и высвобождение эндотоксина  часть боррелий  с измененной АГ структурой сохраняется, размножается  бактериемия  накопление в крови новых спирохетолизинов  лизис боррелий и высвобождение эндотоксина и т.п. (5-6 раз)  прекращение поступления боррелий с измененной АГ структурой  выздоровление.  

Патогенез эндемического клещевого энцефалита.

Особенность: проникают в ранку на месте присасывания клеща с его слюной.

7. Клинические проявления:

Инкубационный период около 7 дней. Приступ заболевания начинается остро. Озноб , сменяющийся затем чувством жара. Боли в мышцах. Кожа лица гиперемирована. В результате тромбоцитопении, поражения печени и эндотелия сосудов нередко признаки тромбогеморрагического синдрома (упорные носовые кровотечения, кровоизлияния в кожу и слизистые оболочки, кровохарканье, эритроциты в моче).

8. Иммунитет: ГИО, постинфекционный нестойкий.

9. Эпидемиология. Источник – больной человек. Переносчик – платяная вошь. ОПЗ – втирание гемолимфы при расчесах

10. Профилактика: вакцинопрофилактика не применяется. Раннее выявление, изоляция и госпитализация больных, борьба со вшивостью.

11. Лечение: -лактамные АБ

12. Диагностика

а) для вшивого тифа:

Материал – кровь во лихорадочного приступа.

1.  Бактериоскопия мазка и толстой капли (окраска по Романовскому-Гимзе)
2.  Биопроба: заражение морской свинки. Возбудитель клещевого возвратного тифа для них непатогенен.

б) для клещевого возвратного тифа:

Материал – биоптат с места укуса. Иммунофлуоресценция. Серодиагностика: РСК и другие.

Болезнь Лайма.

Вызывает B.burdorferi. ОПЗ - через Иксодовые клещи. Факторы патогенности: коллагенсвязывающий белок (адгезин, реагирующий с тромбоцитами), белок, связывающий урокиназу. Поражает: кожу, суставы, ткани головного мозга. Часто переходит в хронический.

121. Риккетсии.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Ricketsia, гр. VIII. Большие особые группы, с. Rickettsiaceae, р. Rickettsia, в. R. prowachekii, R. typhi.

2. Морфология: Гр-, мелкие палочки или кокки, имеют капсулоподобную оболочку, микрокапсулу, жгутиков нет, споронеобразующая, неподвижна

3. Тип питания: хемоорганотроф, облигатный паразит

4. Биологические свойства:

а) не растут на искусственных питательных средах

б) культивируют на куриных эмбрионах или в тканевых культурах

5. АГ структура: группоспецифический К-АГ, видоспецифический корпускулярный О-АГ.

6. Иммунитет: непродолжительный нестойкий постинфекционный иммунитет

7. Лечение: чувствительны к АБ тетрациклиновой природы.

8. Профилактика: вакцинопрофилактика не разработана

Эпидемический сыпной тиф.

1. Возбудитель: R. prowachekii.

2. Факторы патогенности и патогенез:

Мелкие повреждения кожи (чаще расчесы)  адгезия на холестеринсодержащих рецепторах  проникновение и размножение в макрофагах, фибробластах, эндотелии капилляров (кл может погибнуть из-за действия эндотоксина)  попадание в кровь  поражение интактных эндотелиоцитов  образование тромба  разрыв капилляров (проявление: петехиальная сыпь).

Выработка эндотоксина  токсинемия  генерализованное воспаление.

3. Эпидемиология. Источник – только больной человек. Переносчик – головная и платяная вши. ОПЗ - втирание фекалий вшей в повреждения кожи (в расчесы). Быстро гибнут во влажной среде, длительно сохраняются в фекалиях вшей и в высушенном состоянии, при низких температурах. Погибают под действием обычных дезинфектантов.

Эндемический сыпной тиф.

1. Возбудитель: R. typhi

2. Факторы патогенности и патогенез: сходен с патогенезом эпидемического.

3. Эпидемиология. Источник – грызуны. Переносчик – паразитирующие на грызунах блохи. ОПЗ - контактным (при втирании в кожу фекалий блох во время расчесов после укуса), аэрозольный (попадание возбудителей на слизистые оболочки глаз и верхних дыхательных путей с пылью, содержащей фекалии зараженных блох), алиментарный (при загрязнении продуктов фекалиями и мочой больных грызунов), трансмиссивный (при укусах блох, а также гамазовых клещей, паразитирующих на грызунах).

Рецидивный сыпной тиф.

1. Возбудитель: R. prowachekii

2. Патогенез: В латентном состоянии риккетсии Провачека длительно сохраняются в кл л. у., печени, легких и не выявляются клинически. Ослабляющие организм факторы (ОРЗ, пневмония, переохлаждением, стресс)  активизация риккетсий  бактериемия  проявления эпидемического сыпного тифа.

3. Эпидемиология. Рецидив (следствие активизации риккетсий, сохранившихся в организме после перенесенного эпидемического сыпного тифа).

Клинические проявления сыпных тифов.

Болезнь начинается остро: субфебрильное состояние.  Мучительная головная боль и бессонница. Гиперемия и одутловатость лица (вид человека, вышедшего из парильни). На  складках конъюнктив  характерные точечные пятна  темно-красного цвета. Симптомы щипка и жгута положительны. На 4—6-й день — розеолезно-петехиальная сыпь на боковых поверхностях туловища, сгибательных поверхностях рук, спине, внутренней поверхности бедер.

Диагностика сыпных тифов.

Материалы: кровь больного, органы зараженных животных.

1. Бактериологический метод:

1-ый этап: введение в желточный мешок куриного эмбриона или заражение клеточных культур.

2-ой этап: микроскопия по Здродовскому, ИФА, вскрытие животных и микроскопия по Здродовскому.

2. Биопроба: заражение самцов морских свинок, вскрытие и анализ.

Материал – сыворотка крови. Серодиагностика: РА, РСК, РПГА.

Ку-лихорадка.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Ricketsia, гр. VIII. Большие особые группы, с. Rickettsiaceae, р. Coxiella, в. C.burneti

2. Морфология: Гр-, палочка, имеют капсулоподобную оболочку, микрокапсулу, жгутиков нет, споронеобразующая, неподвижная.

3. Тип питания: хемоорганотроф

4. Биологические свойства:

а) не растут на искусственных питательных средах

б) хорошо культивируются в морских свинках

5. АГ структура: АГ 1-ой фазы (поверхностный полисахарид), АГ 2-ой фазы, токсин.

6. Факторы патогенности и патогенез:

Проникновение через поврежденную кожу или слизистые без признаков воспаления в месте ворот  малая первичная риккетсемия  размножение в макрофагах и лимфоидных тканях  выход из макрофагов  генерализация процесса.

7. Клинические проявления: характеризуются выраженным полиморфизмом, поэтому по клиническим признакам трудно диагностируется.

8. Иммунитет: прочный и длительный ГИО.

9. Эпидемиология. Зоонозное. Очаги болезни: первичные (природные – клещи, грызуны, птицы) и вторичные (сельскохозяйственные). ОПЗ – аэрозольный, алиментарный, контактный, трансмиссивный (клещами). Заражение от больного человека происходит редко — через инфицированную мокроту и молоко кормящих женщин. Необычно устойчивы к окружающей среде, к различным физическим и химическим воздействиям.

10. Профилактика: (накожная) живая вакцина М-44.

11. Лечение: антибиотики тетрациклиновой группы и левомицетин

122. Возбудители хламидиозов.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Chlamydiales, c. Chlamydiaceae, р.Chlamydia, в. C. trachomatis (1 биовар – трахома, 2 биовар – венерическая лимфогранулема, 3 биовар – уро- и экстрагенитальные хламидиозы), C. psitacci (орнитоз), C.pneumoniae.

2. Морфология: Гр-, мелкие кокки, бескапсульные, не имеют жгутиков, неподвижны. Представлены в двух формах: элементарные тельца сферической формы (вне человека) и ретикулярные тельца (внутриклеточно).

3. Тип питания: хемоорганотроф, облигатные внутриклеточные паразиты

4. Биологические свойства:

а) на искусственных питательных средах не размножаются

б) культивируются в желточном мешке куриных эмбрионов и в культурах клеток

5. АГ структура: группоспецифический липогликопротеид, видоспецифический АГ.

6. Факторы патогенности и патогенез:

а) орнитоз:

Адгезия на рецепторах эпителиоцитов бронхов, бронхиол, лимфоцитов  проникновение и размножение в кл  разрушение кл  проникновение в интактные кл  бактериемия  занос в паренхиматозные органы.

б) трахома и венерическая лимфогранулема, урогенитальный хламидиоз:

При трахоме и урогенитальном хламидиозе: попадание на слизистую  мочеполовых органов, прямой кишки, конъюнктиву глаз  размножение и накопление  в эпителиальных клетках  выделение токсинов  местные воспалительные процессы  (уретрит, конъюнктивит, проктит)  распространение по слизистым  поражение мочеполовых органов.  

При венерической лимфогранулеме 1) воспаление в области ворот не выражено 2) распространение МБ лимфогенное 3) поражаются в основном л. у. При этом хламидии и их токсины могут проникать в кровь, обусловливая аллергическую перестройку организма без возникновения вторичных гематогенных очагов в других органах.

7. Клинические проявления:

а) орнитоз: явления общей интоксикации, поражение легких и склонность к затяжному течению с обострениями.

б) трахома: поражение роговицы и конъюнктивы с образованием фолликулов (трахоматозных зерен), в поздней стадии — рубцеванием конъюнктивы и хряща век

в) венерическая лимфогранулема: поражение преимущественно области наружных половых органов, промежности и прямой кишки

8. Иммунитет: ГИО, КИО, ГЗТ. Постинфекционный иммунитет кратковременный и нестойкий. Наблюдаются случаи повторных заболеваний и реинфицирования.

9. Эпидемиология.

а) орнитоз: источник – птицы. ОПЗ – аэрозольно.

б) трахома: источник -  больные с активными и стертыми формами,  с рецидивами заболевания, а также носителям. ОПЗ - через руки, одежду, полотенце и др.

в) венерическая лимфогранулема, урогенитальный хламидиоз: источник – больной человек или носитель, ОПЗ - половой, иногда контактно-бытовой.

10. Профилактика: вакцинопрофилактика не применяется.

11. Лечение: АБ тетрациклиновой группы, эритромицину и рифампицину.

12. Диагностика:

1. Бактериоскопический метод исследования: выявление хламидии, их

морфологических структур и антигенов в пораженных клетках (клиническом

материале).

Материал для исследования: соскобные препараты с доступных исследованию  слизистых оболочек мочеполового тракта (уретра, шейка матки и т.п.) и других органов (конъюнктива,   прямая кишка и пр.) при экстрагенитальных формах.

Мазок по Романовскому-Гимзе. Цитоплазматические включения хламидии (тельца Гальберштедтера-Провачека) содержат крупные ретикулярные тельца или мелкие элементарные тельца. По цвету и внутренней структуре РТ и ЭТ отличаются от ядра клетки и цитоплазмы.

Метод характеризуется сравнительно низкой чувствительностью. Применение люминисцирующих поликлональных и моноклональных антител для выявления АГ хламидии в цитоплазматических включениях в соскобных препаратах урогенитального тракта значительно увеличивает чувствительность и специфичность метода. Используется как прямой, так и непрямой иммунофлюоресцентный метод. При люминесцентной микроскопии антигены хламидии выявляют на красном или оранжевом фоне  цитоплазмы эпителиальных клеток в виде внутриклеточных включений ярко-зеленого цвета. По   информативности и чувствительности уступает только бактериологическому методу.

При   диагностике   орнитоза   и   других   зоонозных   хламидиозов бактериоскопический метод не применяется.

2. Бактериологический метод исследования: выделение хламидии из инфекционного материала заражением куриных эмбрионов, лабораторных животных или клеточных культур с последующей индикацией возбудителя.

Материал для исследования: - тот же, что и при бактериоскопии. При орнитозе - кровь или мокрота. Кровь из вены (не менее 5 мл) исследуют в первые 7-10 дней заболевания, мокроту - до 14 дня заболевания. Для удаления сопутствующей микрофлоры добавляют антибиотики, не действующие на хламидии (стрептомицин, нистатин, гентамицин). При заражении куриного эмбриона исследуемый материал вводят в желточный мешок 6-7-суточногоразвивающегося эмбриона. Индикацию хламидии проводят через 48-72 часа на основании обнаружения типичных цитоплазматических включений, содержащих элементарные и ретикулярные тельца (мазки-отпечатки из   желточных   мешков куриных

эмбрионов и (или) оценка зараженных клеток - окраска по Маккиавелло, прямая и непрямая РИФ).

При диагностике   орнитоза   кроме культур клеток можно заражать пибораторных животных (в мозг или внутрибрюшинно).

3. Серологический метод исследования: антитела выявляют в сыворотке крови, которую исследуют 2-3 раза с интервалом 10-14 дней, и секретах половых органов. Для диагностики используют РСК, РПГА, РИФ, ИФА. При урогенитальных хламидиозах диагностически значимыми в РИФ являются титры 1:32-1:64. Наиболее достоверным является нарастание титра антител в четыре и более раза.

4. Аллергологический метод исследования: постановка кожно-аллергических проб. Используется при диагностике орнитоза с орнитозным аллергеном. Внутрикожная проба становится положительной с первых дней заболевания у большинства больных, сохраняясь до года и более.

123. Микоплазмы пневмонии.

1. Классификация: надцарство Procaryota, царство Bacteria, раздел Scotobacteria, класс Bacterias, порядок Mollicutes, гр. I. Большие особые группы, с. Mycoplasmataceae, р. Mycoplasma, в. M.pneumoniae, M.orale, M. fermentes, M. arthritidis.

2. Морфология: Гр-, нет КС и ПГ, неподвижны

3. Тип питания: хемоорганотроф, факультативный анаэроб

4. Биологические свойства:

а) хорошо растут на всех средах, колонии имеют вид яичницы-глазуньи

б) для роста необходимы ЖК

5. АГ структура: видоспецифический мембранный АГ.

6. Факторы патогенности и патогенез:

Адгезия на эпителиоцитах верхних дыхательных путей (липидные компоненты мембраны микоплазмы диффундируют в мембраны кл, а стеролы кл поступают в микоплазмы)  размножение в цитоплазме и образование микроколоний  распространение по организму с фагоцитами или гематогенно  достигают альвеолоцитов, внедряются в межальвеолярные перегородки с формированием инфильтратов.

7. Клинические проявления:   развивается постепенно, начинается с симптомов, сходных с ОРВИ. Не свойственны выраженная интоксикация и проявления дыхательной недостаточности. Сухой или со скудной мокротой изнурительный и продолжительный кашель. 

8. Иммунитет: ГИО, КИО, продолжительность зависит от интенсивности заболевания, обычно напряженный.

9. Эпидемиология. Источник - больной человек и носитель микоплазм. ОПЗ — воздушно-капельный

10. Профилактика: в очаге проводят раннее и активное выявление больных и их изоляцию, специфической профилактики нет

11. Лечение: АБ группы тетрациклинов.

12. Диагностика: основной метод – серодиагностика, т.к. трудно выделим на культуре. Постановка РСК с диагностикумом из микоплазмы пневмонии или РПГА с эритроцитами барана и адсорбированными на них микоплазменным АГ. Диагностическое значение: нарастание титра АТ в 4 и более раза в парных сыворотках, взятых от больного на 7-8-й день и в конце 2-й недели болезни.

124. Вирусология - наука, изучающая морфологию, физиологию, генетику, экологию и эволюцию вирусов.

Методы вирусологии:

1) микроскопический (ЭМ) 2) вирусологический 3) серологический (поиск АТ к вирусу) 4)биологический (инфицирование лабораторных животных) 5) аллергический.

Основополагающий принцип систематики – тип нуклеиновой кислоты вирионов. По данному признаку выделяют две группы: 1) ДНК-содержащие 2) РНК-содержащие. Каждая из них подразделяется на семейства (-viridae), подсемейства (-virinae), роды, виды, варианты (типы – по антигенной структуре – серотипы, по генотипу)(-virus).

Открытие вирусов принадлежит русскому учёному Дмитрию Иосифовичу Ивановскому:1892 -  работа по изучению мозаичной болезни табака, показал, что возбудитель этой болезни имеет очень малые размеры, не задерживается на бактериальных фильтрах, являющихся непреодолимым препятствием для мельчайших бактерий и не способен культивироваться на искусственных питательных средах. Открыл вирусы растений.

Критерии систематики вирусов:

1) особенности нуклеиновых кислот:

а) структуры (одно-двухцепочечные, полные-недостроенные, цельные-фрагментированные)

б) конфигурации (линейные-кольцевые)

в) геномной функции («плюс-минус» нитевые)

2) наличие или отсутствие внешней оболочки

3) круг хозяев и антигенная специфичность

4) размеры и морфология вирионов, тип симметрии и число капсомером в капсиде

5) органно-тканевой тропизм вирусов, их ЦПД, способы передачи и распространения.

125. Формы существования вирусов. Морфология и биохимическая структура вирионов. Структура, свойства и функции нуклеиновых кислот, белков, углеводов, липидов вирионов. Прионы.

Формы существования вирусных молекул:

а) внеклеточная (элементарные частицы, вирусные частицы, вирионы) – корпускулярные частицы сферической, кубической, нитевидной формы. Размеры: 15-30 до 200-500 нм. Обладают скрытой инфекциозностью.

б) внутриклеточная – репродуцирующая, вегетативная форма. Тесна связана с генетическим аппаратом и метаболизмом кл. Проявляет патогенность.

в) интегрированная с клеточным геномом - провирус

Вирусы: 1) инфекционные с автономной репликацией нуклеиновых к-т и продукцией вирионов (продуктивная инфекция) 2) интеграционные вирусы, способные интегрироваться с геномом кл и утрачивающие способность вызывать продуктивную инфекцию.

Структурная организация вирионов простая, органеллы отсутствуют, у многих нет даже ферментов, различают вирионы а) простые – нуклеиновая к-та, окруженная снаружи белковой оболочкой – капсидом б) сложные – имеют дополнительно внешнюю оболочку – суперкапсид (пеплос).

Структура и химический состав простых вирионов.

В основном состоят только из капсидных белков (1-3 вирусоспецифических белка), у некоторых содержатся также терминальные, ковалентно связанные с  концом вирионной НК белки, участвующие в регуляции вирусного генома.

Капсид имеет строго упорядоченную структуру, в основе которой принципы а) спиральной (вирусы растений) – у палочковидных и нитевидных вирионов б) кубической (большинство патогенных для ч-ка вирусов) – у сферических вирионов или в) смешанной симметрии. Капсид спиральной симметрии: капсомеры уложены в виде спирали вокруг оси, кубической симметрии: в основе – фигура икосаэдра. Формирование нуклеокапсидов происходит самопроизвольно.

Структура и химический состав сложных вирионов.

Имеют много разновидностей белков (кроме капсидных и геномных также ферменты транскрипции и репликации вирусного генома и т.д.). Цикл образования сложных капсидов носит многоступенчатый характер.

В суперкапсиде – липидном бислое – превалируют гликопротеиды, часто образующие поверхностные «шипы». Функции гликопротеидов: 1) прикрепительные белки – распознают специфические клеточные рецепторы и взаимодействуют с ними 2) белки слияния – обуславливают проникновение вируса в кл, инициируя слияние его с мембранами кл. Кол-во углеводов в гликопротеидах – до 10% общей массы вириона. Углеводы гликопротеидов обеспечивают сохранение конформации белка и его устойчивость к протеазам. Липиды суперкапсида в основном представлены фосфолипидами (2/3) и холестеролом (1/3), также являются стабилизаторами, поэтому обработанные эфиром, дезоксихолатом, детергентами вирионы распадаются и утрачивают инфекциозность. Липидно-углеводные компоненты суперкапсида клеточного происхождения (включаются из плазматических мембран при отпочковывании от них вирусов).

Т.о., по хим. структуре все вирусы – нуклеопротеиды, а по организации – простые и сложные.

Прионы – белковые молекулы определенной структуры, способные индуцировать деструктивные процессы в кл организма человека и животных. Отсутствие в составе прионов нуклеиновых кислот определяет необычность некоторых из свойств: устойчивость высоким температурам, ионизирующей радиации, УФ, но чувствительны к фенолу и детергентам при нагревании.  Ген, кодирующий прионовый белок, находится не в составе приона, а в клетке. Прионовый белок, попадая в организм, активирует этот ген и вызывает индукцию синтеза аналогичного белка. Вместе с тем прионы (необычными вирусами) обладают рядом свойств обычных вирусов: 1) проходят через бактериальные фильтры б) не размножаются на искусственных питательных средах 3) репродуцируются до концентраций 105—1011 на 1 г мозговой ткани 4) адаптируются к новому хозяину 5) изменяют патогенность и вирулентность 6)  воспроизводят феномен интерференции 7) обладают штаммовыми различиями и способностью к персистенции в культуре клеток, полученных из органов зараженного организма 8) могут быть клонированы.

Персистируют в организме ч-ка длительное время, не вызывают ГИО и КИО, не являются индукторами ИФН и не чувствительны к нему. Являются возбудителями медленных инфекций, существуют в двух формах: нормальной (являются естественным компонентом кл здорового организма, принимают участие в механизме старения мозга и нервной системы) и патогенной.

Инфекции, вызываемые прионами: Куру ( “хохочущая смерть”), болезнь Крейтуфельда-Якоба, болезнь Геротнера-Штреуспера, амиотрофический лейкоспонгиоз.

Существует мнение, что вирусы и прионы имеют большое значение в процессе старения, которое происходит при ослаблении иммунитета.

Структурно-функциональная организация генома вирусов.

Геном вируса гаплоидный, т.к. представлен одним набором генов. Частично диплоидны ДНК-содержащие вирусы с повторяющимися последовательностями. Полностью диплоидны ретровирусы, геном которых содержит две идентичные молекулы РНК.

Считывание информации с оперона вирусов регулируется энхансером (усилитель транскрипции), промотором (инициирует транскрипцию), оператором и терминатором. В структурных генах имеются  экзоны (несут информацию) и интроны (некодируемые вставочные последовательности, вырезаемые посредством сплайсинга).

Экономия генетического материала вирусов достигается:

1.  вирусные иРНК могут направлять синтез двух-трех белков (за счет двухкратного считывания одной и той же РНК с находящихся в ней в разных участках двух-трех инициирующих кодонов АУГ)
2.  сдвига рамки считывания на один или два кодона при транскрипции
3.  трансляция гигантских полипептидов-предшественников с последующих их нарезанием на более мелкие.

Общий механизм реализации генетической информация:

Существует несколько путей реализации генетической информации: 1) ДНК  иРНК  белок (как в кл) 2) +РНК  белок 3) –РНК  иРНК  белок 4) РНК  ДНК  иРНК  белок (позитивный геном с наличием обратной транскриптазы) 5) одноцепочечная ДНК  промежуточный двухцепочечный ДНК-транскрипт иРНК  белок (у парвовирусов).

Вирусные ДНК:

Молекулярная масса примерно в 10-100 раз меньше, чем у ДНК бактерий. В геноме до нескольких сотен генов. ДНК могут быть однинитевыми или двунитевыми, кольцевыми или линейными, цельными или с «разрывом-дефектом» в одной цепи,  на концах находятся инвертированные последовательности, функциональное назначение которых: 1) маркеры, позволяющие отличать вирусную ДНК от клеточной 2) способность замыкаться в кольцо.

Вирусные РНК:

могут быть однонитевыми или двунитевыми, кольцевыми или линейными, фрагментированными (РНК гриппа) или нефрагментированными (РНК парамиксовирусов). В составе однонитевых РНК часто имеются спиральные участки типа двойной спирали ДНК.

Группы однонитевых РНК в зависимости от их функций: а) плюс-нить (позитивный геном) – РНК, выполняющие функцию иРНК. Имеют модифицированные концы в виде «шапочки» для прикрепления рибосом б) минус-нить (негативный геном) – РНК, служащие матрицей для образования иРНК. Некоторые вирусы могут содержать и плюс, и минус нити РНК (амбисенсвирусами).

У двунитевых ДНК- и РНК-содержащих вирусов информация обычно записана в одной цепи и лишь у некоторых для хранения информации используется вторая цепь (экономия ген. материала).

Геномная РНК ретровирусов, имеющих в своем составе обратную транскриптазу (РНК-зависимую ДНК-полимеразу), относятся к плюс нитевым, т.к. иРНК у них синтезируется по схеме РНК  одна нить ДНК  вторая нить ДНК  интеграция в клеточный геном  иРНК и она не просто комплементарна геномной, а полностью гомологична ей.

Вирусные белки.

а) структурные – входят в состав вирусного капсида: капсидные белки, белки, несущие «адресную функцию» и узнающие рецепторы кл хозяина, белки адсорбции вирусов на поверхности кл, защитные белки и т.д. Особенность капсидных белков: строго упорядоченная структура, обеспечивающая построение капсида из субъединиц-капсомеров, состоящих из идентичных полипептидных цепей, способных к самосборке.

Внешняя оболочка сложных вирионов состоит из белков, входящих в состав гликолипидов и гликопротеидов. Гликопротеиды обладают антигенными свойствами и ответственны за адсорбцию на специфических рецепторах кл. Гликолипиды стабилизируют структуру вирионов. Липидный и углеводный состав сложного вириона определяется кл хозяина, но модифицируется суперкапсидными белками.

б) функциональные – ферменты, участвующие в репродукции вирусов:1) ферменты репликации и транскрипции, 2) ферменты, участвующие в проникновении вирусной НК в кл хозяна и выходе образовавшихся вирионов из нее (нейраминидаза, лизоцим).

Ферменты вирусов: а) вирионные – ферменты транскрипции и репликации (ДНК- и РНК-полимеразы), обратная транскриптаза ретровирусов, экзо- и эндонуклеазы, АТФаза и т.д. б) вирусиндуцированные – структура которых закодирована в вирусном геноме – РНК-полимеразы пикорна-, тога-, орто- и парамиксовирусов, ДНК-полимераза покс- и герпесвирусов в) клеточные ферменты, модифицируемые в процессе репродукции вируса.

126.  Типы взаимодействия вируса с клеткой. Различают три типа взаимодействия вируса с клеткой: продуктивный, абортивный и ин-тегративный.

Продуктивный тип — завершается образованием нового поколения вирионов и гибелью (лизисом) зараженных клеток (цитоли-тическая форма). Некоторые вирусы выходят из клеток, не разрушая их (нецитолитическая форма).

Абортивный тип — не завершается образованием новых вирионов, поскольку инфекционный процесс в клетке прерывается на одном из этапов.

Интегративный тип, или вирогения — характеризуется встраиванием (интеграцией) вирусной ДНК в виде провируса в хромосому клетки и их совместным сосуществованием (совместная репликация).

Репродукция вирусов осуществляется в несколько стадий, последовательно сменяющих друг друга: адсорбция вируса на клетке; проникновение вируса в клетку; «раздевание» вируса; биосинтез вирусных компонентов в клетке; формирование вирусов; выход вирусов из клетки.

Адсорбция. Взаимодействие вируса с клеткой начинается с процесса адсорбции, т. е. прикрепления вирусов к поверхности клетки. Это высокоспецифический процесс. Вирус адсорбируется на определенных участках клеточной мембраны — так называемых рецепторах. Клеточные рецепторы могут иметь разную химическую природу, представляя собой белки, углеводные компоненты белков и липидов, липиды. Число специфических рецепторов на поверхности одной клетки колеблется от 104 до 105. Следовательно, на клетке могут адсорбироваться десятки и даже сотни вирусных частиц.

Проникновение в клетку. Существует два способа проникновения вирусов животных в клетку: виропексис и слияние вирусной оболочки с клеточной мембраной. При виропексисе после адсорбции вирусов происходят инвагинация (впячивание) участка клеточной мембраны и образование внутриклеточной вакуоли, которая содержит вирусную частицу. Вакуоль с вирусом может транспортироваться в любом направлении в разные участки цитоплазмы или ядро клетки. Процесс слияния осуществляется одним из поверхностных вирусных белков капсидной или суперкапсидной оболочки. По-видимому, оба механизма проникновения вируса в клетку не исключают, а дополняют друг друга.

«Раздевание». Процесс «раздевания» заключается в удалении защитных вирусных оболочек и освобождении внутреннего компонента вируса, способного вызвать инфекционный процесс. «Раздевание» вирусов происходит постепенно, в несколько этапов, в определенных участках цитоплазмы или ядра клетки, для чего клетка использует набор специальных ферментов. В случае проникновения вируса путем слияния вирусной оболочки с клеточной мембраной процесс проникновения вируса в клетку сочетается с первым этапом его «раздевания». Конечными продуктами «раздевания» являются сердцевина, нуклеокапсид или нуклеиновая кислота вируса.

Биосинтез компонентов вируса. Проникшая в клетку вирусная нуклеиновая кислота несет генетическую информацию, которая успешно конкурирует с генетической информацией клетки. Она дезорганизует работу клеточных систем, подавляет собственный метаболизм клетки и заставляет ее синтезировать новые вирусные белки и нуклеиновые кислоты, идущие на построение вирусного потомства.

Реализация генетической информации вируса осуществляется в соответствии с процессами транскрипции, трансляции и репликации.

Формирование (сборка) вирусов. Синтезированные вирусные нуклеиновые кислоты и белки обладают способностью специфически «узнавать» друг друга и при достаточной их концентрации самопроизвольно соединяются в результате гидрофобных, солевых и водородных связей.

Существуют следующие общие принципы сборки вирусов, имеющих разную структуру:

1. Формирование вирусов является многоступенчатым процессом с образованием промежуточных форм;

2. Сборка просто устроенных вирусов заключается во взаимодействии молекул вирусных нуклеиновых кислот с капсидными белками и образовании нуклеокапсидов (например, вирусы полиомиелита). У сложно устроенных вирусов сначала формируются нуклеокапсиды, с которыми взаимодействуют белки суперкапсидных оболочек (например, вирусы гриппа);

3. Формирование вирусов происходит не во внутриклеточной жидкости, а на ядерных или цитоплазматических мембранах клетки;

4. Сложно организованные вирусы в процессе формирования включают в свой состав компоненты клетки-хозяина (липиды, углеводы).

Выход вирусов из клетки. Различают два основных типа выхода вирусного потомства из клетки. Первый тип — взрывной — характеризуется одновременным выходом большого количества вирусов. При этом клетка быстро погибает. Такой способ выхода характерен для вирусов, не имеющих суперкапсидной оболочки. Второй тип — почкование. Он присущ вирусам, имеющим суперкапсидную оболочку. На заключительном этапе сборки нуклеокапсиды сложно устроенных вирусов фиксируются на клеточной плазматической мембране, модифицированной вирусными белками, и постепенно выпячивают ее. В результате выпячивания образуется «почка», содержащая нуклеокапсид. Затем «почка» отделяется от клетки. Таким образом, внешняя оболочка этих вирусов формируется в процессе их выхода из клетки. При таком механизме клетка может продолжительное время продуцировать вирус, сохраняя в той или иной мере свои основные функции.

Время, необходимое для осуществления полного цикла репродукции вирусов, варьирует от 5—6 ч (вирусы гриппа, натуральной оспы и др.) до нескольких суток (вирусы кори, аденовирусы и др.). Образовавшиеся вирусы способны инфицировать новые клетки и проходить в них указанный выше цикл репродукции.

127. 1.В настоящее время вирусные инфекции составляют преобладающую часть инфекционной патологии человека. Самыми распространенными среди них остаются острые респираторные (ОРВИ) и другие вирусные инфекции, передаваемые воздушно-капельным путем, возбудители которых относятся к абсолютно различным семействам, чаще всего это РНК-содержащие вирусы (вирус гриппа А, В, С, вирус эпидемического паротита, вирусы парагриппа, кори, риновирусы и др.).

Не менее распространены и кишечные вирусные инфекционные заболевания, вызываемые вирусами, также относящимися к различным семействам РНК-  и ДНК-содержащих вирусов (энтеровирусы, вирус гепатита А, ротавирусы, калициновирусы и др.).

Широко распространены во всем мире такие вирусные инфекционные заболевания, как вирусные гепатиты, особенно гепатит В, передаваемый трансмиссивным и половым путем. Их возбудители - вирусы гепатита А, В, С, D, E, G, ТТ - относятся к разным таксономическим группам (пикорнавирусов, гепаднавирусов и др.), имеют разные механизмы передачи, но все обладают тропизмом к клеткам печени.

Одна из самых известных вирусных инфекций — ВИЧ-инфекция (часто называемая СПИДом - синдромом приобретенного иммунодефицита, который является ее неизбежным исходом). Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) — возбудитель ВИЧ-инфекции — относится к семейству РНК-вирусов Retroviridae, роду лентивирусов.

Весьма распространены в настоящее время арбовирусные инфекционные заболевания. Естественные хозяева их возбудителей — мелкие грызуны и их эктопаразиты. Человеку эти вирусы передаются через укусы кровососущих насекомых, т. е. переносчиками являются членистоногие, поэтому и называются все эти вирусы, независимо от их таксономической принадлежности, арбовирусами.

Большинство из них - РНК-содержащие, входят в семейства -тога-, флави-, буньявирусов и являются возбудителями энцефалитов и геморрагических лихорадок. Возбудителями тяжелых форм геморрагических лихорадок (лихорадки Эбола, Марбург-ская лихорадка и др.) являются фило-, аденовирусы. Но трансмиссивный путь заражения при этих инфекционных заболеваниях не является единственным. Вышеназванные инфекции в основном представляют собой эндемичные заболевания, но тяжелые вспышки некоторых из этих заболеваний (крымской геморрагической лихорадки, лихорадки западного Нила) имели место в Ростовской и Волгоградской областях летом 1999 г.

Кроме инфекционной патологии человека, доказана роль вирусов и в развитии некоторых опухолей животных и человека (онкогенные, или онковирусы). Среди известных вирусов, обладающих онкогенным действием, есть представители как ДНК-содержащих (из семейства паповавирусов, герпесвирусов, аденовирусов, поксвирусов), так и РНК-содержащих (из семейства ретрорвирусов, род пикорновирусов) вирусов.

2. Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используются различные методы.

Вирусологическое исследование (световая микроскопия) позволяет обнаружить характерные вирусные включения, а электронная микроскопия — сами вирионы и по особенностям их строения диагностировать соответствующую инфекцию (например, ро-тавирусную).

Вирусологическое исследование направлено на выделение вируса и его идентификацию. Для выделения вирусов используют заражение лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры тканей.

Первичную идентификацию выделенного вируса до уровня семейства можно провести с помощью:

•  определения типа нуклеиновой кислоты (проба с бромдезоксиу-ридоном);

•  особенностей ее строения (электронная микроскопия);

•  размера вириона (фильтрование через мембранные фильтры с порами диаметром 50 и 100 нм);

•  наличия суперкапсидной оболочки (проба с эфиром);

•  гемагглютининов (реакция гемагглютинации);

•  типа симметрии нуклеокапсида (электронная микроскопия).

Результаты оцениваются по заражению культуры ткани пробой, подвергнутой соответствующей обработке, и с последующим учетом результатов заражения методом цветной пробы фильтрования. Существенное значение для идентификации вирусов (до рода, вида, внутри вида) имеет также изучение их антигенного строения, которое проводится в реакции вирусо-нейтрализации с соответствующими иммунными сыворотками. Сущность этой реакции состоит в том, что после обработки гомологичными антителами вирус утрачивает свою биологическую активность (нейтрализуется) и клетка хозяина развивается так же, как и неинфицированная вирусом. Об этом судят по отсутствию цитопатического действия, цветной пробе, результатам реакции торможения гемагглютинации (РТГА), отсутствию изменений при заражении куриных эмбрионов, выживаемости чувствительных животных.

Вирусологическое исследование — это "золотой стандарт" вирусологии и должно проводиться в специализированной вирусологической лаборатории. В настоящее время оно используется

практически только в условиях возникновения эпидемической вспышки того или иного вирусного инфекционного заболевания.

Для диагностики вирусных инфекций широкое применение нашли методы иммунодиагностики (серодиагностики и имму-ноиндикации). Они реализуются в самых разнообразных реакциях иммунитета:

•  радиоизотопный иммунный анализ (РИА);

•  иммуноферментный анализ (ИФА);

•  реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

•  реакция связывания комплемента (РСК);

•  реакция пассивной гемагглютинации (РПГА);

•  реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и др.

При использовании методов серодиагностики обязательным является исследование парных сывороток. При этом 4-кратное нарастание титра антител во второй сыворотке в большинстве случаев служит показателем протекающей или свежеперене-сенной инфекции. При исследовании одной сыворотки, взятой в острой стадии болезни, диагностическое значение имеет обнаружение антител класса IgM, свидетельствующее об острой инфекции.

Большим достижением современной вирусологии является внедрение в практику диагностики вирусных инфекций моле-кулярно-генетических методов (ДНК-зондирование, полимераз-ной цепной реакции — ПЦР). В первую очередь с их помощью выявляют персистирующие^ вирусы, находящиеся в клиническом материале, с трудом обнаруживаемые

128. 

Противовирусный иммунитет. Основой противовирусного иммунитета является клеточный иммунитет. Клетки-мишени, инфицированные вирусом, уничтожаются цитотоксическими лимфоцитами, а также NK-клетками и фагоцитами, взаимодействующими с Fc-фрагментами антител, прикрепленных к вирусспецифическим белкам инфицированной клетки. Противовирусные антитела способны нейтрализовать только внеклеточно расположенные вирусы, как и факторы неспецифического иммунитета — сывороточные противовирусные ингибиторы. Такие вирусы, окруженные и блокированные белками организма, поглощаются фагоцитами или выводятся с мочой, потом и др. (так называемый «выделительный иммунитет»). Интерфероны усиливают противовирусную резистентность, индуцируя в клетках синтез ферментов, подавляющих образование нуклеиновых кислот и белков вирусов. Кроме этого, интерфероны оказывают иммуномодулирующее действие, усиливают в клетках экспрессию антигенов главного комплекса гистосовместимости (МНС). Противовирусная защита слизистых оболочек обусловлена секреторными IgA, которые, взаимодействуя с вирусами, препятствуют их адгезии на эпителиоцитах.

1.Существование вирусов в 2 (внеклеточной и внутриклеточной) формах предопределяют и особенности иммунитета при вирусных инфекциях. В отношении внеклеточных вирусов действуют те же неспецифические и специфические механизмы антимикробной резистентности, что и в отношении бактерий. Клеточная ареактивность — один из неспецифических факторов защиты. Она обусловлена отсутствием на клетках рецепторов для вирусов, что делает их невосприимчивыми к вирусной инфекции. К этой же группе защитных факторов можно отнести лихорадочную реакцию, выделительные механизмы (чихание, кашель и др.). В защите от внеклеточного вируса участвуют:

•  система комплемента;

•  пропердиновая система;

•  NK-клетки (естественные киллеры);

•  вирусные ингибиторы.

Фагоцитарный механизм защиты малоэффективен в отношении внеклеточного вируса, но достаточно активен в отношении клеток, уже инфицированных вирусом. Экспрессия на поверхности таких вирусных белков делает их объектом макрофагально-го фагоцитоза. Поскольку вирусы представляют собой комплекс антигенов, то при их попадании в организм развивается иммунный ответ и формируются специфические механизмы защиты — антитела и эффекторные клетки.

2. Антитела действуют только на внеклеточный вирус, препятствуя его взаимодействию с клетками организма и неэффективны против внутриклеточного вируса. Некоторые вирусы (вирус гриппа, аденовирусы) недоступны для циркулирующих в сыворотке крови антител и способны персистировать в организме человека достаточно долго, иногда пожизненно.

При вирусных инфекциях происходит продукция антител классов IgG и IgM, а также секреторных антител класса IgA. Последние обеспечивают местный иммунитет слизистых оболочек на входных воротах, что при развитии вирусных инфекций желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей может иметь определяющее значение. Антитела класса IgM появляются на 3—5-й день болезни и через несколько недель исчезают, поэтому их наличие в сыворотке обследуемого отражает острую или свежеперенесенную инфекцию. Иммуноглобулины G появляются позже и сохраняются дольше, чем иммуноглобулины М. Они обнаруживаются только через 1-2 недели после начала заболевания и циркулируют в крови в течение длительного времени, обеспечивая тем самым защиту от повторного заражения.

Еще более важную роль, чем гуморальный иммунитет, при всех вирусных инфекциях играет клеточный иммунитет, что связано с тем, что инфицированные вирусом клетки становятся мишенью для цитолитического действия Т-киллеров. Кроме всего прочего, особенностью взаимодействия вирусов с иммунной системой является способность некоторых из них (так называемые лимфотропные вирусы) поражать непосредственно сами клетки иммунной системы, что приводит к развитию иммунодефицитных состояний.

Все перечисленные' механизмы защиты (исключая фагоцитоз зараженных клеток) активны только в отношении внеклеточного вируса. Попав в клетку, вирионы становятся недоступными ни для антител, ни для комплемента, ни для иных механизмов защиты. Для защиты от внутриклеточного вируса в ходе эволюции клетки приобрели способность вырабатывать особый белок — интерферон.

3. Интерферон — это естественный белок, обладающий противовирусной активностью в отношении внутриклеточных форм вируса. Он нарушает трансляцию и-РНК на рибосомах клеток, инфицированных вирусом, что ведет к прекращению синтеза вирусного белка. Исходя из этого универсального механизма действия интерферон подавляет репродукцию любых вирусов, т. е. не   обладает   специфичностью,   специфичность   интерферонаиная. Она носит видовой характер, т. е. человеческий интерферон ингибирует репродукцию вирусов в клетках человека, мышиный — мыши и т. д.

Интерферон обладает и противоопухолевым действием, что является косвенным свидетельством роли вирусов в возникновении опухолей. Образование интерферона в клетке начинается уже через 2 ч после заражения вирусом, т. е. намного раньше, чем его репродукция, и опережает механизм антителообразования. Интерферон образуют любые клетки, но наиболее активными его продуцентами являются лейкоциты и лимфоциты. В настоящее время методами генной инженерии созданы бактерии (кишечные палочки), в геном которых введены гены (или их копии), ответственные за синтез интерферона в лейкоцитах. Полученный таким образом генно-инженерный интерферон широко используется для лечения и пассивной профилактики вирусных инфекций и некоторых видов опухолей. В последние годы разработан широкий круг препаратов — индукторов эндогенного интерферона. Их применение предпочтительнее, нежели введение экзогенного интерферона. Таким образом, интерферон является одним из важных факторов противовирусного иммунитета, но в отличие от антител или клеток-эффекторов он обеспечивает не белковый, а генетический гомеостаз.

129. Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используются различные методы.

Вирусологическое исследование (световая микроскопия) позволяет обнаружить характерные вирусные включения, а электронная микроскопия — сами вирионы и по особенностям их строения диагностировать соответствующую инфекцию (например, ро-тавирусную).

Вирусологическое исследование направлено на выделение вируса и его идентификацию. Для выделения вирусов используют заражение лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры тканей.

Первичную идентификацию выделенного вируса до уровня семейства можно провести с помощью:

•  определения типа нуклеиновой кислоты (проба с бромдезоксиу-ридоном);

•  особенностей ее строения (электронная микроскопия);

•  размера вириона (фильтрование через мембранные фильтры с порами диаметром 50 и 100 нм);

•  наличия суперкапсидной оболочки (проба с эфиром);

•  гемагглютининов (реакция гемагглютинации);

•  типа симметрии нуклеокапсида (электронная микроскопия).

Результаты оцениваются по заражению культуры ткани пробой, подвергнутой соответствующей обработке, и с последующим учетом результатов заражения методом цветной пробы фильтрования. Существенное значение для идентификации вирусов (до рода, вида, внутри вида) имеет также изучение их антигенного строения, которое проводится в реакции вирусо-нейтрализации с соответствующими иммунными сыворотками. Сущность этой реакции состоит в том, что после обработки гомологичными антителами вирус утрачивает свою биологическую активность (нейтрализуется) и клетка хозяина развивается так же, как и неинфицированная вирусом. Об этом судят по отсутствию цитопатического действия, цветной пробе, результатам реакции торможения гемагглютинации (РТГА), отсутствию изменений при заражении куриных эмбрионов, выживаемости чувствительных животных.

Вирусологическое исследование — это "золотой стандарт" вирусологии и должно проводиться в специализированной вирусологической лаборатории. В настоящее время оно используется

практически только в условиях возникновения эпидемической вспышки того или иного вирусного инфекционного заболевания.

Для диагностики вирусных инфекций широкое применение нашли методы иммунодиагностики (серодиагностики и имму-ноиндикации). Они реализуются в самых разнообразных реакциях иммунитета:

•  радиоизотопный иммунный анализ (РИА);

•  иммуноферментный анализ (ИФА);

•  реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

•  реакция связывания комплемента (РСК);

•  реакция пассивной гемагглютинации (РПГА);

•  реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и др.

При использовании методов серодиагностики обязательным является исследование парных сывороток. При этом 4-кратное нарастание титра антител во второй сыворотке в большинстве случаев служит показателем протекающей или свежеперене-сенной инфекции. При исследовании одной сыворотки, взятой в острой стадии болезни, диагностическое значение имеет обнаружение антител класса IgM, свидетельствующее об острой инфекции.

Большим достижением современной вирусологии является внедрение в практику диагностики вирусных инфекций моле-кулярно-генетических методов (ДНК-зондирование, полимераз-ной цепной реакции — ПЦР). В первую очередь с их помощью выявляют персистирующие^ вирусы, находящиеся в клиническом материале, с трудом обнаруживаемые или не обнаруживаемые другими методами.

130 Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые.

Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.

Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей.

Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться in vitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др.

К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.

О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.

Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.

Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.

Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.

Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6—7-дневной инкубации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз.

Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц является метод бляшек.

Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.

Для культивирования вирусов используют ряд методов. Это культивирование в организме экспериментальных животных, развивающихся куриных вибрионах и культурах тканей (чаще — эмбриональные ткани или опухолевые клетки). Для выращивания клеток тканевых культур используют многокомпонентные питательные среды (среда 199, среда Игла и др.). Они содержат индикатор измерения рН среды и антибиотики для подавления возможного бактериального загрязнения.

Культуры тканей могут быть переживающими, в которых жизнеспособность клеток удается сохранить лишь временно, и растущими, в которых клетки не только сохраняют жизнедеятельность, но и активно делятся.

В роллерных культурах клетки ткани фиксированы на плотной основе  (стекло)   —  чаще  в  один  слой  (однослойные),  а  в суспензированных —взвешены в жидкой среде. По количеству пассажей, выдерживаемых растущей культурой тканей, среди них различают:

•  первичные (первично-трипсинизированные)  культуры  тканей, которые выдерживают не более 5—10 пассажей;

•  полуперевиваемые культуры тканей,  которые поддерживаются не более чем в 100 генерациях;

•  перевиваемые культуры тканей, которые поддерживаются в течение неопределенно длительного срока в многочисленных генерациях.

Чаще всего используются однослойные первично-перевиваемые и перевиваемые тканевые культуры.

2. О размножении вирусов в культуре ткани можно судить по ци-топатическому действию (ЦПД):

•  деструкции клеток;

•  изменению их морфологии;

•  формированию многоядерных симпластов или синтиция в результате слияния клеток.

•  в клетках культуры ткани при размножении вирусов могут образовываться включения — структуры, не свойственные нормальным клеткам.

Включения выявляются в окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках из зараженных клеток. Они бывают эозинофильные и базофильные.

По локализации в клетке различают: цитоплазматические; ядерные; смешанные включения.

Характерные ядерные включения формируются в клетках, зараженных вирусами герпеса (тельца Каудри), цитомегалии и полиомы, аденовирусами, а цитоплазматические включения — вирусами оспы (тельца Гварниери и Пашена), бешенства (тельца Бабеша-Негри) и др.

О размножении вирусов в культуре ткани также можно судить по методу "бляшек" (негативных колоний). При культивировании вирусов в клеточном монослое под агаровым покрытием на месте пораженных клеток образуются зоны деструкции моно-сом — так называемые стерильные пятна, или бляшки. Это дает возможность не только определить число вирионов в 1 мл среды (считается, что одна бляшка является потомством одного вириона), но и дифференцировать вирусы между собой по феномену бляшкообразования.

Следующим методом, позволяющим судить о размножении вирусов (только гемагглютинирующих) в культуре ткани, можно считать реакцию гемадсорбции. При культивировании вирусов, обладающих гемагглютжирующей активностью, может происходить избыточный синтез гемагглютининов. Эти молекулы экспрессируются на поверхности клеток культуры ткани, и клетки культуры ткани приобретают способность адсорбировать на себе эритроциты — феномен гемадсорбции. Молекулы гемагглютинина накапливаются и в среде культивирования, это приводит к тому, что культуральная жидкость (в ней накапливаются новые вирионы) приобретет способность вызывать гемагглютинацию.

Наиболее распространенным методом оценки размножения вирусов в культуре ткани является метод "цветной пробы". При размножении в питательной среде с индикатором незараженных

клеток культуры ткани вследствие образования кислых продуктов метаболизма она изменяет свой цвет. При репродукции вируса нормальный метаболизм клеток нарушается, кислые продукты не образуются, среда сохраняет исходный цвет.

131. Куриные   эмбрионы.   Куриные   эмбрионы   по   сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям.

Для получения чистых культур риккетсий, хламидий. и ряда вирусов в диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его оболочках.

О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.

К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препаратов.

132. Большинство известных химиотерапевтических препаратов не обладают противовирусной активностью, так как механизм действия большинства из них основан на подавлении микробного метаболизма, а у вирусов собственные метаболические системы отсутствуют.

Антибиотики и сульфаниламиды при вирусных инфекциях используют только с целью профилактики бактериальных осложнений. Тем не менее в настоящее время разрабатываются и применяются химиотерапевтические средства, обладающие противовирусной активностью.

Первая группа — аномальные нуклеозиды. По строению они близки к нуклеотидам вирусных нуклеиновых кислот, но, включенные в состав нуклеиновой кислоты, они не обеспечивают ее нормальное функционирование. К таким препаратам относятся азидотимидин — препарат, активный в отношении вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекция). Недостаток этих препаратов — в высокой токсичности для клеток макроорганизма.

Вторая группа препаратов нарушает процессы абсорбции вирусов на клетках. Они менее токсичны, обладают высокой избирательностью и весьма перспективны. Это тиосемикарбозон и его производные, ацикловир (зовиракс) - герпетическая инфекция, ремантадин и его производные — грипп А и др.

Универсальным средством терапии, так же как и профилактики, вирусных инфекций является интерферон.

133. Острые респираторные вирусные инфекцииОстрые респираторные вирусные инфекции

(ОРВИ) — группа острых инфекционных болезней человека, передающихся

воздушно-капельным путем и характеризующихся преимущественным поражением органов

дыхания. ОРВИ являются самыми распространенными инфекционными болезнями

человека. К числу ОРВИ относят грипп, парагрипп, аденовирусные болезни,

респираторно-синцитиальную, риновирусную и коронавирусную инфекцию.

Коксаки-вирусные болезни (см. Энтеровирусные болезни).

   Этиология. ОРВИ вызываются вирусами, относящимися к различным семействам и

родам, обладающими выраженным тропизмом к эпителию слизистой оболочки

дыхательных путей. Они, кроме аденовирусов, относятся к РНК-содержащим вирусам,

являются облигатными внутриклеточными паразитами, мало устойчивы в окружающей

среде, термолабильны, мгновенно погибают под действием дезинфицирующих средств.

   Источником возбудителей инфекции является только человек — больной или

вирусоноситель. Передача вируса от человека к человеку происходит главным

образом воздушно-капельным путем; возможно также заражение через предметы

обихода (например, посуду, полотенца, игрушки). ОРВИ регистрируются во всех

странах мира, чаще в средних широтах. Отмечаются выраженные сезонные (весна,

осень) подъемы заболеваемости, чему способствуют охлаждение и снижение

резистентности организма. К этим инфекциям восприимчивы люди всех возрастов,

особенно дети.

   Патогенез отдельных ОРВИ имеет общие черты (поражение эпителия различных

отделов дыхательных путей и легких, интоксикация), определяющие сходство таких

клинических проявлений болезни, как кашель, насморк, боль и першение в горле,

острое начало болезни, наличие гиперемии и отечности слизистых оболочек зева и

глотки, лихорадка, а также других симптомов общей интоксикации.

   В патогенезе ОРВИ важную роль играет микст-патология, обусловленная сложными

вирусно-бактериальными ассоциациями с развитием вторичных процессов: катара

верхних дыхательных путей, ангины, бронхита, пневмонии, когда по существу

создается синергидный патологический эффект, нередко обусловливающий тяжелое

течение болезни в целом и даже ее исход. Сочетание респираторно-синцитиальной

инфекции с другими ОРВИ (гриппом, парагриппом, аденовирусной инфекцией) ведет к

обострению хронического бронхита и к развитию хронической пневмонии.

   В то же время в патогенезе и клинических проявлениях отдельных

нозологических форм имеются существенные различия (см. Грипп, Аденовирусные

болезни, Энтеровирусные болезни).

   Иммунитет после перенесенных ОРВИ обычно непродолжительный,

типоспецифический.

   ОРВИ характеризуется коротким инкубационным периодом (до 7 суток), острым

началом, сочетанием катаральных явлений с лихорадкой и общей интоксикацией.

   Диагноз устанавливают на основании клинической картины, данных

эпидемиологического анамнеза (общение с больным или вирусоносителями),

результатов лабораторных исследований.

   Дифференциальный диагноз между различными ОРВИ в поликлинических условиях

сложен. Выраженный токсикоз с первого дня болезни с последующим присоединением

катаральных явлений со стороны верхних дыхательных путей отличает грипп от

других ОРВИ, при которых развитие катаральных явлений часто предшествует

повышению температуры тела, а явления интоксикации выражены слабо.

Дифференциальный диагноз проводят также с продромальным периодом кори,

преджелтушным периодом вирусного гепатита, пневмококковым ринитом,

менингококковым назофарингитом. Для дифференциальной диагностики между

отдельными ОРВИ используют реакцию связывания комплемента, реакцию непрямой

гемагглютинации, реакцию торможения гемагглютинации, а для экспресс-диагностики

— метод иммунофлюоресценции в прямой или непрямой модификации.

   Лечение ОРВИ дифференцировано в зависимости от нозологической формы, тяжести

течения болезни, ее осложнений и возраста больных. Основная масса больных

лечится на дому. Показан постельный режим, щадящая диета, обильное питье (чай,

молоко, фруктовые соки, морсы), тепловые процедуры, ингаляция, средства от

насморка, кашля, бронхолитики, витамины (С, группы В), жаропонижающие средства

при температуре выше 38,5°, десенсибилизирующие средства. При всех ОРВИ показаны

интерферон и реаферон. При осложнениях ОРВИ применяют антибиотики и

сульфаниламиды. Показаниями для госпитализации являются осложненное и тяжелое

течение болезни, наличие тяжелых сопутствующих болезней. Больным с тяжелым

134

течением ОРВИ в условиях стационара назначают донорский противогриппозный или

противокоревой гамма-глобулин, нормальный человеческий иммуноглобулин, плазму,

средства дезинтоксикации, кортикостероиды.

   Прогноз благоприятный, однако возможны летальные исходы у лиц с отягощенным

анамнезом, у детей до 1 года и больных старше 70 лет при тяжелом и осложненном

течении болезни, особенно при гриппе.

   Профилактика состоит в раннем выявлении и изоляции больных; повышении

неспецифической сопротивляемости организма (занятие физкультурой и спортом,

закаливание организма, рациональное питание, назначение витаминов по

показаниям); ухаживающие за больными должны носить 4—6 слойные марлевые маски.

Следует ограничивать во время вспышек ОРВИ посещения амбулаторий, поликлиник,

зрелищных мероприятий, больных родственников. Лицам, общавшимся с больными,

назначают противовирусные препараты (например, оксолиновую мазь). Помещение, где

находится больной, нужно регулярно проветривать, делать влажную уборку 0,5%

раствором хлорамина. В очаге проводят текущую и заключительную дезинфекцию, в

частности кипячение посуды, белья, полотенец, носовых платков больных. Применяют

живые или убитые вакцины (при гриппе).

   Ниже приводятся данные об ОРВИ, не описанные самостоятельными статьями.

   Парагрипп характеризуется преимущественным поражением гортани, носа, бронхов

и умеренной лихорадкой. Возбудитель относится к парамиксовирусам. Известно 4

серотипа возбудителя. Случаи парагриппа регистрируются на протяжении всего года

с сезонными подъемами заболеваемости в осенне-зимний и весенний периоды.

Возможны ограниченные эпидемические вспышки. На долю парагриппа приходится

16—18% всей заболеваемости ОРВИ. Болеют дети любого возраста и взрослые. Вирус

размножается преимущественно в клетках эпителия верхних дыхательных путей,

особенно гортани, вызывая в них деструктивные изменения. Воспалительный отек у

детей может приводить к сужению просвета гортани. Наблюдается вирусемия.

Инкубационный период длится от 1 до 7 дней, чаще 2—4 дня. Начало постепенное, у

детей раннего возраста — острое. Наиболее характерным симптомом является сухой

«лающий» кашель. Наблюдаются першение в горле, осиплость голоса, заложенность

носа, а затем появление обильного серозного отделяемого, которое при

присоединении вторичной бактериальной инфекции принимает гнойный характер.

Температура обычно не превышает 38°, продолжительность лихорадки 2—5 дней, у

детей температура может подниматься до более высоких цифр. Общие симптомы

интоксикации выражены слабо: небольшая боль в лобно-височной области,

познабливание, небольшие мышечные боли. При осмотре отмечаются бледность кожи,

гиперемия и отечность слизистой оболочки носа, гиперемия мягкого неба и задней

стенки глотки. Из осложнений наиболее частым является пневмония, у детей —

ларинготрахеобронхит острый стенозирующий. Прогноз благоприятный.

   Респираторно-синцитиальная инфекция характеризуется преимущественным

поражением бронхов и легких и умеренно выраженной интоксикацией. Возбудитель

относится к роду метамиксовирусов. Болеют главным образом дети младшего возраста

и даже новорожденные. Заболеваемость среди взрослых носит спорадический

характер, среди детей дошкольного возраста возможны эпидемические вспышки,

возникающие обычно с октября по апрель, т.е. в период сезонного подъема

заболеваемости. Вирус первоначально внедряется в эпителий слизистой оболочки

носа и глотки, вызывая воспалительный процесс. У взрослых патологический процесс

этим может ограничиваться. У детей наиболее выражены изменения в мелких бронхах

и бронхиолах, их просвет почти полностью закрывается тягучей слизью. В

пораженных участках наблюдаются характерные многоядерные сосочковые разрастания,

занимающие иногда значительную часть просвета бронхов, в некоторых случаях

альвеол. В легочной ткани отмечаются мелкоочаговые ателектазы и эмфизема. В

результате диффузного обструктивного процесса в бронхах развивается гипоксия.

Инкубационный период длится от 3 до 9 дней. Продолжительность болезни 5—7 дней,

но возможно и затяжное ее течение. Температура нормальная или субфебрильная,

явления интоксикации отсутствуют или выражены слабо. Кашель и насморк слабо

выражены. Слизистая оболочка мягкого неба и глотки гиперемирована незначительно.

У детей старшего возраста и взрослых болезнь протекает легко, без осложнений. У

детей первого года жизни сначала появляется насморк, затем присоединяется

кашель, через 2—3 дня повышается температура, возникает одышка преимущественно

экспираторного характера, отмечается втяжение уступчивых мест грудной клетки,

цианоз. В легких выслушиваются рассеянные мелкопузырчатые хрипы, появляются

135 симптомы общей интоксикации. Прогноз благоприятный.

   Риновирусная инфекция характеризуется преимущественно поражением слизистой

оболочки носа и глотки. Возбудитель относится к роду риновирусов. Известно более

100 серотипов возбудителя. Болеют все возрастные группы населения.

Заболеваемость регистрируется преимущественно в весенне-осенний период, в виде

спорадических случаев и небольших вспышек в закрытых коллективах. Вирус

размножается в эпителиальных клетках слизистой оболочки носа, вызывая

катаральное воспаление с резким отеком слизистой оболочки, десквамацией эпителия

и обильной секрецией. У детей воспалительный процесс может распространяться на

гортань, трахею и бронхи. Инкубационный период продолжается от 1 до 6 дней.

Болезнь начинается с чиханья, заложенности носа, иногда небольшого недомогания.

Через несколько часов появляются обильные серозные выделения из носа. Возможен

сухой кашель. Температура чаще нормальная, реже субфебрильная. При осмотре

определяются гиперемия и набухание слизистой оболочки носа, инъекция сосудов

склер и конъюнктив, возможна мацерация кожи у носовых отверстий. У детей

младшего возраста болезнь может протекать тяжелей, возможны осложнения,

вызванные бактериальной флорой. Продолжительность болезни не превышает 7 суток.

Прогноз благоприятный.

   Коронавирусная инфекция характеризуется преимущественным поражением верхних

дыхательных путей, чаще болеют дети, клинически сходна с риновирусной инфекцией.

Прогноз благоприятный.

Таксономия: семейство – Orthomyxoviridae, род Influenzavirus. Различают 3 серотипа вируса гриппа: А, В и С.

Структура вируса гриппа А. Возбудитель гриппа имеет однонитчатую РНК, состоящую из 8 фрагментов. Подобная сегментарность позволяет двум вирусам при взаимодействии легко обмениваться генетической информацией и тем самым способствует высокой изменчивости вируса. Капсомеры уложены вокруг нити РНК по спиральному типу. Вирус гриппа имеет также суперкапсид с отростками. Вирус полиморфен: встречаются сферические, палочковидные, нитевидные формы.

Антигенная структура. Внутренние и поверхностные антигены. Внутренние антигены состоят из РНК и белков капсида, представлены нуклеопротеином (NP-белком) и М-белками. NP-и М-белки — это типоспецифические антигены. NP-белок способен связывать комплемент, поэтому тип вируса гриппа обычно определяют в РСК. Поверхностные антигены — это гемагглютинин и нейраминидаза. Их структуру, которая определяет подтип вируса гриппа, исследуют в РТГА, благодаря торможению специфическими антителами гемагглютинации вирусов. Внутренний антиген – стимулирует Т-киллеры и макрофаги, не вызывает антителообразования. У вируса имеются 3 разновидности Н- и 2 разновидности N – антигенов.

Иммунитет: Во время заболевания в противовирусном ответе участвуют факторы неспецифической защиты: выделительная функция организма, сывороточные ингибиторы, альфа-интерферон, специфические IgA в секретах респираторного тракта, которые обеспечивают местный иммунитет.

Клеточный иммунитет - NK-клетки и специфические цитотоксические Т-лимфоциты, действующие на клетки, инфицированные вирусом. Постинфекционный иммунитет достаточно длителен и прочен, но высокоспецифичен (типо-, подтипо-, вариантоспецифичен).

Микробиологическая диагностика. Диагноз «грипп» базируется на (1) выделении и идентификации вируса, (2) определении вирусных АГ в клетках больного, (3) поиске вирусоспецифических антител в сыворотке больного. При отборе материала для исследования важно получить пораженные вирусом клетки, так как именно в них происходит репликация вирусов. Материал для исследования — носоглоточное отделяемое. Для определения антител исследуют парные сыворотки крови больного.

Экспресс-диагностика. Обнаруживают вирусные антигены в исследуемом материале с помощью РИФ (прямой и непрямой варианты) и ИФА. Можно обнаружить в материале геном вирусов при помощи ПЦР.

Вирусологический метод. Оптимальная лабораторная модель для культивирования штаммов—куриный эмбрион. Индикацию вирусов проводят в зависимости от лабораторной модели (по гибели, по клиническим и патоморфологическим изменениям, ЦПД, образованию «бляшек», «цветной пробе», РГА и гемадсорбции). Идентифицируют вирусы по антигенной структуре. Применяют РСК, РТГА, ИФА, РБН (реакцию биологической нейтрализации) вирусов и др. Обычно тип вирусов гриппа определяют в РСК, подтип — в РТГА.

Серологический метод. Диагноз ставят при четырехкратном увеличении титра антител в парных сыворотках от больного, полученных с интервалом в 10 дней. Применяют РТГА, РСК, ИФА, РБН вирусов.

Лечение: симптоматическое/патогенетическое. А-интерферон – угнетает размножение вирусов.

1. Препараты  - индукторы эндогенного интерферона.

Этиотропное лечение -  ремантидин – препятствует репродукции вирусов, блокируя М-белки. Арбидол – действует на вирусы А и В.

2. Препараты  - ингибиторы нейраминидазы. Блокируют выход вирусных частиц из инфицированных клеток.

При тяжелых формах – противогриппозный донорский иммуноглобулин и нормальный человеческий иммуноглобулин для в\в введения.

Профилактика: Неспецифическая профилактика – противоэпидемические мероприятия, препараты а-интерферона и оксолина.

Специфическая – вакцины. Живые аллантоисные интраназальная и подкожная, тривалентные инактивированные цельно-вирионные гриппозные интраназальная и парентеральная-подкожная (Грипповак), химические  Агриппал, полимер-субъединичная «Гриппол». Живые вакцины создают наиболее полноценный, в том числе местный, иммунитет.