Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Тема 1 и 6
1.Какова роль вирусов в инфекционной патологии?
Вирусы — возбудители болезней животных, растений, а также человека. Подобно другим инфекционным агентам они содержат ге нетическую информацию в форме последовательности нуклеотидов в молекулах нуклеиновых кислот (ДНК или РНК), реализуют ее с помощью триплетного кода, обладают наследственностью и измен чивостью, поддаются естественному и искусственному отбору. Но в отличие от других инфекционных агентов вирусы не имеют своего обмена веществ, и поэтому они ничем не питаются, не дышат и ниче го не выделяют, у них нет белоксинтезирующих и энергообразую щих систем. Вирусы размножаются только в живых клетках, поэто му их можно рассматривать как биологические образования, несу щие генетическую информацию, которую они реализуют только в живых клетках животных и растений.
В хозяйствах промышленного типа широко распространены ос трые респираторные и кишечные заболевания, вызываемые виру сами парагриппа (парамиксовирусы), инфекционного ринотрахеи-та (герпесвирусы), вирусной диареи (флавивирусы), аденовируса ми и др.
Вирусы могут быть причиной внутриутробной патологии живот ных. Так, парвовирус свиней, вирус чумы свиней часто вызывают мертворождение и мумификацию плодов, вирус инфекционного ри-нотрахеита — пороки развития, слепоту и т. д. Доказана роль виру сов в возникновении опухолевых болезней (лейкозов, болезни Маре ка и др.). Многие вирусные болезни животных опасны и для челове ка (бешенство, вирусные энцефалиты, грипп, геморрагические лихо радки и др.).Среди рациональных мер борьбы с вирусными болезнями ла бораторная диагностика занимает ведущее место.
2. как используют КК вирусами?
Культивирование вирусов в культуре клеток: методика сводится к следующему:подбор культуры клеток, получение вируссодержащего материала,подготовка для заражения,; заражение клеток вируссодержащим материалом; культивирование вируса в клетках; индикация вируса в культуре клеток; сбор культуральной жидкости и идентификация в ней вируса.
Подбор культур клеток. Не всякая клетка чувстви тельна к любому вирусу. Вирус к первичной культуре обычно ус пешно адаптируется при условии, если культура получена из орга нов животного, естественно восприимчивого к данному вирусу. Од нако адаптация вируса к перевиваемым клеткам более сложна, а в ряде случаев неосуществима. Для культивирования некоторых ви русов до сих пор неизвестно ни одной клеточной системы. Для куль тивирования вируса используют обычно молодые клетки, т. е. в пер вый день формирования монослоя, а в некоторых случаях (для парвовирусов свиней) клетки заражают при их посеве, так как вирус интенсивно размножается при наличии делящихся клеток (когда они находятся в стадии логарифмического роста).
Получение вируссодержащего материала и подготовка его для заражения (см тема2:вопросы Сорокина и Арифулина)
Заражение клеток. Для этого отбирают пробирки (или матрасы) со сплошным клеточным монослоем, просматривая их под малым увеличением микроскопа. Ростовую питательную среду сли вают, клетки 1—2 раза промывают раствором Хенкса, чтобы удалить сывороточные антитела и ингибиторы. В каждую пробирку вносят по 0,1—0,2 мл вируссодержащего материала и покачиванием распре деляют его равномерно по слою клеток. В таком виде пробирки (мат расы) оставляют от 1 до 2 ч при 22 или 37 °С для адсорбции вируса на поверхности клеток. Затем вируссодержащий материал удаляют из пробирок (матрасов) и наливают поддерживающую среду (в про бирку 1—2 мл, в матрасы около 10 % его объема). При выделении вируса из патологического материала некоторые пробы (фекалий и др.) могут оказывать токсическое действие на клетки, поэтому после адсорбции вируса монослой клеток отмывают 1—2 раза раствором Хенкса (или питательной средой) и затем наливают поддерживаю щую среду.
Культивирование вируса. Пробирки (матрасы) за крывают герметически резиновыми пробками и ставят на инкубацию в термостат при 37 °С. Наиболее широко применяют стационарное инкубирование. При этом матрасы кладут в горизонтальном положе нии, пробирки — под углом 5° так, чтобы монослой клеток оказался под питательной средой (чертой вверх). В ряде лабораторий заражен ные культуры клеток инкубируют на вращающейся системе — рол лерах (рис. 40). Используя этот метод, удается получать большой выход вируса, имеющего более высокий инфекционный титр, чем при стационарном культивировании. Для каждой пробы материала обычно используют не менее 4—10 пробирок с культурой клеток. Для контроля оставляют 4—6 пробирок с незараженной культурой клеток, в которых заменяют ростовую среду на поддерживающую.В культурах клеток, зараженных вирусом, питательную среду мож но не менять в течение 7 дней, а рН среды (6,9—7,4) поддерживать с помощью 7,5%-ного раствора бикарбоната натрия. При более дли тельном культивировании инфицированных клеток (аденовирусы и др.) среду меняют.Все пробирки (матрасы) после заражения клеток ежедневно исследуют под малым увеличением микроскопа, сравнивая культу ры клеток, зараженные вирусом, с контрольными.
В термостате адсорбировавшиеся на клетках вирусные части цы проникают внутрь их и начинается их репродукция. Новые вирусные частицы покидают (полностью или частично) клетки, в ко торых они образовались, проникают в непораженные клетки, репро дуцируются в них, переходят в новые клетки и поражают их. Так про должается до тех пор, пока есть живые неповрежденные клетки. В результате этого процесса практически все клетки в матрасе или про бирке поражаются вирусом, хотя абсолютно все почти никогда не поражаются.Вирус накапливается в основном в культуральной жидкости, но часть вирионов может оставаться и внутри не разрушенных вирусом клеток. Чтобы оставшийся в клетках вирус освободить, клетки тща тельно разрушают или многократным замораживанием — оттаива нием (2—3 раза), или с помощью ультразвука.