Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
1
Первинні зміни в шкірних алотрансплантатах при первинній пересадці виникають, як правило, на 6-8 добу. З'являється набряк, інфільтрація трансплантата лімфоцитами, стаз, крововили ви. Трансплантат синіє, твердіє, трапляються дегенеративні зміни в епідермісі. На 10-ту добу трансплантат відмирає.
При повторних пересадках від тих же донорів патологічні зміни настають значно швидше, на 3-4 день. Іноді деструктивні процеси розпочинаються відразу ж після пересадки, ще до проростання судин. Такий хід подій і навів на думку, що їх причиною є імунологічний механізм.
Встановлено, що антигени донора, потрапляючи в організм реципієнта, спричиняють сенсибілізацію лімфоцитів (Т-хелперів ГСТ і Т-кілерів), які мігрують у трансплантат. У процесі взаємодії сенсибілізова них лімфоцитів з клітинами трансплантата виділяються різноманітні лімфокіни. Вони впливають на макрофаги і лімфоцити, порушують проникність мембран клітин трансплантата, що призводить до їх руйнування. Велике значення у цьому процесі має лімфотоксин.
Відторгнення шкірних трансплантатів обумовлюється в основному механізмами гіперчутливості сповільненого типу - клітинними факторами без участі антитіл. Водночас відторгнення трансплантата нирок може бути зумовлене як факторами клітинного, так і гуморального імунітету.
Для успішної трансплантації необхідно подолати трансплан таційний імунітет. Яким чином цього можна досягти?
По-перше, потрібно підібрати донора найбільш сумісного з реціпієнтом за антигенним набором. Основним методом селекції донора є типування антигенів HLA. Алелі, що кодують антигени гістосумісності першого класу трьох локусів HLA-А, HLA-B, HLA-C визначають ся в реакціях комплементзалежного лімфоцитолі зису, а антигени другого класу виявляються в реакції бласттрансформації в культурі змішаних лімфоцитів.
Оскільки в клініці допускаються пересадки і при несумісності за одним - двома антигенами системи HLA, то підбір донора в багатьох випадках не виключає повністю розвитку реакції відторгнення. Для пригнічення реакції відторгнення при пересадці органів і тканин використовують різноманітні способи впливу на імунну систему (іонізуюче випромінювання, імунодепресанти, кортикостероїди, антиметаболіти, антилімфоцитарну сироватку, циклоспорин А). Для інактивації імунокомпетентних клітин останнім часом використовують моноклональні антитіла, які кон'юговані з клітинними отрутами (з дифтерійним гістотоксином).
Імунодепресанти (імуносупресивні препарати, імуносупресори) - це клас лікарських препаратів, що застосовуються для забезпечення штучної імуносупресії (штучного пригнічення імунітету).
Застосування
Штучна імуносупресія як метод лікування застосовується насамперед при трансплантації органів і тканин, таких, як нирки, серце, печінка, легкі, кістковий мозок.
Крім того, штучна імуносупресія (але менш глибока) застосовується при лікуванні аутоімунних захворювань і захворювань, імовірно (але поки недоведеною) мають або можуть мати аутоіммунну природу.
Види препаратів
Клас імуносупресивних препаратів неоднорідний і містить препарати з різними механізмами дії і різним профілем побічних ефектів. Різниться і профіль імуносупресивної ефекту: деякі препарати більш-менш рівномірно пригнічують всі види імунітету, інші мають особливу вибірковість по відношенню до трансплантаційного імунітету і аутоімунітету, при порівняно меншому вплив на антибактеріальний, противірусний і протипухлинний імунітет. Прикладами таких, щодо селективних, імуносупресорів є тімодепрессін, циклоспорин А і такролімус. Розрізняються імуносупресивні препарати і по переважного впливу на клітинний або гуморальний імунітет.
Варто зазначити, що сама успішна аллотрансплантация органів і тканин, різке зниження відсотка відторгнення трансплантатів і тривала виживаність хворих з трансплантатами стали можливими тільки після відкриття і впровадження в широку практику трансплантології циклоспорину А. До його появи не існувало задовільних методів імуносупресії, які давали можливість забезпечити необхідний ступінь придушення трансплантаційного імунітету без важких, загрозливих для життя хворого побічних ефектів і глибокого зниження протиінфекційного імунітету.
Наступним етапом розвитку теорії та практики імуносупресивної терапії в трансплантології стало впровадження протоколів комбінованою - трьох-або чотирьохкомпонентної імуносупресії при пересадці органів. Стандартна трикомпонентна імуносупресія на сьогоднішній день складається з комбінації циклоспорину А, глюкокортикоїду і цитостатика ( метотрексату або азатіоприну, або мікофенолат мофетилу). У хворих з високим ризиком відторгнення трансплантата (висока ступінь негомологичностью трансплантата, попередні невдалі трансплантації та ін) зазвичай застосовують чотирьохкомпонентної імуносупресію, що включає також анти-лімфоцитарний або анти-тімоцітарний глобулін. Хворим, не переносять один або більше компонентів стандартної схеми імуносупресії або схильним високому ризику інфекційних ускладнень або злоякісних пухлин, призначають двокомпонентну імуносупресію або, рідше, монотерапію.
Новий прорив в трансплантології пов'язаний з появою нового цитостатика флударабіну фосфату (Флудара), що володіє сильною селективної цитостатичної активністю щодо лімфоцитів, і c розробкою методу короткочасної (кілька діб) високодозової пульс-терапії глюкокортикоїдами з використанням метилпреднізолону в дозах, в 100 разів перевищують фізіологічні. Одночасне застосування флударабіну фосфату і надвисоких доз метилпреднізолону дозволило в лічені дні і навіть години купірувати гостро виникають на фоні стандартної імуносупресивної терапії реакції відторгнення трансплантатів, що було дуже важкою справою до появи Флудара і високодозової глюкокортикоїдів.
62. Анафілактичний тип алергії: алергени, періоди і механізм розвитку, клінічні прояви, профілактика.
Алергія (від грецьк. Allos - інший) - специфічна підвищена чутливість до антигенів (алергенів) в результаті неадекватної реакції імунної системи. Алергія може проявлятися по типу гіперчутливості негайного типу і гіперчутливості уповільненого типу. - Гіперчутливість негайного типу (ГНТ) - гіперчутливість, обумовлена антитілами (IgE, IgG, IgM) проти алергенів. До ГНТ відносяться I, II і III типи алергічних реакцій (по Джеллі і Кумбсу).
I тип - анафілактичний. При первинному контакті з антигеном утворюються IgE, які прикріплюються Fc-фрагментом до огрядних клітин і базофілів. Повторно введений антиген перехресно зв'язується з IgE на клітинах, викликаючи їх дегрануляцію, вивільняючи гістамін та інші медіатори алергії. З гранул в тканини викидаються біологічно активні медіатори: вазоактивні аміни (гістамін), протеоглікани (гепарин), продукти ліпідного обміну (лейкотрієни, простагландини і фактор, що активує тромбоцити), ферменти (триптаза, хімази, карбоксипептидаза, катепсин G) і цитокіни (IL- 3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, GM-CSF, TNF-cc). Хемотаксичні фактори привертають нейтрофіли, еозинофіли і макрофаги. Так, еозонінофільні хемотаксичні фактори залучають еозинофіли, які виділяють ферменти, катіонні білки, лейкотрієни і основний білок, що ушкоджує епітелій. Тромбоцити теж виділяють медіатори алергії. Перераховані компоненти викликають скорочення гладких м'язів, ослаблення серцевої діяльності, розвиток колапсу, підвищення судинної проникності, набряк, свербіж і т. д.
Клінічні прояви гіперчутливості I типу можуть протікати на фоні атопії. Атопія - спадкова схильність до розвитку ГНТ, обумовлена підвищеним виробленням IgE-антитіл до алергену, підвищеною кількістю Fc-рецепторів для цих антитіл на огрядних клітках, особливостями розподілу тучних клітин і підвищеною проникністю тканинних бар'єрів.
Анафілактичний шок - протікає гостро з розвитком колапсу, набряків, спазму гладкої мускулатури; часто закінчується смертю. Кропив'янка - збільшується проникність судин, шкіра червоніє, з'являються пухирі, свербіння.
Ангіоедема - набряк підшкірних і субмукозних тканин; часто поєднується з кропив'янкою. Алергічний риніт або ринокон'юнктивіт - розвивається набряк, подразгюється слизова оболонка. Поліноз (сінна лихоманка) - алергія до пилку рослин, що виявляється в вазомоторних проявах слизових оболонок (ринітах, кон'юнктивітах) та бронхоспазмі.
Бронхіальна астма - розвивається запалення, бронхоспазм, посилюється секреція слизу в бронхах. Харчова алергія - характерна нудота, діарея, свербіж, висипання, анафілаксія.
Лабораторна діагностика. Визначення в крові хворого: загальних IgE-та IgG-антитіл до передбачуваних алергенів; рівня гістаміну, триптази, інтерлейкінів (ІЛ-5, ІЛ-4). У хворих на поліноз при загостренні в мазках із носа зростає кількість еозинофілія від 10% до 100% (норма - не більше 2%). Можлива еозинофілія в крові. Шкірні тести з атопічними алергенами: пилковими, побутовими, харчовими, епідермальними та ін. Провокаційні назальні, інгаляційні та інші тести.
Принципи діагностики алергічних захворювань – визначення реагінів в сироватці крові in vitro визначення сенсибілізації до певних алергенів in vivo (шкірно-алергічні проби). Принципи лікування, алергічних захворювань: Звільнення організму від контакту з алергеном. Імуносупресивна терапія: пригнічення, гуморального або клітинного ланцюга патогенезу алергії. Блокада медіаторів імунних реакцій антигістамінними препаратами. Протизапальні препарати (кортикостероїди та ін.). Специфічна імунотерапія: імунізація специфічним алергеном з метою синтезу захисних IgG, які конкурують з IgE.
Клінічні прояви - Розвивається через кілька хвилин або годин після дії алергену: розширюються судини, підвищується їх проникність, розвиваються свербіж, бронхоспазм, висипання, набряки. Пізня фаза ГНТ доповнюється дією продуктів еозинофілів і нейтрофілів
Профілактика анафілактичного шоку: перед введенням усіх сироваткових препаратів обов’язково визначається чутливість організму до сироватки, що вводиться. Лікувальна доза сироватки вводиться дробно за Безредко з метою запобігання розвитку анафілактичного шоку. Для цього вводять кінську сироватку, розведену 1:100 внутрішньошкірно в згинальну поверхню передпліччя в об'ємі 0,1 мл. Якщо через 20 хвилин набряк або почервоніння в місці введення не досягають у діаметрі 1,0 см, проба вважається негативною. При від'ємній шкірній пробі нерозведену сироватку вводять підшкірно в об'ємі 0,1 мл. При відсутності реакції через 30 хв. вводять стерильним шприцом решту дози сироватки. Особам з позитивною реакцією на внутрішньошкірне введення 0,1 мл розведеної в 100 разів кінської сироватки або тим, що мали реакцію на підшкірне введення 0,1 мл сироватки, подальше введення препарату протипоказане. (НАКАЗ МОЗ від 5 серпня 1999 року N 198).
63. Цитотоксичний і імунокомплексний типи алергічних реакцій: алергени, механізм розвитку, клінічні прояви.
Алергія – імунологічна реакція організму на дію антигену або напівантигену (гаптену), яка супроводжується пошкодженням власних тканин. Якщо пошкодження викликає такі зміни в організмі, які характерні для хвороби, тоді виникають алергічні хвороби. Алергічні хвороби – група захворювань, в основі розвитку яких лежить пошкодження, що викликається імунною реакцією на алергени.
Цитотоксичний тип алергічної реакції протікаэ за участю імуноглобулінів класів G і М, а також при активації системи комплементу, що веде до пошкодження клітинної мембрани. Цей тип алергічної реакції спостерігається при лікарській алергії з розвитком лейкопенії, тромбоцитопенії, гемолітичної анемії, а також при гемолізі під час гемотрансфузій, гемолітичній хворобі новонароджених при резус-конфлікті.
Імунокомплексна реакція - реакція гіперчутливості, обумовлена утворенням преципитирующих комплексів антиген-антитіло в невеликому надлишку антигенів. Комплекси відкладаються на стінках судин, активують систему комплементу і викликають запальні процеси (наприклад, сироваткова хвороба, нефрит іммунокомплексний).
65. Практичне використання серологічних реакцій, компоненти, механізми, цілі. Приклади.
Фази ходу серологічних реакцій:
1. Специфічна (між антитілом і антигеном).
2. Неспецифічна, яка зумовлює зовнішній прояв реакції
Практичне використання серологічних реакцій:
1. Діагностика інфекційних захворювань:
- серологічна (визначення антитіл у сироватці крові обстеженого),
- бактеріологічна, або вірусологічна (визначення антигенних властивостей збудника, виділеного від хворого або носія).
2. Оцінка рівня поствакцинального імунітету.
3. Оцінка імунного статусу (стану імунної
системи)
Приклади:
66. РНГА: компоненти, механізми, ціль застосування.
Реакція непрямої гемаглютинації (РНГА) - використовується для виявлення антитіл в сироватці крові хворого з допомогою антигенного еритроциторного діагностикуму, який є еритроцитами з адсорбованими на них антигенами. Вони взаємодіють з відповідними антитілами сироватки крові, що викликає склеювання та випадіння еритроцитів на дно пробірки або ячейки у вигляді фестончатого осаду.
67. Реакція преципітації: компоненти, механізм, мета, практичне застосування. Приклади.
Реакція преципітації (РП) (механізм) характеризується взаємодією розчинного антигену (преципітиногену) і антитіла (преципітину) в присутності електроліту (0,85% розчин NaCl). При позитивній реакції відбувається агрегація антигену, що проявляється помутнінням прозорої рідини і випадінням осаду (преципітату). Осад комплексів антиген-антитіло із розчину відбувається в діапазоні еквівалентних співвідношень концентрацій взаємодіючих молекул. РП є більш чутливою в порівнянні з реакцією аглютинації та дозволяє виявити специфічний антиген у дуже малих концентраціях. Тому реакції преципітації використовуються головним чином з метою визначення антигену.
Різновиди РП:
РП в рідині відбувається при змішування розчинів антигену й антитіла або нашаруванні одного компонента на інший. В останньому варіанті на межі двох реагентів утворюється преципітат у вигляді кільця. Така реакція одержала назву реакції кільцепреципітації. Реакцію проводять у вузьких пробірках з 0,1 – 0,5 мл реагентів.
Для визначення антигенів використовуються реакцію преципітації або дифузії в гелях агару або агарози. Суть реакції полягає в тому, що антиген і антитіло дифундують в порах гелю на зустріч один одному, взаємодіють між собою і утворюють комплекс, який осаджується у вигляді лінії преципітації.
Діагностичну преципітуючу сироватку готують шляхом імунізації кролів розчином антигену по спеціальній схемі. Одержану імунну сироватку титрують в реакції преципітації. Титром сироватки є найбільше розведення антигену, де ще утворюється преципітат.
Практичне використання РП: для діагностики ряду інфекційних захворювань – сибірки, чуми, туляремії, епідемічного цереброспінального менінгіту та інші. В якості антигенів використовують екстракти уражених органів, ліквор і інше, а в якості антитіл (преципітинів) – діагностичні преципітуючі сироватки.
РП використовується також для визначення класів імуноглобулінів та для вивчення антигенної структури бактерій. Крім того, для визначення видової приналежності білків, зокрема білків крові в судовій практиці.
68. ІФА: компоненти, механізми, мета практичного застосування.
Імуноферментний аналіз (ІФА) оснований на виявленні антигенів за допомогою специфічних антитіл кон’югованих (з’єднаних) з ферментом-міткою (пероксидазою хрону або лужною фосфатазою). Після з’єднання антигена з міченою сироваткою в суміш додається субстрат (хромоген), наприклад Н2О2. Субстрат розщеплюється ферментом, а продукти його деградації викликають хімічну модифікацію хромогену, що викликає зміну забарвлення реагуючої суміші. Інтенсивність забарвлення прямо пропорційна концентрації антигена або антитіл, які прийняли участь в реакції, тобто прореагували.
Твердофазний ІФА-найбільш поширений варіант даного методу, коли один із компонентів імунної реакції (антиген або антитіла) сорбований на твердому носії, наприклад, в лунках планшету із полістеролу.
При визначенні антитіл в лунки планшету з сорбованим антигеном послідовно додається сироватка крові хворого, антиглобулінова сироватка, мічена ферментом і субстрат (хромоген) для фермента. Кожний раз після додавання наступного компоненту незв’язані реагенти видаляються із лунок шляхом ретельного промивання. При позитивному результаті змінюється колір хромогену. На твердофазному носії можно фіксувати не тільки антиген, а й антитіла. В цьому випадку в лунки з сорбованими антитілами додається досліджуваний антиген, імунна сироватка, мічена ферментом, а потім хромоген.
69. РЗК: компоненти, механізм, цілі застосування, приклади. Комплемент, гемолітична сироватка: одержання, практичне застосування, титрування.
Реакція зв’язування комплементу (РЗК) - є п’ятикомпонентною реакцією, яка ґрунтується на використанні двох систем “антиген-антитіло”, що конкурують між собою за можливість зв’язати комплемент. Перша система – дослідна - містить антиген і антитіло. Один із цих реагентів є відомим, а інший - компонентом, що досліджується. Друга, або гемолітична, система складається з еритроцитів барана та гемолітичної системи. При відповідності один одному антигенів та антитіл вони утворюють імунний комплекс, до якого через Fc-фрагмент антитіл приєднується комплемент (С), тобто відбувається зв’язування комплементу комплексом антиген-антитіло. Якщо комплекс антиген—антитіло не утворюється, то комплемент залишається вільним.
РЗК проводять у дві фази:
1-а фаза — інкубація суміші антиген + антитіло + комплемент;
2-а фаза (індикаторна) — виявлення в суміші вільного комплементу шляхом додавання до неї гемолітичної системи.
При утворенні комплекса антиген—антитіло в 1-й фазі відбувається зв’язування комплементу, і тоді в 2-й фазі гемоліз сенсибілізованих антитілами еритроцитів не відбудеться (реакція позитивна). Якщо антиген та антитіло не відповідають один одному (в досліджуваному зразку відсутні антиген або антитіло), комплемент залишається вільним та в 2-й фазі приєднується до гемолітичної системи, викликаючи гемоліз еритроцитів.
Реакцію проводять у 3 пробірках. Відтитровані інгредієнти (антиген, комплемент, гемолітична сироватка) розводять фізіологічним розчином таким чином, щоб робоча доза їх містилася в 0,5 мл. Одночасно готують 3% суспензію овечих еритроцитів. У допоміжних пробірках розводять інактивовану прогріванням (56 °С – 30 хвилин) досліджувану сироватку. При постановці реакції спочатку змішують досліджувану сироватку, антиген і комплемент. Суміш витримують при температурі 37 °С упродовж 40 хвилин. Після зазначеного терміну в пробірку додають гемолітичну систему (2 мл гемолітичної сироватки + 2 мл 3% суспензії еритроцитів). Пробірки знову струшують та ставлять у термостат при 37 °С. Облік результатів реакції проводять після того, як відбудеться повний гемоліз у пробірках із контролем сироватки і контролем антигену.
Результати реакції визначають за наявністю чи відсутністю гемолізу у дослідній пробірці. Реакцію вважають позитивною при повній затримці гемолізу, коли рідина в пробірці безкольорова і еритроцити осідають на дно, а негативною – при повному лізисі еритроцитів, коли рідина інтенсивно забарвлена («лакова кров»). Ступінь затримки гемолізу оцінюють залежно від інтенсивності забарвлення рідини і розміру осаду еритроцитів на дні ( ++++, +++, ++, +).
РЗК належить до непрямих двосистемних реакцій, яка використовується для серологічної діагностики (визначення в крові специфічних комплементзв’язуючих антитіл) за допомогою відомого антигену або визначення антигенів за допомогою відомих антитіл.
Якщо в досліджуваній сироватці є специфічні до даного антигену антитіла, то утворюється комплекс антиген+антитіло, який приєднує до себе комплемент. Але цей процес є непомітним візуально. Для того щоб визначити, в якому стані знаходиться доданий комплемент (зв’язаний чи незв’язаний), додається друга система, яка називається індикаторною. Гемолітична система готується перед постановкою реакції і складається з гемолітичної сироватки, яка містить антитіла проти овечих еритроцитів (гемолізини) та еритроцити барана (ЕБ). Імунна реакція гемолізу в цій системі відбувається за наявності незв’язаного в першій системі комплементу.
Як комплемент у РЗК використовується сироватка морської (гвінейської) свинки. Усі компоненти РЗК, за винятком досліджуваної сироватки, попередньо титруються і використовуються в робочій дозі.
У тому випадку, коли в досліджуваній сироватці є специфічні антитіла, утворюється комплекс антиген+антитіло, який через Fc-фрагмент антитіл зв’язує комплемент, але це візуально не помітно. Тому додається до цієї суміші гемолітична система, і якщо комплемент зв’язаний у першій системі, то гемоліз у другій системі не відбувається, реакція позитивна – ЕБ знаходяться в осаді. У тому випадку, коли в досліджуваній сироватці антитіла відсутні, комплемент залишається в першій системі незв’язаним, вільним, і коли додається друга (гемолітична) система, відбувається гемоліз еритроцитів, що свідчить про те, що РЗК негативна. РЗК використовується для діагностики сифілісу, туберкульозу, бруцельозу, кандидозу, грипу та інших захворювань.
70. Реакція імунофлуоресценції (РІФ): різновиди, компоненти,
механізм, цілі застосування.
Реакція імунофлюоресценції (РІФ) - полягає в тому, що при зв’язуванні відомих мічених флуорохромом специфічних реагентів з досліджуваними реагентами під час дослідження у люмінісцентному мікроскопі спостерігається світіння об’єктів, покритих молекулами міченого реагенту. Виділяють прямий та непрямий метод. Пряма РІФ заснована на тому, що мікроби або антигени тканин, до яких додані імунні сироватки зі специфічними антитілами, міченими флуорохромами, починають світитися зеленим світлом в УФ-променях люмінісцентного мікроскопа. Бактерії в препараті на склі обробленому такою сироваткою, світяться по переферії клітини у вигляді облямівки зеленого кольору.
Непряма РІФ заснована на виявленні комплекса антиген-антитіло за допомогою антиглобулінової сироватки, міченої флуорохромом.
Спочатку на мазок з фіксованими на склі мікроорганізмами наноситься антимікробна кроляча діагностична сироватка, яка містить немічені специфічні антитіла, щоб відбулась реакція антиген-антитіло. Такі препарати необхідно помістити в вологу камеру на 40 хвилин. Антитіла, які не зв’язались з антигенами мікроорганізмів відмиваються водою. На препарат наноситься антиглобулінова (антикроляча) сироватка мічена флуорохромом. Знову препарат поміщається в вологу камеру, потім промивається водою і проводиться мікроскопія в люмінісцентному мікроскопі, як і при прямому методі РІФ. Якщо в досліджуваному препараті знаходяться збудники (мікроорганізми) які є специфічними до доданих немічених антитіл, то відбувається реакція антиген-антитіло (антитіла сорбуються на поверхні фіксованих мікроорганізмів). Утворений комплекс виявляється за допомогою мічених флуорохромом антикролячих антитіл, які сорбуються на повехні першого комплексу антиген-антитіло. Комплекс антиген-антитіло-антиглобулін, що утворився, легко виявляється у люмінісцентному мікроскопі.
Реакція імунофлуресценції широко використовуються в медичній прктиці особливо для прискореної, експрес-діагностики інфекційних захворювань.
71. Реакція флокуляції: компоненти, механізм, цілі застосування.
Для визначення активності імунних антитоксичних сироваток і анатоксинів використовується реакція флокуляції, яка характеризується помутнінням у пробірці з сумішшю анатоксину (токсину) й антитоксину.
Для постановки реакції флокуляції (табл. 5) змішують сироватку (в даній демонстрації це антитоксична протидифтерійна сироватка) з антигеном (в даній демонстрації це протидифтерійний токсин). Після змішування компонентів пробірку зтрушують та витримують у термостаті 2 години, після чого залишають на 18 – 20 годин при кімнатній температурі. При позитивній реакції на дно пробірки випадає преципітат. Реакцію враховують неозброєним оком або за допомогою лупи.
72. Реакція нейтралізації: компоненти, механізм, цілі застосування.
73. Реакції аглютинації: механізм, різновиди, компоненти, мета практичного використання.
Реакция агглютинации (от лат. oggiutinatio — склеивание) — склеивание корпускул (бактерий, эритроцитов и др.) антителами в присутствии электролитов. Реакция агглютинации проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например, бактерий), «склеенных» антителами. Реакцию агглютинации используют для: определения возбудителя, выделенного от больного; определения антител в сыворотке крови больного; определения групп крови.
Для определение антигенных свойств возбудителя, выделенного от больного используется ориентировочная реакция агглютинации на стекле. К капле агглютинирующей сыворотки (разведение 1:20) добавляют взвесь бактерий, выделенных от больного. Образуется хлопьевидный осадок.
Развернутая реакция агглютинации с возбудителем, выделенным от больного. К разведениям агглютинирующей сыворотки добавляют взвесь бактерий, выделенных от больного.
Определение антител в сыворотке крови больного проводится с использованием развернутой реакции агглютинации с сывороткой крови больного. К разведениям сыворотки больного добавляют диагностикум. Агглютинация с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие Q-антиген) происходит в виде мелкозернистой агглютинации. Агглютинация с Н-диогностикумом (бактерии, убитые формалином, сохранившие жгутиковый Н-антиген) крупнохлопчатая и протекает быстрее.
В РНГА выявляют антитела сыворотки крови больного с помощью антигенного зритроциторного диагностиками, который представляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами. Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде «пуговки». РПГА ставят в пластиковых планшетках или в пробирках с разведениями сыворотки крови больного, к которым добавляют эритроцитарный диагностикум. Иногда применяют антительный эритроцитарный диагностикум — эритроциты, на которых адсорбированы антитела, Например, можно обнаружить ботулинический токсин, добавляя к нему эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум (такую реакцию называют реакцией обратной непрямой гемагглютинации — РОНГА).
74. Імунний статус: визначення, принципи та методи дослідження.
76. Методи і цілі дослідження гуморальної ланки імунітету.
Основні ланки імунітету , стан яких оцінює лікар:
• гуморальну ланку (В-лімфоцити та імуноглобуліни). Гуморальний тип імунологічної реакції заснований на виробленні антитіл - складних за будовою білкових молекул, які ми називаємо імуноглобулінами.
Етапи імунологічної діагностики :
• перший. Виявляють узагальнені характеристики або "грубі" дефекти в системі імунітету. Проводять ці дослідження за допомогою найбільш простих, так званих орієнтовних, методів. Іноді їх називають імунологічними тестами першого рівня. Зазвичай по цим методам визначають 20 показників, серед яких кількість лейкоцитів, лімфоцитів, різних підгруп Т-лімфоцитів, рівні імуноглобулінів А, М, G, концентрація циркулюючих імунних комплексів та ін
• другий. Більш ретельний аналіз стану імунітету проводять на другому етапі обстеження, якщо були виявлені відхилення в орієнтовних тестах. Імунологічні тести другого рівня дозволяють виявити зміни у змісті складних речовин, які беруть участь у регуляції імунної відповіді (наприклад, інтерлейкін ), а також кількість клітин, які мають певний вид імуноглобулінів
Найчастіше при імунологічному дослідженні визначають вміст імуноглобулінів класів А, М, G , за спеціальними показаннями - імуноглобуліну Е.
Мета : оцінити стан гуморальної ланки імунітету, виявити імудодифіцитний стан, визначити кількісні показники гуморального імунітету.
Для дослідження використовують кров пацієнта. Дослідження проводять за допомогою серологічних методів діагностики, найчастіше – це постановка серологічних реакцій.
78. Діагностичні імунні сироватки: одержання, титрування, практичне застосування, механізм. Приклади.
Діагностичні препарати
При проведенні діагностики інфекційних захворювань широко використовуються імунологічні методи дослідження, які дозволяють з допомогою серологічних реакцій підтвердити клінічний діагноз, а також вид збудника.
Використання цих методів можливо тільки при наявності високоякісних препаратів до яких відносяться антигени, діагностикуми, алергени, діагностичні сироватки та імуноглобуліни.
Проведення серологічних реакцій грунтується на специфічності вказаних препаратів. Тобто за допомогою відомого антигена в сироватці крові виявляються відповідні, специфічні до нього антитіла і навпаки, за допомогою відомих антитіл (діагностичні сироватки) виявляються відповідні (специфічні) антигени.
Діагностичні сироватки
антитіла мають сецифічність, тобто здатність вступати в реакцію та утворювати комплекс тільки з тими антигенами, під впливом яких вони синтезувалися в організмі.
Це дозволяє використовувати імунні сироватки, які містять відомі по специфічності антитіла, для визначення антигенів (мікроорганізмів) в серологічних реакціях.
Імунні сироватки, які використовуються для визначення виду інфекційного захворювання називаються діагностичними.
Методи серологічної ідентифікації мікроорганізмів основані на властивості антитіл, які містяться в діагностичних сироватках вибірково з'єднуватися з комплементарними антигенами мікроороганізмів.
Діагностичні сироватки одержують шляхом імунізації лабораторних тварин (кроликів) мікробними завісями, суспензіями вірусів, анатоксинами, окремими очищеними антигенами збудників. Імунізацію проводять по спеціальній схемі. Потім тварин обезкровлюють, сироватку відокремлюють від кров'яного згустка та визначають титр антитіл в серологічній реакції. Титр антитіл це найбільше розведення сироватки де ще відмічається позитивна реакція.
Діагностичні сироватки використовуються для:
1. Експрес-діагностики (індикації) збудника в матеріалі від хворих і в різних об’єктах зовнішнього середовища.
2. Ідентифікації збудника в чистій культурі – на заключному етапі бактеріологічного дослідження.
Для експрес-діагностики використовуються мічені (флуоресціюючі) сироватки, антитіла в яких з’єднані (кон’юговані) з флюорохромом, який дає світіння під впливом ультрафіолетового проміння. Досліджувальний матеріал фіксують на предметному склі, потім наносять мічену сироватку зі специфічними антитілами і через 30 – 40 хвилин обережно змивають водою, сушать і мікроскопіюють за допомогою люмінісцентного мікроскопа. Якщо утворився комплекс антитіл з антигеном (мікробом), то в полі зору видно мікроорганізми, які світяться, наприклад палички збудника.
Приклади флуоресціюючих (мічених) сироваток:
• флуоресціюючі протихолерні антитіла уявляють собою мічені флюорохромом гамаглобулінові фракції аглютинуючої О-сироватки;
• флуоресціюючі протичумні антитіла;
• суха флуоресціююча сироватка проти сибірки та ін.
Використовується також метод непрямої люмінісцентної мікроскопії, при якій на препарат на склі спочатку наносять звичайну (не флуоресціюючу) діагностичну сироватку. Потім змивають нанесену сироватку та наносять мічену антиглобулінову видову сироватку (до гамаглобулінів тварин, яка була використана для одержання діагностичної сироватки). Таким чином одержують комплекс, який складається із антигена, на якому сорбовані специфічні антитіла, які в свою чергу оточені флуоресціюючими антитілами, що світяться.
Для непрямої імунолюмінісцентної мікроскопії випускаються флуоресціюючі антивидові сироватки проти глобулінів-коней, кролика і деяких тварин. Флуоресціюючі сироватки випускаються в ампулах у вигляді ліофільно висушеного препарата.
З діагностичною метою у більшості випадків для виявлення специфічних антигенів використовуються преципітуючі сироватки. Реакція преципітації може бути поставлена в преципітаційних пробірках або в гелі. Прикладом класичного методу є реакція Асколі для виявлення сибіркового антигену (іноді чумного, туляремійного, менінгококового), а також визначення видової приналежності кров’яної плями в судово-медичній практиці.
Преципітація в гелі використовується для кількісного визначення імуноглобулінів різних класів (IgM, IgG, IgA) в крові та інших біологічних рідинах здорових або хворих людей з метою оцінки стану гуморального імунітету.
Для ідентифікації збудників у чистій культурі – на заключному етапі бактеріологічного дослідження використовуються в більшості випадків аглютинуючі сироватки. Приклади таких сироваток:
• аглютинуючі адсорбовані сальмонельозні О- і Н-сироватки;
• аглютинуючі ОК-сироватки проти ентеропатогенних типів кишкових паличок;
• аглютинуючі холерні О, ОН, Огава, Інаба-сироватки.
Приклад опису аглютинуючої адсорбованої сальмонельозної О-сироватки – антитільний препарат, який використовується з діагностичною метою в реакції аглютинації на склі для вивчення антигенної структури сальмонел. Сироватка отримана шляхом гіперімунізації кролів О-антигеном.
Титр антитіл - це найбільше розведення сироватки де ще відмічається позитивна реакція.
79. Імунотерапія інфекційних захворювань за допомогою сироваток, імуноглобулінів і вакцин. Принципи, механізми. Приклади.
При інфекційних захворюваннях вакцини відповідних збудників призначаються у періоді ремісії з метою формування повноцінного імунітету, для запобігання рецидиву хвороби або при затяжному, хронічному перебігу з невираженими симптомами. Протягом застосування вакцини протипоказане використання глюкокортикоїдів, цитостатиків, препаратів, що пригнічують імунітет. І навпаки, доцільно призначати засоби, що прискорюють метаболізм в імунокомпетентних клітинах - метилурацил, нуклеїнат натрію, пентоксил, вітаміни.
Можливість створення протипухлинних вакцин грунтується на тому, що неопластичні клітини мають певні притаманні лише їмантигени. Складність полягає в тому, що від пухлини до пухлини ці антигени різні і навіть в одному пухлинному конгломераті різні клони пухлинних клітин будуть відрізнятись за антигенним складом. Тому цей напрямок поки майже не виходить за межі лабораторних досліджень. Як виняток, поширення у світі набула вакцинація жінок від папіломавірусу людини, який доведено викликає рак шийки матки. Однак ефективність таких вакцин є не дуже високою через складність охопити всі штами вірусу, що циркулюють в природі.
У лікуванні алергічних захворювань дуже добрі результати показали алергенні вакцини. Алергенспецифічна імунотерапіяполягає у введенні відповідного алергенного препарату (вакцини) особам, чутливим до нього, за спеціальною схемою, у кількостях, що поступово зростають, досягаючи дози, яка буде ефективною для поліпшення симптомів, пов'язаних із наступним контактом з причинним алергеном.
До методів пасивної Імунотерапії відноситься серотерапія - введення лікувально -профілактичних імунних сироваток або виділених з них імуноглобулінів (або гамма- глобулінів) . Лікувальні імунні сироватки мають видовий специфічністю , тому їх повторне введення людині може викликати анафілактичний шок , а одноразове введення у великій дозі - сироваткову хворобу . У зв'язку з цим чужорідні імунні сироватки , не позбавлені видової специфічності , слід використовувати переважно в лабораторних цілях. Навпаки , людські імунні сироватки , одержувані від реконвалесцентів або спеціально імунізованих донорів , і особливо виділені з них імуноглобуліни можна застосовувати широко .
Імуноглобуліни - сукупність білків , кожен з яких складається з легких і важких ланцюгів , зазвичай з'єднаних дисульфідними зв'язками . Їх поділяють на класи і підкласи залежно від амінокислотної послідовності важких ланцюгів . У людини і ссавців розрізняють 5 класів імуноглобулінів ( lgM , lgG , lgA , lgD , lgE ) . Всі антитіла є імуноглобулінами , хоча не всі іммуноглобуліновие молекули володіють функцією антитіл. Протективні (захисні ) властивості найяскравіше виражені у lgG . Лікувальний препарат імуноглобуліну являє собою очищений мономерний lgG . Найбільш добре очищені препарати lgG можуть випускатися у формі, придатній для внутрішньовенного введення. Лікувальний препарат « Імуноглобулін нормальний людський для внутрішньом'язового введення » виготовляють із суміші більше 1000 сироваток , завдяки чому він містить широкий спектр антитіл різноманітної специфічності , що відображає стан колективного імунітету контингенту донорів.
Імуноглобуліни спрямованої дії ( антистафілококовий , антірезусний і т.д.) отримують з сироваток з підвищеним титром відповідних антитіл (наприклад , з крові реконвалесцентів ) , у зв'язку з чим їх називають також гіперімунні імуноглобулінами .
81. Імуноглобуліни: визначення, приготування, мета використання.
Імуноглабуліни використовуються для специфічної профілактики інфекційних захворювань, збудники яких продукують екзотоксин (дифтерії, правця, ботулізму, газової гангрени), а також при укусі гадюк. При цьому створюється пасивний імунітет.
Імуноглобуліни готують шляхом гіперімунізації коней відповідними анатоксинами. Гіперімунізацію проводять шляхом багаторазового введення анатоксину за певними схемами. За титр сироватки беруть кількість антитоксичних одиниць, що містяться в 1 мл. Титрування антитоксичної сироватки проводиться на лабораторних тваринах або в реакції флокуляції in vitro. Якщо титрування проводиться на тваринах, то за 1 антитоксичну одиницю (АО) беруть мінімальний об’єм сироватки в мілілітрах, який нейтралізує певну кількість DLM відповідного токсину. Наприклад, за 1 АО протидифтерійної сироватки беруть мінімальний її об’єм, який нейтралізує – 100 DLM дифтерійного токсину, для морських свинок вагою 250 грамів.
Якщо титрування проводиться в реакції флокуляції, то за 1 АО антитоксичної сироватки беруть її мінімальний об’єм у мілілітрах, який при взаємодії з однією імуногенною (антигенною) одиницею відповідного анатоксину зумовлює (викликає) ініціальну (початкову) флокуляцію.
При досить високому титрі антитіл роблять часткове кровопускання і після згортання крові відділяють сироватку. Отримані антитоксичні сироватки фільтруються через бактеріальні фільтри та підлягають очищенню, концентрації (видаленню із сироватки альбумінів і еуглобулінів із подальшою концентрацією імуноглобулінів). У ряді випадків роблять обробку сироватки сульфатом амонію та протеолітичними ферментами (пепсином). При застосуванні ферментації титр зростає в 5–10 разів, а анафілоктогенні властивості препарату зменшуються. Всі антитільні препарати підлягають контролю. Сироватки повинні містити певний титр антитіл, бути стерильними і непірогенними.
Удосконалення сироваткових препаратів завершується одержанням імунних гамма-глобулінів, які відрізняються від очищених сироваток тим, що в них зведено до мінімуму вміст інших білків.
Гомологічний гамма-глобулін готують із сироватки людей-добровольців, імунізованих проти різних вірусних або бактеріальних інфекцій, або із сироваток крові реконвалісцентів. Гама-глобуліни застосовуються для лікування і профілактики кашлюку, правця, грипу, кору. Для очищення та концентрації імуноглобулінів використовують різні методи: висолювання сульфатом амонію; спиртове осадження за Коні; препаративний електрофорез; ультрафільтрацію через молекулярні сита; іонообмінну хроматографію та інші.
Імуноглобулін із сироватки людей являє собою гомогенний препарат, що рідко викликає у людей алергічні реакції. Гомологічні антитіла швидше надходять у кров і довше в ній зберігаються.