Энтеровирусные инфекции Лабораторная диагностика гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызываемых вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами

Работа добавлена на сайт samzan.net:

Стоматологический факультет

Занятие № 2.1.4

Энтеровирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызываемых вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить основные группы энтеровирусов; биологические свойства возбудителей гепатитов А, Е, полиомиелита, вирусов Коксаки, ECHO, ротавирусов; принципы вирусологической диагностики энтеровирусных инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

Характеристику биологических свойств возбудителей.
Клинику, патогенез, эпидемиологию, восприимчивость, иммунитет, механизм передачи возбудителей при энтеровирусных инфекциях.
Принципы лабораторной диагностики гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.
Основы профилактики гепатитов А, Е, полиомиелита,

инфекций вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

Препараты для диагностики, лечения и профилактики энтеровирусных

инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

составлять алгоритм вирусологического обследования пациента с
энтеровирусной инфекцией;
интерпретировать результаты вирусологических исследований с целью
диагностики энтеровирусных инфекций;
классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей вирусных кишечных инфекций.

Работа № 1. Принципиальная лабораторная диагностика энтеровирусных инфекции

См. теоретическую справку

Исследуемый материал:

____________________

Работа № 2. Вирусологическая диагностика энтеровирусов

Методические указания

Идентификацию вирусов проводят в различных серологических реакциях, используя известные специфические антитела. Например, вирусы полиомиелита можно дифференцировать от вирусов Коксаки А и В, ECHO в РСК, используя антитела к общему антигену (VP-4) для всех типов вирусов полиомиелита.

В реакции использована диагностическая сыворотка, содержащая антитела к общему (внутреннему) антигену вируса полиомиелита VP-4 и исследуемый вируссодержащий материал.

Тип вируса полиомиелита определяют в реакции нейтрализации по цветной пробе, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, VP-2 и VP-3).

Самостоятельная работа

А) Цель: учестьрезультат РСК, поставленной с целью идентификации вируса полиомиелита, выделенного от больного с подозрением на полиомиелит.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Опыт КС КД КГС

Результат:_____________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Б) Определить тип вируса полиомиелита в реакции нейтрализации по результату постановки цветной пробы, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, УР-2 и VP-3). Учесть результат реакции. Сделать вывод.

Методические указания

Цветная проба для обнаружения вируса полиомиелита в культуре тканиприменяется наряду с изучением цитопатического эффекта, вызываемого вирусом в культуре тканей. В пробирки с культурами тканей и питательной средой вносят исследуемый материал и индикатор феноловый красный, пробирки ставят в термостат. В этом случае, если вирус не размножается в культуре ткани, кислые продукты метаболизма клеток поступают в среду, которая приобретает желтую окраску. Если же полиовирусы размножаются в клетках тканей и пораженные клетки гибнут, то среда сохраняет первоначальный красный цвет, так как в неё не поступают кислые продукты метаболизма клеток и не изменяют её окраску. При рН 7,4-7,8 цвет среды красный, при рН 7,2 — оранжевый, при рН 7,0 и ниже — жёлтый. Таким образом, по изменению цвета среды с культурой тканей, куда внесён исследуемый материал и индикатор, можно судить о поражении клеток вирусами.

Направление:___________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Диагностические сыворотки, содержащие антитела к поверхностным антигенам вируса полиомиелита

Контроль среды

Контроль культуры клеток

Контроль вируса

VP-1(тип1)

VP-2 (тип2)

VP-3 (типЗ)

Результат

реакции

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 3. Серологическая диагностика энтеровирусов

Учесть готовый результат РСК с парными сыворотками больного с целью выявления нарастания титра специфических антител против вируса Коксаки тип А.

Направление:___________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

титры 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 КД КС КГС

1-ая неделя

2-ая неделя

Результат:______________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 4. Ситуационная задача

Женщина, 25 лет на 3 неделе беременности поступила в клинику с жалобами на общую слабость, тошноту, отсутствие аппетит, ноющие боли в правом подреберье. Из анамнеза, больная приехала из Туркменистана.

Какой вирус гепатита мог вызвать инфекционный процесс у больной?

________________________________________________________________________

Перечислить признаки, характерные для данной инфекции.

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Составить план лабораторного обследования на гепатит, указать, какие реакции и с какой целью используются для диагностики заболевания.

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).

1. Диагностическая сыворотка полиомиелитная 1 типа

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

1. ECHO диагностическая сыворотка Тип 4

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

1. Вакцина полиомиелитная пероральная 1, 2, 3 типов из штаммов Сэбина

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5.____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

1. Коксаки В диагностическая сыворотка тип 5 2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

1.Вакцина «Имовакс Полио»

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

1.Вакцина «Аваксим»

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

1.Вакцина ротавирусная

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Заполнить контрольные карты по предложенным нозоформам:

ПОЛИОМИЕЛИТ

Таксономическое положениевозбудителя

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Структура вириона__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура_________________________________________________________________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Культивирование и репродукция

_____________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период______________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Назовите основные клинические формы полиомиелита:

____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия)____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)______________________________________________________________________________________________________________________________________________

ГЕПАТИТ А

Таксономическое положениевозбудителя

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Структура вириона__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и репродукция

_____________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период______________________________________________________________________

Основные клинические проявления в зависимости от возраста:

____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

ГЕПАТИТ Е

Таксономическое положениевозбудителя

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Структура вириона__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и репродукция

_____________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период______________________________________________________________________

Особенности течения гепатита Е:

____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Подпись преподавателя_________________________________________________________

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. В клинику поступил больной с предварительным диагнозом «Полиомиелит?». В процессе лечения его обследовали на 5-й и 30-й дни болезни для выявления специфических антител с помощью цветной пробы. Результаты исследования: на 5-й день - положительная цветная проба в разведении сыворотки 1/10, на 30-й— 1/80. Оценить диагностическую ценность полученного результата.

2. В диагностическое отделение инфекционной больницы поступило несколько детей в возрасте 10-12 лет из пригородного спортивного лагеря. По клиническим симптомам был поставлен предварительный диагноз «Гепатит А?». Какой исследуемый материал необходимо взять для лабораторного исследования? Какие методы необходимо использовать для диагностики заболевания?

Пример решения задачи

В диагностическое отделение инфекционной больницы поступили двое больных с желтухой. Возникло подозрение на гепатит А. В целях подтверждения диагноза в лабораторию отправлена сыворотка крови больных для проведения иммуноферментного анализа с использованием диагностикума вируса гепатита А. Оценить результат, записать протокол, сделать выводы.

Выделяется для учета результатов исследования полистироловый планшет с результатами ИФА.

Вопросы 1. Какую тест-систему взяли для исследования? 2. Зарисовать схему реакции (ИФА) в данном исследовании. 3. У кого из больных подтвержден диагноз гепатита А и почему?

Решение. Студент учитывает данные ему результаты исследований, заполняет протокол и делает выводы:

1. Для исследования взята тест-система для ИФА с адсорбированными на твердой фазе антигенами (HAV-АГ) вируса гепатита А,

где 1 - твердая фаза (дно лунки планшета); 2 - адсорбированный на твердой фазе АГ вируса (HAV-антиген); 3 - сыворотка крови больного; 4 - антиглобулиновая сыворотка, меченная ферментом пероксидазой; 5, 6 - субстрат к ферменту и индикатор на продукты расщепления субстрата.

3. При проведении лабораторного исследования подтвердился диагноз гепатита А у больного А., так как результат иммуноферментного анализа у него положительный, т. е. выявлены AT против HAV-антигена вируса.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ СПРАВКА

Эпидемиология энтеровирусных инфекций

Для энтеровирусных инфекций характерен фекально-оральный механизм передачи инфекции. Источником инфекции является больной человек, преимущественно дети, в основном, со стертыми субклиническими и безжелтушными формами болезни. Вирус выделяется с фекалиями в конце инкубационного и в течение преджелтушного периодов. С момента появления желтухи, заразность больного резко снижается. Заражение происходит через пищу, воду, предметы обихода, загрязненные фекалиями и содержащими вирус. Вирусы Коксаки и ECHO могут распространяться капельным путём. Мухи и тараканы, которые в естественных условиях соприкасаются с человеческими испражнениями, могут служить механическими переносчиками инфекции. Энтеровирусы регулярно обнаруживаются в сточных водах, даже прошедших очистку. Не исключен парентеральный механизм передачи инфекции. Заболевание регистрируется чаще в осенне-зимний период, преимущественно среди детей в организованных коллективах, с подъемами через 3-5 лет.

Гепатитом Е, в отличие от гепатита А, преимущественно поражаются люди в возрасте 15-29лет. Заболеваемость среди детей составляет около 30%. Инкубационный период составляет 10-60 дней. Гепатит Е часто протекает в виде хронической инфекции с высоким процентом летального исхода у беременных (до 20% и более). Вирусемия при этом гепатите сохраняется длительное время — до 6 мес. Для данной инфекции характерна эндемичность, заболевания возникают в районах с жарким климатом и недостаточным водоснабжением (Азия, Африка, Туркменистан и др.). При гепатите Е типичен взрывной характер эпидемий, связанных с определенными источниками водоснабжения.

Особенности лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций

Лабораторная диагностика проводится путем выделения вируса из организма больного, а также по нарастанию титра вирусспецифических антител. Вирусы выделяют из фекалий, крови, смывов носоглотки и другого материала, в зависимости от периода заболевания одновременно на первичных и перевиваемых культурах клеток, а также путем заражения мышей сосунков. Для идентификации вируса применяется реакция нейтрализации.

Выделение энтеровирусов из организма больного, особенно из фекальных масс, не является абсолютным основанием для постановки диагноза, учитывая распространение бессимптомного носительства. Поэтому необходима серологическая диагностика с использованием парных сывороток, взятых в первые дни и на 2-3 неделе после начала заболевания. В положительном случае отмечается нарастание титра Ат во второй сыворотке, не менее чем в 4 раза в реакциях нейтрализации, РСК, РТГА.

Исследуемый материал: испражнения, отделяемое носоглотки, СМЖ, кровь и др.

Лабораторная диагностика гепатитов А и Е

Испражнения, моча, кровь, биопсия

Маркеры гепатитов А и Е

Возбуди-тель

Маркеры

Диагностическое значение

Вирус HA

Антиген HAV Ag

анти-HAVIgM

анти-HAVIgG

Определяется в фекалиях уже через 10–20 дней после заражения и обычно сохраняется там короткое время (не более 1–2 недель).

Появляются в сыворотке в начале желтушного периода и сохраняются до 6 месяцев. Таким образом, выявление антител анти-НAV IgM указывает на острое заболевание вирусным гепатитом А.

Появляются в начальной стадии инфекции и сохраняются в крови всю жизнь.Обнаружение в крови антител анти-HAV IgG при отсутствии анти-HAV IgM указывает на перенесенный в прошлом вирусный гепатит А.

Вирус HE

антигеныВГЕ

анти-HEVIgM

анти-HEVIgG

Определяют методом иммуноэлектронной микроскопии, ПЦР, иммунофлюоресцирующих антител (МФА) в фекалиях больных

определяются с высокой частотой в сыворотках больных ГЕ в острой стадии заболевания и в период ранней реконвалесценции;

свидетельствуют о перенесенной в прошлом ГЕ - инфекции.

Ротавирусы

Лабораторная диагностика заболеваний, вызванных данным возбудителем, проводится путем выявления вируса в фекальных массах больных в первую неделю заболевания, с одной стороны, и регистрация нарастания титра специфических антител в парных сыворотках - с другой. Ротавирусы обнаруживаются в фекальных массах в 100% случаев в первые дни заболевания с помощью иммунной и электронной микроскопии. Вирусный антиген выявляют в фекалиях иммуноферментным и радиоиммунным методами, в реакциях иммунофлюоресценции, а также с помощью нуклеиновых зондов. Вирусы могут быть выделены в культурах клеток в первые дни болезни. Серологическую диагностику проводят в реакциях нейтрализации вируса в культуре клеток, РСК, а также в РТГА с эритроцитами человека группы 0. В качестве диагностикума используют ротавирусы обезьян и телят.

PAGE \* MERGEFORMAT1

1. Свитанок Положение о Конкурсе на лучшее чтение поэтических произведений Тараса Григорьевича Шевче
2. Тема- ХОЧУ БЫТЬ ЗДОРОВЫМ Подготовила
3. Гнедич ОдиссеяЖуковский Введение в историю античной литературы Античная литературав переводе с г
4. Нормированное пространство Банахово пространство
5. менеджер Приглашаются школьники старших классов а также взрослые люди
6. О Коммунальная гигиена 0 Часть I [Раздел 1 которого разрабатывается проект водопровода
7. Фредрик Джеймисон
8. историческая социологическая и историческая школы Неспособность представителей классической эволюцион.html
9. Бабасов БК ldquo;Государственное регулирование инвестиционной деятельности в период стабилизации экономик
10. Дерево как символическая деталь в романе Тургенева Отцы и дети
11. Внутренний фотоэффект в полупроводниках
12. Тема Системный подход к управлению Понятие системы классификация их свойства Организация как с
13. Лео Бернетт
14. Chrlemgne Карл I (Великиий, король франков)
15. ТЕМАТИЧНЕ ТА КОМП~ЮТЕРНЕ МОДЕЛЮВАННЯ ФОТОХІМІЧНИХ ПРОЦЕСІВ ТА ВИЗНАЧЕННЯ ЇХ КІНЕТИЧНИХ ПАРАМЕТРІВ
16. О ГАНЖА АА ЗОТОВ ГУМАНИСТИЧЕСКАЯ СОЦИОЛОГИЯ ФЛОРИАНА ЗНАНЕЦКОГО ГАНЖА Анна Олеговна ~ аспирантка соци
17. на тему- Принципы и методы организации денежного обращения
18. Гроші На екрані ~ слайд гроші що сиплються
19. тематика и информатика Отчет по практической работе 2 Исследование устойчивости системы
20. распространение Вашей печатной продукции флаеры визитки диски и т

Материалы собраны группой SamZan и находятся в свободном доступе