Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Занятие № 2.1.3.
Вирусные нейроинфекции. Лабораторная диагностика бешенства, клещевого энцефалита
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
изучить биологические свойства возбудителей клещевого энцефалита, бешенства и принципы их вирусологической диагностики; классифицировать антимикробные препараты для идентификации, лечения, профилактики клещевого энцефалита и бешенства.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
4. Профилактические, лечебные и диагностические препараты, которые применяются при клещевом энцефалите и бешенстве.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ: алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;
методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей вирусных нейроинфекций.
Работа № 1.Принципиальная схема лабораторной диагностики клещевого энцефалита
Ситуационная задача
В инфекционную больницу поступил больной М., 27 лет, с жалобами на озноб, лихорадку (39,50С), мучительную головную боль, ломящие боли в конечностях и поясничной области, тошноту и неоднократную рвоту. Больной заторможен. При обследовании выявлены менингеальные симптомы и признаки очагового поражения ЦНС: парезы шеи, мышц плечевого пояса, верхних конечностей. Из анамнеза известно, что пациент живет в сельской местности, часто помогает в работе егерю. Приблизительно 3 недели назад обнаружил на себе присосавшегося клеща. Против клещевого энцефалита не вакцинировался. После осмотра больного врач поставил предварительный диагноз: «Клещевой энцефалит, менингоэнцефалитическая форма»?
Цель: разобрать принцип лабораторной диагностики клещевого энцефалита, обосновать методы, представленные в схеме «Лабораторная диагностика клещевого энцефалита».
Исследуемый материал: кровь, СМЖ, ткань органов от трупов
Работа № 2. Вирусологическая диагностика клещевого энцефалита
А) Определить наличие вируса клещевого энцефалита в аллантоисной жидкости куриного эмбриона с помощью постановки реакции гемагглютинации (РГА).
Направление:___________________________________________________________________
Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Б) Определить наличие вируса клещевого энцефалита в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона свиньи по результату ЦПД вируса. Описать ЦПД вируса.
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
В) Провести идентификацию вируса клещевого энцефалита с помощью постановки РН в перевиваемой культуре клеток (КК) почек эмбриона свиньи по ЦПД.
Направление:___________________________________________________________________
Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Механизм:
Постановка:
|
Исследуемые пробирки с культурой клеток |
Опыт |
Контроли к опыту |
||
|
Контроль вируса |
Контроль культурыклеток |
Контроль спец. сыворотки |
||
|
Результат РН в культуре клеток ПЭС |
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Работа № 3. Серологическая диагностика клещевого энцефалита
В) Учесть результат постановки ИФА с парными сыворотками больного с подозрением на клещевой энцефалит.
Направление:___________________________________________________________________
Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Постановка
негативный позитивный
Титры 1/4 1/8 1/16 /32 1/64 1/128 контроль контроль
1-ая неделя
2-ая неделя
Результат:______________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Работа № 4. Принципиальная схема лабораторная диагностики бешенства
Цель: разобрать принцип лабораторной диагностики бешенства, обосновать методы, представленные в схеме «Лабораторная диагностика бешенства».
Исследуемый материал: слюна, мозговая ткань погибших животных и людей
Работа № 5. Основные методы индикации и идентификации вируса бешенства
А) Определить наличие вируса бешенства в пораженных нервных клетках погибшего больного по наличию цитоплазматических включений.
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Б) Начертить схему постановки прямой РИФ, используемой для идентификации вируса бешенства в исследуемом материале.
Направление:___________________________________________________________________
Ингредиенты:________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Механизм:
Постановка:
Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Самостоятельная работа студента во внеурочное время:
1.Вакцина «Энцепур»
2._____________________________________________________________________________
3._____________________________________________________________________________
4._____________________________________________________________________________
5._____________________________________________________________________________
6._____________________________________________________________________________
1.Иммуноглобулин против клещевого энцефалита
2._____________________________________________________________________________
3._____________________________________________________________________________
4._____________________________________________________________________________
5._____________________________________________________________________________
6._____________________________________________________________________________
1.Антирабический иммуноглобулин
2._____________________________________________________________________________
3._____________________________________________________________________________
4._____________________________________________________________________________
5._____________________________________________________________________________
6._____________________________________________________________________________
1.Вакцина антирабическая культуральная инактивированная
2._____________________________________________________________________________
3._____________________________________________________________________________
4._____________________________________________________________________________
5._____________________________________________________________________________
6._____________________________________________________________________________
КЛЕЩЕВОЙ ЭНЦЕФАЛИТ
Таксономия возбудителя:
Семейство__________________________________________________________________
Род________________________________________________________________________
Вид__________________________________________________________________________
Строение вириона__________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Антигенная структура______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Культивирование и репродукция
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Резистентность____________________________________________________________________________________________________________________________________________
Эпидемиология
Источник инфекции____________________________________________________________________
Механизм передачи______________________________________________________________________
Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Патогенность для животных____________________________________________________________________
Патогенез и клиника
Входные ворота________________________________________________________________________
Инкубационный период_______________________________________________________________________
Клинические симптомы__________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Иммунитет___________________________________________________________________
Лабораторная диагностика____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Неспецифическая профилактика (мероприятия)_____________________________________________________________________________________________________________________________________________
Специфическая профилактика (препараты)_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
Лечение (препараты)___________________________________________________________
БЕШЕНСТВО
Таксономия возбудителя:
Семейство____________________________________________________________________
Род__________________________________________________________________________
Строение вириона___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Культивирование и репродукция
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
2. Объясните эпидемиологическую цепь бешенства (резервуар в природе, пути передачи, входные ворота)
Источник инфекции____________________________________________________________________
Механизм передачи______________________________________________________________________
Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________
3. Опишите патогенез бешенства. Какова зависимость между локализацией укуса и продолжительностью инкубационного периода?
_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
4. Как протекает бешенство? (стадии, исход)
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
5. Принципы лабораторной диагностики бешенство (цели, методы).
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Подпись преподавателя_________________________________________________________
СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ
1. В травматологический пункт обратилась женщина по пово ду рваной раны правой кисти. Рана - результат укуса бездом ной собаки. Указать, какие профилактические мероприятия должен провести врач травматологического пункта.
2. На фельдшерский пункт обратился молодой человек по поводу рваной раны правой кисти. Рана была ре зультатом тяжелых укусов, нанесенных собственной охотни чьей собакой, которая погибла через 5 дней. Из мозга (аммонов рог) погибшей собаки был приготовлен препарат, окрашенный по Манну. Оценить результат исследования. Указать какие препараты можно использовать для профилакти ке бешенства у укушенного.
3. Среди работников лесхоза заболело несколько человек. Заболевание сопровождалось высокой температурой, по ражением нервной системы в виде парезов и параличей. Был по ставлен диагноз вирусного клещевого энцефалита. Для подтверж дения диагноза была исследована сыворотка крови больного в РТГА. Учесть результат, оформить протокол, сделать выводы.
Выделяется для учета результатов исследования планшет с РТГА для изучения наличия антител в сыворотке больного к вирусам клещевого и японского энцефалитов.
|
Диагностикум |
Разведение сыворотки больного |
|||||
|
1/20 |
1/40 |
1/80 |
1/160 |
1/320 |
К |
|
|
Из вируса клещево го энцефалита Из вируса японского энцефалита |
+ (отсутствие гемагглютинации) - (наличие склеен ных эритроцитов) |
+ – |
+ – |
+ – |
+ – |
– _ |
Вопросы 1. Какова этиология вирусного энцефалита у обследованного больного? Почему? 2. Ингредиенты РТГА в данном исследовании?
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ СПРАВКА
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА
Лабораторная диагностика клещевого энцефалита проводится в двух направлениях: 1) выделение вируса и его идентификация; 2) серодиагностика. Вирусологическая диагностика предусматривает накопление вируса в организме белых мышей или в курином эмбрионе с последующей идентификацией вируса. Для накопления вируса также используют культуру клеток фибробластов куриных эмбрионов. В этих клетках вирус накапливается, но клетки в процессе репродукции вируса не разрушаются. В перевиваемой культуре клеток почек эмбриона свиньи репродукция вируса сопровождается деструкцией клеток. Поэтому наблюдается ЦПД (очаговая мелкозернистая деструкция клеток).
Индикацию вируса проводят на лабораторных животных (белых мышах) по клиническим проявлениям болезни, а в культуре клеток почек эмбриона свиньи (ПЭС) по цитопатическому действию (ЦПД) и бляшкообразованию.
Идентификация вирусов клещевого энцефалита проводится на основании изучения антигенной структуры выделенных вирусов (в качестве антигенных маркеров используются антитела к различным антигенам вируса).
Геном вируса клещевого энцефалита состоит из однонитчатой, линейной, "плюс-нитевой" РНК. Антигенная структура вируса представлена одним общим NP-антигеном, который выявляется в РСК. В липопротеиновой оболочке вируса содержится 3 антигена: E1, E2 и Е3. Поверхностные антигены вируса определяют его видовую специфичность. E1 — гемагглютинирующийантиген, антигены Е2 и Е3 участвуют в проникновении вируса в восприимчивую клетку и выявляются в РН. Антигены Е2 и Е3 обладают иммуногенной активностью и обеспечивают формирование в организме клеточного и гуморального (образуются вируснейтрализующие антитела) иммунитета.
Идентификация вирусов клещевого энцефалита проводится на основании постановки серологических реакций: РСК, РТГА, в РН на лабораторных животных или в культуре клеток, в нРИФ и РП в геле.
Серодиагностика. Антитела в крови больного выявляют в РСК, РТГА и РН. При отсутствии положительного результата реакции проводят дополнительное исследование сыворотки крови, взятой через 2-3 месяца от начала заболевания. Одновременно определяют различные классы иммуноглобулинов для диагностики острых и хронических форм заболеваний. Наличие IgM свидетельствует об острой инфекции, IgG и IgA — о хроническом течении заболевания после перенесённой инфекции. Комплементсвязывающие антитела в крови переболевших сохраняются в течение 4 месяцев, антигемагглютинирующие — до 3 лет, а вируснейтрализующие — до 10 лет.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БЕШЕНСТВА
Лабораторная диагностика бешенства проводится на основании выявления телец Бабеша-Негри. Внутриклеточные включения при бешенстве (тельца Бабеша - Негри) обнаруживаются в нервных клетках Аммонова рога и в клетках Пуркинье мозжечки. Тельца расположены в цитоплазме рядом с ядром клетки. При окраске по Туревичу или Манну тельца Бабеша-Негриокрашиваются в красный цвет.
Для исследования берут кусочки мозговой ткани в стерильную посуду и хранят в период транспортировки в лабораторию в глицерине на льду.
Специфический антиген в мазках-отпечатках и гистологических срезахмозга и подчелюстных желёз погибших людей и животных определяют в прямой и непрямой РИФ с использованием коммерческого антирабического иммуноглобулина. Для постановки биологической пробы используют белых мышей, заражают их интрацеребрально, и у заражённых животных развиваются параличи с последующей гибелью животных. Животных вскрывают и исследуют мозг на наличие телец Бабеша-Негри и специфического антигена в РИФ.
Для идентификациивозбудителя используют следующие особенности вируса. Возбудитель представлен одним антигенным вариантом. Выделяют "фиксированный" и "уличный" вирус бешенства. Оба вируса антигенно идентичны. Нейтрализующее действие навозбудитель оказывают антитела к поверхностным гликопротеиновым антигенам. Комплементсвязывающие антитела к антигенам нуклеокапсида не оказывают протективного действия. Вирус имеет следующие антигены: NP — нуклеопротеидный (антиген сердцевины), G — поверхностный гликопротеидныйAg, Ml и М2 — два негликозилированных белка, L и NS — протеины транскриптазы. Для идентификации вируса используют комплементсвязывающие антитела к NPAgвируса и вируснейтрализующие антитела к GAg вируса.
Серодиагностика проводится только для определения поствакцинального иммунитета. Антитела к вирусу бешенства выявляют в РН, РСК, РИФ, РИА и ИФА.
и ИФА.