Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
35
Конопельцев Игорь Геннадьевич
Озонотерапия и озонопрофилактика
воспалительных заболеваний и функциональных расстройств матки у коров
16. 00. 07 – ветеринарное акушерство и биотехника
репродукции животных
Автореферат
диссертации на соискание учёной степени
доктора ветеринарных наук
Воронеж 2004
Работа выполнена на кафедре хирургии и акушерства ФГОУ ВПО
«Вятская государственная сельскохозяйственная академия».
Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ,
доктор ветеринарных наук, профессор
Нежданов Анатолий Григорьевич
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор
Мисайлов Владимир Дмитриевич
заслуженный деятель науки РФ,
доктор биологических наук, профессор
Бузлама Виталий Соломонович
доктор ветеринарных наук, профессор
Гавриш Владимир Георгиевич
Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия
ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана».
Защита диссертации состоится 28 мая 2004 г. в 10 часов
на заседании диссертационного совета Д. 220. 010.05 при ФГОУ ВПО
«Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д.Глинки» (394087, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д.Глинки».
Автореферат разослан _________________ 2004 г.
Учёный секретарь
диссертационного совета Хромова Л.Г.
Сокращения и условные обозначения
ОФР – озонированный физиологический раствор
ФР – физиологический раствор
ОРЖ – озонированный рыбий жир
РЖ – рыбий жир
ОРРМ – озонированное растительное рафинированное масло
РРМ – растительное рафинированное масло
БХЛ – биохемилюминесценция
ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы
АДР – адреналин
АХ – ацетилхолин
БАВ – биологически активные вещества
β - АР - бета-адренорецепторы
α – АР - альфа-адренорецепторы
β – АРИМ – β - адренорецепторный ингибирующий механизм
ГМК – гладкомышечные клетки
ПГF 2 α – простагландин ф-2 альфа
СА – сократительная активность
ССА – спонтанная сократительная активность
СДМ – сократительная деятельность матки
ОРК – озонированный раствор Кребса
РК – раствор Кребса
ПОЛ – перекисное окисление липидов
БАСК – бактерицидная активность сыворотки крови
ЛАСК – лизоцимная активность сыворотки крови
ФАН – фагоцитарная активность нейтрофилов
АОЗ – антиоксидантная защита
Окс – окситоцин
Эст – эстрофан
ПХВ – полихлорвинил
КОЕ – колонеобразующие единицы
ПДЭ – плацента денатурированная эмульгированная
1 Общая характеристика работы
1.1 Актуальность темы.
Продовольственная безопасность для всех государств мира относится к числу главнейших политических и экономических задач, которая гарантирует стабильность в развитии общества. В решении проблемы снабжения населения России ценными для здоровья продуктами питания важная роль принадлежит молочному скотоводству. Однако в условиях современных интенсивных технологий широкое распространение имеют воспалительные заболевания и функциональные расстройства органов размножения у коров, которые ставят под угрозу реализацию потенциальных возможностей их репродуктивной системы и способствуют дальнейшей экспансии в страну не всегда качественных мяса и молока. Из числа воспалительных болезней матки послеродового периода превалируют послеродовой эндометрит (Е.В.Ильинский, 1968-1995; Н.И.Полянцев и др., 1971; Д.Д.Логвинов, 1977-1981; А.Г.Нежданов, 1987; А.И.Варганов, 1987; Т.Е. Григорьева, 1988; В.Д.Мисайлов, 1990; Г.А.Черемисинов и др., 1991; В.Я. Батраков, 1991; Г.Ф.Медведев и др., 1994;В.П. Иноземцев, 1995; А.В.Филатов, 1998; А.Н.Турченко, 1999-2001; К.Д.Валюшкин, 2001; И.А.Родин, 2002; и др.) и цервицит (Э.К.Ибрагимов, 1991), а из числа её функциональных расстройств - субинволюция (С.Н.Чередков и др. 1984; О.Г. Ивашкевич, 1985; А.М.Белобороденко, 1990; Б.Г.Панков, 1994-2003; А.Г. Нежданов, В.Д.Мисайлов, 1996; В.В.Пилейко, 2002; и др.).
Причиной симптоматического бесплодия у молочных коров очень часто является хронический (Н.И.Полянцев, А.Н.Синявин, 1989; Г.А.Че-ремисинов, Ю.Г.Ткаченко, 1991; Л.А.Таранова, 2000; и др.), в том числе субклинический эндометрит (В.А.Акатов и др., 1976; Ю.А.Скрипицын, 1979; Н.П.Фургасова, 1990; В.Г.Гавриш, 1997; В.В.Яцына, 2002; и др.).
Развитие патологии матки носит многофакторный характер, и в основе её очень часто лежит нарушение сократительной деятельности миометрия. Однако до сего времени нет единой концепции о системе регуляции контрактильной деятельности матки (В.И.Циркин, 1987).
В нейрогуморальной регуляции сократительной работы мышечных волокон матки принимают участие различные биологически активные вещества и бета-адренорецепторный ингибирующий механизм, однако, сведений о характере их влияния на мышечные структуры рогов, тела и шейки матки при различных физиологических состояниях коров, крайне недостаточно, и они носят противоречивый характер. В настоящее время в ветеринарном акушерстве существует острая необходимость в разработке не дорогостоящего, портативного гистерографа, позволяющего оперативно осуществлять контроль над сократительной активностью матки у животных в условиях производства.
Требует дальнейшего изучения вопрос о роли продуктов ПОЛ в патогенезе акушерско-гинекологических заболеваний (М.И.Рецкий, 1999; А.Г.Нежданов и др., 2000; А.Ф.Колчина, 2000).
Новым социальным принципом аграрной политики правительства России в области животноводства становится ориентирование производителей и потребителей на отечественные экологически безопасные продукты питания (С.А.Данкверт, И.М.Дунин, 2003). Поэтому традиционно сложившаяся практика использования лекарственных средств в ветеринарии требует нового осмысления. Фармакотерапия и фармакопрофилактика, часто применяемые в акушерско-гинекологической практике, не всегда обладают высокой эффективностью (В.П.Иноземцев, Б.Г.Таллер, 1994). Вместе с тем, они могут на фоне иммунодефицитного состояния макроорганизма, являться причиной рецидивов и бактерионосительства, возникновения в природе высокоустойчивых штаммов микроорганизмов и воспалений микозной этиологии.
Необходимость поиска новых подходов в терапии коров с патологией репродуктивных органов обусловлена и полиэтиологичностью заболеваний, изменением характера течения воспалительных процессов, загрязнением продуктов животноводства остаточными количествами антибиотиков, синтетических простагландинов и гормонов. Установлено, что при любом методе введения антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны способны аккумулироваться в организме животных и длительный период времени сохраняться в продуктах животноводства. Данный факт негативно сказывается на технологических процессах изготовления кисломолочных продуктов. Антибиотики и сульфаниламиды, попадая в организм животного и человека, могут вызвать аллергию, анафилаксию, изменения количественного и качественного состава бактериальной микрофлоры и другие нежелательные явления.
Поэтому современное состояние ветеринарной медицины характеризуется все более настойчивым внедрением в практику экологически безопасных методов профилактики и лечения различных заболеваний животных с использованием УФО крови, пробиотиков, сапропелей, лазера, медицинских пиявок, ультразвука, акапунктуры, электропунктуры, электромагнитного поля УВЧ, КВЧ, СВЧ, вибромассажа и др. (А.И.Варганов, 1987; П.Н.Никоноров и др., 1992; В.П.Иноземцев, И.И.Балковой, 1994; С.П.Петров и др., 1994; В.П.Иноземцев 1995, 1999; Р.Г.Кузьмич, 1999; Ю.Г.Юшков, Е.Ю.Смертина, 2000; В.А.Петров, 2000; В.К.Копытин, Ю.В. Василькова, 2000; Г.В.Казеев и др., 2002; В.А.Петров и др., 2003; Л.К.Попов, И.С.Попова, 2003; и др.).
Одним из новых немедикаментозных методов профилактики и лечения заболеваний животных и человека является озонотерапия. В клинической практике озон используется в различных концентрациях, проявляя бактерицидное, противовоспалительное, иммуномодулирующее, вирицидное, фунгицидное, аналгезирующее, антистрессовое и цитостатическое свойства, а кроме того, он способен оказывать коррегирующее воздействие на систему антиоксидантной защиты и микрогемоциркуляцию. Поэтому в науке в настоящее время идёт активный процесс экспериментально-клинических исследований, связанных с изучением свойств озона и его влияния на организм животных при различных заболеваниях. Вместе с тем, исследований, касающихся использования озонотерапии и озонопрофилактики в области акушерства в медицине и в ветеринарии, до настоящего времени, крайне недостаточно. Это связано с отсутствием методологической основы для воспроизведения данного метода. Поэтому разработка научных основ и практических методов использования озона для терапии и профилактики болезней органов репродуктивной системы в настоящее время является одной из актуальных задач ветеринарной акушерской науки.
1.2 Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение этиологии и патогенеза неспецифических воспалительных заболеваний и функциональных расстройств матки у высокопродуктивных молочных коров, разработка научных основ и практических методов их терапии и профилактики с использованием озона. Исходя из поставленной цели, на разрешение были поставлены следующие задачи:
Исследования выполнены в соответствии с научно-тематическим планом ФГОУ ВПО «Вятская государственная сельскохозяйственная академия» по теме: «Усовершенствовать и разработать методы и средства диагностики, профилактики и лечения незаразных болезней сельскохозяйственных животных» с номером государственной регистрации 01.200.2-01263.
Отдельные разделы работы выполнены при участии доктора медицинских наук, профессора В.И.Циркина, кандидата биологических наук О.Ю.Беспятых и кандидата ветеринарных наук, доцента А.В.Филатова. За что автор работы им глубоко признателен и выражает искреннюю благодарность.
1.3 Научная новизна. Впервые разработаны способы терапии и профилактики воспалительных заболеваний и функциональных расстройств матки у коров с применением озонированного рыбьего жира, озонированного растительного рафинированного масла и озонированного физиологического раствора. Определено материально-техническое обеспечение для осуществления локальной и системной озонотерапии. Путём электронно-микроскопических исследований биоптатов различной видовой принадлежности установлен механизм антимикробного действия озонированного рыбьего жира. Осуществлена оценка влияния ОФР на функциональное состояние миокарда коров. Показано, что озонированный изотонический раствор натрия хлорида при парентеральном введении оказывает положительное влияние на процессы ПОЛ и АОЗ и одновременно активизирует факторы клеточного и гуморального иммунитета, улучшает микрогемоциркуляцию и не оказывает отрицательного действия на гемопоэз. В сравнительном аспекте в условиях Северо-Восточного региона Нечернозёмной зоны РФ при круглогодовой стойловой и стойлово-пастбищной системе содержания скота изучены вопросы распространения акушерской патологии и воспроизводительной способности у коров. Впервые показано, что миометрий нестельных клинически здоровых и больных эндометритом коров обладает различной способностью к автоматии, но проявляет одинаковую хемореактивность к ацетилхолину, окситоцину, ПГF2α (как стимуляторам СА) и адреналину (как ингибитору СА). Доказано, что слабая СА миометрия при воспалении матки возникает вследствие низкой способности к автоматии и высокой бета-адренореактивности миоцитов. Определена возможность снижения бета-адренореактивности путём блокирования β– адренорецепторов обзиданом и озонированным раствором Кребса. Показано, что циркулярная мускулатура шейки матки нестельных и стельных коров не обладает способностью к автоматии, а сократительная способность ГМК шейки матки наиболее выражена у стельных коров.
Научная новизна диссертации подтверждена патентом и свидетельством на полезную модель.
1.4 Практическая значимость работы. Разработаны экологически безопасные, снижающие медикаментозную нагрузку на организм животных и человека, эффективные способы терапии и профилактики воспалительных заболеваний и функциональных расстройств матки у коров с использованием озона. Материалы диссертации вошли в «Методические рекомендации по применению озона для профилактики и терапии заболеваний матки и молочной железы у коров и свиноматок» (Киров,2002), одобренные Департаментом ветеринарии МСХ Российской Федерации.
1.5 Апробация и реализация результатов исследований. Основные положения диссертации доложены и одобрены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава факультета ветеринарной медицины Кировского сельскохозяйственного института и Вятской государственной сельскохозяйственной академии (1990-2003 г.г.); научной конференции «Повышение эффективности лечебно-профилактических мер при незаразных болезнях животных» (Казань, 1990); научной конференции, посвящённой 70-летию факультета ветеринарной медицины ВГАУ им. К.Д.Глинки (Воронеж, 1996); научной конференции «Актуальные проблемы современной биохимии» (Киров, 1996); научно-практической конференции учёных и специалистов АПК «Пермский аграрный вестник» (Пермь, 1998); научно-производственной конференции, посвящённой 190-летию ветеринарного образования в России и 100-летию ветеринарной науки (Санкт-Петербург, 1998); на научной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной науки» (Москва, 1999); на международной конференции, посвящённой 70-летию образования зооинженерного факультета «Инфекционные и инвазионные болезни животных» (Казань, 2000); международной конференции, посвящённой 30-летию ВНИИПФиТ «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях (Воронеж, 2000); IV Всероссийской научно-практической конференции «Озон и методы эфферентной терапии в медицине» (Н.Новгород, 2000); международной научно-производственной конференции по акушерству, гинекологии и биотехнике репродукции животных, посвящённой 100-летию И.А. Бочарова (Санкт-Петербург, 2001); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» (Воронеж, 2002); международной научно-практической конференции «Здоровье-питание-биологические ресурсы» (Киров, 2002); Всероссийской научно-практической конференции «Диагностика, профилактика и лечение болезней животных» (Киров, 2002), II-ой международной научно-практической конференции «Сельскохозяйственная биотехнология» (Горки, 2002); международной научно-практической конференции «Новiтехнологii оздоровлення природними та преформованими факторами» (Харьков, 2002); V-ой Всероссийской научно-практической конференции «Озон в биологии и медицине» (Н. Новгород, 2003); международной научно-практической конференции, посвящённой 100-летию А.П.Студенцова (Казань, 2003).
Материалы диссертационной работы опубликованы в журналах «Реаниматология и интенсивная терапия. Анестезиология» (2000, № 4), «Нижегородский медицинский журнал» (2003) и «Ветеринария» (2001, № 2; 2003, № 1), в коллективных монографиях «Инфракрасные спектры веществ, применяемых при изготовлении консервантов для клеток животного и растительного происхождения» (Киров, 2000) и «Атлас инфракрасных спектров криопротекторов» (Сыктывкар, 2000); используются в практической работе ветеринарных специалистов Кировской области и учебном процессе ФГОУ ВПО «Вятская государственная сельскохозяйственная академия».
1.6 Публикации. Основные положения диссертации изложены в 42 работах, опубликованных в журналах, материалах международных, Всероссийских конференций, сборниках, монографиях, рекомендациях, информационных листках ЦНТИ, патенте на изобретение и свидетельстве на полезную модель.
1.7 Структура и объём диссертации. Материал диссертации изложен на 356 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений и приложения. Список использованной литературы включает 443 источника, в том числе 54 иностранных. Диссертация иллюстрирована 75 таблицами и 30 рисунками.
1.8 Основные положения выносимые на защиту:
2 Материал и методы исследований
Работа выполнялась в период с 1990 по 2003 годы и являлась составной частью научных исследований по теме: «Усовершенствовать и разработать методы и средства диагностики, профилактики и лечения незаразных болезней сельскохозяйственных животных» с номером гос. регистрации 01.200.2-01263. Клинико-экспериментальные исследования проводили на животноводческих комплексах Кировской, Пермской, Нижегородской и Вологодской областей. Под наблюдением находились 10281 разновозрастных коровы холмогорской и голштинизированной чёрно-пёстрой пород с продуктивностью от 3,9 до 8,2 тысячи килограмм молока при жирности от 3,4 до 4,1 процента.
Изучение вопроса о степени распространения акушерско-гинеко-логических заболеваний у коров проводили согласно “Методическим указаниям по диагностике, лечению, профилактике акушерско-гинекологи-ческих болезней и ветеринарному контролю за воспроизводительной функцией коров”(1986).
В цельной крови гемоглобин определяли по Сали, эритроциты и лейкоциты подсчитывали в счетной камере Горяева, выводили лейкограмму. Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли с использованием латекс-теста по С.Г.Потаповой и др. (1977), индекс регидности или коэффициент деформируемости эритроцитов вычисляли на приборе «Измеритель деформируемости эритроцитов автоматический ИДА-1». В сыворотке крови определяли общий белок рефрактометрическим методом, белковые фракции - нефелометрическим методом по Оллу и Маккорду, в модификации С.А.Карпюка (1962), бактерицидную активность по О.В.Смирновой, Т.А.Кузьминой (1966), лизоцимную активность по В.Г.Дорофейчуку (1968), иммуноглобулины классов A, G и M методом радиальной иммунодиффузии по G.A. Mancini в модификации Б.Е.Караваева (1983) с использованием моноспецифических антисывороток крупного рогатого скота, общие иммуноглобулины с применением NaSО4 (б/в, х.ч.), циркулирующие иммунные комплексы по П.В.Барановскому, В.С.Дальнишину (1983), активность β-лизинов по О.В.Бухарину и др. (1972). Оценку состояния процессов пероксидации проводили методом индуцированной биохемилюминесценции на биохемилюминометре БХЛ-06, сопряжённым с компьютером IBM PC/AT в диалоговом режиме. Билирубин, АЛТ и АСТ определяли спектрофотометрически, щелочную фосфатазу - методом по гидролизу п-нитрофенилфосфата, креатинин - методом Поппера, мочевину по цветной реакции с диацетилмонооксимом.
Изучение сократительной активности и хемореактивности миометрия коров проводили на 6-ти канальном «Миоцитографе» конструкции А.Г.Гусева и В.И.Циркина. В опытах использовали матки коров, находящихся в разных физиологических состояниях (нестельные, стельные с разным сроком гестации и больные гнойно-катаральным эндометритом). Было проведено 141 различное тестирование. Методика исследований состояла из оценки фоновой активности миометрия при перфузии только раствора Кребса, а затем изучали реакцию мышечных волокон на различные вещества, для этого полоски перфузировали веществом в минимальной его концентрации в течение 10 минут, далее отмывали раствором Кребса и вновь перфузировали этим же веществом, но в концентрации на порядок выше предыдущей. В конце эксперимента изучали эффект адреналина на фоне других БАВ, а также эффект применения обзидана и озонированного (в течение 30 минут с концентрацией озона на выходе прибора 10 мг/л) раствора Кребса. При анализе механограмм рассчитывали число сокращений на 10-ти минутном интервале, их среднюю величину (амплитуда СА, в мН), сумму амплитуд всех сокращений на 10-ти минутном интервале (суммарная СА, в мН/10 мин) и тонус (в мН). Вычисленные показатели выражали в процентах к фоновым значениям.
Отбор проб маточного содержимого от 118 коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, осуществляли по методике Н.Н.Михайлова с соавт.(1967). Чувствительность выделенных культур микроорганизмов к различным антибиотикам определяли в соответствии с “Методическими указаниями по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков” (1983).
Разработка методик озонотерапии и озонопрофилактики выполнена с использованием отечественного генератора медицинского озона «Озон-М-50» (МАЮИ 941714.004 ТУ) производства ОАО «Электромашиностроительный завод им. ЛЕПСЕ» г. Киров, рыбьего жира, изготовленного согласно ТУ 8112-04977536-1-93, и растительного рафинированного подсолнечного масла, изготовленного в соответствии с требованиями ТУ 9140-208-00334537-97.
Жирнокислотный состав рыбьего жира до и после озонирования изучали методом газожидкостной хроматографии.
Фармако-токсикологическую оценку озонированного рыбьего жира и озонированного растительного рафинированного масла осуществляли согласно нормативным документам: «Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные положения. РД 42-28-8-89», «Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов вводимых людям. Методические указания. Мук 4.1/4.2.588-96», «Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов. Санитарные правила СП 3.3.2.561-96».
Для определения величины антимикробной активности ОРЖ, ОРРМ и ОФР в качестве тест-культур использовали музейные штаммы Staphylococcus aureus 35, Pseudomonas aeruginosa 1677, Escherihia coli М-17 и микроорганизмы, выделенные из экссудата коров, больных эндометритом.
Механизм антимикробного действия озонированного рыбьего жира на культуры золотистого стафилококка и кишечной палочки изучали посредством электронной микроскопии.
Материалом для гистологического исследования являлись матки убойных клинически здоровых, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом и выздоровевших коров после внутриматочных введений озонированного рыбьего жира. Парафиновые срезы толщиной 5 – 7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, азур-эозином, по ван Гизону, Граму, заключали в канадский бальзам и покрывали покровными стёклами.
С целью изучения терапевтической эффективности, ОРЖ больным острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом животным (n =37) вводили внутриматочно в дозе 50-75 мл. Коровам контрольной группы (n =37) с целью оказания лечебной помощи в полость матки инстиллировали 10%-ю суспензию трициллина на рыбьем жире в дозе 100,0 мл. Интервал введения препаратов составлял 48 - 72 часа.
Для определения терапевтической эффективности озонированного рыбьего жира в составе комплексного лечения при субклиническом эндометрите животных в контрольную (n=24) и подопытную (n=24) группы подбирали по принципу аналогов на основании положительной реакции их течковой слизи с 4%-ным раствором NaOН в период стадии возбуждения полового цикла. Терапию коров подопытной группы осуществляли с выполнением однократных инъекций 1%-го раствора новокаина в дозе 100,0 мл в блокаде по С.Г.Исаеву, 10,0 мл 10%-ной суспензии АСД - 2 на тривите интрамускулярно и внутриматочно вводили 10,0 мл озонированного рыбьего жира. Животным контрольной группы назначали лечение по идентичной схеме, за одним лишь исключением: им в полость матки инстиллировалось 10,0 мл 1%-ного раствора диоксидина пролонгированного.
Эффективность озонированного рыбьего жира при санации матки у бесплодных коров оценивали на двух группах животных – подопытной (n=16) и контрольной (n=16). Коровам подопытной группы через 6-8 часов после искусственного осеменения мано-цервикальным способом интраматочно вводили 10,0 мл озонированного рыбьего жира, а животным контрольной группы – 10,0 мл мастисана А.
Целесообразность использования озонированного рыбьего жира при профилактике послеродового эндометрита определялась на трёх группах коров. Животных первой опытной группы подразделили на две подопытные группы. Первую подгруппу (n=40) составили коровы с нормальным отелом, которым не позднее шести часов после отделения последа ОРЖ вводили в полость матки однократно в дозе 75 мл. Второй подгруппе животных (n=10) препарат назначали после оперативного отделения плодных оболочек. Коровам второй опытной группы изучаемый препарат в указанной выше дозировке инстиллировали внутриматочно двукратно с интервалом 72 часа как в случаях нормальных родов (n=38), так и патологических (n=12). Контрольных животных в зависимости от течения послеродовой деятельности разделили на две подгруппы и им трансцервикально однократно назначали пять фуразолидоновых суппозиториев.
При оценке терапевтической эффективности озонированного растительного рафинированного масла при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите коровам подопытной группы (n=25) ОРРМ вводили в полость матки с ректальной фиксацией её шейки в количестве 50-75 мл с интервалом 48-72 часа. Животным контрольной группы (n=25) интраматочно назначали 100,0 мл 10%-ой суспензии фуразолидона на растительном масле с интервалом 48-72 часа.
Инфракрасные (ИК) спектры образцов субстанций физиологического раствора изучали методом жидкой плёнки на спектрофотометре «Specord 75 IR» в диапазоне волновых чисел 4000-500 см-1.
Оценку растворимости озона в 1000,0 мл физиологического раствора и динамику его распада осуществляли йодометрическим методом по ГОСТ № 030941 в модификации О.Ю.Искусных, М.И.Рецкого (2002).
Оценку сердечной деятельности у коров после парентеральных введений озонированного физиологического раствора проводили по М.П.Рощевскому (1965).
Изучение эффективности сочетанного применения ОФР с окситоцином для профилактики субинволюции матки и послеродового эндометрита провели на коровах с нормальным отёлом. Озонированный 0,9%-ный раствор хлорида натрия животным первой (n=26) группы вводили путем струйного внутривенного вливания в объеме 1000,0 мл в день отела, на 1-й, 3-й и 5-й дни послеродового периода совместно с 20 ЕД окситоцина. Концентрация озона в инфузионной среде была в среднем 2,5 мг/л. Коровам второй (n=26) группы по той же схеме и в том же количестве интравенозно назначали стерильный изотонический раствор хлорида натрия, в который предварительно добавляли 20 ЕД окситоцина.
Определение эффективности озонотерапии в составе комплексной схемы лечения коров, больных острым эндометритом, развившегося после нормального отёла, на фоне субинволюции матки и задержания последа провели на 114 животных. Заболевших коров по принципу парных аналогов разделили на две группы – подопытную и контрольную. В день постановки диагноза на заболевание животным обеих групп внутримышечно назначали 2,0 мл 2%-ного раствора синэстрола и 10,0 мл тривита. Инъекцию витаминов повторяли через 10 суток. Коровам подопытной группы на 3,5 и 7-ой дни болезни внутривенно струйно инфузировали 1000,0 мл ОФР (О3 – 2,0-2,5 мг) совместно с 20 ЕД окситоцина. Интраматочно по способу глубокого цервикального введения с ректальной фиксацией шейки матки с обязательной аппликацией слизистой оболочки цервикального канала с интервалом 48 часов в объеме 50-75 мл вводили ОРЖ. Комплексная схема лечения коров контрольной группы отличалась тем, что им интравенозно назначали 400,0 мл 20% -го раствора глюкозы и 20 ЕД окситоцина, а в полость матки – 100,0 мл 10%-ной суспензии трициллина на рыбьем жире.
Для определения эффективности озонотерапии при одновременном заболевании коров цервицитом и острым эндометритом их по принципу парных аналогов разделили на подопытную и контрольную группы. В день постановки диагноза на заболевание животным обеих групп внутримышечно назначали 2,0 мл 2%-ного раствора синэстрола, 10,0 мл тривита и подкожно 20,0 мл ПДЭ. Инъекцию витаминов и ПДЭ повторяли через 10 суток. Коровам подопытной группы на 3, 5 и 7-ой дни болезни внутривенно струйно инфузировали 1000,0 мл ОФР совместно с 20 ЕД окситоцина. Интраматочно с обязательной аппликацией слизистой оболочки цервикального канала с интервалом 48 часов в количестве 75,0 мл вводили ОРЖ. Комплексная схема лечения коров контрольной группы отличалась тем, что в идентичные сроки им интравенозно назначали 400,0 мл 20%-го раствора глюкозы совместно с 20 ЕД окситоцина, а в полость матки – 100,0 мл 10%-ной суспензии трициллина на рыбьем жире.
Сравнительную терапевтическую эффективность сочетанного применения ОФР и озонированного растительного рафинированного масла при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите определяли на 38 коровах. При этом в день постановки диагноза животным внутримышечно назначали 2,0 мл 2%-ного раствора синэстрола и 10,0 мл тривита. Инъекцию витаминов повторяли через 10 суток. Коровам подопытной (n=19) группы на 3, 5 и 7-й дни болезни внутривенно струйно инфузировали 1000,0 мл ОФР (О3 – 2,0-2,5 мг) совместно с 20 ЕД окситоцина. Интраматочно при ректальной фиксации шейки матки с интервалом 48 часов в объеме 50-75 мл вводили ОРРМ. Комплексная схема лечения коров контрольной (n=19) группы отличалась тем, что интравенозно им на 3, 5 и 7-й дни курса терапии назначали 400,0 мл 20%-ного раствора глюкозы совместно с 20 ЕД окситоцина, а в полость матки – 100,0 мл 10%-ной суспензии трициллина на растительном масле.
Эффективность сочетанного применения ОФР и озонированного рыбьего жира оценивали в лечении 36 коров, больных хроническим катарально-гнойным эндометритом. Животным трёхкратно с интервалом 48 часов вводили 1%-ный раствор новокаина в дозе 100,0 мл по методу С.Г. Исаева, однократно в день постановки диагноза интрамаскулярно 2,0 мл 2%-ного раствора синэстрола и двукратно с интервалом в семь дней внутримышечно по 10,0 мл 10%-ной суспензии АСД-2 на тетравите. Внутриматочно подопытным (n=18) больным коровам дополнительно вводили посредством полистироловой пипетки в зависимости от размеров матки 15-20 мл озонированного рыбьего жира двукратно с интервалом 24-48 часов и внутривенно ОФР с концентрацией озона 2-2,5 мг в объёме 1000,0 мл трёхкратно с интервалом 48 часов, а контрольным (n = 18) животным – 15-20 мл 1%-ного раствора диоксидина пролонгированного действия и внутривенно трёхкратно с интервалом 48 часов 200,0 мл 40%-ного раствора глюкозы.
Регистрацию сократительной функции матки у коров осуществляли методом внутренней гистерографии с помощью разработанного нами устройства.
Исчисление экономической эффективности озонотерапии проводили согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» М., 1997. Статистическая обработка материала выполнена на персональном компьютере IBM “Pentium IV” в операционной системе “Windows-2000” с помощью пакета программ “Microsoft Office 2000”.
3 Результаты собственных исследований
3.1 Распространение заболеваний половых органов у коров
при разных системах содержания
На отдельных животноводческих комплексах в Северо-Восточном регионе Нечерноземной зоны РФ задержание последа диагностируется в среднем у 6,8% коров, острый эндометрит - у 28,8%, субинволюция матки и цервицит соответственно у 19,1% и 4,3% животных. Кроме того, одновременно эндометрит и цервицит выявляется у 12,3% коров. Из числа гинекологических заболеваний хронический и субклинический эндометрит регистрировали соответственно у 14,6 и 22,1% коров. Гипофункцию яичников отмечали у 6,5%, персистентное желтое тело - у 2,8%, кисты лютеиновую и фолликулярную соответственно - у 1,2% и 2,2%, оофорит - у 1,1%, хронический периоофорит - у 7,7%.
При стойлово-пастбищной системе содержания в сравнении со стойловой от ста коров было больше получено телят на 9,3% (Р<0,05). Достоверным было и преимущество по индексам оплодотворения коров (на 0,4) и тёлок (на 0,8), периоду бесплодия (на 42,3 дня; Р<0,01).
Более низкие показатели воспроизводительной способности у коров при стойловом содержании во многом обусловлены высоким риском возникновения послеродового эндометрита. Так, средний показатель коров с данной патологией при стойловом содержании колебался от 24,9% до 31%. Воспаление эндометрия при стойлово-пастбищной системе содержания выявлялось у 22,7% - 20,2% коров. При проведении сравнительного анализа индекса оплодотворения и периода бесплодия у переболевших эндометритом и клинически здоровых коров было установлено, что эти показатели имели тенденцию к снижению при стойлово-пастбищной системе содержания. Так, у животных, переболевших эндометритом, при стойловой системе индекс оплодотворения составлял 2,6-3,4, период бесплодия от 108 до 121 дня, а при стойлово-пастбищной – 1,9-2,1 и от 77,3 до 84,3 дня соответственно. Вместе с тем, у клинически здоровых коров при стойловой системе содержания индекс оплодотворения находился на уровне 1,8-2,4, период бесплодия от 65,3 до 76 дней, а при стойлово-пастбищной – 1,6-1,8 и от 62 до 66,1 дня.
В среднем за период наблюдения независимо от системы содержания у 2,4% коров наблюдалось естественное многоплодие. Поэтому в процессе выполнения работы регистрировали случаи возникновения у них задержания последа и послеродового эндометрита. При стойлово-пастбищной системе содержания многоплодные коровы в 21,7% случаев переболевают задержанием последа, а в 73,9% случаев послеродовым эндометритом. Круглогодовая стойловая система содержания у многоплодных коров способствует увеличению количества случаев возникновения задержания последа и послеродового эндометрита соответственно на 17,3% и на 13%.
Нами было установлено, что гематологические показатели отелившихся коров при круглогодовой стойловой системе содержания характеризуются нарушением в равновесии между накоплением в крови свободных радикалов и функциональной недостаточностью звеньев антиоксидантной защиты, низкими количественными показателями гемоглобина, эритроцитов, клеток белой крови, в том числе участвующих в фагоцитозе. Всё это и наличие отклонений в белоксинтезирующей функции печени на фоне активных инволюционных процессов в матке негативно отражается на жизнедеятельности различных органов, тканей и в целом на адаптационных возможностях животных, что в конечном итоге приводит к развитию низкой иммунологической защиты организма коров и предрасполагает к широкому распространению акушерской патологии и снижению темпов воспроизводства крупного рогатого скота.
3.2 Сократительная активность и хемореактивность
миометрия коров
У всех полосок, иссеченных из продольного слоя мускулатуры матки нестельных коров, зафиксирована спонтанная СА. Среднее число сокращений за 10 минут у продольных полосок составило 5,95+1,19, амплитуда которых достигала 0,15-0,26 мН/мг сырой массы полоски. Полоски изолированного миометрия нестельных коров обладали выраженной способностью изменять спонтанную СА под влиянием биологически активных веществ. Так, ацетилхолин (10-6г/мл) усиливал частоту спонтанных сокращений полосок на 75 % от исходного уровня, суммарную СА – на 53 %. Окситоцин (5х103МЕ/мл) повышал частоту фоновых сокращений полосок на 66 % от исходных значений, суммарную СА – на 92 %. Аналогичная картина получена в отношении ПГF 2α. Адреналин в концентрации 10-6 г/мл уменьшал частоту спонтанных сокращений полосок на 30%, амплитуду на 40% и суммарную СА на 45%. Кроме угнетения спонтанной СА адреналин (10-6 г/мл) на фоне действия ПГF 2a уменьшал частоту сокращения полосок на 40, амплитуду – на 55, суммарную активность – на 65%. На фоне действия окситоцина адреналин снижал параметры СА на 50, 50, 75% соответственно. Аналогичная картина отмечена при действии адреналина на СА полосок миометрия на фоне ацетилхолина. Значительная степень снижения СА полосок под влиянием адреналина свидетельствует о присутствии значительного количества β - адренорецепторов в мускулатуре рога матки нестельных коров, взаимодействие адреналина, с которыми вызывает угнетение СА матки. Это позволяет говорить о высокой β - адренореактивности миометрия нестельных коров.
Полоски мышц, иссеченные из циркулярного слоя матки по своим свойствам: способности к автоматии, сократимости, хемореактивности и β - адренореактивности не отличались от продольных полосок. Это означает, что в функциональном плане мышечная стенка матки нестельной коровы является гомогенным образованием.
Вызванная СА у циркулярных полосок гладких мышц шейки матки коров появляется только в ответ на действие ацетилхолина (пороговая концентрация 10-8 г/мл). Амплитуда сокращений составляет 0,18 мН/мг сырой массы полоски. В ответ на воздействие других веществ: окситоцина, ПГF2α и адреналина у полосок не зафиксировали генерацию СА. Следует отметить, что ни адреналин, ни ПГF 2a каждый в отдельности не вызывали СА миоцитов шейки матки нестельных коров, а при совместном воздействии (адреналин на фоне ПГF 2a) вызывали у мышц шейки матки сократи тельную активность.
У стельных коров со сроком стельности не более 4-х месяцев, полоски, иссеченные из продольной мускулатуры матки, обладали спонтанной СА только в 30% случаев. Полоски от животных со сроком беременности 5 и более месяцев не обладали спонтанной СА, что свидетельствовало о потере способности к автоматии у мускулатуры рога матки коров с увеличением срока гестации. Среднее число спонтанных сокращений на 10-минутном ин тервале у полосок составило 4,80±0,72.
Стимулирующее дозозависимое влияние на СА продольных полосок рога матки стельных коров оказывали ацетилхолин, окситоцин и ПГF 2a. Оно проявлялось в повышении исходного тонуса, учащении и повышении амплитуды спонтанных сокращений, а при их отсутствии - в генерации фазных сокращений. Адреналин, как и на мускулатуре рога матки нестельной коровы, вызывал снижение всех параметров СА. На продольных полосках рога матки стельных коров адреналин угнетал не только спонтанную СА, но и вызванную окситоцином, ацетилхолином и ПГF 2a. Удаление адреналина сопровождалось восстановлением СА. Например, на фоне действия ПГF 2a (10-7 г/мл) адреналин в концентрации 10-6 г/мл угнетал частоту сокращений на 70% от исходного уровня, амплитуду на 90% и суммарную активность на 92% (достоверное угнетение по всем параметрам). На фоне ацетилхолина (10-6 г/мл) адреналин (10-6 г/мл) ингибировал частоту сокращений на 57%, амплитуду - на 56% и суммарную СА - на 66%; на фоне окситоцина (5х10-3 МЕ/мл) - на 35%, 50% и 58% соответственно. Эти данные свидетельствуют, как и в случае с миометрием нестельной коровы, что у стельных коров мускулатура рога матки имеет высокую β - адренореактивность.
Полоски мускулатуры из циркулярного слоя рога матки, в отличие от продольного, при стельности обладали более низкой способностью к автоматии, низкой сократимостью – в 2-3 раза, не повысили свою чувствительность к окситоцину и ПГF 2a. На основании этого можно заключить, что при беременности у коров возникает функциональная гетерогенность мышечной стенки матки.
Циркулярный слой мускулатуры шейки матки стельных коров не обладал способностью генерировать спонтанные сокращения, т.е. у него отсутствовала способность к автоматии. Появление сократительной активности у циркулярной мускулатуры шейки матки стельных коров вызывали: аце тилхолин (пороговая концентрация 10-8 г/мл); окситоцин (в мак симальной концентрации – 5 мЕД/мл) и адрена лин (пороговая концентрация 10-8 г/мл), который в ранее приведенных случаях выступал ингибитором СА. Свой стимулирующий эффект адреналин сохранял на фоне СА миоцитов шейки матки, вызванной ацетилхолином, окситоцином и на фоне их рефрактерности к ПГF 2a.
Продольный слой мускулатуры рога матки коров, больных эндометритом, обладает частичной способностью к автоматии (73,3%). Кроме того, наблюдается уменьшение сократимости, в сравнении с миометрием нестельных коров (таблица 1).
Таблица 1- Показатели автоматии мускулатуры рога матки коров
|
Полоски миометрия от коров |
Количество полосок |
Полоски, обладающие ССА, % |
Число сокращений за 10 минут |
Амплитуда, мН |
|
Нестельных здоровых |
27 |
100,0 ± 0,0 |
5,95 ± 1,19 |
6,40 ± 0,95 |
|
Больных эндометритом |
30 |
73,3 ± 8,07* |
5,33 ± 0,92 |
3,92 ± 0,98 |
Примечание: *- различия с миометрием нестельных коров достоверны (р<0,05).
Про дольные полоски мышц матки коров, больных эндомет ритом, обладают способностью изменять СА под воздействием различных биологически активных веществ. Тем не менее, сократимость полосок, иссеченных из матки коров с наличием воспаления в эндометрии, в 1,5-2 раза ниже, чем из матки от клинически здоровых нестельных животных.
Установили, что окситоцин, ацетилхолин и ПГF2α усиливали, а адреналин уменьшал частоту и амплитуду сократительной активности полосок мускулатуры матки коров, больных эндометритом (рисунок 1). Так, окситоцин в концентрации 5 МЕ/мл увеличивал от исходного уровня частоту сокращений в 1,8; амплитуду в 1,6; суммарную активность в 2,8 раза. Ацетилхолин в концентрации 1мкг/мл - в 1,9; 1,9; 3,1 раза соответственно. ПГF2α в концентрации 0,1мкг/мл - в 1,3; 1,3; 1,5 раза соответственно. Адреналин оказывал дозозависимое ингибирующее воздействие на СА миометрия. Так, в концентрации 0,1мкг/мл он вызывал снижение частоты в
1,1 раза, амплитуды - в 1,4 раза и суммарной СА в 1,2-1,3 раза. Более того, адреналин (1мкг/мл) снижал тонус до 1,5 мН.
Кроме угнетения спонтанной сократительной активности полосо к, адреналин сни жал параметры вызванной сократительной активности. Например, на фоне действия окситоцина (5 мЕД/мл) адреналин в концентрации 1мкг/мл уменьшал частоту сокра щений от исходного уровня в 1,4; амплитуду в 1,3 и суммарную активность в 1,5 раза. На фоне ацетилхолина (1 мкг/мл) - в 1,1; 1,4; 1,5 раза соответственно. На фоне ПГF 2a (0,1мкг/мл) - в 1,4; 1,5; 1,7 раза соответственно.
Данные о степени угнетения СА полосок адреналином, как и в случае с миометрием нестельных коров, свидетельствуют, что мускулатура матки коров, больных эндометри том, обладает высокой β-адренореактивностью. Основные отличия мускулатуры матки коров, больных эндометритом, от нестельных клинически здоровых заключаются в пониженной в 1,3 раза способности к автоматии и низкой сократимости – в 1,5-2 раза.
Таким образом, в регуляции сократительной активности миометрия коров независимо от физиологического состояния принимает активное участие β - АРИМ. Высокая β-адренореактивность миоцитов, имеющая место при функциональных расстройствах и воспалении матки, объясняет низкую результативность от использования известных миотропных средств, широко применяющихся в условиях практики. Поэтому включение в комплекс терапевтических мероприятий лекарственных веществ, способных блокировать β – адренорецепторы, позволит значительно повысить сократительную способность маточных структур и эффективность выполняемых процедур.
3.3 Микрофлора матки коров при послеродовом эндометрите и её чувствительность к антибиотикам
В результате выполненных бактериологических исследований установили, что в 96,6% в экссудате матки при остром воспалении эндометрия присутствуют микроорганизмы. Неспецифические возбудители заболевания, с учётом их специфических свойств, были отнесены в 23,2% к стафилококкам (Staph. aureus, Staph. saprophyticus, Staph. epydermidis), в 23,2% - к кишечной палочке, в 27,5% - к стрептококкам (Str. pyogenes, Str. pneumoniae), в 13,9% - к споровым анаэробам (Bac. subtilis, Bas. cereus), в 11,1% - к вульгарному протею и в 1,1% - к синегнойной палочке. Количество микробных клеток в отдельных пробах экссудата колебалось от (5,6+0,2)х104 до (3,2+0,6)х106. В эксперименте показали, что в 95,7% случаев культуры микробных клеток были смешенными и лишь в 4,3% случаев в виде монокультур.
В результате микологических исследований доказали, что в 8,3% случаев в воспалительный процесс могут включаться грибы из рода Mucor, Aspergillus, Penicillinum, Candida, Trichophyton.
Изолированная микрофлора была наиболее чувствительна к стрептомицину, неомицину, гентамицину и резистентна к пенициллину, линкомицину, канамицину и эритромицину. Но всё же использование в лечебной практике пусть даже высоко активных антибиотиков несёт в себе определённую экологическую опасность.
3.4 Разработка способа терапии и профилактики эндометрита у коров с применением озонированного рыбьего жира
Технология приготовления озонированного рыбьего жира (ОРЖ) заключается в барботировании рыбьего жира озоно-кислородной смесью. Предварительно рыбий жир наливают в чистые стеклянные флаконы вместимостью 500 мл в количестве 400,0 мл, закрывают пробкой из черной резины и вставляют две иглы различной длины. Иглу 20198 (И-33) соединяют с полихлорвиниловой (ПХВ) трубкой со штуцером озонатора, через которую пропускают озоно-кислородную смесь. Через иглу типа 2055 осуществляют выпуск отработанного газа в деструктор прибора посредством трубки ПХВ.
Озонированный рыбий жир, приготовленный путём барботирования в течение 60 минут 400,0 мл исходного сырья озоно-кислородной смесью с концентрацией в ней озона 10 мг/л, обладает более высокими антимикробными свойствами в сравнении с 5 мг/л и 8 мг/л.
Выбранный режим барботирования озоно-кислородной смесью рыбьего жира приводит к определённому изменению процентного соотношения в жирнокислотном составе и прежде всего за счёт снижения линолевой кислоты (на 51,1%).
Озонированный рыбий жир является нетоксичным и низко реактогенным, оказывает положительное влияние на регенеративный процесс и не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием. Его антимикробные свойства по отношению к грамположительным и грамотрицательным микроорганизмам музейных и полевых штаммов проявляются по истечению 30 минут совместного инкубирования, которые остаются стабильными в течение шести месяцев при температуре хранения 4+20С.
Результаты электронной микроскопии показали, что ОРЖ вызывает локальные повреждения биополимеров клеточной стенки и цитоплазматической мембраны, которые заключаются в утрате этими структурами на отдельных участках типичного слоистого строения, что, несомненно, способствует нарушению избирательной проницаемости мембран. Развитие последующего лизиса микроорганизмов, очевидно, является следствием активизации собственных ферментных систем клетки в результате указанных структурных нарушений. Кишечная палочка отличается от золотистого стафилококка большей чувствительностью к ОРЖ. Отмеченное явление, по всей вероятности, обусловлено наличием у St. aureus более массивной клеточной стенки и отсутствием у него периплазматического пространства, являющегося у грамотрицательных бактерий местом локализации многих ферментных систем, обеспечивающих, в том числе, транспортные функции и осморегуляцию.
Установили, что при внутриматочном введении озонированный рыбий жир вызывает активизацию моторики матки, которая выражается в увеличении амплитуды сокращений её мышечных структур, повышении числа сокращений и их продолжительности. Через 3 часа после инстилляции ОРЖ средняя высота амплитуды сокращений по сравнению с исходным значением возросла в 7 раз (Р<0,01), частота сокращений увеличилась на 6,5%, а их продолжительность на 21% (Р<0,001) . Контракционный индекс в 9,5 раза был выше своей начальной величины. Через 6 часов от момента начала экспериментальной работы величины всех изучаемых показателей по отношению к предыдущему сроку исследования хотя и снизились, но амплитуда сокращений и их продолжительность соответственно в 3,2 раза (Р<0,001) и на 9,4% (Р<0,01) превосходили изначальные величины. При этом частота сокращений была практически равной изначальной, что и позволило контракционному индексу в 3,5 раза быть выше по отношению к исходному значению. По истечению 24 часов амплитуда сокращений по-прежнему превосходила свой исходный показатель в 1,9 раза (Р < 0,01), но частота сокращений уменьшилась на 13,3% при идентичности в продолжительности сокращений. Поэтому за счёт сохранившейся разницы в величине амплитуды сокращений контракционный индекс всё ещё в 1,6 раза превосходил исходное значение.
Клиническое выздоровление коров на фоне использования озонированного рыбьего жира сопровождалось отчётливо выраженными явлениями репарации в эндометрии, и при этом большая часть маточных желёз полностью восстанавливалась, а в других наблюдался активный процесс деления эпителиальных клеток.
Сопоставляя показатели крови коров в начале развития болезни и при наступлении клинического выздоровления, на фоне озонотерапии, следует отметить, что наиболее существенные сдвиги в сторону снижения, произошли в количестве лейкоцитов (на 5,8 %) и лимфоцитов (на 7,7%), α- глобулиновой фракции белков (на 40,2 %; Р<0,001) и γ-глобулинов (на 8,7%), иммуноглобулина G (на 6,1%), иммуноглобулина М и иммуноглобулина А в одинаковой степени (на 16,7%), показателя светосуммы радикалов (S) (на 11%) и показателя максимальной интенсивности свечения (Imax) липидных субстратов (на 10,5%). Вместе с этим наблюдалось повышение уровня гемоглобина с 92,90,14 до 93,60,04 г/л (Р<0,001) и общего белка с 72,10,27 до 78,20,16 г/л. Увеличилось и количество эритроцитов на 6%, нейтрофилов на 18,5% и их поглотительная активность на 21,6%, альбуминов на 9,3% (Р< 0,05), бета- глобулинов на 19,5% (Р<0,01), лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови возросли соответственно на 62,7% (Р<0,001) и 4,7%, а показатель АОЗ - Decrement на 7,1%. Изучаемые показатели крови у подопытных животных по истечению десяти дней после клинического выздоровления от изначальных показателей имели отличия в сторону повышения по уровню гемоглобина (на 1,2%) и общего белка (на 11,7%; Р < 0,001), числу эритроцитов (на 10%), нейтрофилов (на 25,3%; Р<0,05) и их фагоцитарной активности (на 13%), альбуминов (на 7 %), β-глобулинов (на 5%). Имели более высокие цифровые значения показатели ЛАСК (на 26,6%) и БАСК (на 2,4%), иммуноглобулин G ( на 1,4%), иммуноглобулин М (на 5,5%), иммуноглобулин А (на 33,3% ; Р < 0,05) и Decrement (на 7,1%). Разницу в сторону уменьшения отмечали в количестве лейкоцитов (на 5,8%), лимфоцитов (на 10,1%), α-глобулинов (на 18,7%; Р<0,001), γ-глобулинов (на 4,8%), недоокисленных продуктов ПОЛ (на 11,3%; Р < 0,05), Imax (на 10,5%).
Указанные изменения в содержании гемоглобина, эритроцитов, общего белка и белковых фракций, показателей перекисного окисления липидов, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, а также активизация фагоцитоза свидетельствуют о положительном влиянии ОРЖ на процесс клинического выздоровления высокопродуктивных коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом. Однако следует отметить, что анализ динамики в морфологическом составе, иммуннобиохимических показателях крови у подопытных животных показал, что местное применение озонированного рыбьего жира (моноозонидотерапия) лишь оказывает благоприятное влияние на затухание локального воспалительного процесса в матке и не обуславливает существенное снижение маркеров патогенеза - гидроперекисей через активацию АОЗ в макроорганизме.
Эффективность применения ОРЖ при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите у коров показана в таблице 2.
Таблица 2 - Терапевтическая эффективность озонированного рыбьего жира при остром послеродовом эндометрите у коров
|
Показатель |
ОРЖ |
10 %-я суспензия трициллина |
|
Количестиво больных коров |
37 |
37 |
|
Выздоровело, коров / % |
34 / 91,9 |
32 / 86,5 |
|
Количество введений |
5,2+0,4 |
5,4+0,3 |
|
Оплодотворилось, коров / % |
30 / 88,2 |
27/ 84,4 |
|
Оплодотворилось после 1-го осеменения, коров / % |
19 / 63,3 |
12 / 44,4 |
|
Коэффициент оплодотворения |
1,6+0,1** |
2,0+0,1 |
|
Количество дней бесплодия |
56,9+6,3 |
73,7+9,1 |
|
Среднесуточный удой в период болезни, кг |
18,2+1,2 |
17,7+0,9 |
**Р<0,01.
Из представленных в таблице 2 данных видно, что процент клинического выздоровления и оплодотворения коров при использовании ОРЖ был выше на 5,4 и 3,8, чем в результате применения с этой целью 10 %-ной суспензии трициллина. Количество дней бесплодия на одно животное в группе с применением ОРЖ было меньше на 16,8 дня, а среднесуточный удой молока выше на 0,5 кг.
Экономическая эффективность лечебных процедур с использованием озонированного рыбьего жира на рубль затрат составила 64,46 рубля.
Результаты эксперимента по определению терапевтической эффективности озонированного рыбьего жира в составе комплексной схемы при субклиническом эндометрите коров представлены в таблице 3.
Таблица 3 - Эффективность лечения больных субклиническим эндометритом коров озонированным рыбьим жиром
|
Показатель |
ОРЖ |
Диоксидин |
|
Количество коров в группе |
24 |
24 |
|
Период бесплодия до лечения, дн. |
64,47,2 |
68,110,3 |
|
Коэффициент оплодотворения после лечения |
1,50,1 |
1,90,3 |
|
Оплодотворилось после 1-го осеменения,% |
66,6 |
58,3 |
|
Оплодотворилось всего,% |
91,7 |
83,3 |
|
Количество дней от начала лечения до стельности |
29,77,3 |
44,87,8 |
Как показывает цифровой материал таблицы 3, сочетанное применение озонированного рыбьего жира с раствором новокаина и суспензии АСД-2 на тривите, обладает более высокой эффективностью в сравнении с 1%-ным раствором диоксидина пролонгированного действия. Так, при использовании ОРЖ удалось восстановить воспроизводительную способность у 91,7% высокопродуктивных коров, больных латентной формой воспаления эндометрия, при этом 66,6% из них оплодотворились в первую половую охоту. Стельность у подопытных коров наступила при коэффициенте оплодотворения 1,8. Это позволило в сравнении с контрольными животными повысить оплодотворяемость при данной патологии на 8,4%, а после первого осеменения на 8,3% и снизить коэффициент оплодотворения на 0,4, а период бесплодия на 15,1 дня.
При профилактике острого послеродового эндометрита у коров установили, что однократное внутриматочное введение ОРЖ коровам после нормального отела предупредило развитие эндометрита у 90%, а после оперативного отделения последа – у 60%. Введение в полость матки фуразолидоновых палочек обеспечивало профилактический эффект соответственно у 81,1% и 53,9% животных. Более высокий результат в профилактике воспаления слизистой оболочки матки удалось добиться в результате двукратного использования ОРЖ в 1 и 3-й дни как после самопроизвольного (92,2%), так и оперативного отделения оболочек плода (69,7%).
После применения ОРЖ оплодотворяемость коров, не заболевших эндометритом, по первой опытной группе на фоне нормального течения родового процесса составила 91,7%, а оперативного отделения последа – 66,6%, что выше, чем у контрольных животных соответственно на 8,3% и 9,5%. Двукратное использование ОРЖ позволило добиться оплодотворения 97,2% коров после нормального отела и 75% после ручного отделения плодных оболочек. Коэффициент оплодотворения коров контрольной группы по окончанию профилактических процедур в случаях нормального отела составил 2,0, а после оперативного отделения оболочек плода 2,9, что соответственно выше в сравнении с животными первой опытной группы на 0,2 и 0,3. Коэффициент оплодотворения у животных второй опытной группы после самопроизвольного и оперативного отделения последа соответственно равнялся 1,4 и 2,1. Количество дней бесплодия у коров первой опытной группы в первом случае оказалось равным 45,8, а во втором – 75,9, что в 1,5 и 1,2 раза меньше, чем данные величины у контрольных животных. У коров второй опытной группы, где ОРЖ применяли двукратно после нормальных и патологических родов, период бесплодия в подгруппах был соответственно 39,9 и 64,8 дня.
Следовательно, внутриматочное введение ОРЖ на 27,5 – 53,3% снижает риск возникновения эндометрита у коров в послеродовой период и способствует оптимизации у них воспроизводительной способности.
3.5 Разработка способа терапии больных эндометритом коров с применением озонированного РАСТИТЕЛЬНОГО РАФИНИРОВАННОГО МАСЛА
Озонированное растительное рафинированное масло, приготовленное путём барботирования 250,0 мл исходного сырья озоно-кислородной смесью с концентрацией в ней озона 20 мг/л обладает более высокими антимикробными свойствами в сравнении с 10 мг/л и 15 мг/л. Повышение концентрации озона в озоно-кислородной смеси до отметки 25 мг/л имело равноценные показатели по антимикробной активности.
При оценке антимикробного действия озонированного рафинированного растительного масла (ОРРМ) в качестве тест-культур использовались штаммы Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli озонированное растительное рафинированное масло антимикробным действием в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. Его действие в течение 24 часов снижает количество жизнеспособных микробных клеток на 4-5 порядков. Растительное рафинированное масло после барботированния озоно-кислородной смесью способствует усилению регенеративных процессов, в рекомендуемых дозах не обладает острой и хронической токсичностью и относится к группе низко реактогенных средств.
Результаты клинического испытания ОРРМ при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите у коров представлены в таблице 4.
Таблица 4 - Сравнительная лечебная эффективность озонированного растительного рафинированного масла и суспензии фуразолидона при остром эндометрите у коров
|
Показатель |
ОРРМ |
10 %-я суспензия фуразолидона |
|
|
Количество коров |
25 |
25 |
|
|
Выздоровело, % |
88,0 |
84,0 |
|
|
Количество введений |
5,4+0,3 |
5,6+0,4 |
|
|
Оплодотворилось, % |
90,9 |
85,7 |
|
|
Коэффициент оплодотворения |
1,6+0,16 |
2,2+0,20* |
|
|
Количество дней бесплодия |
69,8+5,5 |
88,4+7,2* |
* P<0,05.
Из таблицы 4 видно, что при назначении озонированного растительного рафинированного масла клиническое выздоровление наступало у 88% животных, а при использовании с этой целью 10%-ной суспензии фуразолидона – у 84,0%. Кроме того, предлагаемый способ повышает оплодотворяемость коров на 5,2% при более низком коэффициенте (на 0,6; P<0,05) и снижает период бесплодия на 18,6 дня (P<0,05).
3.6 разработка способа профилактики и терапии субинволюции матки и эндометрита у коров с
использованием озонированного изотонического раствора хлорида натрия при парентеральном введении
Барботирование озоно-кислородной смесью 1000,0 мл 0,9%-го раствора хлорида натрия температурой +250С проводили в пластиковой бутылке посредством керамического распылителя. При этом, степень насыщения физиологического раствора озоном была прямопропорциональна его количеству в барботируемой смеси на выходе медицинского генератора озона. Период полураспада озона в изотоническом растворе хлорида натрия при различных исходных его значениях составлял в среднем 30 минут. При этом динамика распада растворенного озона в физиологическом растворе протекала неравномерно. В первые 30 минут распад озона отличался более высокой интенсивностью, а в последующие полчаса резко замедлялся и количество озона уменьшалось всего лишь на 17%.
Величина антимикробной активности озонированного физиологического раствора в отношении музейных штаммов грампозитивных и грамнегативных микроорганизмов прямопропорциональна концентрации растворённого в нём медицинского озона.
Через 48 часов, после третьей внутривенной инфузии ОФР отелившимся коровам, в крови наблюдается достоверное повышение уровня гемоглобина на 2,8% (P < 0,001), количества лимфоцитов на 14,7% (P < 0,05), эритроцитов на 9,9% и коэффициента их деформируемости (IR) на 40,1 % (P<0,001), сегментоядерных нейтрофилов на 7,7%, эозинофилов на 2,2% и моноцитов на 20%, а также снижение числа лейкоцитов на 5%, юных и палочкоядерных нейтрофилов соответственно на 50% и 26,9%, базофилов на 40%. Кроме того, наблюдалось увеличение γ-глобулинов на 32,3% (P<0,01), бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови соответственно на 29,9% (P<0,05) и 32,3% (P<0,001), а также повышение антиоксидантной активности сыворотки крови (Decrement) на 5,8% (P<0,02). Поступивший в сосудистое русло озон обусловил тенденцию увеличения в крови общего белка на 5,8%, α - и β-глобулинов соответственно на 9,9% и 5,9%, произошло усиление процесса фагоцитоза через активацию нейтрофилов на 12,8%.
Следовательно, внутривенное введение 2,0-2,5 мг/л озона растворенного в 0,9%-ном растворе хлорида натрия оказывает положительное влияние на процессы ПОЛ и АОЗ с одновременной активацией факторов клеточной и гуморальной защиты организма при этом улучшается микрогемоциркуляция и не оказывается отрицательного воздействия на процесс гемопоэза в кроветворных органах.
Внутривенное введение озонированного физиологического раствора оптимизирует показатели сократительной деятельности миокарда у коров за счёт улучшения реологических свойств крови и метаболических процессов в сердечной мышце.
Сравнительная оценка влияния озонированного раствора Кребса и обзидана на параметры сократительной активности миометрия больных эндометритом коров приведена в таблице 5.
Как показывает цифровой материал таблицы 5, озон обладает β - адреноблокирующим эффектом. В присутствии ОРК частота сокращений гладких мышц по сравнению с исходным значением увеличилась в 1,6 раза (Р0,05), а в присутствии обзидана в 2,4 раза (Р0,001). В ответ на обработку ОРК амплитуда сокращений миометрия повысилась в 2,1 раза (Р0,05), а на обработку обзиданом в 1,1 раза. Суммарная сократительная активность мышечных структур под воздействием ОРК увеличилась в 3,2 раза (Р 0,01), а под воздействием обзидана в 3,7 раза (Р 0,01).
Таблица 5 - Сократительная активность миометрия больных
эндометритом коров на фоне адреналина под влиянием озонированного
раствора Кребса и обзидана (n=14)
|
Показатель |
Исходные значения |
На фоне ОРК + адреналин, 10-6 г/л |
Исходные значения |
На фоне обзидана + адреналин, 10-6 г/л |
|
Частота сокращений / 10 минут |
7,41,3 |
12,01,7* |
6,71,5 |
16,21,4*** |
|
Амплитуда сокращений, мН |
3,90,7 |
8,41,4* |
9,42,6 |
10,71,9 |
|
ССА, мН/10 мин |
29,87,5 |
95,621,6** |
51,012,3 |
188,841,0** |
*Р 0,05 по отношению к исходному значению; **Р 0,01 по отношению к исходному значению; ***Р 0,001 по отношению к исходному значению.
Оценивая полученный эффект стимуляции работы миометрия на фоне насыщенного озоном раствора Кребса можно заключить, что озон не уступает по данному показателю одному из представителей препаратов обладающих специфическим β-адреноблокаторным действием.
Результаты испытания показали (таблица 6), что трехкратное применение ОФР и окситоцина профилактирует возникновение субинволюции матки и послеродового эндометрита у коров, в сравнении с животными, которым инъецировали физиологический раствор с окситоцином, в 2 раза.
Таблица 6 - Эффективность сочетанного применения ОФР и окситоцина в
профилактике субинволюции матки и эндометрита у коров
|
Группы коров |
Применяемые препараты |
Количество коров |
Заболело |
|||
|
субинволюцией |
эндометритом |
|||||
|
животных |
% |
животных |
% |
|||
|
1 |
ОФР + окситоцин |
26 |
2 |
7,7 |
4 |
15,3 |
|
2 |
ФР + окситоцин |
26 |
4 |
15,4 |
8 |
30,7 |
|
3 |
Без препаратов |
26 |
9 |
34,6 |
11 |
42,3 |
Экономический эффект профилактических мероприятий на рубль затрат составил 49,7 рубля.
Через 6 часов после внутривенной инфузии ОФР с 20 ЕД окситоцина амплитуда, число сокращений за 10 минут, их продолжительность и контракционный индекс соответственно увеличились в 2,1 раза, в 1,5 раза, в 1,2 раза и 4 раза. Назначение животным изотонического раствора хлорида натрия с окситоцином сопровождалось менее значительными изменениями в сторону повышения амплитуды, числа и длительности сокращений, а также контракционного индекса. Совместное применение ОФР и окситоцина уменьшает период инволюции на 5,4 дня (P<0,001), коэффициент оплодотворения на 0,3 (P<0,05) и период бесплодия на12,9 дня.
3.7 Результаты научно-производственных опытов по определению эффективности сочетанного применения озонированного рыбьего жира, озонированного рафинированного растительного масла и озонированного физраствора при эндометрите у коров
Результаты эффективности сочетанного применения ОРЖ и ОФР при остром послеродовом эндометрите у коров, возникшего на фоне нормального отёла, субинволюции матки и после отделения последа показаны в таблице 7.
Данные таблицы 7 указывают, что в течение 15-ти дневного срока использование ОРЖ и ОФР обусловило клиническое выздоровление 96,4% коров, заболевших после нормального отела, у 80% - после задержания плодных оболочек и у 85,7% - на фоне субинволюции матки. Анализ оплодотворяемости у выздоровевших подопытных коров показал, что в первом, во втором и третьем случаях в течение 4-х месяцев после отёла стали стельными соответственно 92,5 %, 75,0 % и 83,3 % из них, а это на 4,3 %, 11,4 % и 10,6 % больше, чем соответствующие величины у контрольных коров.
Таблица 7 - Показатели эффективности озонотерапии при остром
послеродовом эндометрите
|
Показатель |
Заболело коров эндометритом … |
|||||
|
после нормального отела |
после задержания последа |
на фоне острой субинволюции матки |
||||
|
опыт |
контроль |
опыт |
контроль |
опыт |
контроль |
|
|
Больных коров |
28 |
28 |
15 |
15 |
14 |
14 |
|
Выздоровело коров, % |
96,4 |
89,2 |
80,0 |
73,3 |
85,7 |
78,6 |
|
Оплодотворилось, % |
92,5 |
88,0 |
75,0 |
63,6 |
83,3 |
72,7 |
|
Индекс оплодотворения |
1,6+ 0,3 |
1,8+ 0,2 |
1,7+ 0,2 |
2,1+ 0,4 |
2,2+ 0,2 |
3,0+ 0,3 |
|
Кол-во дней бесплодия |
47,1+8,3 |
66,2+ 9,7 |
94,3+ 8,6 |
117,5+ 7,0 |
77,2+ 8,4 |
99,1+ 12,7 |
Коэффициент оплодотворяемости животных опытной группы излечившихся от эндометрита, возникшего после нормального отела, составил 1,6+0,3, после задержания последа – 1,7+0,2 и на фоне острой субинволюции матки – 2,2+0,4. Данные показатели в сравнении с контролем были ниже соответственно на 0,2, 0,4 и 0,8. Количество дней бесплодия у коров, подвергнутых комплексной озонотерапии, оказалось минимальным и составило согласно очередности 47,1+8,3, 94,3+8,6 и 77,2+8,4, что на 19,1, 23,2 и 21,9 дня меньше, чем у контрольных животных.
Результаты применения ОРЖ и ОФР в составе комплексной терапии коров, больных острым эндометритом и цервицитом представлены в таблице 8.
Таблица 8 - Эффективность комплексной озонотерапии при эндометрите,
сопряженным с цервицитом у коров (n = 16)
|
Показатель |
Опыт |
Контроль |
|
Количество введений |
5,2+0,3* |
6,4+0,5 |
|
Период лечения, дн. |
13,6+0,4* |
14,8+0,2 |
|
Выздоровело коров, % |
87,5 |
81,2 |
|
Оплодотворилось коров, % |
92,8 |
84,6 |
|
Коэффициент оплодотворения |
2,0+0,2 |
2,4+0,6 |
|
Дни бесплодия |
72,2+9,5* |
96,6+6,3 |
*P<0,05 - по отношению к контрольной группе.
Применение ОФР и ОРЖ в составе комплексной терапии обусловило наибольший процент выздоровления и оплодотворения коров с данной патологией. Для этого достоверно меньше потребовалось внутриматочных введений ОРЖ и был короче период лечения. У подопытных оплодотворившихся коров период бесплодия был на 24,4 дня (P<0,05) меньше и в среднем после двукратного осеменения они становились стельными.
Немедикаментозный способ комплексной озонотерапии оказал корригирующее влияние на процессы белкового и липидного обменов, а также иммунобиологическое состояние организма коров. При этом в крови выздоровевших животных произошло достоверное увеличение альбуминов на 48,3%, α-глобулинов на 44,4% и бактерицидной активности ее сыворотки на 28,7%. На данном фоне наблюдалось достоверное снижение количества общих иммуноглобулинов на 33%, β-глобулинов на 31,2%, γ-глобулинов на 24,7%, уровня циркулирующих иммунных комплексов С3 и С4 на 29,5% и 41,5%, а также их инфекционности на 25%. Парентеральное введение растворенного озона сопровождалось достоверной ингибицией процесса ПОЛа (светосумма радикалов снизилась на 15,6%, а интенсивность вспышек на 12,2%) и одновременной активацией звеньев АОЗ (Decrement увеличился на 42,8%). Экономическая эффективность сочетанного применения ОРЖ и ОФР в качестве лечебных процедур при остром эндометрите у коров сопряжённым с цервицитом на рубль затрат составила 25,5 рубля.
Результаты сочетанного применения ОФР и озонированного растительного рафинированного масла при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите представлены в таблице 9.
Таблица 9 - Эффективность сочетанного применения озонированно- го растительного масла и озонированного физраствора при остром
эндометрите коров
|
Показатель |
ОРРМ+ОФР |
10 %-я суспензия трициллина + глюкоза |
|
|
Количество коров |
19 |
19 |
|
|
Выздоровело, % |
100 |
100 |
|
|
Количество внутриматочных введений |
4,7+0,23 |
4,8+0,27 |
|
|
Оплодотворилось, % |
94,7 |
89,5 |
|
|
Оплодотворилось после 1-го осеменения, % |
72,7 |
62,5 |
|
|
Коэффициент оплодотворения |
1,4+0,20 |
1,6+0,26 |
|
|
Количество дней бесплодия |
40,3+6,1 |
58,0+8,9 |
Из данных таблицы 9 видно, что при одинаковом количестве внутриматочных введений оплодотворяемость коров после озонотерапии была на 5,2%, а после первого искусственного осеменения на 10,2% выше по отношению к коровам контрольной группы. Коэффициент оплодотворения имел тенденцию к снижению на 0,2, а период бесплодия был короче на 17,7 дня.
Экономический эффект на рубль затрат от сочетанного применения озонированного растительного рафинированного масла и озонированного физиологического раствора составил 33,4 рубля.
Результаты комплексной терапии коров, больных хроническим катарально-гнойным эндометритом, представлены в таблице 10.
Из цифровых данных таблицы 10 видно, что лечебный эффект от применения раствора новокаина, суспензии АСД-2 на тетравите, синэстрола, озонированного рыбьего жира и ОФР на 11% превосходит таковой показатель в контроле. Кроме того, оплодотворяемость коров в этой группе была выше на 8,9%, а коэффициент меньше на 0,3. В среднем число дней от начала лечения и до наступления стельности у подопытных животных было достоверно на 23,9 меньше, чем у коров контрольной группы.
При исчезновении признаков хронического воспаления по отношению к исходным значениям наблюдали увеличение на 7,3% ( Р<0,001)
Таблица 10 - Сравнительная эффективность озонированного рыбьего жира и диоксидина при хроническом эндометрите у коров
|
Показатель |
ОРЖ |
Диоксидин |
|
Количество коров в группе |
18 |
18 |
|
Период бесплодия до лечения, дней |
97,110,1 |
92,813,2 |
|
Наступило клиническое выздоровление,% |
88,8 |
77,8 |
|
Оплодотворилось коров из числа выздоровевших, % |
87,5 |
78,6 |
|
Коэффициент оплодотворения |
1,80,1 |
2,10,1 |
|
Кол-во дней от начала лечения до стельности |
44,63,2 |
68,58,9* |
*Р < 0,05.
общего белка, на 4,1% ( Р>0,1) альбуминов, а α- и γ-глобулинов соответственно на 7,1% (Р>0,1) и 26,2% (Р<0,01).На данном фоне в 1,7 раза (Р<0,001) снизился уровень β-глобулинов и возросло количество в крови опсонинов антигенов на 22,4% (Р<0,001). Повышение в крови иммуноглобулинов активизировало процесс образования комплексов антиген-антитело одинаково в 1,7 раза (Р<0,05 и Р<0,01) и привело к увеличению их размера на 6,7%. Параллельно наблюдалось повышение бактерицидной (в 1,6 раза; Р<0,01) и лизоцимной (в 1,2 раза; Р<0,05) активности сыворотки крови. Затуханию воспаления в слизистом слое матки, повышению защитных функций организма способствовало достоверное ингибирование ПОЛ (на 14,1%) и активирование систем АОЗ (на 12%).
Из достоверных отличий в изучаемых показателях крови выздоровевших и клинически здоровых коров следует отметить более низкое содержание альбуминов (на 18,8%), бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови соответственно на 27,2% и 25,7%, а также на 39,3% было ниже значение I max и, наоборот, на 23,7% оставалось на более высоком уровне количество β-глобулинов.
4 Выводы
1 Неспецифические воспалительные заболевания и функциональные расстройства матки у высокопродуктивных молочных коров в сельхозпредприятиях Северо-Восточного региона Нечерноземной зоны РФ регистрируются соответственно в 4,3-28,8% и 19,1% случаев. При круглогодовом стойловом содержании животных частота заболеваемости эндометритом возрастает в 1,4 раза, индекс оплодотворения в 1,2 раза, продолжительность бесплодия у каждой коровы на 42,3 дня. Это связано с нарушением в их организме равновесия в системе перекисного окисления липидов-антиоксидантной защиты и ослаблением окислительно-восстановительных и иммунных реакций. Заболеваемость коров черно-пестрой породы послеродовым эндометритом в 1,8 раза превышает данный показатель животных холмогорской породы.
2 Воспалительные процессы в матке коров развиваются в результате проникновения в ее полость и воздействия потенциально патогенных и патогенных микроорганизмов: стрептококков (27,5%), стафилококков (23,2%), кишечной палочки (23,2%), споровых анаэробов (13,9%), вульгарного протея (11,1%) и синегнойной палочки (1,1%), в 95,7% случаев представленных в виде смешанных культур. В 8,3% случаев эндометрит имел микозную этиологию. Количество микробных клеток в 1 см3 маточного содержимого при её воспалении колебалось от 5,6 х 104 до 3,2 х 106.
3 Миометрий тела и рогов матки клинически здоровых и больных эндометритом коров обладает идентичной хемореактивностью и высокой β - адренореактивностью к биологически активным веществам (активизация под влиянием ацетилхолина, окситоцина, ПГF2α и угнетение под влиянием адреналина). При развитии воспалительного процесса в матке способность к автоматии и сократимости миометрия снижается в 1,4 и 1,5-2 раза.
4 Для мускулатуры шейки матки характерно отсутствие автоматии, наличие способности α - адренорецепторов повышать свою чувствительность к адреналину под влиянием ПГF2α. Гладкомышечные клетки шейки матки нестельных коров рефрактерны к окситоцину, ПГF2α и адреналину и способны генерировать сокращения под влиянием ацетилхолина, у беременных коров они не реагируют сокращением на присутствие ПГF2α и индуцируют работу в присутствии ацетилхолина, адреналина и окситоцина.
5 Озонированный рыбий жир обладает высокой бактерицидной активностью (микробная нагрузка составляет до 107/мл по ОК) и утеротоническим действием, оказывает положительное влияние на регенеративные процессы в эндометрии. Механизм его антимикробного действия по отношению к золотистому стафилококку и кишечной палочке сводится к локальным повреждениям биополимеров клеточной стенки и цитоплазматической мембраны, что способствует нарушению её избирательной проницаемости. Озонированный рыбий жир обладает утеротоническим действием и оказывает положительное влияние на морфологические структуры эндометрия.
В рекомендуемых дозах озонированный рыбий жир не токсичен для лабораторных и продуктивных животных, не вызывает проявления реакций гиперчувствительности немедленного и замедленного типа, не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.
6 Применение озонированного рыбьего жира путём внутри-маточного его введения коровам при остром послеродовом эндометрите обеспечивает клиническое выздоровление 91,9% животных, оплодотворение 88,2% при индексе 1,6 и продолжительности бесплодия 56,9 дня.
В комплексной терапии коров при хроническом субклиническом эндометрите внутриматочные введения озонированного рыбьего жира позволяют повысить оплодотворяемость выздоровевших животных на 8,4%, снизить коэффициент оплодотворения на 0,4 и продолжительность бесплодия на 15,1 дня.
Санация полости матки коров озонированным рыбьим жиром после патологических родов повышает эффективность профилактических мероприятий на 6,1%, а при бесплодии - повысить оплодотворяемость животных на 18,7% и снизить коэффициент оплодотворения на 0,6.
7 Озонированное растительное рафинированное масло способствует усилению регенеративных процессов, в рекомендуемых дозах не обладает острой и хронической токсичностью и относится к группе низко реактогенных средств. Озонированное растительное рафинированное масло обладает антимикробным действием в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. В течение 24 часов вызывает снижение числа микробных популяций на 4-5 порядков.
8 Использование озонированного растительного рафинированного масла путём внутриматочного введения, в сравнении с 10%-ной суспензией фуразолидона на растительном масле, позволяет повысить эффективность лечебных процедур при остром гнойно-катаральном эндометрите у коров на 4%, их оплодотворяемость на 5,2%, снизить коэффициент оплодотворения на 0,6 и период бесподия на 18,6 дня.
9 В процессе длительного озонирования физиологического раствора не установлено образования токсических хлоркислородосодержащих ионов. Степень насыщения изотонического раствора хлорида натрия озоном прямопропорциональна его значению в озоно-кислородной смеси на выходе генератора озона. Период полураспада озона независимо от его концентрации в физрастворе составляет в среднем 30 минут, а в последующие полчаса количество озона уменьшается на 17%. Антимикробная активность озонированного физраствора in vitro прямопропорциональна концентрации растворённого в нём озона.
10 Трёхкратное внутривенное введение озонированного физраствора с концентрацией озона 2,0-2,5 мг/л оказывает положительное влияние на процессы перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной защиты, обеспечивает активацию факторов клеточной и гуморальной защиты организма коров. При этом улучшается микрогемоциркуляция и оптимизируются показатели сократительной деятельности миокарда. Озонированный раствор Кребса по бета-адреноблокаторному действию на миоциты матки не уступает обзидану.
11 Озонированный физиологический раствор совместно с окситоцином при внутривенном введении в день отела, на 3-й и 5-й дни послеродового периода активизирует сократительную активность матки отелившихся коров, обуславливает снижение их заболеваемости субинволюцией матки и послеродовым эндометритом в 2 раза, способствует оптимизации воспроизводительной функции.
12 Сочетанное применение озонированного физраствора и озонированного рыбьего жира в составе комплексной схемы лечения коров, больных послеродовым эндометритом, обеспечивает клиническое выздоровление 80-96,4% и оплодотворение 75-92,5% животных, уменьшает коэффициент оплодотворения на 0,2-0,8 и продолжительность бесплодия на 19,1-23,2 дня; больных эндометритом и цервицитом - выздоровление 87,5%, снижает коэффициент оплодотворения на 0,4 и продолжительность бесплодия на 72,2 дня. Приводит к исчезновению клинических признаков хронического катарально-гнойного эндометрита у 88,8% коров с восстановлением воспроизводительной способности у 87,5%, коэффициентом оплодотворения 1,8 и периодом бесплодия после лечения 44,6 дня.
13 Внутривенное введение озонированного физраствора и внутриматочная инстилляция озонированного рыбьего жира сопровождается достоверным увеличением в крови коров альбуминов на 48,3%, альфа-глобулинов на 44,4% и бактерицидной активности сыворотки крови на 28,7%, снижение количества общих иммуноглобулинов на 24,7%, уровня крупных циркулирующих иммунных комплексов на 29,5%, а уровня средних и малых циркулирующих иммунных комплексов на 41,5%, их инфекционности на 25%, наблюдается ингибиция процесса перекисного окисления липидов и активация звеньев антиоксидантной защиты.
14 Применение озонированного растительного рафинированного масла и озонированного физраствора в составе комплексной схемы терапии обуславливает клиническое выздоровление больных острым послеродовым эндометритом коров с оплодотворяемостью 94,7%, коэффициентом оплодотворения 1,4 и количеством дней бесплодия 40,3 дня.
15 Экономический эффект на 1 рубль затрат при озонотерапии воспалительных заболеваний матки у коров составил 25,5-64,4 рубля, а при озонопрофилактике – 49,7 рубля.
5 Практические предложения
1 При лечении коров, больных острым эндометритом, для снижения медикаментозной нагрузки на их организм и получения экологически безопасных продуктов питания, использовать интраматочные введения озонированного рыбьего жира или озонированного растительного рафинированного масла в дозе 50-75 мл с интервалом 48-72 часа. Для повышения эффективности выполняемых лечебных процедур их целесообразно сочетать с внутривенной инфузией озонированного физиологического раствора ( О3 2,0-2,5 мг/л) с 20 ЕД окситоцина в количестве 1000,0 мл на 3, 5, и 7-е сутки курса терапии.
2 При терапии коров, больных одновременно послеродовым эндометритом и цервицитом, использовать комплексную схему назначения лекарственных средств, включающую внутриматочное введение озонированного рыбьего жира в дозе 75,0 мл при интервале 48-72 часа с аппликацией слизистой оболочки цервикального канала и трёхкратное интравенозное назначение озонированного физраствора в количестве 1000,0 мл с концентрацией озона 2,0-2,5 мг/л совместно с 20 ЕД окситоцина на 3, 5 и 7-ой дни курса лечения.
3 При комплексной терапии коров, больных хроническим эндометритом в качестве этиотропного средства использовать внутриматочные введения озонированного рыбьего жира в дозе 15-20 мл с интервалом 24-48 часов, а в качестве патогенетического – озонированный физраствор в дозе 1000,0 мл (О3 2,0-2,5 мг/мл) с 20 ЕД окситоцина трёхкратно с интервалом 48 часов.
4 В комплексной схеме лечения коров, больных субклиническим эндометритом, предусматривать внутриматочное введение озонированного рыбьего жира в дозе 10,0 мл.
5 Санацию матки у бесплодных коров проводить путём однократного введения в полость матки озонированного рыбьего жира в дозе 10,0 мл через 6-8 часов после искусственного осеменения.
6 Профилактику послеродового эндометрита у коров проводить путем внутриматочного введения озонированного рыбьего жира в дозе 75,0 мл однократно или двукратно - в день отёла и спустя 72 часа.
7 Для профилактики субинволюции матки и послеродового эндометрита озонированный физраствор в количестве 1000,0 мл с концентрацией озона 2,0-2,5 мг/л инфузировать внутривенно совместно с 20 ЕД окситоцина на 1, 3 и 5-е сутки после отёла.
8 Приготовление озонированных рыбьего жира, растительного рафинированного масла и физиологического раствора необходимо осуществлять в следующих технологических режимах:
- сертифицированный рыбий жир в количестве 400,0 мл барботировать озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 10 мг/л через иглу типа 20198 в течение 60 минут;
- сертифицированное растительное рафинированное масло в количестве 250,0 мл подвергать барботажу озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 20 мг/л посредством керамического распылителя в течение 90 минут;
- для создания концентрации озона 2,0-2,5 мг/л в 1000,0 мл физраствора его барботируют озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 10 мг/л посредством керамического распылителя в течение 30 минут. Время использования озонированного физраствора от момента приготовления не должно превышать 10 минут.
9 Для регистрации маточных сокращений у коров использовать устройство для гистерографии (свидетельство на полезную модель № 27478).
1 Этиология и профилактика бесплодия у коров /А.И.Варганов, А.С.Видякин, И.Г.Конопельцев и др. // Повышение эффект. лечеб.-проф. мероприятий при незараз. болезнях у коров: Сб. науч. тр.- Казань, 1990.- С. 42-45.
2 Сократительная активность изолированного миометрия коров /А.И.Варганов, О.Ю.Беспятых, И.Г.Конопельцев и др. //Науч. аспекты профилактики и терапии болезней с.-х. животных: Матер. науч. конф.- Воронеж, 1996. -Ч.1.- С. 58-59.
3 Сократительная активность изолированных гладких мышц шейки матки коров /О.Ю.Беспятых, И.Г.Конопельцев, М.Л.Дектярёва и др. //Актуальные проблемы соврем. биохимии: Матер. науч. конф.- Киров, 1996.- С.6-7.
4 Функциональные свойства изолированных гладких мышц матки коров /А.И.Варганов, О.Ю.Беспятых, И.Г.Конопельцев, В.И.Циркин //Пермский аграрный вестник: Тез. докл. науч.-практ. конф. учёных и специалистов АПК.- Пермь, 1998.- С.160-161.
5 Беспятых О.Ю. Особенности функционального состояния сократительного аппарата миометрия у коров, больных эндометритом /О.Ю. Беспятых, И.Г.Конопельцев, В.И.Циркин //Пермский аграрный вестник: Тез. докл. науч.-практ. конф. учёных и специалистов АПК.- Пермь, 1998.- С.163-164.
6 Функциональная характеристика гладких мышц шейки матки коров /О.Ю.Беспятых, И.Г.Конопельцев, М.Л.Сазанова и др. //Матер. науч.-произв. конф., посвящ. 190-летию ветерин. образования в России и 100-летию ветеринарной науки.- Санкт-Петербург, 1998.- Ч.II.- С.56-57.
7 Сравнительная характеристика продольного и циркулярного слоёв матки коров /О.Ю.Беспятых, И.Г.Конопельцев, М.Л.Сазанова и др. //Материалы науч.-произв. конф., посвящ. 190-летию ветерин. образования в России и 100-летию ветеринарной науки.-Санкт-Петербург,1998.- Ч.II.-С.57-58.
8 Варганов А.И. Распространение и этиология мастита и эндометрита у коров /А.И.Варганов, И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов //Акуальные пробл. ветеринарной науки: Тез докл., МГАВМиБ.- М.. 1999.- С.7-8.
9 Щелчков П.И. Экономическая эффективность терапии коров, больных острым гнойно-катаральным эндометритом /П.И.Щелчков, И.Г. Конопельцев, А.В.Филатов //Инфек. и инвазион. болезни животных: Матер. междунар. конф., посвящённой 70-летию образования зооинженерного факультета.- Казань, 2000.- С. 222.
10 Конопельцев И.Г. Эффективность озонированного рыбьего жира при эндометрите у коров /И.Г.Конопельцев, С.Ф.Чучалин, А.А.Костяев //Инфек. и инвазион. болезни животных: Матер. междунар. конф., посвящённой 70-летию образования зооинженерного факультета.- Казань, 2000.- С.16-17.
11 Возможности, некоторые результаты и перспектива использования озона при заболеваниях репродуктивных органов и молочной железы у коров /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов, В.Е.Романов и др. //Теорет. и практ. аспекты возникн. и развития болезней животных и защита их здоровья в современ. условиях: Матер. междунар. конф., посвящён. 30-летию ВНИИПФиТ.- Воронеж, 2000.- С.166-167.
12 Конопельцев И.Г. Антимикробная активность и стабильность озонированного рыбьего жира /И.Г. Конопельцев, А.В.Филатов, А.А.Костяев //Реаниматология и интенсив. терапия. Анестезиология.- 2000.- № 4.- С.125.
13 Конопельцев И.Г. Применение озонированного рыбьего жира для профилактики и лечения коров, больных эндометритом /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов, А.А.Костяев //Реаниматология и интенсив. терапия. Анестезиология.- 2000.- № 4.- С.126.
14 Озонированный рыбий жир при эндометрите коров /И.Г. Конопельцев, А.В.Филатов, П.И.Щелчков, И.Н.Гамулинская //Ветеринария.- 2001.- № 2.- С. 35-37.
15 Стабильность озонированного физиологического раствора и его влияние на организм новотельных коров /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов, Н.В.Плетенёв и др. //Матер. междунар. науч.-произв. конф. по акушерству, гинекологии и биотех. репродукции животных.- Санкт-Петербург,2001.-С.73-75.
16 Конопельцев И.Г. Комплексная озонотерапия при эндометрите различного происхождения у коров /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов //Актуальные пробл. болезней молодняка в соврем. условиях: Матер. междунар. науч.-практ. конф.- Воронеж, 2002.- С. 324-325.
17 Влияние озонированного физиологического раствора на организм коров и их воспроизводительную функцию /И.Г.Конопельцев, А.В. Филатов, Н.В.Плетенёв и др. //Здоровье-питание-биологические ресурсы: Мат. междун. науч.- практ. конф.- Киров, 2002.- Т.2.- С. 425-428.
18 Чучалин С.Ф. Распространение патологии послеродового периода у коров-первотёлок /С.Ф.Чучалин, И.Г.Конопельцев //Диагностика, профил. и лечение болезней животных: Матер. Всеросс. науч.-практ. конф.- Киров, 2002.- С.90-91.
19 Конопельцев И.Г. Распространение заболеваний репродуктивных органов у коров в условиях Евро-Северо Восточного региона России /И.Г. Конопельцев, А.В.Филатов, В.П.Ворожцов //Диагностика, профил. и лечение болезней животных: Матер. Всеросс. науч.-практ. конф.- Киров, 2002.- С.41-42.
20 Роль микробного фактора в развитии эндометрита у коров /И.Г. Конопельцев, А.Л.Мухамадьярова, А.В.Филатов, Н.В.Плетенёв //Диагностика, профил. и лечение болезней животных: Матер. Всеросс. науч.-практ. конф.- Киров, 2002.- С.42-43.
21 Применение озона - новый подход в профилактике и лечении коров, больных эндометритом и маститом /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов, Е.В.Копылова и др. //Сельскохозяйств. биотехнология: Матер. II-ой междун. науч.-практ. конф.- Горки, 2002.С.- 406-412.
22 Эффективность применения озона при заболеваниях репродуктивных органов и молочной железы у коров и свиноматок /И.Г. Конопельцев, А.В.Филатов Н.Н.Шулепова и др. //Новiтехнологii оздоровлення природними та преформованими факторами: Матер. конф.- Харкiв.- 2002.- Ч.II.- С. 97-99.
23 Конопельцев И.Г. Влияние озонированного физиологического раствора на сократительную функцию матки коров и их оплодотворяемость /И.Г.Конопельцев, А.И.Попов, Н.В.Плетенёв //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, 2003.- С.305-306.
24 Результаты разработки и внедрения озонотерапии и профилактики болезней матки и вымени у коров /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов, Е.В.Копылова, А..А. Костяев //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, 2003.- С.306-307.
25 Конопельцев И.Г. Озонотерапия при воспалительных заболеваниях матки у коров /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов, Д.А. Троегубов //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, 2003.- С.307-308.
26 Антибактериальная активность озонированного растительного масла in vitro в отношении патогенных штаммов стафилококка, стрептококка и кишечной палочки /Е.В.Копылова, И.Г.Конопельцев, В.А.Платонов, Е.Р.Клабукова //Нижегородский медицинский журнал. Озонотерапия, 2003.- С.24.
27 Конопельцев И.Г. Озонотерапия при одновременном заболевании коров эндометритом и цервицитом /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов, Н.В. Плетенёв //Ветеринария.- 2003.- №.1.- С.35-37.
28 Конопельцев И.Г. Некоторые результаты по внедрению озонотерапии в ветеринарном акушерстве /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов //Пробл. акуш.-гинек. патологии и воспроизвод. с.-х. животных: Матер. междунар. науч.-конф., посвящён. 100-летию А.П. Студенцова. -Казань, 2003. - Ч.1.- С.178-180.
29 Новый прибор для регистрации маточных сокращений /И.Г.Конопельцев, Н.В.Плетенёв, А.В.Филатов, В.Н.Шулятьев //Пробл. акуш.-гинек. патологии и воспроизвод. с.-х. животных: Матер. междунар. науч.-конф., посвящён. 100-летию А.П. Студенцова. -Казань, 2003.- Ч.1.- С.180-182.
30 Патент на изобретение № 2181595 RU, МКИ 7 А 61 К 35/60, А 61 Р 15/00. Способ лечения острого эндометрита у коров /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов; Вятская ГСХА.- 2000112119/13; Заявл. 15.05.2000; Опубл. 27.04.2002; Бюл. № 12.-2002.- 8 с.
31 Свидетельство на полезную модель № 27478 RU, МКИ 7 А 61 D 7/00. Устройство для гистерографии /И.Г.Конопельцев, Н.В.Плетенёв, С.В. Сурков и др.; Вятская ГСХА.- 2002109668/20; Заявл. 11.04.02; Опубл. 10.02.2003; Бюл. № 4. - 2003.- 4 с.
32 Атлас. Инфракрасные спектры веществ, применяемых при изготовлении консервантов для клеток животного и растительного происхождения /А.А.Костяев, Е.П.Сведенцов, А.С.Гордецов и др. -Киров,2000.- 68 с.
33 Атлас инфракрасных спектров криопротектеров /А.А.Костяев, Е.П.Сведенцов, Е.А.Гордиенко и др. - Сыктывкар: Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН, 2000.- 72 с.
34 Методические рекомендации по применению озона для профилактики и терапии заболеваний матки и молочной железы у коров и свиноматок /И.Г.Конопельцев, А.В.Филатов, П.И.Щелчков и др.- Киров, 2002.- 25 с.
Рисунок 1 - Сократительная активность продольной мускулатуры рога
матки коровы, больной эндометритом, под влиянием ацетил-
холина (А), окситоцина (Б), ПГF 2a (В) и адреналина (Г)