эпидемиологическое благополучие
Работа добавлена на сайт samzan.net:
Санитарная микробиология занимается изучением микроорганизмов, содержащихся в окружающей нас среде и способных непосредственно или косвенно неблагоприятно влиять на здоровье людей. Эта наука изучает микрофлору воды, воздуха, почвы, пищевых продуктов и других объектов, определяя их санитарно-эпидемиологическое благополучие. Важнейшими задачами санитарной микробиологии являются определение наличия болезнетворных микробов и ядовитых продуктов их жизнедеятельности в изучаемых объектах, выявление и оценка степени недоброкачественности продуктов, особенно пищевых, изменения которых вызываются микробами. Для решения этих задач необходимы соответствующие нормативы, по которым можно судить о соответствии выявляемой микрофлоры внешней среды определенным гигиеническим требованиям.
В санитарной микробиологии существуют стандартные методы исследования объектов внешней среды, правила взятия проб исследуемого материала, критерий оценки полученных результатов, которые регламентированы специальными инструкциями, государственным общесоюзными стандартами (ГОСТ) и общесоюзным стандартами (ОСТ), различными методическими указаниями.
Санитарная микробиология занимается также разработкой рекомендаций по оздоровлению окружающей среды путем воздействия на ее микрофлору и оценкой степени эффективности мероприятий, проводимых в это направлении.
При исследовании объектов внешней среды в сан тарной микробиологии используют методы количественного определения микробной флоры — общего количества бактерий в исследуемом объекте независимо от их видовой принадлежности, а также методы качественного определения видового состава микроорганизмов. Важней шей задачей санитарной микробиологии является обнаружение в исследуемых объектах патогенных микробов и их токсинов.
Однако непосредственное выявление их представляет значительные трудности. Это связано с тем, что патогенные микробы встречаются во внешней среде непостоянны главным образом во время эпидемических вспышек; количество их бывает обычно незначительным; многие из них трудно культивировать на искусственных питательных средах. Некоторые патогенные микроорганизмы (вирусы, риккетсии) вообще не растут на искусственны средах. Поэтому отрицательные результаты исследования на патогенную микрофлору не всегда свидетельств; ют об ее отсутствии. В связи с этим для санитарно-микробиологического контроля окружающей среды наряд с выявлением отдельных патогенных микроорганизмов определяют общее количество бактерий и санитарно-показательные микроорганизмы. На основании этих косвенных показателей судят о возможном загрязнении внеш ней среды возбудителями заболеван
Санитарно-показательные микроорганизмы являются постоянными обитателями поверхностей и полостей человеческого или животного организма. Обнаружение и в объектах внешней среды свидетельствует о загрязнение выделениями человека или животного. Чем обильнее такое загрязнение, тем больше возможность попадания в объект патогенных микробов. Санитарно-показательными микроорганизмами могут быть только те, которые постоянно и в больших количествах содержатся в выделениях человека или животного, они должны сохранять жизнеспособность во внешней среде в течение сроков, близких к срокам выживания патогенных микробов, выделяемых теми же путями, но не размножаться интенсивно во внешней среде. Они должны также легко обнаруживаться современными и довольно простыми методами исследования. Основными санитарно-показательными микроорганизмами в отношении кишечных инфекций, указывающими на фекальное загрязнение внешней среды (вода, почва), считают бактерии группы кишечных палочек (БГКП). В качестве дополнительных показателей при оценке некоторых объектов определяют наличие фекальных стрептококков (энтерококков) и клостридий.
Кишечные палочки как санитарно-показательные микробы наиболее полно соответствуют требованиям, предъявляемым к таким микроорганизмам. Они являются постоянными обитателями кишечника человека и теплокровных животных, в больших количествах выделяются в окружающую среду. Сроки их выживания во внешней среде немного превышают сроки сохранения патогенных представителей кишечных бактерий в тех же условиях или совпадают с ними.
К БГКП относятся не только эшерихии, но и представители родов цитробактер, энтеробактер, клебсиеллы. Для них характерны следующие признаки: короткие, грамотрицательные, неспорообразующие палочки, на среде Эндо они растут в виде темно-красных колоний с металлическим блеском или без него либо в виде розовых колоний с темным центром; сбраживают лактозу и глюкозу при 37°С в течение 24 ч с образованием кислоты и газа, не обладают оксидазной активностью. Отрицательная оксидазная проба позволяет дифференцировать семейство Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитов, обладающих ферментом оксидазой.
Все БГКП попадают во внешнюю среду только из кишечника человека и животных. Наибольшее санитарно-показательное значение в этой группе имеет E. coli, присутствие которой, например, в питьевой воде, рассматривается как признак свежего хозяйственно-бытового загрязнения, несомненно, фекального происхождения.
Присутствие энтерококков считают дополнительным показателем фекального загрязнения воды и других объектов. Однако их выделение требует сред более сложных при приготовлении и растут они медленнее. Энтерококки являются нормальными обитателями кишечника, но выделяются во внешнюю среду в меньших количествах, чем кишечные палочки. Энтерококки быстрее отмирают в воде и почве. Как правило, они не размножаются в этих объектах, что позволяет рассматривать их как показатель свежего фекального загрязнения.
К санитарно-показательным клостридиям относят группу грамположительных, спорообразующих анаэробных палочек, редуцирующих сульфит на сульфит-неомицинполимиксиновой среде (СПН) при инкубации в условиях 45°С в течение 12—24 ч. Эта группа в основном представлена CI. perfringens, которые встречаются в кишечнике большинства людей в значительно меньших количествах, чем кишечная палочка. Клостридии более, устойчивы, чем не образующие спор БГКП и энтерококки. Определение санитарно-показательных клостридий рекомендуют проводить в почве и воде, используемой на предприятиях пищевой промышленности, а также при выборе новых источников водоснабжения.
Санитарно-показательными микроорганизмами загрязнения воздуха закрытых помещений являются стафилококки (Staph, aureus), а также зеленящие и гемолитические стрептококки, постоянно обитающие на слизистой оболочке верхних дыхательных путей и выделяющиеся в воздушную среду при разговоре, кашле, чиханье. Во внешней среде стрептококки сохраняют жизнеспособность в течение примерно тех же сроков, что и возбудители дифтерии, а стафилококки — даже дольше. Чем большее количество стрептококков обнаруживают в воздушной среде, тем вероятнее возможность заражения человека воздушно-капельными инфекциями. Нарастание обсемененности воздуха Staph, aureus и частое его обнаружение свидетельствуют о санитарно-эпидемиологическом неблагополучии. В лечебных учреждениях вторичным источником обсеменения воздуха Staph, aureus могут быть загрязненные постельные принадлежности, белье, с которых эти микроорганизмы попадают в воздух, Наиболее полную картину воздушно-капельного загрязнения воздуха дает определение и стрептококков и стафилококков. Однако ввиду того, что стрептококки довольно трудно культивировать, в лабораторной практике ограничиваются выделением Staph, aureu
Развитие исследований в области аэробиологии показало, что в воздухе закрытых помещений наряду с большим количеством сапрофитных микроорганизмов могут находиться патогенные бактерии и вирусы; менингококки, патогенные стафилококки, возбудители дифтерии, туберкулеза, коклюша, вирусы гриппа, оспы, аденовирусы и др. Санитарно-бактериологические исследования воздуха проводят в плановом порядке в яслях и детских садах, больницах, операционных, аптеках, школах, кинотеатрах. Исследуют также атмосферный воздух.
При санитарно-бактериологическом исследовании воздуха проводят:
1) определение общей бактериальной об- семененности воздуха (общее число бактерий в 1 м3);
2) выявление саиитарно-показательных микроорганизмов;
3) по эпидемическим показаниям выделение вирусов и патогенных бактерий из воздуха закрытых помещений;
4) при исследовании атмосферного воздуха дополнительное определение качественного состава микрофлоры с учетом наличия спорообразующих аэробов и анаэробов, которые служат показателем загрязненности воздуха микроорганизмами почвы.
Методы отбора проб воздуха для бактериологического исследования подразделяют на:
1) аспирационные, основанные на активном просасывании воздуха с помощью различных приборов;
2) седиментационные, основанные на принципе механического оседания микробов.
Пробы воздуха берут на уровне сидящего или стоящего человека, выделяя одну точку взятия проб на каждые 20 м2 площади.
Аспирационные методы используют при исследовании воздуха как закрытых помещений, так и атмосферного. Наиболее широкое применение в последние годы получил аппарат Кротова (рис. 44), который позволяет пропускать от 25 до 50 л воздуха в минуту. В аппарате Кротова воздух засасывается сквозь узкую щель крышки прибора и ударяется о поверхность плотной питательной среды в чашке Петри, которая медленно вращается на подвижном столике. Поверхность питательной среды равномерно обсеменяется микроорганизмами.
Существуют также другие приборы: ПОВ-1, бактериоуловител Речменского, Дьяконова, в которых воздух просасывается с помощью насосов, воздуходувок, аспираторов через материал, задерживающий бактериальный аэрозоль. В качестве такого материала используют стерильную воду, питательные среды, стерильный ватный тампон, пенистые или порошковые фильтры из растворимых материалов. Объем просасываемого воздуха измеряют с помощью газовых часов. После взятия пробы 1 мл жидкости засевают в чашку с мясо-пептонным агаром для определения общего числа бактерий. Через 24 ч инкубации в термостате при 37°С подсчитывают число колоний и делают пересчет на 1 м3 воздуха. С целью определения санитарно-показа^ тельных микроорганизмов и патогенных микробов делают посевы на различные элективные среды.
Седиментационный метод наиболее старый (метод оседания Коха). Его используют только при исследовании воздуха закрытых помещений. Для этого чашки Петри с питательными средами при исследовании общей бактериальной загрязненности воздуха оставляют открытыми в местах отбора проб в течение 5—10 мин. По окончании экспозиции чашки зарывают и помещаю в термостат при 37°С на 24 ч, а затем при комнатной температуре выдерживает еще сутки. О степени загрязненности воздуха судят по количеству выросших колоний. Несмотря на неточность, данный метод пригоден для сравнительных оценок чистоты воздуха.
В настоящее время бактериологическое исследование воздуха проводится в основном в больницах согласно «Инструкции по бактериологическому контролю комплекса санитарно-гигиенических мероприятий в лебечно- профилактических учреждениях: отделениях хирургического профиля, в палатах и отделениях реанимации и интенсивной терапии» (Приложение к приказу № 720 от 31.07.1978 г. МЗ СССР). Определяют общую бактериальную обсемененность и наличие Staph, aureus.
Для установления общей бактериальной обсемененности воздуха закрытых помещений, согласно инструкции, отбирают две пробы воздуха с помощью аппарата Кротова по 100 л каждая.
С целью исследования воздуха на наличие стафилококка берут пробы воздуха на две чашки с желточно-солевым агаром или молочно-желточно-солевым агаром, пропуская 250 л воздуха.
Санитарно-бактериологическое исследование воздуха имеет большое значение в хирургических отделениях больниц, родильных домах, где имеется опасность возникновения внутрибольничной инфекции. Обнаружение Staph, aureus в этих отделениях является недопустимым. Нарастание количества Staph, aureus определенных фаготипов следует рассматривать как грозный предвестник возможного появления госпитальной инфекции.
Выявление вирусов и патогенных бактерий из воздуха закрытых помещений проводят по эпидемиологическим показаниям при оценке эффективности обеззараживания воздуха, при контроле санитарно-микробиологического содержания больничных учреждений и т. д.
Для выявления микобактерий туберкулеза отбор проб производят при помощи прибора ПОВ-І, в котором в качестве улавливающей используют среду Школьниковой. Исследуют 250—500 л воздуха (см. Микробиологическая диагностика туберкулеза).
Эталоном чистоты атмосферного воздуха считают показатель бактериальной обсемененности в зеленой зоне (зеленая зона ВДНХ—350 микробов в 1 м3). Пример значительного обсеменения воздуха — места скопления людей и транспорта. Воздух операционных до начала операции должен содержать не более 500, а после нее — не более 1000 микробов в 1 м3. Staph, aureus не должны обнаруживаться при исследовании 250 л воздуха. В предоперационных и перевязочных до начала работы количество микробов в 1 м3 не должно превышать 750. В больничных палатах летом число микробов должно быть менее 3500, а зимой — менее 5000 в 1 м3. Здесь допускают наличие стафилококков в воздухе: летом — 24, зимой — 52 при исследовании 250 л воздуха.
Санитарно-бактериологическому исследованию подлежит питьевая вода централизованного водоснабжения, колодцев и родников (децентрализованное водоснабжение), вода открытых водоемов (реки, озера, пруды), плавательных бассейнов, минеральная вода и сточные воды. Эти исследования проводят при систематическом наблюдении за качеством воды централизованного водоснабжения, по эпидемическим показаниям, а также при выборе источника водоснабжения.
Методика отбора проб воды, хранения их и доставки в лабораторию, стандартные методы исследования качества воды регламентированы ГОСТ 18963—73. Санитарно-бактериологическое исследование воды включает определение:
1) общего количества бактерий в 1 мл воды,
2) количество санитарно-показательных микроорганизмов БГКП: коли-индекса и коли-титра. По эпидемиологическим показаниям определяют также наличие патогенных микробов в воде.
Правила взятия пробы для бактериологического исследования. Достоверность результатов бактериологического исследования воды и правильность гигиенических заключений определяются:
1) выбором места отбора проб воды;
2) соблюдением правила отбора;
3) хранением и транспортировкой проб в лабораторию.
Пробы воды отбирают с соблюдением правил стерильности, в стерильные бутыли или специальными приборами — батометрами.
Пробы питьевой воды для бактериологического исследования берут в количестве 400—500 мл, при исследовании сточных вод— 100 мл, а для определения патогенных энтеробактерий (сальмонеллы, шигеллы) и кишечных вирусов— 1л.
Воду для исследования необходимо доставить как можно быстрее, не позднее 2 ч с момента взятия.
Исследование воды на общую бактериальную обсемененность и определение санитарно-показательных микроорганизмов
Общее количество бактерий в воде определяют путем посева воды в стерильные чашки Петри, в которые затем добавляют расплавленный и остуженный до 42—45°С агар. При исследовании чистой воды засевают 1 мл, а при исследовании загрязненных вод делают посевы по 1 мл определенных разведений воды (1 : 10— 1 : 100 и более). Чашки помещают в термостат при 37°С на 24 ч (или при 20—22°С на 48 ч) и по истечении срока инкубации подсчитывают все колонии, выросшие как на поверхности агара, так и в глубине его, выбирая чашки, в которых наиболее удобно произвести подсчет колоний.
Общее количество бактерий определяют в пересчете на число колоний, выросших при посеве 1 мл воды. Считают, что в чистой воде общее количество бактерий должно быть не более 100 в 1 мл воды, в воде сомнительной чистоты— от 100 до 1000, в загрязненной — свыше 1000. Общее количество бактерий в 1 мл водопроводной воды не должно превышать 100; для колодцев и открытых водоемов допускают до 1000.
Определение санитарно-показательных микроорганизмов. Интенсивность фекального загрязнения воды характеризуют два показателя:
1) индекс кишечной палочки (коли-индекс)—количество БГКП, обнаруженное в 1 л воды;
2) титр кишечной палочки (коли-титр) — наименьшее количество миллилитров воды, в котором обнаруживают БГКП.
Для определения количества БГКП используют метод мембранных фильтров, который основан на концентрировании определенных объемов воды на мембранных фильтрах с последующим посевом их на среду Эндо. Бродильные (титрационные) методы, предусматривают посев определенного количества воды на среды обогащения, а метод прямого посева — определенных разведений воды на среду Эндо. Бродильный метод удлиняет срок анализа на сутки.
Выбор метода исследования зависит от качества воды. Чистые воды, которые хорошо фильтруются (вода централизованного водоснабжения), исследуют методом мембранных фильтров. Если воды содержат различные примеси, применяют метод бродильных проб. Метод прямого посева на среду Эндо используют редко, при исследовании сильно загрязненных проб воды.
При определении БГКП учитывают все разновидности кишечной палочки, дифференцируя колонии по лактозному признаку, оксидазному тесту и ферментации глюкозы.
Метод мембранных фильтров. Сущность метода заключается в концентрации БГКП из определенного объема воды на мембранном фильтре, выращивании их при 37°С на среде Эндо, дифференциации выросших колоний и определении коли-индекса. Мембранные фильтры представляют собой проницаемые для воды нитроцеллюлозные пленки с порами разного диаметра в зависимости от номера фильтра. Для фильтрации воды централизованного водоснабжения используют фильтры № 2 и 3, диаметр пор которых меньше диаметра бактериальной клетки, а для, загрязненной воды применяют еще и фильтры № 6, задерживающие крупные частицы, взвешенные в воде. Перед употреблением фильтры стерилизуют 10 мин кипячением в дистиллированной воде, меняя ее 3—5 раз. Мембранные фильтры помещают в фильтровальный аппарат Зейтца. Фильтруют не менее 300—500 мл чистой воды, 100—10—: 1 мл или по 1 мл соответствующих разведений более загрязненной воды. После фильтрации пробы воды мембранный фильтр переносят на среду Эндо, разлитую в чашки Петри. Поверхность фильтра с осевшими на не микробами должна быть обращена вверх. Посевы выдерживают в термостате при 37°С в течение 18—24 ч. Если на фильтрах вырастают колонии, характерные для БГКП: красные, темно-красные с металлическим блеском или без него (лактозоположительные), из них готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При наличии грамотрицательных, не образующих спор палочек ставят тест на наличие оксидазы. Число колоний, не обладающих оксидазной активностью, подсчитывают и при содержании; их более трех в 1 л питьевой воды и более десяти в 1 л воды колодцев немедленно дают ответ о наличии БГКП в количестве, превышающем норму. Сомнительные колонии— розовые с темным центром и бесцветные, содержащие грамотрицательные палочки и дающие отрицательный результат пробы на оксидазу, пересевают в полужидкую среду с глюкозой (2—3 колонии). При образовании кислоты и газа через 5—6 ч пребывания в термостате при 37°С выделенную культуру также относят к БГКП.
Отрицательный ответ об отсутствии в пробе воды БГКП дают при отсутствии роста на фильтре колоний кишечной палочки через 18—24 ч, а также рри наличии колоний, обладающих оксидазной активностью.
Результаты анализа выражают в виде коли-индекса, который высчитывают, умножив количество выросших колоний БГКП на 1000 и разделив на объем профильтрованной воды.
При исследовании воды открытых водоемов и сточных вод на фильтре подсчитывают только число лактозоположительных колоний кишечной палочки — ЛКП (темно- красные с металлическим блеском и без него). Наличие характерной морфологии, отрицательного теста на оксидазу свидетельствует о присутствии БГКП. При нетипичном росте, отсутствии реакции на оксидазу и в спорных случаях производят посев подозрительных колоний на полужидкую среду с лактозой и определяют ферментацию до кислоты и газа при 37°С. Учетом только лактозоположительных кишечных палочек можно закончить исследование воды водоемов (пресных и соленых) в местах хозяйственно-бытового и культурного водопользования, на этапах очистки питьевой воды, необеззараженных сточных вод и воды открытых водоемов.
Все БГКП (лактозоположительные и лактозоотрицательные варианты) определяют при изучении процессов самоочищения воды, при изучении искусственных водоемов (водохранилищ и каналов), выборе нового источника водоснабжения, преобладании на фильтре розовых оксидазоотрицательных колоний.
Титрационный (бродильный) метод. Сущность бродильного метода заключается в посеве определенного количества воды на жидкие питательные среды накопления, подращивании БГКП при 37° с последующим высевом на плотные питательные среды (среда Эндо), дифференциации выросших колоний и определении БГКП в 1 л воды. Выбор объема исследуемой воды зависит от характера водоисточника. Выбранные объемы проб засевают во флаконы и пробирки с глюкозопептонной или лактозопептонной средой, внося 100 и 10 мл воды в 10 мл или 1 мл концентрированной среды, а 1 мл воды или 1 мл соответствующего разведения воды — в пробирки с 5 мл среды обычной концентрации. Инкубируют при 37° С в течение 24 ч и делают высев на среду Эндо (с расчетом получения роста изолированных колоний) из каждого флакона и пробирки, где наблюдают помутнение, образование кислоты и газа или только помутнение и образование кислоты. Посевы выдерживают при 37°С в течение 16— 18 ч. При росте на среде Эндо темно-красных с металлическим блеском или без него колоний, в которых при микроскопии обнаруживают грамотрицательные палочки, не обладающие оксидазной активностью, ответ о присутствии БГКП выдают через 40—42 ч. При росте на среде Эндо розовых или бесцветных колоний, оксидазонегативных, содержащих грамотрицательные палочки, их отсевают на среду с глюкозой. Образование кислоты и газа в пробирке с этой средой через 24 ч инкубирования при 37°С свидетельствует о наличии БГКП. Результаты исследования выражают коли-индексом, величину которого определяют по таблице.
Отрицательный ответ «БГКП не обнаружены» может быть выдан при отсутствии изменения среды накопления (или при наличии помутнения без образования кислоты) через 24 и 40—42 ч, если на среде Эндо нет роста колоний, характерных для БГКП. Оксидазоположительные красные или розовые колонии, или оксидазоотрицательные колонии, содержащие грамположительные палочки или кокки не учитываются.
Определение оксидазной активности колоний БГКП проводят непосредственно на мембранном фильтре, который переносят на фильтровальный лист бумаги и смачивают реактивом. Через 2—5 мин его помещают обратно на среду Эндо и учитывают результаты. При отрицательной реакции цвет колоний не меняется, при положительной— колонии изменяют цвет на сине-фиолетовый.
При бродильном методе фильтровальную бумагу смачивают реактивом, часть колонии со среды Эндо переносят штрихом на бумагу. При положительном результате реакции не позднее 1—2 мин штрих синеет, при отрицательном — не меняется. Реактив можно закапать непосредственно на колонию или сектор посева на среде Эндо. Следует помнить, что реактив обладает бактерицидными свойствами, поэтому колонии для дальнейших исследований непригодны.
При отсутствии реактива для оксидазного теста делают прямой посев или высев со среды накопления на модифицированную среду Эндо с молоком или желатином. Дифференцируют БГКП от других грамотрицательных палочек, которым не придают санитарно-показательного значения, по наличию у последних протеолитической активности: образованию кратера на среде с желатином или зоны протеолиза (просветления вокруг колонии) на среде Эндо с молоком.
Дополнительные исследования, выявляющие наличие фекальных кишечных палочек (ФКГІ) —показателей свежего фекального загрязнения, проводят путем постановки теста ферментации лактозы до кислоты и газа при 43— 45°С, засевая колонии в желчно-лактозную среду с бриллиантовым зеленым, или лактозный бульон с борной кислотой, или полужидкую среду с лактозой. Наличие кислоты и газа при инкубации в течение 24 ч при 43—44,5°С, а также отсутствие роста на среде Козера (отношение к солям лимонной кислоты) указывает на свежее фекальное загрязнение воды.
Качество питьевой воды определено ГОСТ 2874-73, в котором предусмотрено как норма:
1) общее количество бактерий в 1 мл воды не более 100;
2) количество БГКП в 1 л воды (коли-индекс) на плотных питательных средах (при использовании метода мембранных фильтров) не более 3, а при использовании жидких сред накопления коли-титр не менее 300. Вода питьевая, забираемая из колодцев, регламентирована «Санитарными правилами по устройству и содержанию колодцев» (Минздрав СССР, 1975), в которых предусмотрено БГКП не более 10 в 1 л, а коли-титр не менее 100. ГОСТ 17.1.3.03-77 определяет правила выбора и оценки качества источников централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения. Вода поверхностных источников хозяйственно-питьевого водоснабжения не должна содержать возбудителей кишечных заболеваний, а число БГКП должно быть не более 10 000 в 1 л воды. Вода плавательных бассейнов отвечает требованиям рекомендации Минздрава СССР 1976 г., если ее коли-титр не менее 100. Минеральные воды должны иметь коли-титр более 300 и микробное число не более 100 в 1 л (ГОСТ 13273-67). Сточные воды считаются достаточно обеззараженными при коли-титре не менее 1, коли-индексе не более 1000 в 1 л, при наличии остаточного хлора не менее 1,5 мг/мл.
Почва является основным резервуаром микроорганизмов в природе. Качественный состав микрофлоры почвы исключительно разнообразен. Микробиологическое исследование почвы имеет важное значение.
Оно проводится:
1) при строительстве жилых объектов, прежде всего детских учреждений (детские сады, пионерские лагеря и др.);
2) при решении вопросов о водоснабжении и канализации населенных мест;
3) для контроля за работой сооружений по очистке населенных мест;
4) для санитарной оценки методов обезвреживания нечистот и твердых отбросов;
5) при эпидемиологических обследованиях для выяснения путей заражения и сроков выживания патогенных микробов в окружающей среде, в том числе и в почве;
6) для санитарной оценки почв, загрязненных различными химическими веществами.
В зависимости от поставленной задачи проводят краткий или полный санитарно-микробиологический анализ почвы (Инструкция по санитарно-бактериологическому исследованию почвы, 1958; «Методические указания по санитарно-микробиологическому исследованию почвы», № 1446, 1976). Краткий санитарно-микробиологический анализ почвы включает определение:
1) общего количества бактерий, растущих на мясо-пептоном агаре;
2) санитарно-показательных микроорганизмов — БГКП;
3) термофильных бактерий.
Отбор и предварительная обработка проб почвы. Для изучения микробного загрязнения на каждые 1000 м2 территории выделяют два участка по 25 м2 каждый. Один из них должен находиться на чистой территории, другой — на предполагаемом участке загрязнения. Отбирают средний образец почвы, состоящий из отдельных проб, взятых в 3—5 точках по диагонали, или в 5 точках, взятых под углом и в центре участка. Отдельную пробу берут из поверхностного слоя почвы глубиной до 20—25 см, снимая верхний слой. После чего лопатку прожигают, берут кусок почвы и от него в стерильную посуду отделяют пробу почвы массой 200—300 г. Из отдельных хорошо перемешанных проб почвы составляют средний образец, масса которого должна быть не менее 1 кг. От среднего образца отделяют 200—300 г и вносят в стерильную посуду. Затем почву дробят в стерильной ступе, просеивают через стерильное сито, отбирают навеску для исследования от 1 до 30 г, в зависимости от предполагаемой степени загрязненности почвы.
Определение общего количества бактерий. Этот показатель имеет условное санитарно-гигиеническое значение. Делают разведения почвенной навески от 1:10 до 1 : 10 000— 1 : 100 000. Из каждого разведения производят посев 1 мл в стерильную чашку,» в которую вносят расплавленный и остуженный до 45°С агар, а затем перемешивают. После застывания агара посевы помещают в термостат на 48 ч при 28—30°С. Для подсчета выросших колоний берут те разведения, при которых на чашке выросло от 50 до 150 колоний. После подсчета колоний делают пересчет на 1 г почвы.
Определение БГКП. Для определения фекального загрязнения почвы используют два метода:
1) титрационный;
2) метод мембранных фильтров.
Определение БГКП в почве титрационным методом. Из первого разведения почвенной суспензии (1:10) 10 мл засевают в 50 мл среды Кесслера, что соответствует посеву 1 г почвы. Из следующих разведений засевают по 1 мл в 9 мл той же среды. Посевы выращивают 48 ч при 43°С. Отсутствие газообразования и помутнения в бродильных сосудах со средой через 48 ч позволяет дать отрицательный ответ. При наличии в средах газообразования и помутнения или только помутнения производят высев на чашку со средой Эндо. Чашки инкубируют 24 ч при 37°С. Типичными для кишечных палочек являются колонии красного или розового цвета. Дальнейшую идентификацию колоний проводят аналогично исследованию воды на наличие кишечных палочек.
Ускоренное определение кишечных палочек методом мембранных фильтров. Этот метод применяют при исследовании малозагрязненных почв. Через мембранные фильтры № 3 пропускают 5—10 мл почвенной суспензии из разведения 1:10. Дальнейший ход аналогичен определению этим методом кишечных палочек в воде. Результат бактериологического исследования выражают коли-индексом или коли-титром. Под коли-индексом подразумевают количество кишечных палочек в 1 г почвы, под коли-титром — наименьший объем почвы, в котором еще обнаруживают кишечную палочку.
Определение термофильных бактерий. Термофильные бактерии попадают в почву вместе с созревшими органическими удобрениями (навоз, компост). Сточные жидкости, испражнения, свежий навоз богат кишечной палочкой, но бедны термофилами. Поэтому почвы, содержащие много кишечных палочек и мало термофилов, могут рассматриваться как загрязненные фекалиями. Учет термофильных бактерий производят на агаре, который разливают толстым слоем. Посевы делают из разведений почвы 1 : 10— 1 : 100 000 в количестве 1 мл на две чашки с агаром. Выращивают 24 ч при 60°С. Пересчет термофильных микробов на 1 г почвы производят аналогично расчету при изучении общей обсемененности.
Помимо описанных показателей в почве, можно определить также титр CI. perfringens, хотя значение этого показателя в целях определения санитарного состояния почвы невелико в связи с тем, что CI. perfringens может не только долго сохраняться, но и размножаться в почве. Однако наличие этого микроба косвенно может указывать на присутствие других клостридий, например возбудителей столбняка — CI. tetani и ботулизма — Gl. botulinum.
Микробиологические исследования проводят в комплексе с химическими, определяя содержание нитрифицирующих бактерий, аммонифицирующих, аэробных целлюлозоразлагающих микроорганизмов, а также присутствие аммиака и нитритов.
В случае необходимости, по эпидемиологическим показаниям, определяют наличие в почве патогенных энтеробактерий, возбудителей пищевых токсикоинфекций, проводят санитарно-вирусологические исследования.
Пищевые продукты, содержащие большое количество питательных веществ, являются благоприятной средой для существования и размножения микробов. Микрофлора, которая встречается в пищевых продуктах, может быть специфической и неспецифической. Специфическая микрофлора состоит из тех микроорганизмов, которые обусловливают вкусовые и питательные свойства продуктов, например молочнокислые бактерии в кисломолочных продуктах и квашеных овощах. Неспецифическая микрофлора представлена случайно попавшими в пищевые продукты микробами из внешней среды. Некоторые из них не оказывают влияния на пищевые продукты, другие делают их непригодными для употребления и даже вредными, например, картофельная палочка, вызывающая «тягучую болезнь хлеба», бактерии, являющиеся причиной ослизнення напитков, и др. Санитарно-показа- тельные и патогенные микроорганизмы также относят к неспецифической микрофлоре.
Попадание в пищевые продукты патогенных микробов, например, стафилококков, возбудителя бсітулизма, сальмонелл, приводит к возникновению у человека пищевых отравлений. Пищевые продукты могут быть факторами передачи кишечных инфекций: брюшного тифа и паратифов, дизентерии, холеры, а также бруцеллеза, туляремии, Ку-лихорадки, туберкулеза и др.
Санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов производят в плановом порядке с целью определения соответствия продукта требованиям ГОСТ, временным техническим условиям (ВТУ), и другим установленным кондициям, а также по эпидемиологическим показаниям: при пищевых отравлениях, обнаружении недоброкачественности продукта.
При плановых исследованиях пищевых продуктов определяют общее количество бактерий и степень обсеменения санитарно-показательными бактериями (БГКП). Исследование по эпидемиологическим показаниям преследует цель установления возможных возбудителей пищевых токсикоинфекций.
Отбор проб пищевых продуктов для санитарно-бактериологического исследования проводится в соответствии с существующими ГОСТ. Молоко и молочные продукты из тары большой емкости отбирают в количестве не менее 0,25 л в стерильные колбы. Продукты в мелкой упаковке берут целиком. Пробы сливочного масла и сыров отбирают при помощи стерильного щупа из глубины продукта. Яйца берут целиком 2 штуки из партии, яичный порошок—50 г в стерильные колбы. Мясо и мясные продукты отбирают из толщи продукта при помощи стерильного ножа или скальпеля в количестве не менее 200 г. Тушки птицы берут целиком, колбасу — целым батоном или куском, вырезанным стерильным ножом. Пробы крупной рыбы отбирают вместе с головой и частью брюшной полости. Мелкую рыбу берут целиком. Отобранные пробы мяса и рыбы упаковывают в стерильный пергамент, а затем в оберточную бумагу. Мясные и рыбные полуфабрикаты берут в количестве 1 — 2 штук в стерильные банки. Холодные закуски, первые и вторые горячие блюда, пробы кондитерских изделий с кремом отбирают по 1 порции в стерильную посуду. Отобранные пробы пломбируют и по возможности быстрее доставляют в лабораторию. Из отобранных проб в лаборатории берут навеску в 25—30 г. Навеску из плотных продуктов измельчают с небольшим количеством 0,1% пептонной воды или изотонического раствора хлорида натрия в гомогенизаторе или растирают со стерильным кварцевым песком в стерильной ступке. Полученную взвесь отстаивают и надосадочную жидкость используют для дальнейших исследований. Жидкие и полужидкие продукты тщательно размешивают. Продукты с резко кислой реакцией подщелачивают 10% раствором гидрокарбоната натрия до нейтральной реакции (рН — 7,0— 7,2), Сливочное масло, кремы, мороженое и подобные им продукты расплавляют при температуре 40—43°С. Из подготовленных образцов продуктов готовят ряд последовательных 10-кратных разведений, которые используют для дальнейших исследований.
Определение общего микробного обсеменения проводят путем посева в стерильные чашки Петри по 1 мл определенных разведений продукта (1:10, 1 : 100 и т. д.). Под общим микробным обсеменением подразумевается количество аэробов и факультативных анаэробов, дающих рост на мясо-пептонном агаре при 37°С в перерасчете на 1 г или 1 мл продукта.
Определение БГКП. Посевы различных разведений продукта производят на модифицированную среду Кесслер или Хейфеца. Среда Кесслер разлита по пробиркам с поплавками, содержит глюкозу и генциановый фиолетовый, который задерживает рост молочно-кислых бактерий. В состав среды Хейфеца входят маннит и индикатор, изменяющий цвет среды при расщеплении маннита. При росте кишечной палочки на среде Кесслер в поплавке образуется газ, и она мутнеет; среда Хейфеца изменяет цвет. Пробы молочных продуктов, кондитерских изделий, салатов, рыбы засевают на среду Кесслер, мясо и мясные продукты — на среду Хейфеца. Посевы инкубируют в термостате при 43°С в течение 18—20 ч. При наличии характерного роста на указанных средах производят пересев на среду Эндо. На среде инкубируют посевы в термостате при 37°С в течение 24 ч, после чего микроскопируют выросшие колонии. Обнаружение грамотрицательных палочек, дающих помутнение и газообразование в среде Кесслер, изменение цвета среды Хейфеца свидетельствуют о наличии в исследуемом разведении БГКП. Титр кишечной палочки определяют по соответствующим таблицам на основании посевов 10-кратных разведений.
Молоко и молочные продукты могут содержать различные микроорганизмы. При изготовлении кисломолочных продуктов в молоко после пастеризации добавляют закваску, которая характеризует специфическую микрофлору данного продукта. Мезофильные молочнокислые стрептококки используют для приготовления творога, сметаны, ряженки, простокваши; молочнокислые ацидофильные палочки— для изготовления ацидофильных продуктов; болгарскую палочку — для приготовления южной простокваши; дрожжи й молочнокислые бактерии —в производстве кефира. Неспецифическую микрофлору молока составляют гнилостные микробы, аэробные и анаэробные бациллы, плесени и многие другие. Они придают молоку неприятный вкус и запах. Обсеменение молока микробами происходит уже в процессе дойки, и интенсивность его зависит от соблюдения санитарно-гигиенических условий при получении молока. Плохие условия хранения молока способствуют нарастанию в нем микрофлоры.
Патогенные микроорганизмы могут попадать в молоко в процессе его получения и транспортировки из окружающей среды или могут содержаться в молоке больных животных (стафилококки, бруцеллы, микобактерии туберкулеза). Через молоко и молочные продукты могут передаваться возбудители различных заболеваний.
В соответствии с ГОСТ 9225—68 «Молоко и молочные продукты», и «Методическими указаниями по санитарно- бактериологическому исследованию продукции молочных кухонь» от 15.12.65 г. при бактериологическом исследовании молока, сливок, масла, творога, мороженого и других молочных продуктов производят определение:
1) общего количества бактерий,
2) количества БГКП (коли-титра). По эпидемическим показаниям проводят бактериологическое исследование для выявления возбудителя заболевания, возникновение которого связывают с употреблением данного продукта.
Образцы продуктов для бактериологического исследования отбирают раньше, чем для физико-химического исследования. Из образцов молока, сливок, молочнокислых продуктов, мороженого, масла, отбирают 1 мл и добавляют 9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия. К измельченным навескам в 10 г сыра, творога, сгущенного молока, сухих сливок добавляют по 90 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия. Из полученного разведения 1:10 готовят разведения 1 : 100 и т. д.
Определение общего количества бактерий. Производится путем посева 1 мл различных разведений исследуемого продукта. Разведение для посева выбирают в соответствии с учетом наиболее вероятного микробного обсеменения. Ход исследования и определение числа бактерий в 1 г продукта соответствует описанной выше методике. Определение общего количества бактерий в кисломолочных продуктах, содержащих обильную специфическую микрофлору, не проводят. При контроле состава микрофлоры кисломолочных продуктов просматривают мазки, приготовленные из исследуемого продукта, и окрашенных метиленовым голубым. В поле зрения препарата должны находиться только специфические для данного продукта микроорганизмы.
Определение БГКП. Посевы из каждого разведения продукта производят в пробирки со средой Кесслер. Продукт считается не загрязненным кишечной палочкой при отсутствии помутнения и образования газа в этой среде. При помутнении среды и наличии газа в поплавке производят высев из соответствующего разведения на среду Эндо. При наличии на этой среде колоний, типичных для: БГКП, делают мазки и окрашивают их по Граму. В случае обнаружения грамотрицательных палочек производят посев на среду Козера и на среду с глюкозой. Пробирки со средой Козера помещают в термостат при 37°С, а пробирки с глюкозой при 43°С. Через 18—24 ч учитывают результаты. При отсутствии кислоты и газа на среде с глюкозой дают отрицательный ответ об отсутствии БГКП. Наличие кислоты и газа в среде с глюкозой и отсутствие роста на среде Козера указывают на присутствие цитратотрицательных разновидностей БГКП, Изменение цвета среды Козера из оликово-зеленого в синий свидетельствует, что обнаруженные бактерии относятся к цитратположительным разновидностям кишечных палочек, которые не учитывают. Коли-титр вычисляют по таблицам.
Официальные нормативы для санитарно-бактериологической оценки молока и некоторых молочных продуктов приведены в табл. 14.
Присутствие патогенных микробов недопустимо.
Бактериологическое исследование изделий из крема и сливочного масла осуществляют в плановом порядке и по эпидемическим показаниям, согласно «Методическим указаниям по проведению санитарно-бактериологического исследования на предприятиях, вырабатывающих кондитерские кремовые изделия» Минздрава СССР 1976 г. Оно предусматривает определение:
1) титра БГКП; 2) количества плазмокоагулирующих стафилококков в 1 г/мл продукта.
Титр БГКП в креме должен быть не ниже 0,01, содержание коагулазоположительных стафилококков — не более 500 в 1 г на 1 мл продукта.
Мясо и мясные продукты могут обсеменяться различными микроорганизмами. Органы и ткани животного могут обсеменяться первично (прижизненно) в результате ослабления организма (голодание, травма и т. д.), когда в результате нарушения барьерных функций кишечника микробы из него проникают в кровь. Микробы могут распространяться по организму также в результате заболевания животного (например, сальмонеллезами). Однако в большинстве случаев микроорганизмы попадают в мясо и мясные продукты вторично при забое животных, во время разделки туш, в процессе заготовки и хранения продукта. На свежезабитых тушах животных часто обнаруживают стафилококки, энтерококки, кишечную палочку, а также протей, CL, perfringens, сальмонеллы. Микрофлора охлажденного мяса представлена 19 родами микроорганизмов (кишечная палочка, стафилококки, клостридии, бациллы, дрожжи и др.) а при низких плюсовых температурах могут преобладать микробы-психрофилы. В замороженном мясе могут размножаться различные плесени. При повышении температуры микроорганизмы начинают интенсивно размножаться, вызывая процессы гниения, кислого брожения. В процессе переработки мяса характер микрофлоры может меняться. В зависимости от условий выдерживания фарша в нем могут размножаться различные микроорганизмы, формируете определенная микрофлора. В сырокопченых колбасах микрофлора в основном представлена молочнокислыми палочками, дрожжами, микрококками, в меньшей степени— спорообразующими микробами. В вареных колбасах в подавляющем количестве встречаются спорообразующие микробы. Патогенные микробы могут прижизненно обсеменять ткани больного животного или вноситься во время убоя, обработки и хранения туш. Особенно опасно загрязнение патогенными микробами полуфабрикатов и готовых мясных блюд. При хранении их в неблагоприятных условиях микробы могут размножаться, вызывая заболевания людей. Мясо и мясные продукты могут явиться причиной разнообразных заболеваний. В колбасах и окороках возможны размножение палочки ботулизма и накопление его токсина. Котлеты и другие вторые горячие блюда из мяса могут быть причиной пищевых токсикоинфекций, обусловленных сальмонеллами, CI. perfringens, протеем. Студни, мясные салаты, изделия из мясного фарша могут явиться причиной заболеваний, вызванных сальмонеллами, шигеллами, патогенными эшерихиями, энтерококками, протеем, энтеротоксигенными стафилококками.
Методы санитарно-бактериологического исследования мяса изложены в ГОСТ 21237-75, мяса кроликов — в ГОСТ 20235-74, мяса птицы — в ГОСТ 7702.0-74— 7702.2-74. Из доставленных образцов мяса готовят мазки-отпечатки, окрашивают по Граму, просматривают 5— 10 полей зрения, подсчитывают количество кокков, палочек, обращают внимание на наличие бацилл, подозрительных на сибиреязвенные. В зависимости от результата микроскопии проводят исследование на наличие возбудителя сибирской язвы, сальмонелл, эшерихий, протея, кокковой группы (преимущественно стафилококка), пастерелл, листерий, на наличие анаэробов (патогенных и токсигениых клостридий).
Исследования колбас и других изделий из мяса проводятся в соответствии с ГОСТ 9958-74. Определяют общее количество бактерий в 1 г продукта. В готовых кулинарных изделиях устанавливают присутствие БГКП. Помимо этого, проводят исследование для выявления сальмонелл, протея, анаэробов рода клостридий. Для обнаружения микробов рода сальмонелл делают посев по 0,1 мл взвеси продукта на среды Эндо, Левина, Плоскирева, висмутсульфит-агар, а также на среды обогащения (селенитовый бульон, среды Мюллера и Кауфмана), Ход анализа аналогичен исследованию при пищевых отравлениях.
Присутствие микробов рода протея определяют посевом 0,1 мл взвеси продукта по методу Шукевича. Для установления присутствия клостридий делают посев в пробирки со средой Китта — Тароцци.
Считают, что мясные изделия не должны содержать патогенных и гнилостных микробов. В продуктах, подвергнутых термической обработке, недопустимо присутствие БГКП.
Консервированные продукты (мясные, рыбные и овощные) используются с каждым годом все шире. Существуют консервированные продукты, приготовленные с применением стерилизации в автоклаве (консервы), и консервированные без термической обработки (презервы).
Стерилизация консервов в автоклаве производится с учетом сохранения их вкусовых и питательных свойств, поэтому она не всегда приводит к полному уничтожению микроорганизмов. Презервы (кильки, сельди в маринаде, пюре-пасты и др.) обязательно содержат микробы и могут храниться лишь непродолжительное время при пониженной температуре.
Остаточная микрофлора консервов представлена главным образом аэробными и анаэробными спорообразующими микроорганизмами, а также термофилами. При неправильном хранении консервов и презервов микроорганизмы могут размножаться и выделять различные продукты метаболизма, в том числе и газообразные. В результате этого появляется вздутие консервных банок — так называемый бомбаж (биологический).
Патогенные микробы могут попадать в консервы при инфицировании исходного продукта. Споры этих микробов, например возбудителя ботулизма, сохраняясь при термической обработке консервов, прорастают; в благоприятных условиях и выделяют сильный токсин, который становится причиной тяжелых пищевых отравлений. Для контроля доброкачественности консервов их выдерживают на заводах в термостатах до 10 сут при 37°С.
Санитарно-бактериологическое исследование консервов производят, если внешний вид партии вызывает подозрение (наличие деформированных и бомбажных банок), или по эпидемиологическим показаниям. Отбор, проб и бактериологическое исследование производят в соответствии с ГОСТ 10444.075-10444.15-75. Баночные консервы вначале проверяют на герметичность, выдерживая их в горячей воде при 95°С в течение 3 мин. Наличие дефектов укупорки определяют по выделению пузырьков газа. Герметически укупоренные банки испытывают на бомбаж, помещая в термостат при 37°С на 5 сут. Бомбажныё банки не исследуют — они подлежат уничтожению. Посевы материала производят в боксе, предварительно обработанном дезинфицирующими хлорсодержащими препаратами и бактерицидной лампой, с соблюдением всех правил асептики. Определяют наличие мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов путем посевов в соответствующие питательные среды, а также анаэробов путем посевов в среду Китта — Тароцци. В консервах, хранящихся при 30°С и выше, определяют термофильные аэробные и анаэробные микроорганизмы. По эпидемиологическим показаниям консервы исследуют на наличие возбудителя ботулизма и ботулинического токсина (ставят биологическую пробу на белых мышах), сальмонелл, патогенных стафилококков.
По техническим условиям ГОСТ консервы не должны содержать патогенных микробов, протея и кишечной палочки и не должны иметь признаков недоброкачественности, обусловленной жизнедеятельностью микроорганизмов. Допускается наличие непатогенных спорообразующих микробов при отсутствии бомбажа и нормальных органолептических качествах продукта.
Безалкогольные (газированные и негазированные плодоягодные напитки) и слабоалкогольные напитки (квас, пиво, брага) доставляют в лабораторию в запечатанных бутылках. Горлышко бутылки прожигают, вынимают пробку, закрывают стерильной ватой. Газированные напитки выдерживают 1 ч при 43°С для удаления углекислоты. Определяют реакцию напитка с помощью лакмусовой бумажки. При кислой реакции напиток подщелачивают 10% раствором бикарбоната натрия до нейтральной реакции. Определяют общее количество бактерий, наличие БГКП и ослизняющих бактерий.
Определение общего количества бактерий производят до подщелачивания напитка по общепринятой методике. В газированных безалкогольных напитках общее количество бактерий не должно быть больше 100, а в негазированных — не более 200.
Исследование на наличие БГКП проводится так же, как при исследовании питьевой воды. Титр кишечной палочки газированных безалкогольных напитков должен быть не менее 300, не газированных — не менее 100, хлебного кваса — не менее 10. Иногда при хранении в напитке появляются ослизняющие бактерии (лейконосток), которые гюртят его. Для выделения лейконостока напиток засевают в 10% сахарный бульон и на чашки с сусло-агаром. Посевы выращивают при 20—22°С. На плотных средах колонии лейкостока прозрачные, слизистые. При микроскопии обнаруживают диплококки и цепочки, имеющие капсулу, окрашивающиеся по Граму положительно.
Для санитарно-бактериологического исследования сиропов их берут в стерильную посуду, готовят разведение 1 : 10 и засевают как водопроводную воду. Дальнейший ход аналогичен исследованию воды.
Для оценки санитарно-гигиенического состояния предприятий общественного питания, детских, лечебно-профилактических учреждений, предприятий пищевой торговой сети определяют бактериологическую загрязненность рук работающего персонала и предметов окружающей обстановки. Эти исследования необходимы также при выявлении путей распространения инфекционных заболеваний. Бактериальное загрязнение определяют путем изучения микрофлоры смывов, сделанных с рук и поверхностей исследуемых объектов.
В зависимости от целей исследования в смывах определяют:
1) наличие БГКП; 2) общую бактериальную обсемененность с пересчетом на 1 см2 исследуемой площади;
3) наличие Staph, aureus и других патогенных микробов
На предприятиях общественного питания, в детских учреждениях обычно исследование ограничивают обнаружением БГКП (как показателя фекального загрязнения объекта) и Staph, aureus. В лечебно-профилактических учреждениях в соответствии с «Инструкцией по бактериологическому контролю комплекса санитарно-гигиенических мероприятий в лечебно-профилактических учреждениях (отделениях хирургического профиля, в палатах и отделениях реанимации и интенсивной терапии)» — приложения к приказу Минздрава СССР № 720-78 г., кроме этих показателей, при необходимости определяют количественную характеристику обсеменения, наличие сине-гнойной палочки. Смывы берут стерильными ватными тампонами или салфетками, смоченными стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. При взятии с больших поверхностей (столы, стены и др.) смывы производят в нескольких местах исследуемого предмета площадью примерно в 100X100 см. Смывы с рук производят увлажненной салфеткой или тампоном: протирают сначала тыл кисти, затем ладонную поверхность, межпальцевые пространства, ногтевое ложе.
Для определения общего числа микробов в исследуемом смыве к 2 мл изотонического раствора хлорида натрия, используемого для увлажнения тампона, прибавляют еще 8 мл и тампон тщательно отмывают встряхиванием. Полученное исходное разведение 1 : 10 вносят в чашки Петри по 1 мл, заливают расплавленным и остуженным до 45°С мясо-пептонным агаром, инкубируют в термостате при 37°С и через 48 ч подсчитывают количество выросших колоний, делая перерасчет на 1 см2 исследуемой поверхности.
Для определения БГКП производят посев в среду обогащения, для чего тампон погружают в среду Кесслер или 10—20% желчный бульон. Через сутки инкубирования при 37°С делают пересев на среду Эндо. После инкубации в термостате при 37°С в течение 18—24 ч, подозрительные колонии микроскопируют, пересевают в среду Гисса с глюкозой и выдерживают при 43°С 24 ч. Затем производят учет результатов.
Для обнаружения стафилококков делают посев с тампона на желточно-солевой агар. Кроме того, в качестве среды накопления используют бульон с 6,5% хлорида натрия и бульон с 1 % глюкозы, разлитые по 0,5 мл в пробирки, куда засевают по 0,2—0,3 мл смывной жидкости. Инкубируют при 37°С в течение 24 ч, а затем делают пересев на чашки с желточным агаром. Дальнейшее исследование проводится по общепринятой методике обнаружения стафилококков. В хирургических отделениях больниц, согласно инструкции, на предметах окружающей обстановки выявляют наличие синегнойной палочки. Для этого специальные посевы не производят, так как колонии данной палочки удается выявить на среде Эндо и других средах (по пигментообразованию). Колонии, подозрительные на синегнойную палочку, пересевают на скошенный агар, содержащий 2—5% глицерина, или маннит. На поверхности скошенного агара синегнойная палочка дает обильный рост с зеленоватым оттенком, маслянистой консистенции с характерным запахом жасмина, земляничного мыла. Выделенную культуру окрашивают по Граму, микроскопируют, определяют гемолитические свойства путем посева на чашку с кровяным агаром.
Смывы с рук хирургов для проверки стерильности производят стерильными марлевыми салфетками, которые помещают в широкогорлые пробирки с раствором нейтрализатора (вода или изотонический раствор хлорида натрия) и стеклянными бусами, встряхивают в течение 10 мин, отмывную жидкость засевают по 0,5 мл на две чашки Петри с мясо-пептонным агаром для определения общей микробной обсемененности, а марлевую салфетку помещают в 0,5% сахарный бульон. Инкубируют при 37°С в течение 48 ч. Дальнейший ход исследования зависит от характера микрофлоры (кокковая, кишечная группа ит. д.) .
Бактериологическое исследование инструментария, перевязочного, шовного и другого хирургического материала на стерильность проводят согласно приложению к приказу Минздрава СССР № 720-78 г.
Посевы исследуемого материала делают в боксе с соблюдением правил асептики. Исследуемый материал вносят в две пробирки с сахарным бульоном Хоттингера, в тиогликолевую среду и бульон Сабуро. Кетгут предварительно выдерживают сутки в 10% растворе гипосульфита для нейтрализации спиртового раствора йода, в котором его обычно хранят, а затем еще сутки в стерильной дистиллированной воде. Шелк перед посевом сутки выдерживают в стерильной дистиллированной воде. Посевы в сахарном бульоне и тиогликолевой среде инкубируют при 37°С, а в среде Сабуро — при 20—22°С. Посевы выдерживают в термостате в течение 14 сут, просматривая их каждый день. При появлении роста микробов делают мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют. Дальнейший ход исследования зависит от вида микроорганизма. Материал считается стерильным при отсутствии роста во всех пробирках.
2. Тема 8- Парламент в зарубежных странах
3. Контрольная работа- Технология выращивания сельскохозяйственных культур
4. 2012г. Вопросы к экзамену по дисциплине Охрана труда по специальности- 2 ~ 40 01 01 Программное обе
5. ВВЕДЕНИЕ Мы уже не раз говорим о том что в моде в одежде как в воде отражается наша жизнь.
6. Новогодние приключения Деда Мороза Музыкальный руководитель Дианова Елена Ал
7. 1данилевский- егип кит ассирвавилонофиникийхалтийск инд иран еврей греч рима равий г
8. Валютно-обменные операции в коммерческом банке
9. Стеклянный окунь
10. Тема 2 Теоретичні засади культури мовлення та виразного читання План 1
11. тематизирует и обобщает данные об их природе населении внутренние пространственные различия
12. Реферат- Необходимость и сущность государственного регулирования экономики
13. Нижний Новгород
14. Петербурга він швидко зорієнтувався що на відміну від української мови українська культура була дуже попу
15. ГЛАВконтроль проводит опрос получателей государственных и муниципальных услуг в Республике Коми
16. Дисконтная карта действует при расчетах с физическими лицами
17. Загрязнение атмосферного воздуха выхлопами газа автомобильного транспорта
18. Реферат- Эффективность применения технических средств в делопроизводстве
19. Ликвидация крайней нищеты и голода Задача 1
20. 430 родился в Тагасте около Карфагена на территории нынешнего Алжира