Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«Новосибирский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
(ГБОУ ВПО НГМУ Минздравсоцразвития России)
ПЕДИАТРИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
Кафедра медицинской химии
ПРАКТИКУМ
К ЛАБОРАТОРНЫМ ЗАНЯТИЯМ
ПО БИОХИМИИ
Под редакцией профессора В.И. Шарапова
Учебное пособие
для студентов 2-го курса лечебного, педиатрического, стоматологического и медико-профилактического факультетов
Новосибирск - 2012
Под редакцией профессора В.И.Шарапова
Практикум к лабораторным занятиям по биохимии. – Изд. испр. доп.- Новосибирск, НГМУ.- 2012.- 40с.
В настоящих методических указаниях представлены лабораторные работы, выполняемые на практических занятиях по дисциплине «биологическая химия».
Лабораторные работы приведены в соответствии с рабочими программами по биологической химии для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Учебное пособие может быть использовано студентами для подготовки к практическим занятиям, коллоквиумам и экзамену по биологической химии.
Рецензенты:
О.Р. Грек, д.м.н., профессор, заведующий кафедрой фармакологии НГМУ,
А.А. Зубахин, д.м.н., профессор кафедры патологической физиологии и клинической патофизиологии НГМУ
Переработанное пособие утверждено на заседании кафедры медицинской химии
(протокол № 8 от 14.11.2011г.)
Утверждено и рекомендовано к печати ЦМК по физиологии
(протокол № 2 от 18 января 2012г.)
© Шарапов В.И.
© Новосибирский государственный
медицинский университет, 2012 г.
ПРАВИЛА РАБОТЫ НА КФК-2
стр
Лабораторная работа №1
Определение общего белка сыворотки крови по биуретовой реакции......................................................................1
Лабораторная работа №2
Определение активности псевдохолинэстеразы сыворотки крови...........................................................................2
Лабораторная работа №3
Определение трансаминазной активности сыворотки крови....................................................................................3
Лабораторная работа №4
Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови..........................................................................4
Лабораторная работа №5
Определение активности амилазы (диастазы) в моче амилокластическим способом............................................5
Лабораторная работа №6
Количественное определение глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидазным методом
( по окислению фенофталеина)............................................................................................................................................6
Лабораторная работа №7
Определение глюкозы о- толуидиновым методом..........................................................................................................6
Лабораторная работа №8
Качественная реакция на определения сахара в моче- реактив Ниландера...........................................................7
Лабораторная работа №9
Турбидиметрический метод определения бета-липопротеидов сыворотки крови
по Бурштеиу и Самаи.......................................................................................................................................................7
Лабораторная работа № 10
Реакция образования иодоформа ( на ацетоновые тела)...............................................................................................8
Лабораторная работа №11
Определение содержания холестерина в сыворотке крови (метод Ильке)..............................................................8
Лабораторная работа №12
Лабораторная работа №13
Определение активности ГГТП сыворотки крови.......................................................................................................10
Лабораторная работа №14
Лабораторная работа №15
Количественное определение витамина С в сыворотке крови....................................................................................11
Лабораторная работа №16
Лабораторная работа №17
Коагуляционная проба Вельтмана......................................................................................................................................12
Лабораторная работа №18
Определение общего гемоглобина методом щелочной денатурации...........................................................................12
Лабораторная работа №19
Определение билирубина методом Иедрашека................................................................................................................13
Лабораторная работа №20
Определение кальция, фосфора в сыворотке крови титрометрическим методом
с применением мурексида.....................................................................................................................................................14
Лабораторная работа №21
Качественные реакции на неорганические и органические составные части мочи...............................................14
Лабораторная работа №22
Определение белка слюны биуретовым методом...........................................................................................................15
Лабораторная работа № 1
Количественное определение активности амилазы слюны..........................................................................................16
Лабораторная работа №2
Определение активности щелочной фосфатазы слюны.................................................................................................16
Лабораторная работа №3
Определение трансаминазной активности слюны.........................................................................................................17
Лабораторная работа №4
Определение кальция в слюне титрометрическим методом с применением мурексида......................................18
ПРАВИЛА РАБОТЫ НА КФК-2
1.Калориметр включить в сеть за 15 мин. до начала измерений. Во время прогрева кюветное отделение должно быть открыто (при этом шторка перед фотоприемниками перекрывает световой пучек).
2. Установить необходимый светофильтр. При переключении светофильтров ручка «чувствительность» должна находится в положении «1» (красный светофильтр 670- «1», зеленый светофильтр 540- «1»), а ручка «установка 100 Грубо» в крайнем левом положении (это предохраняет прибор от перегрузки и порчи).
3. В световой поток поместить кювету с контрольным раствором по отношению к которому производят измерения.
4. Во вторую ячейку кюветодержателя поместить кювету с исследуемым раствором.
5. Закрыть крышку кюветного отделения.
6. Ручка ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ и УСТАНОВКА 100 вначале ГРУБО, затем ТОЧНО установить отсчет 100 по шкале калориметра.
7. Поворотом ручки под кюветным отделением до упора, ввести в световой поток кювету с исследуемым раствором.
8. Снять отсчет по шкале Д в единицах оптической плотности.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО БЕЛКА СЫВОРОТКИ КРОВИ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ
1) Нормопротеинемия 60-80г/л.
2) Гипопротеинемия:
1. Относительная (гидремия при нагрузке водой, водных отравлениях).
2. Абсолютная вследствие:
а) подавления синтеза белка (альбуминов при нарушении функции гепатоцитов, глобулинов при всех формах недостаточности РЭС).
б) потери белков преимущественно альбуминов (нарушение функции желудочно-кишечного тракта, нарушение почечного фильтра, кровоизлияния, увеличение проницаемости капилляров - отеки, обширные экссудаты, обширные выпоты в серозные полости);
в) усиление расхода альбуминов при голодании.
3) Гиперпротеинемия:
1. Относительная (обезвоживание)
2. Абсолютная вследствии усиления синтеза глобулинов (злокачественные новообразования, ряд форм лейкозов, инфекционное или токсическое раздражение РЭС).
Принцип метода: Биуретовый метод основан на образовании в щелочной среде окрашенного комплексного соединения меди с пептидными группами белка. Характерная фиолетовая окраска раствора пропорциональна числу пептидных групп.
Ход определения: К 0,1 мл сыворотки крови прибавляют 5 мл биуретового реактива (состав : СuSO4, 5H2O, NaOH, сегнетова соль). Смешивают, избегая образования пены. В контрольную
пробу к 0,1мл физ.раствора добавляют 5мл биуретового реактива. Через 30 мин измеряют оптическую плотность опытной и контрольной проб на фотоэлектроколориметре. Зеленый светофильтр в кювете толщиной 1см против контроля. Окраска стабильная в течении 1 часа.
Расчет: Концентрацию белка в сыворотке крови определяют по калибровочному графику.
Норма 63-83 г/л.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 2
Значение метода: Аминотрансферазы (АЛТ и АСТ) представляют собой ферменты, участвующие в переносе аминогрупп от альфа-аминокислот к альфа- кетокислотам. Коферментом в этой реакции является производная Вит В6- пиридоксальфосфат. Аминотрансферазы относятся к широко распространенным ферментам в организме, к ряду внутриклеточных. В сыворотке крови активность этих ферментов в норме не высока. Органические поражения при острых и хронических заболеваниях, сопровождаются деструкцией клеток, приводят к выходу трансаминаз из очага поражения в кровь.
АЛТ-содержится в высоких концентрациях в печени и в меньших количествах в скелетных мышцах, почках, сердечной мышце. Значительное повышение (в 10-100 раз) активности АЛТ в крови наблюдается при вирусном гепатите, токсическом некрозе печени. Особое значение имеет определение АЛТ в инкубационный период вирусного гепатита, а также для постановки диагноза при безжелтушной форме этого заболевания и эффективности лечения.
АСТ- широко распространена с высокими концентрациями в сердце, печени, скелетных мышцах, почках, эритроцитах. Повреждение любой из этих тканей может привести к повышению концентрации АСТ в сыворотке крови. Особое значение определения АСТ имеет для диагностики инфаркта миокарда и динамики заболевания. Уже через три часа после заболевания АСТ повышается, в сыворотке на 4-5 сутки наблюдается пик подъема, к 7 суткам активность АСТ должна вернуться к норме.
Активность АСТ определяется также в ротовой жидкости. Источником АСТ являются эпителиальные клетки, фибробласты, лейкоциты крови и плазма крови. В норме активность АСТ в ротовой жидкости следовая. Увеличение активности АСТ говорит о повреждении тканей парадонта и может служить одним из признаков гингивита.
Принцип метода: О трансаминазной активности сыворотки крови судят по количеству ПВК, образующейся при переаминировании из аланина или в результате декарбоксилирования щавелеуксусной кислоты, образующейся при переаминировании из аспарагиновой кислоты (АСТ). ПВК взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином, с образованием 2,4-динитрофенилгидразона пировиноградной кислоты. При обработке динитрофенилгидразона щелочью образуется окрашенное в красный цвет соединение. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству ПВК.
Ход работы: В пробирку вносят 0,1мл сыворотки и 0,5мл субстратной смеси, составленной из аланина и альфа-кетоглутаровой кислоты. Пробирку помещают в термостат при 37 град С на 15 минут, затем добавляют 0,5мл раствора 2,4-динитрофенилгидразина и оставляют стоять при комнатной температуре на 10 минут, после чего приливают 5мл NаОН и через 10-15 минут колориметрируют на ФЭКе в кювете на 0,5см с зеленым светофильтром против контроля.
Контроль: К 0,2мл Н2О приливают 1мл субстратной смеси, 1мл 2,4- динитрофенилгидразина и через 15 минут 10мл NаОН (обязательно соблюдать порядок добавления реактивов). После фотометрирования используют калибровочный график. Активность АЛТ выражают в МКМ ПВК, образованной под действием ферментов, содержащихся в 1мл слюны за час при 37 град
Норма: АЛТ- 0,1-0,68 мкм/л.ч
АСТ- 0,1-0,45 мкм/л.ч
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3
Значение метода: определение сывороточной псевдохолинэстеразы имеет важное значение, как метод функционального исследования печени. Этот фермент синтезируется в клетках печени и относится к группе секреторных ферментов. При нарушении белоксинтезирующей активности печени, содержание фермента в сыворотке крови сокращается.
Принцин метода: метод основан на фотометрическом определении концентрации уксусной кислоты, образованной при гидролизе ацетилхолинхлорида ацетилхолинэстеразой сыворотки крови.
Ход работы:
1 этап. В 2 пробирки (опыт и контроль) разливают 2,5 мл вероналового буфера с индикатором феноловым красным (рН 8,4) приливают 0,05 мл сыворотки крови и прогревают 5 минут в термостате при 37 градусах Цельсия.
2 этап. В обе пробирки приливают 0,1 мл (2-3 капли) ацетилхолинхлорида.
В контрольную пробу добавляют 2-3 капли прозерина (ингибитор фермента) и инкубируют при 37 градусах Цельсия в течение 30 минут.
3 этап. После инкубации сразу же в опытную пробу добавляют 0,1мл (2-3 капли) прозерина, ингибитора фермента. Смесь охлаждают при комнатной температуре.
4 этап. Производят измерение оптической плотности опытной пробы против контроля на ФЭКе в кювете на 0,5 см при зеленом светофильтре. Окраска устойчива в течение часа.
Расчет: из показателя оптической плотности холостой пробы вычитают показатель оптической плотности опыта и по калибровочному графику находят активность фермента, которая выражается в микромолях уксусной кислоты, образовавшейся при инкубации 1 мл сыворотки крови в течении часа при 38 градусах Цельсия.
Норма: 160-340 мкМ./ час.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 4
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ.
Принцип метода: Под действием фермента сыворотки крови бета-глицерофосфат подвергается гидролизу с освобождением неорганического фосфата, по которому судят об активности данного фермента.
Ход определение: Тщательно сполостнуть дистиллированной водой пробирки и воронки.
|
РЕАКТИВЫ |
ОПЫТ |
КОНТРОЛЬ |
|
1.Раствор бета-глицерофосфата |
1мл |
1мл |
|
2. Сыворотка |
0,1мл инкубация 30 мин при 37градусах |
- |
|
3. ТХУ-10% |
1мл |
1мл |
|
4.СЫВОРОТКА |
- |
0,1 мл |
|
Тщательно перемешать и фильтровать через смоченный дистиллированной водой фильтр. К фильтрату добавить: |
||
|
5. Молибденовый раствор |
1мл |
1мл |
|
6. Раствор аскорбиновой кислоты |
1мл |
1мл |
|
Перемешать и через 10 мин. колометрировать контроль и опыт против Н20 (красный светофильтр, кюветы 5 мл). РАСЧЕТ: Из коэффициента светопоглощения опыта (Е оп) вычесть коэффициент светопоглощения контроля (Е контр). Разность посмотреть по калибровочному графику. В норме активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови взрослых 1,0-6,0 мм/час л., у детей до 6лет 2,5-15 мм/час до 16 лет 5,0-30,0 мм/час л. |
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 5
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АМИЛАЗЫ (ДИАСТАЗЫ) В МОЧЕ АМИЛОКЛАСТИЧЕСКИМ СПОСОБОМ.
Значение метода: Диастаза (альфа-амилаза) является экскреторным ферментом. Наиболее богаты амилазой поджелудочная и слюнные железы. В норме активность этого фермента в крови сравнительно невелика в связи с тем, что амилаза-низкомолекулярный белок, она проходит через почечный фильтр и определяется в моче. Повышение амилазной активности мочи прежде всего связывается с повреждением клеток поджелудочной железы (увеличение проницаемости мембран, некротизированных клеток, нарушение оттока секрета в 12-перстную кишку). Так, при остром панкреатите амилазная активность мочи может увеличиться в 10-30 раз. Повышение амилазной активности мочи, но в меньшей степени, может сопровождать воспаление слюнных желез (острый паротит). Снижение активности амилазы в плазме крови наблюдается при уменьшении синтеза фермента при снижении функции поджелудочной железы, склерозировании органа.
Принцип метода: Основан на фотометрическом измерении падения концентрации крахмала в результате ферментативного гидролиза.
Ход работы:
РЕАКТИВЫ ОПЫТ КОНТРОЛЬ
1. Крахмал 2% 0,5 нагрев 0,5 нагрев
2.Фосфатный буфер 0,3 10 мин 0,3 10 мин
3. Nа СI 3% 0,1 при 37градусах 0,1 при 37 градусах
4.НСI (1Н) --- инкубировать 0,1 инкубировать
5.Моча 0,1 30 мин - 30 мин
6.Н20 при 37 градусах 0,1 при 37 градусах
Реакцию ОПЫТА прерывают прибавлением 0,1мл НСI
По 0,2 мл содержимого пробирок ОПЫТА и КОНТРОЛЯ переносится в разные колбы емкостью 50 мл. В каждую из колб прибавляют примерно по 40 мл воды, 0,5 НСI и 0,1 мл раствора йода и доливают до метки дистил. водой. Еоп и Е контр измеряют на ФЭКе при красном светофильтре с толщиной кюветы 1см, против воды. Амилазную активность мочи выражают через количество мг крахмала, гидролизованного амилазой, содержащей в 1мл мочи за 60 мин при 37 градусах.
Расчет
Е контр-Еоп * 10 * 20 *10
Хмг крахмала= ----------------------------
Еконтр
Где: Е-экстинкция или коэффициент
10-количество мг крахмала, введенного в опытную и контрольную пробы.
20-коэффициент перерасчета на 1мл биологической жидкости за час инкубации .
10-разведение мочи
Норма: 80-160 мг крахмала, гидролизованного 1мл биологической жидкости за час инкубации при 37 градусах Цельсия.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 6
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ О-ТОЛУИДИНОВЫМ МЕТОДОМ.
Принцип метода: Альдогексозы (глюкоза, галактоза, ксилоза ) при нагревании с орто- толуидином в кислой среде дают синезеленое окрашивание, интенсивность которого определяется колометрически.
Ход работы: 0,2мл сыворотки крови (спинномозговой жидкости) вносят в пробирку с 2мл 6% ТХУ. Содержимое пробирки перемешивают и фильтруют. К фильтрату приливают 2мл. О-толуидинового реактива и ставят на 8 минут в кипящую баню. После охлаждения (15 мин) фотометрируют при красном светофильтре. В качестве контроля используется вода. Параллельно определяют светопоглощение стандартного раствора глюкозы (0,05мл глюкозы) обработанного так же, как и опытная проба.
А
Расчет: ------ х 200 = мг %
Б х 4
А-светопоглошение образца
Б-светопоглощение раствора глюкозы (800 мг на 100мл)
Норма: кровь –70-110мг %, плазма-60-100мг %, спинномозговая жидкость-45-70мг %.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 7
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ (ПО ОКИСЛЕНИЮ ФЕНОЛФТАЛЕИНА).
Принцип метода:
В-d глюкоза + в-d глюкозооксидаза глюколактон + ФАДН2
-------------------------
ФАД
ФАДН2+О2 = ФАД +Н2О2
Образующаяся перекись водорода в присутствии ионов меди окисляет фенолфталин до фенолфталеина, который в щелочной среде окрашен в красный цвет.
Ход работы: 0,2 мл сыворотки крови вливают в 2мл 5% ТХУ, перемешивают и фильтруют через смоченный водой фильтр. К фильтрату прибавляют 2мл 0,25 моль/л фосфата натрия и 2 капли раствора глюкозооксидазы. Перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем добавляют 2 мл рабочего реактива и через 10мин. фотометрируют в кюветах толщиной 1 см при зеленом светофильтре против дистилированой воды.
Количество глюкозы в сыворотке определяется по калибровочному графику.
Норма: 3,5-5,7 ммоль/л.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 8
КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА ОПРЕДЕЛЕНИЯ САХАРА В МОЧЕ - РЕАКТИВ НИЛАНДЕРА.
Реакция Ниландера относится к окислительно-восстановительным методам определения сахара. Она основана на окислении глюкозы солью висмута Вi (NO3)2 в щелочной среде. При кипячении, в случае наличия сахара в моче, выпадает черный осадок
металлического висмута.
|| 2+ ОН
t
Ход работы:
К 1-2 патологической мочи прибавляют 0,5-1мл реактива Ниландера и кипятят 2 мин.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 9
ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕТА- ЛИПОПРОТЕИДОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ ПО БУРШТЕЙНУ И САМАИ.
Значение метода: По изменению липопротеидов сыворотки можно судить о различных патологических процессах организма человека. Увеличение содержания бета-липопротеидов- наиболее часто встречающееся в липограмме отклонение от нормы. Оно отмечается при атеросклерозе, внутрипеченочном холестазе, механической желтухе, диабете, при резких гипопротеинемиях, гликогенозах, ксантоматозе и др. Увеличение бета-липопротеидов в крови тесно связано с гиперхолестеринемией, поскольку холестерин входит в состав, главным образом, бета-липопротеидов.
Принцип метода: Метод основан на избирательном осаждении бета-липопротеидов с помощью гепарина в присутствиии ионов Са. Введение гепарина в присутствии Са вызывает связывание бета-липопротеидов и помутнение раствора, оптическую плотность которого можно измерить на ФЭКе. Степень помутнения соответствует концентрации бета-липопротеидов.
Ход работы: К 2мл 0,025М р-ра СаСI2 добавляют 0,2 мл сыворотки крови и оптическую плотность р-ра определяют на ФЭКе (Е1) в кювете толщиной 0,5 см с красным светофильтром против воды. Затем в кювету добавляют 0,04мл 10% р-ра гепарина и содержимое перемешивают. Бета-липопротеиды образуют комплекс с гепарином, дающий помутнение р-ра. При этом оптическая плотность увеличивается (Е2). Определяют точно через 4мин после добавления гепарина. Разница Е1 – Е2 приходится на оптическую плотность, обусловленную липопротеидами. Количественную оценку проводят по калибровочному графику и выражают в мг%.
Норма 300-400мг% (3-6 г/л).
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 10
1. РЕАКЦИЯ ОБРАЗОВАНИЯ ИОДОФОРМА (НА АЦЕТОНОВЫЕ ТЕЛА).
1мл. мочи + 1мл. NаОН + 5 капель I2 в КI = желтое окрашивание.
2. ПРОБА С ХЛОРНЫМ ЖЕЛЕЗОМ.
1мл. мочи + 5 капель хлорного железа = вишнево- красное окрашивание.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 11
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
(МЕТОД ИЛЬКЕ).
Значение метода: Холестерин может накапливаться в крови в больших количествах при нарушении жирового обмена. Длительная гиперхолестеринемия при измененных условиях растворимости холестерина приводит к развитию атеросклероза. Гиперхолестеринемия наблюдается при механической желтухе, нефрите и нефрозах, гипотериозе, авитаминозе группы «В». Очень высокое содержание холестерина в крови наблюдается при сахарном диабете, липоидном нефрозе. Гипохолестеринемия обнаружена при анемиях, лихорадочных состояниях, сыпном тифе, голодании, гипертиреозе, раковой кахексии, поражении ЦНС.
Принцип метода: Холестерин в присутствии смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и конц. серной кислоты в соотношении 1:5:1 (реактив Ильке) превращается в сульфокислоту холестерина зеленого цвета.
Ход работы: в сухую пробирку к 2 мл реактива Ильке добавить 0,1 мл сыворотки. Сыворотку вносить медленно по стенке пробирки. Затем встряхивают содержимое пробирки и помещают в темное место на 20 мин. Окрашенную в зеленный цвет жидкость колориметрируют на ФЭКе, применяя красный светофильтр в кювете 0,5см. Контроль при фотометрировании - реактив Ильке. Содержание холестерина определяется по калибровочному графику.
В норме содержание холестерина 3,5-6,8 мМоль или 116-242 мг %
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 12
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ КИСЛОТНОСТИ, ОБЩЕЙ СОЛЯНОЙ КИСЛОТЫ, СВОБОДНОЙ СОЛЯНОЙ КИСЛОТЫ В ОДНОЙ ПОРЦИИ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА.
Значение метода: При клиническом анализе желудочного содержимого важнейшее значение имеет содержание кислот. Повышенная кислотность может указывать на язвенную болезнь и (или) 12-перстной кишки, гиперацидный гастрит. Пониженная кислотность встречается при ряде желудочно-кишечных заболеваний (гипоацидный гастрит), раке желудка. Кислоты желудочного сока, всасываясь в кровь, играют большую роль в кислотно-щелочном равновесии организма.
Принцип метода: Определение общей кислотности, свободной и связаной соляной кислоты проводят титрованием желудочного содержимого щелочью, с применением индикатора, которые в зависимости от рН среды меняют окраску, индикатор фенолфталеин (индикатор на общую кислотность) в кислой среде остается бесцветным, а в щелочной окрашивается в розовый цвет. Индикатор диметиламиноазобензол в присутствии свободной НСI окрашивается в ярко-красный цвет, в ее отсутствии дает желтое или оранжевое окрашивание. Зона перехода фенолфталеина лежит в пределах рН 8,2-10, а диметиламиноазобензола рН 2,9-4,0.
Ход работы: Отмеривают пипеткой в колбочку 10 мл. Профильтрованного желудочного сока и добавляют 1-2 капли диметиламиноазобензола и 2 капли фенолфталеина. Титруют 0,1Н раствором NаОН до цвета красной рыбы, т.е желтовато-красной окраски. Первая точка. Затем продолжают тирование до лимонножелтого цвета. Вторая точка. И, наконец, до розового окрашивания. Третья точка.
Расчет:
Свободная НСI = Количество NаОН в 1 точке умноженное на 10.
Общая НСI= Количество NаОН во 2 точке + Количество NаОН в 3 точке : 2 * 10
Связанная НСI= Общая НСI- Свободная НСI
Общая кислотность= Количество NаОН в 3 точке умноженное на 10.
Норма
Общая кислотность желудочного сока 40-60Ед
Свободная НСI-20-40 Ед
Кислотность желудочного содержимого выражается в титрационных единицах – количестве 0,1 р-ра NаОН, пошедших на титрование 100мл желудочного сока.
(для опыта взято 10мл желудочного сока, поэтому умножают на 10).
ПИРАМИДОНОВАЯ ПРОБА НА ОБНАРУЖЕНИЕ КРОВИ В ЖЕЛУДОЧНОМ СОКЕ.
Принцип и значение метода: Химическое обнаружение в желудочном соке крови сводится к нахождению кровяного пигмента гемоглобина. Гемоглобин обладает «пероксидазной» активностью и способен окислять пирамидон в присутствии перекиси водорода. При этом получается окрашенный продукт реакции.
Ход работы: К 5мл 5% спиртового раствора пирамидона прибавляют 0,5мл 30% уксусной кислоты и 0,5мл 3% Н2О2 и 1мл желудочного сока, при положительной пробе получается фиолетовая окраска через 5-10 мин.
РЕАКЦИЯ УФФЕЛЬМАННА НА МОЛОЧНУЮ КИСЛОТУ.
Значение метода: В норме в желудочном содержимом находится следовые количества молочной кислоты. Она появляется при ускоренной десквамации эпителия желудка в больших количествах. Это может произойти при острых токсикоинфекциях, протекающих с явлениями тяжелого гастроэнтерита (сальмонеллез) и некоторых формах гастрита. Источником молочной кислоты в желудке могут быть грибки сапо оа. Появляется она также при резком снижении кислотности желудочного сока.
Ход работы: В пробирку налить немного 1% раствора фенола, несколько капель раствора хлорного железа и после появления сиреневого окрашивания 1-2 капли желудочного сока. Сиреневая окраска меняется на зелено-желтую вследствие разрушения соединения фенола с железом и образования железной соли молочной кислоты.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 13
Значение метода: Фермент ГГТП локализован в мембранах клеток разных органов и служит для транспорта всех аминокислот внутрь клетки. При патологических процессах печени, сопровождающихся разрушением клеток, повышается активность фермента в плазме крови. Фермент мембранный, поэтому появляется в плазме рано. Повышение активности ГГТП в плазме наблюдается при алкоголизме, приеме опиатов. Снижение активности отмечается при приеме эфедриновых препаратов.
Принцип метода: Заключается в фотометрическом определении концентрации нитроанилина, который образуется при взаимодействии гамма-глютамил-нитроанилида с дипептидом глицил-глицилом под действием ГГТП.
Гамма-глютамил-нитроанилид+глицил-глицил------ гамма-глютамил-глицил-глицил+ нитроанилин
Активность ГГТП выражается в международных единицах Е/Л, означающих количество микромолей нитроанилина, образующегося под действием фермента, содержащегося в 1мл сыворотки за 1мин инкубации при 37 Градус С.
Ход процесса: В две пробирки наливают по 0,25 мл субстрата. В опытную пробирку добавляют 1мл сыворотки, а в контрольную 1мл физ. р-ра. Ставят на 15 мин инкубировать при 37 Град. Затем в обе пробирки наливают 2,7 мл уксусной кислоты, перемешивают и фотометрируют против контроля в кюветах толщиной 0,5см красным светофильтром.
НОРМА: Мужчины 15-106 Е/Л, женщины 10-66 Е/Л
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 14
Значение метода: Остаточный азот – азот небелковых соединений крови.
К остаточному азоту относится: мочевина, аминокислоты, креатин, креатинин, мочевая кислота,
гиппуроновая, аммиак.
1) Норма 14-28мм/л.
2) Увеличение уровня –Азотемия
1. Относительная ( обезвоживание)
2. Абсолютная:
а) ретенционная: ренальная (нарушение фильтрации); экстраренальная (снижение оттока мочи, снижение почечного кровотока вследствие шока, острой кровопотери).
б) продуктивная: подавление синтеза белка и усиление распада белка (лечение антибиотиками, сахарный диабет, гиперкортицизм, голодание)
2) Снижение уровня остаточного азота.
1. Относительное (введение больших количеств солевых растворов).
2. Абсолютное (понижение образования мочевины).
Принцип метода: мочевина при нагревании в кислой среде взаимодействует с диацетилмоноксимом и образует красный комплекс. Интенсивность окраски пропорционально концентрации мочевины в сыворотке крови.
Ход работы: в пробирку вносят 0,1 мл сыворотки крови. Добавляют 2мл диацетилмоноксима, перемешивают. Пробирку плотно закрывают ватой и нагревают 10 мин. в кипящей водяной бане. Охлаждают 2-3 мин и сразу фотометрируют, применяя зеленый светофильтр и кюветы на 0,3 мм. Контролем служит дистиллированая вода. Параллельно определяют оптическую плотность для стандартного раствора мочевины: 0,1 мл стандатного раствора мочевины, 2мл раствора диацетилмоноксима , перемешивают, кипятят 10 мин., охлаждают.
Концентрация мочевины в стандартном растворе (эталонном) 100мг% или 16,65 м моль /л.
Расчет: Х м моль /литр= А/Б 16,65 ; Х мг % = А/Б 100
Где А - оптическая плотность сыворотки крови,
Б - оптическая плотность стандартного раствора мочевины.
Содержание мочевины в сыворотке крови 20-40 мг% или 2,5-8,32 м моль /л.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 15
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ
Принцип метода : количественного определения витамина С в сыворотки крови основан на его способности восстанавливать 2,6- дихлорфенолиндофенол, который в щелочной среде имеет синюю окраску, а в кислой красную.
Ход работы: К 5 мл сыворотки крови добавляют равный объем 20% сульфосалициловой кислоты для осаждения белков. Выпавший в осадок белок отфильтровывают, 6 мл фильтрата наливают в колбу для титрования (это будет соответствовать 3 мл сыворотки крови) и титруют из микробюретки 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 секунд. Подсчитывать содержание витамина С в крови по формуле:
г эквив. витамина С х А х 100
Х= _________________________________ =мг %
В
Где: Х- содержание витамина С в крови
Г - эквив. Витамина С-граммэквивалент вит С =88
Н - нормальность р-ра 2,6-дихлорфенолиндофенола =0,001
А - количество мл 2,6-дихлофенолиндофенола, пошедшего на титрование.
В - количество мл сыворотки, взятой в опыт (3мл)
100-коэфициент для пересчета в мг%
Норма: 0,8-1,2 мг%.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 16
Определение содержания витамина С в моче дает представление о запасах этого витамина в организме, так как наблюдается соответствие концентрации витамина С в крови и количество этого витамина, выделяемого с мочой.
Ход работы: в коническую колбочку отмеривают 10 мл мочи и 10 мл дистиллированной воды, перемешивают, подкисляют 1мл концентрированной уксусной кислоты и титруют 0,001 н раствором 2,6- дихлорфенолиндофенола до розового окрашивания.
Подсчитывают содержание витамина С по формуле:
0,088 х А х 1500
Х=________________= мг/сутки
10
где:
Х-содержание витамина С в моче
А- количество 0,001н раствора 2,6 дихлорфенолиндофенола в мл , израсходованное на титрование
10-количество мочи, взятой для титрования
1500-ориентировочно взятое количество мочи.
Норма: 10-20 мг/сутки.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 17
КОАГУЛЯЦИОННАЯ ПРОБА ВЕЛЬТМАНА
Значение метода: Сыворотку крови можно представить как коллоидную систему, устойчивость которых зависит от содержания белковых фракций крови и соотношения между ними. Повышенной устойчивостью обладают альбумины – белки, с малыми размерами молекул, выраженным электрич. зарядом и высокой степенью гидратации. У глобулинов-большие размеры молекул сочетаются с меньшим зарядом и более низкой степенью гидратации. В связи с этими особенностями устойчивость глобулинов значительно ниже. Коллоидная устойчивость сыворотки крови уменьшается при снижении фракции альбуминов , при заболеваниях печени (гепатит, цирроз, острая желтая атрофия печени), при гемолитических состояниях. Также считают, что коагуляционная проба снижена при повышении содержания гамма-глобулинов, снижающих стабильность сыворотки. Увеличение пробы наблюдается при острых воспалительных и эксудативных процессах, когда увеличивается кол-во альфа- и бета- глобулинов, повышающих стабильность сыворотки (эксудативная фаза ревматизма, активный процесс туберкулеза легких, злокачественных опухолей, больших потерях жидкости, острых инфекционных заболеваниях). В клинико-диагностических лабораториях широко используют методы при которых реакциями коагуляции обнаруживают изменения в составе белков сыворотки крови. Одним из таких методов является коагуляционная проба Вельтмана.
Принцип метода: Устойчивость р-ров высокомолекулярных соединений (белков) зависит от 2-х факторов: величины заряда молекул и степени их сольватации. В пробе Вельтмана для получения коагуляции белков сыворотки крови используется раствор СаСI2, который как электролит снижает заряд молекул и тепловую денатурацию, в результате которой молекулы белка приобретают гидрофобные свойства и теряют гидратную оболочку.
Ход работы: К 0,1 мл сыворотки крови прибавляют 4,9 мл дистил., воды, перемешивают и прибавляют 0,1 мл раствора СаСI2, встряхивают и нагревают на пламени до однократного
закипания. Охлаждают и на свету наблюдают за появлением коагуляции белка. Если белки не коагулировали, то добавляют еще 0,1 мл СаСI2 и вновь кипятят. Процедуру повторяют до тех
пор, пока не выпадут хлопья. Результаты оценивают, подсчитывая общее количество 0,5% раствора СаСI2 пошедшего на реакцию. В норме реакция наступает при добавлении 0,4- 0,5 мл СаСI2.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 18
Значение метода: У детей при рождении количество гемоглобина выше, чем у взрослого (60-70%). Нв у новорожденного составляет фетальный гемоглобин и 30-40% Нв (взрослого типа). После рождения фетальный гемоглобин убывает и к 5-6 месяцам жизни составляет 1-2 % всего Нв. Фетальный Нв отличается от взрослого рядом свойств: он растворяется при более высоких концентрациях солей, более устойчив к щелочам, имеет другую электрофоретическую подвижность. Определение фетального гемоглобина имеет большое значение не только у детей, но и у взрослых при различных патологических состояниях, например при гипоксиях (пневмонии, инфаркте миокарде, гепатите, хроническом бронхите и др).
Ход работы: В пробирку отмеряют 4,9 мл 0,04% р-ра NН4ОН и 0,1 гемолизата. Жидкость встряхивают 2-3 мин. Оптическую плотность определяют с зеленым светофильтром в кювете на 0,3 см против воды. Количество Нв определяют по калибровочному графику в г/л.
Норма = 130-185г/л.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 19
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА МЕТОДОМ ИЕНДРАШЕКА
Значение метода: Для дифференциальной диагностики желтух необходимо определить, за счет какой фракции возникает билирубинемия.
|
Пигменты |
Желтухи |
||
|
Механическая |
Острый гепатит |
Гемолитическая |
|
|
Свободный билирубин крови |
Не изменен |
Незначительно повышен |
Резко повышен |
|
Связанный билирубин крови |
Резко повышен |
Значительно повышен |
Незначительно повышен |
|
Билирубин мочи |
Значительно повышен |
Незначительно повышен |
Не изменен |
|
Уробилин мочи |
Не изменен или снижен |
Значительно повышен |
Резко повышен |
|
Стеркобилин кала |
Снижен |
Не изменен или снижен |
Резко повышен |
|
Органоспецифические ферменты |
Умеренная гиперферментемия |
Резкая гиперферментемия на ранних стадиях |
Не изменены |
Принцип метода: при добавлении кофеинового реактива к сыворотке весь билирубин переходит в диссоциированное состояние и дает розово-фиолетовое окрашивание с диазореактивом. Без добавления кофеинового реактива окрашивание с диазореактивом дает только холебилирубин. По интенсивности окраски определяют светопоглащение.
Ход работы:
|
Реактивы |
Пробирка 1 |
Пробирка 2 |
Пробирка 3 |
|
Общий билирубин |
Холебилирубин |
Контроль |
|
|
Сыворотка крови |
0,5мл |
0,5мл |
1,0 мл |
|
Физ. раствор |
- |
1,75мл |
0,5 мл |
|
Кофеиновый реактив |
1,75мл |
- |
3,5 мл |
|
Диазосмесь 10 мл диазо 1 0,3 мл диазо 2 |
0,25мл |
0,25мл |
Для развития окраски общего билирубина пробу оставляют на 20 минут. Холебилирубин колориметрируют через 10-15 минут после добавления смеси. При более длительном стоянии в реакцию вступает гембилирубин. Обе пробирки колориметрируют против контроля в кюветах на 0,5 см с зеленым светофильтром. Количество гембилирубина определяют по разности общего и холебилирубина.
Норма: общий 4,2-20,5 мкМоль/л, холебилирубин 1,0-5,2мкМоль/л.
гембилирубин 3,2-15,4 мкМоль/л.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 20
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ТИТРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ С ПРИМЕНЕНИЕМ МУРЕКСИДА
Значение метода: Определение Са крови имеет большое значение (клиническое). Са определяют при рахите, при спазмофилии, при костных заболеваниях, при некоторых заболеваниях почек. При рахите также определяют коэффициент (Са/Р), в норме он равен 1,9-2 а при рахите увеличивается до 3 и более.
Принцип метода: мурексид образует с ионами Са в щелочной среде комплексное соединение, окрашенное в красно- фиолетовый или бледно-розовый цвет (в зависимости от концентрации). При титровании раствором более сильного комплексо-образователя трилона Б, этот комплекс разрушается, что приводит к изменению окраски, свойственной свободному мурексиду (бледно-сиреневой).
Ход работы: в стаканчик вносят 50 мл дистил. воды, 10 капель 9н р-ра NаОН и прибавляют несколько крупинок мурексида. Сразу появляется бледно-сиреневое окрашивание, обусловленное свободным мурексидом. Приблизительно половину раствора переливают в другой чистый стаканчик и эта часть служит эталоном окраски свободного мурексида. К оставшейся части р-ра добавляют 1мл сыворотки, что приводит к появлению бледно- розового окрашивания, обусловленного образованием кальциево-мурексидного комплекса. Раствор немедленно титруют трилоном Б до возращения прежней окраски индикатора. Конец титрования устанавливают путем сопоставления опытной и контрольных проб.
С тр.Б х V тр. Б 3,6мэкв/л Vтр Б
С Са= ----------------------------- = ---------------------
Vсыв 1мл
Vтр.Б- Обьем трилона Б, пошедший на титрование.
Норма: Са=4,5-6,0 мэкв/л
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 21
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ.
Значение метода: Гиперфосфатемия встречается при почечной недостаточности, гипопаратиреозе, акромегалии, при гипервитаминозе Д, костных заболеваниях, туберкулезе, диабете, кетозе, повышенной мышечной работе, при молочной диете. Гипофосфатемия наблюдается при гиперпаратиреозе, остеомаляции, пеллагре, длительном лечении инсулином и хлористым кальцием, при нарушении всасывания фосфатов, Д- авитаминозном рахите.
Принцип метода: Неорганический фосфор при взаимодействии с (NН4)2МоО4 образует фосфорно-молибденовую кислоту, которая восстанавливается аскорбиновой кислотой до синего фосфорно-молибденового комплекса. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации неорганического фосфора.
Ход работы: К 4мл. дист.воды прилить 1мл сыворотки и 5мл трихлоруксусной кислоты (ТХУ), через 10 минут фильтруют. К 5мл фильтрата добавляют 1мл (NН4)2МоО4 и 1,8мл дистил.воды,
0,2 мл аскорбиновой кислоты. Через 20 минут колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром относительно дист. воды. Количество неорганического фосфора определяют по калибровочной кривой. Норма: 1,8- 2,4 мэкв/л.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 22
Качественные реакции на неорганические и органические составные части мочи.
В пробирке держат 1мл НNО3 c NаСI , туда же осторожно по стенке, слегка наклонив пробирку наслаивают из пипетки мочу, на границе 2-х жидкостей при наличии белка появляется белое колечко.
Ход определения: К 0,5мл спиртового р-ра пирамидона прибавляют 5 капель конц. уксусной кислоты, 0,5 мл 3% Н2О2 и 1мл мочи. При положительной пробе получается фиолетовая окраска.
Принцип метода: Метод основан на способности энольной формы фенилпировиноградной кислоты образовывать с ионами трехвалентного железа комплексное соединение, окрашеное в сине-зеленый цвет.
Ход работы: к 5мл мочи приливают 4 капли 5Н раствора серной кислоты, перемешивают и добавляют к смеси 4 капли 10% раствора FеСI3. При наличии в моче фенилпировиноградной кислоты через 30сек- 1мин. появляется сине-зеленое окрашивание.
Проба с хлорным железом: 1мл мочи + 5капель хлорного железа =вишнево-красное окрашивание.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ САХАРА- РЕАКЦИЯ НИЛАНДЕРА.
Реакция Ниландера относится к окислительно-восстановительным методам определения сахара. Она основана на окислении глюкозы солью висмута Вi(NО3)2 в щелочной среде.
R- COH + Bi ------------- R-COOH +Bi
ОН
При кипячении, в случае наличия сахара в моче, выпадает черный осадок металлического висмута.
Ход работы: к 1-2мл патолог. мочи прибавляют 0,5мл реактива Ниландера и кипятят 2 мин.
СТОМАТОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
(дополнительные лабораторные работы)
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1
ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА СЛЮНЫ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ.
Принцип метода: белки в щелочной среде реагируют с сернокислой медью с образованием комплексных соединений, окрашенных в фиолетовый цвет. Интенсивность окрашивания пропорциональна концентрации белка в растворе.
Ход определения:
1.Тщательно прополоскать рот водой;
2.Отмерить в стаканчик 20 мл дистиллированной воды, прополоскать рот и выплюнуть содержимое в тот же стаканчик;
3.Впробирку отмерить 3,0 мл разведенной слюны (из стаканчика), добавить 3,0 мл биуретового реактива и через 30 минут колориметрировать на ФЭКе против контроля (зеленый светофильтр).
Время экспозиции 30 мин.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 2
Принцип метода: амилазная активность слюны или амилокластическая сила слюны, выражается количеством 0,1% раствора крахмала в мл, которое может расщепить 1мл слюны при температуре 38 град. в течении 30 минут.
Ход определения:
1. Наливают из бюретки в 10 пронумерованных пробирок по 1мл дистиллированной воды.
2. В первую пробирку отмеривают 1мл слюны, разведенной водой в 10 раз.
3. Перемешивают содержимое первой пробирки и последующего выпускания из пипетки путем трехкратного втягивания пипеткой жидкости из пробирки. 1мл полученного раствора переносят из первой пробирки во вторую.
4. Перемешивают таким же образом содержимое второй пробирки и переносят 1мл из второй пробирки в третью и т.д. Этим способом получают ряд разведений. Концентрация фермента в каждой последующей пробирке в 2 раза меньше, чем в предыдущей. Из десятой пробирки 1мл жидкости, как излишней выливают.
5. Наливают все 10 пробирок еще по 1мл дистил. воды.
6.Далее наливают пипеткой во все 10 пробирок (начиная с десятой, потом в девятую и т.д.) по 2мл раствора крахмала и перемешивают содержимое каждой пробирки.
7.Одновременно помещают все 10 пробирок в нагретую до 37 град С водяную баню.
8.Через 30 минут вынимают пробирки из бани, быстро охлаждают их током холодной воды, перемешивают содержимое каждой пробирки и ставят по порядку в штатив.
9. Прибавляют в каждую пробирку по 2 капли раствора йода, перемешивают и наблюдают в пробирках гамму цветов от желтого к синему. 10.Составляют таблицу для записей реакций окрашивания содержимого всех пробирок с йодом по предлагаемому образцу: Гидролиз крахмала в присутствии ферментов слюны при различном ее разведении.
|
№ п/п; |
Количество 0,1% раствора крахмала в мл |
Разведение слюны |
Окрашивание с йодом |
Расчет: расчитывают количество слюны в последней пробирке с желтоватой окраской (5 пробирка). Если слюна в ней, например, была разведена в 320 раз составляют следующую пропорцию и находят амилокластическую силу слюны: 1/320 мл слюны расщепили 2мл 0,1% р-ра крахмала; 1мл слюны расщепил Х мл 0,1% р-ра крахмала.
2 Х 1
Х= ------------------------- = 640мл 0,1 % раствора крахмала.
1/320
В норме амилазная активность слюны А = 160-320.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФОТА ЗЫ СЛЮНЫ.
Принцип: Под действием фермента слюны бета-глицерофосфат натрия подвергается гидролизу с освобождением неорганического фосфата, по которому судят об активности данного фермента.
Ход определения:
РЕАКТИВЫ ОПЫТ КОНТРОЛЬ
1. р-р в-глицерофосфата 1мл 1мл
2. слюна 0,2 мл --
Инкубация 30 мин при 37 градусах Цельсия.
3. ТХУ 10% 1мл 1мл
4. слюна -- 0,2мл
Тщательно перемешивают и фильтруют через смоченный дистиллированной водой фильтр.
К фильтрату добавить:
5. молибденовый р-р 1мл 1мл
6. р-р аскорбиновой
кислоты 1% 1мл 1мл
Через 10 минут колометрировать против воды (красный светофильтр, кюветы 5мм).
Расчет: Из коэффициента светопоглощения опыта (Еоп) высчитают коэффициент светопоглащения контроля (Е контр). Разность посмотреть по калибровочному графику. Результат выражен в условных единицах.
Нормальная активность щелочной фосфатазы слюны 18-22ед.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 4
Значение метода: Аминотрансферазы (АЛТ и АСТ) представляют собой ферменты, участвующие в переносе аминогрупп от альфа-аминокислот к альфа- кетокислотам. Коферментом в этой реакции является производная Вит В6- пиридоксальфосфат. Аминотрансферазы относятся к широко распространенным ферментам в организме, к ряду внутриклеточных. В сыворотке крови активность этих ферментов в норме не высока. Органические поражения при острых и хронических заболеваниях, сопровождаются деструкцией клеток, приводят к выходу трансаминаз из очага поражения в кровь.
АЛТ-содержится в высоких концентрациях в печени и в меньших количествах в скелетных мышцах, почках, сердечной мышце. Значительное повышение (в 10-100 раз) активности АЛТ в крови наблюдается при вирусном гепатите, токсическом некрозе печени. Особое значение имеет определение АЛТ в инкубационный период вирусного гепатита, а также для постановки диагноза при безжелтушной форме этого заболевания и эффективности лечения.
АСТ- широко распространена с высокими концентрациями в сердце, печени, скелетных мышцах, почках, эритроцитах. Повреждение любой из этих тканей может привести к повышению концентрации АСТ в сыворотке крови. Особое значение определения АСТ имеет для диагностики инфаркта миокарда и динамики заболевания. Уже через три часа после заболевания АСТ повышается, в сыворотке на 4-5 сутки наблюдается пик подъема, к 7 суткам активность АСТ должна вернуться к норме.
Активность АСТ определяется также в ротовой жидкости. Источником АСТ являются эпителиальные клетки, фибробласты, лейкоциты крови и плазма крови. В норме активность АСТ в ротовой жидкости следовая. Увеличение активности АСТ говорит о повреждении тканей парадонта и может служить одним из признаков гингивита.
Ход работы: вместо сыворотки ротовую жидкость.
Принцип метода: О трансаминазной активности сыворотки крови судят по количеству ПВК, образующейся при переаминировании из аланина или в результате декарбоксилирования щавелеуксусной кислоты, образующейся при переаминировании из аспарагиновой кислоты (АСТ). ПВК взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином, с образованием 2,4-динитрофенилгидразона пировиноградной кислоты. При обработке динитрофенилгидразона щелочью образуется окрашенное в красный цвет соединение. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству ПВК.
Ход работы: В пробирку вносят 0,1мл сыворотки и 0,5мл субстратной смеси, составленной из аланина и альфа-кетоглутаровой кислоты. Пробирку помещают в термостат при 37 град С на 15 минут, затем добавляют 0,5мл раствора 2,4-динитрофенилгидразина и оставляют стоять при комнатной температуре на 10 минут, после чего приливают 5мл NаОН и через 10-15 минут колориметрируют на ФЭКе в кювете на 0,5см с зеленым светофильтром против контроля.
Контроль: К 0,2мл Н2О приливают 1мл субстратной смеси, 1мл 2,4- динитрофенилгидразина и через 15 минут 10мл NаОН (обязательно соблюдать порядок добавления реактивов). После фотометрирования используют калибровочный график. Активность АЛТ выражают в мкм ПВК, образованной под действием ферментов, содержащихся в 1мл слюны за час при 37 град
Норма: АЛТ- 0,1-0,68 мкм/л.ч
АСТ- 0,1-0,45 мкм/л.ч
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 5
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В СЛЮНЕ ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ (ПО ОКИСЛЕНИЮ ФЕНОЛФТАЛЕИНА)
Принцип метода:
В-d глюкоза + в-d глюкозооксидаза глюколактон + ФАДН2
-------------------------
ФАД
ФАДН2+О2 = ФАД +Н2О2
Образущаяся перекись водорода в присутствии ионов меди окисляет фенолфталеин до соединения, которое в щелочной среде окрашено в красный цвет.
Ход работы: 0,2 мл слюны вливают в 2мл 5% ТХУ, перемешивают и фильтруют через смоченный дистил. водой фильтр. К 1мл фильтрата прибавляют 2мл 0,25 моль/л фосфата натрия и 1 каплю раствора глюкозооксидазы. Перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 5 мин. Затем добавляют 2 мл рабочего реактива и через 5мин фотометрируют в кюветах толщиной 1 см при зеленом светофильтре против дистил. воды.
Количество глюкозы в слюне определяется по калибровочному графику. Концентрацию глюкозы в слюне определить до и через 15 мин. после приема сладостей и последующего применения различных гигиенических средств. Для гигиенических мероприятий использовать общедоступные средства: водопроводную воду, 1-2% раствор бикарбоната натрия, зубную щетку или одну из не содержащих сахара жевательных резинок.
Содержание глюкозы определять орто-толуидиновым методом.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 6
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ В СЛЮНЕ ТИТРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ С ПРИМЕНЕНИЕМ МУРЕКСИДА
Ход определения: в стаканчик вносят 50 мл дистил.воды, 10 капель 9Н р-ра NаОН и прибавляют несколько крупинок мурексида. Сразу появляется бледно-сиреневое окрашивание, обусловленное свободным мурексидом. Приблизительно половину раствора переливают в другой чистый стаканчик и эта часть служит эталоном окраски свободного мурексида. К оставшейся части раствора добавляют 1мл слюны, что приводит к появлению бледно – розового окрашивания, обусловленного образованием кальциево-мурексидного комплекса. Раствор немедленно титруют трилоном Б до возращения прежней окраски индикатора. Конец титрования устанавливают путем сопоставления опытной и контрольных проб.
Стр.б * V тр.б 1,8(мм/л) *Vтрб
Са=--------------------- = ----------------------- = ммол/л
V слюны 1
Vтр.б: 0,9-2,3 ммоль/л
ИНТЕРПРИТАЦИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
Глюкоза
Универсальный источник энергии для клеток - главное вещество, из которого любая клетка человеческого организма получает энергию для жизни. Потребность организма в энергии, а значит - в глюкозе - увеличивается параллельно физической и психологической нагрузке под действием гормона стресса - адреналина, во время роста, развития, выздоровления (гормоны роста, щитовидной железы, надпочечников). Для усвоения глюкозы клетками необходимо нормальное содержание инсулина - гормона поджелудочной железы. При его недостатке (сахарный диабет) глюкоза не может пройти в клетки, ее уровень в крови повышен, а клетки голодают.
Повышение (гипергликемия):
- сахарный диабет (недостаточность инсулина)
- физическая или эмоциональная нагрузка (выброс адреналина)
- тиреотоксикоз (повышение функции щитовидной железы)
- феохромоцитома (опухоль надпочечников, выделяющая адреналин)
- акромегалия, гигантизм (повышение уровня гормона роста)
- синдром Кушинга (повышение уровня гормона надпочечников - кортизола)
- заболевания поджелудочной железы (панкреатит, опухоль, муковисцидоз)
- хронические заболевания печени, почек
Снижение (гипогликемия):
- голодание
- передозировка инсулина
- заболевания поджелудочной железы (опухоль из клеток, синтезирующих инсулин)
- опухоли (избыточное потребление глюкозы как энергетического материала опухолевыми клетками)
- недостаточность функции эндокринных желез (надпочечников, щитовидной, гипофиза (гормон роста)
- тяжелые отравления с поражением печени (алкоголем, мышьяком, соединениями хлора, фосфора, салицилатами, антигистаминами)
- состояние после гастрэктомии, заболевания желудка и кишечника (нарушение всасывания)
- врожденная недостаточность у детей (галактоземия, синдром Гирке)
- у детей, рожденных от матерей с сахарным диабетом
- недоношенность
Общий белок
Белки - главный биохимический критерий жизни. Они входят в состав всех анатомических структур (мышцы, клеточные мембраны), переносят вещества по крови и в клетки, ускоряют течение биохимических реакций в организме, распознают вещества - свои или чужие и защищают от чужих, регулируют обмен веществ, удерживают жидкость в кровеносных сосудах и не дают ей уходить в ткани. Белки синтезируются в печени из аминокислот пищи. Общий белок крови состоит из двух фракций: альбумины и глобулины.
Повышение (гиперпротеинемия):
- обезвоживание (ожоги, диарея, рвота - относительное повышение концентрации белка за счет снижения объема жидкости)
- миеломная болезнь (избыточная продукция гамма-глобулинов)
Снижение (гипопротеинемия):
- голодание (полное или белковое - строгое вегетарианство, нервная анорексия)
- заболевания кишечника (нарушение всасывания)
- нефротический синдром (потеря в почках)
- повышенное потребление (кровопотеря, ожоги, опухоли, асцит, хроническое и острое воспаление)
- хроническая печеночная недостаточность (гепатит, цирроз)
Альбумин
Одна из двух фракций общего белка. Выполняет транспортную функцию.
Повышение (гиперальбуминемия):
Истинной (абсолютной) гиперальбуминемии не бывает. Относительная возникает при снижении общего объема жидкости (обезвоживании) - см. гиперпротеинемия.
Снижение (гипоальбуминемия):
Те же, что и для общей гипопротеинемии.
Билирубин общий (норма
Компонент желчи, состоит из двух фракций - непрямого (несвязанного), образующегося при распаде клеток крови (эритроцитов), и прямого (связанного), образующегося из непрямого в печени и выводящегося через желчные протоки в кишечник. Является красящим веществом (пигментом), поэтому при его повышении в крови изменяется окраска кожи - желтуха.
Повышение (гипербилирубинемия):
- избыточное разрушение эритроцитов (гемолитическая желтуха: резус-конфликт, переливание крови, гемолитическая анемия, малярия, физиологическая желтуха новорожденных)
- повреждение печеночных клеток (гепатиты, гепатозы - паренхиматозная желтуха)
- непроходимость желчных протоков (механическая желтуха)
- врожденные особенности обмена веществ (синдром Жильбера, семейная гипербилирубинемия)
Билирубин прямой
Одна из двух фракций общего билирубина (см). Определяют для дифференциальной диагностики гипербилирубинемии (желтухи).
Повышение:
- гемолиз эритроцитов
Мочевина
Продукт обмена белков, удаляющийся почками. Часть остается в крови.
Повышение:
- нарушение функции почек
- непроходимость мочевыводящих путей
- повышенное содержание белка в пище
- повышенное разрушение белка (ожоги, острый инфаркт миокарда)
Снижение:
- белковое голодание
- избыточное потребление белка (беременность, акромегалия)
- нарушение всасывания
Креатинин
Креатинин - как и мочевина, продукт обмена белков, выводящийся почками. В отличие от мочевины зависит не только от уровня белка, но от интенсивности его обмена. т.о. при акромегалии и гигантизме (повышенный синтез белка) его уровень растет, в отличие от уровня мочевины. В остальном причины изменения уровня те же, что для мочевины (см).
Мочевая кислота
Мочевая кислота – продукт обмена нуклеиновых кислот, выводящийся из организма почками.
Повышение (гиперурикемия):
- подагра (нарушение обмена нуклеиновых кислот)
- почечная недостаточность
- миеломная болезнь
- токсикоз беременных
- пища, богатая нуклеиновыми кислотами (печень, почки)
- тяжелая физическая работа
Снижение (гипоурикемия):
- болезнь Вильсона-Коновалова
- синдром Фанкони
- диета, бедная нуклеиновыми кислотами
Аланинаминотрансфераза (АлАТ)
Фермент, вырабатываемый клетками печени, скелетных мышц и сердца.
Повышение:
- разрушение клеток печени (некроз, цирроз, желтуха, опухоли, алкоголь)
- инфаркт миокарда
- разрушение мышечной ткани (травма, миозит, мышечная дистрофия)
- ожоги
- токсическое действие на печень лекарств (антибиотиков и др)
Снижение:
- недостаточность витамина В6
Аспартатаминотрансфераза (АсАТ)
Фермент вырабатываемый клетками сердца, печени, скелетных мышц и эритроцитами.
Повышение:
- повреждение печеночных клеток (гепатит, токсическое повреждение лекарствами, алкоголь, метастазы в печень)
- тяжелая физическая нагрузка
- сердечная недостаточность, инфаркт миокарда
- ожоги, тепловой удар
Гамма-глутамилтрансфераза (Гамма-ГТ)
Фермент, вырабатываемый клетками печени, поджелудочной железы, предстательной железы, щитовидной железы.
Повышение:
- заболевания печени (алкоголизм, гепатит, цирроз, рак)
- заболевания поджелудочной железы (панкреатит, сахарный диабет)
- гипертиреоз (гиперфункция щитовидной железы)
- рак предстательной железы
Снижение:
- гипотиреоз (гипофункция щитовидной железы)
Амилаза
Фермент, вырабатываемый клетками поджелудочной и околоушной слюнной желез.
Повышение:
- панкреатит (воспаление поджелудочной железы)
- паротит (воспаление околоушной слюнной железы)
Снижение:
- недостаточность функции поджелудочной железы
- муковисцидоз
Калий, натрий, хлориды
Обеспечивают электрические свойства клеточных мембран. По разные стороны клеточной мембраны специально поддерживается разница концентрации и заряда: натрия и хлоридов больше снаружи клетки, а калия внутри, но при этом меньше, чем натрия снаружи, - это создает разность потенциалов между сторонами клеточной мембраны - заряд покоя, который позволяет клетке быть живой и реагировать на нервные импульсы, участвуя в системной деятельности организма. Натрий и хлориды - внеклеточные ионы, калий - внутриклеточный. Кроме поддержания потенциала покоя, эти ионы принимают участие в генерации и проведении нервного импульса - потенциала действия. Регуляция минерального обмена в организме (гормоны коры надпочечников) направлена на задержку натрия, которого не хватает в натуральной пище (без поваренной соли) и выведение калия из крови, куда он попадает при разрушении клеток. Ионы вместе с другими растворенными веществами удерживают жидкость: цитоплазму внутри клеток, внеклеточную жидкость в тканях, кровь - в кровеносных сосудах, регулируя артериальное давление, предотвращая развитие отеков. Хлориды входят в состав желудочного сока.
Повышение калия (гиперкалиемия):
- повреждение клеток (гемолиз - разрушение клеток крови, тяжелое голодание, судороги, тяжелые травмы)
- обезвоживание
- острая почечная недостаточность (нарушение выведения почками)
- надпочечниковая недостаточность
Снижение калия (гипокалиемия)
- хроническое голодание (непоступление с пищей)
- продолжительные рвота, понос (потеря с кишечным соком)
- нарушение функции почек
- избыток гормонов коры надпочечников (в т.ч. прием лекарственных форм кортизона)
- муковисцидоз
Повышение натрия (гипернатриемия):
- избыточное потребление соли
- потеря внеклеточной жидкости (профузный пот, тяжелая рвота и диарея, повышенное мочеотделение (несахарный диабет)
- избыточная задержка (повышенная функция коры надпочечников)
- нарушение центральной регуляции водно-солевого обмена (патология гипоталамуса, кома)
Снижение натрия (гипонатриемия):
- потеря (злоупотребление мочегонными, патология почек, надпочечниковая недостаточность)
- снижение концентрации за счет повышения объема жидкости (сахарный диабет, хроническая сердечная недостаточность, цирроз печени, нефротический синдром, отеки)
Повышение хлоридов:
- обезвоживание
- острая почечная недостаточность
- несахарный диабет
- отравление салицилатами
- повышенная функция коры надпочечников
Снижение хлоридов:
- избыточное потоотделение, рвота, промывание желудка
- увеличение объема жидкости
Кальций
Участвует в проведении нервного импульса, особенно в сердечной мышце. Как все ионы, удерживает жидкость в сосудистом русле, препятствуя развитию отеков. Необходим для мышечного сокращения, свертывания крови. Входит в состав костной ткани и эмали зубов. Уровень в крови регулируется гормоном паращитовидных желез и витамином Д. Паратгормон повышает уровень кальция в крови, вымывая из костей, увеличивая всасывание в кишечнике и задерживая выведение почками.
Повышение (гиперкальциемия):
- повышение функции паращитовидной железы
- злокачественные опухоли с поражением костей (метастазы, миелома, лейкозы)
- саркоидоз
- избыток витамина Д
- обезвоживание
Снижение (гипокальциемия):
- снижение функции щитовидной железы
- дефицит витамина Д
- хроническая почечная недостаточность
- дефицит магния
- гипоальбуминемия
Фосфор неорганический
Элемент, входящий в состав нуклеиновых кислот, костной ткани и основных систем энергообеспечения клетки - АТФ. Регулируется параллельно с уровнем кальция.
Повышение:
- разрушение костной ткани (опухоли, лейкоз, саркоидоз)
- избыток витамина Д
- заживление переломов
- снижение функции паращитовидных желез.
Снижение:
- недостаток гормона роста
- дефицит витамина Д
- нарушение всасывания, тяжелый понос, рвота
- гиперкальциемия
Магний
Антагонист кальция. Способствует расслаблению мышц. Участвует в синтезе белка.
Повышение (гипермагниемия):
- обезвоживание
- почечная недостаточность
- надпочечниковая недостаточностьь
- множественная миелома
Снижение (гипомагниемия):
- нарушение поступления и/или всасывания магния
- острый панкреатит
- снижение функции паращитовидной железы
- хронический алгоколизм
- беременность
Лактат
Молочная кислота. Образуется в клетках в процессе дыхания, особенно много в мышцах. При полноценном снабжении кислородом не накапливается, а разрушается до нейтральных продуктов и выводится. В условиях гипоксии (недостатка кислорода) накапливается, вызывает чувство мышечной усталости, нарушает процесс тканевого дыхания.
Повышение:
- прием пищи
- интоксикация аспирином
- физическая нагрузка
- введение инсулина
- гипоксия (недостаточное снабжение кислородом тканей: кровотечение, сердечная недостаточность, дыхательная недостаточность, анемия)
- инфекции (пиелонефрит)
- третий триместр беременности
- хронический алкоголизм
Креатинкиназа
Фермент, содержащийся в скелетных мышцах, сердечной, реже - в гладких (матке, ЖКТ)
Повышение:
- инфаркт миокарда
- повреждения мышц (миопатии, миодистрофии, травмы, хирургические вмешательства, инфаркты)
- беременность
- алкогольный делирий (белая горячка)
- черепно-мозговая травма
Снижение:
- малая мышечная масса
- неподвижный образ жизни
Лактатдегидрогеназа (ЛДГ)
Внутриклеточный фермент, образующийся во всех тканях организма.
Повышение:
- разрушение клеток крови (серповидноклеточная, мегалобластическая, гемолитическая анемии)
- заболевания печени (гепатиты, цирроз, механическая желтуха)
- повреждения мышц (инфаркт миокарда)
- опухоли, лейкемии
- повреждения внутренних органов (инфаркт почки, острый панкреатит)
Фосфатаза щелочная
Фермент, образующийся в костной ткани, печени, кишечнике, плаценте, легких.
Повышение:
- беременность
- повышенный обмен в костной ткани (быстрый рост, заживление переломов, рахит, гиперпаратиреоз)
- заболевания костей (остеогенная саркома, метастазы рака в кости, миеломная болезнь)
- заболевания печени, инфекционный мононуклеоз
Снижение:
- гипотиреоз (гипофункция щитовидной железы)
- анемия (малокровие)
- недостаток витамина С (цинга) В12, цинка, магния
- гипофосфатаземия
Холинэстераза
Фермент, образующийся в печени. Основное использование - для диагностики возможного отравления инсектицидами и оценки функции печени.
Повышение:
- гиперлипопротеинемия IV типа
- нефроз
- ожирение
- рак молочной железы
Снижение:
- отравление фосфорорганическими соединениями
- патология печени (гепатит, цирроз, метастазы в печень)
- дерматомиозит
- состояние после хирургических операций
Липаза
Фермент, расщепляющий жиры пищи. Выделяется поджелудочной железой. При панкреатите более чувствительна и специфична, чем амилаза, при простом паротите, в отличие от амилазы, не изменяется.
Повышение:
- панкреатит, опухоли, кисты поджелудочной железы
- желчная колика
- перфорация полого органа, непроходимость кишечника, перитонит
Амилаза панкреатическая
Фермент, вырабатываемый поджелудочной железой.
Повышение:
- острый и хронический панкреатит
Снижение:
- некроз поджелудочной железы
Гликозилированный гемоглобин
Образуется из гемоглобина при долго повышенном уровне глюкозы - в течение не менее 120 дней (длительность жизни эритроцита), используется для оценки компенсированности сахарного диабета, долговременного контроля эффективности лечения.
Повышение:
- длительная гипергликемия (более 120 дней)
Фруктозамин
Образуется из альбумина крови при кратковременном повышении уровня глюкозы - гликированный альбумин. Используется, в отличие от гликированного гемоглобина, для кратковременного контроля состояния больных сахарным диабетом (особенно новорожденных), эффективности лечения.
С- пептид
Продукт обмена инсулина. Используется для оценки уровня инсулина, когда его прямое определение в крови затруднительно:
наличие антител, введение препарата инсулина извне.
ЛИПИДЫ
Липиды (жиры) - необходимые для живого организма вещества. Основной липид, который человек получает из пищи, и из которого затем образуются собственные липиды - холестерин. Он входит в состав клеточных мембран, поддерживает их прочность. Из него синтезируются стероидные гормоны: гормоны коры надпочечников, регулирующие водно-солевой и углеводный обмен, приспосабливающие организм к новым условиям; половые гормоны. Из холестерина образуются желчные кислоты, участвующие в усвоении жиров в кишечнике. Из холестерина в коже под действием солнечных лучей синтезируется витамин Д, необходимый для усвоения кальция. При повреждении целостности сосудистой стенки и/или избытке холестерина в крови он осаждается на стенку и образует холестериновую бляшку. Это состояние называется атеросклероз сосудов: бляшки суживают просвет, мешают кровотоку, нарушают гладкость течения крови, усиливают свертываемость крови, способствуют образованию тромбов. В печени образуются различные комплексы липидов с белками, циркулирующие в крови: липопротеиды высокой, низкой и очень низкой плотности (ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП); общий холестерин поделен между ними. Липопротеиды низкой и очень низкой плотности осаждаются в бляшках и способствуют прогрессированию атеросклероза. Липопротеиды высокой плотности за счет наличия в них специального белка - апопротеина А1 - способствуют “вытягиванию” холестерина из бляшек и играют защитную роль, останавливают атеросклероз. Для оценки риска состояния важен не суммарный уровень общего холестерина, а соотношение его фракций.
Общий холестерин
Повышение:
- генетические особенности (семейные гиперлипопротеинемии)
- заболевания печени
- гипотиреоз (недостаточность функции щитовидной железы)
- алкоголизм
- ишемическая болезнь сердца (атеросклероз)
- беременность
- прием синтетических препаратов половых гормонов (контрацептивы)
Снижение:
- гипертиреоз (избыток функции щитовидной железы)
- нарушение усвоения жиров
Холестерин ЛПВП
Повышение:
- патология печени (хронический гепатит, цирроз, алкоголизм и другие хронические интоксикации)
Снижение:
- декомпенсированный сахарный диабет
- хроническая почечная недостаточность
- ранний атеросклероз коронарных артерий
Холестерин ЛПНП
Повышение:
- генетические особенности липидного обмена
- ранний атеросклероз коронарных сосудов
- гипотиреоз
- заболевания печени
- беременность
- прием препаратов половых гормонов
Апобелок А1
Защитный фактор против атеросклероза.
Нормальный уровень в сыворотке зависит от возраста и пола. г/л.
Повышение:
- снижение веса
- физическая нагрузка
Снижение:
- генетические особенности липидного обмена
- ранний атеросклероз коронарных сосудов
- некомпенсированный сахарный диабет
- курение
- пища, богатая углеводами и жирами
Апобелок В
Фактор риска атеросклероза
Нормальный уровень в сыворотке зависит от пола и возраста. г/л.
Повышение:
- злоупотребление алкоголем
- прием препаратов стероидных гормонов (анаболики, глюкокортикоиды)
- ранний атеросклероз коронарных сосудов
- заболевания печени
- беременность
- сахарный диабет
- гипотиреоз
Снижение:
- диета с низким содержанием холестерина
- гипертиреоз
- генетические особенности липидного обмена
- потеря веса
- острый стресс (тяжелая болезнь, ожоги)
В\А1
Это соотношение является более специфичным маркером атеросклероза и ишемической болезни сердца, чем соотношение фракций
ЛПНП/ЛПВП. Чем выше, тем больше риск.
Триглицериды
Другой класс липидов, не являющийся производным холестерина.
Повышение:
- генетические особенности липидного обмена
- ожирение
- нарушение толерантности к глюкозе
- заболевания печени (гепатит, цирроз)
- алкоголизм
- ишемическая болезнь сердца
- гипотиреоз
- беременность
- сахарный диабет
- прием препаратов половых гормонов
Снижение:
- гипертиреоз
- недостаточность питания, всасывания
КАРДИОМАРКЕРЫ
Миоглобин
Белок мышечной ткани, отвечает за ее дыхание.
Повышение:
- инфаркт миокарда
- уремия (почечная недостаточность)
- мышечное перенапряжение (спорт, электроимпульсная терапия, судороги)
- травмы, ожоги
Снижение:
- аутоиммунные состояния (аутоантитела против миоглобина): полимиозит, ревматоидный артрит, миастения.
Креатинкиназа МВ
Одна из фракций общей креатинкиназы.
Повышение:
- острый инфаркт миокарда
- острое повреждение скелетных мышц
Тропонин I
Специфический сократительный белок сердечной мыщцы.
Повышение:
- инфаркт миокарда
- ишемическая болезнь сердца
ДИАГНОСТИКА АНЕМИИ (БИОХИМИЯ)
Основная функция крови - транспорт кислорода к клеткам тела. Эту функцию выполняют красные кровяные тельца - эритроциты. Эти клетки образуются в красном костном мозге, выходя из него, теряют ядро - на его месте образуется впадина, и клетки принимают форму двояковогнутого диска - при такой форме обеспечивается максимальная площадь поверхности присоединения кислорода. Вся внутренняя часть эритроцита заполнена белком гемоглобином - красным кровяным пигментом. В центре молекулы гемоглобина находится ион железа, именно к нему присоединяются молекулы кислорода. Анемия - состояние, при котором доставка кислорода не соответствует потребностям тканей в нем. Проявляется в виде кислородного голодания (гипоксии) органов и тканей, ухудшении их работы. Возможные причины анемии делятся на 3 группы: недостаточное потребление кислорода (недостаток его в атмосферном воздухе, патология органов дыхания), нарушение его транспорта в ткани (патология крови - недостаток или разрушение эритроцитов, дефицит железа, патология гемоглобина, заболевания сердечно-сосудистой системы) и повышенный расход кислорода (кровотечение, опухоли, рост, беременность, тяжелые заболевания). Для диагностики причины анемии проводят следующие тесты.
Железо
Нормальное содержание в сыворотке зависит от пола
Повышение:
- гемолитическая анемия (разрушение эритроцитов и выход их содержимого в цитоплазму)
- серповидно-клеточная анемия (патология гемоглобина, эритроциты имеют неправильную форму и тоже разрушаются)
- апластическая анемия (патология костного мозга, эритроциты не образуются, и железо не используется)
- острый лейкоз
- избыточное лечение препаратами железа
Снижение:
- железодефицитная анемия
- гипотиреоз
- злокачественные опухоли
- скрытое кровотечение (желудочно-кишечное, гинекологическое)
Ферритин
Белок, в составе которого железо находится в депо, запасаясь на будущее. По его уровню можно судить о достаточности запасов
железа в организме.
Повышение:
- избыток железа (некоторые заболевания печени)
- острый лейкоз
- воспалительный процесс
Снижение:
- дефицит железа
Общая железосвязывающая способность сыворотки
Показывает наличие железа в сыворотке крови - в транспортной форме (в связи со специальным белком - трансферрином). Железосвязывающая способность повышается при недостатке железа и снижается при его избытке.
Повышение:
- железодефицитная анемия
- поздние сроки беременности
Снижение:
- анемия (не железодефицитная)
- хронические инфекции
- цирроз печени
Фолаты
Фолиевая кислота вместе с витамином В12 необходима для деления клеток, при ее дефиците развивается в том числе и анемия - В12-фолиеводефицитная или мегалобластная (предшественники эритроцитов в костном мозге не могут поделиться и в кровь выходят гигантские клетки).
Повышение:
- вегетарианская диета (избыток фолиевой кислоты в пище)
Снижение:
- дефицит фолиевой кислоты
- дефицит витамина В12
- алкоголизм
- недостаточность питания
- нарушение всасывания
Группа крови
На эритроцитах имеются специальные белки - антигены групп крови. В плазме к этим антигенам имеются антитела. При встрече одноименных антигена и антитела происходит их взаимодействие и склеивание эритроцитов в монетные столбики. В таком виде они не могут переносить кислород. Поэтому в крови одного человека не встречаются одноименные антиген и антитело. Их комбинация - группа крови. Ее надо учитывать при переливании крови, т.е. переливать только одногруппную кровь, чтобы избежать склеивания. Антигены и антитела групп крови, как все белки организма, наследуются - именно белки, а не сами группы крови, поэтому комбинация этих белков у детей может отличаться от комбинации у родителей и получаться другая группа крови. Существует множество антигенов на эритроцитах и множество систем групп крови. В рутинной диагностике пользуются определением группы крови по системе АВ0. Антигены: А, В; антитела: альфа, бета. Наследование: ген IA кодирует синтез белка А, IB - белка В, i не кодирует синтез белков.
Группа крови I (0). Генотип ii. Отсутствие антигенов на эритроцитах, присутствие обоих антител в плазме
Группа крови II (А). Генотип IA\IA или IА\i. Антиген А на эритроцитах, антитело бета в плазме
Группа крови III (В). Генотип IB\IB или IВ\i. Антиген В на эритроцитах, антитело альфа в плазме
Группа крови IV (АВ). Генотип IA\IB. Оба антигена на эритроцитах, отсутствие антител в плазме.
Наследование:
У родителей с первой группой крови может родиться ребенок только с первой группой.
У родителей со второй - ребенок с первой или второй
У родителей с третьей - ребенок с первой или третьей
У родителей с первой и второй - ребенок с первой или второй
У родителей с первой и третьей - ребенок с первой или третьей
У родителей со второй и третьей - ребенок с любой группой крови
У родителей с первой и четвертой - ребенок со второй и третьей
У родителей со второй и четвертой - ребенок со второй, третьей и четвертой
У родителей с третьей и четвертой - ребенок со второй, третьей и четвертой
У родителей с четвертой - ребенок со второй, третьей и четвертой.
Если у одного из родителей первая группа крови, у ребенка не может быть четвертой. И наоборот - если у одного из родителей четвертая, у ребенка не может быть первой.
Групповая несовместимость:
При беременности может возникнуть не только резус-конфликт (см), но и конфликт по группам крови. Если плод имеет антиген, которого нет у матери, она может вырабатывать против него антитела: антиА, антиВ. Конфликт может возникнуть если плод имеет II группу крови, а мать I или III; плод III, а мать I или II; плод IV, а мать любую другую. Нужно проверять наличие групповых антител во всех парах, где у мужчины и женщины разные группы крови, за исключением случаев, когда у мужчины первая группа.
Резус-фактор
Белок на мембране эритроцитов. Присутствует у 85% людей - резус-положительных. Остальные 15% - резус-отрицательны. Наследование: R- ген резус-фактора. r - отсутствие резус фактора. Родители резус-положительны (RR, Rr) - ребенок может быть резус-положительным (RR, Rr) или резус-отрицательным (rr). Один родитель резус-положительный (RR, Rr), другой резус-отрицательный (rr) - ребенок может быть резус-положительным (Rr) или резус-отрицательным (rr). Родители резус-отрицательны, ребенок может быть только резус-отрицательным. Резус-фактор, как и группу крови, необходимо учитывать при переливании крови. При попадании резус фактора в кровь резус-отрицательного человека, к нему образуются антирезусные антитела, которые склеивают резус-положительные эритроциты в монетные столбики.
Резус-конфликт
Может возникнуть при беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом (резус-фактор от отца). При попадании эритроцитов плода в кровоток матери, против резус-фактора у нее образуются антирезусные антитела. В норме кровоток матери и плода смешивается только во время родов, поэтому теоретически возможным резус-конфликт считается во вторую и последующие беременности резус-положительным плодом. Практически в современных условиях часто происходит повышение проницаемости сосудов плаценты, различные патологии беременности, приводящие к попаданию эритроцитов плода в кровь матери и во время первой беременности. Поэтому антирезусные антитела необходимо определять при любой беременности у резус-отрицательной женщины начиная с 8 недель (время образования резус-фактора у плода). Для предотвращения их образования во время родов, в течение 72 часов после любого окончания беременности срока более 8 недель вводят антирезусный иммуноглобулин.
ОБЩИЙ АНАЛИЗ КРОВИ
Гемоглобин
Кровяной пигмент эритроцитов, переносящий кислород.
Повышение:
- полицитемия (увеличение количества эритроцитов)
- пребывание на больших высотах
- чрезмерная физическая нагрузка
- обезвоживание, сгущение крови
Снижение:
- анемия
Цветовой показатель
Цветовой показатель отражает относительное содержание гемоглобина в эритроцитах. Используется для дифференциальной диагностике анемий: нормохромная (нормальное количество гемоглобина в эритроците), гиперхромная (повышенное), гипохромная (пониженное)
Повышение:
- сфероцитоз
Снижение:
- железодефицитная анемия
Эритроциты
Красные кровяные тельца. Образуются в красном костном мозге. Содержат гемоглобин. Переносят кислород. Норма 4-5 млн в мл (у женщин меньше, у мужчин – больше)
Повышение:
-полицитемия (болезнь костного мозга)
-обезвоживание (сгущение крови)
Снижение:
-анемия
Лейкоциты
Белые кровяные тельца. Образуются в красном костном мозге. Функция - защита от чужеродных веществ и микробов (иммунитет).
Норма 4-10 тыс в мл.
Существуют разные виды лейкоцитов со специфическими функциями (см. лейкоцитарная формула), поэтому диагностическое значение имеет изменение числа отдельных видов, а не всех лейкоцитов в общем.
Повышение:
- лейкоз
- инфекции, воспаление
- состояние после острого кровотечения, гемолиза
- аллергия
Снижение:
- некоторые инфекции (грипп, корь, краснуха и др)
- патология костного мозга (апластическая анемия)
- повышенная функция селезенки
- генетические аномалии иммунитета
Лейкоцитарная формула
Процентное соотношение разных видов лейкоцитов.
Нейтрофилы
Клетки, отвечающие за воспаление, борьбу с инфекцией (кроме вирусных), неспецифическую защиту (иммунитет), удаление собственных погибших клеток. Зрелые нейтрофилы имеют сегментированное ядро, молодые - палочковидное. Диагностическое значение при воспалении имеет именно относительное повышение числа палочкоядерных нейтрофилов (палочкоядерный сдвиг).
Норма - 60-75% от общего числа лейкоцитов, палочкоядерных - до 6.
Повышение:
- инфекции (бактериальные, грибковые, паразитарные)
- воспалительный процесс (ревматизм, повреждение тканей, курение, панкреатит и тп)
- интоксикации (почечная, печеночная недостаточность)
- психоэмоциональное возбуждение
- злокачественные опухоли
Снижение:
- некоторые инфекции (вирусные, хронические, тяжелые, особенно у пожилых)
- апластическая анемия, патология костного мозга
- генетические нарушения иммунитета
Эозинофилы
Участвуют в борьбе с паразитарными инвазиями, аллергией.
Норма - 1-5% от общего числа лейкоцитов.
Повышение:
- аллергические состояния
- паразитарные инвазии
- злокачественные опухоли
- миелолейкоз
Снижение:
- гнойные инфекции
- роды
- оперативное вмешательство
- шок
Базофилы:
Выходя в ткани, превращаются в тучные клетки, отвечающие за выделение гистамина - реакцию гиперчувствительности на пищу, лекарства и пр.
Норма - 0-1% от общего числа лейкоцитов.
Повышение:
- реакции гиперчувствительности
- ветряная оспа
- гипотиреоз
- хронические синуситы
Снижение:
- гипертиреоз
- беременность
- овуляция
- стресс
- острые инфекции
Лимфоциты
Основные клетки иммунной системы. Борятся с вирусными инфекциями. Уничтожают чужеродные клетки и измененные собственные клетки (распознают чужеродные белки - антигены и избирательно разрушают клетки, их содержащие - специфический иммунитет), выделяют в кровь антитела (иммуноглобулины) - вещества, блокирующие молекулы антигенов и выводящие их из организма.
Норма - 18-25% от общего числа лейкоцитов.
Повышение:
- вирусные инфекции
- лимфолейкоз
Снижение:
- острые инфекции (невирсные) и заболевания
- апластическая анемия
- системная красная волчанка
- иммунодефицитные состояния
- потеря лимфы
Моноциты
Самые крупные лейкоциты, большую часть жизни проводят в тканях - тканевые макрофаги. Окончательно уничтожают чужеродные клетки и белки, очаги воспаления, разрушенные ткани. Важнейшие клетки иммунной системы, первые встречающие антиген, и представляющие его лимфоцитам для развития полноценного иммунного ответа.
Норма - 6-8% от общего числа лейкоцитов.
Повышение:
- инфекции вирусные, грибковые, протозойные
- туберкулез, саркоидоз, сифилис
- лейкозы
- системные заболевания соединительной ткани (ревматоидный артрит, системная красная волчанка, узелковый периартериит)
Снижение:
- апластическая анемия
- волосатоклеточный лейкоз
СОЭ
Скорость оседания эритроцитов в виде столбика при отстаивании крови. Зависит от количества эритроцитов, их “веса” и формы, и от свойств плазмы - количества белков (в основном фибриногена), вязкости. Норма 3-15 мм/ч.
Повышение:
- инфекции
- воспалительный процесс
- злокачественные оухоли
-анемия
-беременность
Отсутствие увеличения при наличии перечисленных выше причин:
- полицитемия
- снижение уровня фибриногена в плазме.
Ретикулоциты
Молодые формы эритроцитов, несозревшие. В норме находятся в костном мозге. Их избыточный выход кровь говорит о повышенной скорости образования эритроцитов (из-за их разрушения или повышения потребности).
Повышение:
- усиление образования эритроцитов при анемии (при кровопотере, железодефицитной, гемолитической)
Снижение:
- апластическая анемия
- заболевания почек
- нарушения созревания эритроцитов (В12-фолиево-дефцитная анемия)
Тромбоциты
Кровяные пластинки, образующиеся из гигантских клеток костного мозга. Отвечают за свертывание крови. Нормальное содержание в крови 180-360 тыс/мл.
Повышение:
- полицитемия
- миелолейкоз
- воспалительный процесс
- состояние после удаления селезенки, хирургических операций.
Снижение:
- тромбоцитопеническая пурпура
- системные аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка)
- апластическая анемия
- гемолитическая анемия
- гемолитическая болезнь, изоиммунизация по группам крови, резус-фактору
КОАГУЛОГРАММА (ГЕМОСТАЗИОГРАММА)
Свертывание крови состоит из трех этапов. Первый - при механическом или химическом повреждении стенки кровеносного сосуда или тромбоцитов выделяется вещество - тромбопластин, запускающий каскад реакций свертывания. Второй этап заключается в каскадной активации факторов свертывания - белков, всегда присутствующих в крови в норме. Синтезируются факторы свертывания в печени с участием витамина К, существуют в крови в неактивном виде, активируются в присутствии ионов кальция постепенно: тромбопластин активирует одни факторы, их активные формы активируют следующие и т.д. - каскадная реакция, последним этапом является образование активного тромбина из неактивного протромбина. Третий этап свертывания - активация тромбином неактивного белка крови фибриногена, превращение его в активный фибрин, который является уже нерастворимым белком и составляет основу сгустка. В сетях фибрина запутываются тромбоциты и другие форменные элементы крови, тромбоциты сокращают сгусток, спрессовывают его и образуют зрелый тромб, который закрывает дефект сосудистой стенки или закупоривает сосуд, в который попал химический раздражитель. Т.о. свертывание (гемостаз) состоит из плазменного звена (факторы свертывания и образование фибрина) и сосудисто-тромбоцитарного звена (прилипание (адгезия) тромбоцитов к сосудистой стенке, сокращение сосуда, агрегация тромбоцитов, формирование тромба). После выполнения своей функции тромбы разрушаются, фибрин растворяется
специальными веществами (плазмин) другой системы крови - фибринолитической. Т.о. состояние крови поддерживается взаимоотношением трех систем: свертывающей (факторы свертывания, тромбоциты, кальций, сосудистая стенка), противосвертывающей (ингибиторы всех реакций свертывания, уравновешивающие систему в норме, когда образование тромбов
на данный момент не нужно; например, ингибитор тромбина - антитромбин III) и фибринолитической (растворение сгустков). От преобладания той или иной системы в каждый момент времени зависит состояние крови.
Время кровотечения (свертывания) (по Дьюку)
Время прекращения кровотечения при проколе кожи. Основной скрининговый тест для оценки состояния сосудистой стенки и функции тромбоцитов.
В норме составляет 2-3 минуты (до 7-11).
Увеличение:
- тромбоцитопения
- нарушение адгезии и агрегации тромбоцитов (болезнь Виллебрандта, тромбастения Гланцмана)
- заболевания соединительной ткани
- заболевания печени
- почечная недостаточность
Активированное частичное тромбопластиновое время
АЧТВ. Время свертывания крови, зависящее от присутствия факторов свертывания, а также от количества гепарина в крови. Основное применение - контроль за уровнем гепарина при лечении им, уточнение дозировки.
Повышение:
- недостаток факторов свертывания
- присутствие волчаночного антикоагулянта
- гепарин
- внутрисосудистое свертывание крови
Тромбиновое время
Время последнего этапа свертывания крови: образование нерастворимого фибрина из фибриногена под действием тромбина,
зависит от уровня фибриногена и наличия ингибиторов этого этапа.
Повышение:
- дефицит фибриногена
- ингибиторы тромбина или фибриногена
- гепарин
Протромбиновое время
Время второго этапа свертывания - образования тромбина из протромбина.
Повышение:
- болезни печени
- дефицит витамина К
- дефицит протромбина и других факторов свертывания
- внутрисосудистое свертывание крови
Фибриноген
Белок плазмы, предшественник фибрина - белка, образующего тромб. Является белком острой фазы воспаления, влияет на величину СОЭ.
Повышение:
- воспаление, разрушение тканей (инфаркт миокарда)
- прием эстрогенов (женских половых гормонов)
- беременность
Снижение:
- нарушение синтеза в печени
- синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания
Плазминоген
Предшественник плазмина - активного белка фибринолитической системы. Плазминоген неактивен, всегда присутствует в сыворотке, синтезируется в печени.
Повышение:
- беременность (особенно 3 триместр)
- синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания
- лечение фибринолитиками (стрептокиназа)
- тяжелое заболевание печени
Антитромбин III
Белок противосвертывающей системы, ингибитор тромбина. Синтезируется в печени. Его снижение может приводить к тромбозам и отсутствию эффекта от лечения гепарином.
Повышение:
- острый гепатит, механическая желтуха
- воспаление
- менструация
Снижение:
- врожденный дефицит
- синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания
- печеночная недостаточность