Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
ЛЕКЦИОННЫЙ КУРС ПО ЧАСТНОЙ ВИРУСОЛОГИИ
ВИРУСЫ ВЫЗЫВАЮЩИЕ БОЛЕЗНИ ЖВАЧНЫХ И ОДНОКОПЫТНЫХ
ДЛЯ СТУДЕНТОВ ФАКУЛЬТЕТА ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ
Подготовлен:
ВАСИЛЬЕВЫМ Д.А ЛУГОВЦЕВЫМ В.Ю
УЛЬЯНОВСК 2004
УДК: 619:616.9
«Курс лекций по частной вирусологии»
Часть первая Б– «Вирусы вызывающие болезни жвачных и однокопытных»
Учебное пособие по курсу ВСЭ для студентов факультета ветеринарной медицины (Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия. Кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии, ветеринарно-санитарной экспертизы).
Данное учебное пособие подготовлено: д б н, академиком РАЕН, профессором Васильевым Д.А. (Ульяновская государственная с-х академия) и DVM, PhD Луговцевым В.Ю (Food and Drug Administration, Center for Biologics Evaluation and Research, Laboratory of Pediatric Respiratory Viral Diseases. Bethesda, MD 20892, USA)
Предлагаемое учебное пособие издается кафедрой микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы согласно ее плану, целью которого является оперативный выпуск отдельных учебных изданий. Это позволяет дать студенту либо новую научную или инструктивную информацию, либо более подробно разъяснить ключевые положения разделов учебных дисциплин, преподаваемых на кафедре. Предлагается общий список литературы использованный при написании данного лекционного материала. Подбор вирусных инфекционных агентов для предлагаемого курса проводился на основе программы лекционного курса вирусологии и ВСЭ читаемого на кафедре.
Семейство: Herpesviridae.
Таксономическая структура семейства.
Семейство: Herpesviridae, Подсемейство: Alphaherpesvirinae Рода:Simplexvirus,
Varicellovirus“,Marek’s disease-like viruses”“Infectious laryngotracheitis- like viruses”
Подсемейство:Betaherpesvirinae Рода: Cytomegalovirus, Muromegalovirus, Roseolovirus
Подсемейство: Gammaherpesvirinae Рода:Lymphocryptovirus, Rhadinovirus, “Ictalurid herpes-like viruses”
Характеристика вириона.
Морфология. Вирион содержит симметрические и несимметрические компоненты. Сферический вирион включает ядро (кор), капсид, тегумент и оболочку. Кор включает геном вируса, упакованый в капсид. Матриксный капсид представляет собой икосаэдрон (Т=16), размер 100 –110 нм в диаметре, состоит из 162 капсомеров, из которых 150 – гексамеры, а 12 – пентамеры. HHV-1 имеет протеиновую оболочку толщиной 16 нм и внешним диаметром 125 нм. Сборка капсида начинается вокруг вспомогательного протеина, с образованием прокапсида, субъединицы которого имеют слабые связи между собой. Протеолитическое разрезание вспомагательного белка приводит к реорганизации белковой оболочки в характерную капсидную форму. Структура тегумента слабо изучена и не имеет симметрии. Он включает многие протеины, из которых не все требуются для формирования вириона. Некоторые из его отдельных протеинов могут значительно различаться по количеству. Тегумент с поверхностной оболочкой, не содержащий капсид, может покидать клетку вместе с полноценными вирионами. Оболочка представляет собой липидный бислой, связанный своей внутренней поверхностью с внешней поверхностью тегумента. Она содержит несколько различных вирусных гликопротеинов (не менее 10 у HHV-1). Диаметр вириона 100-200 нм, масса вириона HHV-1 13,3х10-16 г, масса капсида 5,0х10-16 г, плавучая плотность в CsCl 1,22-1,28 г/см3. Вирион чувствителен к высушиванию, низким значениям рН, детергентам и жирорастворителям.
Геном. ДНК двуспиральная, линейная; размер 125-240 kbp. G+C состав 32-75%. ДНК составляет 10% от массы вириона
Другие компоненты вириона. HHV-1 имеет более 30 полипептидов. Зрелый капсид состоит из 6 протеинов, тогда как тегумент включает не менее 15. Оболочка вириона содержит не мнее 10 (в некоторых случаях много больше) интегрированных мембранных протеинов, играющих роль в адсорбции и проникновении в клетку.
Внешняя липопротеидная оболочка чаще имеет происхождение от мембран аппарата Гольджи. Многие оболочечные протеины содержат N- или O-связанные гликаны.
Организация генома и репликация. Количество открытых рамок считывания (ORFs) у герпесвирусов варьирует от 70 до более 200. У герпесвирусов млекопитающих и птиц около 40 консервативных генов, организованных в 7 блоков. Блоки генов у представителей разных подсемейств могут иметь различное расположение и ориентацию, но внутри блоков гены располагаются в определенном порядке с определенной полярностью. Герпесвирусы рыб и амфибий отнесены к семейству только по морфологии, так как не имеют сиквенсов, родственных герпесвирусами млекопитающих и птиц.
Стратегия репликации хорошо описана пока только для HHV-1. В адсорбции и проникновении задействованы оболочечные протеины вириона и рецепторы клеточной мембраны. Проникновение в клетку происходит путем слияния мембран оболочки вируса и мембраны клетки. Нуклеокапсид транспортируется в ядро, а тегумент, предположительно, изменяет метаболизм клетки (протеин UL41 ингибирует синтез клеточных протеинов, а протеин UL48 проникает в ядро и активирует ранние вирусные гены). После проникновения генома вируса в ядро клетки начинается транскрипционный каскад. Ранние гены (альфа) регулируют последующую экспрессию генов транскрипционными и посттранскрипционными механизмами. Ранние гены (бета) кодируют ДНК-репликационный комплекс и различные протеины, изменяющие клеточный метаболизм. Структурные протеины вируса кодируются ранними генами (гамма). Транскрипция направляется РНК полимеразой II клетки.
Синтез вирусной ДНК начинается с одного или более участков начала репликации (origine of replication). Вновь синтезированная ДНК упаковывается внутри ядра из конкатамера в незрелый капсид, содержащий кор из вспомогательных протеинов, которые разрушаются при протеолитическом воздействии во время созревания. Нуклеокапсид отпочковывается через внутреннюю ядерную мембрану в перинуклеарное пространство, а образующийся оболочечный вирион транспортируется к клеточной поверхности.
Антигенные свойства. Герпесвирусы продуцируют образованием АТ на структурные и неструктурные протеины. Оболочечные протеины обладают иммуногенностью и являются мишенями для вируснейтрализующих антител. Перекрестная нейтрализация наблюдается между близкородственными вирусами внутри рода.
Биологические особенности. Отмечен широкий спектр естественных хозяев. Вероятно, практически все позвоночные могут быть носителями множества видов герпесвирусов. Герпесвирусы выделены и от моллюсков. Как правило, для конкретных видов вирусов наблюдается определенный спектр восприимчивых хозяев, но может быть и передача вирусов от одного вида хозяина другому. Экспериментально показано, что некоторые представители подсемейтсва Alphaherpesvirinae могут инфицировать широкий спектр видов животных, тогда как представители подсемейств Betaherpesvirinae и Gammaherpesvirinae проявляют очень ограниченную хозяинную специфичность. Такая же закономерность отмечена и при изучении спектра восприимчивых культур клеток. В естественных условиях передача вирусов происходит аэрозольно (HHV-3), контактно (алиментарно, HHV-4) или половым путем (HHV-2). Векторной передачи не отмечалось.
В связи с хорошей адаптацией герпесвирусов к естественных хозяевам, тяжело протекающие инфекции встречаются, в основном, у молодых или иммуносупрессированных организмов, плодов (внутриутробное поражение) и при инфицировании других хозяев. Большинство герпесвирусов вызывают системные инфекции, сопровождающиеся на начальном этапе клеточно-ассоциированной виремией. Однако инфекции, обусловленные некоторыми членами рода Simplexvirus ограничиваются эпителиальными тканями и афферентными нервными волокнами по месту инокуляции. Отличительным признаком герпесвирусов, определяющим их сохранение, является их способность к длительной латенции. По немногочисленным данным представители подсемейства Alphaherpesvirinae латентно сохранаются в нейронах, подсемейства Betaherpesvirinae – в клетках моноцитарного ряда, а подсемейства Gammaherpesvirinae – в клетках лимфоцитарного ряда.
Критерии подразделения на виды внутри семейства. Родственные герпесвирусы относят к определенному виду по следующим признакам: 1) нуклеотидный сиквенс можно легко отличить от других данного рода; 2) занимают другие экологические ниши, имеют определенные эпидемиологические характеристики, определенных естественных хозяев и характеризуются соответствующи патогенезом.
Подсемейство: Alphaherpesvirinae.
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы отличаются от таковых других представителей семейства. Характрными для данного подсемейства являются участок генома, включающий уникальную короткую последовательность (US), и фланкирующие инвертированные повторы (IRS и TRS), содержащие гены, гомологичные HHV-1. Вирусы продуктивно инфицируют фибробластоподобные клетки в культуре и эпителиальные клетки in vivo. Многие представители вызывают у естественных хозяев везикулярные поражения эпителия.
Род: Simplexvirus. Типовой вид: Human herpesvirus 1 (HHV-1) (герпесвирус человека 1).
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы отличаются от таковых других представителей подсемейства. Вирусы имеют широкий спектр чувствительных культур клеток, репродуктивный цикл в которых сопровождается быстрым цитолизом. Латентная инфекция наблюдается в нейронах. Многие члены рода инфицируют человека или приматов. Могут проявлять перекрестную реактивность в серологических реакциях с вирусами других родов подсемейства.
Виды (8 видов):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
Аббревиат-а |
|
Ateline herpesvirus 1 (Spider monky herpesvirus) |
Герпесвирус коатов (цепкохвостых обезьян) 1 |
AtHV-1 |
|
Bovine herpesvirus 2 (Bovine mamillitis virus) |
Бычий герпесвирус (Вирус бычьего мамиллита) |
BoHV-2 |
|
Cercopithecine herpesvirus 1 (B-virus; Herpesvirus simiae) |
Герпесвирус мартышкообразных 1 (В-вирус; герпесвирус simiae) |
CeHV-1 |
|
Cercopithecine herpesvirus 2(SA8) |
Герпесвирус мартышкообразных 2(SA8) |
CeHV-2 |
|
Cercopithecine herpesvirus 16 (Herpesvirus papio 2) |
Герпесвирус мартышкообразных 16 (papio герпесвирус) |
CeHV-16 |
|
Human herpesvirus 1* (Herpes simplex virus 1) |
Герпесвирус человека 1 (вирус простого герпеса 1) |
HHV-1 |
|
Human herpesvirus 2** (Herpes simplex virus 2) |
Герпесвирус человека 2 (вирус простого герпеса 2) |
HHV-2 |
|
Saimiriine herpesvirus 1 (Herpesvirus tamarinus) (Marmoset herpesvirus) |
Герпесвирус беличьих обезьян 1 (герпесвирус тамаринов) (герпесвирусо игрунков) |
SaHV-1 |
Примечание: * - номер генома в генбанке [X14112];** - номер генома в генбанке [Z86099].
Род: Varicellovirus. Типовой вид: Human herpesvirus 3 (HHV-3) (герпесвирус человека 3).
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы отличаются от таковых других представителей подсемейства. Представители рода обнаружены у широкого спектра млекопитающих. Латентная инфекция наблюдается в сенсорной нервной системе, реже в других местах. Некоторые представители могут проявлять перекрестную реактивность в серологических реакциях с вирусами данного рода.
Виды (16 видов):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиатура |
|
Bovine herpesvirus 1 (Infectious bovine rhinotracheitis virus) |
Бычий герпесвирус 1 (Вирус ринотрахеита КРС) |
AJ004801 |
BoHV-1 |
|
Bovine herpesvirus 5 (Bovine encephalitis virus) |
Бычий герпесвирус 5 (Вирус энцефалита КРС) |
-- |
BoHV-5 |
|
Bubaline herpesvirus 1 (Water buffalo herpesvirus) |
Герпесвирус буйволов 1 (герпесвирус азиатского буйвола) |
-- |
BuHV-1 |
|
Canid herpesvirus 1 (Caninae herpesvirus) |
Герпесвирус собачьих 1 |
-- |
CaHV-1 |
|
Caprine herpesvirus 1 (Goat herpesvirus) |
Герпесвирус коз 1 |
-- |
CpHV-1 |
|
Cercopithecine herpesvirus 9 (Simian varicella virus) (Liverpool vervet herpesvirus) (Patas monkey herpesvirus deltaherpesvirus) (Medical lake macaque herpesvirus) |
Герпесвирус мартышкообразных 9 (вирус ветряной оспы обезьян) |
-- |
CeHV-9 |
|
Cervid herpesvirus 1 (Red deer herpesvirus) |
Герпесвирус оленьих 1 (герпесвирус красных оленей) |
-- |
CvHV-1 |
|
Cervid herpesvirus 2 (Reindeer herpesvirus) |
Герпесвирус оленьих 2 (герпесвирус оленей raindeer) |
-- |
CvHV-2 |
|
Equid herpesvirus 1 (Equine abortion virus) |
Герпесвирус лошадей 1 (вирус инфекционного аборта лошадей) |
M86664 |
EHV-1 |
|
Equid herpesvirus 4 (Equine rhinopneumonitis virus) |
Герпесвирус лошадей 4 (вирус ринопневмонии лошадей) |
AF030027 |
EHV-4 |
|
Equid herpesvirus 8 (Asinine herpesvirus 3) |
Герпесвирус лошадей 8 (Asinine герпесвирус 3) |
-- |
EHV-8 |
|
Equid herpesvirus 9 (Gazelle herpesvirus) |
Герпесвирус лошадей 9 (герпесвирус газелей) |
-- |
EHV-9 |
|
Felid herpesvirus 1 (Feline rhinotracheitis virus) |
Герпесвирус кошачьих 1 (вирус ринотрахеита кошек) |
-- |
FeHV-1 |
|
Human herpesvirus 3 (Varicella-zoster virus) |
Герпесвирус человека 3 (вирус ветряной оспы) |
X04370 |
HHV-3 |
|
Phocid herpesvirus 1 (Harbor seal herpesvirus) |
Phocid герпесвирус 1 (герпесвирус тюленей) |
-- |
PhoHV-1 |
|
Suid herpesvirus 1 (Pseudorabies virus) |
Герпесвирус свиней 1 (вирус псевдобешенства; Ауески |
-- |
SuHV-1 |
Предполагаемые виды: Equid herpesvirus 3 (EHV-3) (Equine coital exantema virus)
Equid herpesvirus 6 (EHV-6) (Asinine herpesvirus 3).
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы отличаются от таковых других представителей подсемейства. Вирусы данного рода были выделены только от птиц. Вызывают образование опухолей. Продукция инфекционных внеклеточных вирусных частиц ограничена эпителием перьевых фолликулов. Все представители проявляют перекрестную реактивность в серологических реакциях с вирусами данного рода.
Виды (3 вида): Предполагаемые виды: нет.
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
Аббревиа-а |
|
Gallid herpesvirus 2 (Marek’s disease virus type 1) |
Герпесвирус куриных 2 (вирус болезни Марека типа 1) |
GaHV-2 |
|
Gallid herpesvirus 3 (Marek’s disease virus type 2) |
Герпесвирус куриных 3 (вирус болезни Марека типа 2) |
GaHV-3 |
|
Meleagrid herpesvirus 1 (Turkey herpesvirus) |
Meleagrid герпесвирус (Герпесвирус индеек) |
MeHV-1 |
|
Gallid herpesvirus 1 (Infectious laryngotracheitis virus) |
Герпесвирус куриных 1 (Вирус инфекционного ларинготрахеита |
GaHV-1 |
Неклассифицированные вирусы подсемейства (3): Macropoid herpesvirus 1 (MaHV-1) (Parma wallaby herpesvirus),Macropoid herpesvirus 2 (MaHV-2) (Dorcopsis wallaby herpesvirus), Psittacid herpesvirus 1 (PsHV-1)(Parrot herpesvirus)
Подсемейство: Betaherpesvirinae.
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы представителей родов имеют различия. Гены, соответствующие гену US22 HHV-5, являются характерными для членов подсемейства. Вирусы имеют строгую специфичность виду-хозяину и типу культур клеток. Цикл репродукции медленный, вирус, как правило, клеточно-ассоциированный. У иммунокомпетентных хозяев инфекция обычно протекает инаппарантно. Латентная инфекция чаще связана с клетками моноцитарного ряда.
Род: Cytomegalovirus. Типовой : Human herpesvirus 5 (HHV-5) (герпесвирус человека 5).
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы отличаются от таковых других представителей подсемейства. Геном цитомегаловирусов превышает 200 kbp. Инфицированные клетки увеличиваются (цитомегалия).
Виды (3 вида):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
Аббревиатура |
Cercopithecine herpesvirus 5(African green monkey cytomegalovirus) |
Герпесвирус мартышкообразных 5 (цитомегаловирус африканских зеленых мартышек) |
CeHV-5 |
|
Cercopithecine herpesvirus 8 (Rhesus monkey cytomegalovirus) |
Герпесвирус мартышкообразных 8 (цитомегаловирус макак резус) |
CeHV-8 |
|
Human herpesvirus 5* (Human cytomegalovirus) |
Герпесвирус человека 5 (цитомегаловирус человека 5) |
HHV-5 |
Примечание: * - номер генома в генбанке [Х17403].
Предполагаемые виды (2): Aotine herpesvirus 1 (AoHV-1) (Herpesvirus aotus 1)
Aotine herpesvirus 3 (AoHV-3) (Herpesvirus aotus 3)
Род: Muromegalovirus. Типовой: Murid herpesvirus 1 (MuHV-1) (герпесвирус мышиных ).
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы отличаются от таковых других представителей подсемейства. Размер генома муромегаловирусов превышает 200 kbp. Инфицированные клетки увеличиваются (цитомегалия).
Виды (2 вида): Предполагаемые виды: нет.
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома в генб. |
Аббревиа-а |
|
Murid herpesvirus 1 (Mouse cytomegalovirus) |
Герпесвирус мышиных 5 (цитомегаловирус мышей) |
U68299 |
MuHV-1 |
|
Murid herpesvirus 2 (Rat cytomegalovirus) |
Герпесвирус мышиных 2 (цитомегаловирус крыс) |
-- |
MuHV-2 |
Род: Roseolovirus.Типовой вид: Human herpesvirus 6 (HHV-6) (герпесвирус человека 6).
Геном розеоловирусов меньше, чем у других представителей подсемейства (менее 200 kbp). Вызывают продуктивную инфекцию Т-лимфоцитов. Выражено серологическое родство. Виды (2 вида):
|
вид вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиатура |
|
Human herpesvirus 6 |
Герпесвирус человека 6 |
Х83413 |
HHV-6 |
|
Human herpesvirus 7 |
Герпесвирус человека 7 |
U43400, AF037218 |
HHV-7 |
Подсемейство: Gammaherpesvirinae.
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы генов BNRF-1, BTRF-1 и BRLF-1 HHV-5 (соответствующие ORFs вируса Saimiriine herpesvirus 2 - ORFs 3, 23 и 50) отличают представителей данного таксона других представителей семейства. Многие члены подсемейства способны инфицировать in vitro лимфоциты, и образовывать латентно инфицированные культуры с небольшим числом клеток, инфицированных продуктивно. Латентная инфекция in vivo наблюдается в лимфоцитах и тканях лимфоидных органов. Острые инфекции часто ассоциируются с лимфопролиферативными нарушениями. Многие представители подсемейства ассоциируются с опухолями лимфоидного и нелимфоидного происхождения.
Род: Lymphocryptovirus.Типовой вид:Human herpesvirus 4 (HHV-4)(герпесвирус человека
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы отличаются от таковых других представителей подсемейства. Характрными для данного рода является ген EBNA вируса HHV-4 и его гомологи других вирусов. Вирусы инфицируют В-лимфоциты в культуре, но как правило непродуктивно, приводя к иммортализации. В-клетки или их предшественники являются местом латенции вируса in vivo. Члены рода обнаружены только у людей и нечеловекообразных приматов. Выражено серологическое родство.
Виды (7 видов): Предполагаемые виды: нет.
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
Аббреви-а |
|
Cercopithecine herpesvirus 12 (Herpesvir papio)(Baboon herpesvirus) |
Герпесвирус мартышкообразных 12 (герпесвирус бабуинов) |
CeHV-12 |
|
Cercopithecine herpesvirus 14 (African green monkey EBV-like virus) |
Герпесвирус мартышкообразных 14 (EBV-подобный вирус африканских зеленых мартышек) |
CeHV-14 |
|
Cercopithecine herpesvirus 15 (Rhesus EBV-like herpesvirus) |
Герпесвирус мартышкообразных 15 (EBV-подобный вирус макак резус) |
CeHV-15 |
|
Human herpesvirus 4*(Epstein-Barr virus)№ генома в генбанке [G59074]. |
Герпесвирус человека 4 (вирус Эпштейна-Барра) |
HHV-4 |
|
Pongine herpesvirus 1 (Herpesvirus pan) |
Герпесвирус низших гоминид 1 (герпесвирус pan) |
PoHV-1 |
|
Pongine herpesvirus 2 (Orangutan herpesvirus) |
Герпесвирус низших гоминид 2 (герпесвирус орангутанов) |
PoHV-2 |
|
Pongine herpesvirus 3 (Gorilla herpesvirus) |
Герпесвирус низших гоминид 3 (герпесвирус горилл) |
PoHV-3 |
Род: Rhadinovirus. Типовой вид: Saimiriine herpesvirus 2 (SaHV-2).
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы отличаются от таковых других представителей подсемейства. Многие виды продуктивно инфицируют in vitro фибробласты, часто многих видов. Выделены от многих видов млекопитающих. Латентная инфекция наблдается в Т- или В-лимфоцитах.
Виды (12 видов):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиат-а |
|
Alcelaphine herpesvirus 1 (Malignant catarrhal fever virus) |
Alcelaphine герпесвирус 1 (вирус злокачественной катаральной горячки) |
AF005370, AF005363, AF005368 |
AlHV-1 |
|
Alcelaphine herpesvirus 2 (Hartebeest malignant catarrhal fever virus) |
Alcelaphine герпесвирус 2 (вирус злок-нойкатаральной горячки Hartebeest) |
-- |
AlHV-2 |
|
Ateline herpesvirus 2 (Herpesvirus ateles) |
Герпесвирус коатов (цепкохвостых обезьян) 2 |
-- |
AtHV-1 |
|
Bovine herpesvirus 4(Movar virus) |
Герпесвирус бычий 4 |
-- |
BoHV-4 |
|
Cercopithecine herpesvirus 17 (Rhesus radinovirus) |
Герпесвирус мартышко образных 17(макак резус) |
-- |
CeHV-17 |
|
Equid herpesvirus 2* |
Герпесвирус лошадей 4 |
U20824 |
EHV-2 |
|
Equid herpesvirus 5 |
Герпесвирус лошадей 5 |
-- |
EHV-5 |
|
Equid herpesvirus 7 (Asinine herpesvirus 2) |
Герпесвирус лошадей 7 (Asinine герпесвирус 2) |
-- |
EHV-7 |
|
Hippotragine herpesvirus 1 (Roan antilope herpesvirus) |
Hippotragine герпесвирус 1 (герпесвирус антилоп Roan) |
HiHV-1 |
|
|
Human herpesvirus 8 (Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus) |
Герпесвирус человека 8 (вирус, ассоциированный с саркомой Капоши) |
U75699, U75700, U93872 |
HHV-8 |
|
Murid herpesvirus 4 (Mouse herpesvirus strain 68) |
Герпесвирус мышиных 4 (герпесвирус мышей, шт 68 |
U97553 |
MuHV-4 |
|
Ovine herpesvirus 2 (Sheep-associated malignant catarrhal fever virus) |
Герпесвирус овец 2 (вирус злокачественной катаральной горячки, ассоциированной с овцами |
-- |
OvHV-4 |
|
Saimiriine herpesvirus 2. (Herpesvirus saimiri) |
Герпесвирус беличьих обез -ьян 2(герпесвирус Saimiri) |
X64346 |
SaHV-2 |
Примечание: * - EHV-2, первоначально обозначался как “цитомегаловирус лошадей”. Так как данный вирус является членом Gammaherpesvirinae, данное название было упразднено и используется только как синоним.
Предполагаемые виды (4): Leporid herpesvirus 1 (LeHV-1)(Cottontail rabbit herpesvirus), Leporid herpesvirus 2 (LeHV-2) (Herpesvirus cuniculi),Leporid herpesvirus 3 (LeHV-3) (Herpesvirus sylvilagus),Marmomid herpesvirus1(MarHV-2)(Woodchuck herpesvirus) (Herpesvirus marmota)
Неклассифицированные виды подсемейства (1):
Callitrichine herpesvirus 1 (CalHV-1) (Herpesvirus sanguinum).
Неклассифицированный род семейства: “Ictalurid herpes-like viruses”.
Типовой вид: Ictalurid herpesvirus 1 (Channel catfish virus), (IcHV-1), [М75136].
Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы единственного члена данного рода напоминают таковые других герпесвирусов, и поэтому, он был выделен в отдельную груп.
Неклассифицированные вирусы семейства (52).
Филогенетическое родство внутри семейства. Семейство Herpesviridae составляют представители, отличающиеся широким разнообразием, но которые, в то же время, имеют сходную морфологию. Данные анализов, основанных на серологических исследованиях или гибридизации нуклеиновых кислот, редко имеют решающее значение при определении родства между вирусами. Возрастающее значение данных по сиквенсам способствовало широкому использованию сравнительного анализа сиквенсов с целью распределения герпесвирусов по таксонам и молекулярно-филогентического анализа семейства. Понятие отдельной генетической группы определялось по двум критериям: 1) сравнение нуклеотидных и аминокислотных последовательностей консервативных генов герпесвирусов и 2) идентификация отдельных уникальных генов. Тем не менее, некоторые вирусы были отнесены к определенным таксонам на основе серологического родства.
Использование данных критериев подкрепило достоверность существующей таксономической структуры семейства (подразделение на подсемейства). Однако на основе этих критериев были созданы дополнительные таксоны:
Gallid herpesvirus 2 (GaHV-2) и Gallid herpesvirus 3 (GaHV-3) (Marek’s disease virus type 1 and 3, соответственно) и Meleagrid herpesvirus 1 (MeHV-1) (Turkey herpesvirus) относятся к отдельной генетической группе внутри подсемейства Alfaherpesvirinae, так же как и Gallid herpesvirus 1 (GaHV-1) (Infectious laryngotracheitis virus), выделенный в отдельный таксон. Соответственно было создано два новых рода: “Marek’s disease-like viruses” и “Infectious laryngotracheitis-like viruses”.
Анализ сиквенса Ictalurid herpesvirus 1 (IcHV-1) (Channel catfish virus) показал лишь отдаленное родство данного вируса с герпесвирусами млекопитающих и птиц, и на данный момент он помещен в новый род, обозначенный “Ictalurid herpes-like viruses”, но еще не ратифицированный в качестве члена семейства.
Exanthema coitale vesiculosum bovis (лат.); Infectious bovine rhinotracheitis(англ.); Infectiose bovine Rhinotracheitis/Infectiose pustulose Vulvovaginitis des Rindes,
Blaschenausschlag, Koitalexanthem (нем.)
Инфекционный ринотрахеит (ИРТ, пузырьковая сыпь, инфекционный вульвовагинит, инфекционный некротический ринотрахеит, инфекционный ринит, «красный нос», контагиозная бронхопневмония, инфекционный катар верхних дыхательных путей) - остропрокающая контагиозная болезнь КРС, характеризующаяся преимущественно катаральнонекротическими поражениями дыхательного тракта, лихорадкой, общим угнетением и| конъюнктивитом, а также развитием пустулезного вульвовагинита, при попадании вируса в половые органы животного и абортами. Болезнь распространена повсеместно. В СССР впервые диагностирована в 1969 г
Вирус ИРТ впервые выделили Медин, Йорк и Мак-Керчер в 1956 г., Ли и Бейкер - в 1957г
Устойчивость. При -60-70°С вирус выживает 7-9 мес, при 56°С инактивируется через 20 мин, при 37°С - через 4-10 сут, при 22°С- через 50 сут. При 4°С активность вируса сни жается через 30-40 сут всего лишь на 1 lg. Лиофилизация почти не влияет на его активность, однако замораживание и оттаивание снижают вирулентность и иммуногенность вируса. Р-ры формалина 1:500 инактивируют вирус через 24 ч, 1:4000 - через 46, 1:5000 - через 96 ч. Ацетон, эфир, хлороформ и этиловый спирт инактивируют его немедленно. Предпола гают, что под воздействием эфира деградирует наружная липосодержащая мембрана вириона или экстрагируется вирусная нуклеиновая кислота. В кислой среде вирус быстро теряет активность, длительно (до 9 мес) сохраняется при рН 6-9 и в условиях 4°С. Имеются сооб щения о выживании вируса в сперме быков, хранящейся при температуре сухого льда, в те чение 4-12 мес, а в жидком азоте - в течение года. Возможна инактивации вируса в свежей сперме быков при обработке её 0,3%-ным р-ром трипсина.
АГ структура. В деталях не изучена. Выделено и охарактеризовано 9 структурных бел ков вируса ИРГ: VP105, VP90 (гемагглютинин), VP74, VP64, VP54, VP50, VP47, VP40, VP31. Гликопротеины gl, gill, glY участвуют в формировании гуморального и клеточного иммунитета. Наиболее эффективным- в этом отношении является gIV. По данным РН наибольшей иммуногенностью обладают VP74 и VP90. Главные нейтрализующие эпитопы расположены на ГА-домене, что сви детельствует о перспективности использования ГА-антигена для приготовления субъеди ничной вакцины.
АГ вариабельность и родство. В настоящее время известно 5 типов герпесвируса КРС: герпесвирус-1 - возбудитель ИРТ; герпесвирус-2 - возбудитель герпетического маммиллита, генерализованного поражения кожи, стоматита; герпесвирус-3 - является причиной злокаче ственной катаральной лихорадки; герпесвирус-4 - обнаруживается у здоровых животных, а также у особей с субфибрильной температурой и гнойным дерматитом, при послеродовом мастите и респираторной инфекции. Установлено, что вирусы, выделенные при респираторном (ринотрахеит - 1-й тип) и генитальном (пустулезный вульвовагинит - 2-й тип) синдромах, в АГ отношении идентичны, однако имеют различную электрофоретическую подвижность. Показано АГ отличие новозе ландских шт. от американских и австралийских шт. В АГ отношении вирус ИРТ отличается от вирусов простого герпеса, бычьих герпесвирусов, но проявляет некоторое родство с вирусом РПЛ в РСК и РДП. По данным Deptula W.et.al., существует 3 типа вируса ИРТ КРС: 1, 2 (подтипы 2а, 2Ь) и 3 (подтипы За и ЗЬ). Ус тановлено существование АГ вариантов герпесвируса 1 КРС, выявляемых в следующих ре акциях: 1) перекрестной РН с сыворотками кролика; 2) гель-электрофорезе меченных ра диоизотопами вирусиндуцированных полипептидов и гликопротеинов; 3) взаимодействия с наборами моноклон. AT, что выявляется реакцией непрямой ИФ, а также при анализе вирусной ДНК с помощью рестрикционной эндонуклеазы.
В Танзании AT к вирусу ИРТ КРС обнаруживались животных у других видов: у 76% взрослых буйволов, у 33% телят буйволов, у 24% свиней-бородавочников. Лабораторные животные к экспериментальному заражению вирусом ИРГ невосприимчивы.
Локализация вируса. Вирус ИРТ обладает тропизмом к клеткам органов дыхания и размножения. У телят при ИРТ его находят в носовых истечениях уже через день после по явления первых признаков болезни и выделяют в течение 14 дн. Наибольшая концентрация его в носовой слизи и содержимом конъюнктивального мешка бывает на 5-6-й дн после за ражения. Вирус можно выделить также из слизи, взятой из трахеи, носовой перегородки, крови, слюны и мочи больного животного. Видимо, существует тро пизм вируса ИРТ и к клеткам пищеварительного тракта. В наибольших титрах он обнару жен в прямой кишке больных телят. Вирус ИРТ может мигрировать со слизистых оболочек в ЦНС через аксоны нервных клеток внутри нервных волокон. ЦНС поражается вследствие центростремительного рас пространения вируса через тройничный нерв и его гассеров узел, а менингомиелит возника ет при проникновении вируса по нервным окончаниям, ганглиям и корешкам в спинной мозг. Вирус внедряется в нейроны спинномозговых ганглиев и сохраняется там в период ла тентной инфекции. Латенция вируса ИРГ порождает ряд проблем, создающих большие трудности в борьбе с этой болезнью. Оказалось, что после заражения КРС вирулентным штаммом все животные становятся латентными носителями вируса точно так же, как и все вакцинные (аттенуированные) штаммы вируса остаются в организме в латентном состоя нии. Диссеминация аттенуированных шт. в окружающую среду практически не контролиру ется. Вакцинация не предотвращает в организме вакцинированных животных латенции ви рулентного вируса. Иммунный статус латентно инфицированных животных влияет на ха рактер выделения вируса. Не выяснено, происходит ли рекомбинация аттенуированного и полевого вирусов в организме латентно инфицированного обоими шт. животного.
Относительно сроков вирусоносительства серонегативными животными-реконвалесцентами данные противоречивы. У некоторых они продолжались 6-12 и даже 19 мес. Эпизоотологическая роль латентного вирусоносительства при ИРТ не изучена. Описано выделение вируса герпеса из культур клеток селезенки плода КРС после длительного культивиро вания его m vitro (30-67 дн). Вирус ИРТ выделен из тканевых эксплантатов тройничного нерва клинически здоровых коров. Переболевшие животные могут быть серонегативными, но выделять вирус со спермой. Доказано постоянное выделение вируса от ла тентно инфицированных телят после введения им синтетических кортикостероидов. В этом случае вирус выделялся из тканей верхних дыхательных путей и реже - из культур клеток других органов От животных, не получавших кортикостероиды, вирус выделить не удава лось. Показано, что кортикостероиды могут реактивировать персистирующий вирус даже через 5 лет после первичного заражения. У таких животных уровень AT, как правило, остается прежним или же несколько увеличивается; клинически такая провокация сопрово ждается поражением эпителия респираторного тракта и слизистой оболочки носоглотки.
При обследовании быков-производителей в 1992-1994 гг. в племхозяйствах Сибири с использованием гибридизационной тест-системы, содержащей нерадиоактивный (биотини лированный) ДНК-зонд, показана высокая степень латентной инфекции и эффективность тест-системы для её выявления. Высказано предположение, что сенсорные ганглии являются местом латентной персистенции вируса и что реактивация его в иммуносупрессированном организме может привести к распространению вируса от ганглиев через нервные клет ки к слизистым оболочкам, при этом он оказывается недоступным воздействию гумораль ных AT. У животных, привитых живой вакциной после провокации кортикостероидом, так же могут появиться клинические признаки болезни Вирус у быков-производителей может выделяться после переболевания до 6 мес, и они могут заражать коров при случке. Вирусо-носительство не связано с присутствием AT, однако с появлением их вирус из влагалищных выделений выделить не удавалось.
Влияние вируса на плод. Плод КРС очень чувствителен к вирусу ИРТ. Заражение его возможно как во второй половине утробного развития, так и в конце первого периода эм бриогенеза. Виремия в постнатальном периоде наблюдается в течение короткого времени и бывает слабо выражена. Аборты у животных, заболевших во время беременности, как пра вило, являются следствием гибели плода. Самый высокий титр вируса обнаруживают в ко тиледонах, даже когда в самом плоде вируса уже нет. В плаценте также обычно содержится много вируса, даже когда нет ее видимых поражений. Изолировать вирус из плаценты впер вые удается через 8 дн после заражения беременного животного. Аборт может наступить не ранее чем через 3 мес после прививки живой вакциной.
АГ активность. Гликопротеины являются основными АГ вируса ИРТ, связанными с нейтрализацией вируса. При раздельной иммунизации телят очищенными гликопротеинами вируса ИРТ - gl и gIV максимально иммуногенными оказался гликопротеин gIV, а также безвирусный лизат инфицированных клеток. Предполагается, что гликопептид мол.м. 71,5 кД является АГ, ин дуцирующим синтез AT, участвующих в цитотоксичности, а полипептид VP8 (мол.м. 73 кД) индуцирует синтез ВНА.
При естественном и экспериментальном заражениях вирус индуцирует образование ВНА, КСА и ПА. В сыворотке крови переболевших или иммунных животных присутствуют AT, которые выявляются РИГА. Нет корреляции между титром AT и сроками выделения вируса от больных животных. Показано, что 19S - раннем 7S - поздние AT быстрее нейтра лизуют гомологичные, чем гетерологичные штаммы. ВНА могут быть комплементзависимые и комплементнезависимые. В ответ на первичную естественную инфекцию происходит накопление первых AT, титр их быстро снижается и через 6 мес приближается к титру комплементнезависимых AT. Эти различия можно использовать в ретроспективной диагностике для суждения о давности переболевания животного.В индукции сывороточньгх ВНА при ИРТ участвуют 4 гликопротеина. Установлен переход специфических молозивных AT против ИРТ у новорожденных телят в секреты дыхательных путей уже в 1 дн после потребления молозива. Титры AT в секретах носовой полости в большинстве случаев не превышали 1:8 (в молозиве, сыворотке матерей и сыворотке телят они достигали 1:128 - 1:256) и их устанавливали лишь к 15-20дн.
Культивирование. Вирус ИРТ культивируется в монослое клеток почки телят, в эмбрионах коров. При низких титрах вируса его ЦПД в культуре клеток наступает че рез 48-96 ч. Это действие нейтрализуется специфической сывороткой. Для культиви рования пригодны перевиваемые линии клеток почек и тестикулов телят. Изменения в них развиваются на 4-6-е сут. Репродукция вируса сопровождается подавлением митотической активности клеток и образованием внутриядерных включений. Появляется большое число включений, которые, сливаясь между собой, образуют одно крупное включе ние с выраженным светлым ободком. Оно занимает почти все пространство ядра. Хроматин сохраняется в виде узкого ободка, непосредственно прилегающего к ядерной оболочке, це лостность которой, как правило, не нарушается. Выявляются симпласты. Клетки пикнотизируются, округляются и отторгаются от стекла. Вирус, выращенный в монослое клеток МДВК, обладает стабильной активностью. Помимо первичных и перевиваемых культур клеток используют органные культуры слизистых оболочек верхних дыхательных путей, ротовой полости, ЖКТ, конъюнктивы, влагалища телят и эмбрионы коров. В культу рах из органов вирус обнаруживали через 29 дн после заражения. ЦПД развивалось фокусно, сначала по периферии эксплантатов. В органных культурах слизистой оболочки носа и трахеи телят, убитых на 2-й и 7-й дн после заражения, вирус находили в течение 1-2 мес. В культуре клеток под агаровым покрытием на 4-6-й дн инкубации вирус ИРТ образует округ лые, с ровными краями бляшки, диаметром 1-2 мм.
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные и латентные вирусоносители. Особенно опасны быки-производители. Восприимчивые живот ные обычно заболевают через 10-15 сут после поступления в неблагополучное хозяйство. Установлена возможность контактного, интраназального, воздушно-капельного заражения животных, а также через инфицированные корма, транспортные средства, работников жи вотноводства, птиц, насекомых и т.д. Особенно опасна абортивная форма болезни, так как она трудно выявляется и может быть причиной эпизоотии. В Африк антилопа гну является латентным носителем ви руса ИРГ. Помимо того, вирус может реплицироваться в клещах, которые играют роль в возникновении заболевания среди КРС.
Клинические признаки. У КРС болезнь проявляется 5-ю формами: поражением верхних дыхательных путей, вагинитами, энцефалитами, конъюнктивитами и артритами. Кроме того, у телят возможна пневмония. При хронической серозно-гнойной пневмонии поги до 20% телят. В зависимости от способа передачи возбудителя болезнь может проявляться преимущественным поражением верхних дыхательных путей или половых органов, абортами, энцефалитами и у телят кератоконъюнктивитами. При генитальной форме пор наружные половые органы, иногда у коров развивается эндометрит, а у быков - орхит, что может стать причиной бесплодия. У быков, используемых для искуственного осемен ИРТ проявляется рецивирующим дерматитом (облысением, образованием струпьев) промежности, вокруг ануса, иногда на хвосте, ягодичной области и мошонке. Инфицированная вирусом сперма может быть причиной эндометритов и бесплодия коров.
Аборты и гибель плода в утробе матери отмечались через 3 нед после заражения, что совпадает с повышением титра специфических AT в крови матери. Присутствие AT в высоком титре у стельных коров-реконвалесцентов не предупреждает аборты и смерть плода в утробе матери. Возможно, с этим свойством вируса связаны его длительная персистенция в тканях и склонность ИРТ к латентному течению при генитальной форме в эпителии слизи стой влагалища, его преддверии и вульве образуются многочисленные разной величины пустулы (пустулезный вульвовагинит). На их месте появляются эрозии и язвочки. После за живления язвенных поражений на слизистой оболочке длительное время остаются гипере-мированные узелки. У больных быков процесс локализуется на препуции и поло вом члене. Характерным является образование пустул и пузырьков. У незначительной части стельных коров наблюдают аборты, рассасывание плода или преждевременный отел. Абор тировавшие животные, как правило, ранее переболевали ринотрахеитом или конъюнктиви том. Нередко аборты бывают после прививки живой вакциной против ИРТ. Среди аборти ровавших коров возможны летальные исходы из-за метритов и разложения плода. Однако, нередки случаи абортов при полном отсутствии воспалительных процессов на слизистой оболочке матки коровы. При ИРТ встречаются случаи острого мастита. Вымя резко воспа лено и увеличено, при пальпации становится болезненным. Сильно снижаются надои.
При менингоэнцефалитах наряду с угнетением отмечают расстройство двигательных функций и нарушение равновесия. Болезнь сопровождается мышечным тремором, мычани ем, скрежетом зубов, конвульсиями, слюнотечением. Такой формой болезни, в основном, заболевают телята 2-6-мес возраста.
Респираторная форма инфекции характеризуется внезапным повышением температуры тела до 41-42°С, гиперемией слизистой оболочки носа, носоглотки и трахеи, угнетением, су хим болезненным кашлем, обильным серозно-слизистым истечением из носа (ринитом) и пенистым слюноотделением. По мере развития болезни слизь становится густой, в дыха тельных путях образуются слизистые пробки и очаги некроза. При тяжелом течении болезни отмечают признаки асфиксии. Гиперемия распространяется на носовое зеркальце («красный нос»). Доказана этиологическая роль вируса ИРТ при массовом кератоконъюнктивите мо лодняка КРС. У молодняка болезнь проявляется иногда в виде энцефалита. Начинается она внезапным возбуждением, буйством и агрессией, нарушением координации движений. Тем пература тела нормальная. У телят раннего возраста некоторые штаммы вируса ИРГ вызы вают остро протекающее заболевание ЖКТ, которое трудно дифференцировать от диспеп сии и энтеротоксемии.
У больных животных клинически четко выражена респираторная форма; генитальная форма часто протекает незаметно. Резкая физическая нагрузка как стресс может вызывать сдвиги в иммунном состоянии и размножении вируса, влиять на функцию лимфоцитов.
Патологоанатомические изменения. При вскрытии животных, убитых или павших при острой респираторной форме, обычно обнаруживают признаки серозного конъюнктиви та, катарально-гнойного ринита, ларингита и трахеита, а также поражения слизистых обо лочек придаточных полостей. Слизистая оболочка носовых раковин отечна и гиперемирована, покрыта слизисто-гнойными наложениями. Местами выявляют разной формы и величи ны эрозийные поражения. Гнойный экссудат скапливается в носовой и придаточной полос тях. На слизистых оболочках гортани и трахеи - точечные кровоизлияния и эрозии. В тяже лых случаях слизистая трахеи подвергается очаговому некрозу. В летальных случаях воз можна бронхопневмония. В легких встречаются очаговые участки ателектаза. Просветы альвеол и бронхов в пораженных участках заполнены серозно-гнойным экссудатом. Интерстициальная ткань сильно отечна. При поражении глаз конъюнктива века сильно гипереми-рована, с явлениями отека, который распространяется и на конъюнктиву глазного яблока. Конъюнктива покрыта саловидным налетом. Часто в ней образуются сосочкообразные бу горки размером около 2 мм. Местами на ней выявляют небольшие эрозии и язвочки.
При генитальной форме на сильно воспаленной слизистой оболочке влагалища и вульвы видны пустулы, эрозии и язвочки на разных стадиях развития. Кроме вульвовагинита, мож но обнаружить серозно-катаральный или гнойный цервицит, эндометрит и значительно реже проктит. У быков-производителей в тяжелых случаях к пустулезному баланопоститу присоединяются фимоз и парафимоз.
Свежие абортированные плоды обычно отечны, с незначительными аутолитическими явлениями. На слизистых и серозных оболочках небольшие кровоизлияния. По прошествии более длительного срока после гибели плода изменения имеют более тяжелый характер; в межмышечной соединительной ткани и полостях тела скапливается темно-красная жид кость, в паранхиматозных органах - очаги некроза.
При поражении вымени обнаруживают серозно-гнойный диффузный мастит. Поверх ность разреза отечна, отчетливо гранулирована вследствие увеличения пораженных долек. При надавливании с неё стекает мутный гноеподобный секрет. Слизистая оболочка цистер ны гиперемирована, набухшая и пронизана кровоизлияниями. Местами встречаются эро зийные поражения слизистой с фибринозными наложениями. При энцефалитах в головном мозге гиперемия сосудов, отечность тканей и мелкие кровоизлияния .
Гистологические изменения. При респираторном синдроме выявляют острое ката ральное воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей, ярко выраженный . клеточный инфильтрат в её толще и подлежащей соединительной ткани, состоящий из нейтрофильных лейкоцитов и лимфоцитов. Мерцательный однослойный эпителий в пораженных участках разрушается до базальной мембраны. В первые 2 сут болезни в эпителиаль ных клетках слизистой оболочки носовой полости, находящихся на границе с очагом пора жения, можно обнаружить внутриядерные включения. В легких при бронхопневмонии на блюдают межлобулярные отеки интерстициальной ткани, иногда кровоизлияния. Просветы альвеол и бронхов пораженных участков заполнены серозным экссудатом с примесью нейтрофильных лейкоцитов. В перибронхиальной интерстициальной ткани находят обильные лимфоцитарные инфильтраты.
В конъюнктиве век микроскопически наблюдают инъекцию кровеносных сосудов, ост рый катаральный конъюнктивит, ярко выраженную гиперплазию лимфатических фоллику лов. Многослойный «призматический» эпителий слизистой инфильтрирован лимфоцитами и нейтрофильными лейкоцитами, а в пораженных участках дегенерирован и опущен вплоть до базальной мембраны. В некоторых клетках выявляют внутриядерные включения.
Гистологические изменения в слизистой оболочке вульвы, преддверия влагалища и вла галища характеризуются явлениями острого пустулезного вульвовагинита. В плоском мно гослойном эпителии наблюдают мелкие очаговые дегенеративные изменения клеток глубо ких слоев и образование на их месте пустул и пузырьков. Участки пораженной слизистой и её соединительно тканной основы сильно инфильтрированы нейтрофильными лейкоцитами и лимфоцитами, на месте лопнувших пустул эрозийные поверхности, покрытые гнойным экссудатом. В пораженных клетках эпителия внутриядерные включения. При благоприят ных условиях заживление дефектов эпителия наступает на 14-е сут. Мелкие гиперемированные узелки на эпителии слизистой оболочки, остающиеся после заживления дефектов, пред ставляют собой лимфатические фолликулы. В абортированных плодах гистопатология ха рактеризуется мелкими очаговыми некрозами и кровоизлияниями в почках, легких, печени, головном мозге, желчном пузыре, матке, влагалище. Матка самки чаще почти совсем не по ражена. В вымени находят резкое перерождение и десквамацию эпителия в просвет прото ков и цистерны. Просветы альвеол заполнены экссудатом с примесью нейтрофильных лей коцитов и клеток спущенного эпителия. В интерстиции органа обнаруживают отек и ин фильтрацию клетками крови. В клетках плоского многослойного эпителия - внутриядерные тельца-включения. В головном мозге обнаруживают хорошо выраженный лимфоцитарный менингоэнцефалит. Ему сопутствуют периваскулярная лимфоцитарная инфильтрация в раз личных отделах полушарий и мозжечка, сильная инъекция сосудов и отечность вещества мозга. У животных, которые погибают, в веществе мозга преобладают кровоизлияния, а при затяжном характере болезни - дегенеративные изменения нервных клеток.
ИРТ диагностируют на основании клинико-эпизоотологических данных, патологоанатомических изменений в органах и тканях с обязательным подтверждением лабораторными методами. Латентную инфекцию устанавливают только лабораторными исследованиями. Лабораторная диагностика включает: 1) выделение вируса из патологического материала в культуре клеток и его идентификацию в РН или РИФ; 2) обнаружение АГ вируса ИРГ в па тологическом материале с помощью РИФ; 3) выявление AT в сыворотке крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в РН или РИГА. Для лабораторной диагностики ИРТ используют набор диагностикумов ИРТ КРС. Диагностику ИРТ проводят параллельно с исследованием материала на ПГ-3, аденовирусную, PC-инфекции и ВД-БС.
Предварительный ди агноз на ИРТ КРС ставят на основании положительных результатов обнаружения АГ в па тологическом материале РИФ с учетом эпизоотологических и клинических данных, а также патологических изменений.
Окончательный диагноз ставят на основании совпадения ре зультатов РИФ с выделением и идентификацией вируса; совпадение результатов РИФ с об наружением AT в 30% и более вторых проб сывороток в титрах не ниже 1:2 в РН и 1:26 в РИГА и обнаружением 4-кратного и более увеличения титра AT в парных пробах сыворо ток. Предварительный диагноз ставят в вет лабораториях в течение 2-3 дн, окон чательный - в течение 15-30 дн.
Выделить вирус из носовой полости, влагалища и с конъюнктивы удается с 5-го по 10-й дн, а ВНА - с 5-8-го дня после заражения. Более высокий титр AT наблюдается после 35 дн, затем начинается медленное снижение. Для выделения вируса ИРТ из бразильской спермы использовали 2 линии перевиваемых клеток МДВК и метод непрямой ИФ (67). Установле но, что максимальное количество вируса выделяется во время подъема температуры тела на 4-7-й дн болезни и продолжался до 10-14 дн.
Обнаружение специфических телец-включений. В ядрах клеток эпителия поражен ных слизистых оболочек носовой полости, вульвы, вагины и конъюнктивы находят специ фические тельца-включения. Через 18-20 ч после заражения их можно обнаружить в клет ках культуры, окрашенной гематоксилин-эозином.
Выделение вируса. Вирус выделяют в культурах клеток почек телят, почек эмбрионов телят, тестикул бычков. В настоящее время для выделения вируса ИРТ используют 2 линии клеток МДВК. В этой линии клеток выделяли вирус из бразильской коммерческой спермы с признаками ЦПЭ и подтверждением методом прямой ИФ.
Экспресс-методы индикации. Для обнаружения вируса ИРТ применен метод молекулярной гибридизации с использованием радиоак тивно меченых ДНК-зондов. Однако более перспективным является применение нерадиоак тивного метода детекции вирусной ДНК. Описаны выявленные последовательности BHV-1 гибридизацией in situ с помощью меченного биотином ДНК-зонда. Предложенный зонд также имел существенный недостаток, поскольку неспецифически связывался с ДНК вируса БА. Поэтому разработан нерадиоактивный метод детекции вируса ИРТ на основе высокочувствительного зонда, меченного биотином. Время тестирования биотинилированного зонда составляет около суток, что существенно меньше по сравнению с вирусологиче ским тестированием (до 40 дн). Наиболее важным представляется использование биотинилированного ДНК-зонда в случае выявления вируса в период карантинирования вновь заве зенных животных, а также для обнаружения заболевания на ранних стадиях и диагностики латентной формы ИРТ для выявления возможного содержания вируса ИРТ в сперме быков. Разработана также ПЦР для обнаружения герпесвируса типа 1 КРС.
ИФ. Техника постановки её такая же, как и при диагностике аденовирусной инфекции КРС. Обращают внимание на свечение АГ в цитоплазме и перинуклеарной зоне неповреж денных клеток. Ярко-зеленая флюоресценция в виде гранул или диффузного свечения цито плазмы не менее чем в 10% клеток позволяет оценить препарат как положительный. Пред варительный диагноз ставят при наличии не менее 30% положительных препаратов от об щего количества исследованных проб. В мазках из влагалища и конъюнктивы специфиче скую флюоресценцию отмечали через 24 ч, из препуция - через 48, из носа и трахеи - через 72 ч после заражения. Присутствие специфического АГ удается подтвердить заражением культуры клеток почки телят, в которой обнаруживается специфическая перинуклеарная и диффузная цитоплазматическая флюоресценция, свойственная ИРТ. Использование культу ры клеток почки кролика позволяет освободиться от неспецифического свечения. Совпадаемость результатов ИФ и патологоанатомических изменений составляет 87%, а ИФ и вирусологических исследований - 44%. При параллельном исследовании сывороток в РН и РИГА результаты совпадали в 94% случаев. В полевых условиях РИФ оказалась поло жительной в 18,5%, а метод вирусовыделения - в 15,9% случаев. РИФ можно использовать для экспресс-диагностики ИРТ с последующим подтверждением диагноза вирусологически ми методами.
РН. При наличии ЦПД в культурах клеток, зараженных изолятом, и положительной ИФ проводят окончательное типирование вируса в РН, которую ставят общепринятым методом в первичной культуре ПЭК или перевиваемой линии клеток МДВК. Результаты РН учиты вают по ЦПД вируса, для чего определяют титр типируемого изолята в присутствии специ фической и отрицательной контрольной сывороток. Титр рассчитывают по методу Рида и Менча и выражают в ТЦДзо/мл. Затем вычисляют индекс нейтрализации. Видовую принад лежность изолята устанавливают при разности в титрах вируса не менее 2 lg; при разности от 1 до 2 реакцию считают сомнительной, в этом случае её повторяют; при разности нейтрализации менее 1 реакцию считают отрицательной. При положительных ре зультатах РН изолят считают идентифицированным.
РТГА. Ставят её микрометодом при 4°С с 0,5-1%-ной взвесью эритроцитов белых мы шей, разбавитель - трис-буферный р-р с 0,2% БСА. В качестве АГ используют культуральную жидкость, которую концентрируют ПЭГ-6000 или ультрацентрифугированием.
ELISA. Иммунопероксидазный метод можно использовать для исследования прижиз ненно взятых нозофарингиальных мазков-отпечатков в клетках, полученных из носовых смывов. Кроме того, для лабораторной идентификации вируса ИРГ рекомендован непрямой антикомплементарный иммунопероксидазный метод НАИП. При световой микроскопии он обеспечивает четкое выявление вирусного АГ в цитоплазме инфицированных клеток в виде окрашенных в коричневый цвет образований, которые видны при увеличении в 140 раз. Специфичность показателей, полученных этим методом, подтверждается постановкой специальных иммунологических контролей. При постановке перекрестной иммунопероксидазной реакции с гетерологичными АГ эта реакция имеет выраженный видоспецифический характер: АГ реагирует только с гомологичной сывороткой. Эндогенная пероксидаза в куль туре клеток ПЭК и LF не выявляется.
Таким образом, НАИП является перспективным при диагностике острых респиратор ных вирусных инфекций КРС. При использовании его для индикации вируса ИРТ в культуре клеток ПЭК АГ выявляется через 18-22 ч после заражения. Три прямых серологических метода быстрого обнаружения вирусных АГ (ИФ, ИФА и ELISA) одинаково приме нимы для обнаружения вируса во время лихорадки, но не на поздних стадиях болезни.
Идентификация с помощью монАТ антител. Иммунопероксидазный метод с исполь зованием монАТ является более чувствительным и специфичным по сравнению с обычными методами выделения вируса. Помимо того, данный метод имеет преимущество в быстроте получения результатов. Быстрое подтверждение вируса ИРГ (инфекции) возможно ме тодом культивирования его с последующим ИФА зараженной культуры с использованием монАТ. Проведена молекулярная характеристика южноамериканских изолятов герпес-вируса-1 (ИРГ) КРС с помощью монАТ и электрофореза в полиакриламидном геле с доде-цилсульфатом натрия.
Идентификация посредством рестрикционного анализа ДНК. Описаны методы клонирования фрагментов генома вируса ИРТ, выделение и характеристика рекомбинантного ДНК-зонда, которые позволяют определять вирус в клинических пробах. С помощью метода дот-блот-гибридизации выявлена ДНК вируса ИРГ в пробах спермы, полученной от серопозитивных животных, когда выде ление вируса в культуре клеток давало отрицательный результат. Хороший результат также получен при использовании инфицированных культур клеток.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. AT к вирусу ИРТ можно обнару жить в сыворотках крови больных и переболевших животных в РН, РНГА и др. Для поста новки ретроспективного диагноза используют парные пробы сывороток, взятые с интерва лом в 3 нед. Результат серодиагностики учитывают по возрастанию титра AT в парных про бах сыворотки, а также числа серопозитивных животных через указанный интервал.
РН. Ставят методом разведения испытуемых сывороток с постоянной дозой вируса в культуре клеток ПЭК или ТБ. Вирус предварительно титруют в культуре клеток. Заражен ные и контрольные культуры инкубируют при 37°С, ежедневно учитывая ЦПД вируса, окончательный учет проводят на 5-7-е сут. Наибольшей чувствительностью обладает РН, основанная на 24-ч инкубации смеси вирус-сыворотка. Титром вируса считают об ратную величину его наибольшего разведения, вызывающего ЦПД в 50% культур, который высчитывают по методу Рида и Менча, или Кербера и выражают в ТЦДзо/мл. Титры 1:32, 1.64 обнаруживаются редко. В неблагополучных по данной болезни стадах ВНА выявляют ся у 12% клинически здорового скота. Ретроспективный диагноз на ИРТ ставят при 4-кратном и более приросте AT в пробах сывороток реконвалесцентов. В настоящее время широко используют микрометод РН.
РНГА. Биологическая промышленность нашей страны выпускает эритроцитарный диагностикум. РНГА ставят согласно методическим указаниям в микропанелях с U-образными лунками наборов микротитрования Такачи или Титертек по общепринятой методике. Ре зультаты РНГА с используемыми сыворотками оценивают по титрам; положительные - 1:16 и выше, сомнительные - 1:8, отрицательные - 1:4, 1:2 и нулевые. Увеличение титров AT в парных сыворотках в 2-4 раза свидетельствует о наличии инфекции. Применяя РНГА, можно обнаружить AT в более ранний период инфекции, чем с помощью РН. Установлено соответствие результатов РНГА и РН в 95% случаев. Высокие титры чаще выявляли в РНГА. С её помощью быстрее, чем РН проводить тонирование AT к вирусу ИРТ. Титры AT были в 7-10 раз выше выявляемых в РН.
РДП. Не нашла широкого применения в диагностической практике, хотя многие иссле дователи рекомендуют её использовать для серодиагностики ИРТ. Marchang (1982) считает, что диагностика по наличию ПА имеет ряд преимуществ по сравнению с РН: она проще и быстрее в постановке, чем РН. ПА обнаруживают вскоре после введения вируса в организм, но они быстро исчезают. По наличию ПА можно уловить недавно прошедшую инфекцию, в то время как ВНА длительно циркулируют в организме, и заболевание можно уловить только по парным сывороткам. При выявлении ПА лучше всего брать пробы крови на 8-й и последующие дни болезни.
РТГА. Может использоваться для выявления и количественной оценки AT к вирусу ИРТ. Титр анти-ГА коррелирует с титром ВНА. Положительный результат РТГА уже в 1-ом разведении сыворотки (1:4) указывает на наличие AT к вирусу ИРГ в данной пробе сыворотки. 4-кратный и более прирост титров анти-ГА в парных пробах сыворотки является показателем активной инфекции.
ELISA. Широко применяют в Нидерландах, США, Великобритании, Швеции, странах бывшего СССР. Он оказался пригодным для обнаружения AT к вирусу ИРТ в молоке. Для этого достаточно получения проб смешанного молока от 5-10 коров. AT определяют после предварительного концентрирования в них Ig. Совпадаемость данных серологических реак ций в пробах сыворотки крови и молока составляла 92,8%. С помощью метода можно оперативно определять иммунологический статус поголовья лактирующих коров це лого региона, а также проводить обследование экспортируемых и импортируемых животных.
Предложен непрямой метод IgM-ELISA для определения недавней инфекции ИРТ. Ран ние AT IgM выделены на 6-й да после заражения, к 9-му да происходил рост титра AT Ig, a к 13-му да - ВНА. У телят, привитых инактивированной вакциной, раннего иммунного от вета не происходило - AT IgM не выявлялись, a IgM и ВНА появлялись позже, чем после заражения. Однако при этом следует иметь в виду, что наличие в сыворотке КРС ревматоидного фактора может привести к ложноположительньш результатам диагностики в IgM-ELISA. В этом случае предварительная обработка проб сыворотки антибычьими IgM позво ляет избежать ложноположительных результатов. Тест IgM-ELISA имеет большую ценность в диагностике ИРГ. В группе позитивных сывороточных проб корреляция между ELISA и РИГА составляла 98,3%, a ELISA с ИФ - 95,7% .
ELISA с использованием монАТ. Основан на конкуренции между AT сыворотки кро ви КРС и нейтрализующими мышиными монАТ. Для его проведения лунки микротитрационных панелей обрабатывают очищенным вирусом ИРГ, и после высушивания их можно использовать немедленно или хранить при - 20°С. В обработанные вирусом лунки панелей последовательно вносят неразведенную испытуемую сыворотку, специфические к вирусу ИРГ монАТ, конъюгированные пероксидазой, субстрат пероксидазы. Результаты реакции учитывают в спектрофотометре при А405. В случае положительной реакции связывание монАТ ингибируется AT сыворотки крови. Метод оказался намного чувствительнее и специ фичнее РН.
Аллергическая проба. Установлено, что при экспериментальном заражении наступает аллергизация организма, проявляющаяся положительной кожной аллергической реакцией уже на 7-й день после заражения, а при вакцинации живой вакциной это происходит через 2 нед после вакцинации, при естественном заражении (спонтанные аборты) аллергизация также наступает быстрее. В Болгарии и ФРГ применяют кожно-аллергическую реакцию для выявления переболевших и вакцинированных животных.
С целью унификации методов дифференциальной диагностики болезней, проявляющих ся с везикулярным синдромом, получены высокоактивные препараты для идентификации возбудителей ИРТ и ВД КРС. Использование этих праймеров при вирусологической экспер тизе патологических материалов оказалось особенно полезным при смешанном течении ящура и указанных болезней. Применение ранее разработанных для диагностики ящура ме тодов изготовления специфических АГ и антительных препаратов дает возможность изго товления аналогичных по качеству диагностикумов при идентификации вирусов ИРТ и ВД и унификации для схемы дифференциальной диагностики основных болезней, протекающих с везикулярным синдромом.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦЕФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА.
Переболевание сопровождается стойким и длительным иммунитетом, который может передаваться потомству с AT молозива. Иммунитет у переболевших животных длится не менее 1,5-2 лет, однако у животных-реконвалесцентов, имеющих AT, состояние абсолютной иммунности бывает редко, и их следует рассматривать как потенциальный источник инфи-цирования других животных. Даже выраженный гуморальный иммунитет не предотвращает персистенции вируса. В случае реинфекции вновь происходит размножение и выделение ви руса, хотя болезнь протекает без видимых клинических признаков. При возникновении по вторного заболевания трудно бывает отличить реинфекцию от реактивации персистирующего вируса. Поэтому всех животных, имеющих AT к ИРТ, следует считать носителями виру са, находящегося в состоянии латенции.
Слизистые оболочки респираторного и генитального трактов больных животных проду цируют IgA и интерферон. AT в сочетании с комплементом ограничивают, но не исключают распространения вируса ИРТ в организме. В подавлении инфекции клеточный иммунитет при ИРТ более эффективный, чем гуморальный и в основном связан с Т-лимфоцитами и макрофагами. Инактивация ТК-гена снижает способность вируса (1-го типа) вызывать аборты у привитого КРС.
Живые вакцины. Живые вакцины при ИРТ отличаются большим разнообразием Только в США применяют 14 вариантов живых вакцин. Большинство из них - штаммы вируса, аттенуированные длительным пассированием в первичных культурах и перевивае мых линиях клеток. В Бельгии и Японии применяют ts-мутанты. Живые вакцины при ин-траназально-внутримышечном применении обусловливают хороший локальный иммунитет и защиту животных от клинического проявления инфекции. При вакцинации живыми вак цинами необходимо использовать такие штаммы, которые не способны к персистенции, ибо не исключается возможность возникновения рекомбинантных вариантов при взаимодейст вии аттенуированного и вирулентного штаммов вируса. В качестве живой вакцины предло жен дефектный по ТК иммуногенный мутант, способный персистировать в организме при витых телят не менее 3-х мес и передаваться телятам без перехода в ТК-генотип.
В РФ и странах СНГ для профилактики ИРТ применяют живую вакцину ТК-А (ВИЭВ) Её вводят подкожно в дозе 2-105 ТЦЦзо/мл. Иммунитет у привитых животных наступает на 5-7-й день после вакцинации и сохраняется не менее одного года. Широко применяют также живую бивалентную вакцину "Бивак", содержащую 2 вакцинных штамма: ПГ-3 и ИРТ Вакцина "Бивак" производится биофабрикой, она безвредна, иммуногенна.
Персистенция и экскреция аттенуированного штамма вируса обнаружены также при применении других живых вакцин. Особенно часто и длительно вакцинный штамм вируса ИРТ выделяется со спермой привитых быков. Введение живой вакцины во время эстрального периода может сопровождаться поражением яичников, а вакцинация в ранний период стельности прерыванием беременности.
Считается, что интраназальная вакцинация более эффективна, чем подкожная или внут римышечная. При этом введении вакцинный вирус быстро - в клетки верхних дыхательных путей и глоточного кольца и усиливается синтез IgA и локальное образование интерферона., а при генитальном введении проникает в эпители альные клетки влагалища или препуция. Размножаясь в указанных клетках, вирус может выделяться во внешнюю среду в течение 2-х нед.
Патентуется живая поливалентная вирус-вакцина из 5 типов аттенуированных вирусов наиболее широко распространенных в Японии и других странах: вирус ИРТ, ВД-БС, ПГ-3, PC-вирус и бычий аденовирус 7-го типа. Все компоненты приготовлены в клеточных куль турах. Поливалентность препарата усиливает эффективность вакцинации КРС.
Рекомбинантные вакцины. В ген gill аттенуированного вакцинного штамма ИРТ (NY) dltk была встроена мономерная вставка эпигонов белка Р1 вируса яшура. Полученная модифицированная живая вакцина защищала телят от ИРГ и ящура. Получен также рекомбинант вируса ИРТ, экспрессирующий димерную вставку эпитопов виру са ящура. Возможно получение рекомбинантов с 3-валентными вставками эпитопов вируса яшура серотипов О, А и С. Получена генно-инженерная вакцина из мутанта вируса ИРТ. Инактивированные вакцины. По степени разрушения АГ детерминант инактиванты располагаются следующим образом: Уф облучение, нагревание (56°С), р-пропилактон, формальдегид и димерэтиленинин. В РФ применяется инактивированная димерэтилениминовая вакцина из эпизоотического шт. 4016, в которой в качестве адъюванта используется аэросил. В Чехословакии используется формолвакцина с масляным адъювантом. Препарат применяется двукратно в дозе 2 мл с 4-нед ин тервалом. У вакцинированных животных формируются гуморальные (1:128 - 1:256) и сек реторные (1:2-1:8) AT. Наблюдалась корреляция между уровнем сывороточных AT и устой чивостью телят к заражению. Однако вакцинация серонегативных телят не предупреждала у них постинфекционной латенции вируса, но препятствовала ей у ранее перенесших спон танную инфекцию. Колостральный иммунитет длился 4-5 мес. Вакцинация телят инду цировала сероконверсию лишь тогда, когда уровень материнских AT у них был очень низ ким. Применение инактивированной вакцины против ИРГ среди 100% серопозитивных коров способствовало снижению числа случаев патологических состояний, ассоциирован ных с инфекцией этим вирусом. Отмечено также и улучшение некоторых показателей вос производства: повышение процента рождаемости, снижение количества случек, необходи мых для оплодотворения, уменьшение числа спонтанных абортов. Уже после однократной вакцинации у коров и стельных нетелей обнаружено повышение титра AT к ИРТ (6-9 log независимо от тира AT до вакцинации). Инактивированные вакцины, как и живые, при меняют двукратно с 2-3-нед интервалом. Эффективность инактивированных вакцин против ИРТ зависит от концентрации АГ и природы адъюванта. Для оценки иммуногенности вакцины против ИРТ можно использовать кроликов в качестве лабораторной модели. По титрам накопления ВНА у привитых внутримышечно кроликов судят о качестве вакцины. Высокоиммуногенна инактивированная вакцина против ИРТ с двухкомпонентным масляным адъювантом ВНИЯИ и ГОА-сапониновым адъювантом.
Субъединичные вакцины. Показано минимальное размножение вируса ИРТ в орга низме животных, иммунизированных гликопротеином gIV, который может быть использо ван в качестве субъединичной вакцины в сочетании со свободным от вируса лизатом инфи цированных клеток. Субъединичную вакцину готовили в виде иммуностимулирующего комплекса (ИСКОМ) из вирулентного штамма вируса герпеса типа 4 КРС. Очищенный ви рус обрабатывали 1%-ным l-o-h-октил-глюкопиранозидом в течение нескольких часов при 4°С, затем центрифугировали в ступенчатом градиенте сахарозы. После диализа осадок рас творяли в фосфатном буфере. Препарат в дозе 50 и 100 мкг вирусных компонентов дважды вводили внутримышечно 4-мес телятам с интервалом в 4 нед. Через 2 нед после второй вак цинации животных заражали интраназально вирулентным вирусом ИРТ. Все животные, иммунизированные ИСКОМ вакциной не заболели, вирус в носовом секрете не обнаружи вался, титр ВНА составлял 1:3500 и выше. У телят, иммунизированных коммерческой вак циной, наблюдали подъём температуры и наличие вируса в носовом секрете. При испы тании на телятах не было выявлено корреляции между титром сывороточных ВНА и устой чивостью к заражению.
Запатентован метод получения субъединичной вакцины на основе полипегггидов герпесвируса КРС 1-го типа. В качестве кандидата в вакцину использо вали мажорный гликопротеин gIV вируса ИРТ КРС. Опытных животных вакцинировали дважды с 3 нед интервалом. Препарат индуцировал ВНА в сыворотке крови и в слизистой носовых путей. Иммунизация приводила к предупреждению развития клинических призна ков заболевания при экспериментальном заражении разрешающей дозой вируса. Сравнение иммуногенности субъединичной и инактивированной вакцины с масляным адъювантом дало сходные результаты. Титр гуморальных AT у КРС после 1- и 2 кратного применения субъединичной вакцины был выше, чем при прививке инактивированной вак циной. Секреторные AT формировались лишь после 2 кратной вакцинации и были равно значными у животных, привитых обоими препаратами. В ФРГ имеется хороший опыт сочетанного применения живой и инактивированной вакцины против ИРГ. Живую вакцину вво дили двукратно с интервалом в 6 нед сразу после установления диагноза. Спустя 7 мес 2 кратно с тем же интервалом вводили инактивированную вакцину. В результате такой вак-цинопрофилактики новых случаев заболевания не регистрировали. Спустя 4 г. после пре кращения вакцинации животные оказались серонегативными. Авторы оценили предло женную ими схему применения живой и инактивированной вакцин как эффективную для оздоровления поголовья от ИРТ.
Поскольку вирус ИРТ может приживляться и длительно персистировать в организме вакцинированных животных, трудно однозначно ответить на вопрос о значении специфиче ской профилактики в оздоровлении хозяйств от ИРТ или точнее - можно ли путем система тического применения вакцин освободить хозяйство от носительства полевых штаммов ви руса. Имеются сообщения о том, что полного оздоровления можно достичь лишь в результа те систематического (4-летнего) применения в хозяйстве инактивированной эмульгированной вакцины,.
Связь уровня антител с резистентностью животных. Полной связи между титрами гуморальных AT и невосприимчивостью к вирусу нет. Даже низкий уровень AT может за щитить животное от заражения. Это кажущееся противоречие можно объяснить тем, что в устойчивости организма к инфекции большое значение имеют местные (секреторные) AT и другие факторы иммунитета. Вирус ИРТ в организме индуцирует синтез интерферона, кото рый препятствует размножению вируса в клетках. Интерферон в высоких титрах обнаружи вается в течение 7 да при внутривенном введении вируса. Установлено и локальное образо вание интерферона в дыхательных путях при интраназальном и интратрахеальном зараже ниях. Вакцинный вирус также обладает высокой интерфероногенной активностью. Наступ ление ранней невосприимчивости у вакцинированных телят связано с появлением интерфе рона. Видимо, выявление специфических AT в сыворотке крови не является точным инди катором иммунитета, хотя остается критерием при иммунологической оценке. Большинство авторов считают, что ВНА в титре 1:2-1:4 защищают животных от заражения. Телята, имеющие индекс нейтрализации сыворотки крови 2,4 и 2,83±0,9 и титр AT в РИГА 1:232, клинически не реагировали на введение вирулентного вируса.
Связь титров антител с вирусоносительством и вирусовыделением. Иммунизация животных живыми вакцинами против ИРГ снижает, но не предотвращает латентной инфек ции у КРС. Со временем титр поствакцинальных AT при ИРТ снижается, но так как вирус в организме переболевшего и вакцинированного животного может реактивироваться из ком плекса вирус-антитело, то содержание AT колеблется. По-видимому, этим и обусловлено выделение персистирующего вируса. Даже у животных с высоким титром AT вирус ИРТ был выделен из миндалин и лимфоузлов. В качестве профилактичских мер рекомендуют ре гулярное исследование проб сыворотки крови от быков-производителей на наличие AT, a материала из препуция - вируса.
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Изучением иммуногенных свойств вирус вакцины против ИРГ на коровах установлено, что при 1 кратном введении препарата максимальный уровень AT отмечали через 1-2 мес после вакцинации. Через 6 мес титр AT в РИГА снижался вдвое, а через 9 мес он был на уровне иммунного фона. Динамика ВНА имела такую же закономерность. Однако ВНА на высоком уровне удержива лись дольше. Повторная иммунизация приводила к повышению титра гуморальных AT. У телят, полученных от вакцинированных коров, титр гуморальных AT был выше, чем у их матерей. Пассивно передающиеся AT в сыворотке крови телят и секретах из носовой полости появлялись уже в 1 дн после потребления молозива. Титр их в секретах носовой полости в большинстве случаев не превышал 1:8 в первые 15-20 сут после рождения. Длительность циркуляции поствакцинальных антител. У коров через 9 мес после прививки живой вакциной в РНГА с сывороткой крови AT не выявлялись. Колостральные АТ сохранялись в крови телят в достаточно высоком титре до 30 дн с последующим сниже нием к 60-му дн. Эффективность вакцины против ИРТ в Венгрии долгое время определяли в тесте нейтрализации с сывороткой вакцинированных телят. В настоящее время предложенболее чувствительный метод. Коэффициент корреляции между титром в РН и ELISA составлял 0,789.
Серопрофилактика. Для серопрофилактики ИРТ, ПГ-3 и аденовирусной инфекции ги периммунные поливалентные сыворотки удается получать на лошадях, которых иммунизи руют АГ, инактивированными электрическим полем или лазерным излучением. АГ приме няют с масляными адъювантами. Поливалентные сыворотки применяют в промышленных комплексах по доращиванию и откорму молодняка КРС.
Меры борьбы. Про ведение мероприятий, изложенных в наставлении по борьбе с ИРТ, где предусмотрены на дежная, систематически проводимая диагностика (включая исследование спермы быков-производителей на племенных станциях), строгий контроль за перемещением скота и актив ная профилактика обеспечивает создание устойчивого благополучия хозяйства в отношении ИРТ. Для обеспечения безинфекционного стада КРС проводится регулярное серологическое тестирование и удаление из стада инфицированных животных, вакцинация, дезинфекция и борьба с грызунами.
Ветеринарно-санитарная оценка продукции неразработана.
Семейство: Flaviviridae.
Таксономическая структура семейства.
Семейство: Flaviviridae. Рода: Flavivirus, Pestivirus, Hepacivirus
Особенности вириона.
Морфология. Вирионы сферической формы, имеют липидную оболочку; диаметр 40-60 нм. Капсид образован капсидным протеином (С), а оболочка содержит 2-3, мембранных протеина, кодируемых вирусом. Вцелом, общие структурные характеристики гепацивирусов сходны с таковыми флави- и пестивирусов.
Геном. РНК: односпиральная, линейная, позитивная; размер 11 kb, 12,3 kb и 9,6 kb у флави-, пести- и гепацивирусов, соответствено. 3’-концевого поли(А)-трека нет. У вирусов рода Flavivirus по 5’-концу РНК есть кэп типа I.
Протеины.Все вирусы семейства имеют один небольшой основной капсидный протеин и 2 (Flavivirus и Hepacivirus) или 3 (Pestivirus) мембрано-ассоциированных протеина. В составе сиквенсов неструктурных протеинов определены мотивы, характерные сериновой протеазе, РНК хеликазе и РНК-зависимой РНК полимеразе, которые имеют сходную локализацию в геноме у вирусов всех трех родов.
Другие компоненты вириона.Липиды (15-20% общей массы вириона у флавивирусов), образующие оболочку вириона, имеют клеточное происхождение. Липидные компоненты пести- и гепацивирусов не идентифицированы.
Углеводороды присутствуют в вирионе в виде гликолипидов и гликопротеинов.
Организация генома и репликация. Геномная РНК вирусов всех трех родов имеет сходную организацию. В инфицированных клетках обнаруживают только мРНК, которая имеет одну ORF, фланкированную по 5’- и 3’-концам некодирующими участками (noncoding regions, NCR), формирующими специфические вторичные структуры, необходимые для репликации генома. У флавивирусов инициация трансляции кэп-зависимая в случае, тогда как у пести- и гепацивирусов идентифицирован внутренний сайт входа рибосомы (internal ribosomal entry site, IRES). Вирусные протеины синтезируются как части полипротеина (более 3000 аминокислот), который подвергается ко- и посттрансляционному разрезанию вирусными и клеточными протеиназами. Структурные протеины расположены в N-концевой части полипротеина, а неструктурные – в остальной. Последние включают сериновую протеазу, РНК хеликазу и РНК-зависимую РНК полимеразу. Синтез РНК происходит в цитоплазме в ассоциации с мембранами через синтез негативных промежуточных форм. Сборка вириона и приобретение оболочки происходит на внутриклеточных мембранах, частицы транспортируются в секреторных цитоплазматических везикулах и высвобождаются из клетки путем экзоцитоза.
Антигенные свойства. Между вирусами разных родов антигенного родства нет. Перекрестная активность в серологических тестах наблюдается на внутриродовом уровне (Flavivirus, Pestivitus). Гепацивирусы антигенному анализу пока не поддаются.
Род: Flavivirus. Типовой вид: Yellow fever virus (YFV) (вирус желтой лихорадки).
Характерные особенности. Распространение флавивирусов происходит с участием членистоногих переносчиков (мокитов или клещей), в которых они активно репродуцируются. Некоторые флавивирусы являются этиологическими агентами зоонозов грызунов и летучих мышей, не связанных с участием членистоногих переносчиков.
Характеристика вириона. Морфология.Вирионы сферические; диаметр 50 нм. Различают две формы вирионов. Зрелые вирионы содержат два вирусных мембрано-ассоциированных протеина Е и М. Внутриклеточные незрелые вирусные частицы имеют в своем составе вместо М его предшественника – prM, который протеолитически разрезается во время созревания. Детальный структурный анализ был проведен в отношении вируса клещевого энцефалита (Tick-borne encephalitis virus, TBEV). Его мажерный оболочечный протеин Е формирует димеры, атомная структура которых определена с использованием методов кристаллографии в рентгеновских лучах (X-ray cristallography). Димеры протеина Е имеют палочковидную (цилиндрическую) форму и ориентированы параллельно мембране, т.е. не образуют спайко-подобных выступов (при своем нейтральном рН).Криоэлектронные микрофотографии дают основание полагать, что оболочка вириона и кор имеют икосаэдральную симметрию. Точная Mr вириона не определена, но расчетная, в соответствии с композицией вируса, составляет примерно 60х106. Плавучая плотность в сахарозе составляет 1,19 г/см3, S20w 200S. Вирус стабилен при рН 8,0, но быстро инактивируется при низких значениях рН, температуре выше 40 оС, при воздействии органических растворителей, детергентов, УФ лучей и g-облучении.
Геном. РНК: односпиральная, позитивная, линейная; размер примерно 11 kb. 5’-конец имеет кэп типа I (m-7GpppAmp), предшествующий консервативному динуклеотиду AG. 3’-конец не имеет поли(А)-трека и заканчивается консервативным динуклеотидом CU.
Протеины.В состав вириона входит 3 структурных протеина: капсидный протеин (С), мажерный оболочечный протеин Е, и либо prМ (у незрелых вирионов), либо М (у зрелых вирионов). Атомная структура растворимых димерных форм протеина Е определена кристаллографией в рентгеновских лучах. Протеин Е является вирусным гемагглютинином и участвует в процессе связывании с рецептором и рН-зависимого слияния мембран (вируса и клетки) в процессе рецептор-медиированного эндоцитоза. В инфицированных клетках синтезируется 7 неструктурных протеинов: NS1, NS2А, NS2В, NS3, NS4А, NS4В, NS5. NS3 является мультифункциональным протеином. N-концевая треть протеина формирует вместе с NS2В комплекс вирусной сериновой протеиназы, участвующий в процессинге полипротеина. С-концевая часть NS3 содержит РНК хеликазный домен, участвующий в репликации РНК, а также обладает РНК-трифосфатазной активностью, которая, вероятно, используется в формировании 5’-концевой кэп-структуры вирусной РНК. NS5 является самым крупным и наиболее консервативным протеином флавивирусов. NS5 является РНК-зависимой РНК полимеразой, и также, предположительно, имеет мотив, определяющий метилтрансферазную активность, участвующий в метилировании 5’-кэп-структуры.
Другие компоненты вириона. Липиды (17% массы вириона) имеют клеточное происхождение. Углеводороды, составляющие 9% массы вириона (гликолипиды и гликопротеины) имеют композицию и структуру, зависимые от клеток-хозяина (позвоночных или членистоногих). Сайты N-гликозилирования присутствуют у протеинов prМ (1-3 сайта), Е (0-2 сайта) и NS1 (1-3 сайта).
Организация генома и репликация. В инфицированных клетках обнаруживают только одну вирусную мРНК, которая имеет одну ORF (более 10000 оснований), кодирующую все структурные и неструктурные протеины, фланкированную по 5’- и 3’-концам короткими некодирующими участками (NCR). Хотя нуклеотидные сиквенсы дивергентны, предполагаемая вторичная структура 5’- и 3’-NCRs консервативна у разных флавивирусов. NCRs имеют консервативные участки, различающиеся у флавивирусов, распространяемых москитами или клещами. Длина 3’-NCR вируса клещевого энцефалита может значительно варьировать (45-800 нуклеотидов) и, в некоторых случаях, содержать внутренний поли(А)-тракт. Синтез РНК происходит на мембранах перинуклеарного эндоплазматического ретикулума. После трансляции исходной геномной РНК, запускается процесс репликации РНК, начинающийся с синтеза комплементарных негативных цепей, которые затем используются в качестве матриц для образования полноразмерных позитивных молекул РНК. Они синтезируются по полуконсервативному механизму с образованием промежуточных (содержащих как двухцепочечные участки, так и вновь синтезированные одноцепочечные молекулы) и репликативных (дуплексы молекул РНК) форм. Синетез негативных цепей в клетках, инфицированных флавивирусами, продолжается в течение всего цикла репликации. Трансляция обычно начинается с первого AUG ORF, но у флавивируосв, передающихся москитами, может также начинаться со второго внутреннего AUG, расположенного на 12-14 кодонов ниже. Полипротеин процессируется клеточными протеазами и вирусной NS2B-NS3 сериновой протеазой с образованием зрелых структурных и неструктурных протеинов. Топология протеинов относительно эндоплазматического ретикулума и цитоплазмы определяется внутренними сигналами и специфическими стоп-трансферными сиквенсами (stop-transfer sequences). Пролиферация и гипертрофия внутриклеточных мембран является характерной особенностью клеток, инфицированных флавивирусами. Репликативные комплексы осаждаются с мембранными фракциямии экстракта инфицированных клеток. Первоначально вирусные частицы могут быть обнаружены в шероховатом эндоплазматическом ретикулуме, который считается местом сборки вирионов. Затем такие незрелые вирионы транспортируются через мембранные системы секреторного аппарата клетки к ее поверхности, где происходит их экзоцитоз. Непосредственно перед высвобождением вириона протеин prМ разрезается фуриновыми или фурино-подобными клеточными протеазами с образованием зрелых вирионов. Инфицированные флавивирусами клетки высвобождают также неинфекционные субвирусные частицы, имеющие более низкий (по сравнению с целым вирионом) коэффициент седиментации (70 S против 200 S) и проявляющие гемагглютинирующую активность (медленно седиментирующий гемагглютинин, SHA).
Антигенные свойства. Все флавивирусы серологически родственны, что может быть продемонстрировано в ELISA или реакции ингибиции гемагглютинации с использованием поли- и моноклональных антител. Реакция нейтрализации более значима и может быть использована для определения отдельных серокомплексов более близкородственных флавивирусов. Оболочечный протеин Е является основной мишенью для нейтрализующих антител и вызывает образование протективного иммунитета. Протеин Е индуцирует, также, образование перекрестно реагирующих, но не обладающих нейтрализующей активностью антител. Антигенные сайты, участвующие в нейтрализации определены для всех трех структурных доменов протеина Е. АТ, специфичные prМ, взаимодействуют, в основном, с нейтрализованными вирионами.
Биологические особенности. Спектр естественных хозяев. Флавивирусы могут инфицировать различные виды позвоночных и, во многих случаях, членистоногих. Некоторые вирусы имеют ограниченный спектр восприимчивых хозяев-позвоночных (например, только приматы); другие могут инфицировать широкий спектр видов (млекопитающих, птиц и др.). Членистоногие обычно инфицируются во время прокормления на хозяине (позвоночном), во время виремии, или при ее отсутствии (последнее описано в отношении флавивирусов, передающихся клещами).
Пути распространения и родство по переносчику. Большинство флавивирусов являются арбовирусами и поддерживаются в природе путем передачи между кровососущими членистоногими (переносчиками) и позвоночными (хозяевами). Примрено 50% известных флавивирусов распространяются москитами, 28% - клещами, а остальные являются зоонозными агентами, распространяющимися между грызунами и летучими мышами при отсутствии известных векторов. В некоторых случаях цикл передачи не идентифицирован.
Географическое распространение. Флавивирусы распространены повсеместно, но некоторые виды встречаются в определенных эндемичных или эпидемичных районах, например, вирус желтой лихорадки (YFV) – в тропических и субтропических областях Африки и Южной Америки, вирус Денге (DENV) – в тропических областях Азии, Океании, Африки, Австралии и Америки, вирус японского энцефалита (JEV) – в Юго-Восточной Азии, вирус клещевого энцефалита (TBEV) – в Европе и Северной Азии.
Ассоциация с болезнью. Более 50% известных флавивирусов асоциированы с болезнями человека, включая такие опасные патогены как YFV, DENV (тип 1-4), JEV и TBEV. Болезни, вызываемые флавивирусами, могут быть ассоциированы с симптомами поражения центральной нервной системы (менингиты, энцефалиты), лихорадкой, артралгией, сыпью и геморрагической лихорадкой. Некоторые флавивирусы патогенны для домашних и диких животных (лошадей, свиней, овец, собак, индеек, куропаток, андатр) и вызывать экономически значимые болезни.
Критерии подразделения на виды внутри рода. Видовую принадлежность флавивирусов определяют по следующим критериям: нуклеотидный и аминокислотный сиквенс; антигенные свойства; географическое распространение; переносчики; естественные хозяева; ассоциация с болезнью; экологические характеристики.
Вирусы данного рода сгруппированы по серологическим характеристикам и в соответствии с преобладающими векторами.
Виды (53 вида):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиатура |
|
1. Вирусы, передающиеся клещами (tick-borne viruses) |
|||
|
Группа вирусов млекопитающих, передающиеся клещами |
|||
Gadgets Gully virus |
Вирус Гаджетс Галли |
AF013374 |
GGYV |
Kadam virus |
Вирус Кадам |
AF013380 |
KADV |
Kyasanur virus |
Вирус Киассанур |
X74111 |
KFDV |
Langat virus |
Вирус Лангат |
M73835 |
LGTV |
Omsk hemorrhagic fever virus |
Вирус омской геморрагической лихорадки |
X66694 |
OHFV |
Powassan virus |
Вирус Повассан |
L06436 |
POWV |
Royal Farm virusKarshi virus |
Вирус Ройал Фарм Вирус Карши |
AF013398 AF013381 |
RFV KSIV |
Tick-borne encephalitis virusEuropean subtipe Far Eastern subtype Siberian subtype |
Вирус клещевого энцефалита Европейский субтип Дальневосточный субтип Сибирский субтип |
M27157 X07755 L40361 |
TBEV |
Louping ill virusIrish subtype British subtype Spanish subtype Turkish subtype |
Вирус вертячки Ирландский субтип Британския субтип Испанский субтип Турецкий субтип |
Y07863 X86784 D12937 X77470 X69125 |
LIV |
|
Группа вирусов морских птиц, передающихся клещами |
|||
Meaban virus |
Вирус Мибан |
AF013386 |
MEAV |
Saumarez Reef virus |
Вирус рифов Саумарез |
X80589 |
SREV |
Tyuleniy virus |
Вирус Тюлений |
X80588 |
TYUV |
|
2. Вирусы, передающиеся москитами (mosquito-borne viruses) |
|||
|
Группа вируса Ароа |
|||
Aroa virusBussuquara virus Iguape virus Naranjal virus |
Вирус Ароа Вирус Бусуквара Вирус Игуап Вирус Нараньял |
AF013362 AF013366 AF013375 AF013390 |
AROAV BSQV IGUV NJLV |
|
Группа вируса Денге |
|||
Dengue virusDengue virus type 1 Dengue virus type 2 Dengue virus type 3 Dengue virus type 4 |
Вирус Денге Вирус Денге тип 1 Вирус Денге тип 2 Вирус Денге тип 3 Вирус Денге тип 4 |
23027 M19197 A34774 M14931 |
DENV DENV-1 DENV-2 DENV-3 DENV-4 |
Kedougou virus |
Вирус Кедоугоу |
AF013382 |
KEDV |
|
Группа вируса японского энцефалита |
|||
Cacipacore virus |
Вирус Касипакор |
AF013367 |
СPCV |
Koutango virus |
Вирус Коутанго |
AF013384 |
KOUV |
Japanese encephalitis virus |
Вирус японского энцефалита |
M18370 |
JEV |
Murrey Valley encephalitis virusAlfui virus |
Вирус энцефалита Долиный Муррей Вирус Алфуи |
X03467 AF013360 |
MVEV ALFV |
St. Louis encephalitis virus |
Вирус энцефалита Сент-Луис |
M1661 |
SLEV |
Usutu virus |
Вирус Усуту |
AF013412 |
USUV |
West Nile virusKunjin virus |
Вирус Западного Нила Вирус Куньин |
M12294 D00246 |
WNV KUNV |
Yaounde virus |
Вирус Яоунд |
AF013413 |
YAOV |
|
Группа вируса Кокобера |
|||
Kokobera virusStratford virus |
Вирус Кокобера Вирус Стратфорд |
AF013383 AF013407 |
KOKV STRV |
|
Группа вируса Нтайя |
|||
Bagaza virus |
Вирус Багаза |
AF013363 |
BAGV |
Ilheus virusRocio virus |
Вирус Илхеус Вирус Росио |
AF013376 AF013397 |
ILHV ROCV |
Israel turkey meningoenc -ephalomyelitis virus |
Вирус менингоэнцефало миелита израильских индеек |
AF013377 |
ITV |
Ntaya virus |
Вирус Нтайя |
AF013392 |
NTAV |
Tembusu virus |
Вирус Тембусу |
AF013408 |
TMUV |
|
Группа вируса Спондвени |
|||
Zika virusSpondweni virus |
Вирус Зика Вирус Спондвени |
AF013415 AF013406 |
ZIKV SPOV |
|
Группа вируса желтой лихорадки |
|||
Banzi virus |
Вирус Банзи |
L40951 |
BANV |
Bouboui virus |
Вирус Боубоуи |
AF013364 |
BOUV |
Edge Hill virus |
Вирус Эдж Хилл |
AF013372 |
EHV |
Jugra virus |
Вирус Джугра |
AF013378 |
JUHV |
Saboya virusPotiskum virus |
Вирус Сабойа Вирус Потискам |
AF013400 AF013395 |
SABV POTV |
Sepik virus |
Вирус Сепик |
AF013404 |
SEPV |
Uganda S virus |
Вирус Уганда S |
-- |
UGSV |
Wesselsbron virus |
Вирус Весселсброн |
-- |
WESSV |
Yellow fever virus |
Вирус желтой лихорадки |
X03700 |
YFV |
|
3. Вирусы, для которых членистоногие преносчики не известны (no known arthropod vector) |
|||
|
Группа вируса летучих мышей Энтеббе |
|||
Entebbe bat virusSokoluk virus |
Вирус летучих мышей Энтеббе Вирус Соколук |
AF013373 AF013405 |
ENTV SOKV |
Yokose virus |
Вирус Йокос |
AF013414 |
YOKV |
|
Группа вируса Модок |
|||
Apoi virus |
Вирус Апои |
AF013361 |
APOIV |
Cowbone Ridge virus |
Вирус Cowbone Ridge |
AF013370 |
CRV |
Jutiapa virus |
Вирус Джутиапа |
AF013379 |
JUTV |
Modoc virus |
Вирус Модок |
AF013387 |
MODV |
Sal Vieja virus |
Вирус Сал Виеджа |
AF013401 |
SVV |
San Perlita virus |
Вирус Сан Перлита |
AF013402 |
SPV |
|
Группа вируса Рио Браво |
|||
Bukalasa bat virus |
Вирус Букаласа летучих мышей |
AF013365 |
BBV |
Carey Island virus |
Вирус Carey Island (остр.Carey) |
AF013368 |
CIV |
Dakar bat virus |
Вирус Дакар летучих мышей |
AF013371 |
DBV |
Montana myotis leucoencephalitis virus |
Вирус лейкоэнцефаломиелита Монтана |
AF013388 |
MMLV |
Phnom Penh bat virusBatu Cave virus |
ВирусПномПен летучих мышей Вирус Бату Каве |
AF013394 AF013369 |
PPBV BCV |
Rio Bravo virus |
Вирус Рио Браво |
AF013396 |
RBV |
Предполагаемые виды: Tamana bat virus (TABV), Cell fusing agent virus (CFAV)[M91671].
Род: Pestivirus. Типовой: Bovine viral diarrhea virus1(BVDV1)(в.вирусной диареи КРС 1).
Характерные особенности. Пестивирусы кодируют два уникальных продукта генов. Первый протеин ORF – неструктурный протеин Npro, обладающий аутопротеолитической активностью, отвечающей за высвобождение из вновь образованного полипротеина. Один из трех вирусных оболочечных гликопротеинов Erns обладает РНКазной активностью.
Характеристика вириона. Морфология. Вирионы сферические, оболочечные; диаметр 40-60 нм. На поверхности вириона различают кольцевидные (ring-like) субъединицы размером 10-12 нм. Структура и симметрия кора не изучена.
Точная Mr вириона не определена, но расчетная, в соответствии с композицией вируса, составляет примерно 60х106. Плавучая плотность в сахарозе составляет 1,10-1,15 г/см3, S20w 140-150S. Инфекционность вируса стабильна в пределах относительно широкого спектра рН, но быстро снижается при температуре выше 40 оС и воздействии растворителей и детергентов.
Геном.РНК: односпиральная, позитивная, линейная; размер примерно 12,3 kb. Данных, свидетельствующих о наличии кэпа по 5’-концу, нет. 3’-конец не имеет поли(А)-тракта. Геномная РНК содержит одну ORF, охватывающую почти весь геном вируса. У некоторых цитопатогенных штаммов BVDV-1 в определенных участках генома (NS2 или по месту перехода NS2 в NS3) идентифицированы небольшие вариабельные интегрированные фрагменты нуклеиновой кислоты (вирусного или клеточного происхождения). Другие цитопатогенные изоляты BVDV имеют генетические дуплексы, охватывающие целиком или частично участки генома, кодирующие протеины Npro или NS3, что приводит к увеличению вирусного генома до 16,5 kb. Во всех этих случаях сохраняется одна большая ORF. Цитопатогенные вирусы могут также образовываться при делециях больших участков генома. Такие дефектные геномы могут сохраняться в присутствии интактного хелперного вируса (помощника).
Протеины.В состав вириона входит 4 структурных протеина: основной нуклеокапсидный протеин (С), и 3 оболочечных гликопротеина Erns, Е1 и Е2. Все три глкопротеина существуют в виде межмолекулярных комплексов, связанных дисульфидными связями: гомодимеры Erns, гетеродимеры Е1-Е2, гомодимеры Е2. Erns обладает РНКазной активностью и является уникальным продуктом пестивирусов, не найденым у вирусов других родов семейства. Пестивирусы кодируют 7-8 неструктурных протеинов (NS). Протеин Npro, также уникальный для пестивирусов, является протеиназой, аутокаталитически высвобождающейся от вновь образованного полипротеина. Неструктурный протеин р7, вероятно, участвует в созревании вируса. Протеин NS2-3 многофункциональный. N-концевая область (40%, или NS2) является гидрофобной и содержит мотив “цинкового пальца” (zinc finger motif), что свидетельствует о его участии в связывании РНК или репликации. С-концевая область (60% или NS3) функционирует как сериновая протеиназа, участвующая в процессинге полипротеина и как РНК-хеликаза/NTPаза, вероятно, участвующая в репликации РНК. NS2-3 обнаруживается у нецитопатогенных BVDV. У цитопатогенных изолятов BVDV, вируса пограничной болезни овец (BDV) и классической чумы свиней (CSFV) NS2 и NS3 могут продуцироваться в добавление к NS2-3. Протеин NS4A действует как кофактор для NS3-протеиназной активности. Роль NS4B неизвестна. NS5A является единственным фосфорилированным пестивирусным протеином и, вероятно, участвует в репликации РНК. NS5B обладает активностью РНК-зависимой РНК полимеразы.
Другие компоненты вириона.Имеет липидную оболочку, но по композиции липидов данных нет. Все вирусные оболочечные гликопротеины имеют N-связанные гликаны.
Организация генома и репликация. Геномная РНК состоит из одной ORF, кодирующей полипротеин примерно в 4000 аминокислот, предшествующей ей 5’-NCR (360-385 нуклеотидов), и следующей за ней 3’-NCR (230 нуклеотидов). Порядок расположения генов:5’-Npro-C-Erns-E1-E2-p7-NS2-3(NS2-NS3)-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-3’.
Репликация пестивирусов инициируется рецептор-опосредованным эндоцитозом, в котором участвуют один или более поверхностных клеточных молекул и вирусных гликопротеинов Erns и E2. После эндоцитоза и раздевания геномная РНК служит в качестве мРНК. Субгеномных молекул мРНК нет. Инициация трансляции происходит по кэп-независимому внутреннему инициирующему механизму с использованием внутреннего сайта входа рибосомы (IRES), расположенного в 5’-NCR РНК. Процессинг полипротеина осуществляется ко- и посттрансляционно за счет клеточных и вирусных протеиназ. Неструктурный протеин Npro (первый протеин ORF) отрезается аутопротеолитически от вновь образованного полипротеина по сайту Npro/С. Последующие разрезания полипротеина, сопровождающиеся образованием структурных протеинов C, Erns, E1 и E2, вероятно медиируется клеточными сигнальными пептидазами. Транслокация гликопротеина в эндоплазматический ретикулум происходит, вероятно, при участии внутренней сигнальной последовательности, возможно внутри протеина C. Разрезание между Е2 и р7 происходит не полностью, что приводит к образованию внутриклеточных форм Е2 с разными С-концами. В зависимости от вируса NS2-3 остается интактным (нецитопатогенные вирусы) или обнаруживаются вместе с N- и С-концевыми продуктами NS2 и NS3 (цитопатогенные вирусы). Механизм образования NS3 включает события рекомбинации РНК. Цитопатогенные BVDV имеют генетические вставки, делеции, дуплексы или реорганизации, что, в итоге, приводит к продукции NS3. NS3 (или NS2-3 у нецитопатогенных вирусов) обладает активностью сериновой протеазы, ответственной за весь последующий процессинг полипротеина. NS4A облегчает разрезание, обусловленное NS3, по сайтам NS4B/5A и 5A/5B.
Репликация РНК происходит в ассоциации с внутрицитоплазматическими мембранами, предположительно в репликационных комплексах, образованных вирусной РНК и вирусными неструктурными протеинами. Обнаруживаются репликативные формы РНК пестивирусов. Соотношение позитивных и негативных цепей РНК в клетках, через 12 часов после инфицирования, равно 10. Синтез РНК не ингибируется актиномицином D. Созревание вируса изучено не достаточно. Вирусные протеины не обнаружены на поверхности клетки, что свидетельствовует о созревании вирионов во внутриклеточных везикулах, и последующем высвобождении путем экзоцитоза. Значительное количество инфекционных вирусных частиц остаются клеточно-ассоциированными. Синтез клеточных РНК и протеинов продолжается в процессе инфекции.
Антигенные свойства.Пестивирусы антигенно родственны, и имеют общие эпитопы, участвующие в перекрестной активности. Отдельные антигенные детерминанты были определены с использованием моноклональных антител. Антигенные вариации особенно хорошо просматриваются между изолятами BVDV. N-концевая часть Е2 содержит гипервариабельный, в антигенном отношении, участок. Профиль взаимодействия с моноклональными антителами согласуется генетическим родством вирусов. У инфицированных животных вырабатываются антитела, специфичные двум структурным гликопротеинам (Erns и Е2) и протеину NS3, тогда как на все остальные протеины ответ развивается очень слабый или не развивается совсем. Протеины Erns и Е2 способны индуцировать протективную защиту независимо друг от друга. Моноклональные антитела, специфичные этим протеинам могут обладать нейтрализующей активностью. Антитела, специфичные NS3, нейтрализующей активностью не обладают.
Биологические особенности. Спектр естественных хозяев. Пестивирусы инфицируют свиней и жвачных, включая КРС, овец, коз и диких жвачных. Беспозвоночных хозяев нет.Пути распространения. Передача вируса происходит путем прямого и непрямого контактов. Трансплацентраная и конгенитальная передача происходит у всех видов животных. Патогенность. Пестивирусные инфекции могут протекать субклинически и сопровождаться различными клиническими состояниями, включая диарею, острый геморрагический синдром, острую фатальную болезнь и изнуряющую болезнь. Трансплацентарное инфицирование может приводить к смерти плода, врожденным нарушениям или развитию пожизненной персистентной инфекции. Фатальная болезнь слизистых случается у КРС, персистентно инфицированного нецитопатогенным BVDV, который суперинфицируется цитопатогенным вирусом. Экспериментальная инфекция. В экспериментальных условиях ни у каких видов животных, кроме естественных хозяев вызвать инфекцию BVDV или BDV не удалось. Однако CSFV был адаптирован к репродукции у кроликов. Культуры клеток. Клетки, полученные от естественных хозяев (КРС, свиней, овец) поддерживают репликацию вируса. Большинство вирусных изолятов нецитопатогенны и создают персистентную инфекцию в культуре клеток. Инфекционный нецитопатогенный BVDV часто присутствует в продуктах сыворотки крови КРС, используемых для культивирования клеток. Цитопатогенные BVDV, которые возникают у животных во время персистентной инфекции, способны к бляшкообразованию и ЦП действию. Гемагглютинация. Пестивирусы гемагглютинирующей активностью не обладают.
Критерии подразделения на виды внутри рода.Видовую принадлежность пестивирусов определяют по следующим критериям: родство по нуклеотидному сиквенсу; серологическое родство; вид животного-хозяина (от которого выделен изолят).
Подразделение пестивирусов на виды проводится по нескольким параметрам, и их родству с типовыми вирусами видов, идентифицированных, на данный момент (BVDV-1: NADL; BVDV-2: 890; BDV: BD31 и CSFV: Alfort/187). Родство по нуклеотидному сиквенсу является важнейшим критерием подразделения пестивирусов на виды. Например, сиквенсы 5’-NCR между типовыми вирусами четырех известных, на данный момент, видов различаются на 15%. В большинстве случаев степень гомологии по 5’-NCR позволяет дифференцировать виды. Однако иногда родство по нуклеотидному сиквенсу может быть непоянтным (двусмысленным) и должно быть подкреплено дополнительными сравнительными анализами. Сывортка крови переболевших животных, содержащая антитела против данного вида пестивирусов (например, BVDV-1), обычно имеет титр нейтрализующей активности в несколько раз выше в отношении вирусов соответствующего вида (BVDV-1), чем против вирусов других видов. Наконец, различия по виду животного, от которого выделен вирус, могут (но не всегда) помочь в определении видовой принадлежности. Например, BVDV-1 и CSFV считаются разными видами, так как они отличаются друг от друга по (1) не мнее чем 25%-му различию нуклеотидного состава (по полному геному), (2) не менее чем 10-ти кратным различиям по титрам нейтрализации, при проведении реакции перекрестной нейтрализации с использованием поликлональных антител (сывороток иммунных животных), и (3) по спектру восприимчивых видов животных-хозяев (в естественных условиях CSFV инфицирует только свиней, тогда как BVDV-1 инфицирует как жвачных, так и свнией). Виды (4 вида):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиатура |
Border disease virusBD31 X818 |
Вирус пограничной болезни овец BD31 X818 |
U70263 AF037405 |
BDV |
Bovine viral diarrhea virus1NADL Osloss SD-1 CP7 |
Вирус вирусной диареи КРС 1 NADL Osloss SD-1 CP7 |
M31182 M96687 M96751 U63479 |
BVDV-1 |
Bovine viral diarrhea virus2Strain 890 C413 |
Вирус вирусной диареи КРС 2 Штамм 890 С413 |
U18059 AF002227 |
BVDV-1 |
Classical swine fever virus(Hog cholera virus) Alfort/187 Alfort-Tubingen Brescia C strain |
Вирус классической чумы свиней (Вирус холеры свиней) Alfort/187 Alfort-Tubingen Brescia Штамм C |
X87939 J04358 M31768 Z46258 |
CSFV |
Предполагаемые виды: Pestivirus of giraffe.
Род: Hepaсivirus. Типовой вид: Нepatitis C virus (HCV) (вирус гепатита С).
Характерные особенности.Гепацивирусы распространяются между людьми, через контакт с контаминированной кровью или продуктами крови. Беспозвоночных переносчиков (векторов) нет. Гепацивирусы отличаются от флави- и пестивирусов неспособностью к эффективному накоплению в культурах клеток и по тому, что протеин-предшественник, состоящий из неструктурных (NS) протеинов 2 и 3, аутокаталитически разрезается по сайту соединения NS2-3 по цинк-зависимому механизму.
Характеристика вириона. Морфология.Вирионы сферические, оболочечные; диаметр около 50 нм. Вирусный кор сферический, около 30 нм в диаметре. Инактивируются при обработке хлороформом. Детально структура вириона не изучена.
Плавучая плотность в сахарозе составляет 1,06 г/см3, если вирус выделен из сыворотки крови при остром течении инфекции, и 1,15-1,18 г/см3, если вирус выделен из сыворотки крови при хроническом течении инфекции. Более низкая плотность является результатом физической ассоциации вирионов с сывороточными низкоплотностными липопротеинами. Более высокая плотность появляется в следствие связывания вируса с сыворотчными антителами. Вирус гепатита С (HCV), полученный из культуры клеток, имеет плавучую плотность в сахарозе 1,12 г/см3. S20w 150S. Вирионы стабильны в буфере рН 8,0-8,7, но чувствителльны к нагреванию, органическим растворителям и детергентам.
Геном.РНК: односпиральная, позитивная, линейная; размер примерно 9,6 kb. 5’-конец содержит внутренний сайт входа рибосомы (IRES) и имеет длину 340 нуклеотидов. 3’-конец сложный и содержит вариабельные участки (примерно 50 нуклеотидов), полипиримидиновый, различающийся по длине, участок (примерно 100 нуклеотидов) и высоко консервативный концевой участок (около 100 нуклеотидов).
Протеины.В состав вириона входит как минимум 3 протеина: коровый (нуклеокапсидный) протеин С (р19) и два оболочечных протеина Е1 (gp31) и Е2 (gp70). Дополнительный протеин р7 неполностью отрезается от предшественника Е2, что приводит к образованию Е2-р7 и р7, хотя не ясно, являются ли они структурными компонентами вириона. Два оболочечных протеина образуют в составе вириона гетеродимеры (вероятно нековалентно связанные). Распознаваемые неструктурные протеины включают: NS2 (Mr 21х103) – протеин, который до разрезания является частью цинк-зависимой протеиназы, соединяющей NS2 и NS3, и медиирующей аутокаталитическое разрезание по месту соединения NS2/NS3; NS3 (Mr 70х103) – протеин с активностью сериновой протеазы, хеликазы и NTP-азы (протеиназная активность используется для разрезания по сайтам между оставшимися неструктурными протеинами); NS4А (Mr 6х103) – кофактор, существенный для активности сериновой протеазы NS3; NS4В (Mr 27х103) (функция не известна); NS5А – сериновый фосфопротеин, с неясной функцией (Mr 56-58 х 103, в зависимости от степени фосфорилирования); NS5В (Mr 68х103) – протеин с активностью РНК-зависимой РНК-полимеразы.
Другие компоненты вириона.Наличие липидов не было показано непосредственно. Однако наблюдения по удалению вирусной оболочки и потере инфекционности при воздействии растворителей или детергентов свидетельствуют о присутствии липидов.
Углеводы также не идентифицировнны непосредственно, но наличие сайтов гликозилирования в предполагаемых кодирующих областях генов Е1 и Е2 и демонстрация углеводов, ассоциированных с продуктами этих двух генов, экспрессированных как рекомбинантные протеины, согласуется с наличием углеводов в составе вирионов.
Организация генома и репликация. Геномная РНК состоит из одной ORF, кодирующей полипротеин примерно в 3000 аминокислот. Порядок расположения генов: 5’-C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-3’. Все 3 структурных протеина (С, Е1 и Е2) кодируются в аминоконцевой части ORF. Непосредственно 3’ находится мелкий протеин р7, функция которого неизвестна. Идентифицированные структурные протеины кодируются в 3’-части ORF. Репликация изучена плохо, но есть данные, что она происходит в ассоциации с внутрицитоплазматическими мембранами. Репликативные формы вирусной РНК были обнаружены в ткани печени. Геномная РНК транслируется в полипротеин, который быстро процессируется ко- и посттрансляционно. Инициация трансляции происходит через IRES, расположенный внутри 5’-NCR, который также содержит несколько, расположенных близко друг к другу, AUGs. Транслокация структурных гликопротеинов в эндоплазматический ретикулум вероятно происходит с использованием внутренних сигнальных сиквенсов. Разрезание структурных протеинов осуществляется клеточными сигнальными пептидазами; вирусные протеазы разрезают все соединения между неструктурными протеинами. Сборка вирионов происходит, вероятно, путем почкования в везикулы.
Антигенные свойства.Вирусспецифические антитела к структурным протеинам (С, Е1 и Е2) и неструктурным протеинам (в основном NS3, NS4 и NS5) могут быть выявлены, с использованием рекомбинантных антигенов, в крови людей, инфицированных HCV. В формировании гуморального иммунного ответа участвуют конформационно-зависимые и линейные эпитопым HCV. Значительная гетерогенность по геному отражается в некоторой серологической гетерогенности гуморального иммунного ответа, особенно в отношении продукта гена NS4. Наиболее широкая гетерогенность обнаружена по N-концевым 27 аминокислотам Е2 (гипервариабельный участок 1, HVR-1). Есть данные, что HVR-1 является нейтрализующим эпитопом протеинов HCV и, что уклоняющиеся от нейтрализации варианты (эскейп-варианты) селектируются под влиянием иммунного ответа хозяина. Могут быть другие эпитопы нейтрализации, но они еще не определены. Клеточно-опосредованный иммунный ответ на все протеины HCV был показан, но его значимость не ясна. Однако есть свидетельства, что такой ответ ассоциируется с улучшением или прекращением инфекции. Из-за отсутствия системы культуры клеток, приемлемой для культивирования HCV, нет возможности широкого использования реакции нейтрализации in vitro. Отсутствие протективного иммунитета у шимпанзе, ранее инфицированных HCV, на реинфицирование другим штаммом HCV или даже тем же (сходные данные получены по естественной инфекции у людей), свидетельствует, что определение серотипов HCV затруднительно.
Биологические особенности.Спектр естественных хозяев. Естественным хозяином и резервуаром HCV является человек. Экспериментально инфекция передавалась шимпанзе. Других хозяев не идентифицировано.Пути распространения. Вирус гепатита С распространяется почти исключительно парентерально, через кровь. Эффективный скрининг донорской крови и использование инактивирующих процедур могут значительно снизить уровень распространения HCV через кровь и ее продукты, однако и другие пути заражения, особенно через нестерильные шприцы, остаются важнейшими факторами риска в развивающихся странах. Сообщалось о возможности инфцирования при половом контакте и перинатально. Географическое распространение. Вирус гепатита С распространен повсеместно. Данные (по детекции антител) свидетельствуют, что в развивающихся странах около 0,1-2,0% населения могут быть инфицированы HCV, но в некоторых уровень достигает 20%. Высокий уровень антителоносителей, может быть результатом использования контаминированных игл и шприцов. Примерно 3% населения Земли инфицировано HCV, что обусловливает развитие болезни у 170 миллионов человек.
Патогенность. Течение инфекции варьирует от субклинического до (редко) скоротечного (молниеносного). Персистенция вируса встречается в 80% случаев инфицирования. Из них около 20% переходит в хронический острый гепатит и цирроз. Персистентные инфекции эпидемиологически связаны с первичным раком печени, криптогенным циррозом и некоторыми формами аутоиммунного гепатита. Проявления HCV-инфекции вне печени сопровождаются смешанной криоглобулинемией в ассоциации с мембранопролиферативным гломерулонефритом и аутоиммунными состояниями. Тканевый тропизм. Сообщалось о репродукции вируса гепатита С в некоторых линиях клеток, происходящих из гепатоцитов и лимфоцитов, но накопление вируса было недостаточным для практического использования этих систем. In vivo HCV реплицируется в гепатоцитах при кажущемся отсутствии цитопатогенного эффекта.
Критерии подразделения на виды внутри рода. На основе гетерогенности нуклеотидного состава генома изолятов, полученных из разных регионов мира, вирус гепатита С был классифицирован на 6 генетических групп. Они были названы генотипами HCV 1-6. Генотипы различаются между собой на нуклеотидном уровне на 25-35%. Генотипы 7-11 описаны, но более широкий генетический анализ переместил вирусы генотипов 7-9 и 11 в генотип 6, а генотип 10 – в генотип 3. Шесть генотипов, в свою очередь, были подразделены еще на 100 субтипов, которые раличаются между собой на нуклеотидном уровне на 15-25%. Хотя генотипы различаются, подразделение на субтипы менее ясное, из-за перекрывания по степени гетерогенности. Было предложено подразделять (и классифицировать) основные генетические группы HCV на генотипы 1-6. Из-за невозможности, серотипирования изолятов HCV, и из-за отсутствия других таксономических характеристик основных генотипов, за исключением, географического распространения, все 6 генетических групп HCV, в настоящее время, составляют 1 вид.
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббреви-ра |
Hepatitis C virusHCV genotype 1 Subtype 1a Subtype 1b HCV genotype 2 Subtype 2a Subtype 2b HCV genotype 3 Subtype 3a Subtype 10a HCV genotype 4 Subtype 4a HCV genotype 5 Subtype 5a HCV genotype 6 Subtype 6a Subtype 11a |
Вирус гепатита С Вирус гепатита С генотип 1 Субтип 1а Субтип 1b Вирус гепатита С генотип 2 Субтип 2а Субтип 2b Вирус гепатита С генотип 3 Субтип 3а Субтип 10а Вирус гепатита С генотип 4 Субтип 4а Вирус гепатита С генотип 5 Субтип 5а Вирус гепатита С генотип 6 Субтип 6а Субтип 11а |
M62321 D90208 D00944 D01221 D17763 D63821 Y11604 Y13184 Y12083 D63822 |
HCV HCV-1 HCV-J HCV-J6 HCV-J8 HCV-NZL1 HCV-JK049 HCV-ED43 HCV-EVH1480 HCV-EUHK2 HCV-JK046 |
Типовой вид: GB virus A (GBV-A) [U22303]. GBV-A-like agents (GBV-A-like agents).
Характерные особенности.GBV-A и GBV-A-подобные агенты (GBV-A-like agents) представляют группу родственных вирусов, идентифицированных не менее, чем у 6 видов обезян Америки (Нового Света). Они не вызывают гепатитов у естественных хозяев или других восприимчивых видов животных. Место или орган, в котором происходит репродукция, не определены; хотя вирус передается через кровь, естественные пути передачи неизвестны. Эти вирусы имеют сходную с гепацивирусами организацию генома и отдаленное генетическое сходство, но отличаются отсутствием полного гена капсидного протеина и организацией 3’-NCR, которая имеет менее сложную структуру.
Типовой вид: GB virus В (GBV-В) [U22304].
Характерные особенности. GBV-В был выделен от обезьян тамаринов (tamarin monkey), но их пассажная история свидетельствует о происхождении от человека. Передается через кровь и вызывает гепатиты у некоторых видов обезьян Америки. По организации генома и сходству сиквенсов GBV-B наиболее близок гепацивирусам.
Типовой вид: GB virus С/Hepatitis G virus (GBV-HGV) [U22304] (HGV-1) [044402].
Характерные особенности.GBV-C/HGV генетически гетерогенный вирус, имеющий происхождение от человека. Передается через кровь и ее продукты, но могут быть и другие пути распространения. Хотя описанный, первоначально, как вирус гепатита (поэтому и альтернативное название Hepatitis G virus), данные о его патогенности и месте репродукции остаются противоречивыми. Хотя и отдаленно, по признакам организации генома и генетическому сходству GBV-C наиболее близок группе вирусов GBV-A.
ВИРУСНАЯ ДИАРЕЯ-БОЛЕЗНЬ СЛИЗИСТЫХ К Р С
Bovine Viral Diarrhea/Mucosal disease (англ.); Schleimhautkrankheit der Kinder (нем.); Maladia muqueuse des bovines (франц.); Diarrea virica bovina (исп.)
Вирусная диарея - болезнь слизитых оболочек (ВД-БС) - инфекционная контагиозная болезнь КРС, преимущественно молодых животных, характеризующаяся эрозивно-язвенным воспалением слизистых оболочек пищеварительного тракта, ринитом, увеличени ем лимфоузлов, высокой лихорадкой, общим угнетением, лейкопенией, постоянной или пе ремежающейся диареей, эрозивным и язвенным стоматитом с обильным слюноотделением, появлением слизисто-гнойных истечений из носовой полости. У коров возможны аборты. Впервые как самостоятельное заболевание ВД-БС была определена в штате Нью-Йорк (США) в 1946 г. при вспышке острой, часто со смертельным исходом болезни КРС, харак теризовавшейся диареей и эрозийными поражениями ЖКТ. В настоящее время ВД-БС ши роко распространена на территориях многих стран и вместе с 2-мя другими пестивирусами (ВКЧС и вирус ПВО) инфицирует 173 вида домашних и диких жвачных животных и 11 ви дов свиней. Имеются публикации об обнаружении AT и АГ пестивируса у человека, но возможность его инфицирования только предполагается.
На основании различий в клинических проявлениях вирусную диарею и болезнь слизи стых оболочек КРС первоначально рассматривали как разные болезни. Позднее на основа нии анализа патологических изменений, особенностей эпизоотологии и клинических прояв лений эти 2 болезни стали обозначать под названием вирусная диарея - болезнь слизистых оболочек КРС. Поскольку установлена идентичность возбудителей этих болезней, то их считают одной инфекцией с различными клиническими проявлениями, преимущест венно респираторного или диарейного синдрома, в связи с чем болезнь чаше стали называть вирусная диарея КРС. Болезнь зарегистрирована во всех странах мира. В некоторых штатах США обнаружи вается до 70-90% серопозитивных животных.
Более 50 лет назад Olafson P., Mac Collum A.D. и Fox F.H. и Quids Т. одновременно описали болезнь КРС, протекающую с острым энтеритом, ко торый вызывается вирусом.
Морфология и химический состав. Установлено наличие 8 вирусспецифических бел ков (VP1-VP8) с мол. м. от 120кД (VP1) до 230кД (VP8). Геном вируса представлен 1-нитёвой РНК, состоящей из 9800±200 нуклеотидов. Идентифицированы структурные и не структурные полипептиды и кодирующие их участки генома.
Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, трипсину и дезоксихолату Быстро инактивируется при рН 3. При изменении рН среды от 5,7 до 9,3 инфекционность его снижается, он наиболее устойчив при рН7,4; переносит температуру 4°С, годами сохра няет активность при температуре ниже -20°С. ВД КРС обладает высокой устойчивостью, хорошо сохраняется в нативном виде без добавления стабилизирующих р-ров при 4°, -20°, -40°С и в лиофилизированном состоянии, восстанавливая заданные характеристики. Однако имеются сообщения, что при -20°С некоторые штаммы вируса быстро гибнут, а последовательное замораживание и оттаивание ведет к инактивации. В культуральной жид кости при -15°С вирус активен до года; в крови, лимфоузлах, селезенке и другом патологи ческом материале сохраняется до 6 мес; при 37°С погибает через 5 дн. Прогревание (56°С) в течение 15 мин снижает его активность в 10 раз, однако для полной инактивации при этой температуре требуется 1 ч.
Антигенная структура. В структуре VP3 вируса выявлено 3 АГ-участка, один из кото рых оказался высоко консервативным нейтрализующим эпигоном. Только монАТ к консервативному эпитопу ВД узнают все изоляты этого вируса и не реагируют с изолятами вирусов КЧС и пограничной болезни. В 1960 г. Darbyshire показал АГ-родство между ВКЧС и ВД КРС. Для детального анализа АГ структуры вирусов используют монАТ. При тестировании других пестивирусов с помощью непрямой ИФ и ИФА было показано, что некоторые монАТ выявляли только цитопатогенный вариант ВД, тогда как другие широко реагировали со всеми изоля тами ВД или с ВКЧС и ПВО.
Антигенная вариабельность и родство. Различные штаммы ВД различаются по виру лентности, тропизму и цитопатогенному действию, но идентичны в АГ отношении.
По результатам РН и непрямой ИФ с монАТ референтные цитопатогенные и не цитопа тогенные штаммы ВД-БС разделены на три группы: I - NADL-подобные, II - New York I-подобные, III - Oregon С24У-подобные Полевые изоляты вируса бьши отнесены к I или II группе и не один из них не был отнесен к группе III. Однако по результатам РН большинст во штаммов ВД обладает общим АГ, который несет основной эпитоп нейтрализации. Все изоляты ВД относятся к одной серологически родственной группе. Обнаружена тесная АГ связь ВД с вирусами КЧС и ПВО вероятно за счет сходства АГ структуры гликозилированного полипептида 55кД.
Среди изолятов ВД КРС обнаружена вариабельность, в результате которой возможно заражение плодов вирусом диареи даже у вакцинированных коров-матерей. Все 13 изолятов ВД КРС в 4-х различных фермах Швеции, выделенных от КРС и овец, оказались сходными. Однако определенные эпитопы, присутствующие в изолятах, полученных от КРС, укорачи вались при последующей передаче вируса овцам. Все изоляты бьши отнесены к ВД КРС. Обнаруженная у них специфичность для стада, но не для вида, показала, что ВД КРС легко передается между овцами и КРС. С помощью монАТ установлено значительное генетическое разнообразие популяций вируса.
В 1973 г. Horzinek предложил термин пестивирусы, чтобы сгруппировать 2 АГ родственных оболочечных РНК-содержащих вируса - возбудитель КЧС и ВД КРС. В 1982 г. Международный Комитет по таксономии вирусов принял эту номенклатуру и определил ро довой статус для пестивирусов, включив их в семейство Togaviridae. Однако в настоящее время молекулярно-биологические данные подтверждают, что ВД КРС, в прошлом вклю ченный в семейство Togaviridae, обоснованно перенесен во вновь образованное семейство Flaviviridae, которое ранее было родом.
Локализация вируса, вирусоносительство. У естественно восприимчивых больных животных вирус или вирусный АГ ВД-БС обнаруживали практически во всех органах: в клетках эпителия, лимфоцитах и макрофагах. Из организма возбудитель выделяется с калом, мочой, слюной, носовыми и глазными секретами, а также с экссудатом местных оча гов поражения. Вирус способен длительно персистировать в организме больных животных, поэтому, часто в неблагополучном стаде большинство животных становятся вирусоносителями. Под влиянием стресса происходит угнетение механизмов иммунологической защиты, и вирусоноситель может становиться вирусовыделителем. Вирусоносительство может быть продолжительным. В органах переболевших вирус мо жет сохраняться до 200 дн, в респираторном тракте - до 56 , а в лимфоузлах кишечника - до 39 дн. Из крови переболевших телят его удавалось выделять в течение 4 мес.
Антигенная активность. Вирус обладает выраженной АГ-активностью. В крови пере болевших животных обнаруживают ПА, ВНА и КСА. Наиболее выраженный гуморальный ответ наблюдали у телят на VP2 и УРЗ ВД
Культивирование. Все известные штаммы вируса по цитопатогенной активности под разделяются на 2 группы (биотипа): цитопатогенные и не цитопатогенные. По характеру ЦПД штаммы 1-ого биотипа подразделяются на 2 подгруппы, штаммы, вызывающие ЦПД, и штаммы, вызы вающие депрессию роста клеточного монослоя, начинается через 16-48 ч (в зависимости от типа культуры клеток) и дости гает максимума на 3-4-е сут после заражения. Оно проявляется мелкозернистой инфильтрацией в клетках фибробластного типа, вокуолизацией в перинуклеарной зоне. Сроки развития ЦПД не соответствуют увеличению титра вируса. К 72-96 ч после инокуляции, когда титры вируса достигают максимума, в первичной культуре тестикул отмечают лишь начало ЦПД. У цитопатогенных штаммов ВД 2-ой подгруппы ЦПД заключается в дегенерации, округлении и отслоении клеток от стекла при отсутствии вакуолизации. Округлые клетки, уменьшенные в размере, собираются в группы произвольной конфигурации.
Установлена возможность выращивания вакцинного штамма ВД КРС в суспензионной культуре клеток ВНК-21 и определены оптимальные условия его культивирования. На КЭ культивируются далеко не все штаммы вируса Лишь отдельные из них (например шт Вирджиния) после нескольких пассажей через желточный мешок удалось адаптировать к этой системе. Размножение шт в желточном мешке происходи ло к 48 ч после инокуляции, на 3-6-е сут после заражения около 50% эмбрионов погибали. При гистоисследовании пораженной мембраны находили зернистые или вакуолизированные клетки
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Персистентно инфицированные животные яв ляются основным источником распространения ВД, которая чаще всего наблюдается в воз расте от 6 мес до 2-х лет. Иногда персистентно инфицированные коровы достигают репро дуктивного возраста; их потомство всегда бывает персистентно инфицированным. Ви рус имеется в кишечнике новорожденных телят, которые могут заразиться внутриутробно и постнатально. Иногда такое заражение клинически не проявляется. Основным источником возбудителя - больные и персистентно инфицированные, а также клинически здоровые жи вотные, выделяющие вирус во внешнюю среду с калом, мочой, слюной, носовыми и глаз ными экскретами, со спермой. У персистентно инфицированных животных вирус присутствует во многих тканях, особенно в эпителиальных и ретикуло-эндотелиальных клетках. Наличие персистентно инфицированных животных поддерживает постоянные вспышки вируса в стаде, где процент серопозитивных животных достигает 85-100%. В 1982 г. впервые обнаружили практически здоровых, но персистентно инфициро ванных быков, а некоторые авторы обратили внимание на репродуктивные качества спермы от таких быков-производителей, которые могут инфицировать здоровых ко ров. При наличии у быков-производителей баланопостита, последний проявляется периоди ческим выделением вируса со спермой. У некоторых быков обна руживали более серьезные нарушения сперматогенеза, вызванные разрушением спермато зоидов и эпителиальных клеток спермопроводящих путей, что иногда приводит к полному отсутствию жизнеспособных сперматозоидов в пробе спермы. Ме стные AT в матке могут защищать эмбрионы после осеменения или естественной случки Перинуклеарная зона эффективно предохраняет от эмбриональной инфекции до выхода яй цеклетки и в течение 8-9 дн после оплодотворения и в это время местный иммунитет уже активно отвечает на вирус, введенный со спермой. Имеется сообщение о том, что большое количество цитопатогенного вируса, введенного в матку, на 7-й день после осеменения вы зывает дегенерацию эмбрионов. Вирус выделяется со спермой как у персистентно, так и у клинически инфицированных быков, хорошо сохраняется в условиях замораживания и передается при осеменении.
Передача возбудителя от коров к потомству происходит путем проникновения вируса через плацентарный барьер, в результате возникает внутриутробная инфекция плода. Ново рожденным телятам вирус может передаваться через инфицированное молоко и фекалии. Среди телят возбудитель передается фекально-оральным и воздушно-капельным путями. Передача через эмбрион - один из наиболее важных путей распространения В Д. Если эмбрион инфицируется трансплацентарно, от персистентно инфицированного реципиента, возникает возможность получения персистентно инфицированных телят. Передача также возможна через другие вирусвакцины, контаминированные ВД. Таким образом вирус может сохраняться в пораженных стадах. В Австралии примерно половина случаев ВД-БС у стельных коров была подтверждена выделением вируса, от них получено потомство клини чески нормальных, но персистентно инфицированных телят .
Дикие животные также инфицируются вирусом диареи и представляют резервуар воз будителя. Скорость, с которой инфекция распространяется, может зависеть от штамма ВД и условий содержания животных. У коров с субклинической формой ВД-БС обычно замечают небольшое повышение тем пературы тела и лейкопению с последующим образованием ВНА. Иногда такая инфек ция может обостриться. Когда инфекция переходит в клиническую форму, то охватывает нетелей в возрасте от 6 мес до 2-х лет. В чувствительных неиммунных стадах заболе ваемость может быть высокой, но смертность низкой или совсем отсутствовать. Инкубаци онный период 5-7 да с последующей временной лихорадкой и лейкопенией. Виремия происходит на 4-7-й день после инфицирования, а в некоторых случаях вирус может циркулировать в организме до 15 дн. Клинические признаки включают депрессию, от каз от корма, носовые и глазные истечения, иногда поражение ротовой полости, характери зующееся эрозиями и неглубокими язвами. Как вторичный процесс может развиться острое респираторное заболевание с гипертермией, что неправильно диагностируют как пневмо нию. Перемежающаяся диарея может быть у лактирующих коров и сопровож даться снижением удоя. ВД принимает участие в этиологическом комплексе агентов, ответ ственных за возникновение респираторных заболеваний у КРС, обычно старше 1,5-2-мес возраста.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях восприим чив КРС, буйволы, олени, косули. Заболевает КРС в возрасте от 2 мес до 2-х лет независимо от пола. Взрослый КРС относительно устойчив к инфекциям, но иногда болеют коровы, особенно после первого отела. О восприимчивости других животных сведений нет, хотя Френч (1962) в Австралии обнаружил AT к ВД в крови овец (16%) и свиней (20%). У по следних описана бессимптомная инфекция, вызванная ВД. Изолят вируса от таких свиней вызвал у телят симптомы болезни, тогда как поросята, от которых был изолирован вирус, оставались здоровыми. Вирус ВД-БС выделен от человека и КРС при наличии у них специ фических AT. При заражении суягных овцематок культуральным вируса у потомства на блюдали нарушение функции ЦНС, выпадение волосяного покрова, задержку роста, пони жение жизнеспособности и тремор головы.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Симптомы болезни, тяжесть переболевания, широта распространения и процент летальности зависят от виру лентности вируса, чувствительности животных и наличия неблагоприятных факторов. В ес тественных условиях болеют телята 5-6-мес возраста. Среди взрослых коров до 90% живот ных могут иметь специфические AT, однако клинически болезнь не проявляется. Особенно типично она протекает в откормочных хозяйствах среди молодняка КРС. В Австралии ВД-БС поражает овец. Различают острое, подострое, хроническое и латентное течения болезни. При остром течении симптомы появляются внезапно и выражаются лихорадкой (39,5-42,4°С) в течение 12-60 ч, умеренной или сильной депрессией, тахикардией, учащением ды хания и потерей аппетита, появлением множества эрозий и язв на слизистых оболочках ротовой полости и почти всего пищеварительного тракта. С подъемом температуры регистрируют лейкопению. Особенностью острой формы ВД-БС является тромбоцитопения. У коров может развиваться и генитальная форма в результате контаминирования спермой Она может клинически и не проявляется, однако имеются данные о том, что ВД-БС может быть связана с воспалением яичников у яловых телок.
У больных животных наблюдается истощение, обезвоживание и ацидоз У лактирующих коров снижается продуктивность При осмотре ротовой полости у больных животных можно обнаружить эрозии на губах, краях десен, языка, комиссуры рта и задней части твер дого нёба. Поражения могут сливаться, формируя большие зоны некроза и отторгаться в ро товую полость. Эрозии могут развиваться на носовом зеркальце, ноздрях и в носовой полос ти, а также вызывать сходные поражения вульвы и сосков вымени. Гиперсаливация являет ся результатом поражения ротовой полости, которые встречаются в среднем у 75-80% боль ных животных Часто наблюдается слизисто-гнойное истечение из носа, иногда слезотече ние и отек роговицы. Отмечают также хромоту, затрудняющую движение, связанную с эро зиями и некрозом кожи межкопытной щели, ламинит и воспаление венчика Профузная диарея часто развивается на второй, третий день после появления клинических признаков, но в сверхострых ситуациях смерть может наступить раньше развития этого симптома В фекалиях часто обнаруживают фибринозные отторжения Движения рубца уменьшаются и слабеют, развивается умеренная тимпания.
На ранних стадиях заболевания отмечают сильную лейкопению Развивается лимфопения без сдвига влево и тромбопения, секундарные инфекции обычны. Смерть может про изойти в острой фазе болезни, но чаще через 3-10 дн после проявления клинических при знаков На 7-9-й день появляется диарея и продолжается 1-4 нед Испражнения водянистые, темные, содержат пузырьки зловонных газов, часто сгустки слизи и крови В затяжных слу чаях в области шеи, плеч, колен, промежности и седалищных бугров кожа сморщивается, становится жесткой и покрывается перхотью На препуции, основании мошонки и вымени появляются эрозии и засохшие корочки экссудата. Иногда выпадают волосы, худеют.
У пораженных коров отмечают выраженное снижение молочной продуктивности, абор ты, гибель 6-8% телят от гнойной или фибринозной пневмонии, а у более старших (от 3 нед до 5 мес) - гибель от диареи с поражением кишечника. Телята, персистентно инфицирован ные вирусом диареи, после инфекции in uteri предрасположены к инфекции другими микро организмами, имеющимися в стаде, что приводит к развитию у них пневмонии. Чаще всего абортируют коровы, зараженные в ранний период стельности С увеличением срока стельности острота инфекции у плода снижается Болезнь продолжается от 4 дн до 2 нед и почти всегда заканчивается летально У новорожденных телят наблюдается мозжеч ковая гипоплазия, проявляющаяся затрудненным вставанием и выраженной атаксией. У те лят с гипомиелогенезом наблюдается тремор мышц сразу после рождения. Врожденные де фекты глаз могут привести к слепоте различной степени. При офтальмологическом исследо вании легко выявляется катаракта Недоразвитие скелетномышечного аппарата может при вести к задержке роста плода. Это проявляется рождением слабых, мелких телят, кото рые часто гибнут уже в первые дни жизни Телята, рожденные персистентно инфицирован ными коровами, имеют низкую жизнеспособность, подвержены ранним болезням и обычно погибают Болезнь может проявляться респираторным и энтеритным синдромами. На поздних стадиях стельности (после начального формирования иммунокомпетентности) инфекция редко вызывает врожденные пороки. Телята могут родиться нормальными и иметь ВНА к вирусу, однако они всегда будут внутриутробно инфицированными носителя ми вируса диареи (ВД). Новорожденные иммунокомпетентные телята могут заражаться от матерей при рождении. В таком случае часто развивается тяжелая форма энтерита, которая сопровождается высоким процентом летальности. От больных коров-матерей часто рождаются телята с признаками ВД-БС. У них отмечают некрозы в легких, коже, мозге или поражения в ротовой полости, лихорадку, лейкопению, поражения в носовой полости. Па деж наступает в период от 18 до 96 ч.
Подострое течение характеризуется внезапностью, подъемом температуры тела на 1-2°С, учащенным сердцебиением и дыханием, снижением или полной потерей аппетита. У некоторых больных поражаются слизистые оболочки ротовой полости, появляются истече ния из носа, кашель и кратковременная (12-24 ч) диарея. Болезнь протекает и атипично, сопровождается гиперемией, цианизом слизистых и атонией преджелудков.
Абортивное течение инфекции, проявляющееся невысокой кратковременной лихорад кой, незначительным ринитом, иногда диареей, чаще наблюдают у молодняка старшего возраста и коров, в тех стадах, где регистрируют хроническое течение болезни; болезнь длится 3-4 да, больные животные выздоравливают. Хроническое течение ВД-БС чаще на ступает после острой вспышки болезни. Характерны длительная диарея и кахексия.
Часто инфекция протекает субклинически (стертая форма), иногда сопровождается абортами, по носами и появлением слабого потомства. При латентном течении болезнь протекает бес симптомно и переболевание определяют по наличию специфических AT. Последние часто находят у клинически здорового КРС неблагополучных хозяйств.
Превалирующее течение болезни - острое, одно из наиболее редких течений - персистентная инфекция (1 случай на 100 или 1000 животных). Она развивается у телят, рожден ных от персистентно инфицированных коров при заражении эмбриона в течение первых 4 мес стельности нецитопатогенным вирусом. Хроническое течение ВД-БС - следствие перси-стентной инфекции. Идентификация персистентно инфицированных животных основана на выделении вируса и обнаружении ВНА. Однако не у всех персистентно инфицированных животных образуются ВНА к не цитопатогенному вирусу. Bolin S.R привел схемы раз вития различных клинических течений болезни, вызываемых цитопатогенными и нецитопа-тогенными вирусами, и прямых методов диагностики.
Характерные патологоанатомические изменения обнаруживают на слизистых оболочках ЖКТ и верхних дыхательных путей. Эрозии и язвы находят на слизистой оболочке губ, щек, десен, на боковых поверхностях языка, на нёбе, у основания гортани. Аналогичные пораже ния обнаруживают в рубце и сычуге. В тонком кишечнике отмечаются изменения, харак терные для катарального, фибринозно-некротического или геморрагического энтерита. У отдельных больных животных на 21-й день после заражения отмечают поражения глаз Врожденная курчавость волосяного покрова телят является симптомом персистентной ин фекции у коров. Полагают, вирус может индуцировать у телят диабет.
Клиническое проявление ВД-БС в определенной степени зависит и от биотипа зара жающего штамма. Так, цитопатогенный шт. TVM-2 вызывает у телят явные клинические признаки, характерные для острого течения болезни. Не цитопатогенный шт. Нью Йорк-1 вообще не индуцирует каких-либо клинических признаков болезни. Однако инфицирование любым из 2-х биотипов телят, иммуносупрессированных дексаметазоном приводит к ле тальному исходу. Смешанная инфекция, вызываемая обоими биотопами, не вызывает ка кой-либо серьезной болезни, что, возможно, исключает потенциальную иммуносупресси-рующую активность самого вируса. В США сообщалось о геморрагическом синдроме у КРС с острой инфекцией, вызванной нецитопатогенными штаммами ВД КРС. Отмечалась тяжелая тромбоцитопения. Аналогич ный синдром идентифицирован в нескольких стадах Южной Бельгии.
Патогенез. Вирус легко преодолевает плацентарный барьер и вызывает у плода разви тие патологических изменений, приводящих к морфологическим и функциональным нару шениям (церебральная гипоплазия, микроофтальмия, катаракта). Если заражение плода произошло в течение первой половины беременности, развивается иммунологическая толе рантность и теленок родится персистентно инфицированным нецитопатогенным штаммом вируса. Если такие животные суперинфицируются цитопатогенным штаммом вируса, раз вивается тяжелая болезнь с летальным исходом. Если суперинфекция вызвана гетерогенным цитопатогенным штаммом вируса, то развивается хроническая болезнь. У большинства телят, родившихся от больных матерей, еще до первой дачи молозива имеются ВНА, что свидетельствует о внутриутробном инфицировании. В патогенезе болезни характерным моментом является блокирование иммунореактивности организма вследствие поражения иммунокомпетентных клеток, доказательством чему служит значительное снижение титров противовирусных AT и, в частности противогрип позных, после заражения телят ВД. При ВД-БС КРС подавляются нормальные защитные механизмы, предположительно гуморальные факторы или фагоцитарная функция, что при водит к неингибируемому циркулированию бактерий в крови. Последствием клинически легкой диареи КРС является иммуносупрессия, повышается восприимчивость животных к другим инфекциям. Персистентная форма ВД-БС наблюдается у телят, родившихся от ко ров, зараженных не цитопатогенным вирусом. Клинически такие телята представляются здоровыми, хотя у них наблюдается постоянная виремия. Полагают, что ВД путем подавле ния иммунных реакций способствует диссеминации вируса ИРГ в организме телят. Показа на возможность передачи инфекции через инфицированную вирусом сперму и способность трансплацентарной передачи. Вирионы и обусловленные вирусом ультраструктурные изме нения выявляются, главным образом, в Т-лимфоцитах, моноцитах и лишь в единичных слу чаях в В-клетках. В патогенезе ВД-БС еще многое не ясно. Например, в сыворотке крови реконвалесцентов до 9-18 мес выявляются специфические AT, далее животное становится серонегативным, но не выздоравливает. У таких хронически больных животных удается выделить вирус из крови и лимфоузлов Не ясна причина, обусловливающая серонегативное состояние больного хроника. Трансплантация лимфоцитов от такого животного здоровому сопровождается заболеванием и гибелью от обезвоживания в течение 6 мес.
У плодов после заражения отдельных коров (150-дн стельности) на 17-й день находили воспаление мягких оболочек мозга, некроз клеток наружного зародышевого листка, очаги геморрагии и умеренный отек. На 42-й день поражались весь мозжечок, кожа (ненормальный волосяной покров) и бронхиолы. Нередки случаи мумификации плода. Ус тановлена следующая зависимость действия вируса на зараженные эмбрионы: при зараже нии эмбрионов до 125-дн возраста наблюдали латентную персистентную инфекцию (не цитопатогенным штаммом) или с проявлением симптомов болезни (цитопатогенньм штам мом). Инфицирование приводило к аборту стельных коров или рождению нежизнеспособно го потомства (со скрытой инфекцией). Гибель телят при остром течении болезни наступала в течение 5-7 сут, при хроническом - от 10 сут до нескольких месяцев; у телят развивались эрозии и язвы на слизистой оболочке носа.
Помимо мононуклеарных клеток, АГ ВД-БС обнаруживают в лимфоидной ткани плодов КРС. Инфекция плодов ведет к патологическим изменениям лимфоидной ткани, гипоплазии тимуса. Гистопатологические изменения обнаружены в мозжечке, коже и слизистых обо лочках. С 5-мес срока стельности титр специфических AT у плода нарастает. При зараже нии плода в 7-мес возрасте вирус, как правило, в организме не находят, так как титр AT достаточно высок. С возрастом плода нарастает способность его отвечать плазмоцитарной реакцией в ответ на заражение. Интересно, что IgM у плодов от зараженных стельных коров появляется примерно через 2 нед после инокуляции вируса коровам и через 7 да он сменял ся IgG. Предполагают, что раннее появление Ig в сыворотках эмбрионов - результат АГ ак тивации поликлональных В-клеток эмбриона. С эпизоотической точки зрения вертикальная передача ВД играет важную роль в поддержании и сохранении инфекции. При наличии на ферме вирусоносителей другие телята активно продуцируют AT после исчезновения мате ринских AT, не проявляя симптомов болезни. Предложена и экспериментально доказана гипотеза, согласно которой для появления клинически выраженной болезни требуется персистентная инфекция животных нецитопато генным и последующая инфекция цитопатогенным В Д. Животные становятся персистентно инфицированными нецитопатогенным вирусом после внугриматочной инфекции плода до развития иммунокомпетентности. Когда в постнатальный период такие телята суперинфицируются цитопатогенным БД, это приводит к появлению клинически выраженной болезни, обычно заканчивающейся летально. Не цитопатогенные штаммы вызыва ют латентную персистентную инфекцию КРС без образования AT, что предрасполагает к развитию тяжелого клинически выраженного заболевания после заражения цитопатогенным штаммом ВД. Цитопатогенные штаммы вируса попадают в организм извне или появ ляются в результате мутации эндогенного нецитопатического штамма.
Болезнь слизистых оболочек с тяжелой диареей, выделениями из носа, язвами на слизи стой оболочке рта иногда заканчивается летально. Смерть обычно наступает через 1-3 нед. Основная причина снижения репродуктивной способности коров при ВД-БС - это нарушение оплодотворения. ВД оказывает иммуносупрессивное действие, связанное с по давлением защитной функции и разрушением инфицированных лимфоцитов и лейкоцитов (клеток-мишеней), что в полевых условиях резко снижает устойчивость телят и повышает тяжесть неонатальных диарей и респираторных заболеваний.
Распространение повреждений при БС связано со способностью прямого некротического воздействия вируса на эпителиальные клетки ЖКТ. Вирус также воздействует на эндотели-альные клетки сосудов, особенно в кишечнике и лимфоидной ткани. Наиболее часто у вирусоносителей возникает хроническое течение болезни. Патогенез хронической болезни слизистых не определен, но он во многом сходен с таковым при остром течении болезни Как и при остром течении ВД-БС может быть вызвана как нецитопатогенным, так и цитопа тогенным штаммами вируса. Предполагают, что различия в антигенности суперинфи-цирующего цитопатогенного вируса дают различную клиническую картину у персистентно инфицированных животных. В одном случае это может проявляться острым те чением, когда суперинфицированный вирус обладает близкой гомологией с персистентно инфицирующим нецитопатогенным штаммом, в другом - латентным течением без клиниче ских симптомов. Между 2-мя этими крайностями может встречаться течение болезни, опи сываемое как хроническое. Хроническое течение характеризуется отсутствием аппетита, по терей массы тела, прогрессирующим истощением и задержкой развития животного. Диарея может быть постоянной и перемежающейся Может наблюдаться хроническая пневмония, часто появляются носовые и глазные истечения. Могут развиваться аллопеции (обычно в области шеи) и гиперкератозы. Хронические эрозии часто обнаруживают в ротовой полости, на коже промежности, препуции, вульве, вокруг рудиментарных пальцев, межпальцевой щели и пяточной части копытца. В этих случаях обычны секундарные бактериальные ин фекции. Животные с хронической ВД-БС могут прожить до 18 мес и, в конце концов, поги бают от тяжелого истощения или секундарной инфекции.
Влияние вируса на плод. Плоды КРС очень чувствительны к заражению ВД из-за сво ей агамма-глобулинемии, иммунологической незрелости и наличия во многих органах не дифференцированных клеток. Цитопатогенные штаммы вируса ПВО повреждают плаценту и плод. При заражении коров шт. NADL и овец шт. ВД-3 наблюдается ранняя смерть эм брионов, аборты, мертворождения, недоразвитость плодов, малая масса родившихся телят, наличие у них вирусной персистенции и иммунологической толерантности. На 80-90-й день стельности изменения выявлялись в легких плода и коже, при инфицировании на 140-150-й день возникала дисплазия сетчатки и гипоплазия мозжечка, вызванная непосредственным повреждением вирусом этих органов. При заражении суягных овец шт. ВД-3 ягнята рожда лись слабыми, с курчавой шерстью У них наблюдался тремор, персистентная виремия, иммунологическая толерантность и гипомиелинизация.
Конгенитальные аномалии. В 1986-97 гг в Японии были зарегистрированы 25% конгенитальных аномалий на ферме молочного скота голштино-фризской породы Часть коров абортировали, у 43% родились телята с нарушением ЦНС. Инфицирование происходило между 90-150 дн беременности. Инфицирование после 150 дн беременности не отражалось на иммунотолерантности плода к ВД-БС. Такие телята оставались на всю жизнь пер-систентно инфицированными. Иммунотолерантность и персистентная инфекция встречают ся естественно и могут быть воспроизведены экспериментально. Точная стадия развития плода, когда инфекция может вызвать иммунотолерантность, неизвестна, однако приблизи тельно она возникает в сроки 100-125-дн стельности. Кроме того, показано, что иммуното лерантность и персистенция обусловлены только не цитопатогенными штаммами ВД. Инфицирование коров в период 50-100-дн стельности может привести к смерти плода с последующей его мумификацией, абортом или мертворождением. Освобождение от плода может произойти в промежутке от нескольких недель до месяца после заражения, однако в стационарно неблагополучных стадах процент таких случаев низок В стадах, где преобладают коровы, не имеющие AT к ВД КРС, этот процент может достигать 30. Инфицирование плода примерно 100-150-дн стельности может привести к появлению врож денных дефектов у новорожденных телят. В этот период вирус поражает ство ловые клетки развивающихся систем.
Связь биотипов вируса с клиническим проявлением заболевания. Воздействие и взаимодействие 2-х биотипов вируса, описанных ранее, в последние 6 лет стало предметом пристального изучения и вызывает не только научный, но и практический интерес к рас шифровке патогенеза ВД-БС КРС. При остром течении инфекции первично вирус проникает через слизистую носа или рта, затем распространяется по лимфоидной системе организма Некоторые полевые штаммы хорошо адаптируются к росту на слизистой оболочке носовой полости. Эта способность быстрой репродукции в слизистых оболочках рта и носа мо жет объяснить возникновение слюнотечения, неглубоких эрозий, язв, а также катарального воспаления тонкого кишечника, что характеризует острую инфекцию Дальнейшие ослож нения острой инфекции встречаются, когда к ВД-БС КРС присоединяются другие патогены Многократно отмечали смешанные инфекции с возбудителем ИРГ, респираторно-синцитальной инфекцией. ВД-БС в ассоциации с ротавирусной и коронавирусной, или сальмонеллезной инфекциями проявляется в виде тяжелой формы болезни с энтеритным синдромом. Некоторые эпителиальные ткани поддерживают репликацию ВД Его АГ был обнару жен в кератоцитах языка, кожи и губ и это может быть связано с образованием эрозии в ротовой полости, на носовом зеркальце, что характерно для хронического течения болезни Необходимость антигенной гомологии между персистирующим и суперинфицирующим био типом вируса стала решающей для развития клиничски выраженной формы ВД-БС и инду-цирования персистенции и иммунотолерантности. Выявлено, что VII биотип имеет тро пизм к мезентериальным лимфоузлам и что при последующем развитии поражений этот биотип вируса быстро переходит в пейеровы бляшки, вызывая их поражение и диарею. Патогенез хронического течения болезни объяснить трудно. В подавляющем боль шинстве случаев персистентно инфицированные животные не проявляют хроническую фор му болезни и этот синдром экспериментально не воспроизводится. В патогенезе БС первоначально не цитопатогенный вирус заражает плод и приводит к развитию персистентной виремии у телят. БС у таких телят может возникнуть при суперин фекции "гомологичным" цитопатогенным вирусом, образовавшимся в результате мутации По мнению Becker J.C., БС - это спорадическая форма ВД, возникающая обычно у жи вотных в возрасте от 6 мес до 2-х лет. Заболевает менее 5% животных, но летальность дос тигает 100%. Хроническая болезнь может развиваться у телят при суперинфекции гете рогенным цитопатогенным биотипом вируса с персистентной виремией. У персистент-но инфицированных быков ВД постоянно контаминирует сперму, которая служит источни ком заражения чувствительных к вирусу телок, но инфекция не всегда передается потомству вертикально.
В патогенезе ВД-БС первыми поражаются нейтрофилы, затем инфицируются макрофа ги, отмечается 2-кратное уменьшение числа Т-супрессоров с сохранением числа Т-хелперов без изменений. Увеличивается содержание общего белка и IgG, а снижение числа В-лимфоцитов и моноцитов бывает переходящим и нормализуется к 30-му дню. Поскольку вирус реплицируется во всех главных субпопуляциях лимфоцитов и в других клетках, ре зультатом могут быть лейкопения, что является продолжением инфекции; повреждаются В-клетки и Т-клеточные субпопуляции. В- и Т- клетки повреждаются вследствие воздействия ВД и их способность противостоять другим инфекциям утрачивается.
Согласно концепции патогенеза ВД-БС клинически выраженное заболевание воз никает только у животных, которые инфицируются вирусом на ранней стадии беременности и рождаются с персистирующей вирусной инфекцией и специфической иммунотолерантностью. Врожденные дефекты могут развиваться, когда инфекция плода происходит на про межуточных сроках стельности. Плод может быть инфицирован внутриматочно на поздних строках стельности, при этом инфекция не персистирует и у плода вырабатываются AT. По-стнатальная инфекция проявляется в виде субклинических заболеваний с нормальным им мунным ответом.
Диагноз ставят на основании клинических, эпизоотологических данных и лабораторных методов исследования. Однако эпизоотологические данные, симптомы болезни и характер патологических изменений дают основание лишь заподозрить болезнь. Поскольку ВД-БС напоминает многие другие болезни (чуму, инфекционный язвенный стоматит, грибковый стоматит, ПГ-3, катаральную лихорадку КРС, паратуберкулез и алиментарные отравления), лабораторные исследования в диагностике имеют решающее значение. При ди агнозе на ВД-БС следует учитывать следующее: заболевают отдельные животные в возрасте 3-36 мес, типичные клинические изменения проявляются поражением слизистых оболочек или кровянистым поносом с эрозией или без эрозии слизистых мембран, все заболевшие животные погибают в течение нескольких дней, у больных животных нет специфических AT в крови, хотя остальное поголовье имеет их в высоких титрах.
Лабораторная диагностика ВД-БС включает: 1) обнаружение в патологическом мате риале (мазках, отпечатках, срезах), полученном от больных животных АГ в РИФ; 2) выде ление возбудителя из патологического материала в культуре клеток ТБ, ПЭК или ЛЭК и его идентификация в РН или РИФ; 3) выявление AT в сыворотке крови больных и переболев ших животных (ретроспективная диагностика) в РСК и РН.
Лабораторную диагностику ВД-БС проводят с использованием набора диагностикумов (ТУ 4621-529-79), выпускаемых биологической промышленностью. Ее ведут параллельно с исследованием материала на ПГ-3, аденовирусную (адено 1 и 2), PC и ИРГ. Предварительный диагноз на ВД-БС КРС ставят на основании положительных резуль татов обнаружения АГ в патологическом материале в ИФ и ПЦР с учетом эпизоотологических и клинических данных, а также патологоанатомических изменений. Окончательный диагноз ставят на основании: совпадения результатов ИФ с ПЦР, выделением и идентифи кацией вируса; совпадения результатов ИФ с обнаружением AT в 30% и более вторых проб парных сывороток в титрах не ниже 1:4 в РСК и 1:16 в РН; обнаружения 4-кратного и более прироста AT в парных пробах сывороток. Предварительный диагноз ставят в ветеринарных лабораториях в течение 2-3 дн, окончательный - до 30 дн.
Выделение вируса.
Взятие и подготовка материала. В лабораторию направляют патологический матери ал от больных животных, взятый в первые 2-3 дня при выраженных симптомах болезни, или от животных, убитых с диагностической целью в острой стадии заболевания. От боль ных животных берут 15-20 проб следующего материала: смывы со слизистой оболочки но совой полости, получаемые путем введения стерильного ватно-марлевого или поролонового тампона в носовые ходы; пробы крови в первые 3 да болезни и через 3 нед от тех же живот ных с соблюдением правил асептики в стерильные пробирки по 8-10 мл; соскобы с изъязв ленных или эрозированных участков слизистых оболочек ротовой полости и носового зер кала, взятые жесткими ватно-марлевыми тампонами или скальпелем. Тампоны с материа лом помещают в стерильные пенициллиновые флаконы или пробирки с 2-3 мл стерильного физиологического р-ра или р-ра Хенкса, содержащего 500-1000 ЕД/мл антибиотиков (канамицина, мономицина, неомицина, пенициллина, стрептомицина и др.). Из крови после свертывания стерильно сливают 3-4 мл сыворотки и доставляют в лабораторию.
От животных, убитых с диагностической целью, берут с соблюдением правил асептики кусочки легких с бронхом (на границе пораженного и здорового участков), селезенки, сре-достенные, бронхиальные и брыжеечные лимфоузлы, миндалины, пораженные участки сли зистых оболочек носовой и ротовой полостей, трахеи, ЖКТ, а также пробу крови. Кусочки материала массой до 20 г помещают в стерильную, плотно закрывающуюся посуду. Легче вирус выделить в начале болезни и в период обострения из крови, легких, различных участ ков тонкого кишечника (в особенности из клеток слизистой оболочки 12-перстной кишки), лимфоузлов и селезенки. При хроническом течении болезни его удается регулярно выделять из разных отделов кишечника, но не из крови. Исследование носовых смывов и фекалий в этих случаях также дает отрицательные результаты, хотя в отдельных случаях вирус удава лось выделять из фекалий даже через 5 мес после болезни. В начале болезни в период подъ ема температуры от больных животных берут пробы крови в р-р цитрата натрия или гепа-рина и помещают их в термос со льдом. Из крови экспериментально зараженных животных выделяли вирус с 1-14-го да после заражения. Выделяли его также из тканей абортирован ных или мертворожденных плодов, плаценты и околоплодной жидкости.
Заражение культур клеток. Вирус выделяют в первичных субкультурах клеток эм бриона КРС (ПЭК, ЛЭК, СЭК) или ТБ. Изолят считается выделенным в случае, если он вы зывает стабильное однотипное ЦПД не менее чем в 2-х последовательных пассажах. В этом случае возможна его идентификация в РН. В первичных культурах клеток почки эмбриона коров первые ЦПИ обнаруживают через 2-5 дн после инокуляции. Они выражаются в появ лении мелкозернистой инфильтрации в клетках фибробластоидного типа. По мере развития инфекции клетки постепенно отторгаются от поверхности стекла, но некоторые долго со храняются, образуя островки клеток эпителиоидного типа В конце концов на стекле остает ся только сеть зернистого материала.
При использовании вторичных культур клеток цитопатические изменения появляются почти одновременно во всех клетках монослоя, причем они становятся удлиненными, угло ватыми и кажутся переплетенными. В окрашенных препаратах клеточного монослоя при наличии цитопатических изменений обнаруживают вакуолизацию протоплазмы и измене ние ядер, выражающиеся в сокращении мембраны, пикнозе и кариорексисе.
ИФ. Аналогична таковой при диагностике аденовирусной инфекции. Этим методом АГ ВД обнаруживают в клетках слизистой оболочки прямой кишки, селезенки, легких и лимфоузлов экспериментально зараженных животных. Изучено распределение АГ ВД-БС в тканях животных остром и хроническом течениях болезни. В лимфоидных тканях АГ рас полагается в клетках системы фагоцитирующих мононуклеаров. Между первоначальным обнаружением АГ в слизистой кишечника, кератинизированном эпителии верхних отделов пищеварительной системы и кожи и прогрессированием патологических признаков имеется скрытый период. ИФ биопсийного материала слизистых оболочек ротовой и носовой полостей пригодна для ранней прижизненной диагностики вируса диареи. ИФ для обнаружения АГ вируса в клетках из носоглоточных смывов - надежный и быстрый способ выявления животных, пер-систентно инфицированных вирусом. При исследовании препаратов обращают внимание на свечение АГ в цитоплазме не разрушенных клеток. Яркая зеленая флюоресценция в виде гранул или диффузного свечения цитоплазмы не менее чем в 10% клеток позволяет оценить препарат как положительный. Предварительный диагноз ставят при наличии не менее 30% положительных препаратов от общего количества исследованных проб. Удобным оказался непрямой метод ИФ с использованием конъюгированных Fab-фрагментов AT из гиперим мунной свиной сыворотки против ВД-БС КРС Специфическая флюоресценция вирусного АГ в культуре бычьих макрофагов обнаруживалась в цитоплазме клеток Для идентифика ции не цитопатогенных изолятов метод ИФ практически единственный. При наличии ЦПД в культурах клеток, зараженных изолятом, и положительной флюоресценции проводят окон чательное типирование вируса в РН.
РН. Это основной метод идентификации вируса. Новые изоляты возбудителя ВБ-БС, не обладающие цитопатогенной активностью, могут быть идентифицированы при помощи ги периммунной сыворотки к вирусу диареи по подавлению феномена экзальтации вируса НБ, который используют для индикации подобных штаммов.
РДП. Обеспечивает быструю и точную постановку диагноза, однако пока чувствитель ность метода невелика, и его следует использовать в комплексе с другими методами лабора торной диагностики и идентификации возбуди теля Приготовление испытуемого АГ и ме тодика постановки РДП описаны ранее . Антисыворотку для РДП готовят на КРС Для иммунизации животных используют цитрированную кровь, взятую асептически от экс периментально зараженных животных в период подъема температуры. Кровь вводят внут ривенно (некоторым животным делают несколько таких инъекций). Кровь берут через 60-90 дн после инокуляции.
Выявление вируса ПЦР. Данный метод рекомендован для быстрой диагностики ВД-БС. После цикла обратной транскрипции образцы ткани инфицированной культуры клеток подвергают амплификации с использованием праймеров, обеспечивающих репликацию оп ределенного сегмента гена белка gp48 ВД. Для обнаружения амплифицированных последо вательностей используют электрофорез в ПААГ и гибридизацию с биотинилированным ДНК-зондом на последовательности г енома вируса лейкоза. При идентификации молочных стад, инфицированных вирусом ВД-БС КРС, также предложен метод ПЦР для работы с пробами молока.
ИФА. ИФА позволяет легко идентифицировать культуры клеток, инфицированные ВД. Идентификация с помощью монАТ в практическом диагностическом применении не разра ботана. Однако получено 5 монАТ против вируса ВД-БС КРС с ВН-активностью, которые позволили разделить изоляты ВД на 4 группы По лучена и изучена панель монАТ против Singer-изолята, с помощью которой были обнару жены полипептиды мол м 56-58 кД и доказано, что гликопротеин, локализуется на поверх ности вирионов и является носителем нейтрализующих эпитопов. Анализ с панелью монАТ показал АГ гетерогенность среди изолятов этого вируса.
Серодиагностика заболевания затруднительна, так как при хроническом течении инфек ции AT обнаруживаются непостоянно и бывают в невысоких титрах. Диагноз на про шедшую инфекцию, а также латентное вирусоносительство обычно ставят при помощи РН в культуре клеток, определяя титры AT в сыворотках реконвалесцентов. Для этого лучше ис следовать парные сыворотки, взятые с интервалом 3-4 нед. При диагностике скрытого тече ния инфекции чаще используют сыворотки крови убойного скота, поступающего с клиникой не диагностированной инфекции кишечного и респираторного трактов. Обычно в таких слу чаях процент положительных сывороток (титры от 1:16 до 1 : 128) варьирует в широких пре делах и может достигать 30-50 (иногда до 80) У клинически здоровых животных процент положительных проб может колебаться от 6-8 до 20-30. Динамика появления и угасания титров ВНА недостаточно изучена. Перед исследованием сыворотки прогревают в водяной бане при температуре 57-58°С 30 мин.
В США разработан быстрый количественный метод титрования ВД КРС. Он состоит в микротитровании с использованием цитопатогенных и не цитопатогенных изолятов вируса и перевиваемой линии клеток бычьей почки - МДВК. Для этого серийные разведения вируссодержащей жидкости и суспензию клеток в концентрации 1-Ю5 в среде с 2% сыворотки крови лошади заливают в лунки пластин Terasaki и проводят микротитрование в НИФ, ко торую учитывают на дне лунок пластин, используя водно-иммерсионный объектив микро скопа. Вирус также титруют и по бляшкообразованию. Специфическую флюоресценцию в клетках наблюдали уже через 12 ч после заражения, окончательные результаты считали че рез 72 ч инкубирования. Результаты титрования вируса по бляшкам и в микротитровании совпадали. Микротитрование вируса по ИФ имеет преимущества над стандартным методом титрования по бляшкам, меньше времени и материалов и особенно незаменимо при титровании не цитопатогенных изолятов ВД.
РН. Её ставят методом разведения испытуемых сывороток с постоянной дозой стан дартного вируса в культуре клеток ПЭК или ТБ. Положительными считают сыворотки с титром AT 1:16 и выше, в парных сыворотках - повышение титра AT во второй пробе в 4 раза и более. При экспериментальном заражении у всех телят через 15-61 день обнаружива ли ВНА в титре 1:64 - 1.1024 Реакция, суть которой заключается в подавлении образования бляшек AT исследуемой сыворотки, оказалась пригодной для серологических исследований при ВД-БС. После получения гомогенного слоя клеток культуру промывают 1 раз фосфат ным буферным р-ром и заражают 15 мл суспензии вируса в таком разведении, чтобы в 1 мл ее содержалось около 20 БОЕ. После адсорбции вируса при 37°С в течение 30 мин суспен зию отсасывают и наносят на культуру 15 мл агара После застывания агара на его поверх ности раскладывают кружки фильтровальной бумаги, насыщенной неразведенной иссле дуемой сывороткой. После 4 дн инкубации при 37°С учитывают результаты. Доказательст вом того, что исследуемая сыворотка содержит AT, служит отсутствие повреждения слоя клеток вокруг насыщенного ею кружка фильтровальной бумаги, что обнаруживается в виде венка клеток.
РСК. Ставят микрометодом с использованием микротитратора Такачи или Титертека При их отсутствии возможна постановка РСК в пробирках в общем объеме 0,5 мл.
РДП. Не нашла широкого применения в ветеринарной диагностической практике при обнаружении AT в сыворотках животных. ПА появляются в сравнительно поздние сроки (3-4 нед) после инфицирования и могут сохраняться 4 мес (титры AT до 1.16).
ELISA. В 500 раз чувствительнее РН, менее трудоемок и быстрее выполним. В качестве АГ использовали вирус, концентрированный ПЭГ и очищенный градиентным равновесным ультрацентрифугированием.
При постановке диагноза на ВД-БС необходимо исключить ИРГ, аденовирусную ин фекцию, ПГ-3, злокачественную катаральную лихорадку, ящур, паратуберкулезный энтерит и др. Ввиду того, что ВД-БС может проявляться в различных формах (от острой до латент ной), часто ассоциируется с такими инфекциями, как ПГ-3, аденоинфекция, хламидиозы и др., для окончательного диагноза необходимы лабораторные исследования. Лишь в качестве подозрения на ВД-БС следует учитывать быстрое распространение в стаде болезни, сопро вождающейся лихорадкой, диареей, эрозиями в ротовой полости и ранней лейкопенией.
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА.
Переболевание ВД-БС сопровождается развитием иммунитета. Однако у некоторых жи вотных возможны рецидивы, которые связывают с недостаточностью иммунитета Образо вание иммунитета сопровождается повышением уровня ВНА и других AT, что используют для оценки напряженности иммунитета после вакцинации. ВНА образуются также у плодов при заражении матерей во 2-й половине беременности. У телят установлен выражен ный колостральный иммунитет. Титр материнских AT в сыворотке крови телят снижается и исчезает в течение 3-7 мес после приема молозива. Реконвалесценты сохраняют невоспри имчивость к повторному заражению в течение 2-3 лет Однако у них образуется нестериль ный иммунитет и такие животные длительное время являются вирусоносителями. При хро ническом течении инфекции на фоне иммунодепрессивного действия ВД возникает истоще ние иммунной системы, поэтому у животных обнаруживают низкий титр ВНА. Новорожденные телята приобретают пассивный иммунитет к ВД через молозиво матери, так как Ig не проникают через плаценту стельных коров. Продолжи тельность колострального иммунитета у телят составляет 4-6 нед. В слизистой оболочке ЖКТ под воздействием ВД появляются Ig класса А, причем, образование их в значительном количестве происходит только в том случае, если вирусный АГ непосредственно воздейст вует на слизистую оболочку. Секреторные AT образуются в слизистых носовой полос ти при аэрозольном применении аттенуированного вируса. Развитие ВД-БС происходит в результате специ фической иммунологической толерантности при инфицировании плода.
Большинство сывороточных AT относится к классам Igd и IgG2, что является типич ным для инфекции. Установлено, что животные, не имеющие высокий уро вень AT, невосприимчивы к реинфекции, однако, у некоторых из них после несколь ких месяцев болезни титр ВНА в сыворотке низок, но через некоторое время отмечено его возрастание. Это происходит, по-видимому, вследствие нескольких случаев заражения и показывает, что иммунитет после естественной инфекции не пожизненный. Нет прямой корреляции между титрами ВНА и сроками выделения вируса от больных животных. ВНА могут быть комплементзависимыми и комплементнезависимыми В ответ на первичную ес тественную инфекцию происходит накопление AT 1-го типа, титр их быстро снижается и через 6 мес приближается к титру комплементнезависимых AT. Различия могут быть использованы в ретроспективной диагностике с целью определения срока переболевания животного.
Проблемы специфической профилактики ВД-БС имеют свои особенности, обусловлен ные её патогенезом. Наиболее существенная из них - внутриутробная передача вируса и длительная его персистенция у клинически здоровых животных-реконвалесцентов при на личии специфических AT. Профилактика инфекции заключается в индикации и удалении животных с персистирующей инфекцией и вакцинации иммунокомпетентных.
Применение инактивированных вакцин. Инактивированная вакцина впервые была лицензирована в США в 1981 г., испытана в полевых условиях с положительными резуль татами. В настоящее время инактивированные вакцины готовят из шт. Орегон C-24V, Singer и Нью-Йорк-1. В качестве адъюванта используют ГОА. Инактивированная вакцина из шт. Singer через 7 дн после повторного введения вызывала у телят образование ВНА в высоких титрах и защищала их от экспериментальной инфекции вирулентным iirr.New-York-1. Вакцинация глубоко стельных коров инактивированной вакциной против ВД-БС обеспечивает создание колострального иммунитета у их потомства; пассивные AT сохраня ются в высоком титре до 40-45-дн возраста и обеспечивают защиту животных от экспери ментального заражения. Двукратная вакцинация 7-10-дн телят с интервалом 11 дн на фоне колострального иммунитета не ведет к существенному повышению титра AT и не усиливает защиту при экспериментальном заражении. Однако AT у таких телят сохраняются дольше, чем у невакцинированных. Двукратная вакцинация 7-10-дн серонегативных телят с интер валом 11 дн к 40-45-дн возрасту вызывает образование AT в более низких титрах, т.е. обес печивает создание менее напряженного иммунитета по сравнению с животными, имевшими пассивный иммунитет. Вакцина оказалась эффективной при двукратном применении в дозе 2 мл с интервалом в 21 день; продолжительность иммунитета 1 год. В настоящее время инактивированные вакцины против ВД-БС получают все большее признание. Инактивированной вакцине также свойственны определенные недостатки - они менее иммуногенны при 1-кратном введении поэтому необходима ревакцинация и увеличение до зы введения, особенно при вакцинации молодых животных Продукция секреторных AT и интерферона при введении инактивированных вакцин значительно понижена или отсутству ет.
Применение живых вакцин Разработано множество стратегий использования живых вакцин Применение модифицированных живых вакцин полезно в крупных стадах, которые выпасаются на больших площадях или содержатся в откормочных комплексах, так как для иммунизации модифицированными живыми вакцинами требуются малые дозы при 1-кратном введении Наряду с довольно высокой эффективностью, живые вакцины имеют рад существенных недостатков, в т ч они могут вызывать аборты В результате проникновения в плод вакцинный вирус ВД-БС может вызвать его инфицирование, сопровождающееся аномалиями развития и абортами. Живые вакцины обладают определенным имму-нодепрессивным действием, что может привести к активации других агентов бактериальной и вирусной природы Кроме того вакцинный вирус может длительное время персистировать, что приводит к широкому рассеиванию вируса во внешней среде, создает опасность его риверсии и препятствует проведению диагностических мероприятий.
У стельных коров и персистентно инфицированных телят, кроме того аттенуированные штаммы возбудителя, как правило, индуцируют состояние иммунодепрессии. В связи с чем в поствакцинальный период отмечают повышение частоты секундарных, иногда ле тально протекающих инфекций В связи с возможным нарушением эмбрионального разви тия и возможного возникновения абортов, живыми вакцинами прививают только глубоко стельных коров. Идеально аттенуированные вакцинные штаммы наряду с высокой иммуногенностью не должны проникать через трансплацентарный барьер и вызывать состоя ние толерантности у новорожденных телят, иммунодепрессию и гиперчувствительность к последующему заражению вирулентным штаммом вируса. Фирма Мерье (Франция) предложила новую живую вакцину из аттенуированного штамма ВД-БС, которая прошла широкие испытания на КРС всех возрастов и физиологических групп и оказалась безвред ной и эффективной. Температурно-чувствительный аттенуированный шт RIT4350 ВД полу чен в результате химического мутагенеза (обработка вирулентного шт CNCM1-198 ш vitro азотистой кислотой) Таким образом, решение проблемы с ВД-БС может быть достигнуто защитой плода от заражения в течение 1-й трети беременности. Для первичной иммунизации стад, в которых ранее вакцину не применяли, желательно использовать инактивированную вакцину.
Относительно практического применения живых вакцин имеются весьма разноречивые данные Вакцинация перед случкой предупреждает острую инфекцию в течение раннего пе риода беременности. Однако живая вакцина обладает иммунодепрессивными свойствами, потенциально может вызвать поствакцинальную болезнь, оказать неблагоприятное воздей ствие на плод Серьезные недостатки, свойственные живым вакцинам, послужили поводом для создания и совершенствования инактивированных препаратов, основным преимущест вом которых является полная безвредность для стельных коров и молодняка. Однако они вызывают иммунологическую реакцию с образованием преимущественно гуморальных AT, которые у стельных коров накапливаются в сыворотке крови и в молозиве
Вакцинацию против ВД-БС целесообразно проводить до сезона респираторных болезней, чтобы свести до минимума иммунодепрессию, вызываемую поле выми штаммами вируса
Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. При удачно выбранной схеме 2-кратной вакцинации иммунитет у животных сохраняется до 5 лет. У новорожден ных телят он может быть различным, охватывать более 70% животных и длиться от 3,5 мес до года в зависимости от наличия пассивных AT или внутриутробного или неонатального образования иммунитета. У внутримышечно вакцинированных животных (живой вакциной из шт. Singer) ВНА выявляли на 23-й день после иммунизации, титр AT был 1:32-1:128. У подкожно привитых животных титр AT был 1:32-1:64. При заражении вирулентным виру сом у вакцинированных животных наблюдали некоторое повышение температуры тела У коров, иммунизированных инактивированной вакциной на 7 мес стельности, средний титр ВНА составлял в крови 7,4+0,27 logs., в молозиве - 9,3+0,39 logz. У новорожденных телят (от вакцинированных коров) на 3-й день после выпойки молозива отмечали высокий титр AT -6,9+0,66 logj. При вакцинации коров на 7-8 мес стельности инактивированной вакциной в день отела выявляли высокий уровень AT в крови и молозиве (7,1-7,2 loga). Затем титр AT в крови начинал постепенно снижаться, но и через 6 мес (срок наблюдения) он сохраняла еще на довольно высоком уровне. ВНА сохранялись в молозиве и молоке до 7 да и полностью исчезали после 17 дн лактации. По данным разных исследователей, пассивный иммунитет у телят сохраняется до 2-6 мес и более. Установлено, что уровень IgG в сыворотке крови телят зависит от общего количества этого иммуноглобулина в молозиве Прямой связи между уровнем иммуноглобулинов и заболеваемостью телят установить не удалось, хотя у телят с уровнем IgG ниже 8 мг/мл диарея возникала чаще. Результаты исследований свидетельствуют, что вакцинация глубоко стельных коров обеспечивает создание колострального иммунитета у их потомства. Пассивные AT сохра няются на высоком уровнедо 40-45-дн возраста и обеспечивают защиту жи вотных от экспериментального заражения. Связь титров AT с вирусоносительством и вирусовыделением не изучена.
Ветеринарно – санитарная оценка продукции неразработана.
Семейство: Retroviridae.
Таксономическая структура семейства.
Семейство: Retroviridae Рода: Alpharetrovirus, Betaretrovirus, Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Epsilonretrovirus, Lentivirus, Spumavirus
Характеристика вириона. Морфология. Вирион сферический (диаметр 80-100 нм) оболочечный, с гликопротеиновыми поверхностными выступами (8 нм в длину). Внутреннее ядро включает сферический нуклеокапсид (нуклеоид), расположенный эксцентрично у представителей рода Betaretrovirus, по центру – у Alpharetrovirus, Gammaretrovirus, Deltaretrovirus и Spumavirus, и в виде стержня или усеченного конуса у представителей рода Lentivirus. Существует два пути морфогенеза. Исторически, номенклатура, основанная на электронной микроскопии классифицировала членов родов Alpharetrovirus и Gammaretrovirus, которых сборка капсида происходит на плазматической мембране, как вирусы типа С. По отношению к членам рода Betaretrovirus сбрка их частиц типа А (незрелых капсидов) происходит в цитоплазме с последующим почкованием по морфологическому типу В (MMTV) или D (Mason-Pfizer monkey virus, M-PMV).
Вирионы чувствительны к нагреванию, детергентам и формальдегиду. Поверхностные гликопротеины могут быть удалены пртеолитическими ферментами. Относительно устойчивы к УФ облучению. Плавучая плотность 1,16-1,18 г/см3, S20w 600S (в сахарозе).
Геном. Геном представлен димером молекул РНК (мономер РНК: односпиральная, линейная с позитивной полярностью, размер 7-11 kb), составляющих 2% сухого веса вириона. Мономеры связаны друг с другм водородными связями. Каждый мономер полиаденилирован и кэпирован по 3’- и 5’-концу, соответственно. Очищенная вирусная РНК не инфекционна. Каждый мономер комплементарно ассоциирован со специфической молекулой тРНК, в области (называемой сайтом связывания с праймером – primer binding site), расположенной ближе к 5’-концу РНК, и около 18 оснований по 3’-концу тРНК. РНК и фрагменты ДНК, клеточного происхождения могут оказаться в составе вириона.
Другие компоненты вириона. Протеины составляют около 60% сухой массы вириона. Два оболочечных протеина: SU (surface – поверхностный) и TM (transmembrane – трансмембранный), кодируются вирусным геном env. Внутренние негликозилированные 3-6 структурных протеинов кодируются геном gag. Расположение от N-конца: (1) MA (matrix-матрикс), (2) протеин, обнаруженный у некоторых вирусов, с неопределенной функцией, (3) CA (capsid protein – капсидный протеин), (4) NC (nucleocapsid – нуклеокапсид). Протеин МА часто ацилирован, с меристиловой частью, ковалентно связанной с аминоконцевым глицином. К другим протеинам относятся: протеаза (PR, кодируемая геном pro), обратная транскриптаза (RT, кодируемая геном pol) и интеграза (IN, кодируемая геном pol). У некоторых вирусов присутствует dUTPase (DU), роль которого не ясна. Липиды составляют около 35% сухого веса вириона, и являются производными клеточной мембраны. Углеводы составляют 3% сухого веса вириона. Обычно оба (реже один) поверхностных оболочечных протеина гликозилированы. В вирусной оболочке также обнаруживаются клеточные гликолипиды.
Организация генома и репликация. Вирион несет две копии генома. Инфекционный вирус имеет 4 основных гена, кодирующих вирусные протеины в следующем порядке: 5’-gag-pro-pol-env-3’. Некоторые ретровирусы содержат гены, кодирующие неструктурные протеины, играющие важную роль в регуляции экспрессии генов и репликации вируса. Другие могут нести влияющие на патогенез последовательности клеточного происхождения, которые могут быть включены в полноразмерный геном вируса (например, у вируса саркомы Рауса – Rouse sarcoma virus, RSV) или в виде замен при делециях вирусных последовательностей (например, у вируса саркомы мышей – Murine sarcoma virus). Такие делеции приводят к нарушению репликации вируса и зависят от нетрансформирующих вирусов-помощников, необходимых для образования инфекционного потомства. Во многих случаях последовательности клеточного происхождения образуют гибриды с генами вирусных структурных белков, которые транслируются в один химерный протеин.
Проникновение в клетку определяется взаимодействием гликопротеином вириона и специфическими рецепторами на клеточной поверхности, следствием чего является слияние вирусной оболочки и клеточной мембраны и эндоцитоз. Некоторые из клеточных рецепторов были идентифицированы. В проникновении вируса иммунодефицита человека (Human immunodificiency virus, HIV) в клетку принимают участие два рецептора: иммуноглобулин-подобный протеин с одним трансмембранным участком CD4 и хемокиновый рецептор, пронизывающий мембрану семь раз (CCR5 или CXCR4). Рецепторы для экотропных (Murine leukemia virus, MLV), амфотропных MLV и Gibbon are leukemia virus (GALV) связаны с участием в транспортировке мелких молекул и имеют сложную структуру с множественными трансмембранными доменами. Для вирусов лейкоза птиц (ALVs) идентифицировано два рецептора: для вирусов подгруппы А – мелкая молекула с одним трансмембранным доменом, отдаленно напоминающая клеточный рецептор для низкоплотностных липопротеинов, тогда как для вирусов подгруппы В – рецепторы семейства протеинов фактора некроза опухоли.
Репликация начинается с обратной транскрипции (при участии обратной транскриптазы, RT) вирионной РНК в кДНК, с использованием 3’-конца тРНК в качестве праймера. Синтез кДНК сопровождается разрезанием вирусной РНК (за счет RNAse H активности RT). Продукты гидролиза служат для первичного синтеза кДНК с негативной полярностью. Конечная форма двуспирального ДНК-транскрипта, образуемого из вирусного генома, содержит длинные концевые повторы (LTRs), состоящие из последовательностей с 3’- и 5’-концов вирусной РНК, фланкирующих сиквенс (R), обнаруженный по обоим концам РНК. Процесс обратной транскрипции характеризуется высокой частотой рекомбинации.
Ретровирусная ДНК интегрируется в хромосомную ДНК клетки, образуя провирус, при участии вирусного протеина IN. Слияние конца вирусной ДНК с клеточной сопровждается удалением двух оснований с концов вирусной ДНК и формированием короткого дуплекса клеточного сиквенса в сайте интеграции. Интеграция вирусного генома может происходить по многим сайтам клеточного генома. Однако однажды интегрировавшись, сиквенс уже не может изменить свою позицию внутри той же клетки. Карта интегрированного провируса колинеарна неинтегрированной вирусной ДНК. Интеграция предшествует вирусной репликации.
Интегрированный провирус транскрибируется клеточной РНК полимеразой II в вирионную РНК и мРНК в ответ на транскрипционный сигнал в вирусных LTRs. У вирусов некоторых родов транскрипция также регулируется вирусными трансактиваторами. В зависимости от вируса и генетической карты различают несколько классов мРНК. мРНК, включающая весь геном служит для трансляции генов gag, pro, pol (расположенных в 5’-половине РНК), продуктом которых является полипротеин-предшественник, разрезаемый до структурных протеинов, полимеразы, RT и IN, соответственно. Меньшие РНК, включающие 5’-конец генома, после сплайсинга с сиквенсом 3’-конца генома, и включающие ген env, участки U3 и R, транслируются в предшественники оболочечных протеинов. У вирусов, содержащих дополнительные гены, может происходить другой сплайсинг, но все такие РНК будут иметь общий 5’-концевой сиквенс. Спумавирусы уникальны в том, что могут использовать внутренний промотор, расположенный в гене env выше доступа к рамке считывания. Большинство первично транслированных продуктов представляют собой полипротеины, подвергающиеся протеолитическому разрезанию для приобретения функциональной активности. Продукты генов gag, pro и pol обычно являются вторичными после первичной трансляции продуктов. Для трансляции pro и pol используются обходные трансляционные терминирующие сигналы.
Сборка капсида происходит либо на плазматической мембране (вирусы большинства родов), либо как внутрицитоплазматические частицы (Betaretrovirus и Spumavirus), и высвобождаются из клетки почкованием. Полипротеиновый процессинг внутренних протеинов происходит попутно или последовательно с созреванием вириона.
Антигенные свойства. Протеины содержат типо- и группоспецифические антигенные детерминанты. Некоторые из типоспецифических детерминант участвуют в антитело-обусловленной нейтрализации вируса. Группоспецифические детерминанты являются общими у членов одной серогруппы или могут встречаться у членов разных серогрупп внутри рода. Показана слабая перекрестная активность между представителями разных родов. Эпитопы, определяющие Т-клеточный ответ обнаружены у многих структурных протеинов. Антигенные свойства неиспользуются в классификации вирусов.
Биологические особенности. Ретровирусы распространены среди позвоночных как экзогенные агенты. Эндогенные провирусы, являющиеся результатом произошедшего когда-либо инфицирования герминативных клеток, наследуются по законам Менделя. Ретровирусы связаны с различными болезнями: лейкемии, лимфомы, саркомы и другие опухолевидные процессы тканей мезодермального происхождения; карцинома печени, почек, молочных желез; иммунодифециты (СПИД); аутоиммунные болезни; болезнь нижних двигательных нервов и многие другие остро протекающие болезни. Некоторые ретровирусы непатогенны. Распространение может быть горизонтальное (через кровь, слюну, половые контакты и т.п.) и вертикальное (прямое инфицирование плода; инфицирование через молоко, или при прохождении через родовые пути). Эндогенные ретровирусы наследуются в виде провирусов.
Род: Alpharetrovirus. Типовой вид: Avian leukosis virus (ALV) (вирус лейкоза птиц).
Сборка вирусных частиц происходит на плазматической мембране, по морфологии С-типа. Молекулярная масса протеинов: МА ± 19х103; р10 ± 10х103; СА ± 27х103; NC ± 12х103; PR ± 15х103; RT ± 68х103; IN ± 32х103; SU ± 85х103; TM ± 37х103. Геном 7,2 кб (1 мономер). Расположение генов: gag-pro-pol-env. Дополнительных генов нет. LTR около 350 нуклеотидов, из которых 250 составляют участок U3, 20 – сиквенс R, 80 – участок U5. Вирусы широко распространены и являются экзо- и эндогенными вирусами уток и других видов птиц. Изоляты ALV подразделяются на подгруппы А-J по различию в используемых клеточных рецепторах. Отдаленное сходство сиквенсов выявлено у эндогенных вирусов птиц и млекопитающих. Инфекция ассоциируется с малигнизацией и другми болезнями (истощение, остеопороз). Выделено много онкоген-содержащих вирусов.
Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный сиквенс. Аминокислотный сиквенс (генных продуктов). Спектр естественных хозяев. Разный онкогенез (если есть).
Например, вирус лейкоза птиц может быть легко отличен от вируса саркомы Рауса, так как не имеет онкогена, и кодирует только gag, pol и env. Репликация дефектных альфаретровирусов может быть отличена от вируса саркомы Рауса по различным делециям участков генов gag, pol и env и наличию уникальных для каждого онкогенов. Вирус саркомы Рауса кодирует онкоген src, тогда как вирус миелобластоза птиц, например, кодирует онкоген myb. Спектр хозяев, определяемый взаимодействием поверхностных гликопротеинов и клеточных рецепторов обычно используется для определния штаммов внутри вида.
Виды (9 видов):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиа-ра |
|
Avian leukosis virus Avian leukosis virus-RSA Avian leukosis virus-HPRS103 |
Вирус лейкоза птиц Вирус лейкоза птиц-RSA Вирус лейкоза птиц-HPRS103 |
M37980 Z46390 |
ALV ALV-A ALV-J |
|
Онкогенсодержащие вирусы: |
|||
|
Недефектные по репликации: |
|||
|
Rouse sarcoma virus Rouse sarcoma virus (Prague C) Rouse sarcoma virus (Schmidt-Ruppin B) Rouse sarcoma virus (Schmidt-Ruppin D) |
Вирус саркомы Рауса Вирус саркомы Рауса (Prague C) Вирус саркомы Рауса (Schmidt-Ruppin B) Вирус саркомы Рауса (Schmidt-Ruppin D) |
J02342 AF052428 D10652 |
RSV RSV-Pr-C RSV-SR-B RSV-SR-D |
|
Дефектные по репликации: |
|||
|
Avian carcinoma Mill Hill virus2 |
Вирус Милл Хилл карциномыптиц2 |
К02082 |
ACMHV-2 |
|
Avian myeloblastosis virus |
Вирус миелобластоза птиц |
J02013 |
AMV |
|
Avian myelocytomatosis virus 29 |
Вирус миелоцитоматоза птиц 29 |
J02019 |
AMCV-29 |
|
Avian sarcoma virus CT10 |
Вирус саркомы птиц СТ10 |
Y00302 |
ASV-CT10 |
|
Fujinami sarcoma virus |
Вирус саркомы Фуджинами |
J02194 |
FuSV |
|
UR2 sarcoma virus |
Вирус саркомы UR2 |
M1045 |
UR2SV |
|
Y73 sarcoma virus |
Вирус саркомы Y73 |
J02027 |
Y73SV |
Род: Betaretrovirus.Типовой:Mouse mammary tumor virus(MMTV)(вирус опухоли молочной железы мыш).
Характерные особенности.Вирионы MMTV имеют морфологию типа В (эксцентрично расположенное ядро, выступы на поверхности вириона). Другие члены рода имеют морфологию типа D (менее плотные поверхностные выступы и цилиндрический кор). Сборка капсида происходит в цитоплазме (образуя структуру, называемую частицами типа А), после чего они транспортируются и отпочковываются через цитоплазматическую мембрану. Молекулярная масса протеинов: МА ± 10х103; р21 ± 21х103; СА ± 27х103; NC ± 14х103; DU; PR ± 15х103; RT; IN; SU ± 52х103; TM ± 36х103. Размер генома 8-10 kb (1 мономер). Организация для MMTV: gag-pro-pol-env-sag. У MMTV есть дополнительный ген sag, продуктом которого является суперантиген. У MMTV размер LTR составляет 1300 нуклеотидов, 1200 нуклеотидов, кодирующие регион U3, 15 нуклеотидов – R, 95-120 нуклеотидов – U5, длина которых у всех видов рода.
В данный род входят экзогенные, передающиеся вертикально (с молоком) и эндогенные вирусы мышей, так же как и экзогенные, передающиеся горизонтально, и эндогенные вирусы приматов и овец. Вирусы мышей ассоциированы с карциномой млочной железы и Т-лимфомами, тогда как экзогенные вирусы приматов ассоциированы с иммунодефицитными болезнями; Jaagsiekte virus (JSRV) ассоциирован с раком легких у овец. Онкоген-содержащие вирусы не выявлены.
Критерии подразделения на виды внутри рода.
Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный сиквенс. Аминокислотный сиквенс (генных продуктов). Спектр естественных хозяев.
Некоторые ретровирусы приматов довольно различны между собой, хотя и относятся к одному виду благодаря рекомбинации с геном env гаммаретровирусов. Наиболее дивергентные из них эндогенные Squirrel monkey retrovirus (SMRV) и Langur virus (LNGV), которые не могут инфицировать клетки из тканей органов приматов. Несколько серологически различных штаммов существует у вида Mason-Pfizer monkey virus (M-PMV). Mouse mammary tumor virus (MMTV) выделен как отдельный вид, благодаря наличию уникального участка, кодирующего sag и очень отличающегося гена env. Ovine pulmonary adenocarcinoma virus (JSRV) также выделен как отдельный вид на основе оценки степени нуклеотидной дивергенции. Сходные эндогенные провирусы были идентифицированы и у других млекопитающих (грызуны, приматы).
Виды (5 видов):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиа-а |
|
Langur virus |
Вирус Лангур |
-- |
LNGV |
|
Mason-Pfizer monkey virus Simian retrovirus 1 Simian retrovirus 2 |
Вирус обезьян Месон-Пфайзер Ретровирус обезьян 1 Ретровирус обезьян 2 |
M12349 M11841 M16605 |
M-PMV SRV-1 SRV-2 |
|
Mouse mammary tumor virus |
Вирус опухоли молочной железы мышей |
M15122 |
MMTV |
|
Ovine pulmonary adenocarcinoma virus (Jaagsiekte sheep virus) |
Вирус аденокарциномы легких овец |
M80216 |
JSRV |
|
Squirrel monkey retrovirus |
Ретровирус белечьей обезьяны |
M23385 |
SMRV |
Род: Gammaretrovirus. Типовой : Murine leukemia virus (MLV) (вирус лейкемии мышей).
Характерные особенности. Вирион имеет морфологию типа С, со слаборазличимыми поверхностными выступами. Плотный кор расположен в центре. Сборка капсида происходит на внутренней поверхности мембраны одновременно с почкованием. Молекулярная масса протеинов: МА ± 15х103; р12 ± 12х103; СА ± 30х103; NC ± 10х103; PR ± 14х103; RT ± 80х103; IN ± 46х103; SU ± 70х103; TM ± 15х103. Геном 8,3 kb; расположение генов: gag-pro-pol-env.Дополнительных генов нетРазмер LTR составляет 600 нуклеотидов, 500 нуклеотидов – регион U3, 60 нуклеотидов – R, 75 нуклеотидов – U5.
Вирусы широко распространены, экзогенные (передаются горизонтально и вертикально) и эндогенные вирусы встречаются у многих млекопитающих. Вирусы ретикулоэндотелиозов включают несколько видов, выделенных у птиц, не имеют сходных эндогенных последовательностей. Сходные эндогенные последовательности обнаружены у млекопитающих. Вирусы ассоциируются с рядом таких болезней как малигнизация, иммуносупрессия, нейрологические нарушения и др. Выделено много онкоген-содержащих вирусов млекопитающих и вирусов группы ретикулоэндотелиозов.
Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный сиквенс и вирусный онкогенез. Антигенные свойства. Спектр естественных хозяев. Патогенность.
Описаны вирусы ретикулоэндотелиозов млекопитающих, рептилий и птиц. Вирусы млекопитающих могут быть как способными к репликации и не имеющими онкогенов клеточного происхождения, так и дефектными по способности к репликации, имеющие разные клеточные онкогены.
Murine leukemia virus (MLV) может быть отличен от Gibbon ape leukemia virus (GALV) по дивергенции сиквенсов, различием в рецепторах, необходимых для проникновения в клетку, и ограниченной антигенной перекрестной реактивности в ELISA. Вирус саркомы мышей, дефектные по репликации отличается от MLVs и между собой по наличию клеточных онкогенов (Moloney sarcoma virus(mos) и Wooley monkey sarcoma virus (sis)) и потерей частей генов gag, pol, env.
Виды (17 видов):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиатура |
|
Группа вирусов млекопитающих |
|||
|
Недефектные по репликации |
|||
|
Feline leukemia virus |
Вирус лейкемии кошек |
M18247 |
FeLV |
|
Gibbon ape leukemia virus |
Вирус лейкемии гиббонов |
M26927 |
GALV |
|
Guinea pig type C oncovirus |
Онковирус типа С морских свинок |
M18247 |
GPCOV |
|
Murine leukemia virus Abelson Murine leukemia virus AKR (endogenous) Murine leukemia virus Friend Murine leukemia virus Moloney Murine leukemia virus |
Вирус лейкемии мышей Вирус лейкемии мышей Абелсон Вирус лейкемии AKR (эндогенный) мышей Вирус лейкемии мышей Френд Вирус Молони лейкемии мышей |
J02255 J02009 J01998 M93134, Z11128 J02255 |
MLV AbMLV AKRMLV FrMLV MoMLV |
|
Porcine type C oncovirus |
Онковирус типа С свиней |
-- |
PCOV |
|
Дефектные по репликации |
|||
|
Finkel-Biskis-Jinkins murine sarcoma virus |
Вирус Финкел-Бискис-Джинкинс саркомы мышей |
К02712 |
FBJMSV |
|
Gardner-Alstein feline sarcoma vi |
Вир Гарднер-Алстейн саркомы кош |
-- |
GAFeSV |
|
Hardy-Zukerman feline sarcoma |
Вир Харди-Зукерман саркомы кшк |
-- |
HZFeSV |
|
Harvey murine sarcoma virus |
Вирус Харвей саркомы мышей |
-- |
HaMSV |
|
Kirsten murine sarcoma virus |
Вирус Кирстен саркомы мышей |
-- |
KiMSV |
|
Moloney murine sarcoma virus |
Вирус Молони саркомы мышей |
J02266 |
MoMSV |
|
Snyder-Theilen feline sarcoma vir |
Вирус Снайдер-Тейлен саркомы кш |
-- |
STFeSV |
|
Wooly monkey sarcoma virus (Simian sarcoma virus) |
Вирус саркомы шерстистых обезьян (Вирус саркомы обезьян) |
J02394 |
WMSV |
|
Группа вирусов рептилий |
|||
|
Viper retrovitus |
Ретровирус гадюк |
-- |
VRV |
|
Группа вирусов (ретикулоэндотелиозов) птиц |
|||
|
Chick syncytial virus |
Синцитиальный вирус цыплят |
-- |
СSV |
|
Reticuloendotheliosis virus (strain T, A) |
Вирус ретикулоэндотелиоза, |
-- |
REV |
|
Trager duck spleen necrosis virus |
Вирус некроза селезенки уток |
-- |
TDSNV |
Род: Deltaretrovirus.Типовой: Bovine leukemia virus(BLV)(вирус лейкемии (лейкоза) КРС).
По морфологии и стратегии сборки вирион дельтаретровирусов сходен с таковым гаммаретровирусов: морфология типа С, слаборазличимыми поверхностными выступами, плотный кор расположен в центре; сборка капсида происходит на внутренней поверхности мембраны одновременно с почкованием. Молекулярная масса протеинов: МА ± 19х103; СА ± 24х103; NC ± 12-15х103; PR ± 14х103; RT; IN; SU ± 60х103; TM ± 21х103. Геном 8,3 kb; расположение генов: gag-pro-pol-env-tax-rex. Дополнительные гены: tax-rex, кодируют неструктурные протеины, участвующие в регуляции синтеза и процессинга вирусной РНК. Размер LTR составляет 550-750 нуклеотидов, 200-300 нуклеотидов – регион U3, 135-235 нуклеотидов – R, 100-200 нуклеотидов – U5. Экзогенные вирусы (с горизонтальной передачей) данного рода обнаружены только у небольшой группы млекопитающих. Родственных эндогенных вирусов не идентифицировано. Инфекции связаны с В- или Т-клеточными лейкемиями или лимфомами, так же как и с нейрологической болезнью (тропический спастический парапорез или HTLV-ассоциированная миопатия) с длительным латентным периодом с инцидентностью менее 100%. Онкоген-вирусов нет.
Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный сиквенс. Антигенные свойства. Спектр естественных хозяев. Патогенность. HTLV-1 и STLV-1 были отнесены в соответствующий кластер не по признаку спектра восприимчивых хозяев, а в соответствии с географическим распространением. Все описанные субтипы HTLV-1 наиболее вероятно возникли при межвидовой передаче от обезьян человеку. Например, Primate T-lymphotropic virus 1 (PTLV-1) отличается от Primate T-lymphotropic virus 2 (PTLV-2), впервую очередь, на основе филогенетических различий. Оба вируса имеют одинаковую кодирующую стратегию, но только PTLV-1 имеет отношение к болезни человека.
Виды (4 вида):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббре-ра |
|
Bovine leukemia virus |
Вирус лейкемии (лейкоза) КРС |
K02120 |
BLV |
|
Primate Tlymphotropic virus 1 Human T-lymphotropic virus 1 Simian T-lymphotropic virus 1 |
Тлимфотропный вирус приматов1 Т-лимфотропный вирус человека1 Т-лимфотропный вирус обезьян 1 |
D13784 |
PTLV-1 HTLV-1 STLV-1 |
|
Primate Tlymphotropic virus 2 Human T-lymphotropic virus 2 Simian T-lymphotropic virus 2 (Formely termed STLV-PP) |
Т-лимфотропный вирусприматов 2 Т-лимфотропный вирус человека 2 Т-лимфотропный вирусобезьян 2 (ранее называемый STLV-PP) |
M10060 |
PTLV-2 HTLV-2 STLV-2 |
|
Primate Tlymphotropic virus 3 Simian T-lymphotropic virus 3 (Formely termed STLV-L) |
Т-лимфотропный вирус приматов 3 Т-лимфотропный вирус обезьян 3 (ранее называемый STLV-L) |
Y07616 |
PTLV-3 STLV-3 |
Род: Epsilonretrovirus.
Типовой вид: Walleye dermal sarcoma virus (WDSV) (вир дермальной саркомы (глаукомы)).
Все представители рода являются экзогенными ретровирусами. Имеют сложную структуру. Размер генома 11,7-12,8 kb, расположение генов: gag-pro-pol-env-orfA-orfB; 1-3 ORFs, кодирующие преимущественно дополнительные протеины. ORFa (вирусный гомолог циклину D) присутствует у всех трех ретровирусов, вызывающих глаукому. Функции двух других ORFs у вирусов глаукомы или одной ORF у ретровируса змееголова не определены. Размер LTR ретровирусов рыб варьирует от 500 до 650 нуклеотидов, 450 нуклеотидов – регион U3, 80 нуклеотидов – R, 75 нуклеотидов – U5. Филогенетический анализ участка полимеразы показал, что ретровирусы глаукомы и окуней образуют группу вирусов, отличающихся от ретровирусов змееголова. Тем не менее, на данный момент, все ретровирусы рыб оказались в одной группе с ретровирусами типа С млекопитающих.
Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный сиквенс и вирусный онкогенез. Аминокислотный сиквенс продуктов генов. Спектр естественных хозяев.
Данный род состоит из трех видов ретровирусов рыб, различающиеся между собой на основе филогенетического разнообразия. В даный таксон включены два предполагаемых вида. С появлением дополнительных данных ретровирус змееголова может быть выделен в отдельный род. Вирус гиперплазии окуней был секвенирован только по гену полимеразы и остается в статусе предполагаемого, пока не будет получена дополнительная информация по сиквенсу.
Виды (3 вида):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиатура |
|
Walleye dermal sarcoma virus |
Вирус дермальной саркомы (глаукомы) |
AF033822 |
WDSV |
|
Walleye epidermal hyperplasia virus 1 |
Вирус эпидермальной гиперплазии (глаукомы) 1 |
AF014792 |
WEHV-1 |
|
Walleye epidermal hyperplasia virus 2 |
Вирус эпидермальной гиперплазии (глаукомы) 2 |
AF014793 |
WEHV-2 |
Предполагаемые виды (2): Perch hyperplasia virus (PHV) (вирус гиперплазии окуней)
Snakehead retrovirus (SnRV) [U26458] (ретровирус змееголова).
Род: Lentivirus. Типовой вид: Human immunodificiency virus 1 (HIV-1) вирус иммунодефицита человека 1.
Вирион имеет характерную морфологию, с прямоугольным или конусовидным кором (нуклеоидом). Сборка вириона происходит на клеточной мембране. Молекулярная масса протеинов: МА ± 17х103; СА ± 24х103; NC ± 7-11х103; PR ± 14х103; RT ± 66х103; DU (у всех кроме лентивирусов приматов); IN ± 32х103; SU ± 120х103; TM ± 41х103. Размер генома 9,3 kb; расположение генов: gag-pro-pol-vif-vpr-tat-rev-vpu-env-nef. Кроме основных генов gag-pro-pol-env присутствуют дополнительные гены (например для HIV-1: vif, vpr, tat, rev, vpu и nef), продукты которых участвуют в регуляции и синтезе вирусной РНК и других репликативных процессах. У других вирусов могут быть дополнительные гены неструктурных белков (например у HIV-2: vpx). Размер LTR 600 нуклеотидов, 450 нуклеотидов – регион U3, 100 нуклеотидов – R, 80 нуклеотидов – U5.
В состав рода входят экзогенные вирусы (с горизонтальной и вертикальной передачей) человека и многих других млекопитающих. О существовании родственных эндогенных вирусов сведений нет. Лентивирусы приматов отличаются по использованию хемокинового рецептора, протеина CD4 и по отсутствию DU. Некоторые группы проявляют перекрестную активность по антигенам Gag (лентивирусы овец, коз и кошек). Вирусы, родственные Feline immunodificiency virus (FIV) были выделены от других крупных кошачьих (например, Puma lentivirus), а наличие антител к антигену Gag у львов и других крупных кошачьих свидетельствует о существовании других вирусов, близких FIV и лентивирусам овец и коз. Вирусы ассоциируются с различными болезнями, включая иммунодефициты, нейрологические нарушения, артриты и др. Онкоген-вирусов нет.
Критерии подразделения на виды внутри рода.Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный и аминокислотный сиквенс. Антигенные свойства. Спектр естественных хозяев. Патогенность.
На основе различий по спектру восприимчивых хозяев лентивирусы были подразделены на 5 групп (лентивирусы приматов, овец и коз, лошадей, кошек и КРС). Внтури группы лентивирусов приматов HIV-1 отличается от HIV-2, прежде всего по дивергенции нуклетидных сиквенсов, которая превышает 50%, и по наличию у HIV-2 гена vpx. Показана ограниченная перекрестная реактивность в ELISA на основе Gag-антигенов; по продукту гена env перекрестной активности нет.
Виды (10 видов):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома в |
Аббревиатура |
|
Группа лентивирусов КРС |
|||
|
Bovine immunodeficiency virus |
Вирус иммунодефицита КРС |
M32609 |
BIV |
|
Группа лентивирусов лошадей |
|||
|
Equine infectious anemia virus |
Вирус инфекционной анемии лошадей |
M16575 |
EIAV |
|
Группа лентивирусов кошек |
|||
|
Feline immunodeficiency virus(Petu |
Вирус иммунодефицита кошек(Петулума) |
M25381 |
FIV-P |
|
Felineimmunodeficiencyvirus(Oma) |
Вирус иммунодефицита кошек (Ома) |
FIU56928 |
FIVO |
|
Puma lentivirus (PLV-14) |
Лентивирус пум (PLV-14) |
PLU03982 |
PLV |
|
Группа лентивирусов овец и коз |
|||
|
Caprine arthritis encephalitis virus |
Вирус артрита-энцефалита коз |
M33677 |
CAEV |
|
Visna/Maedi virus (strain 1514) |
Вирус Висна-Мэди(штамм 1514) |
M60609 |
VISNA |
|
Группа лентивирусов приматов |
|||
|
Human immunodeficiency virus 1 Genomic clades of HIV-1 (examples): Clade A:U455 Clade B: ARV-2/SF-2 BRU (LAI) HXB2 RF MN Clade C: ETH2220 Clade D: NDK ELI Clade F: 93BR020 Clade H: 90CR056 Clade O: ANT70 |
ВИЧ 1 (Генетические группы (clades) HIV-1, примеры вирусов каждой группы) |
M62320 K02007 K02013 K03455 M17451 M17449 U46016 M27323 X04414 AF005494 AF005496 L20587 |
HIV-1 HIV-1.U455 HIV-1.ARV-2/SF-2 HIV-1.BRU (LAI) HIV-1.HXB2 HIV-1.RF HIV-1.MN HIV-1.ETH2220 HIV-1.NDK HIV-1.ELI HIV-1.93BR020 HIV-1.90CR056 HIV-1.ANT70 |
Human immunodeficiency virus 2Genomic clades of HIV-2 (examples): Clade A: BEN ISY ROD ST Clade B: D205 EHOA UC1 |
ВИЧ 2(Генетические группы (clades) HIV-1, примеры вирусов каждой группы) |
M30502 J04498 M15390 M31113 X61240 U27200 L07625 |
HIV-2 HIV-2.BEN HIV-2.ISY HIV-2.ROD HIV-2.ST HIV-2.D205 HIV-2.EHOA HIV-2.UCI |
|
Simian immunodeficiency virus
African green monkey (agm) SIVs
African green monkey TYO
African green monkey 155
African green monkey 3
African green monkey gr-1
African green monkey Sab-1
African green monkey Tan-1
chimpanzee SIV mandrill SIV red-capped mangabey SIV sooty mangabey SIV-H4 *Rhesus (Maccaca mulatta) *pig-tailed macaque *stamp-tailed macaque (stm) sykes monkey SIV |
Вирус иммунодефицита обезьян (ВИО) ВИО африканской зеленой мартышки ВИО африканской зеленой мартышки TYO ВИО африканской зеленой мартышки 155 ВИО африканской зеленой мартышки 3 ВИО африканской зеленой мартышки gr-1 ВИО африканской зеленой мартышки Sab-1 ВИО африканской зеленой мартышки Tan-1 ВИО шимпанзе ВИО мандрилл ВИО дымчатого мангабея ВИО-Н4 черного мангабея ВИО макак резус (Maccaca mulatta) ВИО свинохвостых макак ВИО медвежьих макак ВИО белогорлых обезьян |
X07805 M29975 M30931 M58410 U04005 U58991 X52154 M27470 AF028607 X14307 M195499 M32741 M83293 L06042 |
HIV-2 SIV-agm.TYO SIV-agm.155 SIV-agm.3 SIV-agm.gr SIV-agm.sab SIV-agm.tan SIV-cpz SIV-mnd SIV-rcm SIV-sm SIV-mac SIV-mne SIV-stm SIV-syk |
* - описана межвидовая передача SIV-sm (у содержащихся в неволе).
Род: Spumavirus. Типовой вид: Chimpanzee foamy virus (CFV) (пенящий вирус шимпанзе).
Характерные особенности. Вирион имеет характерную морфологию, со слабозаметными поверхностными выступами и центральным неплотным ядром. Сборка капсида происходит в цитоплазме, после чего он отпочковывается в эндоплазматическую сеть или через плазматическую мембрану. Для почкования капсида необходим протеин Env. Нет сведений о разрезании в инфекционном вирионе протеина-предшественника Gag до субъединиц MA, CA, NC. Молекулярная масса протеинов: Gag-предшественник ± 74х103; N-концевой продукт разрезания Gag ± 70х103; Pol-предшественник ± 127х103; RT ± 80х103; IN ± 40х103; Env-предшественник ± 130х103; SU ± 80х103; TM ± 48х103; Itas/Bel ± 35х103; Bet (Bel-1/Bel-2 fusion protein) ± 60х103; Env-Bet fusion protein ± 170х103. Размер генома 11,6 kb; расположение генов: gag-pro-pol-env-tas-bet. Tas является ДНК-связывающим протеином с трансактиваторной функцией. Функции другого дополнительного протеина не известны. Размер LTR 1770 нуклеотидов, 1400 нуклеотидов – регион U3, 200 нуклеотидов – R, 150 нуклеотидов – U5. У вирусов КРС и кошек размер соответствует 950-1000 нуклеотидов. Спумавирусы могут использовать два сайта начала транскрипции: R в LTR и внутренний промотор (IP), расположенный выше дополнительных рамок считывания в гене env. Активность обоих промоторо зависит от Tas. Другим важным критерием отличия спумавирусов от представителей других родов семейства Retroviridae – экспрессия протеина Pol со сплайсированной субгеномной мРНК и присутствие в вирионе большого количества обратнотранскрибированной ДНК.
Вирусы распространены повсеместно, экзогенные, найдены у многих млекопитающих. Естественного инфицирования людей не зарегистрировано, отмечались редкие случаи заражения людей от нечеловекообразных обезьян. Есть данные о существовании родственных (но не близких) эндогенных вирусов. Многие изоляты вызывают характерную “пенистую” цитопатологию в культуре клеток. Болезней, ассоциированных со спумавирусной инфекцией, не отмечается. Онкоген-вирусов не обнаружено.
Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы. Спектр естественных хозяев. Виды (5 видов):
|
Название вида вируса |
Название на русском языке |
№ генома |
Аббревиатура |
|
Bovine foamy virus |
Пенящий вирус КРС |
U94514 |
BFV |
|
Chimpanzee foamy virus Chimpanzee foamy virus human isolate(formerly Human foamy virus, HFV) |
Пенящий вирус шимпанзе Пенящий вирус шимпанзе, изолят от человека (ранее наз. Пенящий вирус человека) |
U04327 Y07725 |
CFV CFV/Hu |
|
Feline foamy virus |
Пенящий вирус кошек |
Y08851 |
FFV |
|
Simian foamy virus 1 |
Пенящий вирус обезьян 1 |
Х54482 |
SFV-1 |
|
Simian foamy virus 3 |
Пенящий вирус обезьян 3 |
M74895 |
SFV-3 |
ЛЕЙКОЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Leukaemia in cattle, Bovine leukosis (англ.); Leukose bovine (франц.)
Лейкоз КРС - хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, основной при знак которой - злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания, в результате чего происходит диффузная инфильтрация органов этими клетка ми или появляются опухоли. Само определение болезни обязывает выдвинуть проблему борьбы с этой инфекцией на первое место И, действительно, после опубликования серий работ о близком генетическом и АГ-родстве ВБЛ с вирусом Т-клеточного лейкоза человека (HTLV-1 и HTLV-2) диагностика и профилактика лейкоза КРС приобретают особую акту альность. Лейкозы животных диагностируют почти во всех странах мира. Широко распространены в США, ряде стран Европы, Африке и Австралии
Почти на протяжении века ученые многих стран проводили исследования по изучению этиологии этого заболевания и лишь 1969 г вошел в историю как год открытия ВЛКРС. Вирус является этиологическим агентом бычьего лейкоза и получил название "вирус лейкоза крупного рогатого скота" (ВЛКРС), или Bovine Leukemia virus (BLV). Морфология и химический состав. Зрелые вирионы ВЛКРС содержат центральнорасположенный электронно-плотный нуклеоид, диаметр которого, в зависимости от методов фиксации и обработки препарата, варьирует от 40 до 90 нм/ Центральная часть нуклеоида отделена от внешней вирусной оболочки промежуточным слоем. Гексагональное очертание нуклеоида в ультратонких срезах предполагает икосаэдрическую симметрию. Внешняя ви русная оболочка представлена 2-контурной мембраной, которая лабильна, из-за чего диа метр вирионов может сильно варьировать - от 73 до 120 им. На поверхности внешней обо лочки выявляют шипики (пепломеры) с пуговкообразным утолщением на конце, длиной 8-11 нм, которые состоят из субъединиц, образованных двумя гликозилированными вирусны ми белками gp51 и gp30, отвечающими за типоспецифичность. Вирионы имеют плавучую плотность в растворе сахарозы и CsCI, равную 1,15-1,18 г/мл и 1,17-1,33 г/мл соответствен но. Химический состав вирионов. протеины 60%, липиды 35, нуклеиновые кислоты 2,2, уг леводы 0,5%.
В структуре ВЛКРС обнаружено 6 основных белков с мол.м. от 10 до 51 кД. 4 негликозилированных белка составляют сердцевину вириона. Два крупных белка являются гликопротеинами - один из которых (р51) расположен на поверхности вириона, другой (р30) - трансмембранный белок. ВЛКРС обладает выра женной антигенной активностью и индуцирует синтез ВНА и КСА. Он агглютинирует эрит роциты мышей. За инфекционность и ГА активность ответственен gp51. Поли- и монАТ против gp51 обладают ВН-активностью, подавляют синцитий образуюшую активность вируса, препятствуют выходу из клеток и вызывают ли зис инфицированных клеток в присутствии комплемента. Оболочка ВЛ КРС содержит 2 белка gp60 (гликопротеин поверхности вириона) и (межмембранный белок). Геном вируса может существовать в 2-х формах геномной 1-цепочечной РНК или в ви де ДНК, синтезированной на геномной РНК как на матрице, и интегрированной в хромосо му клетки-хозяина в виде провируса. Геномная РНК содержится только в зрелых вирионах. В жизненном цикле вируса геномная РНК функционирует лишь 1 раз, когда служит матри цей для фермента - обратной транскриптазы при биосинтезе комплементарной ДНК. Весь объем процессов, необходимый для полной репликации вируса, выполняет ся с участием ДНК-провируса.
Устойчивость. Установлено, что ВЛКРС чувствителен к температурным возденет разрушается при повторных замораживаниях и оттаиваниях и при нагревании до 56°С в течение 15 мин. Пастеризация молока (74°С в течение 16с) разрушает его, и он теряет инфекционность для ягнят. Вирус обнаруживается в молоке после хранения в течение 72 ч. при 1°С, при 10 и 14,5°С его не обнаруживают через 48 и 24 ч соответственно. Полная инактивация вируса в молоке или вируссодержащей жидкости установлена при 50°С в течение 70 С, при 70-74 °С в течение 17 с или при 56-63 °С в течение 5-30 мин. В цельном молоке, хранившемся при 1,1-5,5°С, происходит постепенное снижение титров ВЛКРС в течение 72 ч; при 9,9 и 14,4°С вирус не обнаруживался уже через 48 и 24 ч хранения. В сливках, собранных после отстоя цельного молока, при 1,1°С через 24, 48, 72 ч вирус был выделен только в пробах первых 2-х сроков отстоя. В разбавленном молоке (до 37,5 %) инфекционность сохраняется в течение 12 ч. Если при рН 6,5 вирус сохраняется в молоке в течение 72 ч, то при рН 7,1- только 48 ч. Снижение кислотности молозива до рН 4,5 разрушает вирус в течение 2 ч, особенно при высоких исходных титрах, а в нативном молозиве вирус сохранялся в течение 18 дн. при комнатной температуре. Прямой солнечный свет инактивирует ВЛКРС в течение 4 ч, УФ лучи - в течение 30 мин (120 Вт на расстоянии 1 м ). ВЛКРС полностью теряет активность в р-рах натриевого щелока (0,5° мин, 22°С), этанола (2,0%, 4 ч, 22°С), формальдегида (0,5%, 8 ч, 37°С), фенола (0,5%, 4°С). В жидком азоте лимфоциты, несущие провирусную ДНК, сохраняют инфекционность в течение нескольких лет. Повторное замораживание и оттаивание разрушает клетки и устраняет инфекционность.
Антигенная структура. Электрофорез очищенных вирионов ВЛКРС в SDS - ПА и гельфильтрация в присутствии гидрохлорида гуанидина показывают в составе вирионов 4 главных негликозилированных белка и 2 гликозилированных.
Антигенная вариабельность и родство. В АГ отношении ВЛКРС отличается от из вестных вирусов типа С. Не выявлено с помощью ИФ и иммунодиффузии АГ родства меж ду главным внутренним белком ВЛКРС р24 и группоспецифическими АГ вирусов лейкозов мышей и кошек, опухолей молочных желез мышей, вирусов бабуинов, Мезон-Пфайзера, шерстистых обезьян ВЛКРС, являясь экзогенным ретровирусом КРС, отличается от извест ных ретровирусов по АГ свойствам, морфогенезу, способности индуцировать синцитий в монослойных культурах клеток и по свойствам ревертазы. Кроме того, в отличие от боль шинства других лейкемогенньгх вирусов, он присутствует у инфицированных животных в непродуктивном состоянии.
Локализация вируса, вирусоносительство, персистенция. ВЛКРС обнаруживается в клетках молозива и молока естественно зараженных животных. Из слюны, носовых истече нии, мочи и спермы инфицированных животных его выделить не удалось. Эксперименталь но и спонтанно зараженный до или после рождения теленок остается инфицированным всю жизнь, несмотря на постоянное присутствие ВНА, выявляемых в РДП, РСК и других серо логических реакциях. Отсутствие экспрессии генома ВЛКРС при наличии транскрип ционных провирусов в опухолевых клетках дало возможность предположить, что причиной опухолевой трансформации клеток ВЛКРС является нарушение структуры клеточного гено ма. Неспособность AT элиминировать ВЛКРС объясняется тем, что этот вирус обычно присутствует в инфицированных лимфоцитах в непродуктивном состоянии и защищен от действия AT. Размножение его не является необходимым для распространения в популяции животных. Инфицированные лимфоидные клетки могут передавать вирусный геном потом ству во время размножения клеток. От клетки вирус может передаваться также без продук ции вирусных частиц с помощью механизма Cellular Kissing (клеточного прикосновения), как описано относительно герпесвирусной системы.
Антигенная активность. Инфицированные ВЛКРС животные вырабатывают AT к не скольким вирионным АГ. Впервые для выявления АГ этого вируса в цитоплазме продуцирующих вирус лимфоцитов КРС был использован метод непрямой ИФ с использованием сыворотки больного лейкозом КРС. В дальнейшем было показано, что выявляемый этим методом АГ является вирионным компонентом, несущим АГ детерминанты, присутствую щие в главном внутреннем вирионном белке р24. В сыворотке крови больных лейкозом ко ров обнаружены КСА, к 4-м вирусным полипептидам: р15, р24, gp30, и gp51. В сыворотке крови телят и ягнят, родившихся от больных лейкозом животных, имеется высокий уровень специфических AT, сохраняющийся в течение 5-6 мес. после рождения у телят и 3 мес. у яг нят. Наличие высокого титра колостральных AT способно нейтрализовать инфекции ВЛКРС и предотвратить заражение новорожденных телят при условии их содержания раз дельно от больных коров. AT вырабатываются преимущественно на структурный белок gp51 и относятся к IgC, IgA и IgM. Наличие AT не предотвращает развития опухолей.
Экспериментальная инфекция. Болезнь можно воспроизвести на новорождённых те лятах и овцах при введении им различных вируссодержащих материалов. Эксперименталь ному лейкозу предшествует бессимптомная онковирусная инфекция, переходящая в после дующем в гематологическую стадию болезни с развитием характерной клинической и патоморфологической картины. У заражённых животных гематологическая стадия характеризу ется постоянным лейкоцитозом и лимфоцитозом. Воспроизведение лейкоза у овец осуществляется с большим постоянством и в более короткие сроки по сравнению с КРС. После внутриперитонеального, подкожного, внутримышечного введений нативных лейкоцитов, краткосрочных культур клеток лейкозной коровы и бесклеточных фильтратов культура ной жидкости этих культур у всех заражённых телят и овец через 15-90 дн., в зависимости от дозы и активности вводимых материалов, развивалась инфекция, выявляемая как серологи ческими, так и вирусологическими методами. В условиях опыта животных можно заразить аэрозольно и интраназально. Инфекцию ВЛКРС можно также воспроизвести на козах, однако без клинических при знаков лейкоза. Введение ВЛКРС в организм шимпанзе сопровождалось образованием в длительной циркуляцией вирусспецифических AT, однако выделить инфекционный вирус не удалось. Показана возможность пассирования вируса (шт. FLK) через новорождённых ягнят. В 6-и последовательных пассажах прослежено изменение некоторых биологически свойств вируса: усиление его лейкозогенности и иммуносупрессивного действия, сокраще ние сроков индукции синтеза вирусспецифических AT после инфицирования. Длительное выявление вирусспецифических AT без клинических проявлений лейкоза наблюдается так же у заражённых ВЛКРС кроликов и свиней. Инфицирование ВЛКРС мышей, крыс, хомячков, морских свинок, собак, белок, кошек и птиц (цыплят, голубей) не сопровождается развитием лейкозного процесса или выработкой вирусспецифических AT. Изучены свойства ВЛКРС на кроликах, трансгенных по гену антисмысловой РНК (асРНК) ВЛКРС. Иммунный ответ на экспериментальное заражение ВЛКРС, выявляемым в серологических реакциях, наблюдали у одного из 4-х трансгенныхк у 3-х из 4-х контрольных кроликов через 1-3 мес. Реизолировать ВЛКРС удалось от трек контрольных кроликов, тогда как от трансгенных кроликов вирус не выделяли. Kpoлики наиболее чувствительны при заражении их внутривенно нативными лейкоцитам от больной лейкозом коровы. Кролики могут служить лабораторной моде лью при изучении ВЛКРС. Через 28-35 дней после заражения опытные кролики и овцы продуцировали антивирусные AT, выявляемые в РИД. В клетках нелимфоидного происхождения ни ВЛКРС, ни его АГ не обнаруживаются. С помощью молекулярной гиб ридизации показано, что в этих клетках отсутствуют последовательности ДНК провируса.
Культивирование. Вирус лейкоза впервые удалось обнаружить в куль турах лимфоцитов крови инфицированных животных. ВЛКРС репродуцируется в пере виваемых хронически инфицированных культурах клеток тканей животных разных видов. Наибольшее распространение получила перевиваемая линия клеток FLK-BLV, кото рую получил в 1974 г. Van der Maaten путём сокультивирования эмбриональных клеток почки овцы с лимфоцитами лейкозной коровы. Эта линия клеток используется для биохи мических, морфологических и серологических исследований. В настоящее время получены и широко используются перевиваемые хронически инфи цированные ВЛКРС линии клеток: фибробласты легкого эмбриона коровы (АИД-15), почки эмбриона коровы (ПЭК); почки эмбриона овцы (FLK-BLV); легкого эмбриона летучей мы ши (T61-Lu); легкого макаки-резус (BLV-Simian); селезенки овцы (FLS, J-1228); тимуса эм бриона коровы (ТЭК-МВА-766 LmTT). Способность ВЛКРС индуцировать в монослойных куътурах клеток образование синци тиев (многоядерных клеток) была использована для разработки специфичного, чувствитель ного и быстрого диагностического теста для вьывления инфекционного вируса и ВНА. Этот тест обеспечивает количественные результаты и применяется для прямого выявле ния ВЛКРС - инфекции у животных.
Особенности репродукции. В краткосрочных культурах вирус накапливается во внеклеточных пространствах, но может формировать и внутриклеточные скопления, заключенные в цитоплазматические вакуоли. Почкующиеся формы вирионов можно обнаружить через 3-9 ч культивирования. В нативных лимфоцитах крови больных животных вирионы ВЛКРС, как правило, обнаружить не удается. Почкование вируса сопровож дается значительной дистрофией цитоплазмы. Инфицированные ВЛКРС клетки индуци руют формирование синцития из клеток индикаторных культур. Очаг синцития яв ляется результатом действия одной биологически активной инфекционной вирусной части цы и представлен поликариоцитом, образованным в результате слияния 5-25 клеток.
ГА свойства. ВЛКРС агглютинирует только эритроциты мышей. Максимальная ГА на блюдается при рН 6 и температуре 4°С. После обработки вируса тритоном Х100 или ультра звуком ГА активность вируса повышается в 6-16 раз. Обработка трипсином, KI04 или нейраминидазой значительно снижает ГА-активность ВЛКРС. Эти данные указывают на то, что ГА ВЛКРС является гликопротеином gp51, который после очистки обладает высокой ГА- J активностью. Обработка мышиных эритроцитов нейраминидазой в 4 раза повышает их способность агглютинироваться. ГАд свойства не установлены.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные лейкозом животные. В естественных условиях инфекция ВЛКРС может передаваться пренатально и постнатально. Механизм пренатальной передачи включает передачу вирусного генома через гаметы (генетическая и хромосомная трансмиссия) и передачу целого вируса (эпигенети ческая или экстрахромосомная трансмиссия). Постнатальная передача включает передачу вируса через молоко или при контакте. Контактная передача может быть результатом пря мого воздействия контаминированных вирусом секретов или экскретов или переноса вируса, насекомыми или контаминированными объектами. ВЛКРС может персистировать в лейкоцитах клещей и переноситься ими на здоровых животных. Пренатальная передача ВЛКРС не превышает 20 случаев. Вирус передается от матери плоду трансплацентарно, во время последних 6 мес. внутриутробной жизни, а не через половые клетки. Однако основным путем распространения инфекции в естественных условиях является контактная передача. Так как частицы ВЛКРС не продуцируются in vivo, то логично пред положить, что в большинстве случаев вирус передается с инфицированными лимфоцитами. Для заражения коровы достаточно ввести внутрикожно 2500 лимфоцитов крови. Учитывая возможность переноса ВЛКРС ничтожным количеством крови, следует иметь в виду, что при не соблюдении элементарных санитарных правил инфекция может распространяться во время выполнения ветеринарных процедур со шприцами, иглами и другими хирургически ми инструментами, контаминированными кровью. Следовательно, при массовом взятии крови, вакцинации, туберкулинизации и других мероприятиях для каждого животного необ ходимо использовать отдельный стерильный инструмент. Несоблюдение этого правила рез ко повышает инфицированность животных неблагополучных хозяйств. Имеются косвенные доказательства того, что распространение инфекции ВЛКРС может осуществляться насеко мыми. В тропических зонах, например в Венесуэле, где распространены кровососущие насе комые, пораженность лейкозом особенно высока. ВЛКРС или инфицированные им лимфоциты присутствуют в молоке большинства ин фицированных животных. Однако, несмотря на то, что молоко и молозиво инфицированных коров содержат вирус, инфекция новорожденным телятам в естественных условиях переда ется редко по сравнению с контактным заражением. Устойчивость телят, вскормлен ных инфицированными коровами, к ВЛКРС в течение первых месяцев жизни обусловлена, вероятно, материнскими ВНА, которые приобретают все телята, получающие молозиво. Ес ли теленок заражен ВЛКРС во внутриутробный период, то колостральные AT не влияют на персистенцию вируса. В зависимости от уровня AT в молозиве, материнские AT исчезают в течение 4-6 мес. после рождения. Внутриутробная передача вируса лейкоза обнаружена у 4 из 50 обследованных новорожденных телят. По мнению авторов, возникновение передачи вируса лейкоза не оказывает существенного влияния на эпизоотологию данной инфекции, чем обосновывают нецелесообразность использования серопозитивных коров в системе противолейкозных мероприятий. В сперме инфицированных быков ВЛКРС не выявлен. Однако, у быков с воспалением генитального тракта могут быть в сперме лимфоциты, инфицированные ВЛКРС. Экспери ментально установлено, что коров можно инфицировать путем нанесения таких лимфоцитов на слизистую оболочку матки. Таким образом, в случае наличия ВЛКРС в сперме инфици рованных быков исключена передача вируса от быка корове. Вместе с тем, различий в час тоте проявления инфекции среди потомства ВЛ КРС положительных и ВЛ КРС отрицатель ных быков не выявлено. Механизм контактной передачи ВЛКРС не ясен, поскольку не уста новлено наличие вируса в фекалиях, моче и слюне инфицированных животных. Паренте ральное введение подопытным животным слюны, выделений из носа, проб выдыхаемого воздуха и мочи инфицированных животных не вызывало депрессии. Исследованиями, про веденными в динамике опыта, было установлено, что через 60 сут. после прекращения выпаивания молока у 2-х кроликов в сыворотке крови были выявлены антитела к ВЛКРС в РИД, а через 90 сут. еще 5 кроликов были серопозитивными. На морских свинках не удалось установить факт передачи ВЛКРС через молоко. Опытные животные, которым вы паивали молоко, термически обработанное и контрольные были серонегативными на протя жении всего срока наблюдения. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что молоко является фактором передачи ВЛКРС. В основном инфекционный процесс у КРС ограничивается 2-мя стадиями: инкубационной и бессимптомного вирусоносительства. Только у небольшого % взрослых животных устанавливают 3-ю и 4-ю стадии: клинико-гематологическое и опухолевое проявление, характерные для лейкоза.
При лейкоза КРС рассматривают 2 пути передачи вируса: неонатальный (внутриутробный) и постнатальный (горизонтальный) Сероэпизоотологические исследования, проведенные на 62 тыс. зараженных ВЛКРС и 47 тыс. здоровых коров, показали, что вертикальный путь не оказывает существенного влияния на эпизоотический процесс. Горизонтальный (контакт ный) путь является основным в эпизоотическом процессе. В стадах с зараженностью коров-матерей ВЛКРС в пределах 11,3-33,1% широкомасштабными сероэпизоотологическими ис следованиями 6 – мес. телят (118 тыс. ) в РИД выявляли сравнительно невысокий уровень AT носительства (2,1-4,8%). Одновременно установлено, что в оздоровленных от инфекции ВЛКРС стадах методом постепенной замены зараженных коров серонегативными собствен ной репродукции первотелками, у последних более 57% матерей положительно реагировали на ВЛКРС.
Симптомы и патологоанатомические изменения. Различают 2 основные формы лейкоза КРС: энзоотическую и спорадическую. Последняя форма встречается редко и поражая молодых животных (до 3-летнего возраста), проявляется клинико-морфологическими разновидностями: 1) ювинальный лейкоз (форма лейкоза у телят) - наиболее часто наблюдается у телят моложе 6-мес возраста, характеризуется увеличением лимфоузлов и часто инфильтрацией костного мозга, 2) тимусная форма лейкоза встречается у телят моложе 2-летнего возраста, характеризуется увеличением тимуса, 3) кожная форма встречается у телят от 1 до 3-летнего возраста, характеризуется узелковой лейкемической инфильтрацией кожи. Спорадический лейкоз не представляет особого интереса. Этио логический агент при этой форме болезни не выявлен.
Энзоотический лейкоз - контагиозная болезнь с длительным латентным периодом, во время которого в крови выявляют вирус лейкоза КРС (ВЛКРС) и AT к нему. В основном встречается у крупных животных, наиболее часто в возрасте 5-8 лет. Болезнь характеризует ся пролиферацией неопластических элементов, в результате чего образуются отдельные опухолевые массы и (или) диффузная инфильтрация различных тканей и органов В опухо левый процесс вовлекаются лимфоузлы, часто поражаются селезёнка, сычуг, сердце, почки и другие органы. Клинические проявления зависят от вовлечённых в патоло гический процесс органов, степени опухолевого роста и диссеминации неопластического процесса.
Согласно современным данным, энзоотический лейкоз КРС объединяет две группы болезней. Опухолевые болезни первой группы характеризуются инфильтрацией лимфоцитами органов кроветворения с вовлечением в патологический процесс костного мозга (лимфоидный, миелоидный, слабо дифференцированный и недифференцированный лейкозы с раз личными вариантами). Болезни второй группы (лимфо-, ретикулосаркома, лимфогрануле матоз) сопровождаются опухолевым ростом, первично проявляющимся в лимфоидной ткани (лимфоузлах, селезенке и других органах). Типично протекающий энзоотический лейкоз в терминальной стадии характеризуется потерей массы, анемией, снижением молочной продуктивности и увеличением одного или нескольких периферических лимфоузлов. Заболева ние неизменно заканчивается смертью животного через несколько недель или месяцев после проявления клинических признаков.
Патогенез. Патогенез при лейкозе коров изучен недостаточно, АГ вируса обнаружива ют только в лимфоцитах инфицированных животных после краткосрочного культивирова ния in vitro. Считают, что лимфоцитоз - результат поликлональной пролиферации В-лимфоцитов, постоянно стимулированных АГ ВЛКРС. Сравнительный анализ резуль татов изучения интерфероногенеза лейкоцитами крови у здорового, свободного от ВЛКРС, спонтанно инфицированного вирусом лейкоза с картиной крови в пределах физиологиче ской нормы, а также больного хроническим лимфоидньм лейкозом (ХЛЛ КРС), показал, что титры лейкоцитарного ингерферона в крови спонтанно инфицированных животных снижены в 1,3-2,9, a y больных ХХЛ- в 3,8-9,4 раза по сравнению с клинически здоровыми, свободными от ВЛКРС животными Проведенные исследования показывают, что ВЛКРС обладает иммунодефицитными свойствами, выраженными в данном случае снижением ин терфероногенеза в лейкоцитах крови.
Диагноз на лейкоз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических при знаков, патанатомических изменений и результатов лабораторных исследований, которые включают гематологические и гистологические, а также серологические исследования. Все формы лейкоза характеризуются увеличением в различной степени лимфоузлов. При лимфолейкозе они увеличены равномерно, не сращены с окружающими тканями, кап сула снимается легко, на разрезе узлы серо-белого цвета, сочные и саловидные. Лимфоузлы при лимфогранулематозе, лимфосаркоме и гистиоцитарной саркоме бугристые, капсула сращена с паренхимой, на разрезе часто обнаруживают кровоизлияния и некрозы, в органах брюшной, тазовой полостей, на серозных оболочках отмечают опухолевые разрастания уз лов в виде конгломератов серо-белого, желто-серого цвета. Селезенка при лимфоидном, слабодифференцированном и миелоидном лейкозах увеличена. При первых 2-х формах она буро-красного цвета с четко выраженной красной и белой пульпой за счет гиперплазии фол ликулов. В более поздней стадии болезни граница между белой и красной пульпой стерта. При миелоидном лейкозе селезенка красно-малинового цвета, фолликулы плохо заметны, а в отдельных участках отсутствуют, ткань рыхлой консистенции с кровоизлияниями. При лимфоретикулосаркоме селезенка не увеличена. При всех формах лейкоза отмечают очаго вые или диффузные разрастания серо-белого или серо-розового цвета в печени, почках, толще сердечной мышцы, органах пищеварения, матке, скелетных мышцах, диафрагме и др органах.
Взятие и подготовка материала. Для гематологического исследования кровь берут из яремной вены в пробирки с антикоагудянтом - 10 %-ном р-ром динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА, трилон В) из расчета 0,02 мл р-ра на 1 мл крови. Не разрешается брать кровь от животных за 15 дней до отела и 15 дней после него. Для сероло гического исследования кровь берут от животных в возрасте 6 мес. и старше В лабораторию в термосе со льдом направляют 5-6 мл сыворотки Для гисто- исследования ку сочки пораженных органов (селезенки, лимфоузлов, грудной кости, печени, почек, легких, сердца и правого ушка сердечной мышцы, стенки сычуга, матки и скелетных мышц) посы лают в свежем виде в термосе со льдом или в 10%-ном р-ре формалина.
Для определения вируса в различных материалах используют методы, позволяющие выявлять инфекционный вирус или вирусные АГ. Являясь типичным ретровирусом, ВЛКРС находится у инфицированных животных в форме провирусной ДНК, которую можно вы явить в лимфоцитах крови с помощью ПЦР или методами гибридизации нуклеиновых ки слот При культивировании инфицированных клеток вирус можно выявить с помощью элек тронного микроскопа или по образованию синцития в соответствующих индикаторных культурах.
Электронно-микроскопический метод. Позволяет выявлять вирусные частицы в крат косрочных культурах лейкоцитов крови животных, инфицированных ВЛКРС, и в монослойных культурах клеток, сокультивированных с инфицированными лимфоцитами. По некото рым данным, лейкоцитарные культуры (лейкоциты крови больных коров) через 48-72 ч представлены разнообразными клетками, среди которых находили лимфоциты и лимфобласты, продуцирующие вирусные частицы типа С. Зрелые вирионы имели ультраструктуру, типичную для онковируса типа С. Вирусные частицы находили, в основном, в межклеточ ных пространствах и на внешней мембране лимфоидных клеток. Методом ЭМ у больных лейкозом животных обнаруживают в лимфоцитах ядерные "карманы" в виде неправильного кольца и петли. Как правило, они обладают связью с оболочкой ядра и содержат цитоплазматическое вещество клетки. Иногда центральная часть их заполнена электроннолотными гранулами диаметром 4 нм, расположенными группами и напоминающими гранулы гликогена. Ядерные "карманы" отсутствуют в дифференцированных гранулоцитах, моноцитах и плазматических клетках, в одном лимфоците их обнаруживают 1-5 и более.
Тест синцитиеобразования. ТСО применяется для выявления инфекционного вируса в различных материалах и основан на способности ВЛКРС образовывать синцитии в некото рых нетрансформированных монослойных культурах клеток и в трансформированных пере виваемых культурах клеток СС81. Метод предложен для титрования ВЛКРС с использова нием кошачьей линии клеток S+L Показано, что инокуляция клеток вирусом лейкемии КРС приводит к образованию крупных многоядерных синцитиев, которые выявляются при ок рашивании монослоя. Метод можно использовать для титрования вируса, так как имеется прямо пропорциональная зависимость между уменьшением количества синцитиев и разведением вирусной суспензии. Метод является воспроизводимым, специфическим и чувстви тельным. Рекомендуют микромодификацию метода количественной титрации инфекционно го ВЛКРС, основанную на определении количества синцитиев в культуре эмбриональных клеток теленка, культивированной с лимфоцитами, зараженньми вирусами лейкемии КРС, или в присутствии вируса. Отмечена линейная зависимость между числом инокулированных в культуре клеток зараженных вирусом лейкоцитов и количеством индуцированных синци тиев. При сравнении чувствительности макро- и микрометода титрации число синцитиев в микрокультуре статистически не отличалось от числа синцитиев, индуцированных в макро культуре. Метод сокультивирования используется для выявления инфекционного ВЛКРС Суть его состоит в сокультивировании лимфоцитов крови и чувствительных клеток монослойной культуры с последующим выявлением АГ ВЛКРС с помощью ТСО, РИД или ИФА.
РДП (РИД). Это чувствительный тест для выявления гликолротеина ВЛКРС Позволяет выявлять гликопротеин вируса в концентрации 0,4 мкг/мл.
Биопроба. Инфицированных животных можно выявлять путем постановки биопробы на овцах. С этой целью овцам обычно внутрибрюшинно вводят цельную кровь испытуемого животного. При наличии в пробе крови вируса у овцы развивается инфекция, сопровож дающаяся образованием вирусспецифических AT. AT у зараженных овец выявляют в РДП с гликопротеинным АГ через 3-6 нед.
Реакция бласттрансформации. Хронический лимфоидный лейкоз КРС характеризует ся слабой реакцией бласттрансформации (РБТЛ). Поэтому у животных, подозрительных по заболеванию лейкозом по показателям лейкоцитов крови, проводят РБТЛ в культуре лим фоцитов крови Показатель РБТЛ выражает процент трансформировавшихся лимфоцитов (переходные клетки, бласты, митозы) и определяется после подсчета не менее 1000 клеток культуры У клинически здоровых и с нормальной гемограммой коров, по данным боль шинства исследователей, он составляет в среднем 60% (40-90%), у больных лимфолейкозом РБТЛ значительно снижена уже в субклинической стадии При повышенном содержании в крови общего количества лейкоцитов исследуют животных в РБТЛ Диагноз на лимфолей-коз считают подтвержденным при показателе РБТЛ не выше 35%. Если он выше, то поста новку реакции повторяют с интервалом 3 мес. у тех животных, у которых нарастают гемато логические изменения.
Гистологические исследования. Срезы готовят и окрашивают гематоксилин-эозином. При лимфоидном лейкозе наблюдают в селезенке и лимфоузлах стирание рисунка за счет диффузной инфильтрации клеток лимфоидного ряда, среди которых, в основном выявляют зрелые лимфоциты, в меньшем количе стве обнаруживают пролимфоциты, лимфобласты. В костном мозге строма сохранена, вы является значительное истончение и рассасывание балок, скопления лимфоцитов могут рас полагаться в виде очагов или диффузно, заполняя все костно-мозговые пространства (лимфоидная метаплазия), в почках, печени, сердце, сычуге и других органах обычно выявляют скопления лимфоцитов в просветах капилляров и инфильтрации лимфоидными клет ками интерстициальной ткани. При недифференцированном и слабо дифференцированном лейкозе (гемо-цитоблазтоз) в костном мозге, селезенке, лимфоузлах и других органах наблюдают очаговые и диффуз ные пролифераты, клеточный состав которых представлен недифференцированными или слабо дифференцированными клетками типа гемоцитобластов (родоначальная клетка).
Гематологический метод. Основан на обнаружении в периферической крови повы шенного количества лейкоцитов, в основном лимфоидного ряда, и слабодифференцирован ных клеток (родоначальных, пролимфоцитов, лимфобластов). Количество лейкоцитов под считывают с помощью электронного счетчика частиц или в камере Горяева и выводят лей коцитарную формулу. Животных, подозрительных по заболеванию лейкозом, подвергают дополнительньм гематологическим исследованиям с интервалом 2-3 мес. до получения 2-х подряд качественно одинаковых результатов, по которым их признают здоровыми или больными лейкозом. Следует иметь в виду, что некоторые острые и хронические болезни КРС (перикардиты, ретикулиты, гепатохолангиты, циррроз печени, туберкулез, бруцеллез и др. ) могут сопрово ждаться лейкоцитозом. При этом в отличие от лейкоза увеличение количества лейкоцитов крови происходит, в основоном, за счет найтрофилов, эозинофилов или моноцитов.
Число лейкоцитов в 1 мм3 крови здорового, подозрительного и больного лейкозом КРС
|
Возраст жи вотных-лет |
Число лейко тци товздоровых |
Абсолютное число лимфо цитов у подозрительных |
Число лимфоцитов у больных |
|
От 2 до 4 |
До 11000 |
От 8000 до 10000 |
Свыше 10000 |
|
От 4 до 6 |
До 10000 |
От 6500 до 9000 |
Свыше 9000 |
|
Старше 6 |
До 9000 |
Oт 5500 до 8000 |
Свыше 8000 |
Эти изменения крови имеют временный характер, их дифференцируют от лейкоза повторными гематологи-м исследованиями. Есть методика выделения мононуклеарных клеток из периферической крови инфицированного КРС и их культивирования репродукции инфекционного вируса лейкоза. Метод позволяет получать максимальный с инфицированных вирусом лейкоза лимфоцитов. Из 10 мл цельной крови получают примерно 107 мононуклеарных клеток. Чтобы максимизировать продукцию вирионов и вирус) АГ, к культуре лимфоцитов добавляют Кон-А в конечной концентрации 5 мг/мл.
Конкурентный радиоиммуноанализ (РИА). Наиболее чувствительный метод выявления р24-АГ в краткосрочных культурах лимфоцитов крови инфицированных животных. Метод заключается в том, что экстракт, приготовленный из 48-ч культуры лимфоцитов крови, исследуется на присутствие АГ р24 путем определения его способности предотвращать связывание меченого изотопом р24 со специфическими AT. Для диагностики инфекции ВЛКРС у телят младше 6-мес. возраста, которым выпаивали молозиво инфицированных матерей, а также у взрослых животных, иммунизированных убитым вирусом или вирусными АГ, необходимо использовать методы, основанные на прямом выявлении инфекционного вируса или вирусных АГ в культурах лимфоцитов крови исследуемых животных.
ПЦР. Дает возможность обнаруживать провирусную ДНК через 2 нед после заражения животных. Для амплификации в ПЦР использовали пары праймеров, соответствующих определенным участкам генов gog 24, env-gp5 или pol вируса лейкоза Метод позволяет идентифицировать одну копию генома вируса лейкоза на 100000 клеток крови. Сконцентрированные также праймеры для амплификации специфических для вируса лейкоза КРС последовательностей генов pol и рХ. С помощью этого набора праймеров удавалось амплифицировать и выявлять 10 копий ДНК вируса в присутствии в образце 1 мкг хромосомной ДНК. Доказана возможность использования нерадиоактивных зондов для выявления вируса лейкоза КРС в лимфоцитах периферической крови и клетках лимфосаркомы. Разработан метод ПЦР с последующей нерадиоактивной блот-гибридизацией для тестирования провируса лейкоза КРС в исследуе мом материале.
Серологическая идентификация
ИФ. Используют прямой и непрямой варианты при исследовании мазков крови и изме ненных органов, краткосрочных и перевиваемых культур крови и тканей. Непрямой вариант испытывали на концентрате с 80% живых лейкоцитов. В качестве AT применяли сыворотку больной лейкозом коровы и меченную ФИТЦ кроличью сыворотку против глобулинов быка. При микроскопии препаратов отмечена флюоресценция на поверхности лимфоцитов в виде яркого светящегося кольца или кольца из пунктиров. В препаратах из лейкоцитов здоровых животных подобного свечения не наблюдается или оно слабо выражено в некоторых клет ках Для объективной оценки препаратов рассчитывается индекс флюоресценции (ИФ) по формуле ИФ = (А - В) : А, где А - процент несветящихся клеток в контроле; В - процент не светящихся клеток в опыте. Положительной считается реакция, если ИФ свыше 0,2 ; сомни тельной - 0,11-0,2; отрицательной - ниже 0,1.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика. У животных, зараженных ВЛ КРС, вырабатываются AT к вирусным АГ, которые выявляются с помощью серологических реакции. Характерной особенностью инфекции ВЛКРС у КРС является, как правило, по жизненная персистенция вируса и вирусспецифических AT у больного животного. Поэтому серологические методы обнаружения специфических сывороточных AT являются наиболее практичными, экономичными и широко используемыми в диагностике онковирусной ин фекции у КРС. Серологическими методами ВЛКРС можно выявлять у животных старше 6 нес, так как у телят, выпаиваемых молозивом и молоком инфицированных ВЛКРС матерей, появляются пассивно приобретенные материнские AT, которые могут персистировать до 6-мес. возраста. У зараженных животных в крови циркулируют AT к нескольким структурньм белкам вируса. Однако диагностическое значение имеют AT против gp51 и р24 ВБЛ. Количественные соотношения AT анти-р24 и анти-gр51 могут коррелировать со стадией инфекционного процесса, но при этом, AT к gp51 появляются раньше и содержатся в более высоком титре, чем антитела к р24 и, следовательно, серологические реакции, на правленные на выявление aimi-gp51 - AT по со чувствительности будут превосходить аналоги, в которых используется в качестве АГ р24.
В научно-исследовательских лабораториях для обнаружения специфических AT исполь зуются РН, подавления раннего и позднего поликариоцитоза, нейтрализации псевдотипов и радиоиммуноанализ (РИА). Для эпизоотологического обследования, контроля и борьбы с ВБЛ-инфекцией широко применяют РИД и ИФА, для постановки кото рых выпускаются соответствующие коммерческие диагностические наборы. Все вышепере численные методы предназначены для выявления AT в индивидуальных пробах сыворотки. Для обнаружения AT в низких титрах, например, в индивидуальных пробах молока или в сывороточных пулах, иди в образцах, полученных из молочного танка, требуется высокая чувствительность РИА или ИФА. Разработан ряд серологических реакций для диагностики инфекции, таких как РИФ, РСК, РДП в геле, реакция агглютинации латекса (РАЛ), ELISA, РНГА и реакция нейтрализации псевдотипа (РНПТ).
РДП. Благодаря простоте, специфичности и достаточно высокой эффективности эта ре акция получила наибольшее применение с гликопротеинным АГ ВЛКРС. Из вируса, осаж денного методом ультрацентрифугирования культуральной жидкости краткосрочных культур лейкоцитов лейкозных животных, очищенного в градиенте плотности сахарозы и обра ботанного эфиром, получают АГ, который используют в РДП. С помощью этого АГ в сыво ротках крови инфицированных ВЛКРС животных выявляют ПА к внутреннему полипептиду вируса р24. РДП с гликопротеидным AT - более чувствительный метод выявления инфици рованных ВЛКРС животных, чем РДП с полипептидным АГ РДП (РИД) в геле агара, на правленная на выявление анти-gр51 AT, используется в качестве основного диагностическо го теста, регламентирующего международную и внутреннюю торговлю племенными живот ными, спермой и эмбрионами. При первичном обследовании сывороток крови одной РИД считается достаточно для объявления стада свободным от ВБЛ-инфекции. РИД приме няется в системе противолейкозных мероприятий в неблагополучных хозяйствах.
Специфические ПА к ВЛКРС появляются через 2 мес. после инфицирования и сохраня ются пожизненно. Для постановки РДП используют диагностический набор, в состав кото рого обязательно должны входить специфический АГ ВЛКРС, специфическая положитель ная сыворотка крови КРС Реакцию ставят макро- и микрометодами. Для изготовления АГ используют клеточную линию FLK-BLV. Из культуральной жидкости вирусный АГ выде ляют методом преципитации сульфатом аммония или полиэтиленгликолем. Но наиболее технологичным методом выделения вирусного АГ считают ультрафильтрацию на полупро ницаемых мембранах. На результат реакции иммунодиффузии влияют многие факторы ка чество АГ и контрольных сывороток, количественные соотношения АГ и AT, качество агаpa, pH и ионная сила буфера, температура, диаметр лунок и расстояние между ними. Для постановки РИД выпускают диагностические наборы. Они представляют собой наборы, состоящие из 2-8 препара тов. Обязательными компонентами каждого набора являются препараты тест-системы: ви русный АГ и антисыворотка, которые в результате специфического взаимодействия АГ (gp51 ВБЛ) и AT в процессе диффузии формируют в геле агара нерастворимый комплекс в виде опалесцирующей полосы. Дополнительно наборы могут комплектоваться сухой соле вой смесью агара, стерильным разбавителем для вирусного АГ и контрольньми сыворотка ми, которые поставляются в жидком или лиофилизированном виде. В последнем случае на боры комплектуют соответствующими разбавителями контрольных сывороток. Наборы рас считаны на 90-500 исследований и содержат 3-5 мл вирусного АГ.
РИД проходит в 0,8-1,0% геле агара, который готовят на трис-НС! или боратном буфе рах в диапазоне pH 7,2-8,6, содержащим 8-8,5% NaCl. Методика постановки реакции оди наковая для всех диагностикумов и предусматривает заполнение лунок АГ, антисывороткой и испытуемыми сыворотками по схеме 1:2:4 или 1:3:3. Принято 2 стандарта на диаметр лу нок и расстояние между ними: 1 вариант в странах ЕЭС, тогда как в США, Канаде и стра нах СНГ приняты параметры, соответствующие второму варианту.
Параметры лунок, рекомендуемые для постановки РИД
|
Показатели |
1 вар |
2 вар |
|
Диаметр центральной лунки для антигена мм |
4 |
7 |
|
Диаметр периферических лунок для сыворотки мм |
6 |
7 |
|
Расстояние между центральной и периферической лунками мм |
3 |
3 |
Минимальные необходимые требования, которым должен удовлетворять диагностиче ский набор, заключаются в следующем: АГ должен содержать оболочечный гликопротеин ВБЛ, стандартизованный по референтной сыворотке -1; референтная сыворотка Е-4, раз веденная отрицательной сывороткой в соотношении 1:10, должна быть выявлена как поло жительная без повторной постановки реакции или предварительной концентрации. Референтные сыворотки Е-1 и Е-4 изготовлены в Национальной ветеринарной лаборатории Да нии (P.O. Box 373, DK-1503 Copengagen) и предназначены для стандартизации всех диагно стических наборов для постановки РИД и ИФА. Реакцию учитывают через 48 ч и при следующих показаниях контролей: наличие четкой контрольной полосы преципитации между АГ и специфической положительной сывороткой и отсутствие таковой с отрицательной контрольной сывороткой. Животных, сыворотки которых положительно прореагировали в РДП, считают зараженными ВЛКРС.
Описаны модификация метода иммунодиффузии - усиленная танином непрямая двойная иммунодифузия в геле (НИД-Р) и её применение для выявления AT и АГ ВЛКРС. Со временная диагностика энзоотического лейкоза КРС основана большей частью на тестах иммунодифузии и ELISA. При использовании РИД необходимо придерживаться рекоменда ций производителя очень дорогого АГ. В целях снижения затрат при сохранении надежно сти результатов исследователи уменьшили размер отверстий в розетке и слой агара в чашке Петри, сохраняя прежнюю чувствительность теста.
Предложен метод очистки вируса лейкоза КРС в градиенте плотности перколла. Метод рекомендован для получения очищенного вируса и специфического АГ. Показано значительное преимущество РИД при исследовании молозива титр AT был в 8-32 раза выше, чем в пробах сыворотки крови, исследовать необходи мо первые порции молозива. Титр AT к gp51 и р24 ВЛ КРС сразу после отела был наивысшим – 1:2187- 1:59049 в ИФА и 116-1 512 в РДП. Через 1 сут. титр AT составлял 25% от исходного.
РАЛ. В качестве теста для прижизненной диагностики лейкоза КРС можно использо вать иммунохимическую реакцию агглютинации с латексом в соответствии с временными методическими рекомендациями Животные, сыворотки крови которых дали положитель ную реакцию агглютинации с латексом, подлежат тщательному обследованию на лейкоз другими методами. Реакция перспективна для прижизненной диагностики лейкозов Испытание показало в 67% случаев совпадение результатов с гематологиче скими и около 90% с гистологическими методами диагностики гемобластозов КРС.
ИФ. Менее широко применяют для обнаружения AT в сыворотках крови инфицирован ных животных. При этом используют в качестве клеток-мишеней перевиваемые культуры, хронически инфицированные ВЛКРС.
РНГА. Является чувствительным методом обнаружения AT в сыворотке крови и моло ке Рекомендуют использовать при экспертизе и санитарной оценке молока Наибольший процент совпадений гематологических показателей с результатами серологических исследо ваний был отмечен в РНГА.
ELISA. Широко применяют в США, Бельгии с использованием монАТ для широко масштабного выявления энзоотического лейкоза в стадах КРС. Чувствительность его выше чем РДП. Метод ELISA при диагностике лейкоза КРС может существенно повысить чувст вительность серодиагностики по сравнению с РДП Он удобен для систематического кон троля молока коров благополучных хозяйств. Существующие варианты ИФА включают 5 принципиальных этапов постановки реакции.
Аллергическая реакция. Разработан аллерген для диагностики лейкоза у животных. Для проведения аллергических реакций наиболее подходящее место хвостовая складка у овец и КРС и дорсальная поверхность уха у свиней.
Дифференциальный диагноз. Лейкоз необходимо отличать от актиномикоза, туберку леза, паратуберкулеза и бруцеллеза. При актиномикозе поражаются, главным образом, лимфоузлы головы и грудной области (подчелюстные, заглоточные, околоушные и др.). Они плотной консистенции, с инкапсулированными абсцессами. В центре актиномикозного ума (гранулемы) гистологически обнаруживают друзы гриба. При туберкулезе чаще пораженш в виде узелков, имеющих специфическое гистологическое строение, находятся в легких, кишечнике. Для паратуберкулеза характерно наличие изменений в кишечнике и брыжееч ных лимфоузлах. В кишечнике развиваются продуктивное воспаление и очаговые инфильт раты из эпителиоидных клеток, в результате чего стенка утолщается в 5 и более раз. В лимфоузлах отмечают обширные скопления из эпителиоидных элементов с наличием среди им гистиоцитов и клеток типа Лангерганса. Специфическим методом окраски выявляют бакте рии паратуберкулеза, локализующиеся в эпителиоидных и гигантских клетках. Бруцеллез диагностируют с помощью РСК, РА .
ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА
Проблема специфической профилактики лейкоза КРС не решена, хотя исследования в этой области продолжаются и по сегодняшний день. Против лейкоза КРС получена рекомбинантная вирусвакцина, содержащая генетическую информацию, кодирующую gp51 и gp30 поверхностного АГ. Также показана возможность вакцинации КРС против лейко за гетерологичными клетками млекопитающих, способными продуцировать оболочечные АГ ВЛКРС и его внутренний белок р24. Опубликованы результаты исследований по получению и использованию рекомбинантных вирусов осповакцины, включающих либо полный ген белка оболочки (env), либо толь ко фрагмент гена env с последовательностью, кодирующей гликопротеин gp51 env и часть gp30 ВЛКРС. Вакцинация овец рекомбинантными BLV-вакцинами, содержащими полный ген env, защищает овец от инфекции ВЛКРС, свидетельством чего служит отсутствие персистенции высоких титров анти-gp51-AT по сравнению с невакцинированными ВЛ инфициро ванными животными, ярковыраженная пролиферативная реакция клеток СД-4 вакциниро ванных овец на специфические синтетические пептиды gp51 ВЛКРС и отсутствие провируса ВЛКРС у вакцинированных животных спустя 4 мес. после заражения диким вирусом.
ВЕТЕРИНАРНО – САНТИТАРНАЯ ОЦЕНКА ПРОДУКЦИИ. При поражении мышц, л/у туши, паренхиматозных органов или при выявлении лейкозных разрастаний на серозных покровах туши её независимо от упитанности и продукты убоя утилизируют. При отсутствии паталогиеских изменений направляют образцы на бактериологическое исследование на сальмонеллёз. В случае обнаружения сальмонелл внутренние органы утилизируют, а тушу направляют на проварку. При отсутствие сальмонелл разрешается перерабатывать на варёные, варёно –копчёные колбасы , консервы или проварку.
ИНФЕКЦИОННАЯ АНЕМИЯ ЛОШАДЕЙ
Anemia infectiosa eqvorum (лат.); Eqvine infectious anemia (англ.);Anemia infectiuse du cheval (франц.)
Инфекционная анемия лошадей (ИНАН, болотная лихорадка) - вирусная болезнь одно копытных, характеризующаяся поражением кроветворных органов, преимущественно хроническим течением, рецидивирующей лихорадкой (в периоды обост рения) и анемий. До начала ХХ в. ИНАН регистрировалась во многих странах Европы, а также в США, Японии, Индии в виде эпизоотических вспышек. Наиболее широкое распространение она получила в период мировой войны, сопровождаясь высокой смертностью (до 80%). В по следнее время по данным МЭБ ИНАН встречается в США, Австралии, Японии, Индии, в Северной и Южной Африки, Европы.
Вирусную природу ИНАН лошадей впервые установили Карре и Балле в 1904-1906 гг.
Морфология и химический состав. Вирус имеет внешний оболочечный гликопротеин gp90 и трансмембранный гликопротеин gp45. В настоящее время консервативные эпитопы белков gp90 и gp45 служат основной целью поисков компонентов вакцины против ИНАН.
Вирус ИНАН имеет конический капсид длиной около 120 нм и шириной 60 и 20 нм со ответственно на широком и узком конце. В его структуре обнаружено 6 основных бел ков с мол.м. от 9 до 90 кДи 4 минорных полипептида. В состав наружного слоя оболочки вирионов входит 2 гликопротеина - gp90 и gp45.
Устойчивость. Вирус устойчив к действию трипсина, РНК- и ДНК-азы, чувствите лен к эфиру; термолабилен, при 60°С теряет вирулентность за 30 мин. Кипячение разрушает его через 1-2 мин, солнечные лучи инактивируют за 1-3 ч При 0°С до -2°С сохраняется до 3-х лет, в глицерине - 7 мес., в моче и навозной жиже - до 2,5 мес., в высушенной крови в комнатных условиях - 7 мес., в стерильной воде - до 160 дн. Инфицированное сено и паст бища безопасны через 9 мес. после заражения В осенне-зимний период в овсе вирус теряет патогенные свойства только через 8,5 мес. Устойчив к высушиванию и гниению. В лиофилизированном состоянии при комнатной температуре сохраняет вирулентность в течение 7 мес. Замораживание на его активность не влияет. При биотермической обработке навоза ви рус инактивируется через 30 дн, 2-4%-ный р-р NaOH убивает его за 20 мин, 35%-ный р-р креалина - через 30 мин, 20%-ная хлорно-известковая смесь, содержащая 29,5% активного хлора, обезвреживает вирус в сточных водах за 3 сут. Вирус относительно устойчив к воз действию химических средств. Глицерин частично инактивирует его в течение 4 нед и пол ностью - за 7 мес., 2%-ный р-р формалина инактивирует вирус за 5 мин, но через 5 мин можно реактивировать его р-ром аммиака.
Антигенная структура. У вируса ИНАН описаны 3 группы АГ р29, р12 и р14. АГ р29 представляет собой белок, обозначенный как G-AT Он находится внутри вириона, освобо ждается при обработке вируса эфиром, является общим для всех штаммов вируса ИНАН и обнаруживается в РСК, РДП и РИФ Помимо общего специфического G-AT, вирус содержит поверхностные АГ р12 и р14, различающиеся в опытах перекрестного заражения гомологичными и гетерологичными штаммами. Кроме 2-х негликолизированных вирусных пептидов (р29 и р12), вирионы ИНАН со держат гликопротеины gp77/79 (основной гликопротеин вириона) и gpl0 AT вирусной обо лочки gp77/79 ответственен за продукцию ВНА и подвержен АГ-изменчивости под влияни ем AT. Установлено, что наиболее АГ- активная область белка gp45 (оболочечного гликопротеина) располагается на аминном конце и лежит между гидрофобными доменами слия ния и трансмембранным доменом . В состав сердцевины вирионов входит 4 негликолизированных белка (р26, р15, р11, р9), однако основная масса состоит из белков р26 и р15. Известно, что штаммы возбудителя ИНАН различаются в 1 РН и перекрестной защиты на лошадях. Установлено, что в процессе инфекции происходят изменения поверхностных АГ вируса, что сопровождается появлением антигенных вариан тов, т.е. большое разнообразие вариантов вируса ИНАН может генерироваться в организме инфицированных животных. Установлено быстрое появление новых АГ вариантов ви руса в процессе персистентной инфекции. Существенная изменчивость генов поверхностных гликопротеинов gp20 и gp45 в процессе инфекции у одного и того же животного выявляется с помощью монАТ.
Антигенная вариабельность и родство. Штаммы вируса ИНАН, выделенные в раз личных частях земного шара, в АГ-отношении идентичны Они различаются в РН, но име ют общий АГ, выявляемый в РСК, РЗСК и РДП Помимо того, вирус ИНАН дает перекрест ные серологические реакции с вирусом ВИЧ (СПИД), но не дает таких перекрестов со всеми другими ретровирусами животных. У лошадей, экспериментально зараженных клонирован ным вирусом ИНАН, развивается хронически протекающая болезнь с периодическими ре цидивами лихорадки, сопровождающаяся виремией. Изоляты вируса, выделенные во врем приступов лихорадки, были неодинаковы по АГ-свойствам и отличались друг от друга в РН и ЭФ-ПААГ, но не в РСК и РДП.
Локализация вируса. Вирус проникает в организм восприимчивых животных, глав ным образом, парентерально и разносится по всем органам и тканям. Особенно интенсивно размножается в костном мозге и крови, вызывая угнетение эритропоэза и гемолиз части эритроцитов во время приступа лихорадки. Наиболее высокие титры вируса наблюдают у зараженных лошадей во время первого подъема температуры. Затем титр вируса снижается, но в период повышения температуры вновь возрастает. У лошадей без симптомов болезни титр вируса низкий, иногда его даже невозможно выявить (в культуре лейкоцитов). ИНАН - лимфопролиферативная болезнь с непрерывной виремией при наличии AT. Это можно объ яснить повреждением лимфоцитов, вызванным вирусом, в результате чего защитный кле точный иммунный процесс нарушается. Возбудитель в крови находится в виде комплекса вирус-АТ. У большинства лошадей наблюдают гипергаммаглобулинемию и снижение в сы воротке крови количества комплемента С-3. При изучении локализации вирусного АГ с по мощью ИФ у экспериментально зараженных лошадей установлено следующее. Через 6-38 дн. после заражения животных АГ обнаруживали в цитоплазме клеток селезенки, лимфоуз лов, печени, почек, легких, костного мозга, зобной железы, головного мозга, мозжечка, ги пофиза и желудка. Он обычно находился в единичных клетках или в макрофагах в виде не больших капелек, включенных в цитоплазму.
Вирусовыделение. Из организма больной лошади вирус выделяется с мочой, калом, носовой слизью, секретом конъюнктивы, молоком. Загрязненные выделениями больных корма, навоз и другие субстраты могут быть факторами передачи инфекции.
Антигенная активность. У инфицированных лошадей образуются AT к гликопротеинам оболочки и мажорному протеину сердцевины (р26) вирионов Однако гликопротеины оболочки вирионов очень вариабельны, что является одним из основных механизмов защи ты возбудителя от элиминирующего воздействия факторов иммунитета. В организме инфи цированных лошадей в процессе персистенции возбудителя образуется большое количество различающихся по гликопротеину антигенных вариантов вируса КСА у больных животных впервые обнаружены в 1966 г. Сыворотка экспериментально зараженных лошадей стано вится положительной в РСК с 14-го по 29-й день после инокуляции и удерживается в таком значении в течение нескольких недель Величину КС-титра у больных животных можно разделить на 4 стадии предшествующую - перед развитием AT, раннюю - увеличение титра с высоким плато, снижающую - с уменьшением титра, и позднюю стадии болезни. Специфические ПА появляются в крови лошадей в течение 45 дн. после заражения Ос новные симптомы болезни, включая анемию, тромбоцитонемию и гломерулит, являются следствием развития специфического иммунного ответа. ПА к группоспецифическому АГ выявляют РИД, используя АГ из зараженные культур клеток или тканей селезенки или из очищенного вируса ПА обнаруживают на 14-38-й день после заражения; они могут со храняться до 7 лет. Преципитины более постоянно обнаруживают в сыворотках крови хро нически больных животных. В селезенке больных лошадей выявлен АГ, участвующий в ре акции преципитации с AT сыворотки крови больных животных. Сыворотка крови заражен ных лошадей содержит антивирусные AT, реагирующие как в РСК, так и в РЗСК Выделен ный IgG реагировал в РСК, в то время как иммуноглобулин IgG(T) ингибировал РСК и свя зывался в РЗСК В РЗСК AT выявляли с 28-го по 120-й день после заражения животного.
АГ детерминанты для индукции ВНА расположены в вариабельной области gp90. Основная гуморальная реакция направлена против высоко АГ домена, представленного 83 аминокислотами. Низкие титры ВНА и высокий уровень антигликопротеинной активности сывороток свидетельствует о том, что иммунный ответ направлен прежде всего не на ней трализующие эпитопы, а на вирусные гликопротеины. Большинство иммуногенных сайтов на поверхности вириона не чувствительно к нейтрализации. Нейтрализующей активностью обладает фракция IgG, которую обнаруживают через 40 дн после заражения животного. У некоторых лошадей она сохраняется в течение всей болезни и действует на поверхностные АГ вириона, т. е. реагирует с типо-, но не группоспецифическим компонентом вируса ИНАН. Опыты показали, что 99% инфекционного вируса циркулирует в сыворотке больных живот ных в комплексе с AT .
Экспериментальная инфекция. Подкожное или внутривенное введение 20-50 мл, а часто даже 0,01 мл крови или сыворотки, вызывает у лошадей, в частности у жеребят, через 9-93 дня остро или хронически протекающую болезнь или только вирусоносительство. Заражение per os удается с трудом даже при введении массивных доз вируса. Требуется по вторная дача большого количества инфицированных крови или мочи. Ослов и мулов заразить искусственно удает ся не всегда Удавалось заражать свиней, в их организме вирус находился 30-197 дн.
Культивирование. Вирусразвивается в переживающей ткани селезенки, надпо чечников и лимфоузлов жеребят, в культурах эмбриональных тканей лошади, но без при знаков ЦПД, в культуре клеток лошадиных лейкоцитов, а также клеточной линии кожи лошади.
ГА свойства. Вирус обладает ГА активностью в отношении эритроцитов морской свин ки ГА АГ вируса типоспецифичны и отличаются от АГ, выявляемых в РН. ГА не отделим от вирусных частиц. Рецепторы эритроцитов разрушаются протеолитическими ферментами и формальдегидом, но устойчивы к нейраминидазе, дезоксихолату натрия и перйодату ка лия. В сыворотке больных лошадей содержатся анти-ГА. В РТГА вирус каждого штамма ингибируется только гомологичной антисывороткой. Появление в сыворотках крови анти-ГА предшествует появлению у них ВНА. Вирус ИНАН адсорбируется на лошадиных эрит роцитах, гемолиз их происходит после инкубации со свежей сывороткой крови лошади или морских свинок при 37°С Эритроциты, обработанные 4 ед. ГА и неразведенной свежей сы вороткой лошади, лизируются на 20%, в то время как при обработке 4 ед комплемента морской свинки - на 100%. Специфическая сыворотка лошади подавляет способность вируса агглютинировать эритроциты, но гемолиз не тормозит. Добавление специфической сыво ротки к вирусу, уже прикрепившемуся на эритроцитах, усиливает гемолиз.
Гемадсорбирующие свойства. Наблюдали адсорбцию эритроцитов морской свинки на инфицированной вирусом культуре клеток кожно-мышечной ткани эмбриона лошади.
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные лошади. Осо бенно опасны животные в период острого течения болезни и хроники в период обострения болезни, так как в это время вирус в организме лошадей находится в наибольшей концен трации. Источниками инфекции могут быть также лошади с латентными формами болезни. Вирусоносительство у них может продолжаться 7-10 и даже 18 лет. Необходимо также учитывать возможность распространения возбудителя лошадьми при латентном течении инфекции. Факторами передачи возбудителя могут быть загрязненные выделениями боль ной лошади корма, вода, навоз, предметы ухода и т.д. В организме восприимчивого живот ного вирус попадает через кожу, слизистые оболочки и ЖКТ. Последний путь заражения, по наблюдениям многих авторов, не считается ведущим. Заражение ИНАН возможно при случке и конгенитально - жеребят больными кобылами. Передача вируса может про изойти при проведении различных манипуляций с кровью, шприцем, при маллеинизации, искусственном осеменении и т.д.. Однако основной путь переноса возбудителя от боль ных лошадей к здоровым - кровососущие насекомые: слепни, мухи-жигалки, комары, а так же от кобылы к жеребенку - внутриутробно или с молоком. Установ лено заражение при совместном содержании животных.
ИНАН характеризуется выраженной стационарностью, сезонностью и определенным ареалом. Болезнь чаще встречается в летне-осеннее время, в лесисто-болотистых с кислыми неполноценными почвами, в период массового размножения и лета жалящих насекомых (гнус). Массовое заболевание лошадей наблюдают преимущественно в годы с жарким и су хим летом, а зимой и весной и в горных местностях - в виде спорадических случаев. Эпизо отия может продолжаться от 3-5 мес. до 1-2 лет, протекая остро и подостро. Затем начинает преобладать хроническое (медленное) и латентное течение. Факторы, ослабляющие резистентность животного, - неполноценное кормление и сильное раздражение нерв ной системы животного, вызванное укусами кровососущих насекомых.
Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях болеют лошади всех возрастов и пород, а также ослы и мулы Заболевшие жеребята часто погиба ют. Ослы более устойчивы к вирусу ИНАН.
Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Болезнь развивается после периода инкубации в течение от 15 дн. до нескольких недель в природных условиях и от 10 до 20 дн. в эксперименте. Различают сверхострое, или септицемическое, острое, подострое и хроническое или латентное течение анемии. В развитии болезни характерна опреде ленная цикличность с чередованием периодов обострения (рецидивов) и затухания (ремис сий), что создает в конечном счете большое многообразие ее форм.
При сверхостром течении отмечают быстрый подъем температуры тела, геморрагиче ский гастроэнтерит, асфиксию, сердечную слабость, атаксию, параличи задних конечностей и гибель животных через несколько часов или 1-2 дня.
Острое течение болезни также характеризуется лихорадкой (41-42°С), угнетением или легким возбуждением, гиперемией и отеком конъюнктивы и слизистой оболочки носовой и ротовой полостей, нарушением сердечной деятельности, иногда кровавым поносом, исхуда нием при сохраненном аппетите, набуханием и бледностью с наличием кровоизлияний обо лочек третьего века, отеками в области живота, препуция, конечностей, шаткостью походки, одышкой, быстрым развитием анемии. Кровь становится водянистой (разжижение), количе ство эритроцитов падает до 1 млн. в 1 см3. В крови появляются комплексы "инфекционный вирус - антитело" и отложение их в клубочках почек. Количество гемоглобина сни жается до 20-30%, СОЭ ускорена (70-80 делений в первые 15 мин), отмечается гипергам-маглобулинемия и тромбоцитопения. В церебральной жидкости регистрируют увеличение количества белка и белых клеток крови. Продолжительность болезни 1-3 нед, иногда месяц, и животные погибают.
Подострое течение болезни длится 2-3 мес., сопровождается ремиссирующей лихорад кой и такими же симптомами в период рецидива, что и при остром течении. В период ре миссии указанные признаки постепенно исчезают, и животные выглядят здоровыми. Чем чаще и продолжительнее приступы лихорадки, тем быстрее истощаются защитные силы ор ганизма, и животные в конце концов погибают.
Хроническое течение болезни чаще является продолжением подострого течения Оно отличается чередованием лихорадочных периодов (через 1-3 дн.) и продолжительными пе риодами покоя (ремиссии) - до нескольких месяцев. Во время рецидивов наблюдаются те же симптомы, что и при остром течении болезни: утомляемость, одышка, сердцебиение, потли вость, тремор мышц, исхудание В период ремиссий они исчезают.
Латентное течение ИНАН наблюдается обычно в стационарно неблагополучных пунк тах у резистентных лошадей. Для него характерны резкие и кратковременные подъемы температуры. Такие животные внешне кажутся здоровыми, но являются вирусоносителями представляют большую опасность для окружающего поголовья, служат источником возбудителя инфекции. Болезнь может длиться годами, проявляясь иногда лишь заметным исхуданием, быстрым утомлением и учащенным сердцебиением на работе и при быстрой езде. Персистенция вируса в организме таких внешне здоровых животных может наблюдаться на протяжении 18 лет.
Патологические изменения варьируют в зависимости от тяжести и продолжительности течения болезни. Отмечают выраженный геморрагический диатез в виде многочисленных кровоизлияний на слизистых, серозных оболочках и в паренхиме органов, увеличение селезенки и лимфоузлов, дистрофические изменения в паренхиматозных органах. Картина вскрытия после острого течения болезни характеризуется септическими явлениями. Наблю дают (непостоянно) исхудание животного, желтушные оттенки слизистых оболочек глаз, но са, рта, с точечными кровоизлияниями, наиболее часто на третьем веке и слизистых губ. Подкожная и межмышечная клетчатка желтушна, пронизана кровоизлияниями, местами имеет студневидные серозно-геморрагические инфильтраты. Лимфоузлы, особенно пор тальные и почечные, набухшие, сочны, покрасневшие, окружающая их ткань отечна. Ске летные мышцы крестца и крупа кое-где серого или глинистого цвета, на разрезе рисунок сглажен. Селезенка сильно увеличена (спленомегалия), кровенаполнена, с кровоизлияниям под капсулой, пульпа дряблая. Печень увеличена, дрябловата, мозаичного цвета. Почки уве личены, бледны, усеяны кровоизлияниями, граница слоев стушевана. Сердце увеличено, миокард серого или серо-глинистого цвета. В ЖКТ геморрагическое воспаление слизистой оболочки с кровотечением в полость. В легких кровоизлияния под плерву и в паренхиму. Кровь водянистая, светло-красного (алого) цвета. В головном и спинном мозге иногда нахо дят полнокровие, кровоизлияния, отек и дряблость мозгового вещества.
Патологоанатомические изменения после хронического течения болезни характеризуют ся отсутствием выраженных септических явлений, истощением, бледностью и желтушностью слизистых оболочек, наличием мелких кровоизлияний на серозных покровах кишеч ника, сердца и в подкожной клетчатке, студневидных отеков клетчатки конечностей, под грудка и брюшных стенок, увеличением селезенки и лимфоузлов, их плотной консистенци ей Печень увеличена, плотная, имеет мускатный рисунок на разрезе. Почки увеличены, плотны, серо-желтоватого цвета Миокард в состоянии зернистой и жировой дистрофии с очагами склероза (серо-белые участки).
После латентного течения болезни в трупах не обнаруживают характерных изменений Иногда отмечают изменение цвета селезенки (пульпа ее приобретает светло-красное окра шивание), следы старых кровоизлияний (пигментные пятна) на эндокарде, под серозньми оболочками и очаговые некрозы миокарда.
Гистологические изменения. Наиболее характерны и постоянны изменения со сторо ны мезенхимы в виде пролиферации клеток мононуклеарно-макрофагальной системы и на рушения обмена железа (гемосидерина). При остром течении болезни уже через 11-12 дн. после заражения в селезенке отмечают сильное инфильтрирование ткани незрелыми эрит роцитами, уменьшение количества гемосидерина и хаотичное его расположение по всей пульпе, а не в присинусных зонах (как это бывает в норме), атрофию лимфофолликулов, набухание и пролиферацию ретикулярных клеток, увеличение числа лимфобластов, эозинофильных гранулоцитов.
Патогенез. Патогенез изучен недостаточно. Вирус, проникая в организм восприим чивого животного парентерально с кровью, широко распространяется по органам и тканям. Чаще всего он выявляется в селезенке, лимфоузлах и печени. Методом ФА АГ вируса четко определяется в цитоплазме макрофагов в виде зерен или гранул. Возбудитель размножается в эритроцитах крови и кроветворных клетках костного мозга, сильно наводняя органы и ткани больного животного, достигая максимума в крови в период лихорадки. В это время он легко выявляется различными методами. В то же время в период ремиссии вирус можно обнаружить лишь путем заражения здоровой лошади. Наибо лее характерный признак болезни - анемия - сопровождается резким уменьшением количе ства эритроцитов, гемоглобина, разжижением крови, ухудшением её свертываемости. Со гласно современным представлениям, анемия может быть обусловлена двумя механизмами. Первый механизм связан с непосредственным действием вируса на кроветворный орган -костный мозг, вызывая угнетение его деятельности, нарушение эритропоэза, лизис эритро цитов, снижение (или прекращение) усвоения железа Второй механизм, который считают главным в формировании анемии, связан с образованием противовирусных AT.
Показано, что 3-я фракция комплемента (СЗ) и AT, синтезирующиеся в организме в от вет на проникновение вируса, покрывают зараженные эритроциты лошади, из-за чего по следние становятся хрупкими, быстро и в большом количестве разрушаются и фагоцитируются макрофагами. Вирус вызывает раздражение клеток ретикулоэндотелия, вследствие чего происходит интенсивная пролиферация и накопление клеток мононуклеарно-макрофагальной системы в селезенке, печени, почках и других органах Селезенка утрачивает способность перерабатывать погибшие эритроциты, и эту функцию берут на себя дру гие органы, в клетках которых откладывается большое количество гемосидерина. Исследо вание пунктатов костного мозга показывает, что основной симптом болезни - анемия - воз никает вследствие угнетения эритропоэза, а также лизиса эритроцитов, подвергшихся воз действию вируса и фагоцитированных клетками РЭС. При остром течении болезни эригробластическая группа клеток уменьшается с 40 до 4,6%, а гистиоцитарная группа, клетки которой, обладая фагоцитарной функцией, пожирают эритроциты, увеличивается с 31 да 40%. Считают, что в развитии анемии играет роль снижение деятельности костного мозга.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз на ИНАН ставят комплексно Учитывают эпизоотологические особенности бо лезни, результаты клинического, гематологического и лабораторного исследований, патологоанатомические и гистологические изменения. Эпизоотологические данные собирают непо средственно в хозяйстве, учитывая давность и характер болезни, пути заноса инфекции, ди намику заболеваемости и падежа лошадей за несколько предшествующих лет. Принимают во внимание, что массовые вспышки ИНАН наблюдаются исключительно летом и осенью, а спорадические случаи - в любое время года. Кроме традиционного подсчета эритроцитов, убедительным диагностическим методом является подсчет числа звездчатых лейкоцитов.
При клиническом обследовании учитывают различия в течении болезни, рецидивирующий тип лихорадки при подострой и хронической анемиях, кровоизлияния на слизистых оболочках, исхудание при нормальном аппетите, шаткость зада, отеки, повышенную возбу димость сердца (аритмия, учащение пульса) Повышенную возбудимость сердца устанавливают функциональной пробой: пробег 50 м, подсчет пульса каждые 5 сек в течение 0,5 мин. Результат от деления первой цифры подсчета на последнюю цифру у больных анемией ло шадей должен составлять 2,5-3. Гематологическим исследованием обнаруживают лимфоцитоз, анемию (уменьшение числа эритроцитов в 4-8 раз по сравнению с нормой), увеличен ную СОЭ Убедительным диагностическим тестом является подсчет звездчатых лейкоцитов. Из патоморфологических изменений для острого течения болезни наиболее характерными являются бледность и желтушность слизистых и серозных покровов и подкожной клетчатки, точечные геморрагии в конъюнктиву, слизистую оболочку носа, увеличение селезенки, пе чени, почек, усиление пролиферации лимфоидных клеток и гистиоцитов в этих органах и отложение гемосидерина в печени при одновременном уменьшении количества его в селе зенке. Указанные изменения наблюдают в период рецидива болезни. В хронических случаях характерными признаками являются почти полное отсутствие гемосидерина в селезенке и накопление его в других органах, гломерулонефрит, эндо- и миокардит, интенсивная лимфоидно-гистиоцитарная реакция в селезенке, лимфоузлах, печени, почках в сочетании с некродистрофическими изменениями паренхиматозных клеток. Из серологических реакции для диагностики ИНАН вначале была предложена РСК, в которой первоначально использо вали AT, полученный из селезенки больной лошади, а затем культуральный.
Взятие и подготовка материала. В лабораторию направляют для серологического ис следования 5-6 мл сыворотки крови лошадей, которую консервируют мертиолятом 1:10000 или путем добавления антибиотиков (пенициллина и стрептомицина по 1000 ЕД/мл) и хра нят при температуре 4-8°С. Сыворотки без консерванта хранят в замороженном состоянии. Для гематологического исследования направляют 10-12 мл. крови, стабилизированной 20%-ным р-ром лимоннокислого натрия. Кровь берут до поения и кормления животного. Дм гистологического исследования берут кусочки печени, селезенки, сердца, легких, лимфоуз лов и почек от павших или убитых с диагностической целью лошадей. Материал помещают в 10%-ный р-р формалина. Толщина кусочков не должна превышать 2 см. Для постановки биопробы на жеребятах берут по 300-500 мл крови от наиболее подозрительных по заболе ванию ИНАН лошадей во время подъема температуры.
Индикация и идентификация вируса. Биопроба. В сомнительных случаях для проверки особо ценных лошадей ставят био пробу на жеребятах. При исследовании сывороток лошадей-продуцентов ставят групповую биопробу. С этой целью из благополучного хозяйства берут 2-х жеребят в возрасте 6-12 мес., 4-кратно, с интервалом 7 дн, их обследуют клинико-гематологически и серологически. За тем жеребят заражают сывороткой крови или плазмой, полученной от больных лошадей Сыворотку крови и плазму предварительно проверяют на стерильность (на МПА, МПБ и МЛПБ) и безвредность (на 3-х белых мышах, вводя ее подкожно или внутривенно в дозе 1 мл.). Сыворотку вводят жеребятам подкожно или внутривенно в дозе 100-200 мл, дефибринированную кровь - только подкожно в той же дозе. За зараженными животными наблю дают 90 дн, через каждые 10-15 дн проводят гематологические и серологические (в РДП) исследования. Биологическую пробу считают положительной при наличии у зараженных жеребят ха рактерных клинических симптомов, рецидивирующей лихорадки, слабости, бледности или желтушности слизистых оболочек, исхудания и при получении положительных результатов серологических и гематологических исследований. Жеребят, давших сомнительные резуль таты клинико-гематологических и серологических исследований, убивают и исследуют патологоанатомически и гистологически. При положительном результате обнаруживают серозно-геморрагическую инфильтрацию подкожной и межмышечной клетчатки, гиперемию и отек лимфоузлов, зернистую или жировую дистрофию скелетных мышц, миокарда, почек. Селезенка сильно увеличена вследствие кровенаполнения пульпы. Печень гиперемирована, увеличена, с выраженной дольчатостью на разрезе, паренхима имеет мускатный рисунок. Во всех органах появляется реакция ретикулоэндотелиоза. Биопробу считают отрицательной при отсутствии у подопытных жеребят симптомов болезни, отрицательных результатов се рологических и гематологических исследований. Групповую биопробу проводят путем за ражения двух жеребят смесью сыворотки (плазмы) крови 10-15 лошадей-продуцентов. Смесь вводят подкожно по 100-200 мл каждому жеребенку
Гистологические исследования. Приготовленные срезы органов окрашивают гематоксилин-эозином общепринятым методом. Срезы для исследования на гемосидерин окраши вают по Перлсу. Характер и степень изменений зависят от стадии болезни, количества ре цидивов, ремиссий и их продолжительности. Наиболее характерные изменения выражены в печени и селезенке. При остром течении болезни в капиллярах печени - скопление гистио цитов, макрофагов и лимфоидных клеток. В макрофагах и клетках Купфера – гемосидерин. Печеночные клетки в состоянии жировой или зернистой дистрофии. В селезенке красная пульпа переполнена кровью, количество гемосидерина резко снижено или, наоборот, крове наполнение слабое, а фолликулы гиперплазированы, количество гемосидерина в норме или несколько выше. В почках и сердце - гиперемия, кровоизлияния, серозный отек интерстиция, слабые пролифераты гистиоцитарных лимфоидных клеток, жировая или зернистая дис трофия, иногда небольшие отложения гемосидерина в эндотелиальных клетках и гистиоцитах. Лимфоузлы гиперемированы, с кровоизлияниями. Под плеврой - кровоизлияния.
Гематологические исследования. Включают определение количества гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, СОЭ, лейкоцитарной формулы У больных животных отмечается лимфоцитоз, особенно при подостром и хроническом течениях болезни СОЭ резко увели чена, особенно в первые 15 мин (60-70 делений). Исследование крови проводят через каж дые 3 дн. во время приступов лихорадки и не реже 1 раза в 10 дн. в период ремиссий. Коли чество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в камере Горяева (или в электронном счет чике) по общепринятой методике. Гемоглобин определяют по общепринятому методу гемометром Сали, полученный результат выражают в процентах. При анализе лейкоцитарной формулы следует учитывать, что у здоровых жеребят в возрасте до 4-6 мес. может иногда наблюдаться повышенный процент лимфоцитов (до 60 %). В начале болезни при первом подъеме температуры резкие отклонения от нормы количества эритроцитов и процента гемоглобина, как правило, отсутствуют. У хронически больных ИНАН животных эти показатели восстанавливаются до нормы, а СОЭ остается повышенной. В качестве дополнительных методов диагностики ИНАН используют исследование костномозгового пунктата в динамике болезни - наиболее характерные изменения появляются во время лихо радки резко уменьшается количество клеток эритробластической группы и увеличивается количество клеток гистиоцитарно-моноцитарной группы. Во время длительных ремиссий при хроническом течении болезни состояние клеток костного мозга не отличается от таково го у здоровых лошадей.
|
Вид исследований |
Здоровые лошади нормаль ной упитанности |
Больные ИНАН |
|
Эритроциты, млн/мм3 |
5-9 |
4,5 и ниже |
|
Гемоглобин, г% |
7,6 |
5,0 и ниже |
|
СОЭ, делений за 1 ч |
45-60 |
66 и более |
|
Лейкоциты, тыс/мм3 |
7-10 |
Без изменений |
|
Лимфоциты, % |
25-35 |
60-75 |
Определяют количество сидероцитов в периферической крови, которое увеличивается с приступами лихорадки в течение 3-4 дн. и часто продолжает нарастать после снижения температуры тела. При рецидивах количество сидероцитов достигает 2 тыс. и более на 10 тыс. лейкоцитов в 1 мм3 крови, у лошадей с незначительной реакцией повышение числа си дероцитов иногда является единственным ранним показателем заболевания ИНАН. Опреде ляют количества гамма-глобулина в сыворотке крови, содержание которого у больных ло шадей резко возрастает, а отношение между альбуминовой и глобулиновой фракциями по нижается. Делают биопсию - прижизненное извлечение кусочков печени с последующим гистологическим исследованием.
ИФ. В 1970 г. японские исследователи разработали метод непрямой ИФ для идентифи кации вируса ИНАН лошадей в культурах лейкоцитов лошади. Для этого используют цель ную сыворотку крови лошади или очищенную фракцию иммуноглобулинов Метод эффек тивен только при высокой концентрации вируса. С его помощью можно проследить дина мику репродукции вируса в инфицированной клетке.
Серодиагностика и ретроспективная диагностика
РДП. Реакция нашла широкое применение в бывшем СССР. Она выявляет AT к вирусу в сыворотке крови при остром, хроническом и латентном течении инфекции. Помимо селе зенки от больных животных в качестве АГ можно использовать вирус ИНАН, культивируе мый в культуре лейкоцитов лошадей и инактивированный твином-80 и эфиром. В СНГ да РДП биопромышленность выпускает диагностикум.
РСК. Одна из первых серологических реакций, предложенных для диагностики ИНАЯ Японскими исследователями показано, что вирус, полученный в культуре лейкоцитов, мож но использовать в качестве АГ в РСК с сыворотками больных ИНАН лошадей КСА появ лялись у 79,1% экспериментально зараженных лошадей через 17-40 дн. после введения им вируса, у 78,2% - через 7-20 дн. после появления первой температурной реакции, у некото рых больных лошадей титр AT возрастал непосредственно перед температурной реакцией или сразу после нее AT в крови больных лошадей обнаруживали от 2 до 60 дн. Вторично 1 крови больных они не выявлялись.
РТГА. В отличие от РДП РТГА - более простой метод количественного определения AT к вирусу ИНАН. Авторы обнаруживали анти-ГА в крови жеребят одновременно с AT, выяв ляемыми в РДП. РТГА проводили в объеме 0,1 мл с 0,2%-ной взвесью эритроцитов морской свинки и 4 ГАЕ вируса. Перед постановкой ее сыворотки прогревают и адсорбируют активированным углем. В качестве АГ служит концентрированная вируссодержащая культуральная жидкость. Для культивирования вируса используют субкультуру кожно-мышечной ткани эмбриона лошади.
НИФ. Установлена возможность использовать ее для определения AT к вирусу ИНАН 5-го дня после заражения монослоя дермальных клеток очаги концентрации АГ в виде ярких пятен флюоресценции располагались внутри цитоплазмы в околоядерной области и мели диаметр 0,5-3 мкм. Тест ИФ выявляет более низкие уровни AT, чем РДП.
ELISA. Разработан ELISA с очищенным вирусньм протеином Р26 в качестве АГ с онъюгатом, реагирующим с IgG лошадей Источником вируса служит сокультура перевиваемой линии дермальных клеток лошади, персистентно инфицированная вирусом, и клеток почки эмбриона лошади. Обработка АГ в аффинной хроматографии позволяет освободиться от появления неспецифических линий преципитации в РДП и повышает специфичность. Сказался более чувствительным и эффективным по сравнению с РСК и РДП Титр AT, выявляемый методом, был в 1-2 тыс раз выше, чем в РДП, и в 4 раза выше, чем в РСК . Наибольшая корреляция между 2-мя тестами отмечена на 21-й день и позднее после поражения AT в ELISA удается обнаружить через 1-4 г после заражения. Метод предложено использовать и для определения вирусного АГ, а также для оценки качества вакцин. С 1983 г. в США диагностика ИНАН осуществляется конкурентным ИФА.
Дифференциальная диагностика. При постановке диагноза на ИНАН следует исключить пироплазмоз, нутталиоз, трипаносомоз, лептоспироз, грипп, ринопневмонию. Для пироплазмоза характерна сезонность: апрель-май или август-сентябрь. Болезнь протекает остро, при исследовании крови обнару живают пироплазмы. При нутталиозе максимум больных выявляют в июне. Болезнь проте кает остро и подостро. В крови находят нутталии. У лошадей, больных гемоспоридиозами, наблюдается резкая желтушность слизистых оболочек, имеющая стойкий характер, при ЖАН она отсутствует. При гемоспоридиозах с первых же дней наблюдается резкое учаще ние дыхания - одышка (отек легких), у больных ИНАН со стороны органов дыхания, как правило, особых отклонений от нормы нет Наконец, при гемоспоридиозах у жеребят бо лезнь протекает латентно, а при ИНАН - тяжело, сопровождаясь высокой смертностью. Леп тоспироз исключается на основании исследования сывороток крови больных по реакции микроагглютинации и лизиса, отсутствия лейкоцитоза и наличию лептоспир в моче Болез ни вирусной этиологии (грипп, ринопневмония) отличаются от ИНАН высокой контагиозностыо, быстрым распространением, коротким течением При диагностике этих болезней применяют лабораторные методы выделение вируса на КЭ и культурах клеток и дальнейшая их идентификация в серологических реакциях. Характерным симптомом гриппа лоша дей является сухой резкий кашель, вирус ринопневмонии вызывает у жеребых кобыл абор ты во второй половине жеребости Однако отличием абортов, вызванных вирусом риноп невмонии, является отсутствие повышения температуры тела в день аборта и после него. Аборты, причиной которых служит ИНАН, происходят во время лихорадки или выражен ной анемии и истощения.
Иммунитет изучен недостаточно Долгое время затяжной характер течения ИНАН и длительное переживание (персистенция) возбудителя в организме животных объясняли на рушением или снижением иммунной реакции организма на вирус. И лишь исследованиями последних 2-х десятилетий были обнаружены в сыворотке крови больных лошадей КСА, ПА, ВНА и ИФ AT. AT выявляют в период между 14-120-м дн. по сле заражения, а иногда и на протяжении всей жизни животного. Однако связь между AT и степенью невосприимчивости лошадей к вирусу выяснена недостаточно. Так, образующиеся ВНА не способны предотвратить рецидивы болезни или нейтрализовать вирус. Последние, покрывая эритроциты, способствуют их быстрому разрушению, вызывая анемию. Установ лено, что 99% инфекционного вируса ИНАН, циркулирующего в крови, связано с AT в виде комплексов "АГ-АТ". Недавно японские исследователи, изучая действие иммунодепрессантов на лошадей, зараженных вирусом ИНАН, пришли к выводу, что иммунитет при этой болезни обусловлен функцией лимфоцитов. Показано также, что вирус ИНАН в процессе длительного персистирования в организме лошади значительно изменяет свои биологические свойства, что ставит под сомнение возможность эффективной вакцинации против этой болезни. В последнее время ведут интенсивные исследования по созданию вакцинных препаратов.
Ветеринарно – санитарная оценка – больных и подозрительных по данному заболеванию на убой на пищевые цели не допускается.
СОДЕРЖАНИЕ
Семейства: Herpesviridae…………………………………….3
Flaviviridae……………………………….……..24
Retroviridae……………………………………..53
Список рекомендуемой для студентов монографической литературы по теме лекций.
Бакулов И.А., Ведерников В.А., Семенихин А.Л. Эпизоотология с микробиологией. М. Колос. 1997.
Частная эпизоотология. Под редакцией С.Н. Вышелесского. М.ОГИЗ. 1948.
Гутира Ф., Марек И., Маннингер Р., Мочи И. Частная патология и терапия домашних животных.М. ГИСЛ.1961.
Жданов В.М., Гайдамович С.Я. Общая и частная вирусология. М. Медицина.1982.
Луговцев В.Ю, Васильев Д.А. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных. УГСХА. Ульяновск 2002.
Лурия С. и др. Общая вирусология. М. Мир. 1981.
Методы вирусологии и молекулярной биологии. М. Мир. 1972.
Малоизвестные заразные болезни животных. М. Колос 1973.
Николау.Ш.С. и др. Элементы общей инфрамикробиологии. Бухарест 1965.
Эпизоотология. Под ред. Сосова Р.Ф. М. Колос 1984.
Сюрин В., Белоусова Р., Фомина. Н. Диагностика вирусных болезней животных. М. Агропромиздат 1991.
Сюрин В., Самуйленко А и др. Вирусные болезни животных. М.ВНИТИБП.1998.
Гусев В. Вирусные и бактериальные болезни у обезьян. Калуга. Контур.1998.
Фелнер Ф., и др. Биология вирусов животных. М. Мир.1977.
Ющюк. Н., Венгеров Ю. Лекции по инфекционным болезням. М. ВУНМЦ. 1999.
«Курс лекций по частной вирусологии»
Часть первая Б– «Вирусы вызывающие болезни жвачных и однокопытных»
учебное пособие
подготовлено - Васильевым Д.А, Луговцевым В.Ю.