Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Сложные методы окраски фиксированных препаратов
метод Грама(дифференциальный) |
метод Циля-Нильсена (дифференциальный) |
метод Бурри-Гинса (цитохимический) |
|
|
цель метода |
Выявление грамположительных и грамотрицательных бактерий |
Выявление кислотоустойчивых и некислотоустойчивых бактерий |
Выявление капсулы у бактерий в чистой культуре |
|
основной краситель |
карболовый раствор генцианвиолета |
карболовый раствор фуксина |
не окрашивается, применяется оттеняющее вещество - тушь |
|
протрава |
раствор Люголя (после окрашивания) |
карболовая кислота (в момент окрашивания) |
- |
|
дифференцирующее вещество |
этанол |
серная кислота |
- |
|
дополнительный краситель |
разбавленный карболовый раствор фуксина |
водный раствор метиленового синего |
карболовый раствор фуксина |
|
способ фиксации препарата-мазка |
в пламени спиртовки до окрашивания |
в пламени спиртовки в процессе окраски |
в пламени спиртовки (в этаноле) до окрашивания |
|
этапы окраски |
Окрасить раствором генцианвиолета 1 мин. (или с бумажкой – 3 мин.); Нанести на мазок раствор Люголя – 1 мин.; Промыть в этаноле 30 сек.; Промыть водой; Окрасить раствором фуксина 1 мин. (или с бумажкой – 5 мин.); Промыть водой; Высушить |
Окрашивать карболовым раствором фуксина (фуксин Циля) через фильтровальную бумажку при осторожном нагревании над пламенем спиртовки 3 раза до появления паров белого цвета; Промыть в 5% серной кислоте; Промыть водой; Окрасить раствором метиленового синего 1 мин.; Промыть водой; Высушить |
В каплю туши добавить каплю жидкости с микроорганизмами и растереть тонким слоем как мазок крови; Высушить и зафиксировать; Окрасить фуксином Циля 1 мин.; Высушить |
|
сущность метода |
Генцианвиолет образует комплекс с тейхоевыми кислотами в присутствии Люголя, который задерживается многослойным пептидогликаном у грамположительных бактерий |
При частичном гидролизе клеточной стенки фуксин взаимодействует с миколовыми кислотами и образует комплекс в присутствии фенола |
Капсула не окрашивается, задерживает тушь на поверхности, а фуксин окрашивает бактериальную клетку |
|
микроскопическая картина (рисунок с пояснением) |
|
метод Ожешко (цитохимический) |
метод Пешкова (цитохимический) |
метод Нейссера (цитохимический) |
метод Романовского-Гимзы (универсальный) |
|
|
цель метода |
Выявление спор у бактерий |
Выявление клеточной стенки бактерий |
Выявление включений - зёрен волютина |
Дифференциальное окрашивание отдельных групп м/о и выявление нуклеоида |
|
основной краситель |
фуксин Циля |
водный раствор фуксина |
раствор уксуснокислой синьки |
краситель Романовского-Гимзы (азур, эозин, метиленовый синий) |
|
протрава |
соляная кислота (до окр.), карболовая кислота (в момент окр.) |
раствор танина |
раствор Люголя |
соляная кислота |
|
дифференцирующее вещество |
серная кислота |
- |
- |
- |
|
дополнительный краситель |
водный раствор метиленового синего |
- |
раствор везувина |
- |
|
способ фиксации препарата-мазка |
в пламени спиртовки в процессе окраски |
в жидкости Карнуа 15 мин. перед окрашиванием и промывают водой |
в пламени спиртовки до окрашивания |
в жидкости Карнуа 15 мин. перед окрашиванием |
|
этапы окраски |
На высушенный мазок наложить фильтровальную бумажку, налить 0,5% раствор соляной кислоты и нагревать над пламенем спиртовки до появления пара 3 раза; Далее окрашивать по Цилю-Нильсену. |
Мазок протравливать в 10% водном растворе танина 6-8 мин.; Промыть водой; Окрашивать водным раствором фуксина 30-60 сек.; Высушить |
Окрасть уксуснокислой синькой 1 мин.; Промыть водой; Обработать раствором Люголя 30 сек.; Окрасить везувином 30 сек.; Промыть водой Высушить |
Провести кислотный гидролиз в растворе соляной кислоты при нагревании; Промыть водой; Окрашивают краской Романовского-Гимзы 40-60 мин.; Промыть водой; Высушить |
|
сущность метода |
Внутренние оболочки споры содержат большое количество липидов, которые придают ей свойство кислотоустойчивости |
Танин уплотняет клеточную стенку бактерий, и большая часть фуксина задерживается в ней |
Включения волютина содержат полифосфаты и имеют слабощелочной рН и окрашиваются синькой, которая закрепляется Люголем, цитоплазма имеет кислый рН и окрашивается везувином |
Азур и метиленовый синий окрашивают участки клетки со слабощелочным рН, эозин с кислым |
|
микроскопическая картина (рисунок с пояснением) |
|
Грамположительные -_______________________ фиолетовые;
Грамотрицательные -_______________________
красные
Кислотоустойчивые -________________________
красные;
некислотоустойчивые -________________________
синие
Споры –красные; вегет. клетки -синие
КС –красная; цитоплазма -розовая
Зерна волютина –темносиние; цитоплазма - желтая
Нуклеоид – сине-фиолетовый; цитоплазма - розовая