Будь умным!


У вас вопросы?
У нас ответы:) SamZan.net

Импорт белков в ядро клетки

Работа добавлена на сайт samzan.net:

Поможем написать учебную работу

Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.

Предоплата всего

от 25%

Подписываем

договор

Выберите тип работы:

Скидка 25% при заказе до 9.11.2024

Билет 9.

1.Импорт белков в ядро клетки.

Ядерный поровый комплекс – супрамолекулярная структура с молекулярной массой более 125 мДа (у позвоночных), состоящая из более 1000 белков.

Строение ядерной поры:

Ядерные поры —сложно устроенные, многофункциональные регулируемые структуры, организованные приблизительно 30 белками — нуклеопоринами.Коровая часть-заякорена в ядерной оболочке, состоит из восьми доменов, ограничена цитоплазматическим и ядерным кольцами.

Пассивный транспорт

Разные молекулы-разная скорость.

Через ядерную оболочку беспрепятственно в обе стороны происходит пассивный транспорт высокомолекулярных соединений, имеющих массу не более 5 кДа ( в Википедии проходят до 50, 60-70 уже активно)

Активный транспорт

Путём активного транспорта через ядерные поры могут проходить гораздо более крупные молекулы и целые надмолекулярные комплексы (рибосомные субчастицы, например). Причем одни белки должны поступать в ядро конститутивно (например, гистоны), а другие в ответ на определенные стимулы (например, транскрипционные факторы).

Белки должны обладать сигнальными последовательностями. Самая распространенная- NLS- один или два участка положительно заряженных аминокислот, аргинина и лизина.

Впервые аминокислотные последовательности ядерной локализации (NLS) были обнаружены на С-конце субъединиц нуклеоплазмина (ядерный белок, принимающий участие в структуризации хроматина). Если удалить примерно 50 аминокислот с С-конца, то ни весь нуклеоплазмин, ни его мономеры в ядро не попадают.

Транслокация белков в ядро, в отличие от транслокации в митохондрии и ЭПР, не сопровождается отщеплением этой сигнальной последовательности и разворачиванием полипептидной цепи!

Белок с NLS проходит в ядро в несколько этапов:

1) Связывание NLS с рецептором, импортинами (α и β) и закрепление на цитоплазматических филаментах порового комплекса;

2) Постепенный проход этого комплекса через пору (импортины якобы разрыхляют пространство внутри поры);

3) Импортин β связывается с белком RAN (малая ГТФаза, гидролиз ГТФ делает этот процесс необратимым), происходит распад комплекса (NLS не отщепляется). Импортины возвращаются в цитоплазму (β-импортин в составе с RAN).

2.Определение аминокислотной последовательности белков с помощью секвенаторов.

Секвенирование по Эдману (1960).

  1.  Необходимо разорвать все дисульфидные связи и защитить цистеины от повторного замыкания, всё очень хорошо почистить.
  2.  ФИТЦ (фенилизотиоцианат, мощный электрофильный агент) реагирует с незаряженной N-концевой аминокислотой в слабощелочных условиях, формируя ФТК-производное (фенилтиокарбомоил-производное).

Побочная реакция- в присутствии кислорода ФТК- производное пептидов десульфируется и не расщепляется. Также возможно блокирование аминогруппы альдегидами, находящимися в растворе с образованием основания Шиффа

  1.  При нагревании в безводной кислой среде происходит перестройка, циклизация продукта и отщепление пептида с образованием анилино-тиозолинон-производного и освобождении альфа аминогруппы.

Проблема здесь: если следующая аминокислота глутамин, то возможно превращение в пироглутамин, блокируется дальнейшая деградация.

А в случае связи Asn-Gly происходит образование циклического имида,затем альфа,бета-транспептидация, в итоге Эдман также блокируется.

Аминогруппа треонина серина легко гидролизуется в водной среде.Побочные реакии по остаткам аргинина и гистидина.

  1.  Анилино-тиазолинон экстрагируют из органического растворителя и добавляют к раствору водной кислоты, где формируется фенил-тиогидантоин – устойчивое производное аминокислоты, которое можно регистрировать с помощью хроматографии.

Существует большое число аналогов ФИТЦ, которые образуют тиогидантоины, обладающие рядом преимуществ по сравнению с ФТГ.

Наибольшее распространение получил (ДАБИТЦ). 

В 1976 Эдманом и Бэггом был создан прототип автоматического жидкофазного секвенатора, где реакции были стандартизированы, был исключён контакт образца (нанесён на твёрдую подложку из квадрола (нековалентно связан)) с воздухом, что привело к увеличению выхода реакции отщепления до 95%.

Далее группой под руководством Ларсена было придумана иммобилизация белка через различные боковые радикалы (в том числе по С-концу) на полистирольную матрицу (ковалентная иммобилизация).

В 1981 году Худ и Ханкепиллер сконструировали газофазный секвенатор. Хитрая конструкция позволила значительно уменьшить расход реактивов, растворителей и исследуемого образца белка (до 100-500 пмоль).

Подробнее – со стр. 57 учебника Овчинникова.

 3.N- и O-гликозилирование белков в гликопротеинах.

Гликопротеины – белки, содержащие ковалентно связанный углеводный компонент. Делят на 2 класса по количеству связанных олигосахаридных цепочек: протеогликаны – количество олигосахаридных цепочек многократно превышает пептидную часть; собственно гликопротеины – сладенького понемножку.

  1.  N-гликопротеины

Углеводный остаток присоединяется к амидному азоту остатка аспарагина (желательна непосредственная близость гидроксиаминокислот). Первым моносахаридным звеном обычно оказывается N-ацетилглюкозамин, так что «узел» присоединения имеет следующую структуру:

N-гликозидная связь легко расщепляется в кислой среде,

В гликопротеинах этого типа к остатку аспарагина присоединен олигосахарид, в котором к «узловому» остатку N ацетилглюкозамина присоединен еще один остаток N-ацетилглюкозамина, далее следуют несколько остатков маннозы, галактозы, нейраминовой кислоты, фукозы и др.

Биосинтез N-гликопротеинов происходит в шероховатом ретикулуме, причём на амидную группу Asn переносится сразу большой-большой олигосахарид, включающий глюкозу, маннозу, ацетилглюкозамин, который подвергается процессингу (обязательное удаление глюкозы и удаление/добавление других сахаров).

Остается ядро, к которому присоединяются другие сахара.

Дальнейшие реакции специфичны, вот как пример

N-гликозилирование характерно для секреторных белков, попадающих в ЭПР, хотя оно не является непременной предпосылкой секреции.

  1.  O-гликопротеины

Углеводный остаток присоединяется к оксигруппе Ser или Thr (однозначного сиквенса для гликозилирования нет). Первый моносахарид – N-ацетилгалактозамин.

Биосинтез ступенчатый, всё по порядку, количество моносахаридов не такое большое. О-гликозилирование свойственно веществам, определяющим группу крови (муцины).

Углеводный компонент почти никогда не входит в состав каталитического центра, наличие гликозилирования обычно не влияет на скорость ферментативной реакции. Зато олигосахариды в составе гликопротеинов участвуют в процессах межклеточного узнавания, дифференциации, трансформации клеток, связывании гормонов с рецепторными белками.




1. Иван III внешняя и внутренняя политика
2. Минская городская ратуша административное здание в центре Минска построено в 1600 году первоначально о
3. Гражданскоправовой способ защиты ~ возмещение имущественного ущерба автору или иному правообладателю
4. Роль российских политических партий в современных условиях
5. 1 Начальник отдела кадров относится к категории руководителей
6. Реферат- Популярные услуги INTERNET
7. Статья- Тристан и Изольда- миф и символы
8. Мы Они; общность происхождения; совместный исторический путь предков близость расовых или возникающих
9. Транзисторные инверторы
10. Англия во время правления Георга V
11. Квалифицированное убийство
12. Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого МНОГОПРОФИЛЬНЫЙ КОЛЛЕДЖ ГУМАНИТ
13. Национально-религиозная тема и христианские мотивы в
14. Сахалин первые проекты по Соглашению о разделе прдукции СРП в России К области на островах приковано вни
15. Такая классификация основана на механизмах с помощью которых перемещаются подвижные элементы
16. Конспект лекційПолітологія як наука її місце в системі гуманітарних наук
17. Формальная логика
18. Реферат- Вивчення порушень моторної функції товстої кишки в діагностиці, лікуванні та прогнозуванні гострого перитоніту
19. . Предмет философии и ее функции в обществе
20. Пируватдекарбоксилаза комплексі ішкі мембранада орналас~ан- митохондрияны~ 2