Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Качественные методы гельминтоовоскопии
Просмотр препаратов (исследование) производят при малом увеличении микроскопа: объектив Х8 – Х10, окуляр Х7-Х10. Только в сомнительных случаях используют объектив - Х40. При просмотре яиц с прозрачной оболочкой необходимо затемнить поле зрения микроскопа.
На одном предметном стекле готовят две капли взвеси фекалий на расстоянии 3-4 см друг от друга, используя разные палочки для фекалий.
Этот метод мало эффективен, особенно при слабой инвазии. Метод используют как дополнительный к другим методам.
1. Квадратные пластинки целлофана (22х30 мм)выдержать в феноле, затем в смеси дистиллированной воды (100 мл) + глицерин (100 мл) + 3% малахит зеленый (1 мл)24 часа. ГЛИЦЕРИН ОБЕЗВОЖИВАЕТ ПЛАСТИНКУ ЦЕЛЛОФАНА, ФЕНОЛ ОБЕЗЖИРИВАЕТ, МАЛАХИТ ОКРАШИВАЕТ ПЛАСТИНКУ В ЗЕЛЕНЫЙ ЦВЕТ. Использование такой пластинки улучшает наблюдение яиц в нативном препарате. Препарат обезвоживается и обезжиривается, за счёт этого просветляется, яйца окрашиваются малахитовым зелёным и лучше видны среди фекальной массы.
2. Крупинку фекалий намазать на стеклянную пластинку (25х35 мм)- препарат мутный, яйца трудно различать, т.к. они окрашены пигментом фекалий в желто-коричневый цвет.
3. Накрыть влажной целлофановой пластинкой(препарат обезвоживается, обезжиривается и просветляется, яйца окрашиваются в зеленоватый цвет. Препарат легче изучать).
4. С помощью предметного стекла или биохимической пробочки притереть целлофан.
5. Препарат выдержать в течение часа при комнатной температуре.
6. Затем выдержать 30 минут в сушильном шкафу при 400С.
7. Исследовать.
С помощью этого метода можно исследовать большой объём фекалий в препарате. Наиболее точный метод. Позволяет определить яйца, цисты паразитов при незначительной инвазии.
В результате в пробирке образуется три слоя взвеси.
5. Два верхних слоя слить.
6. К осадку добавить воду, встряхнуть.
7. Центрифугировать.
8. Исследовать 2 капли осадка при увеличении микроскопа 7Х10.
С помощью этого метода можно исследовать яйца всех гельминтов.
Этот метод основан на свойстве яиц гельминтов - всплывать в насыщенных солевых растворах (350 г поваренной соли + 1литр кипяченой воды = фильтровать через марлю). Используется раствор имеющий плотность большую, чем яйца гельминтов(яйца легче). Более плотные истинные солевые растворы.
Удельный вес раствора составляет 1,18. Раствор добавлять постепенно.
Яйца гельминтов, имеющих меньший удельный вес, чем раствор всплывут на поверхность.
С помощью этого метода нельзя обнаружить яйца Trematoda и неоплодотворенные яйца Ascaris. Яйца этих гельминтов и яйца Trichuris trichiura можно обнаружить в осадке. Поэтому надо изучать не только надосадочную плёнку,но и осадок.
5. Метод Калантарян (видоизменённый метод флотации - всплывания)
Этот метод основан на свойстве яиц гельминтов всплывать в насыщенных растворах (NaNO3 + вода ). Удельный вес раствора – 1,4, выше чем имеет раствор поваренной соли.
2. Прокипятить.
Через 10-15 минут яйца всплывут на поверхность.
3.С поверхности смеси снять проволочной петлей (диаметр – 1 см) несколько капель и перенести на предметное стекло.
4. Покрыть покровным стеклом и исследовать.
Исследование осадка при этом методе не требуется (яйца Trematoda всплывают).
Можно использовать калиевую соль, аммиачную селитру, смесь солей.
Детергент (моющее или чистящее средство) – «Лотос», «Экстра» и т.д.
В результате образуется 3 слоя взвеси. Яйца концентрируются над нижним слоем.
3. Приготовить 2-3 препарата после центрифугирования или взять пипеткой с поверхности нижнего слоя.
4. Исследовать.
7. Метод закручивания (метод Шульмана).
1. Фекалии (2-3 г) поместить в стеклянный стакан.
2. Добавить воды (10-15 г) или 0,85% раствор хлорида натрия.
3. Тщательно размешать стеклянной палочкой.
4. Вращать палочкой по центру.
5. Быстро вынуть и поставить на предметное стекло.
В стекающей капле концентрируются яйца или личинки гельминтов (благодаря центростремительной силе вращения).
При исследованиях также обнаруживаются «транзитные» яйца гельминтов (фасциолы,ланцетовидного сосальщиков) и об этом нужно помнить.
- 3 -