Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Билет №12
1. Неферментативные посттрансляционные модификации белков. ???
Глики́рование, или неферментати́вное гликозили́рование, — реакция Майяра, происходящая с участием белков организма. В процессе этой реакции между восстанавливающей (открытой) формой сахара крови или клетки (глюкоза, фруктоза и др.) и амино-группами белков (лизина или N-концевой амино-группы) образуется продукт Амадори, или фруктозамин, который в процессе дальнейших реакций и преобразований превращается в т.н. «поздние продукты гликирования».
Влияние гликирования на работу белков
Гликирование многих белков способно нарушать их функционирование и приводить к патологическим последствиям. Гликирование гемоглобина (HbA1c) широко используется как кумулятивный показатель содержания глюкозы в крови при диагностике диабета.
2. Образование пептидной связи: методы смешанных ангидридов и активированных эфиров, карбодимидный и карбоксиангидридный методы конденсации.
Методы создания пептидной связи
Образование пептидной связи в общем сводится к отщеплению
элементов воды.
Для того чтобы сделать эту реакцию возможной и, более того, обеспечить ее высокую скорость и полноту, необходимо ≪активировать≫ карбоксильную группу. Такая активация должна сводиться
к увеличению электрофильности карбонильного углерода (С6 + ).
Как легко видеть, важная роль в этом случае принадлежит группе X', которая в конечном счете определяет эффективность активации. Методы конденсации обычно и различаются природой группы X'.
1)Методы смешанных ангидридов аминокислот.
Хлорангидридный метод. Хлорангидридный метод, упоминавшийся в историческом очерке, в настоящее время применяется редко, так как сопровождается рацемизацией и образованием по- бочных продуктов. Хлорангидриды получаются обычно обработкой производных аминокислот и пептидов хлористым тионилом или пятихлористым фосфором.
Азидный метод. Метод Т. Курциуса находит широкое применение в синтезе пептидов.
Гидразиды получаются либо прямым гидразинолизом эфиров защищенных аминокислот или пептидов, либо из защищенных гидразидов (—СО—NH—NH—Z—, —СО—NH—NH—Вое и т. д.). Пе-
ревод в азиды осуществляется обработкой водным раствором нитрита натрия в кислой среде при —5 °С или действием изоамилнитрита или трет-бутилнитрита при —20 °С в органическом раство-
рителе (модификация Хонцля и Рудингера, 1961). Азиды можно получать и непосредственно из НООС-производных с помощью дифенилфосфорилазида N3PO(OC6H5)2, применяемого в качестве
конденсирующего агента (в частности, для получения циклопептидов).
Азидный метод не свободен от недостатков. Основная побочная реакция — перегруппировка Курциуса:
Направление и степень протекания этой перегруппировки определяется структурой азида и условиями реакции. Хотя при азидной конденсации рацемизация сведена к минимуму, ее нельзя не учитывать, особенно при блочном синтезе; в качестве основания рекомендуется использовать не триэтиламин-, а N-метилморфолин или N-этилдиизопропиламин.
Более распространенным является применение смешанных ангидридов, в частности с производными угольной кислоты, получаемых
с помощью изобутилхлоркарбоната (Р. Воган, 1951).
2)Метод активированных эфиров. Среди арильных активированных эфиров наиболее широко используются п-нитрофениловые (—ONp) (M. Боданский, 1956), 2,4-динитрофениловые, о-нитрофениловые и о-нитротиофениловые, 2,4,5-трихлорфениловые (—ОТср), пентахлорфениловые (—ОРср). Особое значение приобрели недавно предложенные Л. Кишфалуди высокореакционноспособные пентафторфениловые эфиры (—OPfp). Ариловые
эфиры этих типов получаются обычно из соответствующих фенолов с помощью карбодиимида.
В последние годы большое распространение получили активированные эфиры на основе производных гидроксиламина, и прежде всего N-гидроксисукцинимидные эфиры, например:
3)Карбодиимидный метод. Первой стадией реакции является активирование карбоксильного компонента путем образования реакционноспособного производного О-ацилизомочевины.
Производное 0-ацилизомочевины превращается в пептид непосредственно или через соответствующий симметричный ангидрид. Главным побочным процессом является О -*• N-ацильный сдвиг, приводящий к получению нереакционноспособных побочных продуктов — N-ацилизомочевин.
4) Карбоксиангидридный метод. В 1966 г. Р. Хиршман предложил использовать для направленного синтеза пептидов в водной среде N-карбоксиангидриды (NCA, ангидриды Лейкса, оксазолидиндионы). Суть предложенного им приема заключается в точном регулировании рН среды: конденсация N-карбоксиангидрида с аминокислотой проводится при рН 10,2, при подкислении осуществляется N-декарбоксилирование производных карбаминовой кислоты, и за-
тем цикл реакций повторяется (иногда такой прием обозначаетс как ≪рН-весы≫). Этим методом, в котором построение цепи ведется от С- к N-концу, Р. Хиршман получил весьма длинные пептидныефрагменты S-белка рибонуклеазы.
Но в лекции Иванова к карбоксиангидридному методу приведена такая реакция:
3. Химическая модификация остатков цистеина в белке.
Протонированная форма
Депротонированная форма
Это то, что было на лекции как-то бегло и мутно.
Вот что-то толковое из учебника:
С помощью химической модификации можно также увеличивать число гидролизуемых трипсином связей. Для этой цели, в частности, используется аминоэтилирование остатков цистеина этиле-нимином (Л. Линдлей, 1956):
Пептидные связи, образованные карбоксильной группой S-((З-аминоэтил) цистеина, являющегося структурным аналогом лизина, способны расщепляться под действием трипсина, однако с меньшей скоростью, чем связи, образованные остатками лизина и аргинина. Более полного расщепления можно достичь увеличением концентрации фермента и продолжительности гидролиза.