Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Вирусология. 1 занятие
Характеристика основных свойств вирусов
1. Имеют крайне малые размеры, измеряются в нанометрах. 1 нм – 0,001 мкм. Есть мелкие и крупные вирусы. Мелкие – энтеровирусы, вирус ящура. Крупные вирусы – вирусы оспы. Как правило, вирусы не видны в световой микроскоп за некоторыми редкими исключениями.
2. Не имеют клеточного строения.
3. Генетический материал вирусов – 1 или2-х нитчатая ДНК или 1 или 2-х нитчатая РНК.
4. Вирусы – строгие внутриклеточные паразиты. Проявляют свойства живых существ только внутри клетки хозяина. Предпочитают молодые, делящиеся клетки.
5. Не имеют собственного обмена веществ. Размножаются за счет клетки хозяина.
6. Тип размножения вирусов является дизъюнктивным – разобщенным.
7. В организме хозяина размножаются и поражают строго определенные ткани. Такое предпочтение определенных тканей называют тропизмом вирусов.
8. Поражая определенные ткани, вирусы образуют в этих тканях тельца-включения (цитоплазматические или внутриядерные)
9. Вирусы, как правило, не боятся замораживания, консервируются замораживанием.
10. Вирусы не боятся антибиотиков.
11. Вирусы, как правило, боятся нагревания, кипячения и гниения.
12. Вне живой клетки вирусы существуют в виде вирионов, кристаллизуются.
Морфология и строение вирионов. Формы вирионов, размеры вирусов и способы их измерения.
В клетках живых организмов вирусы представлены чаще всего в виде скоплений не связанных между собой молекул (или частей молекул) вирусной РНК или ДНК. Перед выходом из клетки вирусы формируются в виде отдельных оформленных частиц – вирионов. Вирион состоит из полной или неполной молекулы нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), плотно одетой капсомерами – плотно уложенными белковыми молекулами. Совокупность капсомеров – составляет капсид, а вместе с нуклеиновой кислотой – нуклеокапсид. С химической точки зрения – нуклеопротеид.
Вирионы некоторых вирусов (вирусов животных), кроме нуклеокапсида имеют еще внешнюю или суперкапсидную оболочку, возникающую путем захвата части оболочки клетки при выходе из нее вирионов. Встречаются вирусы, в вирионах которых образуется еще одна, промежуточная М-оболочка, состоящая из липидов и белков (например, это вирусы гриппа). Капсид, суперкапсид. М-оболочка – защитные оболочки вируса. Нуклеиновые кислоты – генетический. наследственный материал вируса.
Имеется три способа укладки капсомеров: 1 со спиральным типом симметрии. В соответствии с этим вирионы имеют палочковидную, нитевидную, овальную или пулевидную форму – вирус бешенства, табачной мозаики, ортомиксовирусы. 2. С кубическим типом симметрии – капсомеры уложены так, что образуют форму многогранника, чаще икосаэдра
У некоторых вирусов нет четко выраженной симметрии – вирус оспы.
3. Комбинированный тип симметрии – имеется у бактериофагов (вирусов бактерий).
Размеры вирусов от 10 (энтеровирусы) до 350 нм (оспенные вирусы), что меньше половины длины волны видимого света. Поэтому они не видны в световой микроскоп.
Методы измерения вирусов при электронной микроскопии – чаще всего сравнительные, т.е. по сравнению со сфотографированными вместе с вирионами кристаллами заведомо известного размера.
Примеры вирусных болезней. Пути передачи вирусных болезней (примеры). Понятие о тропизме вирусов.
Вирусы различаются по использованию т.н. входных ворот инфекции. Различны также пути распространения вируса в организме, места его размножения и пути выделения.
Возбудители респираторных инфекций – коронавирусы, вирусы гриппа, парагриппа используют в качестве входных ворот дыхательные пути. путь передачи болезни - воздушно-капельный. Размножаются они в легких и клетках верхних дыхательных путей и называются пневмотропными
Энтеровирусы, парвовирусы – возбудители кишечных инфекций в качестве входных ворот используют пищеварительный тракт. Пищевой путь передачи. Размножаются в кишечнике, называются энтеротропными.
Аденовирусы – возбудители вирусного гепатита, вирусного гепатита утят - также попадают в организм через пищеварительный тракт. Путь передачи пищевой, водный. Размножаются вирусы во внутренних органах – в печени. Называются висцеротропными.
Рабдовирусы – возбудитель бешенства. Попадает в организм после укуса бешеного животного при ослюнении зараженной слюной травмированных тканей. Путь передачи – контактный. Распространяется по нервным путям, размножается в мозге. Называется, соответственно нейротропными.
Возбудитель инфекционной анемии лошадей ИНАН попадает в организм при укусах насекомых (трансмиссивный путь передачи), при инъекциях, при случке (контактный, половой), от больных родителей потомству (вертикальный путь передачи). Размножается в клетках крови. Считается гематотропным вирусом.
Вирусы ящура, оспы используют в качестве входных ворот дыхательные пути, слизистые оболочки, кожу.Путь распространения – контактный, воздушно-капельный и воздушно-пылевой. Поражается вирусами кожа и слизистые оболочки, соответственно вирусы называются дерматотропными.
Вирусы европейской и африканской чумы свиней, чумы плотоядных, чумы лошадей, чумы крупного рогатого скота – используют все возможные ворота инфекции, все пути передачи. Размножаются и поражают практически все ткани животных. Называются пантропными.
Взятие, пересылка патологического материала для вирусологических исследований.
Вид материала для исследования и постановки диагноза зависит от тропности вируса, патогенеза предполагаемой болезни, путей выделения.При респираторных инфекциях для выделения вирусов берут носоглоточные смывы, мазки из носа и глотки, соскобы трахеи, кусочки легкого. При кишечных инфекциях – фекалии, ректальные мазки, слизь, а от трупов – отрезки кишечника.
При нейротропных инфекциях патологический материал – головной или спинной мозг, при дермотропных инфекциях – свежие поражения кожи – жидкость из афт,пустул, везикул.
При гематотропных инфекциях патологический материал – кровь.
При пантропных инфекциях вирус содержится во всех органах и тканях, как правило, больше всего в крови , головном и спинном мозге, внутренних органах.
Кровь цельная или лаковая (смесь с дистиллированной водой 1:1), эритроциты.
Смывы со слизистых – стерильными ватными тампонами. Погружают в стерильные пенициллиновые флакончики или пробирки с 3-5 мл жидкости. Жидкость – физ.раствор, а лучше – раствор Хенкса, среда для культур клеток Игла, 199, ГЛА с антибиотиками пенициллин и стрептомицин по 500 ЕД и нистатин по 20 ЕД на 1 мл среды. Желательно добавить белковый стабилизатор 0,5% р-р желатина, 0,5% р-р альбумина.
При многих вирусных инфекциях наблюдается явление посмертной аутостерилизации.
В трупе быстро развивается бак. обсеменение. Накапливаются токсические продукты. Следовательно, необходимо брать пат. мат. как можно раньше, лучше в агональном состоянии животного, в стерильных условиях, в стерильную посуду. Практикуется убой в диагностич. целях
Если предположительный диагноз поставить не удается, для исследования берут кровь и кусочки органов (масса 10-20 г, размером несколько кубических см): имеющие видимые отклонения от нормы; соответствущ. клинической картине; наиболее часто содержат вирус – печень, селезёнка, легкие, головной мозг, лимфатические узлы, почки.
Транспортировка материала для исследования
1. Замораживание и перевозка в специальных транспортных контейнерах-холодильниках.
2. охлаждающая смесь 1:1 сухой лед и этиловый спирт (-71ОС)
3. 3 части льда или снега и 1 часть поваренной соли
4. химическая консервация: смесь равных объемов стерильного глицерина глицерина и физ.раствора (нельзя исследовать с помощью МФА). Тщательное этикетирование карандашом.
Успех исследования зависит от быстроты исследований.
Особенности работы вирусологической лаборатории и ее оборудование
Помещения и режим – как в бактериологической лаборатории.
Особенности: боксы «чёрные» и «белые» – большие, не менее 9м2, предбоксник 4 м2. Бактерицидные лампы БУВ-30. Вентиляция с подачей стерильного воздуха. Настольные боксы, ламинары вертикальные. Морозильники, сосуды Дьюара, центрифуги и ультрацентрифуги, столы со стеклянными щитами. Инкубаторы для выращивания куриных эмбрионов, аппаратура для производства культур тканей, роллерные аппараты различных типов, системы для промывания при проведении ИФА и МФА, комнаты для люминесцентных микроскопов и т.д. Дезрастворы: 3% хлорамин, 3% гидроксид натрия, 5% перекись водорода
Условия хранения и культивирования вирусов в лаборатории. Консервирование вирусов.
Штаммы хранят в холодильнике по замком с пломбой или печатью.
Методы консервации:
50% раствор глицерина. При 4 град несколько месяцев;
2. в пробирках с защитной средой при минус 20. 30.70 ОС. Чем больше белка, тем больше стабильность. Добавить можно обезжиренное молоко 10-30%, инактивированная сыворотка крови, желатин 0,5-1,5% , ДМСО 10%.
3. минус 196оС в жидком азоте
4. лиофилизация.
Подготовка вируссодержащего материала к исследованию.
1. Извлечь необходимый пат материал, освободить от жира, фасций и т.д. (извлечь головной мозг из черепа).
2. Измельчить ножницами
3. растереть в стерильной ступке (со стерильным кварцевым песком).
4.приготовить из растертого материала 10% суспензию на фосфатном буфере или р-ре Хенкса.
5. Поместить в пробирки и центрифугировать при 15-3000 об/мин 15-30 мин
6. надосадочную жидкость отсосать в стерильные флаконы
7. обработать антибиотиками (100-1000 ЕД/мл), экспозиция 30-60 мин
8. произвести бак. контроль посевом на питательные среды