У вас вопросы?
У нас ответы:) SamZan.net

Фиксация препарата- 1

Работа добавлена на сайт samzan.net: 2016-03-30

Поможем написать учебную работу

Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.

Предоплата всего

от 25%

Подписываем

договор

Выберите тип работы:

Скидка 25% при заказе до 1.5.2025

Протокол иммуногистоцитохимического метода (иммунофлуоресценция)

для клеточных мазков

1. Фиксация препарата:

1.1. поместить препарат в 1% раствор формалина или в парах 10% формалина (рН=7,4);

1.2. инкубировать препарат в растворе формалина 10 минут при комнатной температуре (или 18 часов в холодильнике);

1.3. удалить остатки формалина с препарата;

1.4. промыть препарат 2-мя сменами PBS по 5 минут (если в парах, то достаточно 1 смены);

2. Пост-фиксация (пермеабилизация препарата):

2.1. поместить препарат в охлажденную смесь этанола и уксусной кислоты (2:1);

2.2. инкубировать препарат 5 минут в морозильнике (-20оС);

2.3. промыть препарат 2-мя сменами PBS по 5 минут.

3. Блокирование сывороткой:

3.1. на срез нанести 15 мкл 10% раствора WGS (whole goat serum) в PBS;

3.2. инкубировать срез 20-30 минут при +37оС во влажной камере;

3.3. осторожно слить раствор со среза.

4. Добавление первичных антител:

4.1. на срез нанести 15 мкл первичных антител в рабочем разведении (обычно 1:25-

                 1:100) в PBS с 1% WGS ;

4.2. инкубировать срез при +37оС 1 час (или в холодильнике до 18 часов) во влажной

      камере;

4.3. промыть срез 2-мя сменами PBS по 2 минуты.

5. Добавление вторичных антител (в темноте):

5.1. на срез нанести 15 мкл вторичных антител в рабочем разведении (обычно 1:100-

                  1:200) в PBS с 1% WGS;

5.2. инкубировать срез при +37оС 30 минут (или в холодильнике 30 минут) во

                  влажной камере в темноте;

5.3. промыть срез 2-мя сменами PBS по 2 минуты.

6. Микроскопирование:

6.1. нанести на срез монтирующую жидкость (15 мкл 70% глицерина в PBS);

6.2. накрыть срез покровным стеклом;

6.3. микроскопировать.

Примечание 1: в случае использования первичных меченых антител этап 5 пропускается, а этап 4 проводится в темноте.

 

Примечание 2: можно использовать препарат клеток, приготовленный следующим образом:

  1.  Суспензию клеток (5 х 106/мл) инкубировать в свежеприготовленном 1% растворе формалина (рН=7,4) 10 минут при комнатной температуре.
  2.  Нанести 50-100 мкл клеточной суспензии на предметное стекло.
  3.  Поместить препарат в охлажденную смесь этанола и уксусной кислоты (2:1).
  4.  Инкубировать препарат 5 минут в морозильнике (-20оС).
  5.  Промыть препарат 2-мя сменами PBS по 5 минут.
  6.  Перейти к этапу 3.




1. Курсовая работа- Особенности домашних заданий по физическому воспитанию для учащихся общеобразовательных школ
2. . Парашютизм.........
3.  Наследственность ~ это свойство организмов передавать особенности строения функционирования и развит
4. Phrasal verbs
5. Статья Экономические информационные системы принципы построения и классификация
6. Контрольная работа- Правовое регулирование внешнеэкономической деятельности предприятия
7. . Бухать употребление алкоголя в больших количествах как правило втечение продолжительного времени напри
8. CLICK HERE Борт 12785ваш курс 120высота 8000
9. Iru 343 351 01 11 доб
10. Праздник Крещение проведенный на городском пруду 19 января собрал многочисленное количество гр