Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА «КОНЕЧНЫЕ ПРОДУКТЫ АЗОТИСТОГО ОБМЕНА»
Оборудование и реактивы: конические колбы, пипетки аналитические, фотоэлектроколориметр, бюретки, моча, 1% спиртовой раствор фенолфталеина, 0,1 н. раствор гидроксида натрия, нейтрализованный формалин, сыворотка крови, кофеиновый реактив, диазосмесь, 0,9% раствор хлорида натрия, рабочий раствор билирубина.
Опыт 1. Количественное определение аммиака в моче по Мальфатти.
Аммонийные соли образуются при нейтрализации аммиаком кислот, поступающих в организм извне или получающихся в организме в процессах обмена веществ. В виде аммонийных солей в норме с мочой за сутки выделяется 0,5—1,2 г аммиака. Выведение аммиака с мочой значительно увеличивается при заболеваниях, сопровождающихся ацидозом, например, при сахарном диабете, когда образуются ацетоновые тела (ацетоуксусная кислота, 3-гидроксимасляная кислота) и увеличивается количество фосфорной и серной кислот в связи с усилением расщепления тканевых белков. Уменьшение количества аммиака в моче характерно для поражения почек за счет потери способности получать аммиак из глутамина.
Отмеряют в колбу 5 мл мочи, добавляют 25 мл дистиллированной воды, 2 капли раствора фенолфталеина и титруют 0,1 н. раствором гидрокисда натрия до появления слабо-розовой окраски. Этим достигается нейтрализация веществ кислотного характера, содержащихся в моче. Добавляют 2 мл формалина. Смесь обесцвечивается вследствие разложения аммиачных солей и появления в растворе кислоты.
Смесь вновь титруют 0,1 н. раствором NaOH до розового окрашивания. Количество израсходованных при последнем титровании миллилитров щелочи умножают на 0,0017 (титр 0,1 н. раствора аммиака) и получают массу аммиака во взятом для анализа объеме мочи.
Рассчитайте, сколько аммиака выделилось с мочой за сутки, если ее суточный объем 1200 мл. Сделайте вывод о наличии или отсутствии ацидоза.
Опыт 2. Определение билирубина в сыворотке крови по диазореакции в присутствии акцелератора (метод Иендрашика, Клетгорна и Грофа)
Билирубин является одним из промежуточных продуктов распада гемоглобина, происходящего в макрофагах селезёнки, печени и костном мозге. Билирубин слаборастворим в воде, в плазме билирубин первично появляется в неконъюгированной форме, связанный с альбумином (непрямой, свободный билирубин). В клетках печени непрямой билирубин конъюгируется с глюкуроновой кислотой и превращается в билирубинмоно- и билирубиндиглюкоронид (конъюгированный, прямой, связанный билирубин). Конъюгированный билирубин водорастворим, он поступает с желчью в желчный пузырь или непосредственно в кишечник. «Прямой» билирубин дает с диазореактивом комплексное соединение розово-фиолетового цвета. «Непрямой» билирубин реагирует с диазореактивом только после добавления кофеинового реактива.
Нормальная моча содержит минимальное количество конъюгированного билирубина (7-20 мкг/л), не выявляемое качественными методами.
В сыворотке крови прямой билирубин и непрямой билирубин вместе образуют общий билирубин крови, определение которого имеет важное значение в лабораторной диагностике. Нормы общего билирубина: 0,5-1,2 мг%, или 8,6-20,5 мкмоль/л. Из него 75% приходится на долю непрямого. Желтуха развивается, если уровень билирубина в плазме крови превышает пороговое значение (примерно 34 мкмоль/л или 20 мг/л), и билирубин начинает связываться эластическими волокнами кожи и конъюктивы. В зависимости от механизма образования различают несколько видов желтух.
Ход работы: в трех пробирках готовят смеси для определения билирубина согласно таблице 1.
Таблица 1.
|
Ингредиенты (в мл) |
«Общий билирубин» |
«Прямой» билирубин |
Контроль |
|
Сыворотка крови |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
|
Кофеиновый реактив |
1,75 |
|
1,75 |
|
0,9% раствор хлорида натрия |
|
1,75 |
0,25 |
|
Диазосмесь |
0,25 |
0,25 |
|
Для определения «прямого» билирубина фотоколориметрирование проводят через 5-10 минут. Измеряют оптическую плотность раствора на фооэлектроколориметре при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) против контроля.
Для определения «общего» билирубина пробу колориметрируют через 20 минут.
Для построения калибровочного графика из рабочего стандартного раствора билирубина готовят ряд разведений согласно таблице 2.
Таблица 2.
|
№ пробирки |
Рабочий раствор билирубина, мл |
0,9% раствор хлорида натрия, мл |
Количество билирубина в пробе, мг |
Концентрация билирубина, мг% |
|
1 |
0,05 |
0,45 |
0,005 |
1 |
|
2 |
0,10 |
0,40 |
0,010 |
2 |
|
3 |
0,15 |
0,35 |
0,015 |
3 |
|
4 |
0,20 |
0,30 |
0,020 |
4 |
|
5 |
0,25 |
0,25 |
0,025 |
5 |
Обрабатывают, как опытные пробы.
По калибровочному графику находят концентрацию «общего» и «прямого» билирубина в сыворотке крови. По разнице этих двух величин содержание находят «непрямого» билирубина. Сравнивают с нормальными значениями.
Контрольные вопросы
1. Приведите уравнения нейтрализации ацетоуксусной и 3-гидроксимасляной кислот аммиаком.
2. Дефект какого из ферментов орнитинового цикла может быть причиной увеличения суточной экскреция аргининосукцината?
3. Почему при поражениях печени наблюдается аминоацидурия?
4. Какова химическая природа билирубина?
5. При каких обстоятельствах в моче может обнаружиться билирубин?
6. При каком виде желтухи происходит обесцвечивание кала? Почему?