Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
1 ВАРИАНТ
1.Самой крупной таксономической категорией является царство, более мелким – подцарство, отдел, класс.
Порядок, семейство, род, вид, подвид и др. Одной из основных таксономических категорий является вид-совокупность особей, объединенных по близким свойствам, но отличающихся от других представителей. Решением Международного кодекса для бактерий рекомендованы следующие таксономические категории: Класс, отдел, порядок, семейство, род, вид.
Функции: 1-половые пили участвуют в конъюгации; 2 – ворсинки общего типо – адгезия, питание – водно-солевой обмен.
-Основные (простые)
- специальные (сложные) –тдля тех, которые не растут на простых средах – МПБ, МПА, кровяной агар и т.д.
4. Размножение – увеличение числа особей. Способы размножения бактерий: а) деление клетки на 2 части (бинарное деление); б) почкование; в) распад нитевидных клеток; г) при помощи спор (актиномицеты).
При делении большинство грамположительных бактерий и нитчатых цианобактерий синтезируют поперечную перегородку от периферии к центру при участии мезосом. Грамотрицательные бактерии делятся путём перетяжки: на месте деления обнаруживается постепенно увеличивающееся искривление ЦПМ и клеточной стенки внутрь.
5. Химиотерапевтический индекс - это соотношение минимальной терапевтической дозы (DC – dosis curativa) к максимальной переносимой дозе (Dt – dosis toleranta). Химиотерапевтический индекс, т.е. DC/Dt должен быть ниже 1. Этот индекс характеризует степень безвредности препарата для организма. При индексе 1 препарат может быть использован для лечения заболевания, т.к. его лечебная доза меньше переносимой.
Билет №2.
1) .Кокки имеют шаровидную (округлую) форму и размеры 0,5-1,5 мкм. В процессе деления молодые новые клетки могут сохранять связь между со-бой, образуя различные сочетания.
По взаимному расположению клеток кокки подразделяются на:
а) микрококки (р. Micrococcus) – клетки располагаются одиночно; сапрофиты, обитатели воды, воздуха;
б) диплококки (р. Diplococcus) – располагаются по две клетки, т.к. клетки делятся в одной плоскости и не расходятся; к патогенным диплокок-кам относятся пневмококки – возбудители пневмонии; гонококки – возбудители гонореи; менингококки – возбудители менингита;
в) стрептококки (р. Streptococcus) – располагаются в виде цепочки клеток, т.к. клетки делятся в одной плоскости и в одном направлении, и со-храняется связь между ними; вызывают гнойные воспалительные процессы у человека и животных;
г) тетракокки (р. Tetracoccus) – располагаются по 4 клетки, т.к. они делятся в двух взаимно перпендикулярных плоскостях и не расходятся; са-профиты, крайне редко – возбудители заболеваний;
д) сарцины (р. Sarcina) – располагаются в виде пакетов (кубиков) клеток, т.к. они делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и не расходятся; сапрофиты, обитатели воздуха;
е) стафилококки (р. Staphylococcus) – образуют беспорядочные скопления в виде виноградной грозди, т.к. делятся в разных направлениях без особой правильности и не расходятся; играют большую роль в патологии человека, являясь гноеродными кокками.
Кроме круглой формы кокки могут иметь овальную или ланцетовид-ную форму – пневмококки; бобовидную (кофейное зерно) форму – менингококки, гонококки.
2). Жгутики – тончайшие, иногда спирально извитые эластические нити (канаты), отходящие от тела бактерий. Длина их во много раз превышает размеры тела (3-12 мкм), а диаметр равен 10-30 нм. Жгутики берут начало от цитоплазматической мембраны и прикрепляются к ней и клеточной стенке специальными дисками (базальное тело). Жгутики являются органоидами движения. Жгутики – необязательные структуры клетки. Жгутики имеют спириллы, вибрионы, многие палочковидные формы. Кокки не имеют жгутиков, за исключением единичных видов. Жгутики состоят из продольных нитей – фибрилл, покрытых чехлом. Фибриллы построены из сократительного белка флагеллина. Субъединицы флагеллина уложены по спирали. Импульсы, возникающие в базальном теле, вызывают сокращение этого белка. Сократительная волна движется как в сторону клетки, так и от нее, в результате чего происходит поступательное движение микроба. Жгутики совершают вращательные движения.По числу и расположению жгутиков бактерии делят на следующие группы:
- монотрихи – имеют один жгутик на одном из полюсов (холерный вибрион);
- перитрихи – имеют 20-30 жгутиков по всему телу (кишечная, брюшнотифозная, столбнячная палочки);
- лофотрихи – имеют пучок жгутиков на одном полюсе (синегной-ная палочка);
- амфитрихи – имеют один или пучок жгутиков на обоих полюсах (спириллы).
Характер движения и его интенсивность у микробов различны, что определяется особенностями расположения жгутиков и физико-химическими свойствами среды (t, рН, вязкость, осмотическое давление).
3).Микроорганизмы, способные синтезировать все соединения из глюкозы (как источника углерода) и солей аммония (как источника азота) являются прототрофами. Если же они не способны синтезировать какое-либо соединение, то являются ауксотрофами (многие патогенные бактерии и бактерии нормальной микрофлоры кишечника человека).
4)Репродукция вирусов внутри клетки протекает в несколько стадий:
1) Адсорбция
2) Проникновение в клетку
3) Дезинтеграция ("раздевание")
4) Репликация вирусной НК и синтез вирусных белков
5) Сборка (морфогенез) вириона
6) Выход вириона из клетки
5)По химической структуре антибиотики делят на 8 групп:
1) в-лактамиды – пенициллин, цефалоспорины и др.;
2) макролиды – эритромицин, олеандомицин;
3) аминогликозиды – стрептомицин, канамицин, гентамицин;
4) тетрациклины – окситетрациклин, доксициклин;
5) полипептиды – полимиксины, бацитрины;
6) полиены – нистатин, амфотерицин В;
7) анзимицины – рифампицин;
8) дополнительный класс – левомицетин, линкомицин, гризеофульвин.
9)гликопептиды-вазомицин
Билет №3
1.Пептидогликан-гетерополимер N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты. Важнейший компонент клеточной стенки бактерий,выполняющий механические функции,осмотической защиты стенки,выполняет антигенные функции.
2.Мукор относится к зигомицетам. Распространенны в почве,воздухе;селятся на хлебе,овощах и т.д. Мицелий не имеет перегородок,многоядерный,сильно ветвится. Споры гриба сконцентрированы в спорангиях,имеющих сферическую форму. Спорангии находятся на удлиненных гифах,растущих вертикально вверх. Определенные виды мукора имеют высокую ферментативность активность, в связи с чем, их используют как закваску с получением сброженных продутов. Некоторые виды могут провоцировать возникновение заболеваний у сельскохозяйственных животных и у человека.
3. Активный транспорт происходит с помощью пермиаз и направлен на перенос в-в от меньшей концентрации в сторону большей.Этот процесс происходит с затратой энергии(АТФ).
Транслокация химических групп-в процессе переноса через мембрану молекула в-ва химически изменяется.
4. Животных заражают (подкожно,внутримышечно,внутрибрюшино),которые чувствительны к определенным вирусам: кроликов-вирусом бешенства,хорьков-вирусом гриппа и т.д.Преимущества метода:обнаружение вируса проводится по признакам заболевания.Недостаток метода-не все вирусы можно культивировать на животных,например,животные невосприимчивы к вирусам человека.
5.Сульфаниламиды действуют бактериостатически,т.е оьладают химиотерапевтической активностью при инфекциях,вызванных грамположительными и грамотрицательными бактериями. Механизм сульфаниламида заключается в том,что эти в-ва,имея структурное сходство с пара-аминобезойной кислотой(ПАБК). Заменяющая ПАБК в процессе синтеза фолиевой к-ты, сульфаниламиды нарушают образование этой к-ты и таким образом препятствуют образованию нуклеиновых кислот,что сопровождается задержкой развития и размножения микроорганизмов.
4ВАРИАНТ
1.Цитоплазматическая мембрана (ЦПМ) окружает наружную поверхность цитоплазмы. Строение: двойной слой (бислой) фосфолипидов и белки. Белки находятся на поверхности бислоя и могут частично или полностью погружаться в липидный слой или пронизывать его насквозь. Функции: 1) активный транспорт (транспортные белки-пермеазы); 2) метаболические процессы (синтез клеточной стенки, энергетический обмен); 3) деление клетки; 4) образование спор.
2. Асперги́лл (Aspergillus) — род высших плесневых грибов, которые могут вызывать заболевания человека и животных (аспергиллёзы).Относится к классу Аскомицеты
В редких случаях некоторые грибы рода Aspergillus могут быть причиной заболевания, называемого аспергиллёзом. Аспергиллёз характерен в основном для лиц с различными иммунодефицитами. Грибок проникает внутрь через дыхательные пути и рот и может,.поражать дыхательную систему, центральную нервную систему, пищеварительный тракт, кожу, органы чувств и половую систему
3. а) простая диффузия – вещества транспортируются без затраты энергии по направлению меньшей концентрации;
б) облегченная диффузия – происходит при большей концентрации веществ вне клетки при участии транспортных белков - пермеаз;
4. а) продуктивный тип – активная репродукция с выходом вируса из клетки;
б) абортивный тип – образование вирионов внезапно прерывается на какой-то стадии;
в) вирогения – встраивание (интеграция) нуклеиновой кислоты вируса в ДНК клетки-хозяина. Встроенный вирус называется ДНК-провирус. В результате клетка приобретает ряд новых свойств (могут возникнуть аутоимунные хронические заболевания, опухоли).
5. органотропность – свойство антибиотика избирательно действовать на определенные органы. Например, энтеросептол применяют для лечения кишечных инфекций, т.к. он практически не всасывается из ЖКТ.
Этиотропность-свойтсво антибиотика действовать именно на возбудителя.
1.Грамотрицательные бактерии это бактерии, которые не окрашиваются кристаллическим фиолетовым при окрашивании по Граму .
Общие признаки, свойственные большинству грамотрицательных бактерий:
1.Наличие двух мембран, между которыми находится клеточная стенка и периплазматическое пространство
2.Более тонкий, по сравнению с грамположительными бактериями, пептидогликановый слой
3.Наружная мембрана содержит липополисахариды (состоит из липида А, полисахаридного ядра и антигена О снаружи и из фосфолипидов изнутри)
4.В наружной мембране присутствуют порины,функционирующие подобно порам для определённых молекул
5.S-слой прикреплен к наружной мембране, а не к пептидогликановому слою
6.Если есть жгутик, он имеет четыре поддерживающих кольца, а не два
7.Отсутствуют тейхоевая и липотейхоевая кислоты
8.Обычно не образуют спор (примечательным исключением является Coxiella burnetii, образующая спороподобные структуры)
9.Липопротеины прикреплены непосредственно к полисахаридной основе.
10.Большинство содержат липопротеин Брауна, который связывает наружную мембрану и цепочки пептидоглюканов ковалентной связью
2. Дро́жжи — внетаксономическая группа одноклеточных грибов, утративших мицелиальное строение в связи с переходом к обитанию в жидких и полужидких, богатых органическими веществами субстратах. Дрожжи представляют собой одноклеточные неподвижные организмы. Они могут быть различной формы: эллиптической, овальной, шаровидной и палочковидной. Длина клеток колеблется от 5 до 12 мкм, ширина - от 3 до 8 мкм. Форма и размеры дрожжевых клеток непостоянны и зависят от рода и вида, а также от условий культивирования, состава питательной среды и других факторов. Более стабильны молодые клетки, поэтому для характеристики дрожжей используют молодые культуры.
3.Дыхание-окислительно-восстановительные реакции,идущие с выделением энергии и образованием АТФ.Биологическое значение дыхания:1)обеспечение организма кислородом;2)удаление углекислого газа;3)удаление конечных продуктов обмена веществ.
4.В куриных эмбрионах.Заражают куриный эмбрион(аллантоисная полость,хорион-аллантоисная оболочка,амниотическая полость,желточный мешок,сам эмбрион).Куриный эмбрион-очень удобен.Он защищен от попадания других микробов(стерильный),техника работы с ним проста,можно накопить большое количество вирусов.Индикация:а)по специфическим поражениям на хорион-аллантоисной оболочке,по гибели эмбриона,б)по реакции склеивания эритроцитов-реакции гемагглютинации(РГА).Недостатки метода:а)не все вирусы(вирус полиомиелита,вирус ящура)можно вырастить в куриных эмбрионах;б)невозможно обнаружить микроб без вскрытия эмбриона;в)в нем много загрязняющих белков и других соединений.
5. По механизму действия антибиотики делят на 4 группы:
1)угнетают синтез белков клеточной стенки(В-лактамы-пенициллины,цефалоспорины);
2)нарушают синтез клеточной мембраны(полиены-нистатин;полимиксины)
3)ингибируют синтез белков(тетрациклины,левомицетин,аминогликозиды-стрептомицин,мономицин,неомицин,канамицин,гентамицин);
4)ингибируют синтез нуклеиновых кислот(противоопухолевые антибиотики:актиномицин подавляет синтез РНК,рубомицин-синтез ДНК).
1.Включения: гликоген, гранулеза, полиметафосфаты (волютин), жиры, кристаллы солей. Функция: запасные питательные вещества, нерастворимые конечные продукты.
Волютин окрашивается метиленовым синим в красно-фиолетовый цвет, а цитоплазма клетки – голубая. Зерна волютина окрашивают и по методу Нейссера. Они окрашиваются в темно-синий цвет, а цитоплазма – в желтый цвет.
Гликоген раствором Люголя окрашивается в красно-бурый цвет, а гранулеза – в серо-синий цвет. Капли жира растворами судана III окрашиваются в красно-оранжевый цвет. Пары осмиевой кислоты окрашивают жировые капли в черный цвет.
1.Цитоплазма - сложный раствор с органоидами, заполняющий полость клетки. Функции: объединяет в одно целое нуклеоид и другие органоиды клетки, обеспечивает их взаимодействие и деятельность клетки как единой целостной живой системы.
2. Грибы рода Penicillium (зеленая плесень, кистевик) относятся к аскомицетам. Мицелий септирован. Плодоносящая гифа имеет вид кисточки, т.к. конидиеносец разветвляется на более мелкие структуры – стеригмы, от которых отходят цепочки конидий. Из некоторых видов пеницилла (P. notatum, P. chrysogenum) был получен первый антибиотик – пенициллин. Имеются патогенные виды, вызывающие заболевания у человека – пенициллинозы
3. Среда Эндо состоит из МПА, 1 % лактозы, фуксина и сульфита натрия, который его обесцвечивает, исходная среда имеет светло-розовый цвет.
Среда Левина состоит из МПА, лактозы, эозина, метиленовой сини и фосфорнокислого натрия, исходная среда имеет красно-фиолетовый цвет.
Среда Плоскирева состоит из МПА, лактозы, бриллиантового зеленого, йода, нейтрального красного, солей желчных кислот, минеральных солей. Эта среда также является элективной, т.к. подавляет рост многих микробов (кишечной палочки и др.) и способствует лучшему росту некоторых болезнетворных бактерий (возбудителей брюшного тифа, паратифов).
Эти среды используются для идентификации бактерий семейства Enterobacteriaceae. Они позволяют отличить патогенные микроорганизмы от кишечной палочки (см. лекцию №5)..
Среды Гисса служат для изучения сахаролитических свойствах микробов
4. а) первичные – клетки этой культуры делятся один раз, поэтому каждый раз необходимо вновь получать культуру ткани; чаще всего используют эмбриональные ткани и опухолевые ткани взрослого человека;
Назначение: выращивание вирусов
5. По происхождению антибиотики делят 5 классов:
1) из грибов – пенициллин;
2) из бактерий – субтилин, грамицидин;
3) из актиномицетов – стрептомицин;
4) из тканей животных – лизоцим, интерферон;
5) из растений – хлорофилипт из эвкалипта, аллилчеп – из лука, аллилсат – из чеснока, из лишайников – усниновая кислота.
7 ВАРИАНТ
1.Спирохеты - микроорганизмы, имеющие штопорообразную извитую форму с тонким, спирально извитым телом и сильно выраженной подвижностью.Спирохеты - группа 1 - включает порядок Spirochaetales . Тонкие спиралевидные одноклеточные формы, обладающие своеобразной морфологией и способом движения ( рис. 13 ). Длина клеток колеблется от 5 до 250 мкм. Склонны к образованию аномальных форм (гранул, цист ). Размножаются поперечным делением. Клетки состоят из протоплазменного цилиндра, аксиальной нити и наружной оболочки. Оболочка тонкая и эластичная, что и обеспечивает спирохетам своеобразный способ передвижения. Грамотрицательны. Представители этой группы различно относятся к кислороду. Есть среди них облигатно аэробные , факультативно и облигатно анаэробные формы. Хемоорганогетеротрофы , существенно различающиеся по степени требовательности к субстрату. Среди них есть свободноживущие формы, основное место обитания которых - пресные и соленые озера, среда с высоким содержанием H2S; комменсалисты , обитающие в желудочно- кишечном тракте пресноводных и морских моллюсков, и паразиты. Некоторые виды патогенны: Treponema pallidum - возбудитель сифилиса ; Borrelia recurrentis - возбудитель возвратного тифа .
Включения: гликоген, гранулеза, полиметафосфаты (волютин), жиры, кристаллы солей. Функция: запасные питательные вещества, нерастворимые конечные продукты.
Волютин окрашивается метиленовым синим в красно-фиолетовый цвет, а цитоплазма клетки – голубая. Зерна волютина окрашивают и по методу Нейссера. Они окрашиваются в темно-синий цвет, а цитоплазма – в желтый цвет.
Гликоген раствором Люголя окрашивается в красно-бурый цвет, а гранулеза – в серо-синий цвет. Капли жира растворами судана III окрашиваются в красно-оранжевый цвет. Пары осмиевой кислоты окрашивают жировые капли в черный цвет.
3.Среда Эндо — дифференциально-диагностическая питательная среда, предназначенная для выделения Esherichia coli. Названа по имени предложившего её японского бактериолога Сигэру Эндо (1869—1937). Обладает слабыми селективными свойствами, компоненты среды подавляют рост грамположительных бактерий.
Состав
Мясопептонный агар, лактоза, фуксин, сульфит натрия (Na2SO3), динатрия фосфат, карбонат натрия.
Принцип действия
Фуксин обесцвечивается сульфитом натрия (образуется бесцветная фуксинсернистая кислота — реактив Шиффа[1]). Энтеробактерии, сбраживающие лактозу, в процессе брожения выделяют муравьиную кислоту, которая даёт цветную реакцию с реактивами на альдегиды, в том числе и с фуксинсернистой кислотой с образованием свободного фуксина, в результате чего их колонии окрашиваются в малиново-красный цвет с металлическим блеском или без него. Колонии бактерий, не сбраживающих лактозу, имеют белый или слабо-розовый цвет (цвет питательной среды).
4.Периодическая культура ведет себя как многоклеточный организм с генетически ограниченным ростом. [1]
В периодической культуре условия все время меняются; плотность популяции бактерий возрастает, а концентрация субстрата уменьшается. Во многих физиологических исследованиях представляется, однако, желательным, чтобы клетки могли долгое время находиться в фазе экспоненциального роста при постоянной концентрации субстрата в неизменных прочих условиях. В какой-то мере приблизиться к такому положению можно, многократно и достаточно часто перенося клетки в новую питательную среду. Той же цели было бы, очевидно, проще достичь, если в сосуд, содержащий популяцию растущих бактерий, непрерывно вводить новый питательный раствор и одновременно удалять из него соответствующее количество бактериальной суспензии. [2]
Между классической периодической культурой и непрерывной культурой в хемостате имеются принципиальные различия, которые в заключение следует еще раз подчеркнуть. [3]
При росте периодических культур на двухкомпонентном субстрате наблюдаются и другие явления. В таком случае они могут метаболизироваться одновременно, и при этом иногда наблюдается даже стимуляция роста. Возможны ситуации, когда ферменты, необходимые для метаболизма второго субстрата, синтезируются, но их активность ингибируется, и тогда субстраты используются последовательно, но рост, строго говоря. В случаях двухкомпонентных смесей последовательно используемых субстратов тот субстрат, который метаболизируется быстрее, обычно расходуется первым, хотя известны и исключения.
5.Виды антибиотиков
Существуют антибиотики с противобактериальным, противогрибковым и противоопухолевым действием. Антибиотики воздействуют на микроорганизмы либо подавляя их размножение (бактериостатический эффект), либо вызывая их гибель (бактерицидный эффект).
Антибиотики противомикробного действия по степени воздействия на те или иные микроорганизмы значительно отличаются друг от друга: одни влияют преимущественно на грамположительные бактерии (бактерии, которые имеют достаточно плотную оболочку, поэтому удерживают цвет при окрашивании по Грамму; к ним относятся пневмококки, стрептококки, стафилококки, возбудители столбняка, ботулизма и др.), другие на грамотрицательные (бактерии, которые имеют менее плотную оболочку, поэтому не удерживают цвета при окраске по Грамму, к ним относятся менингококки, гонококки, дизентерийная палочка, сальмонелла и др.) бактерии, третьи обладают широким спектром действия, включая грамположительные и грамотрицательные бактерии, реккетсии (мелкие бактерии, паразитирующие внутри клеток тканей человека), хламидии (крупные вирусы) и ряд других возбудителей инфекции.
К антибиотикам широкого спектра действия относятся тетрациклины, левомицетин, стрептомицин, неомицин, мономицин, канамицин, ампициллин, имипенем, цефалоспорины, рифампицин.
Тетрациклины
Тетрациклины (тетрациклин, доксициклин, метациклина гидрохлорид, вибрамицин и др.) обладают широким спектром действия, они активны в отношении грамположительных и грамотрицательных кокков (шаровидных бактерий), возбудителей бактериальной дизентерии, брюшного тифа, спирохет (бактерий вытянутой и спирально изогнутой формы), риккетсий, возбудителей особо опасных инфекций (чумы, туляремии, холеры), трахомы, некоторых простейших (например, возбудителей амебной дизентерии). На протея, синегнойную палочку, истинные вирусы и патогенные грибки тетрациклины не действуют.
Механизм действия тетрациклинов связан с угнетением внутриклеточного синтеза белка бактерий. Кроме того, тетрациклины связывают некоторые микроэлементы, входящие в состав ферментов бактерий, что также приостанавливает жизнедеятельность бактерий. Тетрациклины оказывают в основном бактериостатическое действие, поэтому особенно эффективны в отношении размножающихся бактерий.
Всасываются тетрациклины из желудка и тонкой кишки, не полностью, но в достаточной степени, необходимой для того, чтобы обеспечить необходимую концентрацию, выводятся с мочой и желчью.
Тетрациклины могут оказывать ряд побочных эффектов. Так, тетрациклины оказывают раздражающее действие: при приеме внутрь - на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта, результатом чего бывает тошнота, рвота, понос и так далее, при внутримышечном введении - на окружающие ткани (боли после инъекций, воспаление окружающих вен и так далее). Тетрациклины могут оказывать токсическое действие на печень и вызывать дисбактериозы, подавляя нормальную микрофлору кишечника.
Цефалоспорины
Первый антибиотик группы цефалоспоринов (цефалоспорин С) был выделен из одноименного гриба, затем было создано большое количество полусинтетических цефалоспориновых антибиотиков. Действуют цефалоспорины бактерицидно, то есть убивают возбудителей инфекции. Цефалоспорины активны в отношении грамположительных (стафилококки, стрептококки и так далее) и грамотрицательных (сальмонеллы, возбудители дизентерии, некоторые штаммы протея, кишечная палочка и так далее) бактерий.
Цефалоспорины делятся на препараты для приема внутрь (цефалексин, цефаклор) и препараты для парентерального (минуя желудочно-кишечный тракт) введения (цефалотин, цефатоксим).
Недостатком цефалоспоринов является то, что они у значительного процента больных вызывают аллергические реакции. Из неаллергических реакций возможно поражение почек и снижение числа лейкоцитов (а значит, и снижение иммунитета). Кроме того, цефалоспорины обладают местным раздражающим действием, поэтому при их внутримышечном введении могут возникать боль и отек, а при приеме внутрь - тошнота, рвота и снижение аппетита.
Антибиотики широкого спектра действия могут назначаться только врачом, так как они способны оказывать отрицательное воздействие не только на возбудителей инфекции, но и на организм человека.
Вариант 8
Продуктами брожения могут быть этиловый спирт, молочная, масляная, уксусная, пропионовая кислоты. Различают спиртовое, молочнокислое, уксуснокислое, маслянокислое, пропионовокислое и другие виды брожения.
Перевиваемые линии клеточных культур могут быть загрязнены неизвестными вирусами, в том числе онкогенными, это ограничивает их применение, особенно в производстве вакцин.
Билет № 9.
Микрокапсула – слизистое образование, выявляемое при электронной микроскопии.
Слизь – мукоидные экзополисахариды, не имеющие четких внешних границ. Бактериальные экзополисахариды участвуют в адгезии, их еще называют гликокаликсом.
Капсула и слизь предохраняют бактерии от повреждений, высыхания, т.к. они гидрофильны и хорошо связывают воду, препятствуют действию защитных факторов макроорганизма и бактериофагов.
Жизненный цикл плазмодия проходит в 2-х стадиях – бесполой и половой. В организме человека происходит бесполое размножение паразита. Половое размножение происх. в организме переносчика – самки комара.
Инфецированный комар прокалывает кожу и его слюна, содержащая спорозоиты плазмодия, попадает в кровь, спорозоиты попадают в печень, там они развиваются в тканевых шизонтов, которые растут и размножаются путем многократного деления. После образуются молодые особи – тканевые мерозоиты. Далее мерозоиты внедряются в эритроциты. Когда эритроцит разрушается и паразит попадает в кровяное русло, в плазму крови выбрасываются продукты распада гемоглобина и токсические продукты жизнедеятельности паразита.
После нескольких циклов шизогонии в эритроцитах образуются гамонты, которые в организме комара превратятся в макрогаметы и микрогаметы.
При сосании комаром крови больного человека, гамонты попадают в кишечник комара, где превращаются в гаметы. Из микрогамонта образуется 4–8 микрогамет, из макрогамонта – яйцеклетка, происходит копуляция гамет. Образовавшаяся в результате оплодотворения зигота обладает подвижностью и называется оокинетой. Оокинета мигрирует через стенку кишечника комара и на внешней поверхности кишечника превращается в ооцисту. Ядро ооцисты многократно делится и ооциста распадается на огромное количество спорозоитов – до 10000, этот процесс называется спорогонией. Спорозоиты перемещаются в слюнные железы комара.
Таксономия: Plasmodium vivax, P. malariae, P. falciparum, P. Ovale.
Штаммы – это разные микробные культуры одного вида, выделенные из различных источников или даже из одного и того же источника, но в разное время.
В научно-исследовательской работе, особенно при генетических исследованиях, необходимо получать культуру заведомо из одной клетки. Такая культура называется клоном.
1) антибактериальные широкого (тетрациклины, левомицетин) и узкого (полимиксин, бензилпенициллин) спектра действия;
2) противогрибковые широкого (амфотерицин В) и узкого (нистатин) спектра действия;
3) противопротозойные – против простейших ( фумагиллин – антибиотик узкого спектра действия – против амеб);
4) противоопухолевые – препараты, обладающие цитотоксическим действием (рубомицин).
10 ВАРИАНТ
1.- Под микроскопом можно наблюдать живые неокрашенные и окрашенные микробы. Но чаще исследуют препараты убитых и окрашенных микробов. Вначале готовят мазок из микробной культуры или патологического материала, высушивают и фиксируют его. Во время фиксации микробные клетки погибают и прикрепляются к стеклу. Используют физические и химические методы фиксации. Физический метод – фиксация мазка над пламенем спиртовки (несколько секунд) мазком вверх. Химические методы – фиксация в этаноле, метаноле, формалине, ацетоне и т.д. Для окраски фиксированных мазков применяют простые и сложные методы окраски. Простые методы – это методы, когда применяют один краситель. Сложные методы – несколько красителей и другие вещества. Окрашенный мазок называется препаратом.
2.споры химический состав мало воды, много липидов. В оболочке содержится дипиколинат кальция, который придает термоустойчивость. функции: перенесение неблагоприятных условий среды. споры обладают высокой устойчивостью к действию неблагоприятных физических и химических факторов. они находятся в состоянии покоя и сохраняют жизнеспособность в течение длительного времени. в благоприятных условиях спора прорастается и превращается в вегетативную форму.
метод обнаружения: споры окрашивают по методу ожешко. сущность метода. используют сильные воздействия для разрыхления оболочки, сильные красители. споры медленно воспринимают краску и с трудом отдают ее, то есть обесцвечиваются.
3. эндоферменты катализируют процессы внутри клетки. экзоферменты выделяются бактериями в окружающую среду.это ферменты а) пищеварительные ферменты, которые расщепляют сложные вещества до простых веществ. б) защитные ферменты, например пенициллиназа защищает клеточную стенку от действия антибиотика пенициллина. в) ферменты агрессии- факторы вирулентности патогенных бактерий.
консттитутивные ферменты -ферменты, которые синтезируются клеткой непрерывно, независимо от наличия в питательной среде соответствующего субстрата.
Индуцибельные (адаптивные) ферменты синтезируются бактериальной клеткой только при наличии в среде субстрата данного фермента.
4.культивирование риккетсий проводят на переживающих тканях в жидкой среде мейтлендов (раствор тироде и сыворотка) при 37 С 10-14 дней или тироде-сывороточном агаре с добавлением на поверхность измедьченной эпителиальной ткани при 37С 6-10 дней.
способы кулльтивирования хламидий
Хламидии, являясь облигатными паразитами, на искусственных питательных средах не размножаются, их можно культивировать только в живых клетках. Они являются энергетическими паразитами, так как не способны самостоятельно аккумулировать энергию и используют АТФ клетки-хозяина. Культивируют хламидий в культуре клеток HeLa, McCoy, в желточных мешках куриных эмбрионов, организме чувствительных животных при температуре 35 °С
5.Биологическая активность антибиотика- это его способность убивать или тормозить рост и развитие микроорганизмов. Активность выражают в единицах действия. 1 ед- минимальное количество антибиотика которое задерживает рост стандартного штамма тест-микроба в определенных условиях.
Вариант 11
!.Для изучения морфологических признаков применяют микроскопические методы.Используются различные микроскопы и методы микроскопии. световые микроскопы используют для изучения микробов с размерами не менее 0,2 мкм. Микроскоп состоит из механической и оптической части. Механическая часть:штатив, тубус с револьвером, предметный столик, приспособленный для крепления конденсора и светофильтров, макровинт и микровинт;оптическая часть:объективы, окуляры, осветительная сис-ма:конденсор и зеркало.Увеличение объектива и окуляра указано на оправе:объектива-8Х,10Х,40Х и т.д.,а окуляра-4Х, 5Х, 7Х, 10Х,16Х,20х.Общее увеличение микроскопа определяется произведением увелич-я окуляра на увелич-е объектива. В зависимости от среды,которая находится между объективом и препаратом, различают "сухие"(до 40х) и иммерсионные объективы(90-100х)В качестве иммерсионной жидкости используют дистиллированную воду или кедровое(или синтетическое)масло. Для фокусировки света от источника предназначен конденсор. который состоит из нескольких линз и превращает параллельные лучи в сходящиеся.Зеркало направляет свет от осветителя в конденсор. Качество изобр-я в значит. степени зависит от правильного освещения.Самый распрастраненный метод освещения- по Келеру.
2.Бактериофаги-это вирусы ьактерий. Как и вирусы они размножаются только в живых клетках. С помощью электрон. микроскопа показано, что большинство бактериофагов имеют форму головастика или сперматозоида. Они состоят из головки и хвостового отростка. Отросток- стержень с чехлом. Стержень заканчивается шестиугольной пластинкой с короткими шипами, от которых отходят фибриллы. чехол может сокращаться. Внутри головки находитсяч ДНК.ДНК окружена капсидом. В отростке находятся ферменты- лизоцим и АТФаза. Они участвуют в проникновении фага в клетку. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой называется бактериофагией. Стадии взаимод-я фага с клеткой такие же, как у вирусов: адсорбция, проникновение в клетку, синтез нуклеиновых кислот и белков, морфогенез, выход из клетки. Но имеются особенности. Фаги обладают строгой специфичностью взаимодействия. Определенный фаг взаимодействует с определенным видом или даже подвидом бактерий. Поэтому название бактериофагов такие же, как видовые или родовые названия тех бактерий, с которыми они взаимодействуют.
3.Жидкие среды Гисса состоят из пептонной воды, 1% углевода и индикатора Андреде (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью). В среду опускается поплавок, который при стерилизации заполняется средой. Исходный цвет среды- соломенно-желтый. При расщеплении углевода цвет среды становится ярко-розовым(красным) Если образуется газ, он накапливается в поплавке. Если углевод не расщепляется,цвет среды не меняется. Данную среду используют для опрелделения сахаролитических свойств.
4.Химические методы создания анаэробных условий основаны на использовании веществ, способных поглащать кислород в закрытых сосудах(используются аппараты)Пример:пкирогалол.
5вопр - принципы рациональной химиотерапии.
одним из главных ее принципов является обязательное установление этиологии болезни до начала применения химиотерапевтических средств, чтобы выбрать из них препарат, обладающий наиболее высокой активностью в отношении возбудителя данной болезни. Несоблюдение этого принципа заведомо является причиной неэффективности химиотерапии.
Основные принципы рациональной химиотерапии.
1. Возбудитель должен быть чувствителен к АБ
Правило «наилучшего предложения» - референтные таблицы с учетом региональных популяционных особенностей антибактериальной чувствительности.
2. АБ должен созадвать терапевтическую концентрацию в очаге.
3. Преимущественно адекватный режим дозирования в зависимости от:
1)возбудителя
2 )динамики клинического течения инфекции
3) локализации инфекции
4) длительности и характера течения инфекции (острая, хроническая или бактерионосительство)
4. Оптимальная продолжительность противомикробной химиотерапии (пример: стрептококковый фарингит излечим за 10 сут, острый неосложеннный гонококковый уретрит за 1-3 дня, острый несоложненный цистит за 3 дня).
Для предупреждения побочных реакций, развития суперинфекции или резистентности продолжительность лечения должна соответствовать периоду эрадикации возбудителя.
5. Учет факторов пациента:
1) аллергоанамнез, иммунокомпетентность
2)функция печени и почек
3)переносимость АБ при пероральном приеме; комплаентность
4)тяжесть состояния
5)возраст, пол, наличие беременности или вскармливания ребенка, прием пероральных контрацептивов
6)побочные эффекты
6. Комбинированная антибиотикотерапия.
Билет №12
1.Клеточная стенка грам "+ бактерий
"Строение клеточной стенки грам"+" бактерий:
1) толстая стенка (15 - 80 нм);
2) несколько слоев пептидогликана (40-90%);
3) есть тейхоевые кислоты;
4) небольшое количество липидов.
В стенке - три слоя: 1) один слой пептидогликана; 2) волнообразная наружная мембрана; она соединена с пептидогликаном молекулами липопротеидов; 3) липополисахаридный слой, он не закрывает полностью наружную мембрану. Липополисахариды состоят из трех частей: а) липид А; б) ядро; в) О-специфическая цепь. Липид А погружен в наружную мембрану (придает токсичность – эндотоксин). О-специфическая цепь определяет антигенность (О-антиген).
Грам"+" бактерии: стафилококки, стрептококки, бациллы, клостридии, актиномицеты.
2.Получение и применение бактериофагов. Для получения препаратов бактериофагов используют проверенные производственные штаммы фагов и соответствующие им типичные культуры бактерий. В бактериальную культуру в жидкой питательной среде вносят маточную взвесь фага. После просветления (лизиса) культуру фильтруют через бактериальные фильтры, и фильтрат вносят в свежую культуру соответствующих бактерий и т.д. После накопления достаточного количества фага лизированную им культуру бактерий вновь фильтруют, и получают препарат фага.
Таким образом, препараты фагов получают путем многократного пассирования через чувствительную бактериальную культуру, а сами препараты фагов – фильтраты бульонных культур лизированных ими бактерий. Это прозрачные жидкости светло-желтого цвета, а также на их основе готовят другие лекарственные формы - таблетки с кислотоустойчивым покрытием, мази, аэрозоли, свечи.
Применение фагов основано на их строгой специфичности. Они используются для:
а) диагностики инфекционных заболеваний (диагностические препараты): с помощью известного фага можно определить вид или подвид бактериальной культуры;
б) лечения и профилактики заболеваний (лечебно-профилактические препараты).
3.Полужидкие среды Гисса состоят из 0,2-0,5 % мясо-пептонного агара (МПА), 1 % углевода и индикатора ВР (водно-голубая краска и розоловая кислота). Исходный цвет среды - розовато-серый. При расщеплении углевода цвет среды становится голубым, а если образуется газ, наблюдаются разрывы в среде.
Определенный вид бактерий ферментирует не все, а только некоторые углеводы, поэтому в одних пробирках цвет изменяется, а в других – не изменяется, и получается "пестрый ряд"
Назначение:применяют для изучения сахоролитических свойств
4.Биологический метод создания анаэробных условий:
Посев по методу Цейсслера. Каплю (петлю) материала со среды Китта-Тароцци последовательно засевают в три чашки Петри с кровяным агаром. Посевы ставят в анаэростат или аппарат Аристовского, которые ставят в термостат. На следующий день на третьей чашке вырастают отдельные колонии. Делают пересев этих колоний на среду Китта-Тароцци для накопления чистой культуры, изучения ее свойств и точного определения вида микроорганизмов.
Посев по методу Вейнберга. Пастеровской пипеткой переносят материал со среды Китта-Тароцци последовательно в 3-5 узких пробирок с сахарным МПА, погружая пипетку в расплавленный агар до самого дна пробирки. Пробирки быстро охлаждают под холодной водой. Агар застывает и разобщает микробные клетки в глубине агара. Из этих клеток вырастают колонии, которые пересевают в новую среду Китта-Тароцци, накапливают чистую культуру и идентифицируют
5.Метод «канавки» (предложен А. Флемингом). Берут чашку Петри с питательным агаром. В центре по диаметру вырезают полоску агара шириной 1 см. Затем канавку заполняют агаром, смешанным с антибиотиком. После застывания канавки перпендикулярно делают посев исследуемых культур (4-5). После инкубации в термостате чувствительность определяют по длине зоны задержки роста, чем она больше, тем культура чувствительнее и наоборот. Преимущество метода – можно определить чувствительность сразу нескольких культур к данному антибиотику.
13 ВАРИАНТ
Моновалентные бактериофаги — брюшнотифозный, дизентерийный, протейный, синегнойный, холерный, стафилококковый, стрептококковый, коли-фаг (кишечной палочки);Поливалентные препараты – смеси из нескольких фагов против различных типов одного вида бактерий. Комбинированные препараты – смеси из фагов против бактерий разных видов.
14 ВАРИАНТ
1.Кислотоустойчивые бактерии — микроорганизмы, обладающие выраженной резистентностью к 5—10% серной или соляной кислотам, щелочам и спирту. После окрашивания кислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются кислотами с большим трудом, так как содержат жировые и воскоподобные вещества. К числу кислотоустойчивых бактерий относятся возбудители туберкулеза, проказы и некоторые сапрофиты.
Их окрашивают по методу Циля-Нильсена. Для окраски используют 5% карболовый фуксин Циля, 5% раствор серной кислоты и метиленовый синий по Леффлеру. Сущность метода: кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет (цвет фуксина), т.к. миколовая кислота взаимодействует с карболовым фуксином и затем не происходит обесцвечивания серной кислотой. Остальные (некислотоустойчивые) бактерии обесцвечиваются и докрашиваются в синий цвет метиленовым синим. Таким образом, кислотоустойчивые бактерии можно отличить от других.
2. Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в определенный, не изменяющийся объем питательной среды, размножаясь, потребляют питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют периодическим культивированием, а культуру — периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование называется непрерывным, а культура — непрерывной.
При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается придонный, диффузный или поверхностный (в виде пленки) рост культуры. Рост периодической культуры бактерий, выращиваемых на жидкой питательной среде, подразделяют на несколько фаз, или периодов:
лаг-фаза;
фаза логарифмического роста;
фаза стационарного роста, или максимальной концентрации бактерий;
фаза гибели бактерий.
Эти фазы можно изобразить графически в виде отрезков кривой размножения бактерий, отражающей зависимость логарифма числа живых клеток от времени их культивирования.
Лаг-фаза — период между посевом бактерий и началом размножения. Продолжительность лаг-фазы в среднем 4—5 ч. Бактерии при этом увеличиваются в размерах и готовятся к делению; нарастает количество нуклеиновых кислот, белка и других компонентов.
Фаза логарифмического (экспоненциального) роста является периодом интенсивного деления бактерий. Продолжительность ее около 5— 6 ч. При оптимальных условиях роста бактерии могут делиться каждые 20—40 мин. Во время этой фазы бактерии наиболее ранимы, что объясняется высокой чувствительностью компонентов метаболизма интенсивно растущей клетки к ингибиторам синтеза белка, нуклеиновых кислот и др.
Затем наступает фаза стационарного роста, при которой количество жизнеспособных клеток остается без изменений, составляя максимальный уровень (М-концентрация). Ее продолжительность выражается в часах и колеблется в зависимости от вида бактерий, их особенностей и культивирования.
Завершает процесс роста бактерий фаза гибели, характеризующаяся отмиранием бактерий в условиях истощения источников питательной среды и накопления в ней продуктов метаболизма бактерий. Продолжительность ее колеблется от 10 ч до нескольких недель. Интенсивность роста и размножения бактерий зависит от многих факторов, в том числе оптимального состава питательной среды, окислительно-восстановительного потенциала, рН, температуры и др.
Размножение бактерий на плотной питательной среде. Бактерии, растущие на плотных питательных средах, образуют изолированные колонии округлой формы с ровными или неровными краями (S- и R-формы), различной консистенции и цвета, зависящего от пигмента бактерий.
Пигменты, растворимые в воде, диффундируют в питательную среду и окрашивают её. Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима в органических растворителях. И, наконец, существуют пигменты, не растворимые ни в воде, ни в органических соединениях.
Наиболее распространены среди микроорганизмов такие пигменты, как каротины, ксантофиллы и меланины. Меланины являются нерастворимыми пигментами черного, коричневого или красного цвета, синтезирующимися из фенольных соединений. Меланины наряду с каталазой, супероксиддисмутазой и пероксидазами защищают микроорганизмы от воздействия токсичных перекисных радикалов кислорода. Многие пигменты обладают антимикробным, антибиотикоподобным действием.
3. Метод Цейсслера применяется для выделения чистых культур спорообразующих анаэробов. Для этого производят посев на среду Китт-Тароцци, прогревают 20 мин при 80 °C (для уничтожения вегетативной формы), заливают среду вазелиновым маслом и инкубируют 24 ч в термостате. Затем производят посев на сахарно-кровяной агар для получения чистых культур. После 24-часового культивирования интересующие колонии изучаются — их пересеивают на среду Китт-Тароцци (с последующим контролем чистоты выделенной культуры).
Метод Вейнберга используется для получения чистых культур облигатных анаэробов. Культуры, выращенные на среде Китта-Тароцци, переносят в сахарный бульон. Затем одноразовой пастеровской пипеткой материал переносят в узкие пробирки (трубки Виньяля) с сахарным мясо-пептонным агаром, погружая пипетку до дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают, что позволяет фиксировать бактериальный материал в толще затвердевшего агара. Пробирки инкубируют в термостате, а затем изучают выросшие колонии. При обнаружении интересующей колонии на её месте делают распил, материал быстро отбирают и засеивают на среду Китта-Тароцци (с последующим контролем чистоты выделенной культуры).
4.Протеолитические свойства бактерий изучают:
а) по способности разжижать желатин: разные виды бактерий имеют разную форму разжижения желатина; S. aureus – в виде воронки; Bac. antracis – в виде опрокинутой елки; Vibrio cholerae – в виде гвоздя и т.д. Разжижают желатин бактерии, имеющие фермент - коллагеназа;
б) по конечным продуктам распада белков после посева на мясо-пептонный бульон (МПБ). Могут быть следующие конечные продукты: индол, Н2S, NH3.
Для обнаружения этих продуктов используют бумажки с индикаторами. Индикатор для индола - щавелевая кислота (бумажка окрашивается в розовый цвет). Для Н2S – ацетат свинца (черный цвет). Для NH3 – лакмусовая бумажка (синий цвет).
Дополнительно изучаются такие свойства, как восстановление нитратов в нитриты, бутандиоловое брожения на среде Кларка, расщепление крахмала и др.
5.Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений. Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106—107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика.
Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по специальной готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.
К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата.Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.
Билет 15
1.Рикке́тсии — семейство бактерий. Представители семейства Rickettsia представлены полиморфными, чаще кокковидными или палочковидными, неподвижными клетками. Грамотрицательны.В оптимальных условиях клетки риккетсий имеют форму коротких палочек размером в среднем 0,2—0,6 × 0,4—2,0 мкм. При изменении условий роста они легко образуют клетки неправильной формы или нитевидные. На поверхности мембраны клеточной стенки располагается капсулоподобный слизистый покров и микрокапсула, содержащие группоспецифичный «растворимый» антиген. В клеточной стенке локализуются основные белки, большинство из которых являются видоспецифичными антигенами, а также липополисахарид и пептидогликан. В цитоплазматической мембране преобладают ненасыщенные жирные кислоты. Нуклеоид клетки риккетсий содержит кольцевую хромосому. Размножаются путем бинарного деления. Источником энергии у внеклеточных риккетсий служит глутамат. Способны индуцировать свой фагоцитоз эукариотной клеткой. Вместе с тем, многие виды риккетсий патогенны для человека и животных, что определяет их медицинское и ветеринарное значение.Таксономия. Патогенные риккетсии и близкие к ним возбудители — эндоцитобионтыэукариотических клеток по существующей таксономии отнесены в царстве прокариотов к отделу Gracilicutes, классу Proteobacteria, порядку Rickettsiales, семействам Rickettsiaceae, включающей роды Rickettsia, Orientia, Ehrlichia и Bartonellaceae (род Bartonella и, вероятно, род Brucella), а род Coxiella (лихорадка Ку) относят к группе гамма- протеобактерий.
2.Культивирование- Искусственное выращивание микроорганизмов.Для культивирования бактерий необходимо: 1) Соответствующая среда, 2)-Правильно произведенный посев, 3-Оптимальные условия, 4-Определенное время для выращивания. Требования к пит. Средам: а) среды должны быть питательными - содержать все необходимые для жизнедеятельности вещества;б) иметь определенное значение рН; для большинства патогенных микробов оптимальным является рН 7,2-7,4; в) обладать буферностью – содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена микроорганизмов, для того чтобы не изменялось значение рН среды;г) быть изотоничными - осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки; д) быть стерильными для получения чистой культуры;е) содержать достаточное количество Н2О, т.к. бактерии питаются по законам осмоса и диффузии; ж) обладать определенным окислительно-восстановительным потенциалом, для аэробов rH2 – не ниже 10; для анаэробов – не выше 5;з) быть прозрачными;
3. Цитопатическое действие (ЦПД)- наблюдение морфологические изменения клеток, при этом часть из них погибает и отслаивается от поверхности стекла, в результате вместо сплошного клеточного монослоя остаются лишь отдельные клеточного островки; ЦПД обнаруживается микроскопически и служит не только для обнаружения, но и для индефикации вирусов, поскольку характер цитопатическихизменнений для разных вирусов неодинаков; «Цветная реакция» - клетки выращиваются на среде с индикатором, который изменяет цвет под влиянием кислых продуктов метаболизма при росте незараженных клеток; при репродукции вируса нарушается нормальный метаболизм, рН не сдвигается и сохраняется первичный цвет среды. В Тканевых культурах: для их приготовления ипользуют самые различные ткани человека, животных, птиц, чаще всего- эмбриональные и опухолевые ткани, обладающие повышенной метаболической активностью.
4. К жгутиконосцам (п/тип Mastigophora) относятся простейшие, имеющие один или несколько жгутиков (органы движения) и ундулирующую мембрану у трипаносом и трихомонад. К ним относятся такие патогенные представители, как:- трипаносомы – возбудители африканского трипаносомоза и американского трипаносомоза ;- лейшмании – возбудители кожного и висцерального лейшманиозов;- трихомонады – поражают кишечник и мочеполовые пути человека;- лямблии – возбудители лямблиоза. Простейших исследуют в живом виде или применяют сложные методы окраски. По Романовскому-Гимзе цитоплазма окрашивается в синий цвет, а ядро в красный.Болезни, вызываемые простейшими, называют протозойными. Большинство простейших имеют время генерации от 6 до 24 ч. В связи с этим их размножение в организме хозяина обычно сопровождается экспоненциальным увеличением размеров их популяций до тех пор, пока этот процесс не замедлится или не остановится защитными механизмами хозяина или другими внешними факторами. Это означает, что один паразитический организм в принципе способен, размножившись, привести к гибели своего хозяина. В этом плане простейшие — возбудители заболеваний — сходны с возбудителями инфекционных болезней, например с патогенными бактериями и вирусами.
5. К химиотерапевтическим препаратам относятся антибиотики. 1) - лактамиды – пенициллин, цефалоспорины и др.;2) макролиды – эритромицин, олеандомицин;3) аминогликозиды – стрептомицин, канамицин, гентамицин;4) тетрациклины – окситетрациклин, доксициклин;5) полипептиды – полимиксины, бацитрины;6) полиены – нистатин, амфотерицин В;7) анзимицины– рифампицин;8) дополнительный класс – левомицетин, линкомицин, гризеофульвин.По происхождению антибиотики делят 5 классов:1) из грибов – пенициллин;2) из бактерий – субтилин, грамицидин;3) из актиномицетов – стрептомицин;4) из тканей животных – лизоцим, интерферон;5) из растений – хлорофилипт из эвкалипта, аллилчеп – из лука, аллилсат – из чеснока, из лишайников – усниноваякислота.Антибиотики могут быть получены и путем химического синтеза.По спектру действия антибиотики делят на 4 группы:1) антибактериальные широкого (тетрациклины, левомицетин) и узкого (полимиксин, бензилпенициллин) спектра действия; 2) противогрибковые широкого (амфотерицин В) и узкого (нистатин) спектра действия;3) противопротозойные– против простейших ( фумагиллин – антибиотик узкого спектра действия – против амеб); 4) противоопухолевые препараты, обладающие цитотоксическим действием (рубомицин).Антибиотики широкого спектра действия – оказывают влияние на все виды бактерий, грибов или простейших.Антибиотики узкого спектра действия – оказывают влияние на небольшую группу бактерий или других микроорганизмов.По механизму действия антибиотики делят на 4 группы:1) угнетают синтез белков клеточной стенки (-лактамы – пенициллины, цефалоспорины); 2) нарушают синтез клеточной мембраны (полиены – нистатин; полимиксины)3) ингибируют синтез белков (тетрациклины, левомицетин, аминогликозиды - – стрептомицин, мономицин, неомицин, канамицин, гентамицин);4) ингибируют синтез нуклеиновых кислот ( протитвоопухолевые антибиотики: актиномицин подавляет синтез РНК, рубомицин – синтез ДНК).Бактерицидным действием обладают стрептомицин, пенициллины, неомицин, канамицин, полимиксин, цефалоспорины.Бактериостатическим действием обладают тетрациклины, макролиды, левомицетин. Бактериостатические препараты необходимо использовать длительно. Их можно применять после бактерицидных препаратов для долечивания.
16 ВАРИАНТ
Выделяют 2 формы хламидий: 1) элементарные тельца (0,3 мкм) – вне клетки; способны заражать другие клетки;2) ретикулярные тельца (до 1,5 мкм) – внутри клетки, они способные к бинарному делению. В результате этого в клетке образуются микроколонии хламидий, которые находятся в вакуоли. Затем они распадаются на элементарные тельца и покидают клетку. Клетка погибает, а элементарные тельца заражают новые клетки.
Хламидии окрашиваются по методу Романовского-Гимзы. В живом состоянии обнаруживают при фазово-контрастной микроскопии. Вызывают у человека заболевания: трахому, орнитоз, конъюнктивит и др.
2.1 Среды элективные (селективные). Принцип создания – добавление в питательные среды ингибитора подавляющего рост сопутствующей флоры, но не влияющий на рост и размножение выделяемого вида бактерий.
Примеры: желчный бульон – МПБ+ бычья желчь, которая является ингибитором роста кокков и воздушной флоры, но благоприятна для размножения сальмонелл.
2.2 Среды специальные. Необходимы для культивирования бактерий, не растущих на питательных средах.
Примеры: сывороточный бульон, сывороточный агар, кровяной агар – для менингококков и пневмококков, сахарный агар, сахарный бульон – для стрептококков.
а) для выявления протеолитической активности микробов и содержат в своем составе молоко, желатин, кровь и т.д.
б) для обнаружения сахаралитической способности микробов – среды с углеводами и многоатомными спиртами.
в) для определения редуцирующей способности бактерий
Среды для выявления сахаролитических свойств бактерий
Примеры: Среда Эндо. Состав – МПА + лактоза + индикатор фуксин обесцвеченный сульфитом натрия. Среда имеет слаборозовый цвет. Используется для дифференциации бактерий разлагающих лактозу (лактозопозитивные , например кишечная палочка) от бактерий неспособных разлагать лактозу (лактозонегативные, например сальмонеллы, шигеллы). Колонии лактозопозитивных бактерий имеют малиновый цветя, а лактозонегативных – бесцветные.
Среды Гисса (пестрый ряд). Готовится на основе пептонной воды, к которой добавляют химически чистые моно- ди- полисахариды и многоатомные спирты, индикатор и стеклянный поплавок в виде перевернутой маленькой пробирки, для улавливания газообразных продуктов. В состав сред Гисса входит МПБ для определения индола и сероводорода (продукты разложения белков).
Первый этап (1-ый день):
а) из материала (смесь бактерий разных видов) готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют;
б) делают посев материала (смеси бактерий) на чашку Петри с МПА штриховым методом или по методу Дригальского и ставят в термостат при 37С на 24-48 часов.
Второй этап (2-ой день):
а) наблюдают посевы и проводят описание колоний разных видов (размер, форма, цвет, поверхность, форма края, структура, консистенция);
б) из колоний готовят мазки и окрашивают по Граму (колония должна содержать один вид бактерий);
в) делают пересев разных колоний в разные пробирки со скошенным МПА для накопления чистой культуры; выращивают в термостате при 37С 24 часа.
Третий этап (3-ий день): проделывают работу по идентификации (определение вида) культуры и проверяют чистоту культуры. Для определения вида изучают морфологические, культуральные, тинкториальные и биохимические свойства:
а) отмечают характер роста выделенной чистой культуры на МПА (визуально она характеризуется однородным ростом);
б) готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют; если культура чистая, то обнаруживают одинаковые морфологические и тинкториальные клетки;
в) делают посев на среды Гисса и МПБ для изучения сахаролитических и протеолитических свойств чистой культуры; оставляют в термостате при 37 С на 24 часа.
Размером дизентерийная амёба мельче обыкновенной амёбы (Amoeba proteus), подвижна. Ложноножки у дизентерийной амёбы меньше чем у обыкновенной. Эктоплазма чётко отграничена от эндоплазмы, псевдоподии короткие и широкие.
К саркодовым (п/тип Sarcodina) относится дизентерийная амеба, паразитирующая в толстом кишечнике. Передвигается при помощи псевдоподий. Половой путь размножения отсутствует. В жизненном цикле встречаются следующие формы: цисты (четырехядерные), мелкая вегетативная, крупная вегетативная и тканевая формы. Вегетативные (просветные) формы обитают в просвете кишечника, питаясь его содержимым, и не наносят вреда. При снижении резистентности организма они внедряются в слизистую оболочку кишечника и превращаются в тканевую форму, питающуюся клетками стенки кишечника и эритроцитами. В результате на слизистой оболочке образуются язвы, и развивается амебная дизентерия (кишечный амебиаз). Вегетативные формы во внешней среде погибают. Цисты устойчивы.
5.Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений. Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106—107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика.
Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по специальной готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.
К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата.Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.
Вариант 17
Микоплазм обнаруживают в живом состоянии при фазово-контрастной микроскопии и путем электронной микроскопии.
Вызывают заболевание у человека по типу острой респираторной инфекции (Mycoplasmapneumonia).
По консистенции среды делят на:
а) жидкиеб) полужидкиев) плотные или твердыег) сыпучие, д) сухие
По составу среды делят на:
а) естественные б) искусственные в) синтетические
По назначению среды делят на:
а) основные б) специальные в) элективные г) дифференциально-диагностические
3.Ферменты бактерий делят на экзо- и эндоферменты.
Эндоферментыкатализируют процессы внутри клетки. Экзоферменты выделяются бактериями в окружающую среду. Это ферменты: а) пищеварительные ферменты, которые расщепляют сложные питательные вещества до простых веществ; б) защитные ферменты, например, пенициллиназа защищает клеточную стенку от действия антибиотика пенициллина; в) ферменты агрессии – факторы вирулентности патогенных бактерий;
- гиалуронидаза – расщепляет гиалуроновую кислоту;
- дезоксирибонуклеаза – расщепляет ДНК клеток;
- фибринолизин – расщепляет коллаген;
- плазмокоагулаза – свертывает плазму крови;
- нейраминидаза – расщепляет нейраминовую кислоту;
- лецитовителлаза – расщепляет лецитин.
4. Особенностью работы по выделению чистой культуры анаэробов является применение различных методов создания бескислородных условий.
Посев по методу Цейсслера. Каплю (петлю) материала со среды Китта-Тароцци последовательно засевают в три чашки Петри с кровяным агаром. Посевы ставят в анаэростат или аппарат Аристовского, которые ставят в термостат. На следующий день на третьей чашке вырастают отдельные колонии. Делают пересев этих колоний на среду Китта-Тароцци для накопления чистой культуры, изучения ее свойств и точного определения вида микроорганизмов.
Посев по методу Вейнберга.Пастеровской пипеткой переносят материал со среды Китта-Тароцци последовательно в 3-5 узких пробирок с сахарным МПА, погружая пипетку в расплавленный агар до самого дна пробирки. Пробирки быстро охлаждают под холодной водой. Агар застывает и разобщает микробные клетки в глубине агара. Из этих клеток вырастают колонии, которые пересевают в новую среду Китта-Тароцци, накапливают чистую культуру и идентифицируют.
5. Определение активности антибиотика методом диффузии в агар.
Питательный агар (ПА) по 15 мл разливают в чашки Петри. После застывания и подсушивания агара в каждую чашку наливают по 5 мл ПА, смешанного с тест культурой (20 млн. клеток на 1 мл среды). После застывания второго слоя агара на его поверхность наносят по трафарету 6 цилиндров и делают 6 лунок. В 3 лунки вносят по 0,1 мл испытуемого раствора антибиотика, в другие 3 лунки – по 0,1 мл стандартного раствора. Через 16-18 часов термостатирования при 37С цилиндры удаляют и измеряют диаметр зон задержки роста. Активность антибиотика устанавливается с помощью расчетной таблицы ГФК или по стандартной кривой на основе диаметра задержки роста.