Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
7. Грам+ микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый цвет. Грам- в розовый. Сущность окраски по Граму состоит в том, что отношение к краскам зависит от химического состава клетки и структурных особенностей клеточной стенки ( наличие муреина и частично липида). В составе клеточной стенки грам+ микроорганизмов большое количество муреина, воздействие этиловым спиртом вызывает разбухание муреина, что приводит к уменьшению диаметра пор и снижению проницаемости клеточной стенки. Поэтому не происходит вымывания красителя и обесцвечивания микробной клетки. В клеточной стенке грам- микроорганизмов муреиновый слой меньших размеров, диаметр пор больше и спирт легко проходит через клеточную стенку вымывая краситель. Микробная клетка принимает цвет дополнительного красителя (красный). Кроме того, в поверхностном слое грам+ микроорганизмов находится магниевая соль рибонуклеиновой кислоты, которая в присутствии йода в кислой среде образует прочное соединение с основными красителями. Это так же препятствует обесцвечиванию их спиртом.
8. Окраска спор. При неблагоприятных условиях для микробов (отсутствие питательной среды, высушивание, неблагоприятная температура и др.) в цитоплазме некоторых микроорганизмов образуются споры. Формируются они внутри вегетативной клетки, являясь эндоспорами. Палочковидные грамположительные микроорганизмы, образующие округлые споры, диаметр которых не превышает ширину микробной клетки относятся к роду Bacillus и называются бациллами. Микроорганизмы рода Clostridium имеют споры, диаметр которых превышает ширину микробной клетки, и называются клостридиями. По форме они бывают овальные и круглые.
Споры устойчивы к воздействию высоких температур, химических веществ, к высыханию, длительно сохраняются в почве, что объясняется их особым строением и химическим составом, в особенности ее оболочки. Поэтому споры стойки к действию красителей.
Все методы окраски спор основаны на обеспечении проникновения красителя через трудно окрашиваемую оболочку споры. Поэтому применяют протраву. После охлаждения оболочка вновь становится плотной и не пропускает дополнительный краситель.
Окраска спор методом Трухильо. На фиксированный мазок накладывают небольшой кусочек фильтровальной бумаги и на нее наносят водный раствор малахитовой зелени. Подогревают препарат на пламени горелки до появления паров и выдерживают в течение 3 минут, промывают водой и докрашивают 0,25%-ным водным раствором основного фуксина 1 минуту. Промывают водой и высушивают. Микрокартина: споры зеленые, а вегетативные клетки красные.
Окраска спор по методу Ожешки. 1. На высушенный на воздухе препарат, не фиксируя, наливают 0,5% раствор HСl и подогревают 2 минуты (до выделения паров); остудив, сливают кислоту, отмывают водой, дают высохнуть и фиксируют жаром на пламени спиртовки.
2. Фиксированный препарат покрывают полоской фильтровальной бумаги и красят карболовым фуксином Циля при подогревании, в течение нескольких минут до появления пара или даже доводя до кипения. По мере испарения добавляют краситель, не давая ему подсохнуть во время подогревания. Затем краситель сливают, а препарат промывают водой.
3. Обесцвечивают препарат 5% раствором HСl (быстрым погружением в стаканчик или ванночку) в течение нескольких секунд, и тотчас промывают в ванночке с водой. Время выдержки в кислоте колеблется в зависимости от препарата от нескольких секунд до нескольких минут. Это время можно определить опытным путем: через короткие промежутки времени препарат вынимают из кислоты; промывают водой, покрывают покровным стеклом и рассматривают с сухой системой микроскопа: если обесцвечивание оказывается недостаточным, то препарат снова обрабатывают кислотой. Эта обработка должна продолжаться до тех пор, пока вегетативные клетки не сделаются почти бесцветными (чуть заметный розовый оттенок не вредит отчетливости микроскопической картины, а при наблюдении без дополнительной окраски метиленовой синью даже полезен), споры же остаются окрашенными в яркий рубиново-красный цвет.
4. Дополнительно препарат окрашивают метиленовой синью. Докрашивание следует производить с большой осторожностью, начиная от самой короткой выдержки под краской, иначе метиленовая синь может проникнуть и в споры и испортить чистоту их окраски. Затем тщательно промывают водой.
В результате всех операций споры окрашиваются в яркий рубиново-красный цвет, вегетативные же клетки в синий или лиловый.