РЕФЕРАТ дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата сільськогосподарських наук10
Работа добавлена на сайт samzan.net:
УКРАЇНСЬКА АКАДЕМІЯ АГРАРНИХ НАУК
ІНСТИТУТ ТВАРИННИЦТВА
ГОНЧАРУК Оксана Петрівна
УДК 636.4:591.391.2
ВПЛИВ РІЗНИХ КУЛЬТУРАЛЬНИХ СЕРЕДОВИЩ НА МЕЙОТИЧНЕ ДОЗРІВАННЯ ООЦИТ-КУМУЛЮСНИХ КОМПЛЕКСІВ СВИНОМАТОК З НАСТУПНИМ ЇХ ЗАПЛІДНЕННЯМ IN VITRO
03.00.20 - біотехнологія
АВТОРЕФЕРАТ
дисертації на здобуття наукового ступеня
кандидата сільськогосподарських наук
ХАРКІВ–
Дисертацією є рукопис.
Робота виконана в лабораторії генофонду порід сільськогосподарських тварин Інституту розведення і генетики тварин Української академії аграрних наук
Науковий керівник: кандидат біологічних наук, старший науковий співробітник ГУЗЕВАТИЙ Олег Євгенович, Українська академія аграрних наук (м. Київ), завідувач Сектора агробіотехнології
Офіційні опоненти:
доктор сільськогосподарських наук, доцент ШЕРЕМЕТА Віктор Іванович, Національний аграрний університет (м. Київ), завідувач кафедри генетики тварин та біотехнології
кандидат біологічних наук, доцент ТКАЧЕНКО Сергій Васильович, Білоцерківський державний аграрний університет, вчений секретар
Провідна установа:
Державний науково-дослідний контрольний інститут ветеринарних препаратів та кормових добавок Міністерства аграрної політики України, м. Львів
Захист дисертації відбудеться "___" _______2001 року о ___ годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д65.356.02 при Інституті тваринництва УААН за адресою: 62404, Харківська обл., Харківський р-н., п/в Кулиничі
З дисертацією можна ознайомитися у бібліотеці Інституту тваринництва УААН за адресою: 62404, Харківська обл., Харківський р-н., п/в Кулиничі
Автореферат розісланий "____" ________ 2001 р.
Вчений секретар
спеціалізованої вченої ради,
кандидат біологічних наук Проніна В.В.
1
ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ
Актуальність теми. В свинарстві, як і в інших галузях тваринництва, в умовах інтенсифікації та індустріалізації галузі ведеться пошук нових ефективних методів створення, розведення і збереження цінних в генетичному відношенні тварин. Сучасний рівень розвитку біотехнології відкрив привабливі можливості розробки оригінальних шляхів отримання племінних особин. Визнаним шляхом прискорення селекційного процесу є метод трансплантації ембріонів (Квасницкий А.В. и др., 1988; Ruane J., 1988; Завертяев Б.П., 1989; Эрнст Л.К., Сергеев Н.И., 1989; Яблонский В.А., 1989; Seidel G., 1991; Бугров А.Д., 1995, 1997; Мартиненко Н.А. та ін., 1995, 1998; Осташко Ф.І., 1995; Шаловило С.Г., 1996; Шеремета В.І., 1997, 1999). Найскладнішою і ключовою ланкою при використанні біотехнологічних методів у свинарстві є отримання необхідної кількості повноцінних ембріонів на різних стадіях їх розвитку. При традиційних способах відтворення з всього величезного фонду яйцеклітин свиноматок (в яєчниках знаходяться десятки тисяч ооцитів) використовується лише мінімальна частина загального запасу, а переважна більшість клітин залишається в яєчниках, підлягає атрезії і у відтворенні участі не бере. Розробка і вирішення проблеми дозрівання ооцит-кумулюсних комплексів, запліднення in vitro яйцеклітин та раннього ембріонального розвитку дозволить не тільки отримувати необхідну кількість зародків свиней, а й в більш повній мірі використовувати потенційний запас гамет самиць, що закладений в яєчниках. Безумовно, що вже на сучасному етапі технологія in vitro отримання зародків інтенсивно використовується як дешеве й зручне джерело ембріонів для одержання клонованих і трансгенних сільськогосподарських тварин (Безуглий М.Д., 1995; Wilmut J. et al., 1997; Зубець М.В. та ін., 1997, 1999). Однак, отримання біологічно повноцінних ембріонів свиноматок методом запліднення in vitro дозрілих поза організмом яйцеклітин поки що, на жаль, є винятком, а ніж правилом, тому метод потребує вдосконалення (Yoshida M.et al., 1993; Nagai T. et al.,1994; Abeydeera L.R. et al., 1998, 1999).
Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Робота виконувалася у лабораторії генофонду порід сільськогосподарських тварин Інституту розведення і генетики тварин УААН як складова наукової теми: "Розробити методи культивування ооцитів сільськогосподарських тварин, умови для заморожування ооцитів корів і створити ооцито-та ембріобанк великої рогатої худоби" (номер державної реєстрації 0196 UO 16325).
Мета і завдання досліджень. Метою досліджень була розробка оптимальних варіантів отримання біологічно повноцінних, придатних до запліднення in vitro яйцеклітин свиноматок. Відповідно до мети визначалися наступні завдання:
- Дослідити залежність кількості і якості ооцит-кумулюсних комплексів, результатів їх культивування in vitro від способу отримання гамет самиць з яєчників свиноматок.
. З'ясувати строки мейотичного дозрівання до метафази-2 ооцит-кумулюсних
2
комплексів свиноматок та динаміку зміни фаз мейозу при їх культивуванні.
. Встановити ефективність використання різних поживних середовищ для
дозрівання поза організмом ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок.
4. Вивчити ефект використання клітин гранульози у поживному середовищі на етапі дозрівання поза організмом гамет свиноматок.
- Оцінити повноцінність дозрівання яйцеклітин свиноматок в різних поживних середовищах шляхом їх запліднення in vitro.
Об’єкт дослідження: яєчники, ооцит-кумулюсні комплекси і яйцеклітини свиноматок, ембріони свиней, що були отримані in vitro.
Предмет дослідження: ядерне і цитоплазматичне дозрівання ооцит-кумулюсних компплексів свиноматок у різних культуральних середовищах, розвиток зигот свиней після запліднення in vitro.
При виконанні роботи використовували біотехнологічні (дозрівання поза організмом ооцит-кумулюсних комплексів, запліднення in vitro яйцеклітин, культивування зигот і зародків), морфологічні (оцінка яєчників, ооцитів, яйцеклітин, сперматозоїдів та ембріонів за морфологічними показниками) і цитогенетичні (аналіз мейотичного дозрівання гамет самиць та дроблення зародків) методи досліджень.
Наукова новизна одержаних результатів. Проведений порівняльний аналіз використання різних поживних середовищ при дозріванні і заплідненні in vitro яйцеклітин свиноматок. Визначені терміни культивування, що необхідні ооцит-кумулюсним комплексам свиноматок для дозрівання поза організмом до різних стадій мейозу. Встановлені особливості мейотичного дозрівання гамет свиноматок у культуральному середовищі поповненому клітинами гранульози. Виявлена залежність кількості і якості ооцитів свиноматок від способу отримання їх з яєчників забитих тварин. Встановлений позитивний вплив використання змішаної сперми від різних кнурів при заплідненні in vitro яйцеклітин свиноматок.
Практичне значення одержаних результатів. Дослідження виявили можливість дозрівання поза організмом в різних поживних середовищах ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок з наступним їх заплідненням in vitro і отриманням ембріонів. Результати динаміки дозрівання гамет свиноматок дозволяють визначати стан хромосомного апарату клітин в любий проміжок часу культивування. Одержані результати мають цінність для поглиблення знання механізму і строків дозрівання поза організмом ооцит-кумулюсних комплексів свиноматок і можуть бути використані в роботі біотехнологічних центрів і лабораторій, що займаються питаннями культивування і запліднення in vitro ооцитів ссавців.
Особистий внесок здобувача. Експериментальна робота, аналіз літератури, інтерпритація одержаних результатів, їх статистична обробка виконані автором особисто. Вибір напрямку та опрацювання методики досліджень проведені разом з науковим керівником. Із спільних досліджень використано свою частину роботи.
Апробація результатів дисертації. Одержані в експериментах наукові матеріали доповідалися і обговорювалися на щорічних засіданнях лабораторії генофонду порід сільськогосподарських тварин і аспірантських сесіях Інституту розведення і генетики тварин УААН (1995-1998 рр.), на конференціях: "Региональная конференция молодых ученых и специалистов".- Оренбург, 1997; "Интенсификация производства продукции животноводства в Республике Беларусь".-Жодино, 1998; Международной конференции молодых ученых "Творческое развитие научного наследия академика М.Ф.Иванова".- Аскания Нова, 1998; Третьей международной конференции “Актуальные проблемы биологии в животноводстве”.- Боровск, 2000.
Публікації. Матеріали дисертації опубліковані у 9 друкованих працях.
Структура і обсяг дисертації. Дисертація викладена на 139 сторінках машинописного тексту, включає 16 таблиць та 17 рисунків. Дисертація складається з вступу, огляду літератури, матеріалу і методики досліджень, результатів досліджень і їх обговорення, висновків і практичних пропозицій. Список літературних джерел включає 307 найменувань, в тому числі 161 іноземних авторів.
3
МАТЕРІАЛ ТА МЕТОДИКА ДОСЛІДЖЕНЬ
Досліди проводили на фолікулярних ооцитах, одержаних з яєчників свиноматок порід велика біла, українська степова біла і ландрас. Загальна схема досліджень наведена на рис.1. Яєчники в лабораторію привозили не пізніше 1,5-2,5 годин після забою тварин у термосі з фізіологічним розчином (0,9% NaCl) та антибіотиками (100 од/мл пеніциліну і 100 мкг/мл стрептоміцину) при температурі 32-380С. В лабораторії яєчники двічі промивали свіжоприготовленим фізіологічним розчином. Ооцити отримували з яєчників двома шляхами: пункцією антральних фолікулів або надрізаючи лезом видимі антральні фолікули. Вимивали середовищем Дюльбекко з 1 од/мл гепарину ("Biochemi") і антибіотиками, виловлювали пастерівською пипеткою та оцінювали за морфологічними ознаками під контролем мікроскопу МБС-9. Для культивування використовували ооцити з щільним або частково розпушеним кумулюсом, гомогенною та тонкозернистою ооплазмою.
Процедуру дозрівання проводили в чотирьохлункових планшетах ("Costor") протягом 45 годин у накритих вазеліновим маслом краплях поживного середовища з 10% попередньо інактивованої (560С, 30 хв.) фетальної сироватки корів ("Sera Lab."), 50 мкг/мл гентаміцину ("Reanal") з додатками гормональних [2,5 мкг/мл фолікулостимулюючого гормону ("Schering corporation"), 1,0 мкг/мл естрадіолу ("Serva"), 2,5 МОд/мл лютеінизуючого гормону ("Serva")] та енергетичних [2,0 мМ пірувату натрію ("Sigma") і 2,92 мМ лактату кальцію ("Sigma")] компонентів об'ємом 200 мкл на 20 клітин при температурі 38,50С та 5% CO2 у повітрі. В експериментах використовували 4 типи поживних середовищ: DMEM ("Sigma", кат. N D5648), M-199 ("Sigma", кат. N M2520), DME/Ham-F-12 ("Sigma", кат. N D8900), Ham-F-10 ("Sigma", кат. N N1387).
ce
4
2. либо документу руку эта бумага имела на бирже вес.
3. Переходные режимы трансформаторов
4. а он жил в VIV веках до н
5. тематических процессов контроллер прерываний контроллер прямого доступа к памяти контроллеры устр
6. Договору про дружбу і державний кордон і таємного секретного протоколу до нього 1939 22 жовтня проведенн
7. 15 декабря 2001 г когда было принято решение созвать конвент для обсуждения будущего Европы
8. Індивідуальний і диференційований підхід до учнів у навчанні математики.html
9. тема водоснабжения комплекс инженерных сооружений и устройств для получения воды из природных источников
10. чистоты гамет. Менделирующие признаки человека
11. Субъекты международного права
12. Линейные программы
13. Деятельность социального педагога по разрешению споров о воспитании детей
14. просвещения в Россию и их переработки в соответствии с русскими условиями
15. особый товариграющий роль всеобщего эквивалента при обмене товаров
16. Контрольная работа- Отделочные материалы- линолеум.html
17. Характеристики аппартных средств вычислительной техники
18. Notes or pln when speking write only min points on note crds
19. Многие люди получают психологическое удовлетворение от того своим собственным боссом
20. Эмиль или о воспитании вызвала гнев церкви который преследовал Руссо вплоть до его смерти 6