Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«Курский государственный медицинский университет
Федерального агентства по здравоохранению
и социальному развитию»
Кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии
учебно-методическое пособие
для самоподготовки и самостоятельной
работы студентов лечебного факультета
по микробиологии, вирусологии, иммунологии
Курск – 2009
|
|
Печатается по решению |
|
ББК 52.6я73 |
редакционно-издательского |
|
совета ГОУ ВПО КГМУ |
|
|
Росздрава |
Учебно-методическое пособие для самоподготовки и самостоятельной работы студентов лечебного факультета по микробиологии, вирусологии, иммунологии. – Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2009. – 192 с.
Составители: профессор П.В. Калуцкий
профессор В.В. Бельский
Рецензенты: д.м.н., профессор Л.И. Кафарская
д.м.н., профессор В.А. Романов
|
ISBN 978-5-7487-1305-4 |
ББК 52.6я73 |
|
Калуцкий П.В., Бельский В.В., 2009 ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2009 |
План практических занятий по микробиологии,
ВИРУСОЛОГИИ, ИММУНОЛОГИИ
1. Бактериологическая лаборатория. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования.
2. Сложные методы окраски.
3. Структура бактериальной клетки.
4. Морфология микроскопических грибов, спирохет, актиномицетов, микоплазм, риккетсий, хламидий.
5. Итог по разделу «История микробиологии. Морфология микробов».
6. Физиология микробов. Питательные среды. Культивирование бактерий аэробов и анаэробов. Методы выделения чистых культур бактерий.
7. Выделение чистых культур бактерий (продолжение). Методы стерилизации.
8. Выделение чистых культур бактерий (окончание). Изучение ферментативных свойств бактерий. Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха. Нормальная микрофлора организма человека.
9. Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха (окончание). Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы. Нормальная микрофлора организма человека.
10. Итог по разделу «Физиология микробов».
11. Химиотерапия и антибиотики. Бактериофагия.
12. Антибиотики (окончание). Генетика микробов, генная инженерия, биотехнология.
13. Инфекция. Экспериментальный метод исследования.
14. Иммунитет. Факторы врождённого иммунитета. Антигены.
15. Антитела. Реакции иммунитета: реакция нейтрализация токсинов антитоксинами, реакция преципитации, реакция агглютинации.
16. Реакция иммунного лизиса (иммунного бактериолиза, иммунного гемолиза). Реакция связывания комплемента. Реакции с мечеными компонентами: иммунофлюоресценция (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), иммуноблоттинг, радиоиммунный анализ (РИА), иммунная электронная микроскопия (ИЭМ).
17. Медицинские биологические препараты для диагностики, профилактики и терапии инфекционных болезней.
18. Итог по разделу «Инфекция и иммунитет».
19. Общая характеристика возбудителей кишечных инфекций. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов.
20. Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, бактериальной дизентерии, эшерихиозов.
21. Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, дизентерии, эшерихиозов. Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов) и внутрибольничных сальмонеллёзов.
22. Микробиологический диагноз брюшного тифа, паратифов, коли-инфекции (окончание). Микробиологический диагноз холеры. Микробиологический диагноз кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции.
23. Микробиологический диагноз холеры (окончание). Итог по разделу «Возбудители кишечных инфекций».
24. Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками.
25. Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками (продолжение), грамотрицательными палочковидными микроорганизмами и анаэробными микроорганизмами.
26. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, заболеваний, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами (продолжение), дифтерии.
27. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, дифтерии (окончание). Микробиологическая диагностика коклюша, гемофильной инфекции, легионеллёза, туберкулёза, лепры, актиномикоза.
28. Итог по разделу «Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками, грамотрицательными палочковидными и анаэробными микроорганизмами. Микробиологическая диагностика дифтерии, коклюша, гемофильной инфекции, легионеллёза, туберкулёза, лепры, актиномикоза».
29. Микробиологический диагноз зоонозных инфекций - чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы.
30. Микробиологическая диагностика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы (окончание). Микробиологическая диагностика спирохетозов.
31. Микробиологическая диагностика микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов.
32. Морфология и физиология вирусов. Методы культивирования и обнаружения вирусов. Возбудители гриппа.
33. Возбудители острых респираторных заболеваний (ОРЗ), герпетической инфекции.
34. Возбудители энтеровирусных (полиомелита, Коксаки, ЕСHО), нейровирусных (бешенства, вирусных энцефалитов) инфекций.
35. Возбудители вирусных гепатитов. Возбудители геморрагической лихорадки с почечным синдромом, лихорадки Марбург, лихорадки Эбола.
36. Возбудители ВИЧ-инфекции. Онкогенные вирусы. Возбудители медленных вирусных инфекций. Прионы.
37. Итог по практическим навыкам и умениям.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ
ПОДГОТОВКЕ СТУДЕНТА К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ
«Учебно-методическое пособие для самоподготовки и самостоятельной работы студентов лечебного факультета по микробиологии, вирусологии, иммунологии» предназначено для оказания методической помощи как в процессе самостоятельной подготовки к практическому занятию, итоговому занятию и экзамену, так и в процессе работы на самом занятии. В начале пособия имеется план практических занятий по всему курсу. План лекций и практических занятий на семестр вывешивается на стенде у входа на кафедру. Для того чтобы наиболее эффективно и с наименьшими затратами времени усвоить лекционный материал, приучитесь готовиться к лекции: прочтите план предстоящей лекции, затем хотя бы один раз прочтите соответствующий материал по учебнику. Такое предварительное знакомство с темой облегчит вам и процесс восприятия лекции, и конспектирование. При конспектировании лекции обратите особое внимание на новейшие данные медицинской науки и практики, которые не нашли отражение в учебнике.
Готовясь к предстоящему практическому занятию, прочитайте материал по пособию: тема занятия, значение его в общемедицинской подготовке врача, цель самоподготовки (то есть что должен знать студент после самостоятельного изучения темы); исходный уровень знаний – что необходимо вспомнить (или повторить) из ранее пройденного; цель занятия, план изучения темы, навыки, которыми студент должен овладеть после изучения темы. Выучите материал по учебнику, затем по руководству к лабораторным занятиям, по конспекту лекций изучите также дополнительный материал, если он имеется в пособии. Для более углублённого изучения предмета рекомендуется дополнительная литература по разделам. В процессе подготовки читайте текст, вдумываясь в смысл, не продвигайтесь дальше, если вы не поняли прочитанного. Новые термины, латинские названия напишите несколько раз и повторите вслух. Материал, поддающийся классификации, изобразите в виде схемы на бумаге. В конце подготовки проверьте свои знания по контрольным вопросам, которые имеются в пособии по каждой теме. Вопросы предназначены для того, чтобы вы лучше продумали и поняли выученное, потому что важно не только усвоить сумму отдельных фактов, но и осмыслить эти факты и связь между ними, например, для питательных сред – принцип их действия, для реакций иммунитета – механизм и принцип реакции, для лабораторной диагностики конкретного заболевания – особенности методов, связанных с биологией возбудителя, и реакцией на него организма. Выполните в тетради обязательные задания.
По темам частной микробиологии на кафедре в коридоре вывешены наглядные пособия – стенды. Учебные стенды есть также и в учебных лабораториях. Лечебно-профилактические и диагностические препараты в виде наборов ампул и флаконов имеются на кафедре и выдаются лаборантами для изучения. Если в процессе подготовки к занятию у Вас возникают вопросы, Вы можете проконсультироваться с преподавателем. Консультации проводятся в течение всего учебного года. Текущий контроль знаний студентов проводится на каждом практическом занятии с помощью тестового письменного и компьютерного методов, а также в ходе устного разбора. Итоговый контроль по разделам курса – рубежный (компьютерный и устное собеседование), контроль практических навыков на последнем занятии и окончательный – на экзамене (тесты на ЭВМ, устный опрос). При подготовке к итоговым занятиям Вы можете проконтролировать свои знания по вопросам к отдельным разделам курса, электронным тренажёрам, а при подготовке к экзаменам – по контрольным вопросам по всему курсу микробиологии, вирусологии, иммунологии, которые помещены в конце пособия. Главное, что определит Ваши успехи при изучении предмета – это последовательность, систематичность в работе. Вы хорошо и легко усвоите все последующие разделы только в том случае, если основательно изучили и, главное, поняли предыдущие разделы.
ЖЕЛАЕМ УСПЕХА!
ОСНОВНАЯ УЧЕБНАЯ ЛИТЕРАТУРА
1. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология : учеб. для студентов высш. учеб. заведений, обучающихся по мед. специальностям / Л.Б. Борисов. - 3-е изд., стер. - М.: МИА, 2002. - (Учеб. лит. для студентов мед. вузов).
2. Борисов Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: учеб..пособие для студ. мед. вузов / Л.Б. Борисов, Б.Н. Козьмин-Соколов, И.С. Фрейдлин. - М.: Медицина, 1993. - (Учеб. лит. для студентов мед. ин-тов).
ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Занятие 1
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ. МОРФОЛОГИЯ
БАКТЕРИЙ. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ
Микроорганизмы являются возбудителями инфекционных болезней, которые часто встречаются в практике врача. Для того чтобы правильно поставить диагноз инфекционного заболевания, необходимо хорошо знать морфологию микробов, их основные формы, уметь различать их под микроскопом. Каждый врач должен владеть методом микроскопии, для чего необходимо знать устройство микроскопа и правила работы с ним.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- предмет и задачи микробиологии;
- основные этапы исторического развития микробиологии;
- положение микроорганизмов среди других живых существ, принципы их классификации, основные группы микроорганизмов; основные формы бактерий,
- принцип и правила микроскопии с иммерсионным объективом;
- усвоить принцип тёмнопольной, фазово-контрастной, люминесцентной и электронной микроскопии;
- принципы организации и назначение бактериологической, вирусологической, серологической лабораторий,
- оснащение лаборатории и рабочего места бактериолога,
- правила работы на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо знать:
- устройство оптического микроскопа, принцип его работы, разрешающую способность;
- преломление света, показатель преломления среды,
- устройство и принцип работы тёмнопольного и фазово-контрастного микроскопов;
- устройство и принцип работы люминесцентного микроскопа;
- устройство и принцип работы электронного микроскопа;
- принципы разделения живых существ на эукариотов и прокариотов.
Цель занятия
1. Ознакомиться с принципами организации и оборудования бактериологической, вирусологической и серологической лабораторий.
2. Приобрести навыки соблюдения правил противоэпидемического режима и техники безопасности в бактериологической лаборатории.
3. Ознакомиться с основными типами микроскопии, их значением. Овладеть микроскопическим методом исследования.
4. Ознакомиться с основными формами бактерий.
5. Получить чёткое представление о положении микробов среди живых организмов и принципах их классификации.
6. Научится готовить микропрепараты бактерий и окрашивать их простым методом.
План изучения темы
1. Микробиология: определение предмета, отрасли микробиологии, методы исследования, задачи медицинской микробиологии, связь с другими науками, основные разделы.
2. Место бактерий среди других микроорганизмов, размеры, основные формы.
3. Методы изучения морфологии бактерий, простые методы окраски, основные красители.
4. Специальные методы микроскопии.
После изучения темы студент должен уметь
1. Готовить фиксированные препараты из культур микроорганизмов, растущих на плотных питательных средах.
2. Окрашивать препараты простыми методами.
3. Проводить микроскопию с иммерсионной системой микроскопа
4. Дифференцировать микроорганизмы по морфологическим, тинкториальным свойствам и интерпретировать полученные результаты.
Дополнительная литература по разделу
«морфология микробов» (занятия 1-5)
1. Авакян А.А. Атлас анатомии бактерий, патогенных для человека и животных / А.А. Авакян, Л.Н. Кац, И.Б. Павлов. - М.: Медицина, 1972.
2. Борисов Л. Б. Краткий справочник микробиологической терминологии / Л.Б. Борисов, И.С. Фрейдлин. - М.: Медицина, 1975.
3. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
4. Воробьев А.А. Медицинская и санитарная микробиология: учеб. пособие по микробиологии, вирусологии, иммунологии для студентов мед. вузов / А.А. Воробьев, Ю.С. Кривошеин, В.П. Широбоков. - М.: Академия, 2003. - (Высш. образование).
5. Джавец Э. Руководство по медицинской микробиологии: пер. с англ.: в 3 т. / Э. Джавец, Дж.Л. Мельник, Э. Эйдельберг. - М.: Медицина, 1982. - Т. 1.
6. Коротяев А.И. Медицинская микpобиология, иммунология и виpусология: учеб. для мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев; под pед. А.И. Коpотяева. - 3-е изд., испр. и доп. - СПб.: СпецЛит, 2002.
7. Красильников А.П. Микробиологический словарь-справочник / А.П. Красильников, Т.Р. Романовская. - 2-е изд., доп. и пеpеpаб. – Минск: Асаp, 1999.
8. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
9. Медицинская микробиология / гл. pед. В.И. Покpовский, О.К. Поздеев. - М.: ГЭОТАР МЕДИА, 1998. - (Учеб. лит. для студентов мед. вузов и врачей).
10. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб. для студентов мед. вузов / под ред. А.А. Воробьева. - М.: МИА, 2004.
11. Методы общей бактериологии: пер. с англ. / под ред. Ф. Герхардта и др. - М.: Мир, 1983. – Т. 1.
12. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
13. Поздеев О.К. Медицинская микробиология: учеб. пособие для студентов мед. вузов / О.К. Поздеев; под pед. В.И. Покpовского. - 3-е изд., стер. – М.: ГЭОТАР МЕДИА, 2006. - (XXI век).
14. Райнис Б.Н., Пожарская В.О., Казиев А.Х. Общая микробиология с вирусологией и иммунологией / Б.Н. Райнис, В.О. Пожарская, А.Х. Казиев. - М.: Триада-Х, 2000.
15. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: учеб. пособие для студентов мед. вузов / под ред. В.В. Теца. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина,
2002. - (Учеб. лит. для студентов мед. вузов).
16. Словарь терминов, используемых в микробиологии / сост.:
В.К. Шильникова, В.Т. Емцев, Г.В. Годова и др.; под ред. В.К. Шильниковой; Моск. с.-х. акад. им. К.А. Тимирязева, каф. микробиологии. - М.: Изд-во МСХА, 2001.
17. Стейниер Р. Мир микробов: пер. с англ.: в 3 т. / Р. Стейниер,
Э. Эдельберг, Дж. Ингрэм. – М.: Мир, 1979.
18. Шлегель Г.Г. История микробиологии: пер с нем. / Г.Г. Шле-
гель. - М.: УРСС, 2002.
19. Шлегель Г.Г. Общая микробиология: пер. с нем. / Г.Г. Шлегель. - М.: Мир, 1987.
20. Шуб Г.М. Основы медицинской бактериологии, вирусологии и иммунологии / Г.М. Шуб. - М.: Логос, 2001.
21. Текущая информация – в периодическом издании «Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии».
ПРАВИЛА ДЛЯ СТУДЕНТОВ, РАБОТАЮЩИХ НА КАФЕДРЕ МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ, ИММУНОЛОГИИ
Работа на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии и в бактериологической лаборатории требует строгого соблюдения специальных правил, так как исследования проводятся с использованием культур патогенных микроорганизмов и заразного материала от больных и экспериментальных животных. Соблюдение этих правил необходимо для обеспечения как личной безопасности, так и безопасности окружающих.
1. Студенты должны приходить на кафедру в халатах, шапочках, иметь сменную обувь. Категорически запрещается работать в учебных лабораториях без халатов и шапочек, выпускать из-под спецодежды волосы, воротнички, курить, принимать напитки и пищу, пользоваться мобильной связью.
2. Каждый студент имеет постоянное рабочее место в лаборатории. Из личных вещей студента на рабочем месте допускается наличие только рабочей тетради, в которой делаются записи и зарисовки. Ничего лишнего (в том числе учебников и других книг) на рабочем столе не должно быть.
3. С собой нужно иметь: тетрадь для ведения дневника работы, тетрадь для тестовых заданий, цветные карандаши. Не разрешается вести записи красными чернилами или пастой.
4. До начала работы необходимо проверить рабочее место, состояние микроскопа, о недостатках сообщить дежурным студентам и преподавателю.
5. Работать аккуратно, экономно расходовать материалы и реактивы, по окончании работы гасить спиртовку. Необходимо проявлять максимальное внимание ко всем этапам работы с культурами и заражёнными микробами животными. Во время проведения посевов и приготовления мазков не разговаривать и не ходить по лаборатории. Все пробирки и чашки с посевами должны быть промаркированы. В случае загрязнения заразным материалом поверхности стола и других предметов, кожи рук и лица - обработать дезинфицирующим раствором и немедленно сообщить о случившемся преподавателю. Использованные пипетки, предметные и покровные стекла, шпатели, ватные тампоны необходимо помещать в сосуды с дезинфицирующим раствором (пипетки – при полном погружении). Пинцеты, бактериальные петли, иглы после работы с исследуемым материалом необходимо прожигать в пламени горелки.
6. В конце занятия привести в порядок рабочее место. Все предметы на рабочем столе разместить в том порядке, в каком они были до работы. Отработанный материал (культуры, микробный материал и др.) поместить в бикс для обеззараживания путём автоклавирования. Микроскоп привести в порядок и поместить в шкаф. Вылить в специальную ёмкость воду из лотков, обработать при необходимости руки дезинфицирующим раствором и вымыть их с мылом.
ОБЯЗАННОСТИ ДЕЖУРНОГО
1. Дежурные получают от лаборанта всё необходимое для работы, проверяют, всё ли в порядке.
2. Устраняют все недостатки, возникающие в процессе работы.
3. Собирают у студентов посевы, ставят в термостат; использованные посевы сдают лаборанту для обеззараживания путём автоклавирования.
4. По окончании работы следят за тем, чтобы все рабочие места были приведены в порядок, микроскопы протерты и поставлены на место.
5. Сдают лабораторию лаборанту.
Дополнительный материал к занятию
Методы обеззараживания отработанного материала
и контаминированных патогенными микробами объектов
внешней среды
Использованные в работе предметные стекла, пипетки, стеклянные шпателя и металлические инструменты немедленно после работы помещают в стеклянные банки с дезинфицирующим раствором (3% раствор хлорамина), которые должны находиться на рабочем столе.
Посуда, в которой выращивались микроорганизмы (чашки, пробирки, флаконы), складываются в биксы для обеззараживания путём автоклавирования.
Рабочее место по окончании работы подлежит уборке с применением дезинфицирующих средств. Используют более концентрированные растворы, чем для обработки рук, - 5% раствор хлорамина. Пинцетом берут кусочек ваты, смоченной дезинфицирующим раствором, и протирают поверхность стола на рабочем месте.
Мероприятия при возникновении аварии
Объём мероприятий по ликвидации аварии зависит от характера выполняемой работы, вида и свойств возбудителя, масштабов аварии:
- авария с разбрызгиванием патогенных биологических агентов (ПБА), т.е. с образованием аэрозоля (бой пробирок, флаконов или колб с жидкой культурой; бой чашек и пробирок с культурами на агаре с конденсатом; разбрызгивание бактериальной суспензии из пипетки или шприца; разбрызгивание тканевой жидкости при вскрытии трупов заражённых животных, а также другие аварии, ведущие к контаминации воздуха или окружающих предметов, например, авария при транспортировании ПБА в автоклавную и между подразделениями);
- авария без разбрызгивания ПБА (касание петлей с инфицированным материалом края чашки, пробирки, флакона, кристаллизатора, трещина на чашке Петри, пробирке, флаконе с биологическим материалом, падение на стол твёрдой частицы при обжигании петли после посева, касание поверхности посева на твёрдой питательной среде и т.п.);
- авария, связанная с нарушением целостности кожных покровов.
В подразделении, проводящем работу с ПБА, в специально отведённом месте хранят гидропульт (автомакс), комплекты рабочей (для переодевания пострадавших) и защитной (для сотрудников, ликвидирующих последствия аварии) одежды, аварийную аптечку.
В состав аварийной аптечки входит: спирт этиловый 70% (два флакона по 100 мл), 2 - 3 навески перманганата калия для приготовления 0,05% раствора (0,0125 г перманганата калия + 25 мл воды), стерильная дистиллированная вода, 5% настойка йода, ножницы с закруглёнными браншами, перевязочные средства (вата, бинты и пр.), жгут и нашатырный спирт.
Кроме вышеперечисленного в аптечке подразделений, проводящих вирусологические исследования, должны быть 1% раствор борной кислоты, интерферон или индуктор интерферона; в аптечке подразделения, проводящего микологические исследования - 1% раствор борной кислоты или навески для приготовления раствора (0,25 г борной кислоты + 25 мл воды).
Порядок действий при возникновении аварийной ситуации.
При аварии с разбрызгиванием ПБА:
- все находящиеся в помещении лица немедленно прекращают работу и, задержав дыхание, выходят из заразного помещения в предбокс, плотно закрывают дверь, включают аварийную сигнализацию и сообщают о случившемся руководителю подразделения;
- руки обрабатывают дезинфицирующим раствором или спиртом; если лицо не было защищено, то его обильно обрабатывают 700 этиловым спиртом;
- слизистые глаз, носа и рта обрабатывают препаратами из аварийной аптечки; рот и горло прополаскивают 700 этиловым спиртом, в нос закапывают раствор марганцовокислого калия 1:100000 или 1% раствор борной кислоты, а при аварии с вирусами затем закапывают интерферон или индуктор интерферона;
- защитную одежду снимают, погружают в дезинфицирующий раствор или помещают в бикс (бак) для автоклавирования;
- открытые части тела протирают 700 этиловым спиртом;
- в глаза (можно и в нос) закапывают растворы антибиотиков или других средств, к которым чувствителен возбудитель;
- принимают гигиенический душ;
- надевают чистую рабочую одежду.
Порядок проведения дезинфекционных мероприятий:
- сотрудники, участвующие в ликвидации аварии, должны быть одеты в хирургический халат, косынку, пластиковые бахилы;
- при проведении дезинфекции способом орошения в качестве СИЗ органов дыхания используются респираторы марки РУ-60 М или РПГ-68 с патроном, соответствующим применяемому дезинфектанту, или противогаз типа ГП-5;
- для обработки используют дезинфицирующий раствор, эффективный в отношении соответствующего инфекционного агента;
- дезинфекцию помещения проводят, разбрызгивая из гидропульта (автомакса) дезинфицирующий раствор от входной двери и далее, продвигаясь по обработанной территории и орошая перед собой все предметы (пол, стены, потолок) и воздушную среду;
- через 2 часа после первичной обработки собирают тампонами, смоченными дезинфицирующим раствором, осколки разбитой посуды, погружая их в ёмкость с дезинфицирующим раствором; лабораторную посуду с посевами, находившуюся в момент аварии на рабочих поверхностях, погружают в ёмкость с дезинфицирующим раствором или обтирают салфеткой, смоченной дезинфицирующим раствором, и помещают в ёмкость для автоклавирования;
- по окончании дезинфекции воздух и поверхности в помещении обеззараживают бактерицидными лампами по режимам согласно нормативным документам;
- сотрудник, проводивший дезинфекционную обработку, выходит в предбокс или коридор, снимает защитную одежду, погружая её в дезинфицирующий раствор;
- спустя два часа проводят уборку помещения, после чего работа может быть возобновлена.
Методы антисептической обработки рук лабораторных работников, контаминированных исследуемым материалом, культурами
патогенных микробов
По окончании работы руки обрабатывают дезинфицирующим раствором. Используют ватные тампоны или марлевые салфетки, смоченные в 700 этиловом спирте (1% хлорамин, 3% раствор лизола). Последовательность обработки: тыл кисти, ладонная поверхность, межпальцевые пространства и ногтевые ложа, т.е. с учётом первоначальной обработки менее, а потом наиболее загрязнённых мест. Вначале обрабатывают левую, а потом правую кисть руки.
При загрязнении рук культурой патогенного микроба или патологическим материалом сразу же обрабатывают данный участок кожи, покрывая его на 3-5 минут ватой, смоченной в дезинфицирующем растворе.
После обработки рук дезинфицирующим раствором их моют водой с мылом.
Приготовление фиксированных препаратов
из культур микроорганизмов
Приготовление окрашенного препарата из культуры микроорганизмов включает: 1) приготовление мазка, 2) высушивание мазка, 3) фиксацию, 4) окраску.
Приготовление мазка. При приготовлении мазка из культуры микроорганизмов, выросшей на поверхности плотной питательной среды, на обезжиренное предметное стекло наносят петлёй небольшую каплю физиологического раствора, располагая её в центре круга, нарисованного с обратной стороны карандашом по стеклу. При работе спиртовка должна находиться прямо перед вами, на удобном для работы расстоянии. Предметное стекло должно находиться в чашке Петри или лотке: категорически запрещается готовить мазки на предметном стекле, лежащем на столе! В правую руку берут бактериологическую петлю, в левую - пробирку с культурой. Петлю стерилизуют, внося её в пламя горелки в вертикальном положении. После того как петля накалится докрасна, проводят конец петледержателя через пламя. После этого из пробирки вынимают пробку, удерживая её мизинцем правой руки. После обжигания на спиртовке края пробирки в неё вносят петлю, которую охлаждают, прикасаясь к стенкам пробирки. Затем петлей с поверхности среды снимают небольшое количество культуры. Не касаясь стенок пробирки, вынимают петлю и закрывают пробирку пробкой над спиртовкой. После этого пробирку с культурой помещают в штатив, а культуру на петле вносят в приготовленную заранее каплю физиологического раствора, хорошо размешивают и равномерно распределяют по стеклу в виде небольшого круга или овала
1–1,5 см в диаметре. По окончании приготовления мазка петлю вновь стерилизуют в пламени спиртовки.
Для приготовления мазка из бульонной культуры на предметное стекло наносят 1–2 петли исследуемого материала, стерилизуя петлю перед каждым погружением в бульонную культуру микроорганизма, как описано выше, и равномерно распределяют по стеклу (в этом случае не требуется предварительного нанесения на стекло физиологического раствора).
Высушивание мазка. Высушивание мазка производится на воздухе. Для ускорения высушивания предметное стекло с мазком, обращенным кверху, можно подержать в струе тёплого воздуха высоко над пламенем спиртовки, не внося препарат в пламя.
Фиксация мазка. Для этого используют физический и химический методы. Физический метод заключается в фиксации мазка над пламенем спиртовки в течение нескольких секунд мазком вверх (троекратно по 1 секунде). Эту операцию проводят достаточно быстро, стараясь не перегреть мазок, так как при перегревании могут произойти необратимые изменения в клетке. Химический метод фиксации является более мягким по сравнению с фиксацией на пламени. В качестве фиксаторов используют этанол, ацетон, смесь Никифорова (эквивалентное соотношение этанола и эфира), метанол, формалин. После фиксации мазок можно окрашивать.
Окраска мазка. Для окраски мазка следуют предписаниям для каждой методики окраски. При окраске простым способом на мазок наносят несколько капель раствора красителя так, чтобы весь мазок был покрыт им. Краситель оставляют на определённое время. Затем препарат промывают водой и просушивают фильтровальной бумагой.
Правила работы с микроскопом при использовании
иммерсионной системы
1. Настроить освещение микроскопа, используя вогнутое зеркало и объектив х8. Первоначально освещение настраивают при боковом осмотре верхней линзы конденсора. После этого при наблюдении в окуляр, изменяя положение зеркала, настраивают равномерную освещённость поля зрения.
2. На приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами. Иммерсионное масло можно наносить только на сухой мазок.
3. При помощи револьверного устройства установить иммерсионный объектив с увеличением х90.
4. Осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла.
5. Установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта.
6. Провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота. Нельзя допускать соприкосновения объектива с препаратом, так как это может повлечь повреждение стекла или фронтальной линзы объектива (свободное расстояние иммерсионного объектива 0,1-1 мм).
7. По окончании работы с микроскопом необходимо вытереть масло с иммерсионного объектива и перевести револьверное устройство на объектив с малым увеличением (х8).
Контрольные вопросы
Назовите самостоятельные научные дисциплины в микробиологии; основные разделы медицинской микробиологии, основные задачи медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии, основные методы, применяемые в медицинской микробиологии. Назовите отличительные признаки микроорганизмов как представителей царства прокариот. Какие размеры имеют бактерии? Какие различают основные формы бактерий? Как называются кокки, расположенные попарно, цепочкой, гроздьями? По четыре? Пакетами? Как называются палочки, образующие споры? Как называются извитые формы бактерий? Каким будет общее увеличение микроскопа: 1) окуляр х7, объектив х8; 2) окуляр х7, объектив х40; 3) окуляр х7, объектив х90? Каков предел разрешающей способности микроскопа с иммерсионным объективом? Какова роль иммерсионного масла? Каким свойством должно обладать иммерсионное масло для микроскопии? Нужно ли применять иммерсионное масло при микроскопии с объективом: х8, х40, х90? Этапы приготовления препарата–мазка. Для чего фиксируют мазки? Способы фиксации. Что такое простой способ окраски? Назовите красители, применяемые для простых способов окраски и их цвет.
Тёмнопольная микроскопия - на каком физическом принципе основана? Ход лучей света в микроскопе. Какие конденсоры применяются? Как выглядит поле зрения и изучаемые объекты, почему? Можно ли этим методом исследовать живые микробы? Как готовится препарат для исследования в тёмном поле? Фазово-контрастная микроскопия – принцип метода. Какие приборы и приспособления нужны для фазово-контрастной микроскопии? Преимущества данного метода.
Люминесцентная микроскопия - на каком физическом явлении основана? Виды люминесценций. Какой источник света используется? Как называются красители, применяемые для получения вторичной люминесценции? Можно ли исследовать этим методом живые микроорганизмы? Преимущества метода. Электронная микроскопия – что используется в электронном микроскопе вместо световых лучей? Чем объясняется высокая разрешающая способность электронного микроскопа: Какова длина световой волны; длина волны потока электронов? Чему равна предельная разрешающая способность любого микроскопа? Во сколько раз (примерно) больше разрешающая сила электронного микроскопа по сравнению со световым? Какой величины объекты можно увидеть в электронном микроскопе? Для чего применяется электронный микроскоп? Назовите методы микроскопии, позволяющие наблюдать живые микроорганизмы.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Ознакомление с правилами работы в микробиологической лаборатории.
2. Усвоение таксономического положения микробов. Начертите в тетради таблицу «Место микробов среди других живых существ».
3. Приготовление и окраска препаратов из бактериальных культур. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники приготовления и окраски препаратов. Приготовьте мазки-препараты из культур стафилококка и кишечной палочки; окрасьте простым способом –водным фуксином и метиленовым синим. Ознакомьтесь с наиболее употребительными красителями, применяемыми в микробиологической практике.
4. Микроскопирование и зарисовка окрашенных мазков-препаратов различных форм бактерий. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники микроскопии; самостоятельно промикроскопируйте и зарисуйте мазки–препараты различных форм бактерий: круглые (стафилококк, сарцина, стрептококк), палочковидные бактерии (стрептобацилла), извитые (вибрион).
5. Изучение методов тёмнопольной, фазово-контрастной и люминесцентной микроскопии. Повторите устно принципы микроскопии, ознакомьтесь с люминесцентной тёмнопольной и фазово-контрастной микроскопией.
Занятие 2
СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ
При микробиологической диагностике многих болезней приходится применять сложные методы окраски не только специалистам - микробиологам, но и лечащим врачам, в особенности в экстренных случаях. Для того чтобы правильно выбрать подходящий для каждого случая способ окраски и правильно оценить полученные результаты необходимо не только научиться окрашивать препараты, но и хорошо продумать и понять принципы сложных методов окраски. На практике наиболее часто применяют способы окраски по Граму в модификации Синёва и по Цилю-Нильсену.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать принцип и технику сложных методов окраски.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо вспомнить основные формы бактерий и этапы приготовления мазков-препаратов.
Цель занятия
1. Усвоить, что сложные методы окраски служат для дифференциации микробов между собой
2. Освоить метод окраски бактерий по Граму в модификации Синёва и по Цилю-Нильсену.
3. Найти различия в структуре и химическом составе грамположительных и грамотрицательных бактерий.
4. Ознакомиться с основными методами сложной окраски, применяемыми для выявления структурных элементов бактерий.
План изучения темы
1. Понятие о сложных методах окраски.
2. Принцип и техника окраски по Граму в модификации Синёва.
3. Принцип и техника окраски по Цилю-Нильсену.
4. Методы окраски: по Ожешко, по Бурри–Гинсу, по Нейссеру.
После изучения темы студент должен уметь
1. Готовить фиксированные препараты из культур микроорганизмов, растущих на плотных питательных средах.
2. Окрашивать препараты методами Грама (в модификации Синёва) и Циля-Нильсена.
3. Дифференцировать микроорганизмы по морфологическим, тинкториальным свойствам и интерпретировать полученные результаты.
Контрольные вопросы
Кто и когда впервые увидел и описал микроорганизмы? Назовите основные этапы развития микробиологии. Назовите фамилии учёных, с работами которых связано начало развития первых трёх этапов. Назовите фамилию первого микробиолога («охотника за микробами») в России. Назовите фамилию учёного, впервые разработавшего метод предохранительных прививок против оспы. Луи Пастер: назовите его основные открытия в области микробиологии; какой метод предложен им для предупреждения нагноений ран? Какие вакцины им получены? Роберт Кох: основные его открытия в области микробиологической техники и возбудителей болезни. И.И. Мечников: основные открытия в области иммунологии. Назовите фамилии выдающихся русских учёных-микробиологов и иммунологов: первооткрыватель вирусов; основатель первой в России школы микробиологов; учёный, впервые в России получивший пенициллин; иммунолог, автор вирусо–генетической теории происхождения злокачественных опухолей.
Для чего нужны сложные методы окраски? Назовите методы окраски, позволяющие: дифференцировать бактерии на две группы по структуре клеточной стенки; выявлять кислотоустойчивые микробы; выявлять споры; выявлять зёрна волютина; выявлять капсулы. Как производится окраска по Граму в модификации Синёва? Сущность окраски по Граму в модификации Синёва: в какой цвет окрашиваются грамположительные бактерии? Почему? В какой цвет окрашиваются грамотрицательные бактерии? Почему? От чего зависит различное отношение бактерий к окраске по Граму? Отношение бактерий к окраске по Граму в модификации Синёва: кокков, спорообразующих палочек, неспорообразующих палочек, извитых форм (перечислить исключения из правил). Техника окраски по Цилю-Нильсену. Принцип окраски: в какой цвет окрашиваются кислотоустойчивые бактерии, в какой – кислотоподатливые и почему? Какова основная особенность клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий?
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите в тетради этапы окраски по Граму в модификации Синёва и по Цилю-Нильсену.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Освоение метода окраски по Граму в модификации Синёва. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники окраски по Граму. Поставьте опыт окраски по Граму.
Цель опыта: определить, имеет ли метод Грама преимущество перед простым методом и в чём оно состоит; определить, в каких случаях целесообразно применение метода окраски по Граму.
Материал: стафилококки (грамположительные бактерии) и кишечные палочки (грамотрицательные бактерии).
Ход опыта: приготовить два одинаковых мазка из смеси стафилококков и кишечных палочек; окрасить один мазок водным фуксином, другой – по Граму в модификации Синёва. Микроскопировать.
Результат: два рисунка и описание их.
Вывод: (выводы содержат ответы на вопросы, поставленные в цели опыта).
Составьте схему окраски по Граму (поэтапно). Начертите таблицу «Отношение бактерий к окраске по Граму».
2. Освоение метода окраски по Цилю-Нильсену. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники окраски по Цилю-Нильсену. Поставьте опыт окраски по Цилю-Нильсену.
Цель опыта: определить, имеет ли метод Циля-Нильсена преимущества перед простым методом окраски и в чём оно состоит; в каких случаях целесообразно применение этого метода.
Материал: два одинаковых мазка из смеси туберкулёзной палочки (кислотоустойчивые бактерии) и кишечной палочки (кислотоподатливые бактерии).
Ход опыта: окрасить один мазок простым способом (метиленовым синим), другой – по Цилю-Нильсену. Микроскопировать.
Результат: два рисунка и описание их.
Вывод: (ответы, на вопросы, поставленные в цели опыта).
Изобразите принцип окраски по Цилю-Нильсену в виде схемы.
ЗАНЯТИЕ 3
СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ
Знание структуры бактериальной клетки важно для врача, так как особенности течения и эпидемиологии некоторых болезней связаны со структурой возбудителя. Например, наличие капсулы у чумного микроба и у возбудителя сибирской язвы способствует их быстрому распространению в организме; возбудитель ботулизма благодаря своей способности к спорообразованию не погибает при кипячении и поэтому сохраняется в пищевых продуктах. Кроме того, при идентификации, то есть при определении вида микроорганизма, обязательно исследуется его структура - наличие капсул, спор, жгутиков, включений. В некоторых случаях эти признаки приобретают большое значение для дифференциации сходных по многим свойствам, но разных видов бактерий. Например, отсутствие жгутиков для дифференциации дизентерийных палочек от брюшнотифозных, а также сибиреязвенных от сходных с ними непатогенных антракоидных палочек; наличие капсул для выявления пневмококов в мокроте, сибиреязвенных палочек в материале, взятом от больного; наличие включений (зёрен волютина) для дифтерийных бактерий.
Поэтому врачу любой специальности необходимо знать, какие бактерии имеют те или иные структурные элементы, какова биологическая роль этих элементов и как их можно выявить.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать структуру бактериальной клетки.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо вспомнить:
- принципы классификации микроорганизмов;
- основные размеры и формы бактерий;
- назначение сложных методов окраски.
Цель занятия
1. Отметить различия в строении и химическом составе прокариотов и эукариотов.
2. Усвоить, что сложные методы окраски служат для дифференциации микробов между собой.
3. Найти различия в структуре и химическом составе грамположительных и грамотрицательных бактерий.
4. Ознакомиться с основными методами сложной окраски, применяемыми для выявления структурных элементов бактерий.
План изучения темы
1. Постоянные структурные элементы бактериальной клетки.
2. Непостоянные структурные элементы бактериальной клетки.
3. Биологическая роль структурных элементов клетки.
4. Методы изучения структуры бактериальной клетки.
После изучения темы студент должен уметь
1. Выявлять структурные элементы бактериальной клетки.
2. Дифференцировать микроорганизмы в зависимости от наличия или отсутствия структурных элементов.
Контрольные вопросы
Укажите принципы систематики микроорганизмов. Что такое генетическая систематика? Последовательно (от низших к высшим) назовите основные таксономические единицы в систематике микроорганизмов. Дайте определения понятия: вид микроба, чистая культура, штамм, клон. Укажите основные признаки, по которым эукариоты отличаются от прокариотов. Укажите группы микроорганизмов, которые относятся к прокариотам, к эукариотам; назовите неклеточные формы. Как формируется название микроорганизма в соответствии с бинарной номенклатурой: что означает первое слово и как его пишут (с заглавной или строчной буквы); что означает второе слово и как его пишут? Какие термины применяются для обозначения отличий микроорганизмов в пределах одного вида? Какими терминами обозначаются отличия микроорганизмов в пределах одного вида по морфологическим признакам, по биологическим признакам, по антигенной структуре, по биохимической активности, по чувствительности к фагам, по свойствам патогенности, по биологическим свойствам? В каких единицах определяют размеры микроорганизмов и вирусов? Перечислите постоянные и непостоянные структурные элементы бактериальной клетки. Какие из структурных элементов зависят от условий существования бактерий? Клеточная стенка: её строение, биологическая роль. Какая основная химическая структура клеточной стенки характерна для всех бактерий? С помощью каких веществ можно разрушить клеточную стенку? Как называются бактерии, лишённые клеточной стенки полностью и частично? Что такое L-формы бактерий? Где располагается цитоплазматическая мембрана? Основные химические компоненты цитоплазматической мембраны, её строение. Биологическая роль - в каких процессах участвует? Нуклеоид бактерий - биологическая роль, химический состав; назовите отличия генома бактерий от генома эукариотов. Способы выявления нуклеоида бактерий. Внутриплазматические включения - биологическая роль. Какие патогенные бактерии имеют включения (название возбудителя и название вещества включений)? Способ окраски включений. Споры бактерий – биологическая роль. У каких морфологических форм бактерий споры встречаются чаще всего, очень редко, не встречаются? Процесс спорообразования: перечислите основные условия, способствующие образованию спор; время, необходимое для образования спор; может ли образоваться спора в кипящей воде? Какова устойчивость спор во внешней среде? Время, необходимое для превращения споры в вегетативную форму. Как могут располагаться споры в теле бактерий? Назовите виды бактерий с различным расположением спор. Латинские названия палочек, диаметр спор у которых меньше диаметра тела и больше диаметра тела. Перечислите спорообразующие палочки, которые вызывают заболевания у человека. Способы выявления спор. Капсула бактерий – постоянный или непостоянный структурный элемент? Биологическая роль капсулы у патогенных бактерий. Перечислите патогенные бактерии, образующие капсулу в организме. Перечислите капсульные бактерии. Способ выявления капсул в препарате. Жгутики бактерий – биологическая роль, химический состав. Как разделяются бактерии по числу и расположению жгутиков? Как можно увидеть жгутики бактерий? Как можно косвенным образом судить о наличии жгутиков у бактерий? Какими методами для этого пользуются (какие препараты готовят)? Можно ли без помощи микроскопа определить наличие жгутиков у бактерий? Ворсинки (пили, фимбрии) бактерий – где располагаются? Участвуют ли они в локомоторной функции? Название ворсинок первого типа, примерное их число у клетки, биологические функции. Название ворсинок второго типа, примерное число ворсинок у клетки, биологическая роль.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите по-латыни названия видов патогенных микробов:
а) образующих споры;
б) образующих капсулу в организме, капсульных;
в) имеющих цитоплазматические включения.
Заполните таблицу «Структура бактериальной клетки».
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Изучение капсулы бактерий. Промикроскопируйте и зарисуйте демонстрационный препарат из культуры Klebsiella pneumoniae, окрашенный по способу Бурри-Гинса; капсулы на рисунке укажите стрелкой.
2. Изучение спор бактерий. Промикроскопируйте и зарисуйте мазки из культуры бацилл (антракоидной палочки) и из культуры клостридий, окрашенные по способу Ожешко; споры на рисунке отметьте стрелкой.
3. Изучение включений бактерий. Промикроскопируйте и зарисуйте демонстрационный мазок из культуры дифтерийной палочки, окрашенный по способу Нейссера; включения на рисунке отметьте стрелкой; объясните в дневнике причину окраски тела бактерий и включений в разные цвета.
4. Обнаружение наличия жгутиков у бактерий. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем техники приготовления и микроскопирования препаратов «раздавленной» и «висячей» капли; приготовьте и промикроскопируйте препараты «раздавленный» и «висячей» капли из культуры подвижных бактерий. Продемонстрируйте преподавателю технику их микроскопии. Посмотрите демонстрационные пробирки с полужидкой питательной средой, засеянные подвижными и неподвижными микробами; результаты зарисуйте и дайте объяснения в дневнике. Промикроскопируйте и зарисуйте демонстрационные мазки из культуры монотрихов и перитрихов, укажите способ окраски и объясните, почему жгутики стали видны в световом микроскопе.
5. Изучение ультрамикроскопической структуры бактерий. Посмотрите таблицы и слайды с электронограммами бактерий.
ЗАНЯТИЕ 4
МОРФОЛОГИЯ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ГРИБОВ, СПИРОХЕТ, АКТИНОМИЦЕТОВ, МИКОПЛАЗМ, РИККЕТСИЙ, ХЛАМИДИЙ
Среди перечисленных микробов имеются возбудители заболеваний, с которыми приходится сталкиваться врачу любой специальности: сифилис, лептоспироз, сыпной тиф, актиномикоз, грибковые поражения кожи и волос, кандидоз (нередко развивающийся как осложнение при лечении антибиотиками), микоплазменная пневмония, уретриты и многие другие. Врачу необходимо знать морфологию возбудителей, уметь определить их под микроскопом. Это не только необходимо для полноценной теоретической подготовки врача, но важно и в практическом отношении, так как с различиями в структуре микробов связаны и особенности течения болезни, их различия по чувствительности к антимикробным препаратам, от чего зависит выбор химиотерапевтического препарата для лечения. Так, например, к разным веществам чувствительны грибы и бактерии, микоплазмы и бактерии, актиномицеты и грибы, риккетсии и бактерии. Кроме того, необходимо знать названия основных патогенных представителей каждой группы микробов и уметь грамотно написать их латинские названия.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать морфологию и структуру грибов, актиномицетов, спирохет, микоплазм, риккетсий и хламидий, методы изучения этих групп микроорганизмов, уметь написать по–латыни названия патогенных представителей перечисленных групп микробов.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала данной темы необходимо знать:
- структуру бактерий (для сравнения) – из предыдущих занятий;
- морфологию простейших (для сравнения) – из курса биологии.
Цель занятия
1. Отметить особенности строения и морфологии грибов, актиномицетов, спирохет, микоплазм, риккетсий и хламидий.
2. Познакомиться с методами изучения морфологии этих микроорганизмов.
План изучения темы
1. Морфология грибов, классификация, значение в медицине.
2. Морфология актиномицетов, патогенные представители.
3. Морфология спирохет, классификация, структура, патогенные представители.
4. Морфология микоплазм, риккетсий, хламидий; патогенные представители.
После изучения темы студент должен уметь
1. Дифференцировать основные группы изучаемых микроорганизмов по особенностям их строения в готовых микропрепаратах.
Контрольные вопросы
Положение грибов среди микроорганизмов. Особенности строения. Способы размножения. Сравните биологическую роль спор грибов и спор бактерий. Структура клеток. Классификация грибов. Патогенные представители. Морфология нитчатых грибов. Значение их в патологии человека. Морфологические особенности дрожжей. Значение дрожжей в природе и в производстве. Морфологические особенности дрожжеподобных грибов. К какому роду относятся? Сходство их с дрожжами и отличия. Виды дрожжеподобных грибов, их роль в патологии человека. Какой вид чаще всего вызывает заболевания? Способы изучения морфологии дрожжеподобных грибов. Дерматомицеты, их морфологические особенности; какие заболевания вызывают? Методы изучения морфологии. Опишите морфологию основных видов дерматомицетов в поражённом волосе. Актиномицеты – положение среди других микроорганизмов. Структура клетки, сходство с бактериями и отличия; способы размножения. Что образуют актиномицеты в пораженном органе? Каково строение этого образования? Значение актиномицетов в медицинской практике. Как называются заболевания, вызываемые актиномицетами? Патогенные представители. Морфология спирохет: положение спирохет среди микроорганизмов, их форма, структурные элементы, патогенные представители и нормальные обитатели организма человека. Методы изучения морфологии спирохет. Окраска по Романовскому-Гимза, её сущность, преимущества перед другими способами. Различия между тремя родами патогенных спирохет по морфологии и окраске по Романовскому-Гимза. Микоплазмы: их положение среди микроорганизмов, к какому классу относится, особенности морфологии и структуры, значение в патологии. Риккетсии: положение среди микроорганизмов; сходство с бактериями и вирусами. Морфологические типы риккетсий; способы окраски. Названия заболеваний, вызываемых риккетсиями, патогенные для человека представители. Хламидии: положение среди микроорганизмов, морфология, цикл размножения, патогенные представители.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите по–латыни названия патогенных представителей микроскопических грибов, актиномицетов, спирохет, микоплазм, риккетсий, хламидий.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Изучение морфологии микроскопических грибов. Приготовьте препарат из культуры дрожжеподобного гриба рода Candida, промикроскопируйте, найдите псевдомицелий, зарисуйте. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат из культуры дрожжей в люминесцентном и фазово-контрастном микроскопах. Изучите по таблицам и зарисуйте морфологию нитчатых грибов.
2. Изучение морфологии актиномицетов. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат из чистой культуры актиномицета. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат друзы в поражённом органе; опишите в дневнике, чем отличается строение актиномицета в чистой культуре и в органе, чем объясняются эти различия.
3. Изучение морфологии спирохет. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат – мазок крови больного возвратным тифом, окрашенный по Романовскому-Гимза. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат – бледная трепонема в отделяемом твёрдого шанкра и в чистой культуре; опишите в дневнике форму спирохеты и цвет при окраске по Романовскому–Гимза. Промикроскопируйте препарат живых лептоспир в тёмном поле зрения; опишите в дневнике характер завитков и характер движения лептоспир.
4. Изучение морфологии микоплазм. Посмотрите микроскопический препарат и таблицу, опишите в дневнике отличия в структуре клетки бактерий и микоплазм.
5. Изучение морфологии риккетсий. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат из культуры Rickettsia provazekii. Сравните с таблицей, определите морфологические типы в мазке.
6. Изучение морфологии хламидий. Промикроскопируйте и зарисуйте препарат хламидий в клетке эпителия конъюнктивы, укажите стрелками элементарные и ретикулярные тельца.
ЗАНЯТИЕ 5
ИТОГ ПО РАЗДЕЛУ «ИСТОРИЯ МИКРОБИОЛОГИИ.
МОРФОЛОГИЯ МИКРОБОВ»
На данном занятии предстоит подвести итог по пройденному материалу. Хорошие и прочные знания по этому разделу не только обеспечат вам высокую оценку, но и будут полезны и необходимы для изучения следующих разделов курса микробиологии.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать структуру, морфологию и названия патогенных представителей всех изученных групп микробов, историю развития микробиологии, вирусологии, иммунологии.
Исходный уровень знаний
Знать морфологию и структуру изученных ранее групп микробов.
Цель занятия
1. Систематизировать знания по истории микробиологии и морфологии микробов.
2. Продемонстрировать овладение умениями, полученными при изучении морфологии микробов.
План изучения темы
Повторение всего пройденного материала.
После изучения раздела студент должен уметь
1. Готовить фиксированные препараты из культур микроорганизмов, растущих на плотных и жидких питательных средах.
2. Окрашивать препараты простыми методами, а также по Граму (в модификации Синёва) и Цилю-Нильсену.
3. Дифференцировать микроорганизмы по морфологическим, тинкториальным свойствам и интерпретировать полученные результаты.
4. Выявлять структурные элементы бактериальной клетки, дифференцировать микроорганизмы в зависимости от наличия или отсутствия структурных элементов.
5. Дифференцировать основные группы изучаемых микроорганизмов по особенностям их строения в готовых микропрепаратах.
Контрольные практические задания по разделу
«История микробиологии. Морфология микробов»
Приготовьте фиксированный препарат из чистой культуры микроорганизмов, окрасьте его водным фуксином и дайте характеристику.
Приготовьте фиксированный препарат из чистой культуры микроорганизмов, окрасьте его метиленовым синим и дайте характеристику.
Приготовьте фиксированный препарат из чистой культуры микроорганизмов, окрасьте его по Граму в модификации Синёва и дайте характеристику.
Окрасьте готовый препарат водным фуксином и дайте его характеристику.
Окрасьте готовый препарат метиленовым синим и дайте его характеристику.
Окрасьте готовый препарат по Граму в модификации Синёва и дайте его характеристику.
Окрасьте готовый препарат по Цилю-Нильсену и дайте его характеристику.
Микроскопируйте препарат с использованием иммерсионной системы светового микроскопа. Дайте характеристику бактериям в мазке по форме и окраске.
Приготовьте препарат «раздавленной» капли для определения подвижности микробов, микроскопируйте, продемонстрируйте преподавателю.
Контрольные вопросы по разделу
(подробную расшифровку вопросов смотрите в соответствующих
занятиях 1-4)
Работы А. Левенгука, Э. Дженнера, Л. Пастера, Р. Коха. Работы русских ученых: Д.С. Самойловича, И.И. Мечникова, Н.Ф. Гамалея, П.В. Циклинской, С.Н. Виноградского, Д.И. Ивановского, З.В. Ермольевой,
Л.А. Зильбера, В.Д. Тимакова. Место микроорганизмов среди других живых существ, их классификация. Методы микроскопии: световой микроскоп с иммерсионным объективом, микроскопия в тёмном поле зрения, фазово-контрастная микроскопия, люминесцентная микроскопия, электронная микроскопия. Морфология бактерий. Место их среди микробов, размеры, основные формы. Приготовление и окраска препаратов-мазков. Простые методы окраски. Принцип и техника окраски по Граму в модификации Синёва. Отношение бактерий к окраске по Граму. Принцип и техника окраски по Цилю-Нильсену. Характеристика прокариотов, отличия их от эукариотов. Структура бактериальной клетки. Морфология микроскопических грибов. Морфология актиномицетов. Морфология спирохет. Морфология микоплазм. Морфология риккетсий. Морфология хламидий.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
Подведение итога по разделу «История микробиологии. Морфология микробов». Выполнение контрольных заданий. Ответы на контрольные вопросы.
ЗАНЯТИЕ 6
ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ.
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ АЭРОБОВ И АНАЭРОБОВ.
МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ
На предыдущих занятиях вы познакомились с морфологией и тинкториальными свойствами микроорганизмов. Изучение этих свойств необходимо, но, как правило, недостаточно для идентификации возбудителя, то есть определения вида микроба. Поэтому на практике наряду с микроскопическим методом применяется микробиологический метод – культивирование, выделение чистой культуры возбудителя и изучение его физиологических свойств.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- химический состав бактериальной клетки; типы, механизм питания, питательные среды, их состав и назначение;
- типы биологического окисления у микроорганизмов;
- методы культивирования и выделения чистой культуры аэробов и анаэробов;
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала необходимо знать:
- основные группы веществ: белки, жиры, углеводы, нуклеиновые кислоты, минеральные вещества, их функции;
- из курса биохимии вспомнить механизмы биологического окисления, окислительно-восстановительный потенциал;
- приготовление мазка, окраска по Граму в модификации Синёва.
Цель занятия
1. Уяснить особенности метаболизма микроорганизмов, принципы их культивирования в лабораторных условиях.
2. Изучить наборы питательных сред. Классифицировать среды по происхождению, консистенции, составу, назначению.
3. Познакомиться с характером роста бактерий на жидких и плотных питательных средах, с различными типами колоний.
4. Освоить технику посева для выделения чистых культур бактерий.
План изучения темы
1. Химический состав бактериальной клетки.
2. Механизмы и типы питания бактерий.
3. Питательные среды, требования к ним, классификация.
4. Рост и размножение микробов.
5. Биологическое окисление у бактерий. Биологическое окисление у микроорганизмов обязательно изучить, в основном, по конспекту лекций, выделение чистых культур - по практическому руководству.
6. Методы выделения чистых культур бактерий - аэробов и анаэробов.
После изучения темы студент должен уметь
1. Владеть техникой посева бактерий на жидкие и плотные среды.
2. Охарактеризовать предложенные питательные среды, применяемые в микробиологической практике.
Дополнительная литература по разделу
«Физиология микробов» (занятия 6-10)
1. Блохина И.Н. Дисбактериозы / И.Н. Блохина, В.Г. Дорофейчук. - Л.: Медицина, 1979.
2. Бондаренко В.М. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром / В.М. Бондаренко, Т.В. Мацулевич. – М.: Медицина, 2007.
3. Борисов Л.Б. Краткий справочник микробиологической терминологии / Л.Б. Борисов, И.С. Фрейдлин. - Л.: Медицина, 1975.
4. Боровский Е.В. Биология полости рта / Е.В. Боровский, В.К. Леонтьев. - Н. Новгород, 2001.
5. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
6. Вашков В.И. Средства и методы стерилизации, применяемые в медицине / В.И. Вашков // М.: Медицина, 1973.
7. Воробьев А.А. Медицинская и санитарная микробиология: учеб. пособие по микробиологии, вирусологии, иммунологии для студентов мед. вузов / А.А. Воробьев, Ю.С. Кривошеин, В.П. Широбоков. - М.: Академия, 2003. - (Высш. образование).
8. Галынкин В.А. Дезинфекция и антисептика в промышленности и медицине / В.А. Галынкин, Н.А. Заикина, Т.С. Потехина. - СПб, 2004.
9. Галынкин В.А. Питательные среды / В.А. Галынкин, Н.А. Заикина, В.И. Кочеровец. - СПб.: Медицина, 2006.
10. Джавец Э. Руководство по медицинской микробиологии: пер. с англ.: в 3 т. / Э. Джавец, Дж.Л. Мельник Э., Эйдельберг. - М.: Медицина, 1982. - Т. 1.
11. Иванов В.П. Санитарная микробиология (справочник) / В.П. Иванов, А.Г. Бойцов. – СПб.: типография «Ладога», 2000.
12. Ильин Л.А. Антимикробные материалы в медицине / Л.А. Ильин. - М.: Медицина, 1987.
13. Коротяев А.И. Медицинская микpобиология, иммунология и виpусология: учеб. для мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев; под pед. А.И. Коpотяева. - 3-е изд., испр. и доп. - СПб.: СпецЛит, 2002.
14. Красильников А.П. Микробиологический словарь-справочник / А.П. Красильников, Т.Р. Романовская. - 2-е изд., доп. и пеpеpаб. – Минск: Асаp, 1999.
15. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
16. Медицинская микробиология / гл. pед. В.И. Покpовский, О.К. Поздеев. - М.: ГЭОТАР МЕДИА, 1998. - (Учеб. лит. для студентов мед. вузов и врачей).
17. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб. для студентов мед. вузов / под ред. А.А. Воробьева. - М.: МИА, 2004.
18. Методы общей бактериологии: пер. с англ. / под ред. Ф. Герхардта и др. - М.: Мир, 1983. – Т. 1.
19. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
20. Поздеев О.К. Медицинская микробиология: учеб. пособие для студентов мед. вузов / О.К. Поздеев; под pед. В.И. Покpовского. - 3-е изд., стер. – М.: ГЭОТАР МЕДИА, 2006. - (XXI век).
21. Райнис Б.Н., Пожарская В.О., Казиев А.Х. Общая микробиология с вирусологией и иммунологией / Б.Н. Райнис, В.О. Пожарская,
А.Х. Казиев. - М.: Триада-Х, 2000.
22. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: учеб. пособие для студентов мед. вузов / под ред. В.В. Теца. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина,
2002. - (Учеб. лит. для студентов мед. вузов).
23. Сбойчаков В.Б. Санитарная микробиология / В.Б. Сбойчаков. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.
24. Словарь терминов, используемых в микробиологии / сост.:
В.К. Шильникова, В.Т. Емцев, Г.В. Годова и др.; под ред. В.К. Шильниковой; Моск. с.-х. акад. им. К.А. Тимирязева, каф. микробиологии. - М.: Изд-во МСХА, 2001.
25. Стейниер Р. Мир микробов: пер. с англ.: в 3 т. / Р. Стейниер,
Э. Эдельберг, Дж. Ингрэм. – М.: Мир, 1979.
26. Шлегель Г. Общая микробиология: пер. с нем. / Г. Шлегель. - М.: Мир, 1987.
Дополнительный материал к занятию
Питательные среды
По происхождению среды подразделяют на естественные, искусственные и синтетические. К естественным питательным средам относятся натуральные продукты животного или растительного происхождения – молоко, яйца, овощи, животные ткани, желчь, сыворотка крови. Искусственные среды готовятся по определённым рецептам из различных настоев или отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ. Синтетические среды содержат определённые химические соединения в точно указанных концентрациях.
По составу среды делятся на простые и сложные. К простым средам относятся такие, как мясо-пептонный агар (МПА), мясо-пептонный бульон (МПБ). Сложные среды в своём составе содержат различные дополнительные компоненты, необходимые для роста микроорганизмов.
По консистенции среды подразделяют на жидкие, полужидкие, плотные, сыпучие. Жидкие среды чаще применяют для изучения физико-биохимических особенностей микроорганизмов, для накопления биомассы и продуктов обмена в микробиологической промышленности. Полужидкие среды обычно используют для длительного хранения культур. Они содержат в своём составе 0,5-0,7% агар-агара, который в настоящее время используют в качестве уплотнителей для питательных сред. Агар-агар представляет собой полисахарид, выделенный из морских водорослей. Он способен образовывать в воде гель, плавящийся при 1000С и уплотняющийся при 450С и ниже. Большинство микроорганизмов не используют его в качестве питательного субстрата. Плотные среды, содержащие 1,5-2% агар-агара, применяются для выделения чистых культур микроорганизмов, изучения морфологии колоний, количественного учёта, определения антагонистических свойств и других целей. Сыпучие среды используют для хранения посевного материала, культур-продуцентов в микробиологической и медицинской промышленности. К ним относят разваренное пшено, кварцевый песок, пропитанный питательным раствором.
Питательные среды по целевому назначению могут быть разделены на основные, специальные, элективные и дифференциально-диагностические. Основные питательные среды: мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар. Специальные питательные среды применяются для выращивания тех микробов, которые не могут расти на основных средах. Например, кровяной агар и сахарный бульон для стрептококка, сывороточный агар для менингококка и гонококка. Элективные питательные среды применяются для выделения одного какого-либо вида микроорганизма из смеси различных бактерий. Данный вид бактерий растёт на этой среде быстрее и лучше других, опережая их в своем росте; а рост других бактерий задерживается. Например, свёрнутая сыворотка для палочки дифтерии, щелочная пептонная вода для холерного вибриона, желчный бульон для палочек брюшного тифа, солевые среды для стафилококка. Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для отличия одних видов бактерий от других на основании их биохимических свойств. В этих средах в качестве основы применяют разнообразные органические и неорганические соединения: питательный бульон или 1% пептонную воду. К ним добавляют углеводы, спирты, мочевину и другие вещества; при расщеплении которых происходит сдвиг рН в кислую (углеводы, спирты, липиды) или щелочную (белки) сторону, что изменяет цвет индикатора, также входящего в состав среды.
Дифференциально-диагностические среды делят на 4 основные группы:
1. Среды, содержащие белки, дающие характерные изменения под действием бактериальных ферментов и токсинов (кровь, желатин, молоко и др.); их применяют для определения гемолитических или протеолитических свойств: кровяной агар (КА), среда с желатином, молоко, желточно-солевой агар (ЖСА).
2. Среды, содержащие углеводы или многоатомные спирты и индикаторы: ферментативное расщепление субстрата приводит к сдвигу рН и изменению окраски индикатора. Например, среда Эндо, среда Левина, среда Плоскирева, среды Гисса, среда Олькеницкого.
3. Среды для дифференциации микробов по редуцирующей способности. В эту группу входят среды с красителями, обесцвечивающимися при восстановлении, а также среды с нитратами для определения денитрифицирующей активности бактерий.
4. Среды, включающие вещества, ассимилируемые только определённой группой бактерий. Наиболее распространёнными средами данной группы являются цитратный агар Симмонса и цитратная среда Козера.
Подробнее эти среды описаны в дополнительном материале к занятию 9 (тема: «Ферменты бактерий»).
Методы выделения чистых культур бактерий
Используют бактериологический, биологический (заражение лабораторного животного), био-бактериологический методы.
Сущность бактериологического (культурального) метода состоит в посеве исследуемого материала с использованием методов механического разобщения микробов, чтобы получить рост в виде изолированных колоний.
Методы разобщения микроорганизмов основаны на:
1) механическом разобщении бактериальных клеток на поверхности плотных питательных сред шпателем (по Дригальскому), или рассеву штрихами калиброванной петлей (по Гольду), или тампоном, после забора им исследуемого материала;
2) фильтрации исследуемого материала перед посевом (материал пропускают через специальные фильтры с определённым диаметром пор и разделяют содержащиеся в нем микроорганизмы по величине). Этот метод применяют, например, для очистки вирусов от бактерий, а также при получении бактериофагов и токсинов (в фильтрате остается фаг, или очищенный токсин, тогда как на фильтре остаются бактериальные клетки);
3) предварительном разведении в жидкой среде посевного материала с последующим высевом определённой посевной дозы на чашки с агаризованной питательной средой (метод пластинчатых разводок по Коху);
4) биологических свойствах микроорганизма, культуру которого необходимо выделить из исследуемого материала:
а) для получения культур психрофильных бактерий посевы инкубируют при низких температурах для избирательного подавления размножения сопутствующей микрофлоры;
б) метод Шукевича, используемый для выделения культуры бактерий, характеризующихся «ползучим» ростом (протеи);
в) для выделения спорообразующих бактерий прогревают посевной материал на водяной бане при 800С 10-15 мин, перед высевом. При этом погибают вегетативные формы, а споры в таких условиях сохраняются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают;
г) метод ингибирования основан на различном действии некоторых химических веществ и антибиотиков, которые добавляют в питательную среду с целью задержки роста сопутствующих микроорганизмов. Эффект ингибирования учитывается при создании элективных питательных сред. С этой же целью может быть использована предварительная обработка исследуемого материала химическими веществами перед посевом. Например, обработка материала перед посевом серной кислотой (5% раствор) быстро убивает большинство микроорганизмов, кроме кислотоустойчивых, которые выживают в этих условиях.
Биологический метод основан на способности некоторых бактерий быстро размножаться в организме чувствительных к ним лабораторных животных (биопроба) или растений. Для заражения подбирают наиболее восприимчивые к предполагаемому возбудителю инфекции виды животных или виды растений. После появления у заражённых организмов признаков болезни их убивают. Органы исследуют гистологически, микроскопически для обнаружения в них возбудителя. В некоторых случаях производят посев органов и тканей на питательные среды с целью выделения чистой культуры возбудителя (био-бактериологический метод).
Техника посева микроорганизмов на питательные среды
Посев уколом осуществляется уколом микробиологической петлёй или иглой в столбик плотной или полужидкой питательной среды. Применяется для выращивания анаэробов, для выявления характера роста по ходу укола и для определения газообразования. У подвижных и неподвижных микроорганизмов характер роста будет различным. Посев уколом практикуют также для длительного хранения культур.
Посев петлей (посев штрихами) по методу Гольда. На внешней стороне дна чашки Петри с питательным агаром проводят разграничительные линии, разделяющие её на 4 сектора. Исследуемый материал вносят петлёй в первый сектор и проводят ею параллельные линии по всему сектору на расстоянии одна от другой около 5 мм. Этой же петлёй, не изменяя её положения по отношению к агару, проводят такие же линии на других секторах чашки. В том месте, где на агар попало большое количество микробных клеток, рост микроорганизмов будет в виде сплошного штриха. На секторах с небольшим количеством клеток микроорганизмы вырастают в виде отдельных колоний.
Посев шпателем по методу Дригальского. Используют 3 чашки Петри с питательной средой. На 1-ю чашку петлёй или пипеткой наносят каплю исследуемого материала и растирают стерильным шпателем по всей поверхности питательного агара. Затем шпатель, не обеззараживая, переносят во 2-ю чашку и втирают оставшиеся на нём микроорганизмы в поверхность питательной среды. Далее шпатель переносят в 3-ю чашку и аналогичным образом производят посев. На 1-й чашке вырастает максимальное количество колоний, на 3-й – минимальное. В зависимости от содержания микробных клеток в исследуемом материале на третьей или на второй и третьей чашках вырастают отдельные колонии, пригодные для выделения чистой культуры.
Посев по методу Шукевича. Исследуемый материал засевают в конденсационную воду свежескошенного агара. При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды распространяются по агару, как бы «вползают» на его поверхность. Отсевая материал из верхнего края роста культуры в конденсационную воду свежескошенного агара и повторяя это несколько раз, можно выделить чистую культуру.
Приборы, методы и среды для культивирования анаэробов
Микроанаэростат – используется для создания вакуума с дозированным содержанием кислорода. Прибор представляет собой герметически закрывающийся сосуд, снабжённый манометром, в который помещают посевы и откачивают воздух. Микроанаэростат помещают в термостат.
Эксикатор – стеклянный лабораторный сосуд с притёртой крышкой. В его донной части имеется дополнительная емкость, куда наливается смесь пирогаллола и едкого натра или гидросульфита натрия и двууглекислой соды. На сетку-подставку помещают посевы и притирают крышку с помощью вазелина. Эксикатор помещают в термостат.
Метод Фортнера. В чашку Петри наливают питательный агар с
1-2% глюкозы. Посредине чашки стерильным скальпелем вырезают канавку шириной приблизительно 1 см. Одну половину чашки засевают культурой аэробов (сарцина, кишечная палочка), вторую – культурой анаэробов или исследуемым на их наличие материалом. Засеянную чашку закрывают, герметизируют и помещают вверх дном в термостат. Быстрорастущие аэробы, поглощая кислород, создают тем самым благоприятные условия для роста анаэробных микроорганизмов.
Метод Перетца. В стерильную чашку Петри помещают стеклянные палочки, на которые кладут стеклянные пластинки или предметные стекла. В пробирку с 20 мл расплавленного и охлажденного до 500С МПА с 10% глюкозы (pH 7,0-7,2) вносят исследуемый материал и добавляют 2-4 капли 10% гидросульфита натрия на 10% растворе углекислой соды. Содержимое пробирки быстро перемешивают и выливают в чашку с таким расчётом, чтобы агар заполнил пространство между стеклянной пластинкой и дном чашки. Чашки инкубируют при 370С 24-48 часов. Колонии анаэробов вырастают под стеклянной пластинкой.
Метод Вейон-Виньяля. В пробирку с 0,5% расплавленным и охлажденным до 40-450С сахарным агаром вносят исследуемый материал и перемешивают. При необходимости материал разводят путём переноса в последующие 2-3 пробирки с расплавленным агаром. Содержимое пробирок набирают в пастеровские пипетки. После заполнения пипетки вытянутый конец запаивают, а противоположный конец закрывают стерильной ваткой и заливают парафином. Трубки помещают в термостат; через 2-3 суток в агаре вырастают глубинные колонии, видимые в проходящем свете, которые можно изолировать. Для этого трубку надрезают напильником выше уровня намеченной колонии, надламывают, а колонию извлекают петлёй и пересевают для накопления чистой культуры в соответствующую питательную среду.
Метод Биттнера. К крышке чашки Петри с посевом исследуемого материала или выделенной культуры анаэробов прикрепляют пакет из фильтровальной бумаги, содержащей пирогаллол, К2СО3 и тальк. Чашку герметизируют при помощи парафина или скотча. Содержимое пакета увлажняется за счёт образующегося конденсата, и ингредиенты вступают в реакцию, которая сопровождается поглощением О2 и выделением СО2.
Газ-пак (Generbag anaer). Система Generbag anaer состоит из воздухонепроницаемых пакетов, изготовленных из прозрачной пластмассы и генераторов, содержащих смесь веществ, поглощающих кислород. Последовательность работы: вынуть генератор из пакета, поместить в нижнюю часть воздухонепроницаемого пакета, затем поместить чашки (или пробирки) с посевами и с помощью специальной скрепки закрыть пакет. Инкубация при 370С.
Среда Китта-Тароцци. Содержит мясо-пептонный бульон, 0,5% глюкозы и 0,15% агара. На дно пробирки для адсорбции О2 помещают кусочки варёной печени или фарша слоем 1-1,5 см и заливают 6-7 мл среды. Среду перед посевом регенерируют (прогревают 15-20 мин. на водяной бане для удаления воздуха, а затем быстро охлаждают). После посева среду заливают вазелиновым маслом и помещают в термостат.
Полужидкий сахарный агар (высокий столбик). В пробирку с
6-7 мл расплавленного и охлаждённого до 40-450С полужидкого питательного агара, содержащего 0,5-1% глюкозы, вносят исследуемый материал и перемешивают. Посевы помещают в термостат.
Среда для контроля стерильности (СКС). Рост многих анаэробных микроорганизмов возможен только на средах с низким окислительно-восстановительным потенциалом. Поэтому в среды добавляют восстановители, например, тиогликолевую кислоту или её натриевую соль, цистеин, аскорбиновую кислоту. Функции восстановителей выполняют и другие компоненты среды: глюкоза, пептон. СКС содержит питательный бульон, витаминный препарат ЭКД, NaCl, Na2CO3, глюкозу, тиогликолят натрия, цистеин, агар (0,75%). Среду разливают в пробирки по 6-7 мл.
Контрольные вопросы
Химический состав бактериальной клетки: содержание, локализация в клеточных структурах и биологическая роль воды, белков, нуклеиновых кислот, липидов, углеводов и минеральных веществ. Источники азота, углерода. Факторы роста. Что такое энергетический и конструктивный метаболизм? Особенности обмена веществ бактерий. Ферменты бактерий. Механизм расщепления веществ. Способы поступления их в клетку. Типы питания микробов. Могут ли микроорганизмы изменить тип питания? Каковы типы питания патогенных микробов? Каким требованиям должны соответствовать питательные среды? Классификация питательных сред по консистенции, по целевому назначению. Основные питательные среды. Специальные питательные среды, их названия; для каких бактерий предназначены? Элективные питательные среды, состав, применение. Приведите примеры. Дифференциально-диагностические среды, их названия; для чего применяются? Что такое рост микробов, размножение микробов? Как размножаются бактерии? Фазы роста бактериальной культуры в жидкой питательной среде (начертить кривую). Размножение бактерий в непрерывно–проточной среде. Условия культивирования бактерий. Что такое культура бактерий, чистая культура, штамм? Особенности биологического окисления у микробов. Группы микробов по типу биологического окисления. Каковы различия между аэробным и анаэробным типом (основные этапы, ферменты, участие свободного кислорода, конечный акцептор водорода, продукты окисления). Перечислите патогенные анаэробы. Что такое окислительно-восстановительный потенциал среды, какие микробы лучше растут при низких его значениях, какие - при более высоких? Типы брожения. Что такое аэрация питательной среды, как она осуществляется? Особенности культивирования анаэробных бактерий. Среды, методы и приборы, используемые для их культивирования. Среда Китта-Тароцци: на чём основано её действие, что входит в её состав, что делают со средой перед посевом и для чего? Рассказать поэтапно выделение чистой культуры микробов-аэробов. Рассказать поэтапно выделение чистой культуры микробов–анаэробов. Что такое психрофилы, мезофилы, термофилы? Оптимальная температура для роста патогенных микробов.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
В тетради перепишите схемы выделения чистых культур аэробов и анаэробов и впишите цель посева на каждом этапе.
Заполните таблицу «Культивирование анаэробов».
|
№ |
Способ |
Сущность |
Используемые |
||
|
приборы |
методы |
среды |
|||
|
1. |
Физический |
||||
|
2. |
Химический |
||||
|
3. |
Биологический |
||||
|
4. |
Комбинированный |
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Ознакомление с питательными средами. Изучите питательные среды и распределите их по назначению: основные, специальные, элективные, дифференциально-диагностические.
2. Методы посева бактериальных культур с соблюдением правил асептики. Ознакомьтесь с особенностями техники пересева бактериальных культур на плотные и на жидкие питательные среды.
3. Выделение чистой культуры бактерий–аэробов. Ознакомьтесь с методом получения изолированных колоний путем посева на чашке с питательной средой (демонстрация преподавателем). Из смеси бактерий приготовьте мазок, окрасьте по Граму, микроскопируйте, зарисуйте. Произведите посев смеси бактерий на чашку с питательной средой, укажите цель посева.
4. Методы культивирования и выделения чистых культур анаэробов. Ознакомьтесь с аппаратурой для культивирования анаэробов. Из посева на среде Китта–Тароцци приготовьте мазок, окрасьте по Граму, микроскопируйте, зарисуйте. Внимательно проследите за демонстрацией преподавателем посева по методу Вейнберга в трубки Вейон-Виньяля.
ЗАНЯТИЕ 7
ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ (ПРОДОЛЖЕНИЕ)
МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ
Знание методов стерилизации необходимо врачу любой специальности. Поэтому следует тщательно изучить этот материал и знать конкретно методики, аппаратуру, режим стерилизации.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- культуральные свойства микробов;
- понятие о стерилизации, дезинфекции, асептике и антисептике, методы стерилизации;
- устройство термостатов.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала необходимо знать:
- схему выделения чистой культуры аэробов и анаэробов;
- условия, необходимые для культивирования микробов;
- характеристику роста микробов на плотных и на жидких питательных средах; морфологию колоний микробов, пигменты микробов.
Цель занятия
1. Изучить культуральные свойства бактерий.
2. Ознакомиться с особенностями бактериологического метода выделения чистых культур анаэробных микроорганизмов.
3. Ознакомиться с основными методами стерилизации, применяемыми в микробиологии и медицине.
План изучения темы
1. Повторите схему выделения чистой культуры бактерий – аэробов и анаэробов.
2. Понятие о культуральных свойствах микробов;
а) условия, необходимые для культивирования данного вида (питательная среда, рН, гН2, температура, аэробные или анаэробные условия);
б) характер роста данного вида микробов на питательных средах.
3. Пигменты микробов, их характеристика.
4. Методы стерилизации.
После изучения темы студент должен уметь
1. Охарактеризовать колонии микроорганизмов.
2. Провести посев изолированных колоний на скошенный питательный агар.
3. Выбрать средства, режим стерилизации в соответствии с конкретными задачами.
Дополнительный материал к занятию
Методы контроля стерильности
Микробиологический контроль объектов, подвергшихся стерилизации, проводится постоянно.
Контроль работы аппаратуры для стерилизации осуществляется несколькими способами:
1. Персонал должен строго соблюдать установленный режим стерилизации, который обеспечивает гибель микробов.
2. Соответствующей службой должен регулярно проводиться технический контроль аппаратуры для стерилизации.
3. Косвенно о поддержании определенной температуры при стерилизации можно судить по изменению окраски химических индикаторов, которые помещают на поверхность и в глубину стерилизуемого объекта. Создана комплексная система оперативного контроля критических параметров паровой и воздушной стерилизации с помощью индикаторов серий «МедИС», «СТЕРИКОНТ», «СТЕРИТЕСТ», «ИНТЕСТ», «ФАРМАТЕСТ», «СВИДЕТЕЛИ». Индикаторы серий «МедИС» и «СТЕРИКОНТ» предназначены для контроля всех критических параметров паровой или воздушной стерилизации в камере стерилизатора (снаружи стерилизуемых упаковок). Индикаторы серии «СТЕРИТЕСТ» предназначены для контроля всех критических параметров паровой и воздушной стерилизации внутри стерилизуемых упаковок. Индикаторы серии «ИНТЕСТ» предназначены для контроля всех критических параметров паровой и воздушной стерилизации как в камере стерилизатора, так и внутри стерилизуемых упаковок. Индикаторы серии «ФАРМАТЕСТ» предназначены для контроля всех критических параметров паровой или воздушной стерилизации как в камере стерилизатора, так и внутри стерилизуемых флаконов с растворами и питательными средами. Индикаторы серии «СВИДЕТЕЛИ» предназначены для визуального отличия упаковок, прошедших стерилизацию, от нестерилизованных и исключения риска смешения потоков стерилизованных и не стерилизованных изделий.
Преимущества индикаторов:
– чёткий, контрастный цветовой переход облегчает визуальный контроль и повышает его точность;
– на каждом индикаторе напечатан эталон конечного цвета индикаторной метки, который она приобретает при соблюдении параметров стерилизации;
– липкий слой на обратной стороне индикатора облегчает его закрепление на стерилизуемых упаковках и подклеивание в журнал контроля.
4. Микробиологический контроль стерилизации проводится с помощью посевов кусочков стерилизуемого материала, смывов с предметов, подвергшихся стерилизации на среды, позволяющие обнаружить аэробные и анаэробные бактерии, грибы (сахарный бульон, тиогликолевая среда, среда Сабуро). Отсутствие роста после 14 дней инкубации в термостате свидетельствует о стерильности предмета. Кроме того, для контроля процесса стерилизации применяются тест-культуры спор Bacillus stearothermophilus (для контроля работы паровых стерилизаторов) и Bacillus licheniformis B-6 (для воздушных стерилизаторов). Тест-культуры помещают в камеры для стерилизации и после её окончания высевают на питательные среды с последующей инкубацией в термостате.
. Для сохранения стерильности предметы должны иметь упаковку, не допускающую микробного загрязнения. С этой целью применяют полимерную плёнку, бумагу, фольгу, биксы, металлические пеналы, флаконы.
Контрольные вопросы
Как вы будете проводить выделение чистой культуры аэробов и анаэробов на данном занятии? Как, по каким признакам проводится описание изолированных колоний бактерий на плотных питательных средах? Что входит в понятие «культуральные свойства микробов»? Для чего их изучают? Пигменты микробов, их характеристика: приведите примеры микробов, образующих пигменты, растворимые в воде, растворимые в органических растворителях и нерастворимые пигменты. Определите понятия: асептика; антисептика, дезинфекция, стерилизация. Перечислите методы стерилизации, применяемые в микробиологической практике и медицине. Охарактеризуйте каждый из этих методов: аппаратура, режим стерилизации (температура и время), стерилизуемые материалы, контроль успешной стерилизации. Как стерилизовать стеклянную посуду? Простые питательные среды. Питательные среды, содержащие углеводы. Стерилизация дробными методами проводится при таких температурах, при которых споровые формы не гибнут. Как же достигается стерильность при этих методах? Перечислите методы, применяемые для контроля процесса стерилизации. Фильтрование: в каких случаях применяется, что представляют собой фильтры, условия фильтрования; от каких микроорганизмов не освобождается профильтрованная жидкость? Как простерилизовать питательную среду, содержащую белки? Пастеризация: режим, для чего применяется, хранение пастеризованных продуктов. Стерильны ли пастеризованные продукты? Принципиальная схема устройства термостатов и их применение в микробиологической практике.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Перепишите таблицу «Методы стерилизации» и заполните её. Напишите определения понятий: стерилизация, дезинфекция, асептика, антисептика.
МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ
|
Метод |
Аппарат |
Режим стерилизации |
Стерилизуемый |
Контроль стерилизации |
|
Прокаливание |
||||
|
Стерилизация сухим жаром |
||||
|
Стерилизация паром под давлением |
||||
|
Стерилизация текучим паром |
||||
|
Тиндализация |
МЕТОДЫ ЧАСТИЧНОГО ОБЕСПЛОЖИВАНИЯ
|
Метод |
Режим |
От каких микроорганизмов не освобождается |
|
Пастеризация |
||
|
Фильтрование |
||
|
Кипячение |
Дайте определение понятий:
Стерилизация Асептика
Дезинфекция Антисептика
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Изучение культуральных свойств бактерий. Ознакомьтесь с характером роста бактерий на жидких и плотных питательных средах, опишите их в тетради. Изучите характер роста пигментных бактерий по готовым посевам и опишите в тетради.
2. Выделение чистой культуры аэробов (второй день). Изучите и опишите в тетради выросшие на чашке колонии. Отберите изолированные колонии, принадлежащие разным видам бактерий, приготовьте из них мазки, микроскопируйте и зарисуйте. Произведите пересев одной из отобранных колоний на скошенный агар.
3. Выделение чистой культуры анаэробов (третий день). Изучите и опишите колонии в трубке Вейон–Виньяля. Отберите изолированную колонию, извлеките её путём распила трубки, приготовьте мазок, окрасьте по Граму, микроскопируйте, зарисуйте, произведите пересев из этой же колонии на среду Китта–Тароцци.
4. Методы стерилизации. Ознакомьтесь с аппаратурой для стерилизации (демонстрация).
5. Устройство термостата, бокса для проведения посевов (демонстрация).
ЗАНЯТИЕ 8
ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ (ОКОНЧАНИЕ).
ИЗУЧЕНИЕ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ СВОЙСТВ БАКТЕРИЙ.
САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
ВОДЫ И ВОЗДУХА. НОРМАЛЬНАЯ МИКРОФЛОРА
ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА
Способность микробов расщеплять углеводы и белки широко используется в микробиологической практике для идентификации (определения вида) микроба. Дело в том, что разные виды бактерий, в том числе и имеющие одинаковую морфологию, могут отличаться по ферментативной активности. Поэтому идентифицировать такие виды только по их морфологии невозможно. После выделения чистой культуры морфологически сходных микробов производят их посев на среды с углеводами и белковые среды.
В окружающей нас природе наряду с микробами–сапрофитами могут находиться и патогенные микроорганизмы. Поэтому систематический микробиологический контроль почвы, воды и воздуха имеет большое практическое значение как для предупреждения инфекционных заболеваний, так и в интересах экологии - сохранения постоянства микрофлоры в естественной среде обитания.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- ферменты микробов; методы определения ферментативной активности микробов, применяемые для этого питательные среды;
- микрофлору почвы, воды и воздуха; методы санитарно–бактериологического исследования объектов внешней среды.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо знать:
- выделение чистой культуры аэробов и анаэробов;
- питательные среды.
Цель занятия
1. Изучить принципы идентификации чистых культур по морфологическим, культуральным, биохимическим и другим свойствам.
2. Показать разнообразие ферментов у микроорганизмов и возможности их использования для идентификации.
3. Изучить методы и показатели, необходимые для микробиологической оценки объектов окружающей среды.
План изучения темы
1. Ферменты микробов – по лекции и по учебнику. Обратите внимание на особенности ферментных систем прокариотов. Определение ферментативной активности микробов – по практическому руководству и по дополнительному материалу к данному занятию.
2. Санитарно-бактериологическое исследование почвы, воздуха и воды - по учебнику, по лекции, по практическому руководству. Микрофлору внешней среды следует усвоить по определенному плану: постоянная микрофлора данной среды, санитарно-показательные микроорганизмы, показатели микробного загрязнения; для каких инфекционных заболеваний данная среда может быть фактором передачи. Методы санитарно-бактериологических исследований и предельно-допустимые показатели – усвоить конкретно.
3. Нормальная микрофлора организма человека.
После изучения темы студент должен уметь
1. Охарактеризовать колонии микроорганизмов.
2. Провести посев изолированных колоний на скошенный питательный агар.
3. Проводить оценку санитарно-бактериологического состояния воздуха, воды, почвы по микробиологическим показателям.
4. Освоить методику взятия материала для микробиологического исследования со слизистой рото-носоглотки и зева стерильным ватным тампоном.
Дополнительный материал к занятию
Для отличия одних видов бактерий от других изучают их ферментативную активность. Для обнаружения ферментов исследуемую культуру микробов засевают на специальные дифференциально-диагностические питательные среды, которые в зависимости от состава и своего назначения можно разделить на 4 группы.
1. Среды, содержащие белковые вещества (пептон, желатину, молоко, свёрнутую сыворотку крови, куриный белок и т.д.) для выявления протеолитических ферментов.
2. Среды с сахарами или многоатомными спиртами (углеводами), для определения сахаролитической активности микроорганизмов.
3. Среды с химическими веществами, изменяющимися под влиянием окислительно-восстановительных ферментов, продуцируемых микробами.
4. Среды, содержащие индифферентные химические вещества, являющиеся источником питания одних видов и не ассимилируемые другими видами микробов.
Свойство расщеплять углеводы и высокоатомные спирты, которые принято объединять в одну группу, именуемую сахарами, присуще многим микробам. Под действием сахаролитических ферментов бактерий «сахарá» расщепляются либо до кислоты, либо до кислоты и газа. Сахаролитические свойства изучают на средах Гисса (или «пёстрого ряда»). Среды Гисса готовятся на основе жидкой среды (пептонной воды) или полужидкого мясо-пептонного агара. Содержат какой-либо углевод или многоатомный спирт (лактозу, глюкозу, маннит, сахарозу и т.д.) и индикатор, который меняет свой цвет в кислой среде. В пробирку с жидкой средой Гисса помещают стеклянный поплавок. Если на среду Гисса посеять микроб, который сбраживает данный углевод с образованием кислоты и газа, то есть до конечных продуктов, то среда изменит свой цвет, в полужидкой среде появятся пузырьки и разрывы в толще агара, в жидкой среде - пузырёк газа в поплавке. При сбраживании углевода только до промежуточных продуктов (до кислоты) происходит только изменение цвета среды. Кроме того, сахаролитическую активность изучают на средах: Эндо, Левина, Плоскирева, Клиглера, Олькеницкого и других. Среды Эндо, Левина, Плоскирева в чашках Петри применяются для дифференцировки бактерий кишечной группы по их способности сбраживать лактозу. Эти среды содержат питательный агар, лактозу и индикатор, изменяющий свой цвет в кислой среде (индикатор рН). Если посеять на такую среду бактерии, которые сбраживают лактозу, например, кишечную палочку, то в результате сбраживания лактозы образуется кислота и индикатор изменит свой цвет в кислой среде. Поэтому колонии кишечной палочки на таких средах будут окрашены соответственно цвету индикатора: на среде Эндо и среде Плоскирева – в красный цвет, на среде Левина – в чёрно-синий. Если же на эти среды посеять бактерии, которые не сбраживают лактозу, например, палочки брюшного тифа или палочки дизентерии, то кислота не образуется, реакция среды останется слабощелочной и цвет индикатора не изменится. Поэтому колонии бактерий, не сбраживающих лактозу, на этих средах будут бесцветными. Среду Плоскирева можно отнести также и к элективным средам, для выделения палочек дизентерии, так как эта среда содержит соли желчных кислот, задерживающих рост кишечной палочки, и краситель бриллиантовый зеленый, задерживающий рост воздушной кокковой микрофлоры. Висмут–сульфит агар – это дифференциально-диагностическая среда, применяемая главным образом при диагностике сальмонеллёзов. При росте сальмонелл происходит восстановление висмута из его солей и колонии сальмонелл, в отличие от других видов микробов, окрашиваются в чёрный цвет.
Применяются также комбинированные среды, содержащие не один углевод, а два или три, например, среда Олькеницкого – трёхсахарный агар с мочевиной. Одна пробирка среды Олькеницкого заменяет скошенный агар и среды Гисса с лактозой, сахарозой и глюкозой. Среда готовится на основе не очень плотного МПА. Содержит лактозу (1%), сахарозу (1%), глюкозу (0,1%), мочевину, соль Мора (сульфат железа), гипосульфит натрия и индикатор.
Среду после стерилизации в расправленном виде оставляют застывать в таком положении, чтобы получился столбик и скошенная часть. Посев производится штрихом по скошенной части и уколом в столбик. При сбраживании углеводов, которые содержатся в большем количестве (лактозы, сахарозы или обоих сахаров) изменяется цвет всей среды; при сбраживании только глюкозы изменяется цвет столбика, а скошенная часть остается без изменений. Образование газа определяется по наличию пузырьков в столбике агара. Культуры, расщепляющие мочевину с образованием аммиака, дают щелочную реакцию. При этом происходит нейтрализация кислоты, образующейся при сбраживании углеводов, и цвет всей среды не изменяется. Расщепление мочевины свойственно протеям и некоторым кишечным палочкам. Патогенные энтеробактерии не разлагают мочевину. Добавление соли Мора и гипосульфита позволяет также изучить способность бактерий расщеплять белки с образованием сероводорода, что определяется по почернению в столбике агара в результате превращения сульфата железа в сульфид чёрного цвета.
При росте микроорганизмов, образующих амилазу, на средах с растворимым крахмалом происходит его расщепление. Об этом узнают, прибавив к культуре несколько капель раствора Люголя, – цвет среды не изменяется. Нерасщеплённый крахмал даёт с этим раствором синее окрашивание.
Протеолитические ферменты у бактерий изучают на средах с желатином, молоком, сывороткой, пептоном и на некоторых полиуглеводных средах (например, на среде Клиглера). Показателями глубокого расщепления белка является образование индола, аммиака, сероводорода.
Сероводород обнаруживают с помощью полоски фильтровальной бумаги, пропитанной раствором ацетата свинца, которую закрепляют между стенкой засеянной пробирки и пробкой (при взаимодействии сероводорода и ацетата свинца бумага чернеет в результате образования сульфида свинца), или на средах, в состав которых входят соли железа или свинца, которые при взаимодействии с сероводородом дают чёрное окрашивание самой среды или выросших колоний (среды Вильсона-Блера, Клиглера и т.д.)
Для обнаружения индола по способу Мореля узкие полоски фильтровальной бумаги, смоченные горячим насыщенным раствором щавелевой кислоты и высушенные, помещают между стенкой пробирки с питательным агаром и пробкой. При выделении индола на 2-3-й день нижняя часть полоски бумаги приобретает розовый цвет. Другой, более чувствительный, метод обнаружения индола позволяет концентрировать индол на поверхности среды ксилолом или эфиром, а добавление раствора Ковача (парадиметиламинобензальдегида) приводит к образованию красного кольца. Индол образуется при наличии у бактерий фермента триптофаназы.
Наличие аммиака определяют по посинению розовой лакмусовой бумажки, помещённой между стенкой и пробкой засеянной пробирки.
Желатиназа. При посеве уколом в желатин некоторые микробы (холерный вибрион, стафилококк, сибиреязвенная палочка и др.) при комнатной температуре (20-22°С) разжижают его, причём различные виды микробов дают характерную для них форму разжижения (послойно, в виде гвоздя, ёлочки и т.д.).
Другие протеолитические ферменты:
– при посеве на свёрнутую сыворотку вокруг колоний появляются углубления (разжижение);
– в молоке происходит расщепление сгустка казеина с образованием пептона, в результате чего оно приобретает желтоватый цвет (пептонизация молока).
Наличие уреазы у бактерий определяют на среде с мочевиной и индикатором фенол-рот (начальный цвет среды – жёлтый). При расщеплении мочевины на аммиак и углекислый газ накапливается аммоний, что сдвигает рН в щелочную сторону и изменяет цвет индикатора на красный.
Образования ацетоина (ацетил-метил-карбинола) при ферментации глюкозы проводится с помощью реакции Фогес-Проскауэра. Добавление к культуре 40% КОН и 5% альфа-нафтола даёт красное окрашивание, т.е. в щелочных условиях ацетоин образует с альфа-нафтолом соединение красного цвета – ацетилметилкарбинол.
Утилизацию цитрата с целью выявления способности бактерий использовать его как источник углерода проверяют на среде Симмонса. Среда содержит набор солей, агар, неорганический источник азота, цитрат натрия, индикатор бромтимоловый синий. При наличии фермента цитрат-пермеазы среда подщелачивается и окрашивается в синий цвет. При отсутствии роста бактерий среда остается зеленой.
Каталаза – это фермент, катализирующий реакцию разложения перекиси водорода с образованием воды и кислорода. Каталазу содержат аэробы и факультативные анаэробы, но она отсутствует у облигатных анаэробов. Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться сразу же после смешивания микробных клеток с 1% раствором перекиси водорода. На предметное стекло помещают каплю перекиси водорода и суспендируют в ней небольшое количество культуры микроорганизмов, выращенной на плотной среде.
Обнаружение цитохромоксидазы у аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов проводится путём нанесения и растирания петли культуры на индикаторную бумажку, пропитанную спиртовым раствором альфа-нафтола и 1% водным раствором ментола. При положительном результате бумажка синеет.
Выявление нитратредуктазы характерно в основном для факультативных анаэробов. Фермент восстанавливает нитраты в нитриты. Нитрат является конечным акцептором электронов. В кислой среде нитраты окисляют йодид калия. Выделившийся йод, реагируя с крахмалом, даёт синее окрашивание среды.
Тест окисления/ферментации глюкозы (в аэробных/анаэробных условиях) устанавливается на среде Хью-Лейфсона. В среде содержится агар, соли, пептон, глюкоза и индикатор бромтимоловый синий. Посев осуществляют уколом в столбик питательной среды в две пробирки. Для создания анаэробных условий после посева среда в одной из пробирок заливается слоем стерильного вазелинового масла. Посев выращивают 3-4 суток. Образование кислоты из глюкозы изменяет зеленый цвет среды в жёлтый. При окислении глюкозы изменение цвета происходит в верхней части пробирки без вазелинового масла. При ферментации меняется цвет среды под слоем вазелинового масла (в анаэробных условиях). Тест используется для дифференциации аэробных бактерий от анаэробов и факультативных анаэробов. Аэробы (например, Pseudomonas aeruginosa) расщепляют глюкозу в аэробных условиях, то есть только окисляют глюкозу, но не ферментируют её; анаэробы (например, Clostridium perfringens) утилизируют глюкозу только в анаэробных (т.е. ферментируют). Факультативные анаэробы (например, Escherichia coli, Staphylococcus aureus) утилизируют глюкозу в аэробных и анаэробных условиях.
Гемолитические свойства микроорганизмов (способность микроорганизмов разрушать эритроциты) изучают при посеве их на среды с кровью. Жидкие среды при разрушении эритроцитов становятся прозрачными, а на плотных средах вокруг колоний появляется прозрачная зона (гемолиз). Кровяной агар Цейсслера (для культивирования анаэробов) состоит из мясо-пептонного агара с 1% глюкозы на 20% свежей дефибринированной крови. Возбудитель газовой гангрены образует зону гемолиза вокруг колоний. Гемолитические штаммы стафилококков и стрептококков дифференцируют на кровяном агаре по наличию альфа- (неполного) или бета- (полного) гемолиза вокруг колонии.
В последние годы для изучения биохимической активности выпускаются наборы систем индикаторных бумажных, микротест-системы и другие подобные системы одноразового использования, которые позволяют изучить ферментный профиль микробов.
Системы индикаторные бумажные (СИБ) представляют собой наборы бумажных дисков для выявления самых разнообразных ферментов бактерий. Диски пропитаны субстратом (углеводами, аминокислотами, цитратом, ацетатом, малонатом и другими веществами), а также содержат индикатор. Полную петлю исследуемой культуры или каплю густой микробной взвеси вносят в стерильный физиологический раствор (в некоторых случаях в забуференный: рН 5,4-5,6) либо в 1% пептонную воду и помещают в эту пробирку соответствующий диск. В контрольные пробирки культуру бактерий не вносят. Для определения сероводорода диск помещают в пробирку на поверхность МПА, засеянного уколом, что позволяет одновременно определить подвижность. После инкубации в термостате оценивают результаты тестов по изменению цвета среды и диска. Утилизация вещества приводит к изменению цвета индикатора. Во всех пробирках учитывают предварительный результат в тот же день и окончательный – через восемнадцать–двадцать четыре часа. Имеются наборы, которые содержат от десяти до тридцати тест-бумажек.
Диагностические микротест-системы (МТС), типа API-20-Е (для энтеробактерий), API-32-Gr+, ID32 GN, Enterotube и другие. Они представляют собой полистироловые пластины с лунками, или планшеты, в которых содержатся стерильные дифференциально-диагностические среды или только субстраты и индикаторы. Стерилизацию МТС проводят ультрафиолетовым облучением. Существует два основных типа таких систем. Это индивидуальные системы, рассчитанные на идентификацию одной культуры. К ним относятся тест-системы ПБДЭ, ПБДС (Россия), системы API (Франция) и многие другие. Второй тип систем основан на использовании многорядных планшетов, позволяющих одновременно проводить идентификацию нескольких культур. К системам этого типа относятся тест-системы фирмы Lachema (Чехия), ММТ Е (Россия), Enterotube II (США) и др. В каждую ячейку засевают взвесь культуры бактерий определённой густоты. В контрольные ячейки наливают физиологический раствор. Инкубация тест-систем проводится в обычных термостатах или в специальных термостатируемых устройствах, входящих в комплект автоматизированных систем, где учёт результатов и их интерпретация осуществляется автоматически с помощью компьютера (Vitek, BioMerieux, Франция). Результат учитывают после 3–4-часовой инкубации в термостате визуально или при использовании автоматизированной компьютерной системы по изменению цвета индикатора. Микротест-системы особенно удобны при массовых бактериологических исследованиях в практических лабораториях.
|
Идентифицируемые микроорганизмы |
Тест-система |
Время инкубации, ч |
|
Энтеробактерии |
ПБДЭ ММТ Е-1, 2 Энтеротест 1, 2 API 20 Е Enterotube II |
18-24 24 18-24 24-48 18-24 |
|
Стафилококки |
ПБДС Стафи-тест API Staph |
24 24 24 |
|
Стрептококки и энтерококки |
Стрепто-тест API 20 Strep |
24 4-24 |
|
Коринебактерии |
API Coryne |
24 |
|
Анаэробы |
Анаэро-тест API 20 А Rapid Anaerobe |
48 24 4 |
|
Грибы |
API 20 С |
72 |
Санитарная микробиология – раздел медицинской микробиологии, изучающей микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека. Санитарная микробиология разрабатывает методы контроля за состоянием воды, почвы, воздуха, пищевых продуктов и различных предметов обихода. Одновременно санитарная микробиология разрабатывает микробиологические нормативы и мероприятия по оздоровлению окружающей среды.
Практическая санитарная микробиология использует 2 основных метода оценки санитарно-эпидемиологического состояния внешней среды: прямое обнаружение патогенных микроорганизмов и выявление косвенных признаков пребывания патогенов во внешней среде.
Непосредственное обнаружение патогенных микроорганизмов, как правило, затруднено из-за их малого количества и проводится по эпидпоказаниям. Косвенные методы – это определение общей микробной обсеменённости или общего микробного числа (ОМЧ), а также определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ), которые регулярно проводятся контролирующими органами с целью определения безопасности объектов для здоровья населения.
ОМЧ расценивается как показатель интенсивности загрязнения окружающей среды органическими веществами.
Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов в окружающей среде.
Санитарно-показательные микроорганизмы
должны удовлетворять следующим характеристикам
1. Постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и выделяться в окружающую среду.
2. Не должны размножаться вне организма, исключая пищевые продукты.
3. Длительность их выживания в окружающей среде должна быть не меньше и даже несколько больше, чем у патогенных микроорганизмов.
4. Устойчивость санитарно-показательных микроорганизмов в окружающей среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов.
5. У санитарно-показательных микроорганизмов не должно быть в окружающей среде «двойников».
6. Микроб не должен изменяться в окружающей среде.
7. Методы индикации и идентификации санитарно-показательных микроорганизмов должны быть простыми.
Содержание санитарно-показательных микроорганизмов в исследуемых объектах оценивается по их титру и индексу.
Методы проведения санитарно-микробиологических исследований
(предусматривают определение общей микробной обсеменённости (ОМЧ), определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов).
Санитарно-микробиологическое состояние почвы оценивается на основании сопоставления количества термофильных бактерий и бакте-
рий – показателей фекального загрязнения. Почвы с преобладанием санитарно-показательных бактерий расцениваются как санитарно-неблагополучные, загрязнённые фекалиями человека или животных. Присутствие в почве E. coli и Enterococcus faecalis указывает на свежее (до 2 недель), бактерий родов Citrobacter и Enterobacter – на несвежее (до 2 месяцев), а Clostridium perfringens – на давнее (более 2 месяцев) фекальное загрязнение. Более точная оценка проводится с помощью определения коли-индекса – количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП), обнаруженных в 1 г почвы, перфрингенс-титра – масса почвы (в граммах), в которой обнаружена 1 особь Clostridium perfringens, общего числа сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий в 1 г почвы.
Микробиологические нормативы для оценки санитарного состояния почвы:
– чистая почва: коли-титр – 1 и выше; перфрингенс-титр – 0,01 и выше; ОМЧ – 100-1000;
– загрязнённая почва: коли-титр – 0,9-0,01; перфрингенс-титр – 0,009-0,0001; ОМЧ – 1000-100000;
– сильно загрязнённая почва: коли-титр – 0,009 и ниже; перфрингенс-титр – 0,00009 и ниже; ОМЧ – 10000-4000000.
Для определения ОМЧ почву берут на глубине 10-15 см стерильным ножом (из разных мест не менее 10 проб) в стерильную банку. Из проб готовят навеску 30 г, которую вносят в колбу с водой (270 мл) и тщательно встряхивают. Готовят разведения 10-3, 10-4, 10-5. Из 2-х последних разведений 0,1 мл смешивают с 40 мл 0,7% расплавленного и остуженного до 450С МПА, после чего выливают двойным слоем в чашки с 2% агаром. Инкубируют в термостате. Подсчитывают количество выросших колоний.
Для определения коли-титра, перфрингенс-титра различные разведения почвенной суспензии засевают по 1 мл в пробирки со средой Кесслера. Инкубируют при 430С 48 часов. При получении в средах газообразования и помутнения производят высев петлей на среду Эндо. Отбирают типичные для кишечной палочки колонии, делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При выявлении в мазках грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу. Если проба отрицательная, проверяют ферментативные свойства выделенной культуры посевом на полужидкую среду с глюкозой. Появление в среде кислоты и газа подтверждает наличие E. coli. Определяют коли-титр по наименьшему объёму, в котором обнаруживают БГКП.
Для определения перфрингенс-титра различные разведения почвенной суспензии засевают в пробирки со стерильной железосульфитной средой Вильсон-Блера. После 48 часов инкубации при 430С учитывают результаты по образованию черных колоний C. perfringens в агаровом столбике среды. Мазки окрашивают по Граму, микроскопируют (крупные грамположительные палочки со спорами овальной формы, центрального или субтерминального расположения), вычисляют перфрингенс-титр (наибольшее разведение посевного материала, посев которого приводит к почернению и разрыву среды в первые 12 часов роста при 430С).
Санитарно-микробиологическое состояние питьевой воды оценивается по общему микробному числу (ОМЧ) – количеству мезофильных факультативно-анаэробных микроорганизмов (МЕФАМ) в 1 мл воды; присутствию общих и термотолерантных колиформных бактерий.
По эпидемиологическим показаниям, в воде дополнительно определяют наличие энтерококков, сальмонелл, шигелл, вибрионов, энтеровирусов.
Определение общего числа микроорганизмов
Общее микробное число (ОМЧ) - общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать колонии на питательном агаре при t=370С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза.
Из каждой пробы воды делают посев не менее двух объёмов по 1 мл. Для этого 1 мл воды вносят в стерильную чашку Петри, заливают 6-8 мл расплавленного и остуженного до 45-460С питательного агара, тщательно перемешивают. После застывания агара чашки помещают вверх дном и инкубируют при 370С в течение 24 часов. Затем подсчитывают все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Подсчитанное количество колоний на каждой чашке суммируют и делят на 2. Результат выражают в КОЕ (колониеобразующих единиц) в 1 мл исследованной пробы воды.
Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
К общим колиформным бактериям относятся грамотрицательные, не образующие споры палочки, не обладающие оксидазной активностью ферментирующие лактозу или маннит с образованием альдегида, кислоты и газа при 370С в течение 24 часов.
Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками общих колиформных бактерий, но, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при 440С в течение 24 часов.
Микробиологические и паразитологические показатели питьевой воды
(согласно СанПиНу 2.1.4.559–96)
|
Показатели |
Единицы измерения |
Нормативы |
|
Термотолерантные колиформные бактерии |
число образующих колонии бактерий (колониеобразующих единиц – КОЕ) в 1 мл |
не более 50 |
|
Общие колиформные бактерии 2 |
число бактерий в 100 мл |
отсутствие |
|
Общее микробное число 2 |
число бактерий в 100 мл |
не более 50 |
|
Колифаги 3 |
число бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 100 мл |
отсутствие |
|
Споры сульфитредуцирующих клостридий 4 |
число спор в 20 мл |
отсутствие |
|
Цисты лямблий 3 |
число цист в 50 л |
отсутствие |
Примечания: 1 – при определении проводится 2-кратное исследование по 100 мл отобранной пробы воды; 2 – превышение норматива не допускается в 95% проб, отбираемых в точках водоразбора наружной и внутренней водопроводной сети в течение 12 месяцев, при количестве исследуемых проб не менее 100 за год; 3 – определение проводится только в системах водоснабжения из поверхностных источников перед подачей воды в распределительную сеть; 4 – определение проводится только при оценке эффективности технологии обработки воды.
Метод мембранных фильтров
Мембранный фильтр помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Воду фильтруют в объёме 333 мл. Затем фильтры Зейтца помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри и после инкубации при 370С в течение суток подсчитывают количество выросших колоний, типичных для БГКП. Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. Для этого фильтр с выросшими на нём колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-n-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. 2-3 колонии, не изменившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% раствором глюкозы. Посевы инкубируют в течение суток при 370С. При наличии газообразования подсчитывают число красных колоний на фильтре.
Бродильный метод
Засевают 3 объёма воды по 100 мл (для качественного анализа) или при исследовании воды с целью количественного определения общих колиформных бактерий делают посев 3 объёмов по 100 мл, 3 – по 10 мл и 3 – по 1 мл.
Посев 100 мл и 10 мл воды производят в 10 и 1 мл концентрированной лактозо-пептонной среды, посев 1 мл воды – в 10 мл среды обычной концентрации.
Посевы инкубируют при 370C в течение 24-48 часов. Через 24 часа из питательной среды, где отмечено наличие роста и образование газа, делают высев по секторам на среду Эндо, приготовленную с добавлением фуксина.
Положительный результат на присутствие общих колиформных бактерий в данном объёме воды дают по помутнению и образованию газа на среде накопления (глюкозо-пептонная среда или лактозо-пептонная среда) и наличию красных колоний на среде Эндо. В сомнительных случаях выполняют оксидазный тест и подтверждают способность к газообразованию на среде с лактозой или маннитом (глюкозой).
Результат отрицательный, если
– в среде накопления нет признаков роста,
– на секторах среды Эндо нет роста лактозоположительных колоний,
– на секторах среды Эндо выросли нехарактерные для колиформных бактерий колонии,
– все колонии оказались оксидазоположительными,
– если в подтверждающем тесте на среде с лактозой или маннитом (глюкозой) не отмечено газообразования.
Наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий (общих и термотолерантных колиформных бактерий) – вычисляют по специальным таблицам.
Санитарно-микробиологическое состояние воздуха закрытых помещений оценивают по общему микробному числу (ОМЧ) – количеству особей, обнаруживаемых в 1 м3 воздуха, наличию санитарно-показательных бактерий: гемолитических стрептококков, золотистых стафилококков, а также дрожжевых и плесневых грибов.
Согласно СанПиН 2.1.3.1375-03, воздушная среда помещений лечебных учреждений и аптек по уровню бактериальной обсемененности разделена на 4 класса.
Микробиологические показатели для оценки воздушной среды аптечных учреждений можно определить путем посева воздуха седиментационным (по Коху) или аспирационным методом (в аппарате Кротова).
Допустимые уровни бактериальной обсеменённости воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их
функционального назначения и класса чистоты
|
Класс чистоты |
Название помещений |
Санитарно-микробиологические показатели |
|||||
|
общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха (КОЕ/м3) |
количество колоний S.aureus в 1 м3 воздуха (КОЕ/м3) |
количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 дм3 воздуха |
|||||
|
До |
Во |
До |
Во |
До |
Во |
||
|
Особо чистые (А) |
Операционные, родильный зал, асептические боксы для гематологических, ожоговых больных, палата для недоношенных, асептический блок аптек, стерилизационные (чистая половина) боксы бактериологических лабораторий |
не более 200 |
не более 500 |
не должно быть |
не должно быть |
не должно быть |
не должно быть |
|
Чистые (Б) |
Процедурные, перевязочные, предоперационные, палаты реанимации, залы реанимации, детские палаты, комнаты сбора и пастеризации грудного молока, ассистентские и фасовочные аптек, дистилляторная, помещения бактериологических и клинических лабораторий, предназначенные для исследований |
не более 500 |
не более 750 |
не должно быть |
не должно быть |
не должно быть |
не должно быть |
|
Условно чистые (В) |
Палаты хирургических отделений; коридоры, примыкающие к операционным и родильным залам; смотровые, боксы и палаты инфекционных отделений, ординаторские, материальные, кладовые чистого белья |
не более 750 |
не более 1000 |
не должно быть |
не более 2 |
не должно быть |
не должно быть |
|
Грязные (Г) |
Коридоры и помещения административных зданий, лестницы, лечебно-диагностические, санитарные комнаты, туалеты, комнаты грязного белья |
Не нормируются |
Седиментационный метод (по Коху) – оседание микробов под действием силы тяжести - является простым способом изучения микрофлоры воздуха. Он заключается в том, что чашки Петри со средой оставляют открытыми на определённое время (5-10 минут на общую обсеменённость и не менее 40 минут на кокковую микрофлору), затем их закрывают, маркируют и выдерживают 24 часа в термостате и 24 часа при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязнённости воздуха: по приблизительному подсчёту на площадь 100 см2 в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.
Аспирационный метод – более точный количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью приборов. Аппарат Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексигласовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки под входной щелью.
После инкубации посева в термостате проводят расчет микробного числа по формуле:
|
ОМЧ |
= |
N ∙ 1000 |
|
V |
где N – количество выросших на чашке колоний;
V – объём пропущенного через прибор воздуха, дм3;
1000 - искомый объём воздуха, дм3.
Наличие санитарно-показательных для воздуха микроорганизмов – золотистого стафилококка, гемолитического стрептококка, плесневых грибов, кандид – определяют по характеру выросших колоний на специальных средах (желточно-солевом агаре, кровяном агаре, среде Сабуро) и при микроскопическом изучении бактерий из этих колоний.
Контрольные вопросы
Каковы особенности ферментных систем бактерий? Как регулируется продукция ферментов у бактерий? Какие группы ферментов различают в зависимости от механизма, которым регулируется продукция фермента? Какое практическое значение имеет изучение ферментативной активности бактерий? Методы изучения сахаролитической и протеолитической активности бактерий. Дифференциально-диагностические среды: перечислите, назовите основные составные части и применение. На какое изменение среды реагирует индикатор в этих средах? По какому признаку дифференцируются бактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева? Каким свойством должны обладать бактерии, чтобы образовать на этих средах окрашенные колонии? Если бактерии образуют бесцветные колонии, что это означает? Среды Гисса их состав и применение. Что такое «пёстрый» или «цветной» ряд? Среда Олькеницкого, её состав; как производится посев и как отмечают на этой среде ферментацию разных углеводов, образование сероводорода? Что представляют собой микротест-системы для определения ферментативной активности микробов; как производят посев и как учитывают результаты? Что такое СИБ; как используется эта система, как производится посев и учёт результатов? Укажите основные объекты внешней среды, которые подвергаются санитарно-бактериологическому исследованию. Микробиоценоз, определение понятия. Перечислите и дайте характеристику межвидовых взаимоотношений в микробиоценозах. Какие показатели определяются при бактериологической оценке объектов внешней среды? Санитарно-показательные микроорганизмы: определение понятия. Какими свойствами должны обладать санитарно-показательные микроорганизмы? Перечислите санитарно-показательные микроорганизмы для воздуха, воды, почвы. Микрофлора воды: постоянная микрофлора, источники загрязнения. Показатели для санитарно-бактериологической оценки воды. Методика определения общего микробного числа воды. Показатели фекального загрязнения воды, методы их определения. Укажите предельно допустимые показатели для питьевой воды. Микрофлора воздуха: постоянная микрофлора, источники загрязнения. Показатели для санитарно-бактериологической оценки воздуха, методы их определения. Микрофлора почвы: постоянная микрофлора, её значение для круговорота веществ в природе. Источники загрязнения почвы патогенными микроорганизмами. Показатели для санитарно-бактериологической оценки. Для каких заболеваний факторами передачи могут быть вода, воздух, почва? Некультивируемые формы бактерий: определение понятия, практическое значение.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Выпишите названия (по-латыни) видов санитарно-показательных микроорганизмов для воды, воздуха и почвы.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Выделение чистой культуры бактерий–аэробов (3-й день). Изучите культуру на скошенном агаре макроскопически, приготовьте мазок, окрасьте по Граму, микроскопируйте, зарисуйте, сделайте вывод о чистоте культуры. Для дальнейшей идентификации выделенной культуры произведите посев на среды «пёстрого» ряда и на среду Олькеницкого. Изучите готовые посевы аэробных бактерий на средах «пёстрого» ряда и на среде Олькеницкого, составьте таблицу «Биохимическая активность микроорганизмов». Ознакомьтесь с методикой изучения ферментативной активности бактерий с помощью микротест-систем и СИБ.
2. Выделение чистой культуры анаэробов (4–й день). Изучите характер роста культуры на среде Китта–Тароцци, приготовьте мазок, окрасьте по Граму, микроскопируйте, зарисуйте.
3. Исследование микрофлоры воды и воздуха. Произведите посев водопроводной воды для определения общего микробного числа (ОМЧ). Определите показатели фекального загрязнения воды (наличие колиформных бактерий) по демонстрационным посевам и по таблице. Произведите посев воздуха лаборатории седиментационным методом и с помощью аппарата Кротова.
4. Методы изучения нормальной микрофлоры организма человека (подготовка к следующему занятию). Возьмите стерильным тампоном слизь из зева друг у друга и сделайте посев в пробирку с сахарным мясо-пептонным бульоном. Сделайте посев с кожи рук на чашку с МПА: возьмите маленький стерильный ватный тампон, смочите его в стерильном физиологическом растворе, протрите кожу, сделайте посев этим тампоном.
ЗАНЯТИЕ 9
САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ И ВОЗДУХА (ОКОНЧАНИЕ). ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ НА МИКРООРГАНИЗМЫ. НОРМАЛЬНАЯ МИКРОФЛОРА ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА
В медицинской практике для уничтожения микробов в объектах внешней среды широко применяются физические и химические факторы. Поэтому врачу необходимо знать отношение различных микроорганизмов к физическим факторам и химическим веществам для того, чтобы правильно выбрать способ уничтожения микробов во внешней среде или, наоборот, сохранения их жизнедеятельности. Микроорганизмы заселяют организм человека сразу после рождения и всю жизнь сопровождают его. Видовой состав нормальной микрофлоры организма здорового человека может изменяться в зависимости от возраста, пола, состояния здоровья, способа лечения и других причин. Для каждой области человеческого организма формируется характерный биоценоз. Значение микрофлоры для организма человека неоднозначно, но в нормальных условиях в основном положительное. Поэтому необходимо знать состав нормальной микрофлоры, причины, вызывающие её нарушения, способы восстановления.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- характер действия на микроорганизмы физических факторов и химических веществ;
- состав нормальной микрофлоры организма человека, причины его нарушения и способы восстановления.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо знать:
- способы определения ферментативной активности микробов и учета результатов;
- методы санитарно-бактериологического исследования воды и воздуха;
- физические факторы, способные оказать действие на микробы;
- химические вещества, оказывающие губительное действие на микробы (антисептики).
Цель занятия
1. Изучить характер влияния на микроорганизмы физических и химических факторов.
2. Показать разнообразие ферментов у микроорганизмов и возможности их использования для идентификации.
3. Изучить методы и показатели, необходимые для микробиологической оценки объектов окружающей среды.
План изучения темы
1. Повторите методы исследований ферментативной активности бактерий, определения показателей для санитарно-бактериологической оценки воды, воздуха, способы регистрации результатов.
2. Влияние факторов внешней среды на микробы изучите по учебнику, конспектам лекций и руководству; обратите внимание на механизмы действия факторов, особенности действия антисептиков (дезинфицирующих веществ).
3. При изучении нормальной микрофлоры обратите особое внимание на изменение состава микрофлоры в течение первого года жизни ребенка, на причины, вызывающие дисбактериоз, способы его предупреждения и устранения, на оценку положительного и отрицательного влияния микрофлоры на организм человека. Название пробиотиков их состав и способы применения выучить. Пребиотики, синбиотики: их роль в лечении дисбиозов.
После изучения темы студент должен уметь
1. Выбирать методы для предстерилизационной обработки предметов медицинского назначения и дезинфекции.
2. Освоить основные микробиологические методы изучения микрофлоры организма человека.
3. Проводить оценку качественного и количественного состава микрофлоры кожи, рото-носоглотки, желудочно-кишечного тракта, урогенитального тракта.
Дополнительный материал к занятию
Некоторые дезинфицируюшие вещества, применяемые в ЛПУ
|
№ |
Название препарата, фирма, страна |
Спектр |
Область применения дезинфекционных средств |
||||||||
|
Изделия медицинского назначения |
Поверхности помещений, мебели, оборудования |
Сан-тех. оборудование |
Уборочный материал |
Предметы ухода за больными |
Белье |
Посуда |
Выделения |
||||
|
I. Группа галоидосодержащих средств |
|||||||||||
|
1 |
Хлорамины Б, ХБ, Д, Россия |
Бактерии, микобактерии, вирусы, грибы |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
|
|
2 |
Жавелион, Франция |
Бактерии, микобактерии, вирусы, грибы |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
|
|
II. Группа перекисных соединений |
|||||||||||
|
3 |
Дезоксон-1, дезоксон-4, Россия |
Бактерии, микобактерии, вирусы, грибы, споры |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
|
|
4 |
Перекись водорода, Россия |
Бактерии, микобактерии, вирусы, грибы, споры |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
|
|
III. Группа ПАВ |
|||||||||||
|
5 |
Аламинол, Россия |
Бактерии, микобактерии, вирусы, грибы |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
|
|
6 |
Септабик, Израиль |
Бактерии, кроме микобактерий, грибы |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
|
|
IV. Группа гуанидинов |
|||||||||||
|
7 |
Лизетол АФ, Германия |
Бактерии, микобактерии, вирусы, грибы |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
|
|
8 |
Хлоргек- |
Водные р-ры: бактерии, кроме микобактерий Спиртовые р-ры: бактерии, кроме микобактерий, вирусы |
- + |
+ - |
- - |
- - |
- - |
+ - |
+ - |
- - |
|
|
V. Группа альдегидсодержащих вешеств |
|||||||||||
|
9 |
Бианол, Россия |
Бактерии, микобактерии, вирусы, грибы, споры |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
|
|
10 |
Глютарал, Россия |
Бактерии, микобактерии, вирусы, грибы, споры |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
|
|
VI. Группа спиртов |
|||||||||||
|
11 |
Спирт этиловый, Россия |
Бактерии, кроме микобактерий, вирусы, грибы |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
|
|
VII. Группа фенолсодержащих средств |
|||||||||||
|
12 |
Амоцид, Германия |
Бактерии, микобактерии, вирусы, грибы |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
+ |
|
Выписка из санитарных правил СП 1.2.731-99 (Безопасность работы с микроорганизмами III – IV групп патогенности и гельминтами: Санитарные правила. – М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999. – 107 с.)
Режимы обеззараживания различных объектов,
заражённых патогенными микроорганизмами
|
№ |
Объект |
Способ |
Средство |
Концентрация р-ра, % |
Время, мин. |
|
|
1. Бактерии, не образующие спор, кроме микобактерий |
||||||
|
1 |
Помещения (пол, стены, двери), рабочий стол и др. мебель, оборудование |
Протирание |
Хлорамин Б, ХБ Дезоксон-1, дезоксон-4 Перекись водорода с 0,5% моющего средства Аламинол |
1 1 3 1 |
60 30 60 30 |
|
|
2 |
Халаты, шапочки, маски, бельё больного без видимых загрязнений |
Автоклавирование |
Автоклав |
1 атм, 1200С |
30 |
|
|
Замачивание с последующей стиркой |
Хлорамин Б, ХБ Дезоксон-1, дезоксон-4 Перекись водорода с 0,5% моющего средства Аламинол |
0,5 1 3 1 |
60 30 30 15 |
|||
|
3 |
Очки, фонендоскоп |
2-кратное протирание с интервалом 15' с последующим обмыванием водой и погружением |
Перекись водорода с 0,5% моющего средства Перекись водорода Спирт |
3 3 70 |
30 30 30 |
|
|
4 |
Посуда лабораторная (пипетки, пробирки, колбы, чашки Петри), мазки-отпечатки |
Автоклавирование |
Автоклав |
1,5 атм, 1270С |
60 |
|
|
Кипячение |
Пищевая сода |
2 |
30 |
|||
|
Погружение |
Хлорамин Б, ХБ Дезоксон-1, дезоксон-4 Перекись водорода с 0,5% моющего средства |
3 2 3 |
60 60 60 |
|||
|
5 |
Незащищённые участки кожи, руки |
Протирание с последующим мытьем |
Спирт |
70 |
2 |
|
|
6 |
Незащищённые участки кожи, руки при попадании инфекционного материала в случае аварии |
Хлорамин Б или ХБ Спирт |
0,5 70 |
1 2 раза по 2 мин |
||
|
2. Микобактерии |
||||||
|
1 |
Помещения (пол, стены, двери), рабочий стол и др. мебель, оборудование |
Протирание (2-кратное протирание) |
Хлорамин Б, ХБ Дезоксон-1, дезоксон-4 Аламинол |
0,5 0,25 3 |
60 60 90 |
|
|
2 |
Халаты, шапочки, маски, бельё больного без видимых загрязнений |
Кипячение |
Кальцинированная сода Любое моющее средство |
2 0,5 |
15 15 |
|
|
Замачивание |
Хлорамин Б, ХБ Дезоксон-1, дезоксон-4 Аламинол |
5 05 3 |
240 60 180 |
|||
|
3 |
Посуда лабораторная (пипетки, пробирки, колбы, чашки Петри) |
Автоклавирование |
Автоклав |
1,5 атм, 1270С |
60 |
|
|
Кипячение |
Пищевая сода |
2 |
15 |
|||
|
Погружение |
Активированный хлорамин Б, ХБ |
1 |
60 |
|||
|
4 |
Незащищённые участки кожи, руки при попадании инфекционного материала в случае аварии |
Протирание с последующим мытьём |
Активированный хлорамин Б, ХБ |
0,5 |
2 |
|
|
3. Бактерии, образующие споры |
||||||
|
1 |
Помещения (пол, стены, двери), рабочий стол и др. мебель, оборудование |
2-кратное протирание (орошение) с интервалом в 30 мин |
Активированный хлорамин Б, ХБ Перекись водорода с 0,5% моющего средства |
4 6 |
120 120 |
|
|
2 |
Халаты, шапочки, маски, бельё больного без видимых загрязнений |
Автоклавирование |
Автоклав |
2 атм, 1320С |
90 |
|
|
Кипячение |
Кальцинированная сода |
2 |
60 |
|||
|
Замачивание |
Активированный хлорамин Б, ХБ Перекись водорода с 0,5% моющего средства при 500С |
1 3 |
120 60 |
|||
|
3 |
Очки, фонендоскоп |
2-кратное протирание с интервалом в 30 мин с последующим промыванием водой |
Перекись водорода с 0,5% моющего средства при 500С |
6 |
60 |
|
|
4 |
Посуда лабораторная (пипетки, пробирки, колбы, чашки Петри), мазки-отпечатки |
Автоклавирование |
Автоклав |
2 атм, 1320С |
90 |
|
|
Кипячение |
Пищевая сода |
2 |
60 |
|||
|
Погружение |
Активированный хлорамин Б, ХБ Перекись водорода с 0,5% моющего средства при 500С Дезоксон-1 Спирт+3% Н2О2 |
4 6 1 96 |
60 60 60 30 |
|||
|
5 |
Незащищённые участки кожи, руки при попадании инфекционного материала в случае аварии |
Протирание с последующим мытьём |
Активированный хлорамин Б, ХБ |
1 |
2 |
|
|
4. Вирусы и хламидии |
||||||
|
1 |
Помещения (пол, стены, двери), рабочий стол и др. мебель, оборудование |
Протирание (2-кратное) |
Хлорамин Б, ХБ Аламинол Перекись водорода* Дезоксон-1, дезоксон-4 |
3 5 4 0,1 |
30 60 60 45 |
|
|
2 |
Халаты, шапочки, маски, бельё больного без видимых загрязнений |
Автоклавирование |
Автоклав |
0,5 атм, 1100С |
45 |
|
|
Кипячение |
Кальцинированная сода Любое моющее средство |
2 0,5 |
15 15 |
|||
|
Погружение |
Хлорамин Б, ХБ Активированный хлорамин Б, ХБ |
3 (1) 0,5 |
30 (60) 30 |
|||
|
Перекись водорода с 0,5% моющего средства при 50ºС Дезоксон-1, дезоксон-4 Аламинол |
3 0,1 3 |
30 30 60 |
||||
|
3 |
Очки, фонендоскоп |
2-кратное протирание с последующим промыванием водой и погружением |
Перекись водорода Спирт |
6 70 |
15 30 |
|
|
4 |
Посуда лабораторная (пипетки, пробирки, колбы, чашки Петри), мазки-отпечатки |
Автоклавирование |
Автоклав |
1,5 атм, 1270С |
60 |
|
|
Кипячение |
Кальцинированная сода Любое моющее средство |
2 0,5 |
30 30 |
|||
|
Погружение |
Хлорамин Б, ХБ Перекись водорода с 0,5% моющего средства при 50ºС Дезоксон-1, дезоксон-4 |
3 6 0,5 |
60 60 60 |
|||
|
5 |
Незащищённые участки кожи, руки |
Протирание с последующим мытьём |
Хлорамин Б, ХБ Спирт |
1 70 |
2 2 |
|
|
5. Грибы |
||||||
|
1 |
Помещения (пол, стены, двери), рабочий стол и др. мебель, оборудование |
Протирание |
Хлорамин Б, ХБ Активированный хлорамин Б, ХБ Дезоксон-1, дезоксон-4 Аламинол |
5 1 0,5 3 |
60 60 60 60 |
|
|
2 |
Халаты, шапочки, маски, бельё больного без видимых загрязнений |
Кипячение |
Кальцинированная сода |
2 |
30 |
|
|
Погружение |
Хлорамин Б, ХБ Активированный Хлорамин Б, ХБ Дезоксон-1, дезоксон-4 Аламинол |
5 1 0,2 3 |
180 15 60 180 |
|||
|
3 |
Очки |
2-кратное протирание с интервалом 30 мин. |
Хлорамин Б, ХБ Активированный хлорамин Б, ХБ Дезоксон-1, дезоксон-4 Аламинол |
5 1 0,5 3 |
60 60 60 60 |
|
|
4 |
Посуда лабораторная (пипетки, пробирки, колбы, чашки Петри), мазки-отпечатки |
Автоклавирование |
Автоклав |
2 атм, 1320С |
20 |
|
|
Кипячение |
Пищевая сода |
2 |
30 |
|||
|
Погружение |
Хлорамин Б, ХБ |
5 |
120 |
|||
|
5 |
Руки, заражённые участки кожи |
Мытьё с марлевой салфеткой |
Йодонат Активированный хлорамин Б, ХБ |
1 0,5 |
1 2 |
|
Примечание: 1 - отсчёт времени обеззараживания при кипячении начинается с момента закипания воды; 2 - допускается использование зарубежных дезинфицирующих средств, разрешённых для применения в России.
Контрольные вопросы
Перечислите физические факторы, которые могут губительно действовать на микробы. Деление микробов по отношению к температуре; температурный оптимум, минимум, максимум. Приведите примеры видов микробов, которые погибают при комнатной температуре. Погибают ли перечисленные виды бактерий при 00С, при 1000С: возбудитель столбняка, сибирской язвы, дифтерии, брюшного тифа, ботулизма, анаэробной газовой инфекции, менингококк, гонококк, холерный вибрион, стафилококк. Как влияет на бактерии высушивание? Что такое лиофильное высушивание, для чего применяется? Какие виды лучистой энергии губительно действуют на микробов и применяются на практике? Действие биологических факторов на микробы. Назовите дезинфицирующие вещества, наиболее часто применяемые на практике. Механизмы действия дезинфицирующих веществ на микробы. Действие дезинфицирующих веществ на вегетативные формы и споры бактерий. В какой из концентраций этиловый спирт оказывает более сильное бактерицидное действие: 70 или 96%? Почему? Дайте определения понятия: нормальная микрофлора организма человека; резидентная микрофлора, транзиторная микрофлора. Что такое гнотобионты, для чего они используются? Как изменяется микрофлора ребёнка после рождения и в течение первого года жизни? Назовите органы и ткани, свободные от постоянной микрофлоры. Характеристика микрофлоры различных биотопов организма: органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы, кожи, глаз, наружного уха. Микрофлора толстого кишечника – облигатная и факультативная, аэробная и анаэробная. Значение нормальной микрофлоры в жизни человека. Обнаружение какого микроба свидетельствует о фекальном загрязнении? Дисбиоз (дисбактериоз): определение понятия, в чём выражается, причины возникновения, способы предупреждения и лечения. Понятие о пробиотиках, пребиотиках, синбиотиках. Назовите препараты, применяемые для устранения дисбиоза; что они содержат, как применяются, механизмы действия; какие препараты рекомендуют применять для детей до 6-месячного возраста и для взрослых? Бифидогенные препараты (пребиотики): назовите основные препараты.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите название препаратов, применяемых для устранения дисбиоза, их состав, применение.
Заполните в тетради таблицу «Механизм действия химических веществ на микроорганизмы».
|
Группы веществ |
Препараты |
Механизм действия |
|
Поверхностно-активные (детергенты) |
||
|
Фенолы |
||
|
Галоидосодержащие вещества |
||
|
Кислородсодержащие вещества |
||
|
Альдегидсодержащие вещества |
||
|
Спирты |
||
|
Гуанидины |
||
|
Четвертичные аммониевые основания |
||
|
Красители |
||
|
Соли тяжёлых металлов |
||
|
Металлы |
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Учёт результатов определения биохимической активности аэробных бактерий на средах Гисса и Олькеницкого.
2. Исследование микрофлоры воды и воздуха. Произведите учёт результатов посева воды на микробное число. Определите, соответствует ли вода ГОСТу по микробному числу и показателям колиформных бактерий (см. предыдущее занятие). Произведите учёт результатов посевов воздуха, дайте оценку бактериальной обсеменённости воздуха.
3. Действие физических факторов на микроорганизмы. Произведите учёт опыта Бухнера (действие УФ-лучей на бактерии), результат зарисуйте. Поставьте опыт по действию высоких и низких температур на бактерии: испытайте действие замораживания, кипячения и автоклавирования на споровые и неспоровые бактерии.
4. Действие дезинфицирующих веществ на бактерии. По демонстрационной таблице проверьте правильность составленной вами таблицы.
5. Нормальная микрофлора организма человека. Из посева на сахарном бульоне (посев из зева) приготовьте мазок, окрасьте по Граму, промикроскопируйте несколько полей зрения, зарисуйте все обнаруженные виды бактерий. Из посева на МПА (посев с кожи рук) отберите несколько разных колоний, приготовьте мазки, окрасьте по Граму, микроскопируйте, зарисуйте. Приготовьте мазок из зубного налёта: на предметное стекло нанесите каплю физиологического раствора; стерильной заострённой спичкой возьмите у себя зубной налёт, внесите в каплю физиологического раствора, приготовьте мазок, окрасьте по Граму, микроскопируйте, зарисуйте различные виды обнаруженных в мазке микробов. После обобщения полученных результатов сделайте выводы о разнообразии встречающихся видов микробов, о сходстве их по морфологии с патогенными видами и отсюда о необходимости идентификации их не только по морфологии, но и по комплексу других признаков. Выводы запишите в тетрадь.
ЗАНЯТИЕ № 10
ИТОГ ПО РАЗДЕЛУ «ФИЗИОЛОГИЯ МИКРОБОВ»
Занятие является завершающим по разделу «Физиология микробов». На этом занятии преподаватель дает оценку вашей работе: знаете ли вы теоретический материал по данной теме и владеете ли микробиологическими методами исследования.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен быть готов ответить на все вопросы к итоговому занятию.
Исходный уровень знаний
Материал предыдущих занятий с 6 по 9.
Цель занятия
1. Систематизировать знания по физиологии микробов.
2. Продемонстрировать овладение умениями, полученными при изучении физиологии микробов.
План изучения темы
Повторите все темы раздела «Физиология микробов» по учебнику. практическому руководству, по конспектам лекций, прочитайте дополнительный материал в пособии и записи в своей тетради для практических занятий. Ответьте на контрольные вопросы.
После изучения раздела студент должен уметь
1. Владеть техникой посева бактерий на жидкие и плотные среды.
2. Охарактеризовать предложенные питательные среды, применяемые в микробиологической практике.
3. Охарактеризовать колонии микроорганизмов.
4. Провести посев изолированных колоний на скошенный питательный агар.
5. Провести посев изолированных колоний на скошенный питательный агар.
6. Проводить оценку санитарно-бактериологического состояния воздуха, воды, почвы по микробиологическим показателям.
7. Выбрать средства, режим стерилизации в соответствии с конкретными задачами.
8. Выбирать методы для предстерилизационной обработки предметов медицинского назначения и дезинфекции.
9. Освоить основные микробиологические методы изучения микрофлоры организма человека.
Контрольные практические
задания по разделу «физиология микробов»
Произведите посев материала от больного на жидкую питательную среду для выделения анаэробных микроорганизмов.
Произведите посев материала штриховым способом на плотную питательную среду для выделения чистой культуры микроорганизмов.
Произведите посев материала по Дригальскому на плотную питательную среду для выделения чистой культуры микроорганизмов.
Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Эндо.
Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Плоскирева.
Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Левина.
Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Китта-Тароцци.
Оцените результаты исследования ферментативной активности бактерий на среде Олькеницкого.
Идентифицируйте культуру микроорганизмов по результатам определения биохимической активности на средах Гисса.
Контрольные вопросы по разделу
(подробную расшифровку вопросов смотрите
в соответствующих занятиях (6-9))
Основные компоненты химического состава бактериальной клетки, их локализация в клетке и биологическая роль. Понятие о конструктивном и энергетическом метаболизме (анаболизме и катаболизме). Особенности процесса питания у прокариотов. Источники и типы питания микробов. Общие требования к питательным средам; рН среды, его значение для большинства видов бактерий. Классификация питательных сред по происхождению, по составу и назначению, по консистенции. Простые и сложные питательные среды, примеры. Специальные питательные среды: приведите примеры. Элективные питательные среды, примеры. Дифференциально-диагностические среды, принцип их действия, состав и применение. Что такое стерилизация, дезинфекция, асептика, антисептика? Методы стерилизации, применяемые в микробиологической практике (аппарат, режим стерилизации, стерилизуемые материалы, контроль эффективности стерилизации). Стерилизация прокаливанием на огне. Стерилизация сухим жаром. Стерилизация паром под давлением. Дробные методы стерилизации. Фильтрование через бактериальные фильтры. Кипячение. Пастеризация. Как простерилизовать стеклянную посуду и пипетки? Как простерилизовать простые питательные среды, среды, содержащие углеводы? Как простерилизовать питательные среды, содержащие белки? Что такое рост микробов, размножение микробов? Что такое культура бактерий, чистая культура, штамм, клон? Фазы роста бактериальной культуры в жидкой питательной среде. В какой фазе быстрее всего происходит размножение бактерий? В какой фазе наблюдается наиболее высокая концентрация живых бактерий? Методы выделения чистой культуры аэробов. Схема выделения чистой культуры по дням. Термостат, принципиальная схема устройства, применение. На какие группы можно разделить микробы по типу биологического окисления? Характеристика аэробного пути биологического окисления: основные этапы, ферменты, участвующие в этом процессе, продукты окисления. Анаэробный путь - основные этапы, ферменты, получаемые продукты. Перечислите виды бактерий, относящихся к облигатным анаэробам. Методы культивирования анаэробов: аппаратура, питательные среды. Методы выделения чистой культуры анаэробов (по дням). Культуральные свойства бактерий – что входит в это понятие? Приведите примеры характерного роста бактерий на плотных и на жидких средах. Пигменты микробов, их характеристика. Особенности ферментных систем прокариотов. Механизмы саморегуляции ферментных систем. Как определяют способность бактерий сбраживать углеводы? Как определяют протеолитическую активность бактерий? Дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина, Плоскирева, среды Гисса. среды Олькеницкого: состав и принцип их действия. Микротест-системы; система индикаторных бумажек (СИБ): применение, принцип действия. Микрофлора воды. Возбудители каких заболеваний могут передаваться через воду? Какие существуют показатели для характеристики микрофлоры воды? Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах для воды, воздуха и почвы. Микробное число воды, методика определения. Показатели колиформных бактерий для питьевой воды. Микрофлора воздуха. Методики определения микробного числа воздуха. Микрофлора почвы. Роль микробов в круговороте веществ в природе. Какие факторы внешней среды могут губительно действовать на микробы? Погибают ли перечисленные бактерии при 00С и 1000С (приводится список)? Дезинфицирующие вещества, механизмы их действия на микробы. Назовите фамилии учёных, изучавших нормальную микрофлору организма человека. Микрофлора органов и тканей человека – резидентная и транзиторная, изменение в течение жизни. Значение микрофлоры организма в норме и при патологии: полезные функции и возможное вредное воздействие. Дисбактериоз (дисбиоз): определение понятия, причины возникновения, возможные клинические проявления. Методы лабораторной диагностики и оценки степени дисбактериоза. Препараты для устранения дисбактериоза.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Действие физических факторов на микроорганизмы. Учет опыта предыдущего занятия по действию на споровые и неспоровые виды бактерий замораживания, кипячения, автоклавирования. Запишите результат, сделайте вывод.
2. Подведение итога по разделу «Физиология микробов». Выполнение контрольных заданий. Ответы на контрольные вопросы.
ЗАНЯТИЕ 11
ХИМИОТЕРАПИЯ И АНТИБИОТИКИ. БАКТЕРИОФАГИЯ
Несмотря на большие успехи химиотерапии, особенно в последние десятилетия, лечение инфекционных заболеваний остается сложной и важной проблемой. При лечении больного врачу необходимо из большого арсенала имеющихся антибактериальных препаратов выбрать наиболее эффективные и оказывающие наименьший отрицательный эффект на организм больного. Поэтому необходимо знать механизм и спектр действия препаратов, а также побочное влияние их на организм. Кроме того, следует учитывать, что микроорганизмы могут приобретать устойчивость к химиотерапевтическим препаратам и антибиотикам. Поэтому необходимо определить чувствительность к препаратам возбудителя, выделенного у данного больного, для выбора наиболее активного.
Наряду с химиотерапевтическими препаратами и антибиотиками, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний применяются бактериофаги. Специфичность бактериофагов и их способность лизировать микроорганизмы используется для диагностических целей и в эпидемиологической практике.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- источники получения химиотерапевтических препаратов и антибиотиков, а также механизмы антимикробного и побочного действия;
- условия формирования лекарственной устойчивости микроорганизмов и методы её определения;
- природу и свойства бактериофагов, методы их получения, титрования; использование в медицинской практике.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо знать:
- морфологию и физиологию грибов и других продуцентов антибиотиков;
- участие структурных элементов клеток прокариотов в их физиологических функциях;
- состав и функции нормальной микрофлоры организма человека.
Цель занятия
1. Познакомиться с основными группами химиотерапевтических препаратов с антимикробной активностью.
2. Усвоить сведения о механизмах лекарственной устойчивости бактерий.
3. Изучить методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам.
4. Усвоить особенности строения бактериофагов. Освоить методы получения и титрования бактериофагов. Ознакомиться с практическим использованием бактериофагов в медицине и микробиологии.
План изучения темы
1. Химиотерапевтические препараты и антибиотики: источники получения, механизм действия, практическое применение.
2. Лекарственная устойчивость микроорганизмов: механизмы формирования, методы определения, способы преодоления.
3. Бактериофагия: природа бактериофагов, их структура, взаимодействие с бактериальной клеткой, специфичность, выделение и титрование бактериофагов, практическое применение.
После изучения темы студент должен уметь
1. Определить антибиотикограмму исследуемой культуры диско-диффузионным методом.
2. Интерпретировать результаты изучения чувствительности бактерий к антибиотикам, полученные методом бумажных дисков и методом серийных разведений.
3. Установить феномен бактериофагии на плотных и жидких питательных средах, оценить полученные результаты.
4. Применить бактериофаг для профилактики и терапии инфекционных заболеваний.
Дополнительная литература
1. Бойцов, А.Г. Бактериофаги / А.Г. Бойцов, В.П. Иванов, О.Н. Ластовка. – СПб.: Медицина, 2006.
2. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
3. Зубков М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. - Москва, 2002.
4. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
5. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
6. Павлович С.А. Основы вирусологии / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 2001.
7. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / под ред. Л.С. Страчунского, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова. - М., 2002.
8. Страчунский Л.С. Современная антимикробная терапия. Руководство для врачей / Л.С. Страчунский, С.Н. Козлов. - М.: Боргес, 2002.
Дополнительный материал к занятию
Критериями антимикробной активности препарата являются минимальная подавляющая концентрация (МПК) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК). МПК – это наименьшая концентрация антибиотиков, которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий. Она выражается в мг/л или мкг/мл. МБК – это наименьшая концентрация антибиотика, которая вызывает бактерицидный эффект. Для её определения необходимо провести высев из пробирок (визуально отсутствует рост) на плотный питательный агар, не содержащий антибиотик. Этот показатель имеет большое клиническое значение. На основе метода серийных разведений созданы микрометоды, предусматривающие использование меньшего объёма питательной среды. В настоящее время для проведения такого рода исследований выпускаются многочисленные коммерческие наборы, состоящие из высушенных стабилизированных разведений антибиотиков, которые разбавляются суспензией тест-микроба. Данные наборы могут храниться в обычных условиях, вследствие чего исключается необходимость в приготовлении разведений среды и антибиотиков в лабораторных условиях. Достоинством тестов микроразведений является также то, что они включаются в автоматизированную систему.
На основании полученных данных (диаметра зоны задержки роста или величины МПК) микроорганизмы подразделяют на чувствительные, умеренно-резистентные и резистентные. Для разграничения этих категорий используют так называемые пограничные концентрации антибиотиков, которые не являются неизменными величинами. Они пересматриваются по мере изменения чувствительности популяции микроорганизмов. Разработкой и пересмотром критериев интерпретации занимаются ведущие специалисты (химиотерапевты, микробиологи), входящие в специальные комитеты. Одним из них является национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам (National Committee for Clinical Laboratory Standards – NCCLS), организованный в США. В настоящее время стандарты NCCLS используются как международные для оценки результатов определения чувствительности бактерий при многоцентровых микробиологических и клинических исследованиях.
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам
Критерием чувствительности микроорганизмов к антибиотикам является минимальная подавляющая концентрация (МПК) или минимальная ингибирующая концентрация (МИК) антибиотика, задерживающая рост возбудителя при стандартных условиях постановки опыта.
Для определения лекарственной устойчивости используют суточную чистую культуру возбудителя, выделенную из организма больного, и стандартную питательную среду (АГВ или Мюллер-Хинтон агар) для её посева.
Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят диско-диффузионным методом или методом серийных разведений антибиотика в жидких или плотных средах.
Диско-диффузионный метод
Определение чувствительности к антибиотикам методом бумажных дисков основано на диффузии антибиотика в питательную среду. Концентрация антибиотиков в дисках подобрана таким образом, чтобы диаметры зон задержки роста стандартных тест-микроорганизмов соответствовали международным стандартам. Эта концентрация соответствует средней терапевтической дозе для стандартных штаммов микроорганизмов.
Приготовленную взвесь микроорганизмов засевают на поверхность специальной среды (АГВ или агар Мюллер-Хинтона) в чашки Петри. Затем стерильным пинцетом на засеянную поверхность помещают на равном расстоянии друг от друга, от краев и центра чашки стандартные бумажные диски, пропитанные растворами различных антибиотиков (также можно использовать специальные устройства и диспенсеры). Засеянные чашки выдерживают в термостате при температуре, оптимальной для роста исследуемых бактерий. Если бактерии чувствительны к данному антибиотику, то вокруг диска образуется зона задержки роста. Диаметр зоны задержки роста соответствует степени чувствительности исследуемого микроорганизма к данному антибиотику. Окончательный результат оценивается по специальным таблицам, в которых указаны диаметры зон задержки роста стандартных культур, чувствительных, устойчивых и умеренно-устойчивых.
Метод дисков не даёт надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксину, ристомицину). Также этот метод не позволяет определить минимальную подавляющую концентрацию антибиотика.
Метод серийных разведений
Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий (МПК, МИК). Для этого вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ед/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Далее из основного раствора готовят все последующие разведения в бульоне (в объёме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106-107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона (без антибиотика) и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 370С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий под влиянием содержащейся в ней минимальной подавляющей концентрации (МПК) антибиотика. Для оценки минимальной бактерицидной концентрации (МБК) производят высев на плотную питательную среду без антибиотика из пробирок с отсутствием роста. За МБК принимают минимальную концентрацию антибиотика, вызывающую гибель микроорганизма, что характеризуется отсутствием роста на чашках Петри с питательной средой.
Метод серийных разведений антибиотика в агаризованной среде
В этом случае можно в одном опыте проверить чувствительность к разным концентрациям данного антибиотика нескольких культур микроорганизмов. Различные разведения антибиотика готовят в стерильной агаризованной среде. Для этого в неё добавляют требуемое количество исходного раствора антибиотика, тщательно перемешивают и заливают в стерильные чашки Петри. После застывания агара дно чашки с наружной стороны делят маркером на сектора. Каждую исследуемую культуру засевают штрихом с помощью бактериологической петли на определённый сектор в чашки с разными концентрациями антибиотика. Посев исследуемых культур на чашки с различными концентрациями антибиотика можно сделать с помощью аппликатора, позволяющего засевать одновременно 12-15 культур на одну чашку. Затем чашки помещают в термостат при температуре, оптимальной для роста и развития изучаемых бактерий. Результаты учитывают по наличию или отсутствию роста бактерий в сравнении с ростом на среде в контрольной чашке. Бактерии считаются чувствительными к антибиотику в такой его концентрации, при которой их рост полностью подавляется.
Метод Е-тестов
Данный метод сочетает в себе достоинства метода серийных разведений и метода дисков. Вместо дисков используются полоски («линейки») фильтровальной бумаги, пропитанные антибиотиком, причем у основания полоски концентрация антибиотика будет минимальной, а на «верхушке» – максимальной. Полоски помещают на поверхность питательного агара, засеянного исследуемой культурой. Если бактерии чувствительны к действию данного препарата, вокруг участков полоски, содержащих его ингибирующие концентрации, возникает эллипсовидная зона задержки роста. Числовое значение концентрации антибиотика у основания этой зоны указывает на МПК данного антибиотика для данной культуры.
К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков.
К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата.
Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.
Количественные методы или методы титрования бактериофагов
Титрование бактериофагов проводится с использованием культур чувствительных бактерий в жидких и плотных питательных средах.
Метод титрования бактериофага по Аппельману
(на жидкой питательной среде)
Готовят десятикратные разведения исследуемого бактериофага в питательном бульоне. Для этого в ряд пробирок разливают по 4,5 мл бульона. В 1-ю пробирку добавляют 0,5 мл исследуемого фага. Тщательно перемешивают и переносят в последующие пробирки (из пробирки в пробирку) по 0,5 мл соответствующего разведения фага с уменьшением его концентрации в десять раз. Получают разведения от 10-1 до 10-9 степени. Затем в пробирки вносят по 1 капле суточной культуры соответствующих бактерий. После инкубации в течение суток определяют титр фага. За титр бактериофага принимают то его максимальное разведение, при котором наблюдается полный лизис культуры (просветление среды).
Метод титрования бактериофага по Грациа
(на плотной питательной среде)
Питательный агар разливают в чашки Петри и подсушивают в термостате. Готовят полужидкий питательный агар по 3–4 мл в пробирке и растапливают его на водяной бане. Делают десятикратные разведения исследуемого бактериофага в изотоническом растворе хлорида натрия. Затем 0,5 мл каждого разведения бактериофага смешивают с таким же объёмом суточной бульонной культуры чувствительных к бактериофагу бактерий и выливают эту смесь в пробирку с полужидким агаром температурой 45°C. Приготовленную смесь быстро выливают на поверхность первого слоя агара в чашке Петри, где она застывает в виде тонкого слоя. После застывания второго слоя агара чашки инкубируют при 37°C в течение суток. Смеси бактериофага, культуры и полужидкого агара делают из разведений фага 102–1010, в зависимости от предполагаемого титра фага.
Не заражённые бактериофагом бактерии, размножаясь, образуют сплошной газон роста на поверхности питательного агара. Каждая инфицированная бактериофагом бактерия лизируется и освобождает потомство бактериофага, которое внедряется в интактные клетки бактерий, и весь цикл повторяется. В результате лизиса клеток на сплошном бактериальном газоне появляются «стерильные» пятна или негативные колонии бактериофага. Число этих пятен соответствует количеству фаговых частиц в засеянной смеси. Количество пятнообразующих единиц в 1 мл исходной суспензии бактериофага называется его титром.
Фаготипирование бактерий
Метод фаготипирования имеет большое значение при эпидемиологических исследованиях, так как позволяет выявить источник и пути распространения возбудителей заболеваний. Определение фаговара выделенной чистой культуры проводят с помощью набора типовых диагностических бактериофагов. Фаговар культуры определяют по тому типовому фагу, который вызвал её лизис.
Для проведения фаготипирования исследуемую суточную культуру бактерий засевают «газоном» на поверхность питательного агара в чашки Петри, подсушивают в термостате, делят со стороны дна чашки на квадраты и наносят пипеткой по одной капле соответствующего бактериофага в тест-разведении, указанном на ампуле. В один квадрат бактериофаг не вносят, для контроля роста культуры. Чашку термостатируют при 37оС 18-20 часов, после чего оценивают результат реакции. Положительный результат реакции фаголизиса – лизис культуры в месте нанесения бактериофага («негативные» колонии) при наличии роста в контроле свидетельствует о соответствии культуры бактериофагу и принадлежности с учетом её фаголизабельности к соответствующему виду.
Применение бактериофагов
Применяемые на практике препараты бактериофагов представляют собой фильтрат бульонной культуры соответствующих микробов, лизированных фагом, содержащий живые частицы фага, а также антигены бактерий, освободившиеся из бактериальных клеток при их лизисе. Полученный препарат – жидкий бактериофаг – должен иметь вид совершенно прозрачной жидкости желтого цвета большей или меньшей интенсивности. Препарат проходит контроль на стерильность (методом посева), безвредность и литическую активность (титр).
Диагностические бактериофаги выпускаются как в жидкой, так и в сухой форме, в ампулах. Перед началом работы сухой бактериофаг разводится.
Для лечебно-профилактических целей бактериофаги выпускаются в форме таблеток с кислотоустойчивой оболочкой, в жидком виде или в суппозиториях. Таблетированный сухой бактериофаг более стабилен при хранении и удобен при применении. Одна таблетка сухого бактериофага соответствует 20-25 мл жидкого препарата. Срок годности сухого и жидкого препарата составляет 1 год. Жидкий бактериофаг следует хранить при температуре +2 – +100С, сухой – не выше +10С, но его можно хранить в холодильнике и при отрицательной температуре.
Принятый внутрь бактериофаг сохраняется в организме в течение 5-7 дней. Как правило, приём бактериофага не сопровождается какими-либо реакциями или осложнениями. Противопоказаний к приему нет.
Бактериофаги могут применять также в виде орошений, полосканий, примочек, тампонов. Инъекционные формы бактериофагов можно вводить в стерильные полости – брюшную, плевральную, суставную и в мочевой пузырь. Существует форма выпуска бактериофагов в свечах для ректального применения.
Контрольные вопросы
Дайте определение понятия «химиотерапевтический препарат». Назовите фамилию учёного, разработавшего теорию химиотерапии. Какие свойства являются определяющими при выборе химиотерапевтического препарата? Что такое бактерицидное и бактериостатическое действие препарата? Что такое химиотерапевтический индекс, напишите его формулу, для чего применяется этот показатель? Укажите первые антиспирохетные препараты, синтезированные Эрлихом. Назовите группы химиотерапевтических препаратов, приведите примеры. Назовите фамилию учёного, впервые получившего антибактериальный препарат, и название препарата. Дайте определение понятию «антибиотик». Назовите фамилии русских учёных, впервые обнаруживших антибактериальные свойства зелёной плесени. Назовите фамилию учёного, изучавшего свойства зелёной плесени и сделавшего попытку выделить пенициллин. Назовите фамилии учёных – зарубежных и отечественных, получивших первый антибиотик из зелёной плесени. Назовите фамилию учёного, впервые получившего стрептомицин. Классификация антибиотиков по происхождению (источнику получения), по химическому составу. Механизм действия антибиотиков: «мишени» (точки приложения различных групп антибиотиков). Что означает понятие «спектр действия» антибиотиков? Назовите антибиотики активные преимущественно по отношению к грамотрицательным бактериям, преимущественно по отношению к грамположительным бактериям, антибиотики широкого спектра действия, противовирусные, противогрибковые, противоопухолевые антибиотики. Методы определения активности антибиотиков; в каких единицах измеряется антибактериальная активность антибиотиков? Основные проявления побочного действия антибиотиков. Виды лекарственной устойчивости микробов по происхождению. Генетические механизмы лекарственной устойчивости. Фенотипические (биохимические, структурные) механизмы лекарственной устойчивости. Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам, техника исследования и оценка результатов. Какие существуют способы предупреждения и преодоления лекарственной устойчивости микробов? Назовите препараты, предназначенные для преодоления лекарственной устойчивости и применяемые в сочетании с антибиотиками.
ЗАДАЧА 1. Укажите культуру, наиболее чувствительную к пенициллину, если диаметр зоны задержки роста вокруг диска равняется: кишечная палочка – 0 мм; стафилококк – 15 мм; стрептококк – 30 мм; палочка дифтерии – 13 мм.
ЗАДАЧА 2. Выберите наиболее эффективный антибиотик для лечения больного, если при определении лекарственной устойчивости возбудителя методом стандартных дисков установлены диаметры зон задержки роста: пенициллин – 0 мм; стрептомицин – 13 мм; тетрациклин – 28 мм; эритромицин –15 мм.
ЗАДАЧА 3. Применение пенициллина для лечения стафилококкового заболевания у больного оказалось неэффективным. Какую можно предположить причину неэффективности пенициллина? Как можно проверить это предположение? Какие методы можно применить для этого?
ЗАДАЧА 4. У больного Н. с диагнозом бактериальная дизентерия до начала лечения выделен возбудитель дизентерии, чувствительный ко всем антибиотикам. Больной лечился левомицетином, с другими больными дизентерией не контактировал. На третий день после начала лечения снова выделен возбудитель дизентерии, который оказался устойчивым одновременно к трём антибиотикам: левомицетину, тетрациклину и стрептомицину. Как могла возникнуть множественная лекарственная устойчивость у возбудителя дизентерии в данной ситуации? Как доказать предполагаемый вами механизм возникновения множественной лекарственной устойчивости.
Свойства бактериофагов. Природа – к какому царству живых существ относится? Строение - какую форму чаще всего имеет? Какие химические компоненты содержит? Структурные элементы бактериофага. Размеры – в каких единицах измеряется величина бактериофагов? Назовите фамилии учёных, открывших явление бактериофагии. Опишите фазы взаимодействия вирулентного (инфекционного) бактериофага с чувствительной к нему бактериальной клеткой. Как обнаружить действие бактериофага на бактерии в жидкой и плотной питательной среде? Как будет выглядеть положительный результат? Что такое титр бактериофага? Как определяют и обозначают титр бактериофага? Что такое умеренный бактериофаг, профаг, лизогенная культура, лизогенная конверсия, трансдукция? Опишите взаимодействие умеренного бактериофага с бактериальной клеткой. Применение бактериофагов в практической медицине – на каком свойстве оно основано? Назовите бактериофаги, применяющиеся для лечения, для диагностики, для фаготипирования.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
Заполните в тетради таблицы «Принципы классификации антибиотиков», «Механизмы развития приобретённой лекарственной устойчивости к антибиотикам». Перечислите принципы рациональной антибиотикотерапии и осложнения и побочные эффекты антибиотикотерапии.
Принципы классификации антибиотиков
|
№ |
Классификация |
Примеры |
|
По происхождению |
||
|
1. |
||
|
2… |
||
|
По способу получения |
||
|
1. |
||
|
2… |
||
|
По спектру действия |
||
|
1. |
||
|
2… |
||
|
По эффекту действия на бактериальную клетку |
||
|
1. |
||
|
2… |
||
|
По механизму действия (мишени) |
||
|
1. |
||
|
2… |
Механизмы развития приобретённой лекарственной устойчивости
к антибиотикам
|
Генетические |
Фенотипические (биохимические) |
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Знакомство с образцами химиотерапевтических препаратов и антибиотиков. Изучите химиотерапевтические препараты и антибиотики, имеющиеся в наборе. В отношении каждого препарата определите: происхождение (из грибов, из актиномицетов, из животных тканей, из бактерий, полусинтетический, синтетический), спектр действия (антибактериальный, противогрибковый, противовирусный), в каких единицах дозируется. Запишите в тетрадь.
2. Определение чувствительности стафилококка к пенициллину методом серийных разведений.
Цель опыта: по готовому посеву определить бактериостатическую концентрацию антибиотика; рассказать, что необходимо сделать для определения бактерицидной концентрации препарата.
Материал: готовый посев.
Ход опыта: описать.
Результат: определить и записать в виде таблицы.
Вывод: сформулировать.
3. Определение лекарственной устойчивости микроорганизмов методом стандартных дисков.
Цель опыта: определить лекарственную устойчивость культур кишечной палочки и стафилококка с помощью стандартных дисков; определить, в каких случаях устойчивость является природной, а в каких - приобретённой.
Материал: культуры кишечной палочки, стафилококка 209 Р, свежевыделенного от больного стафилококка.
Ход опыта: описать.
Результат: на следующем занятии измерить зоны отсутствия роста вокруг дисков, по таблице определите степень чувствительности микробов к каждому антибиотику. Запишите в тетрадь.
Вывод: сформулируйте в соответствии с поставленной целью.
4. Бактериофагия.
а) Ознакомьтесь с результатами действия бактериофага на бактерии по готовым посевам в жидкой и плотной питательной среде и обратите внимание на «стерильные пятна» - колонии бактериофага.
б) Определение титра бактериофага (учёт результатов демонстрационных посевов):
по Аппельману (в жидкой питательной среде) – определите титр бактериофага, составьте таблицу;
по Грациа (в плотной питательной среде) – сосчитайте стерильные пятна на чашке и с учётом разведения бактериофага определите титр.
Вывод: дайте оценку пригодности бактериофага по титру для практического применения.
в) Деловая игра – методика получения бактериофага. Продумайте последовательность действий, способы и необходимое оснащение для получения 100 литров дизентерийного бактериофага с титром 10-9. Каждый студент участвует в деловой игре, продумав и рассказав ход определённого этапа работы.
г) Ознакомьтесь с набором бактериофагов и определите, с какой целью и каким способом применяется каждый препарат.
ЗАНЯТИЕ 12
АНТИБИОТИКИ (ОКОНЧАНИЕ). ГЕНЕТИКА МИКРОБОВ,
ГЕННАЯ ИНЖЕНЕРИЯ, БИОТЕХНОЛОГИЯ
Способность микроорганизмов изменять свои свойства имеет непосредственное отношение к практической медицине, так как может оказать влияние на результаты лечения, диагностики и профилактики инфекционных заболеваний. В последние годы основные достижения генетики получены на модели микроорганизмов. Возникли новые научные направления – молекулярная генетика и генетическая инженерия. Развитие этих направлений позволило изучить тонкую структуру гена и обеспечивает возможность получения организмов с запланированными свойствами, лечения наследственных заболеваний человека и получение антибиотиков, гормонов, антител и других биологических веществ промышленным путём (биотехнология).
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- структуру и особенности генома микроорганизмов;
- формы изменчивости микроорганизмов, условия, вызывающие изменение их свойств;
- внехромосомные генетические факторы, их свойства и роль в изменчивости микроорганизмов;
- значение изменчивости микроорганизмов для практической медицины.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо знать основные законы генетики, тонкую структуру генов и механизмы, обеспечивающие их функционирование, а также нарушение функции генов в результате мутаций (биология); структуру и функции нуклеиновых кислот, ферменты, участвующие в реализации генетической информации (биохимия).
Цель занятия
1. Ознакомиться с особенностями генома бактериальной клетки, видами и формами изменчивости микроорганизмов.
2. Ознакомиться с практическим применением достижений генной инженерии.
План изучения темы
1. История развития учения о генетике микроорганизмов.
2. Формы изменчивости микроорганизмов.
3. Значение изменчивости микроорганизмов для теории и практики медицины.
После изучения темы студент должен уметь
1. Выявить проявления фенотипической изменчивости (модификации) у бактерий.
2. Интерпретировать результаты опытов по получению фено- и генотипической изменчивости у бактерий.
3. Учесть и оценить результаты ПЦР.
Дополнительная литература
1. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
2. Гетерогенность микробных популяций / В.В. Бельский, П.В. Калуцкий, В.В. Киселева, Е.В. Шаталова, Л.М. Закарян. – М.: МИА, 2008.
3. Елинов Н.П. Основы биотехнологии / Н.П. Елинов. - СПб.: Наука, 1995.
4. Егорова Т.А. Основы биотехнологии / Т.А. Егорова, С.М. Клунова, Е.А. Живухина. – М.: Academia, 2005.
5. Елдышев Ю.Н. Современная биотехнология / Ю.Н. Елдышев. - М.: Гайдекс Ко, 2004.
6. Захаров И.А. Курс генетики микроорганизмов: учеб. пособие для студентов биол. специальностей ун-тов / И.А. Захаров. - Минск, 1978.
7. Коротяев А.И. Медицинская микpобиология, иммунология и виpусология: учеб. для мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев; под pед. А.И. Коpотяева. - 3-е изд., испр. и доп. - СПб.: СпецЛит, 2002.
8. Коротяев А.И. Молекулярная биология и медицина / А.И. Коротяев, Н.Н. Лищенко. - М.: Медицина, 1987.
9. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
10. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб. для студентов мед. вузов / под ред. А.А. Воробьева. - М.: МИА, 2004.
11. Пехов А.П. Генетика бактерий / А.П. Пехов. - М.: Медицина, 1984.
12. Рыбчин В.Н. Основы генетической инженерии: учеб. пособие для вузов / В.Н. Рыбчин. - Минск: Высш. шк., 1986.
13. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия / С.Н. Щелкунов. - Новосибирск: Сибирское университетское издательство, 2004.
Дополнительный материал к занятию
Генетические методы диагностики инфекционных заболеваний
Идентификация нуклеиновых кислот
Метод молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот (НК) основывается на способности НК специфически соединяться (гибридизироваться) с комплементарными фрагментами гомологичных ДНК или РНК искусственно созданных нитей, меченных изотопами или ферментами (пероксидаза, щелочная фосфатаза).
Полимеразная цепная реакция (ПЦР). В случаях когда в исследуемом материале ДНК или РНК мало или недостаточно для того, чтобы установить её точную генетическую принадлежность, прибегают к полимеразной цепной реакции, основу которой составляет катализируемое ДНК-полимеразой многократное образование копий определённого участка ДНК. ПЦР была разработана в 1983 году американским учёным Керри Мюллисом. В 1993 году К. Мюллис за свои исследования был удостоен Нобелевской премии.
ДНК состоит из двух цепей, построенных из четырёх нуклеотидов: аденина, тимина, гуанина, цитозина (А, Т, Г, Ц). Последовательность нуклеотидов одной цепи комплементарна последовательности другой. У каждой цепи есть 3’- и 5’-концы. 3’-конец одной цепи связан с 5’-концом другой. ДНК-полимераза узнает азотистые основания в цепочке-матрице и наращивает вторую цепочку от 3’- к 5’-концу ДНК, делая подобие негатива. В среде, где производится синтез, должен присутствовать строительный материал – свободные нуклеотиды. ДНК-полимераза начинает работать только тогда, когда к цепи ДНК присоединяется праймер. Праймер представляет собой небольшую цепочку нуклеотидов, служащую затравкой для синтеза новой цепи. С матрицей она соединяется комплементарно. В праймере должно быть не менее 20-30 нуклеотидов: чем их больше, тем точнее выбирается антипоследовательность. Многократно повторяя эту операцию, полимераза способна удлинять 3’-конец праймера до тех пор, пока не достигнет 5’-конца матрицы. Однако если добавить в среду дидезоксинуклеотидтрифосфат (ddNTP), например, дидезоксиаденин (ddA), дальнейший рост цепи невозможен, поскольку к 3’-концу нуклеотиды присоединяться уже не могут.
Зная последовательность оснований, на его границе синтезируют праймер-антипоследовательность из 20-30 нуклеотидов. Их добавляют к препарату расплетённой ДНК, они связываются с родственным участком. С этого места начинает работать фермент-копировщик ДНК-полимераза. Чтобы ограничить нужный участок с другой стороны, с 3’-конца, нужны ddNTP четырёх типов. Копия антипараллельна, и по ней ДНК-полимераза движется в обратную сторону. Работу она начинает с праймера ко второму граничному участку (он должен быть антипоследовательностью, то есть таким же, как в матрице). Дойдя до конца, который был началом в предыдущем проходе, фермент уже во втором цикле выдаёт точную копию избранного участка. Полимераза копирует её в следующем цикле, потом обе копии, потом – 4 и т.д. Заставив полимеразу работать дальше побочных продуктов реакции - копий с длинными хвостами с обеих сторон, будет всё меньше. После 20 проходов будет около 1 миллиона копий нужного участка, а других фрагментов – лишь несколько десятков.
Техника ПЦР
Исследуемым материалом для ПЦР может быть культура бактерий, нуклеиновые кислоты, выделенные из клеток, биологические жидкости (кровь, моча), материал из внешней среды – вода, почва, пищевые продукты и т.д., содержащие ДНК или РНК.
На I этапе молекула ДНК разделяется нагреванием до 950С на 2 комплементарные нити.
На II этапе в реакционную смесь добавляют искусственно синтезированные ДНК-олигонуклеотидные праймеры двух типов. Одни из них комплементарны началу одной цепи ДНК, другие – концу второй. Одновременно вводится смесь 4 типов ddNTP. Праймеры соединяются с цепями ДНК.
На III этапе смесь нагревают до 700С и добавляют фермент ДНК-полимеразу (термостабильную), выделенную в 1980 году Калединым из бактерий Thermus aquaticus, живущих в горячих источниках. Этот фермент достраивает вслед за каждым праймером вторую цепь. Процесс удвоения повторяется 20-30 раз до получения миллиона копий исходной молекулы ДНК. Для проведения ПЦР применяются специальные термостаты – термальные циклеры, позволяющие многократно и быстро проводить нагревание и охлаждение исследуемых проб.
На IV этапе проводится оценка результатов ПЦР с помощью электрофореза в 1% геле с окраской фракций ДНК бромидом этидия, ярко светящимся в ультрафиолетовых лучах. Полученные электрофореграммы затем анализируются.
ПЦР наиболее эффективна для обнаружения микроорганизмов, трудно культивируемых в лабораторных условиях. Как правило, эти возбудители – внутриклеточные паразиты, длительно персистирующие в организме хозяина.
Контрольные вопросы
Дайте определение понятий «наследственность» и «изменчивость». Основные этапы развития учения о наследственности и изменчивости у микроорганизмов. Что такое генотип, фенотип? Особенности структуры генома прокариотов. Структурная модель ДНК по Уотсону и Крику. Что такое генетический код? Какими символами обозначается генотип и фенотип бактерий? Перечислите внехромосомные факторы наследственности. Перечислите бактериальные плазмиды; какие свойства они кодируют? Что такое трансмиссивные, нетрансмиссивные плазмиды? Что такое транспозоны, Is-последовательности? Формы изменчивости микроорганизмов: генотипическая и фенотипическая. Механизмы наследственной изменчивости бактерий: мутации и рекомбинации, виды рекомбинаций. Укажите фамилию учёного, опыты которого с пневмококками наметили пути для поиска материальной основы наследственности. Опишите механизм трансформации, трансдукции, конъюгации. Применение генетических методов в диагностике инфекционных заболеваний.
ЗАДАЧА. У больного К. с диагнозом бактериальная дизентерия в первый день заболевания выделен возбудитель дизентерии с типичными для этого вида биохимическими и другими свойствами (не ферментировал лактозу). Через два дня у этого же больного был выделен микроб, у которого все свойства были типичными для возбудителя дизентерии: у него появилась способность ферментировать лактозу. Какой генетический механизм возникновения у возбудителя дизентерии нового свойства можно предположить? Как доказать наличие предполагаемого вами механизма изменчивости?
Дайте определение понятий: молекулярная биология, биотехнология, генетическая инженерия. Опишите последовательность этапов генной инженерии. Укажите способы получения чистых генов для генетической инженерии; векторы (проводники) с помощью которых рекомбинантную ДНК можно ввести в клетку. Ферменты, с помощью которых можно расщеплять молекулу ДНК на отдельные фрагменты, «сшивать» отдельные фрагменты ДНК. Достижения генетической инженерии и биотехнологии: перечислите основные продукты, применяемые в медицине. Геномная инженерия: методы, достижения. Значение изменчивости микроорганизмов для практической медицины.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Составьте схему: «Формы изменчивости бактерий».
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Учёт посевов предыдущего занятия (см. занятие 11).
2. Опыт по выявлению спонтанных мутаций у бактерий.
Цель опыта: определить, имеются ли мутанты, устойчивые к стрептомицину, в культуре бактерий, которая не соприкасалась со стрептомицином.
Методика: на чашке с МПА производится рассев культуры бактерий с целью получения изолированных колоний. После суточного инкубирования в термостате выросшие колонии с помощью игольчатого штампа-репликатора переносятся на чашку с МПА, содержащим стрептомицин, и контрольную чашку. После суточного инкубирования в термостате учитывают результат.
Результат: зарисовать чашки с колониями.
Вывод: сформулировать.
3. Опыт конъюгации бактерий.
Цель опыта: определить, возможна ли конъюгация между данными штаммами.
ЗАДАЧА: получить прототрофный рекомбинант путём конъюгации двух ауксотрофных культур.
Материал: донор, ауксотроф по лейцину, реципиент - ауксотроф по треонину.
Методика: суточные бульонные культуры этих штаммов смешивают во флаконе и оставляют в термостате на 30-60 минут. В результате конъюгации от клеток донора к реципиенту передаются гены, кодирующие способность синтезировать треонин, и образуются прототрофные клетки. Для выявления этих клеток смесь бактерий высевают на среду, в которой отсутствуют лейцин и треонин (так называемая минимальная среда). Если конъюгация произошла, то на минимальной среде вырастут колонии прототрофных рекомбинантов. Донор и реципиент не вырастают.
Результат: нарисовать чашку с готовым результатом опыта.
Вывод: сформулировать.
4. Нарисовать в тетради схемы опытов трансформации и трансдукции.
5. Опыт бактериоциногении.
Цель: определить, какие из испытуемых культур кишечной палочки способны продуцировать колицины.
Методика: испытуемые культуры засеяны бляшками на чашке с МПА. После двухсуточной инкубации в термостате выросшие культуры убиты парами хлороформа. На поверхность посева наливается растопленный МПА, содержащий колицинчувствительную культуру. После инкубации в термостате учитывается результат по зонам отсутствия роста вокруг колоний колициногенных культур.
Результат: зарисовать.
Вывод: сформулировать (указать колициногенные культуры).
6. Диссоциация бактерий. Посмотреть с помощью бинокулярной лупы колонии эпидермального стафилококка: гладкие (S) и шероховатые (R).
ЗАНЯТИЕ 13
ИНФЕКЦИЯ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ
Освоение вопросов инфекции необходимо врачу для понимания патогенеза инфекционных заболеваний. Экспериментальный метод исследования в микробиологии применяется для изучения патогенности микроорганизмов, для выделения чистой культуры возбудителя из исследуемого материала, для испытания лечебного и профилактического действия химиотерапевтических и биологических препаратов.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- понятие об инфекции, формы инфекции;
- понятие о патогенности и вирулентности микроорганизмов, факторы вирулентности и способы их выявления;
- правила заражения и вскрытия животных.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала студенту необходимо знать:
- виды симбиоза макро– и микроорганизмов;
- основные группы микроорганизмов из разделов «Морфология микроорганизмов», «Физиология микроорганизмов»;
- приготовление препаратов–мазков, окраска их по Граму.
Цель занятия
1. Ознакомиться с методами выявления факторов патогенности микроорганизмов.
2. Изучить особенности и динамику развития инфекционного процесса, формы его проявления, пути передачи.
3. Познакомиться с основными методами экспериментального заражения и бактериологического исследования трупов животных.
План изучения темы
1. Инфекция и инфекционный процесс.
2. Патогенность и вирулентность микроорганизмов. Факторы патогенности.
3. Экспериментальное заражение животных. Определение вирулентности микробов и силы токсина.
4. Роль макроорганизма, внешней и социальной среды в возникновении и развитии инфекционного процесса.
5. Динамика развития инфекционного процесса. Виды инфекционного процесса.
После изучения темы студент должен уметь
1. Соблюдая правила асептики, провести бактериологическое исследование трупа лабораторных животных.
2. Определить форму инфекционного процесса у экспериментального животного при бактериологическом исследовании трупа.
Дополнительная литература по разделу «Инфекция и иммунитет»
1. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
2. Внутрибольничные инфекции / Р.Д. Перетц, А.Л. Хэмптон,
П.А. Ристуцциа и др.; под ред. Р.П. Венцела; пер. с англ. Б.А. Годованно-
го. - М.: Медицина, 1990.
3. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул / Ю.В. Езепчук. - М.: Медицина, 1985.
4. Лунгу В.М. Внутрибольничная инфекция / В.М. Лунгу. - Кишинев: Тимпул, 1991.
5. БМЭ: в 30 т. Т. 9. – М.: Сов. энциклоп., 1978.
6. Вершигора А.Е. Общая иммунология / А.Е. Вершигора. - Киев: Выш. школа, 1990.
7. Ершов Ф.И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств) / Ф.И. Ершов, О.И. Киселев. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005.
8. Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция / П.Е. Игнатов. - М.: Время, 2002.
9. Иммунология: пер. с англ.: в 3 т. / ред. У. Пол. - М., Мир, 1987.
10. Иммунология и аллергология (цветной атлас): учеб. пособие для студентов мед. вузов / под ред. А.А. Воробьева, А.С. Быкова, А.В. Караулова. – М.: Практическая медицина, 2006.
11. Иммунология инфекционного процесса: руководство / под ред. В.И. Покровского. - М., 1994.
12. Коротяев А.И. Иммунитет и генетический гомеостаз учеб. пособие для студентов мед. ин-тов / А.И. Коротяев, Т.В. Малышева, Н.Н. Лищенко. - Краснодар: Кубан. мед. ин-т, 1982.
13. Лазарева, Д.Н. Стимуляторы иммунитета / Д.Н. Лазарева,
Е.К. Алехин. - М.: Медицина, 1985.
14. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
15. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб. для студентов мед. вузов / под ред. А.А.Воробьева. - М.: МИА, 2004.
16. Медуницин Н.В. Вакцинология / Н.В. Медуницин. - М.: Триада-Х, 1999.
17. Морозов В.Г. Цитокины / В.Г. Морозов, Г.А. Рытак, В.В. Малинин. - СПб., 2001.
18. Новиков Д.К. Медицинская иммунология: учеб. пособие /
Д.К. Новиков. - Витебск, 2002.
19. Общая медицинская вирусология: учеб. пособие / Н.С. Горячкина и др.; под ред. Н.С. Горячкиной, Л.И. Кафарской. – Ростов н/Д: Феникс, 2007.
20. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
21. Павлович С.А. Основы вирусологии / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 2001.
22. Хаитов Р.М. Иммунология / Р.М. Хаитов. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006.
23. Хаитов Р.М. Иммунология / Р.М. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. – М., 2000.
24. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
25. Ярилин А.А. Основы иммунологии: учеб. для студентов мед. ву-
зов / А.А. Ярилин. - М.: Медицина, 1999. - (Учеб. лит. для студентов мед. вузов).
26. Яфаев Р.Х. Эпидемиология внутрибольничных инфекций /
Р.Х. Яфаев, Л.П. Зуева. - Л.: Медицина, 1989.
Дополнительный материал к занятию
Методы изучения факторов вирулентности бактерий и силы токсинов
1. Биологические пробы на лабораторных животных для определения силы токсина (дерматонекротическая проба на лабораторных животных, кератоконъюнктивальная проба, определение DLM токсина).
2. Посев культуры на кровяной агар для определения продукции гемолизинов.
3. Определение ферментов, обусловливающих инвазивность бактерий:
плазмокоагулаза определяется в реакции плазмокоагуляции с цитратной кроличьей плазмой;
гиалуронидаза определяется по способности культуры гидролизовать гиалуроновую кислоту;
лецитиназу определяют на среде ЖСА (желточно-солевой агар) по наличию венчика вокруг колонии;
ДНК-азу определяют на питательной среде, в которую добавляют раствор ДНК, по просветлению среды вокруг колонии после нанесения на поверхность среды HCl.
4. Определение факторов персистенции микроорганизмов (антилизоцимной, антикомплементарной, антитрипсиновой, антиинтерфероновой, антикарнозиновой, антитромбоцитарной, антииммуноглобулиновой, антигистоновой активности).
Заражение лабораторных животных проводят для:
моделирования инфекционных заболеваний;
выделения чистой культуры возбудителя болезни:
определения факторов вирулентности и измерения летальной дозы;
проверки качества вакцин, иммунных сывороток, фармпрепаратов, антибактериальных препаратов.
Заражение животных производят разными способами (подкожно, внутрикожно, накожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно, через рот, в мозг, интраорбитально и др.) в зависимости от задач исследования и используемых животных.
Контрольные вопросы
Формы симбиоза микро– и макроорганизма. Дайте определение понятий «инфекционный процесс» и «инфекционное заболевание». Условия, от которых зависит возникновение, течение и исход инфекционного процесса. Перечислите положения «триады Генле-Коха». Что такое патогенность микроба? Вирулентность микробов, единицы её измерения. Какая разница между понятиями патогенность и вирулентность микробов? Какой микроб более вирулентен: с DLM 1 миллиард микробных клеток или с DLM 250 млн. микробных клеток? Как можно понизить вирулентность микробов? Как повысить вирулентность микробов? Дайте определение: факультативные внутриклеточные паразиты и облигатные внутриклеточные паразиты, приведите примеры. Факторы вирулентности микробов. Что такое адгезивность микробов и с какими факторами связано это свойство? Что такое инвазивность микробов и с какими факторами связано это свойство? Что такое антифагоцитарная активность микробов и с какими факторами это связано? Какие факторы обеспечивают персистенцию микроорганизмов в организме хозяина? Дайте характеристику экзотоксинов и эндотоксинов: образование, получение, химическая природа, сила действия, избирательность действия, антигенность, реакция на действие формалина и тепла. Анатоксин, его получение и основные свойства. Перечислите токсигенные бактерии. Пирогены бактериального происхождения, их характеристика, применение в медицине; в каких препаратах присутствие пирогенов является нежелательным? Как определяется пирогенность воды и растворов? Понятие об условно-патогенных микробах, примеры. Влияние состояния макроорганизма и условий внешней среды на течение инфекционного процесса. Возможные исходы заражения. Формы инфекционного процесса в зависимости от наличия клинических проявлений. Что такое экзогенная инфекция, эндогенная инфекция, аутоинфекция? Формы инфекции в зависимости от локализации возбудителя в организме хозяина, в зависимости от продолжительности взаимодействия возбудителя с макроорганизмом. Что такое рецидив, реинфекция, суперинфекция, вторичная инфекция? Понятие о бактериемии, септицемии, септикопиемии, токсинемии. Если ввести кровь больного ботулизмом человека в организм мыши, то она заболевает и погибает: чем вызывается гибель мыши? Как называется состояние организма, которое возникает у мыши? Укажите признаки, по которым инфекционные болезни отличаются от неинфекционных. Периоды течения инфекционного заболевания. Основные формы взаимодействия возбудителей при смешанных инфекциях. Перечислите основные особенности вирусных инфекций. Типы вирусной инфекции. Каким термином обозначается вирулентность вирусов? Определение понятия внутрибольничные (госпитальные) инфекции. Какие микроорганизмы (патогенные или условно-патогенные) чаще всего их вызывают? Определение понятия «госпитальные штаммы» и их основные свойства. Условия, способствующие возникновению внутрибольничных инфекций. В каких целях используется экспериментальный метод исследования? Какие животные чаще всего используются для экспериментов в микробиологических лабораториях? Правила отбора и подготовки животных для экспериментального заражения. Какие меры предосторожности следует соблюдать при заражении животных? Назовите методы заражения животных. Какова цель бактериологического исследования трупа экспериментального животного? Какие условия соблюдаются при бактериологическом исследовании трупа? Почему исследуемый материал не должен соприкасаться с дезинфицирующими веществами?
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Составьте схему «Основные факторы вирулентности микробов».
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Изучение факторов вирулентности микробов. Определение плазмокоагулазы: культуру стафилококка засеять в пробирку с цитратной плазмой кролика, в контроле оставить незасеянную плазму. Результаты учесть через два часа. В тетради описать ход опыта, результат и сделать вывод.
2. Изучение демонстрационных посевов стафилококков и стрептококков на кровяном агаре, объяснить причину образования зон гемолиза вокруг колоний.
3. По таблице определить DLM экзотоксина, записать в тетрадь. По таблице определить DLM и вычислить LD50 микробов. Записать в тетрадь.
4. Изучить схемы заражения экспериментальных животных.
5. Внимательно ознакомиться с процессом вскрытия трупа заражённого животного. Протокол вскрытия записать в тетрадь.
ЗАНЯТИЕ 14
ИММУНИТЕТ. ФАКТОРЫ ВРОЖДЁННОГО ИММУНИТЕТА.
АНТИГЕНЫ
Для врача очень важно иметь представление об иммунитете как о способе защиты постоянства внутренней среды организма от генетически чужеродных агентов, в том числе от патогенных микроорганизмов. Иммунология внесла значительный вклад в такие области современной медицины, как переливание крови, вакцинация, трансплантация органов, лечение аллергии, аутоиммунных болезней и рака. Мощным фактором защиты организма от микроорганизмов является врождённый (видовой) иммунитет, который представляет собой совокупность анатомо–физиологических приспособлений организма. Приобретённый иммунитет формируется в результате попадания или введения в организм антигена. Студент должен знать, какие же вещества могут выступать в роли антигена, как получить антиген.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- определение понятия иммунитет, виды иммунитета;
- клеточные и гуморальные факторы врождённого (видового) иммунитета;
- антигены, способы их получения и практическое применение.
Исходный уровень знаний
Из курса биологии и гистологии вспомнить клетки крови, их морфологию; приготовление мазка из крови, фиксацию, окраску.
Цель занятия
1. Познакомиться с клеточными и гуморальными механизмами врождённого иммунитета (фагоцитоз, лизоцим, комплемент, интерфероны).
2. Освоить методы оценки факторов врождённого иммунитета организма человека.
3. Выработать чёткое преставление об антигенах, их разнообразии, свойствах.
План изучения темы
1. Иммунитет, виды иммунитета.
2. Факторы врождённого иммунитета.
3. Антигены, свойства антигенов, методы получения.
В процессе самоподготовки используйте конспект лекций, учебник, руководство к практическим занятиям. Просмотрите дополнительный материал в пособии, ответьте на контрольные вопросы и решите задачи.
После изучения темы студент должен уметь
1. Оценить факторы врождённого иммунитета организма (гуморальные и клеточные).
Дополнительный материал к занятию
Методы оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток
Количественную оценку фагоцитарной активности лейкоцитов проводят в цельной крови, или в лейкоцитарной взвеси, или в обогащенных фракциях фагоцитирующих клеток. В качестве стандартных объектов фагоцитоза используют мелкодисперсные частицы латекса диаметром от 1,0 до 2,0 мкм, суспензию убитых нагреванием клеток бактерий или дрожжеподобных грибов.
Определение фагоцитарной активности полиморфноядерных
лейкоцитов периферической крови
В микропипетку набирают 0,05 мл 2% цитрата натрия и 0,1 мл крови, выливают в пробирку. Добавляют 0,05 мл 2-миллиардной взвеси убитых стафилококков. Пробирку помещают на 30 минут в термостат, после чего встряхивают, готовят мазки, фиксируют их смесью Никифорова и окрашивают метиленовым синим (1% раствор, разведённый 1:4) в течение одной минуты. Мазки микроскопируют, находят 25 нейтрофилов и подсчитывают: процент активных фагоцитов (фагоцитарная активность) - количество нейтрофилов, фагоцитировавших стафилококки, по отношению к 25 изученным нейтрофилам; фагоцитарное число – среднее число стафилококков на один нейтрофил (общее число фагоцитированных стафилококков разделить на 25). Запись удобно вести в сетке (5 клеток х 5 клеток).
Количественная проба на лизоцим в сыворотке крови
В контрольную пробирку налить 0,5 мл физиологического раствора. Этой же пипеткой в опытную пробирку налить 0,5 мл инактивированной сыворотки крови. В обе пробирки добавить по 0,5 мл взвеси микрококка. Встряхнуть. При наличии в сыворотке лизоцима просветление в опытной пробирке появляется через несколько минут.
Контрольные вопросы
Определение понятия иммунитет. Виды иммунитета в зависимости от способа его формирования. Виды иммунитета в зависимости от агента, против которого он направлен. Врождённый (естественный) иммунитет является видовым или индивидуальным, специфическим или неспецифическим, может ли передаваться по наследству? Назовите основные факторы врождённого иммунитета. Автор фагоцитарной теории, основные положения этой теории. Какие клетки обладают фагоцитарной активностью? Фазы фагоцитарного процесса. Какими показателями определяют фагоцитарную активность лейкоцитов (показатель, название, сущность). Какое различие между завершённым и незавершённым фагоцитозом? При каких заболеваниях наблюдается незавершённый фагоцитоз? Укажите факторы, усиливающие фагоцитоз. Опсоно-фагоцитарная реакция – принцип реакции, методика постановки. Что такое опсонический индекс? Перечислите гуморальные защитные факторы крови. Лизоцим: автор, открывший его (в каком материале), химическая природа, отношение к нагреванию, где содержится в организме, какие клетки продуцируют его, что происходит с бактериями под действием лизоцима, влияет ли он на вирусы? Комплемент, его химическая природа, отношение к нагреванию, из каких фракций состоит, где содержится в организме; основные пути активации комплемента; какое участие принимает в реакциях иммунитета; что происходит с бактериями при действии комплемента; укажите животное, которое используется для получения комплемента; при какой температуре и в течение какого времени можно разрушить (инактивировать) комплемент. Как называется сыворотка крови, прогретая при таком режиме? Приобретённый иммунитет, его характеристика: видовой или индивидуальный, специфический или неспецифический, передаётся ли по наследству, функция какой системы (ткани) лежит в основе формирования приобретённого иммунитета?
ЗАДАЧА. В семье заболел дифтерией ребенок Валерий, 3-х лет. Другие члены семьи не заболели, причём мать переболела дифтерией в детстве, а отец был привит дифтерийным анатоксином. Старшая сестра Наташа не была привита дифтерийным анатоксином из-за медицинских противопоказаний, поэтому ей пришлось провести экстренную профилактику с помощью противодифтерийной антитоксической сыворотки. Младший брат, Виталий, 3-х месяцев, не заболел, хотя ничем не был привит. В доме есть кошка и собака, они не заболели. Назовите для каждого из членов семьи и для животных вид иммунитета, благодаря которому они не заболели.
Что такое антиген? Характеристика полноценных антигенов. Какие вещества могут быть антигенами? Как называется способность антигенов индуцировать образование и накопление антител и иммунных лимфоцитов? Вступать с антителами в специфическое взаимодействие? Как называются антигены, обладающие обоими этими признаками? Как называются антигены, обладающие одним (каким?) из этих признаков? Структура антигена. Как называется часть молекулы антигена, определяющая его специфичность? Назовите известные вам антигены. Антигенная структура микробной клетки. Жгутиковый антиген, локализация, буквенное обозначение, природа, отношение к температуре, способ получения. Соматический антиген, его локализация, буквенное обозначение, химическая природа, отношение к температуре, способы получения. Для чего применяются антигены бактерий? Что такое «химическая вакцина»? Что такое протективный антиген? Продукты жизнедеятельности микробной клетки как антигены. Анатоксин, его свойства, получение, применение. Видоспецифические, типоспецифические и группоспецифические антигены микробов, их практическое значение для идентификации микробов. Гетероантигены. Методика приготовления антигена из эритроцитов. Антигены организма человека, аутоантигены, изоантигены.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
Составьте схему «Классификация иммунитета», заполните таблицу «Факторы неспецифической защиты организма».
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
I. Изучение факторов врождённого иммунитета.
1. Фагоцитоз.
Цель опыта: Определить фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови.
Ход опыта: описать.
Результат: подсчитать, зарисовать, отметить на рисунке стрелками стадии фагоцитоза.
Вывод: сформулировать.
2. Незавершённый фагоцитоз. Промикроскопировать и зарисовать мазок из гноя больного гонореей.
3. Лизоцим. Цель опыта: определить, обладает ли лизоцимной активностью сыворотка крови. Ход исследования записать в тетрадь, учесть результат и сделать вывод.
II. Антигены.
1. Приготовление антигена из культуры кишечной палочки. Приготовить взвесь культуры в физиологическом растворе, инактивировать на водяной бане, проверить на стерильность путём посева на скошенный агар. Стандартизировать с помощью оптического стандарта мутности.
2. Приготовление дифтерийного анатоксина. Рассчитать количество формалина, необходимое для того, чтобы получить 0,4% его концентрацию в 10 мл дифтерийного токсина. Добавить формалин и смесь поставить в термостат.
ЗАНЯТИЕ 15
АНТИТЕЛА. РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА: РЕАКЦИЯ
НЕЙТРАЛИЗАЦИИ ТОКСИНОВ АНТИТОКСИНАМИ,
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ, РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ
Раздел «Иммунитет» - важнейший в нашем курсе. Успешное освоение этого раздела возможно только при систематическом и последовательном изучении всех его тем. Понятие об антигенах и антителах, о структурных основах специфичности приобретённого иммунитета, процессе иммуногенеза необходимо для понимания следующих разделов: реакции иммунитета, их использование для диагностики и для специфической профилактики и терапии.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать:
- антитела, их свойства, строение, структурные основы специфичности; процесс антителогенеза;
- реакции иммунитета, механизм, ингредиенты, методы постановки, практическое применение.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо знать структуру простых и сложных белков, структуру иммуноглобулинов (биохимия), клетки крови и органов иммунной системы (гистология); резус–фактор и антитела к нему (физиология).
Цель занятия
1. Изучить строение и функционирование иммунной системы.
2. Изучить специфические формы иммунного ответа: клеточный и гуморальный ответы, иммунологическая память, иммунологическая толерантность.
3. Выработать чёткое преставление об антителах, их строении, классах иммуноглобулинов, их роли.
4. Изучить механизмы взаимодействия антиген-антитело: принципы и методы постановки реакций агглютинации и преципитации.
5. Научиться интерпретировать результаты серологических исследований.
План изучения темы
1. Иммунная система организма. Иммуногенез.
2. Антитела, их свойства, строение. Получение иммунных сывороток.
3. Реакции иммунитета.
Рекомендуется изучить тему по учебнику, затем по конспекту лекций и по «Руководству к лабораторным занятиям». Разобрать схему «Иммунная система». Прочитать план предстоящего занятия, ответить на контрольные вопросы, решить задачи.
После изучения темы студент должен уметь
1. Поставить ориентировочную реакцию агглютинации на стекле, реакцию кольцепреципитации в пробирках.
2. Учесть готовый результат развёрнутой реакции агглютинации в пробирках; учесть и оценить реакцию преципитации в агаре.
Контрольные вопросы
Какая ткань составляет иммунную систему организма? Укажите центральные и периферические органы иммуногенеза у человека и их функции. Опишите процесс формирования гуморального и клеточного иммунного ответа. Назовите классы лимфоцитов, от которых зависит механизм иммунитета: гуморальный и клеточный. Укажите: клетки, которые в процессе антителогенеза осуществляют захват, переваривание и презентацию антигена; клетки, взаимодействующие при формировании гуморального иммунитета, клеточного иммунитета; клетки, которые трансформируются и превращаются в плазмоциты, продуцирующие антитела; клетки, стимулирующие этот процесс; клетки, которые угнетают иммунный ответ; клетки, которые убивают опухолевые и заражённые вирусом клетки. Цитоки-
ны – определение понятия, виды. Антигены главного комплекса гистосовместимости (MHC), их роль в формировании иммунного ответа, в реакции отторжения трансплантата. Классы MHC, их характеристика. Антитела – определение понятия, основные свойства. Как получить иммунную сыворотку? Как получить сыворотку, которая нейтрализовала бы столбнячный токсин? Против каких антигенов образуются антитоксины, агглютинины, преципитины, бактериолизины, гемолизины, антилимфоцитарные антитела? Какие антитела образуются при введении в организм дифтерийного анатоксина? Дифтерийных бактерий? Где содержатся антитела в организме? Что такое титр антител? Химическая природа антител. Структура иммуноглобулина (начертить схему). Что такое активный центр иммуноглобулина? Перечислите классы иммуноглобулинов, значение в организме. Укажите класс иммуноглобулинов, способных проникать через плаценту. С какими структурами иммуноглобулинов связана способность соединяться с антигеном, эффекторные функции? Динамика накопления антител. Вторичный иммунный ответ, его особенности. Что такое реакции иммунитета? Условия протекания реакций иммунитета. Перечислите группы реакций иммунитета. Что такое чувствительность и специфичность иммунологических реакций? Какие реакции иммунитета происходят между токсином и антитоксинами? Как определяется и в каких единицах выражается биологическая активность антитоксических сывороток? Обнаружение токсигенности бактерий методом преципитации в агаре: как ставится реакция, что является антигеном? Антителами? Что происходит между ними? Что появляется при положительной реакции?
ЗАДАЧА. Подставьте вместо пропущенных слов «анатоксин» или «антитоксин»: … является антигеном; ... является антителом; … создаёт при введении в организм активный иммунитет; … создаёт при введении в организм пассивный иммунитет, … получают путём иммунизации животных; … получают из токсина при воздействии формалина и тепла; … нейтрализует токсин; … вызывает в организме образование антител.
Реакция агглютинации: что такое агглютинация, что является антигеном, что – антителами; две фазы реакции; методы постановки; какие контроли ставят и для чего? Реакция агглютинации на стекле: необходимые ингредиенты, метод постановки; как выглядит положительная реакция; в чём преимущество реакции по сравнению с развёрнутой реакцией агглютинации и в чём её недостаток; в каком случае реакция агглютинации на стекле является ориентировочной, а в каком случае она даёт окончательный результат? Развёрнутая реакция агглютинации: необходимые ингредиенты, порядок постановки, необходимые контроли, учёт результатов. Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации: что служит антигеном в этой реакции, как его получают, механизм реакции. Реакция обратной непрямой гемагглютинации: что служит антигеном в этой реакции, как его получают, механизм реакции. Что такое эритроцитарный диагностикум? Что такое антительный эритроцитарный диагностикум? Методика постановки реакций. Реакция коагглютинации. Агглютинирующие сыворотки: что они содержат; как их получают, для чего применяются; что такое титр агглютинирующей сыворотки? В чём различия между поливалентными и моновалентными (монорецепторными) агглютинирующими сыворотками; почему при иммунизации кролика микробами одного вида получается сыворотка, содержащая антитела к нескольким антигенам? Какими способами можно получить монорецепторную сыворотку; что означает термин «адсорбированная агглютинирующая сыворотка»?
ЗАДАЧА. Получена агглютинирующая сыворотка путём иммунизации кролика бактериями с антигенной структурой 1, 3, 4. Как из этой сыворотки получить монорецепторную сыворотку против антигена 3? Что для этого требуются?
Моноколональные антитела и гибридомы: что это такое? Опишите последовательность действий для получения моноколональных антител, какие клетки соединяют для получения гибридом. Преимущество моноколональных антител; практическое применение. Реакция обнаружения неполных антител (реакция Кумбса): чем отличаются неполные антитела от полных; какое свойство антител используется для их обнаружения; какая диагностическая сыворотка для этого применяется? Реакция преципитации: что такое преципитация? Что служит антигеном? Как получить преципитирующую сыворотку? Что такое титр преципитирующей сыворотки? Две фазы реакции, какими по физическому состоянию должны быть ингредиенты реакции? Варианты постановки реакции: в жидкой среде, в геле, с использованием электрофореза. Реакция флоккуляции. Практическое применение реакций преципитации.
ЗАДАЧА. На одежде человека, подозреваемого в убийстве, обнаружено пятно крови. С помощью какой реакции можно определить, человеческая ли это кровь; что здесь будет антигеном и что – антителами; какой диагностический препарат нужно иметь в лаборатории для этой реакции; как он приготовлен?
ЗАДАЧА. Как при помощи реакции преципитации определить является ли доставленный для анализа образец мясом крупного рогатого скота или мясом лошади; какие необходимы для этого диагностические препараты?
Для чего практически применяются реакции иммунитета, какая основная особенность реакций иммунитета используется при этом, в каких двух направлениях применяются реакции иммунитета, какие диагностические препараты необходимо иметь при этом; что они содержат?
Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
Заполните таблицу «Реакции иммунитета» в отношении реакций, разбираемых в рамках данной темы.
Реакции иммунитета
|
Реакция иммунитета |
Антиген |
Антитело |
Способ постановки |
Применение |
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
Работу начать сразу с постановки развёрнутой реакции агглютинации, но в тетрадь записать позже (см. ниже).
1. Учёт посева предыдущего занятия. Посмотрите посев антигена, отметьте результат, сделайте вывод о стерильности приготовленного антигена.
2. Реакция агглютинации:
а) реакция агглютинации на стекле.
Цель опыта: определить, являются ли антитела иммунной сыворотки и антигены бактерий специфичными в отношении друг друга.
Материал: иммунная сыворотка, культура бактерий на скошенном агаре.
Ход опыта: описать.
Результат: нарисовать.
Вывод: сформулировать;
б) развёрнутая реакция агглютинации.
Цель опыта: определить титр агглютинирующей сыворотки.
Материал: агглютинирующая сыворотка, взвесь бактерий.
Ход опыта: начертить схему постановки реакции.
Результат: в конце занятия отметить, в каких пробирках произошла агглютинация.
Вывод: сформулировать.
в) реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации. Разобрать по таблице РНГА. Учесть демонстрационную реакцию, отметить титр сыворотки;
г) реакция Кумбса (определение неполных антител). Разобрать по таблице. Начертить схему реакции в тетради;
3. Реакция преципитации:
а) реакция преципитации с сывороточным антигеном.
Цель: определить видовую принадлежность сывороточного белка.
Материал: перечислить ингредиенты.
Ход опыта: начертить схему.
Результат: отметить, в какой пробирке произошла преципитация.
Вывод: сформулировать;
б) Определение токсигенности коринебактерий дифтерии в реакции преципитации в агаре (учёт демонстрационного посева).
Цель: определить, какие из исследуемых культур являются токсигенными.
Результат: изобразить в виде схематического рисунка. Отметить стрелками токсигенные культуры.
4. Диагностические препараты. Посмотреть диагностикумы и диагностические сыворотки. Провести разбор препаратов по схеме: что содержит препарат (антиген, антитела), как приготовлен, для чего применяется, что можно выявить с помощью этого препарата, как дозируется (титр)?
ЗАНЯТИЕ 16
РЕАКЦИЯ ИММУННОГО ЛИЗИСА (ИММУННОГО БАКТЕРИОЛИЗА,
ИММУННОГО ГЕМОЛИЗА). РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ
КОМПЛЕМЕНТА. РЕАКЦИИ С МЕЧЕНЫМИ КОМПОНЕНТАМИ:
ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИЯ (РИФ), ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ
АНАЛИЗ (ИФА), ИММУНОБЛОТТИНГ, РАДИОИММУННЫЙ
АНАЛИЗ (РИА), ИММУННАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ (ИЭМ)
На данном занятии изучаются реакции иммунитета с участием комплемента и реакции иммунитета с мечеными компонентами (меченые антигены или антитела). Необходимо продумать механизмы и схемы постановки этих реакций. В последние годы перечисленные реакции широко используются для диагностики инфекционных заболеваний и вытесняют традиционные методы (агглютинации, преципитации).
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать о каждой из реакций:
- ингредиенты;
- механизм реакции;
- методы и схемы постановки;
- практическое применение;
- диагностические препараты.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала необходимо восстановить знания, полученные на предыдущих двух занятиях: комплемент и пути его активации; антигены и антитела; механизмы реакций иммунитета.
Цель занятия
1. Изучить механизм и методы постановки реакции иммунного бактериолиза и иммунного гемолиза.
2. Изучить механизм и методы постановки реакции связывания комплемента (РСК).
3. Изучить механизм и методы постановки реакции иммунофлюоресценции (РИФ).
4. Изучить механизм и методы постановки реакций иммуноферментного анализа (ИФА), радиоиммунного анализа (РИА), иммуноблоттинга.
5. Изучить механизм и методы постановки реакции иммунной электронной микроскопии (ИЭМ).
6. Научиться интерпретировать результаты серологических исследований.
План изучения темы
1. Реакция иммунного бактериолиза.
2. Реакция иммунного гемолиза.
3. Реакция связывания комплемента.
4. Реакция с мечеными компонентами: РИФ, ИФА, РИА. ИЭМ, иммуноблоттинг.
5. Реакции иммобилизации.
После изучения темы студент должен уметь
1. Поставить РСК с готовыми ингредиентами по схеме, учесть и интерпретировать её результат.
2. Учесть и оценить результаты РИФ.
3. Учесть и оценить результаты ИФА.
4. Учесть и оценить результаты иммуноблоттинга.
Дополнительный материал к занятию
Реакция локального гемолиза в геле
Реакция предложена Н. Йерне в 1963 г., её применяют для подсчета клеток-антителопродуцентов. Клетки, продуцирующие антитела (например, плазмоциты селезёнки, после иммунизации животного эритроцитами барана), вносят вместе с эритроцитами барана в гель (агар). Затем в реакционную систему вносят комплемент (наслаивая его на агар) и наблюдают образование зон гемолиза вокруг каждой клетки, образующей антитела к эритроцитам барана. Метод получил распространение во многих областях экспериментальной иммунологии, так как даёт возможность оценить образование антител на уровне отдельных тканей и органов и клеточных популяций иммунной системы после различных воздействий.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
ИФА – это выявление антигенов (или антител) с помощью соответствующих им антител (антигенов), конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, β-галактозидазой или щелочной фосфатазой).
Наиболее распространён твердофазный ИФА, когда один из компонентов иммунной реакции (антигены или антитела) сорбирован на твёрдом носителе, например, в лунках пластиковой микропланшетки из полистирола. Для определения антител в лунки с сорбированным антигеном последовательно добавляют:
- сыворотку крови больного,
- антиглобулиновую сыворотку, меченую ферментом,
- смесь растворов субстрата для фермента и хромогена.
Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путём тщательного промывания. При положительном результате изменяется окраска раствора хромогена в жёлто-коричневый цвет (при использовании пероксидазы) или жёлто-зелёный цвет (при использовании фосфатазы).
Если необходимо определить в исследуемом материале антиген, тогда в лунку с сорбированными антителами вносят исследуемый материал, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, и смесь растворов субстрата для фермента и хромогена.
Для постановки ИФА выпускаются специальные тест-системы с набором всех необходимых ингредиентов.
К настоящему времени созданы многочисленные модификации базовой методики ИФА.
Конкурентные методы ИФА: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки. Этот тест используется для определения количества антигена в исследуемом материале.
Сэндвич-ИФА (метод двойных антител для определения антигена): фиксированные на твёрдой фазе антитела инкубируют с анализируемым антигеном. После отмывания добавляют избыток меченых антител, специфичных к тому же антигену. Несвязавшиеся антитела отмывают. Продукт ферментативной реакции образуется в количествах, пропорциональных количеству связанного антигена. Можно использовать немеченые вторые антитела; о реакции в данном случае судят по связыванию энзим-меченых антител, специфичных по отношению к IgG (вторые антитела). В любом случае первые и вторые антитела должны принадлежать животным разных видов.
Измерение количества продуктов реакции ИФА проводят в автоматизированном варианте в приборах-ридерах с помощью спектрофотометра, по оптической плотности растворов в лунках при определённой длине волны.
Иммуноблоттинг
Иммуноблоттинг – (от англ. «blot» – пятно) – метод идентификации антигенов (или антител) с помощью известных сывороток (или антигенов). Представляет собой сочетание гель-электрофореза с ИФА. Первоначально бактериальные клетки или вирионы разрушают при помощи ультразвука, а затем методом электрофореза разделяют все антигены вируса или бактериальных клеток и получают коммерческий реагент на специальной нитроцеллюлозной плёнке. При постановке иммуноблоттинга на плёнку с известными антигенами наносится исследуемая сыворотка пациента. После инкубации и отмывания несвязавшихся антител, приступают к ИФА – на плёнку наносят антисыворотку к иммуноглобулинам человека, меченную ферментом, и хромогенный субстрат, изменяющий окраску при взаимодействии с ферментом. При наличии комплексов антиген-антитело-антисыворотка к иммуноглобулину-фермент на носителе появляются окрашенные пятна. Метод иммуноблоттинга позволяет отдельно обнаружить антитела на различные антигены возбудителя (например, при ВИЧ-инфекции иммуноблоттинг выявляет антитела на gp120, gp24 и другие антигены вируса).
Радиоиммунный анализ (РИА)
В основе метода лежит реакция антиген-антитело с применением метки антигена или антитела радионуклидом. В качестве метки используются 125I, 14C, 3H, 51Cr и другие радионуклиды. Образующиеся иммунные комплексы выделяют из системы и определяют их радиоактивность на счётчиках (β-излучение). Интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.
Широко распространён твёрдофазный вариант РИА с использованием меченых антител или антигенов, сорбированных в лунках полистироловых панелей.
РИА применяют для выявления антигенов микробов, вирусов, различных гормонов, ферментов, лекарственных веществ, иммуноглобулинов, а также других веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях 10-12–10-15 г/л.
Контрольные вопросы
Реакция иммунного бактериолиза: что это за реакция; что является антигеном, что – антителами, механизм реакции, методы постановки, практическое применение. Реакция иммунного гемолиза: необходимые ингредиенты, методика постановки; контроли, практическое применение. Реакция локального гемолиза в геле (реакция Йерне): принцип реакции, методика постановки, практическое применение. Реакция связывания комплемента: принцип реакции; что образуется при взаимодействии иммунной сыворотки со специфическим антигеном; что происходит с комплементом, если он присутствует при этом взаимодействии? Какова судьба комплемента в том случае, если между антигеном и антителами нет специфического сродства? С помощью какой реакции можно определить, что произошло с комплементом; почему используется именно эта реакция; каков видимый положительный результат РСК? Почему? Какое свойство комплемента используется в первой фазе РСК? Во второй фазе? Если конечным результатом РСК является гемолиз, что это означает – положительный или отрицательный результат? Объясните результаты: РСК+ + + +, РСК+ + +, РСК+ +, РСК+. Назовите ингредиенты первой системы РСК и ингредиенты второй системы РСК. Почему исследуемую сыворотку необходимо инактивировать? Как титруют комплемент? Гемолитическая сыворотка: что она содержит, как её получают, что такое титр и как его определяют? Какие животные используются для получения компонентов РСК? Методика постановки РСК на холоде. При постановке каких из перечисленных реакций необходимо участие комплемента: преципитации, флоккуляции, агглютинации, выявления неполных антител, иммунного бактериолиза, иммунного гемолиза, Йерне, РСК? Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – укажите последовательность событий при прямой реакции Кунса; необходимые ингредиенты. Что является антигеном, что – антителами, чем помечены антитела, как учитывается результат реакции, как выглядит положительный результат? Практическое применение – что можно определить с помощью этой реакции? Непрямая реакция иммунофлюоресценции – укажите последовательность событий при этой реакции, необходимые ингредиенты, что является антигеном, какие иммунные сыворотки применяются; практическое применение; преимущество непрямой РИФ по сравнению с прямой реакцией. Иммуноферментный анализ (ИФА) – принцип реакции; необходимые ингредиенты; укажите последовательность событий при постановке реакции с целью обнаружения антигена в исследуемом материале; необходимые ингредиенты; что происходит при положительном результате, как он выглядит? Укажите последовательность действий при постановке ИФА с целью обнаружения антител в исследуемой сыворотке; необходимые ингредиенты; что происходит при положительном результате? Иммуноблоттинг – принцип реакции; основные этапы; необходимые ингредиенты; как учитывается результат; преимущества реакции. Радиоиммунный анализ (РИА) – из каких основных этапов складывается реакция; чем помечены антитела или антигены, как учитывается результат? Иммуноэлектронная микроскопия – принцип метода; основные этапы; необходимые ингредиенты; чем помечены антитела; как учитывается результат реакции. Реакции иммобилизации – принцип метода, техника постановки, компоненты, учёт результатов.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
Заполните таблицу «Реакции иммунитета» в отношении реакций, разбираемых в рамках данной темы.
Реакции иммунитета
|
Реакция иммунитета |
Антиген |
Антитело |
Способ постановки |
Применение |
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
Работу начать сразу с постановки 1 фазы РСК, но в тетрадь записать позже (см. ниже).
1. Реакция иммунного гемолиза. Посмотреть демонстрационную реакцию иммунного гемолиза, зарисовать в виде схемы, объяснить результат в опытной и в контрольных пробирках.
2. Реакция связывания комплемента
а) разобрать РСК по таблице;
б) начертить в тетрадь схему постановки РСК в виде таблицы;
в) поставить вторую фазу РСК (первая фаза ставится в начале занятия);
г) разобрать диагностические препараты, необходимые для РСК;
д) учесть результат. Сформулировать вывод о наличии специфических антител в исследуемой сыворотке.
3. Реакция иммунофлюоресценции. Изучите таблицу, составьте в тетради схему постановки реакции; посмотрите диагностические сыворотки; определите – что содержит сыворотка, как приготовлена, для какой реакции (прямой или непрямой РИФ) она применяется. Посмотрите демонстрационный результат РИФ в люминесцентном микроскопе.
4. Иммуноферментный анализ (ИФА). Составьте в тетради схему постановки реакции в двух вариантах: для обнаружения антигена в исследуемом материале и для обнаружения антител в сыворотке. Ознакомьтесь с набором ингредиентов для диагностики ВИЧ-инфекции и гепатита В. Определите, что содержит каждый ингредиент и для чего он применяется.
5. Иммуноблоттинг. Составьте в тетради схему постановки реакции; посмотрите демонстрацию – результат реакции.
6. Радиоиммунный анализ (РИА). Составьте в тетради схему реакции.
7. Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ). Посмотрите демонстрацию – результат реакции, составьте в тетради схему реакции, укажите стрелками антиген (вирус) и меченые антитела.
ЗАНЯТИЕ 17
МЕДИЦИНСКИЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ, ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ
ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ
Вам предстоит изучить лечебно-профилактические и диагностические биологические препараты. Врачу любой специальности приходится применять на практике те или иные биологические препараты, а чтобы делать это грамотно и сознательно, необходимо усвоить общие принципы создания этих препаратов, их состав, применение.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен знать лечебно-профилактические и диагностические препараты: источники и методы получения, классификацию, практическое применение.
Исходный уровень знаний
Мы ещё раз подчеркиваем – раздел «Иммунитет» можно усвоить только путём систематического и последовательного изучения. Вспомните и повторите весь предыдущий материал по иммунитету: антигены и антитела; виды приобретённого иммунитета; получение иммунных сывороток; диагностические препараты.
Цель занятия
1. Научиться характеризовать диагностические и лечебно-профилактические препараты.
2. Научиться подбирать препараты для иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний.
План изучения темы
При изучении материала по лечебно-профилактическим и диагностическим препаратам важно понять и усвоить основные принципы, с тем чтобы уметь применять их для анализа конкретных препаратов. Чтобы научиться быстро проводить такой анализ, надо потренироваться в процессе самоподготовки. Повторите материал по конспекту лекций, разберите данную в этой лекции схему «Лечебно-профилактические и диагностические препараты», самостоятельно воспроизведите эту схему, не заглядывая в конспект. Затем выучите материал по этой теме по учебнику и по «Руководству к лабораторным занятиям». Выучите дополнительный материал по пособию. Ответьте на вопросы. Прочитайте план предстоящего занятия.
После изучения темы студент должен уметь
1. Дать характеристику диагностическим и лечебно-профилакти-
ческим препаратам.
2. Подобрать препараты для диагностики, профилактики и терапии инфекционных заболеваний.
Дополнительный материал к занятию
Диагностические препараты
К диагностическим препаратам относят:
диагностикумы (бактериальные, риккетсиозные, вирусные, грибковые, паразитарные);
антигены бактерий, вирусов;
диагностические иммунные сыворотки;
диагностические иммуноглобулины;
диагностические бактериофаги (используются для фагодиагностики и фаготипирования бактерий, что имеет эпидемиологическое значение);
аллергены.
Диагностические иммунобиологические препараты широко применяются для диагностики инфекционных болезней, аллергических состояний. Принцип действия диагностических препаратов основан на иммунологических реакциях (реакция антиген-антитело).
Лечебно-профилактические препараты
Вакцины. Вакцинами называются препараты, которые содержат антиген и применяются для создания в организме искусственного активного иммунитета. По природе содержащегося в них антигена и технике приготовления различают вакцины: 1) живые, 2) инактивированные (убитые),
3) химические, 4) анатоксины, 5) ассоциированные, 6) субъединичные,
7) генно-инженерные. По назначению и применению различают вакцины профилактические и лечебные. Вакцины и анатоксины с уменьшенной дозировкой антигена (БЦЖ–м, АД-м и другие) применяют для вакцинации и ревакцинации при наличии противопоказаний к прививкам. Живые вакцины применяются для профилактики следующих заболеваний: туберкулёз (БЦЖ и БЦЖ-м), чума, сыпной тиф (штамм ЕВ), туляремия, бруцеллёз, сибирская язва (СТИ), Ку-лихорадка (штамм М-44), грипп, корь, полиомиелит, эпидемический паротит, жёлтая лихорадка (штамм 17-Д). Инактивированные вакцины применяются для профилактики следующих заболеваний: полиомиелит, холера, брюшной тиф, лептоспироз, коклюш, сыпной тиф, бешенство (антирабическая культуральная вакцина), гепатит А, клещевой энцефалит, грипп, герпес. Химические вакцины, в отличие от живых и убитых, не содержат микробных тел. Они содержат наиболее иммуногенные антигены, извлечённые тем или иным способом из микробных клеток, преимущественно химическими методами. К ним относятся вакцины: брюшнотифозная (содержит 0-антиген бактерий брюшного тифа, адсорбированный на гидроокиси алюминия), менингококковая (содержит капсульный полисахарид менингококка серогруппы А, В), холерная. Вакцины с искусственным адъювантом создаются на основе композиции естественных антигенов и синтетических носителей (гриппозная вакцина с полиоксидонием – Гриппол). Рекомбинантные вакцины – это препараты, полученные в результате генной инженерии (например, дрожжевая рекомбинантная вакцина против гепатита В содержит HBs-антиген, который синтезирован рекомбинантной дрожжевой клеткой). Анатоксины – препараты, полученные из экзотоксинов путём обработки формалином и теплом. Анатоксины: стафилококковый нативный, стафилококковый адсорбированный, холероген-анатоксин, дифтерийный адсорбированный (АД,
АД-м), дифтерийно-столбнячный (АДС, АДС–м), тетра-анатоксин (ботулинический типов А, В, Е, столбнячный), трианатоксин (ботулинический А, В, Е), секстаанатоксин (анатоксины C. perfringens, C. novyi, ботулинический типов А, В, Е, столбнячный). Ассоциированные (комплексные) вакцины содержат разные по своей природе антигены. Ассоциированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС) содержит инактивированную или химическую коклюшную вакцину, дифтерийный и столбнячный анатоксины, адсорбированные на гидроокиси алюминия. Живая сухая комбинированная сыпнотифозная вакцина Е (ЖСКВ–Е) содержит высушенную живую культуру риккетсий Провачека авирулентного штамма Е в смеси с растворимым антигеном вирулентного штамма риккетсий. Холерная вакцина содержит холероген-анатоксин и О-антиген холерных вибрионов. Вакцина MMR содержит антигены возбудителей кори, эпидемического паротита и краснухи.
Лечебные вакцины. Для лечебных целей применяют вакцины при некоторых хронических и вяло протекающих бактериальных и вирусных заболеваниях: бруцеллёзе (инактивированная вакцина), хронической гонорее (инактивированная вакцина), герпесе (герпетическая инактивированная вакцина), стафилококковых инфекциях (стафилококковый антифагин, стафилококковая вакцина), протейной инфекции, инфекциях, вызванных условно-патогенными микроорганизмами. Вакцины применяются для лечения соматических заболеваний различной этиологии (рассеянный склероз, диабет, наркомания и др.), а также онкологических заболеваний (БЦЖ («Имурон») – для лечения рака мочевого пузыря).
Однако все перечисленные вакцины имеют недостатки: не всегда обеспечивают полноценный иммунитет, не гарантируют полной безопасности для пациентов, так как часто содержат балластные вещества, которые могут быть причиной аллергических реакций. Поэтому в настоящее время разрабатываются технологии получения новых вакцин 3-го поколения, лишённых этих недостатков. Для получения таких вакцин используются следующие направления.
1. Синтетические (пептидные) вакцины. К макромолекулярному соединению (белок, олигосахарид, высокомолекулярные электролиты – полиионы и др.), обеспечивающему сильный иммунный стимул, присоединяются искусственно синтезированные или полученные из микробных клеток антигенные детерминанты. Возможно присоединение нескольких детерминант (эпитопов) разных возбудителей. Следовательно, одна такая вакцина может обеспечить выраженный протективный иммунитет против нескольких заболеваний
2. Генно-инженерные вакцины. Гены возбудителей, ответственные за синтез протективных антигенов, выделяют из их хромосом (или синтезируют) и вводят в другие микроорганизмы. В дальнейшем или выделяют нужные антигены, или вводят в организм невирулентные носители антигенов в качестве вакцин.
3. Антиидиотипические вакцины. Используют антиидиотипические антитела 2-го поколения, активные центры которых представляют собой копию антигенной детерминанты (эпитопа).
4. ДНК-вакцины.
5. Вакцины, содержащие продукты генов главного комплекса гистосовместимости.
6. Растительные вакцины.
7. Мукозальные вакцины.
8. Микрокапсулированные вакцины.
Лечебно-профилактические сыворотки содержат антитела и предназначены для создания в организме искусственного пассивного иммунитета. По характеру содержащихся в них антител сыворотки могут быть разделены на антитоксические, антимикробные и противовирусные. Антитоксические сыворотки – гетерологичные (лошадиные): противостолбнячная, противоботулинические (моновалентные типов А, В, С, Е и поливалентная), противодифтерийная, противогангренозные; гомологичные (донорские): антистафилококковая донорская плазма, антисинегнойная донорская плазма, иммуноглобулин противостафилококковый донорский, иммуноглобулин противостолбнячный донорский. Антимикробные иммуноглобулины (гетерологичные): противосибиреязвенный, лептоспирозный, антирабический (против бешенства), против клещевого энцефалита, японского энцефалита, против лихорадки Эбола; гомологичные (донорские) – нормальный человеческий иммуноглобулин (противокоревой), противопротейная донорская плазма, противогриппозный донорский гамма-глобулин.
Бактериофаги – препараты, в которых содержатся вирусы бактерий, способные лизировать и инактивировать бактерии. Их применяют для профилактики и лечения ряда бактериальных инфекций (брюшной тиф, дизентерия, холера, гнойные инфекции). Эти препараты также назначаются с профилактической целью контактным лицам в очагах. Лечебный и профилактический эффект фагов умеренный, поэтому их применяют в комплексе с другими препаратами.
Пробиотики – живые микроорганизмы и вещества микробного происхождения, оказывающие при естественном способе введения позитивные эффекты на физиологические, биохимические и иммунные реакции организма хозяина через стабилизацию и оптимизацию функции его нормальной микрофлоры. Пробиотики получают путём выращивания бактерий на искусственных питательных средах, концентрирования, сушки, стандартизации и изготовления готовых форм в виде порошка или таблеток. В качестве бактерий в пробиотиках используют различные виды бифидумбактерий, лактобактерий и другие микроорганизмы и их комбинации в различных процентных концентрациях (бифидумбактерин, линекс, лактобактерин, биобактон, гастрофарм, колибактерин, бификол, споробактерин, бактисубтил и др.).
Пребиотики – препараты немикробного происхождения, способные оказывать позитивный эффект путём селективной стимуляции роста или усиления метаболической активности нормальной микрофлоры кишечника. К ним относятся лактулоза (дюфалак, лактусан), парааминометилбензойная кислота (ПАМБА), лизоцим, пантотенат кальция, олигосахариды, галакто-олигосахариды. Перечисленные ингредиенты содержатся в молочных продуктах, кукурузных хлопьях, хлебе, бананах, горохе и т.д.
Синбиотики – препараты, полученные в результате рациональной комбинации пробиотиков и пребиотиков.
Иммуномодуляторы – группа иммунобиологических препаратов химической или биологической природы, способные модулировать (регулировать) иммунные реакции (тималин, тактивин, интерфероны, миелопид, интерлейкины, левамизол, нуклеинат натрия, ликопид, полиоксидоний и др.).
Контрольные вопросы
На чём основано практическое применение учения об иммунитете для профилактики и терапии? Что такое вакцина? Виды вакцин. Понятие о живых, инактивированных (убитых), химических, ассоциированных вакцинах, об анатоксинах. Методика получения инактивированных вакцин, примеры. Живые вакцины – характеристика вакцинных штаммов, методы получения, особенности применения, примеры. Химические вакцины – определение понятия, примеры. Анатоксины: методика получения, примеры. Какое преимущество имеют сорбированные вакцины и анатоксины перед нативными? Понятие об адъювантах. Объясните смысл лечебного применения вакцин и анатоксинов; при каких заболеваниях применяются лечебные вакцины? Ассоциированные вакцины – определение понятия, примеры. Характеристика вакцин 1, 2, 3-го поколений, преимущества и недостатки. Принципы получения вакцин 3-го поколения: синтетических, генно-инженерных, субъединичных, антиидиотипических. Лечебные сыворотки, их виды. Получение, очистка и титрование антитоксических сывороток (примеры). В каких единицах дозируются антитоксические сыворотки? Иммуноглобулины, их преимущество перед сыворотками. Методика получения, виды препаратов иммуноглобулинов в зависимости от источников получения. Примеры. Способ введения гетерологичных сывороток и иммуноглобулинов.
Диагностикумы. Бактериальные диагностикумы – способы получения, для чего применяются. Эритроцитарные диагностикумы (антигенсодержащие и антителосодержащие) – способы получения, для чего и в каких реакциях применяются. Антигены для реакции преципитации - характеристика, применение.
Диагностические сыворотки (агглютинирующие, преципитирующие, антитоксические) – способы получения, применение. Монорецепторные (адсорбированные) сыворотки – способ получения. Моноклональные антитела (сыворотки) – способ получения, преимущества.
ЗАДАЧА. Какой вид иммунитета создаётся при введении анатоксина (или вакцины) против брюшного тифа, или противостолбнячной сыворотки, или противосибиреязвенного гамма–глобулина?
ЗАДАЧА. Что содержит (антиген или антитело) и для чего применяется брюшнотифозный диагностикум? Агглютинирующая сыворотка дизентерийная Флекснер? Сыворотка против глобулинов человека (антиглобулиновая) меченая ФИТЦ?
Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
Составьте схему «Медицинские биологические препараты».
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Изучение лечебно-профилактических и диагностических биологических препаратов. Посмотреть препараты, прочитать этикетки, проанализировать каждый препарат по схеме: какой это препарат – лечебно-профилактический или диагностический; что содержит (антиген, антитело, аллерген); как приготовлен; если препарат лечебно-профилактический – какое действие оказывает на организм (формирование какого иммунитета вызывает); если препарат диагностический – что обнаруживает с помощью этого препарата; дозируется ли этот препарат и в каких единицах? Разбор препарата записать в тетрадь.
ЗАНЯТИЕ 18
ИТОГ ПО РАЗДЕЛУ «ИНФЕКЦИЯ И ИММУНИТЕТ»
На предстоящем занятии будет дана оценка вашим знаниям, навыкам и умениям по важнейшему разделу микробиологии. Подготовьтесь к этому занятию как можно лучше. От того, насколько вы сознательно изучите этот раздел, насколько хорошо вы поймете, глубоко и прочно усвоите учение об инфекции и иммунитете, зависит ваш успех по частной микробиологии.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студент должен ответить на все контрольные вопросы к итоговому занятию, быть готовым к выполнению практической задачи, то есть уметь правильно разбираться в биологических препаратах.
Исходный уровень знаний
Материал предыдущих занятий с 13 по 17.
Цель занятия
1. Систематизировать знания по инфекции и иммунитету.
2. Продемонстрировать овладение умениями, полученными при изучении раздела «Инфекция и иммунитет».
План изучения темы
Повторите весь материал по учебнику, по конспекту лекций, по «Руководству к лабораторным занятиям». Учтите при этом рекомендации к предыдущему занятию. Ответьте на контрольные вопросы к занятиям 13-17. Разберите биологические препараты, причем не пытайтесь выучить наизусть все имеющиеся на кафедре препараты –это невозможно и бесполезно, а усвойте общую схему и по этой схеме научитесь разбираться в каждом из них. Для этого нужно поупражняться (примерно так, как по математике при решении задач). На кафедре имеется набор биологических препаратов для подготовки студентов.
После изучения раздела студент должен уметь
1. Провести бактериологическое исследование трупа лабораторных
животных и на основании этого определить форму инфекционного процесса.
2. Оценить факторы врождённого иммунитета организма (гуморальные и клеточные).
3. Ставить, учитывать и интерпретировать результаты иммунологических реакций.
4. Давать характеристику диагностическим и лечебно-профилактическим препаратам.
5. Подбирать препараты для диагностики, профилактики и терапии инфекционных заболеваний.
Контрольные практические
задания по разделу «Инфекция и иммунитет»
Дайте характеристику медицинского иммунобиологического препарата по составу и применению, пользуясь схемой (см. предыдущее занятие).
Контрольные вопросы
(подробную расшифровку вопросов смотрите в соответствующих
занятиях (13-17))
Инфекция, инфекционный процесс, условия возникновения. Патогенность и вирулентность микробов. Микробные токсины. Формы инфекционного процесса. Смешанные инфекции. Внутрибольничные инфекции. Особенности вирусных инфекций. Иммунитет, определение понятия, виды иммунитета. Врождённый иммунитет. Фагоцитарная теория И.И. Мечникова. Система комплемента. Антигены. Антигенная структура бактерий и вирусов. Иммунная система организма. Механизм иммунного ответа. Регуляция иммунного ответа. Антигены гистосовместимости и их роль в формировании иммунитета. Антитела, свойства, строение, классы иммуноглобулинов. Полные и неполные антитела, методы обнаружения. Теория антителообразования. Местный иммунитет. Противовирусный иммунитет. Механизм соединения антитела с антигеном, реакции иммунитета. Виды антител. Моноклональные антитела. Реакция нейтрализации токсина антитоксином. Реакция преципитации. Реакция агглютинации. РНГА и РОНГА. Реакции с применением меченых антигенов и антител: РИФ, ИФА, РИА, иммуноблоттинг. Реакции иммунного гемолиза. РСК. Применение реакций иммунитета при вирусных заболеваниях. Методы оценки иммунного статуса организма. Роль медицинской микробиологии в осуществлении профилактики инфекционных заболеваний, лечебно-профилактические и диагностические биологические препараты. Вакцины, виды вакцин, получение. Живые вакцины. Анатоксины. Характеристика вакцин 1, 2, 3-го поколений. Принципы получения вакцин 3-го поколения (синтетических, генно-инженерных, антиидиотипических и др.). Антитоксические сыворотки. Методы профилактики и терапии токсинемических инфекций. Выявления гиперчувствительности замедленного типа. Аллергены, аллергические реакции. Практическое применение.
ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВАЖНЕЙШИХ
ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И
КЛИНИЧЕСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Методические указания к самостоятельной работе студента
при подготовке к практическим занятиям по частной микробиологии
Те разделы микробиологии, которые вы уже изучили (общая микробиология, учение об инфекции и иммунитете), являются необходимым этапом для формирования врачебного мышления при освоении курса частной (клинической) микробиологии, к которому вы приступаете. На практических занятиях по общей микробиологии и иммунологии вы овладели основными микроскопическими, микробиологическими и иммунологическими методами исследования. Полученные вами теоретические знания и практические навыки создали необходимую базу для успешной работы на практических занятиях по частной микробиологии, где вам предстоит, используя полученные знания и умения, самостоятельно ставить микробиологический диагноз инфекционных заболеваний, то есть выполнять врачебную функцию.
В процессе изучения этого итогового раздела медицинской микробиологии вам необходимо будет усвоить лабораторную диагностику бактериальных, вирусных и грибковых инфекций. Особенностью лабораторной микробиологической и иммунологической диагностики инфекционных заболеваний является то, что по результатам лабораторных исследований не устанавливается конкретная нозологическая форма, то есть название заболевания (это функция лечащего врача), а определяется этиологическая и патогенетическая роль выделенных из организма больных микробов. Лабораторными методами определяют также иммунологические сдвиги и аллергическое состояние организма, что даёт возможность выбора для врача в конкретной клинической обстановке эффективных иммунологических препаратов. Кроме того, изучение свойств выделенного возбудителя, в частности чувствительности его к химиотерапевтическим препаратам, даёт ориентировку лечащему врачу в выборе эффективных антимикробных препаратов для успешного лечения больного.
Таким образом, частная медицинская микробиология имеет прямое отношение к клинике и поэтому данный раздел называют еще клинической микробиологией.
Основной целью клинической микробиологии является определение этиологической роли микроба - возбудителя инфекционного заболевания и (или) иммунологических сдвигов в организме больного. Следовательно, основными задачами клинической микробиологии будут:
1) установить этиологическую и патогенетическую роль выделенных возбудителей;
2) определить характер и уровень иммунологических и аллергических сдвигов в организме больного;
3) обеспечить возможность выбора эффективных химиотерапевтических и иммунологических препаратов для лечения больного.
Решение этих задач обеспечивает возможность:
а) для врача-лечебника: постановку окончательного диагноза инфекционного заболевания и назначение наиболее эффективной, рациональной антимикробной терапии и иммунотерапии;
б) для врача-эпидемиолога: проведение эпидемиологического анализа с целью установления источника, путей передачи инфекции, выявления бактерионосителей, для предупреждения распространения инфекции, а также принятия решения о проведении специфической профилактики в определённых коллективах людей.
Успешная лабораторная диагностика инфекционных заболеваний возможна только при тесном взаимодействии и взаимопонимании лечащего врача и врача–микробиолога. Особенно большое значение имеет правильный выбор материала для исследования и условий транспортировки его в лабораторию, обеспечивающих сохранность живого возбудителя. Выбор материала определяется предварительным клиническим диагнозом заболевания и его стадией, а условия транспортировки – особенностями свойств возбудителя.
При взятии материала для лабораторного исследования от больных или бактерионосителей необходимо соблюдать определенные правила:
1) материал следует брать до применения антибиотиков или других химиотерапевтических препаратов;
2) забор материала производить с учётом стадии заболевания, патогенеза инфекционного процесса и наиболее вероятной локализации возбудителя;
3) материал нужно брать в достаточном количестве, соблюдая правила асептики, чтобы предупредить возможность загрязнения его микроорганизмами окружающей среды и нормальной микрофлоры организма человека;
4) исследуемый материал нужно доставить в лабораторию в возможно короткие сроки в стерильной посуде или в специальных контейнерах при соблюдении первоначальной температуры или в замороженном виде (в зависимости от свойств предполагаемого возбудителя);
5) любой материал, направляемый в лабораторию, должен сопровождаться направлением, в котором лечащий врач указывает фамилию, имя, отчество больного, вид материала, дату его взятия, предварительный клинический диагноз.
На практических занятиях по частной (клинической) микробиологии вы должны будете освоить основные функции врача-микробиолога и иммунолога, то есть самостоятельно провести все необходимые исследования для того, чтобы в зависимости от предварительного клинического диагноза, поступившего материала и запроса лечащего врача установить вид возбудителя или наличие в организме специфических антигенов, антител, наличие аллергической перестройки, определить иммунный статус больного и т.д.
Для выполнения этой работы вы будете пользоваться микробиологическими и иммунологическими методами исследования, усвоенными на предыдущих занятиях. Сюда относятся методы:
1) микроскопические (бактериоскопические, вирусоскопические);
2) микробиологические (бактериологические, микологические, вирусологические);
3) биологические или биопробы;
4) иммунологические (серологические, кожно-аллергические пробы, тесты для оценки иммунного статуса организма).
При подготовке к практическому занятию по частной микробиологии прежде всего необходимо изучить и запомнить характеристики возбудителей заболеваний. Студенты часто жалуются на то, что запомнить характеристики возбудителей трудно и на экзаменах они «путаются». Для того чтобы этого не произошло, рекомендуем вам усвоить общую схему (алгоритм) характеристики возбудителя. Сначала необходимо запомнить и потренироваться в правильном написании названия возбудителя по–латыни. Затем нужно дать характеристику его свойств по следующей схеме:
1) морфология: форма, взаимное расположение клеток в мазке, наличие спор, жгутиков, капсул, включений и других морфологических особенностей;
2) тинкториальные свойства, т.е. способность окрашиваться анилиновыми красителями, отношение к окраске по Граму, специальные способы окраски;
3) культуральные свойства: требовательность к питательным средам, наиболее употребительные питательные среды, температура выращивания, способ биологического окисления, характер роста на плотных и жидких питательных средах, внешний вид колоний и др.;
4) устойчивость во внешней среде: отношение к температуре, высушиванию, длительность сохранения в воде, почве, воздухе, другие особенности;
5) ферментативные свойства: способность расщеплять углеводы, белки, наличие биоваров;
6) антигенные свойства: соматические (О-антигены), жгутиковые (Н), поверхностные антигены и их характеристика, деление на серовары;
7) свойства патогенности: ферменты патогенности, капсула, адгезины, экзо- и эндотоксины и др.
В дальнейшем при изучении отдельных групп возбудителей, нужно найти и выделить общие свойства для каждой группы, с тем чтобы при характеристике отдельных возбудителей добавить в эту общую схему особенности данного возбудителя. Например: все энтеробактерии, возбудители кишечных инфекций, являются палочками средних размеров, в мазке располагаются беспорядочно, перитрихи (за исключением шигелл), грамотрицательны, но отличаются по ферментативным и антигенным свойствам. Все возбудители клостридиальных анаэробных инфекций – крупные грамположительные палочки, спорообразующие, перитрихи (за исключением Clostridium perfringens), не образуют капсул (за исключением Clostridium perfringens), анаэробы. Они отличаются по расположению спор, морфологии глубинных колоний и, что наиболее важно, по антигенной структуре токсинов и их действию на организм. Составление таких схем, где обобщаются свойства целых групп возбудителей, облегчает усвоение их свойств и ускоряет процесс самоподготовки. Если вы усвоите эту общую схему, вам останется только прибавить к ней особенности, касающиеся возбудителей конкретных заболеваний. Следует отметить, что изложенные здесь рекомендации можно использовать при характеристике возбудителей бактериальных инфекций. Остальные группы микроорганизмов (грибы, риккетсии, вирусы, простейшие) имеют свои особенности, которые будут изложены в соответствующих разделах. Изучив характеристику возбудителя, приступайте к составлению схемы исследования с учётом всех необходимых направлений и методов исследования для постановки микробиологического диагноза. На практическом занятии вы получите материал от больного и направление из лечебного учреждения, где сообщаются сведения о больном и предполагаемый диагноз. Учитывая полученный материал и сведения из направления, составьте схему исследования этого конкретного материала и приступайте к её осуществлению. Данные из направления и характеристику материала перепишите в «Журнал микробиологических исследований», схема которого приведена ниже. Сюда же вы будете вносить все полученные по ходу исследования результаты по дням, так как в большинстве случаев исследование материала будет продолжаться в течение нескольких занятий. После завершения исследования обобщите и проанализируйте все полученные данные и в соответствующей графе сформулируйте окончательный результат. Если вы проводите исследование по сокращённой схеме – внесите дополнения в графу «Примечания». При необходимости попросите консультацию преподавателя.
Кроме характеристики возбудителя, схемы микробиологических исследований материалов от больных на практических занятиях будут обсуждаться вопросы эпидемиологии, лечения и специфической профилактики всех изучаемых инфекционных заболеваний. Это вам необходимо иметь в виду при самостоятельной подготовке к практическому занятию, а на самом занятии пересмотреть и охарактеризовать препараты для диагностики, лечения и профилактики обсуждаемых инфекционных заболеваний (химиотерапевтические препараты, антибиотики, диагностические сыворотки, вакцины, аллергены, лечебные и профилактические сыворотки и др.).
Вы овладеете так необходимым для врача материалом по частной микробиологии, если будете выполнять практическую работу сознательно, то есть предварительно подготовившись дома по всем имеющимся источникам (лекции, учебники и т.д.), не надеясь выучить всё в последний день перед итоговым занятием или экзаменом. Настоящие, прочные знания можно получить только при последовательном систематическом изучении материала, когда теоретическая подготовка подкрепляется практической работой на занятиях.
ЖЕЛАЕМ ВАМ УСПЕХОВ!
ЗАНЯТИЕ 19
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КИШЕЧНЫХ
ИНФЕКЦИЙ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА
БРЮШНОГО ТИФА И ПАРАТИФОВ
Кишечные инфекции занимают важное место в инфекционной патологии человека. Возбудители кишечных инфекций относятся к семействам энтеробактерий, иерсиний и вибрионов. Среди них есть патогенные и условно-патогенные представители. В семействе энтеробактерий важнейшими представителями являются бактерии из родов Escherichia, Salmonella и Shigella (патогенные виды). В последние годы в этиологии кишечных инфекций увеличивается роль условно-патогенных бактерий других родов энтеробактерий. Основным методом микробиологической диагностики кишечных инфекций является бактериологический метод. Выделение чистой культуры и идентификация возбудителя позволяет наиболее достоверно диагностировать кишечные инфекции, так как клиническое течение кишечных заболеваний не всегда позволяет поставить правильный диагноз.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы вы должны знать виды возбудителей кишечных инфекций, общую характеристику энтеробактерий. морфологию и физиологию возбудителей брюшного тифа и паратифов; уметь написать их название по-латыни, знать принципы микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов.
Исходный уровень знаний
Из курса общей микробиологии вспомнить методы изучения ферментативной активности бактерий и их значение для идентификации микроорганизмов, состав и назначение дифференциально-диагностических и элективных сред, методику постановки иммунологических реакций.
Цель занятия
1. Ознакомить студентов с классификацией бактерий семейства Enterobacteriaceae и выработать у них представление о роли этих бактерий в возникновении острых кишечных инфекций.
2. Усвоить диагностику брюшного тифа и паратифов, брюшнотифозного бактерионосительства у человека.
План изучения темы
1. Цели и задачи клинической микробиологии, применяемые методы исследования.
2. Правила забора и транспортировки материалов для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний.
3. Общая характеристика бактерий кишечной группы.
4. Характеристика возбудителей брюшного тифа и паратифов.
5. Патогенез брюшного тифа.
6. Ранняя диагностика брюшного тифа.
7. Серологическая диагностика.
8. Диагностика брюшнотифозного носительства.
После изучения темы студент должен уметь
1. Поставить реакцию непрямой (пассивной) гемагглютинации для диагностики брюшного тифа и паратифов, учесть её результат и интерпретировать полученные данные.
2. Производить посев для выделения гемокультуры.
3. Производить посев испражнений для выявления брюшнотифозного бактерионосительства
ЖУРНАЛ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Поскольку Вы начинаете новый раздел микробиологии – клиническую микробиологию, то все записи будете вести в «Журнале микробиологических исследований». Поэтому вам необходимо оформить его по образцу, приведённому ниже. Объём журнала составляет 18-20 листов. Он может быть продолжением дневника, который вы вели на занятиях по общей микробиологии (в этом случае он начинается с новой страницы), или в отдельной тетради. Запись по каждому занятию должна быть удостоверена подписью преподавателя.
Левая сторона тетради Правая сторона тетради
|
Направление из |
Ход исследований |
Результат |
Примечания |
Дополнительная литература по разделу
«Возбудители кишечных инфекций»
1. Будагян Ф.Е. Пищевые токсикозы, токсикоинфекции и их профилактика / Ф.Е. Будагян. – М., 1972.
2. Бухарин О.В. Сальмонеллы и сальмонеллезы / О.В. Бухарин,
Ю.Д. Каган, А.Л. Бурмистров. – Екатеринбург: Медицина, 2000.
3. Бухарин О.В. Шигеллы и шигеллёзы / О.В. Бухарин, В.М. Бондаренко, В.В. Малеев. – Екатеринбург: Медицина, 2003.
4. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
5. Джавец Э. Руководство по медицинской микробиологии / Э. Джавец, Дж.Л. Мельник, Э.А. Эдельберг. - М., 1982: Т.2.
6. Зубков М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. – М., 2002.
7. Иванов В.П. Кампилобактеры и кампилобактериозы / В.П. Иванов, А.Г. Бойцов, А.А. Порин. - СПб.: Медицина, 1995.
8. Йоргенсен Дж.Х. Микробиологический справочник для клиницистов / Дж.Х. Йоргенсен, М.А. Пфаллер. - М.: Медицина, 2006.
9. Маев И.В. Основы эрадикационной терапии / И.В. Маев,
Е.С. Вьючнова, Е.Г. Лебедева. - М.: Медицина, 2000.
10. Мари П.Р. Клиническая микробиология / П.Р. Марри, И.Р. Шей. - М.: Медицина, 2006.
11. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
12. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
13. Поздеев О.К. Энтеробактерии: руководство для врачей / О.К. Поздеев, Р.В. Федоров. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.
14. Руководство по кишечным инфекциям / под ред. И. К. Мусабае-
ва. - Ташкент, 1980.
15. Скала Л.З. Практические аспекты современной клинической микробиологии / Л.З. Скала, С.В. Сидоренко, А.Г. Нехорошева. – М.: ПЛИВА-Лахема, 2004.
16. Страчунский Л.С. Современные методы клинической микробиологии / Л.С. Страчунский. - Смоленск, 2003.
17. Чайка Н.А. Кампилобактериоз / Н.А. Чайка, Л.Б. Хазенсон,
Ж.П. Бутиллер. - М., 1988.
18. Тудор В. Оспа. Холера / В. Тудор, И. Страти. - Будапешт, 1981: Ч. 2.
19. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
20. Энтеробактерии: руководство / под ред. В.И. Покровского. - М., 1985.
Контрольные вопросы
Предмет и задачи частной (клинической) микробиологии. Характеристика методов исследования. Правила забора материалов для исследования от больных и бактерионосителей. Правила транспортировки материалов в лабораторию. Классификация семейства энтеробактерий. Общая характеристика бактерий кишечной группы. Эволюционные связи бактерий кишечной группы. Требовательность к питательным средам. Дифференциально-диагностические среды, применяемые для исследования при кишечных инфекциях: состав, назначение, характер изменений при росте различных представителей. Какие из бактерий кишечной группы подвижны и неподвижны? Род Salmonella: характеристика, классификация. Написать по-латыни названия возбудителей брюшного тифа и паратифов. Морфология, отношение к окраске по Граму, факторы патогенности возбудителей брюшного тифа и паратифов. По какому свойству отличаются возбудители брюшного тифа и паратифов от кишечной палочки при росте на средах Эндо, Плоскирева, Левина? Патогенез брюшного тифа. Обосновать методы диагностики брюшного тифа и паратифов в разные сроки заболевания. Методы ранней диагностики брюшного тифа. Что такое гемокультура? Методика выделения гемокультуры: материал для исследования, откуда его берут и в каком количестве. На какие среды производится посев, какой должен быть объём питательной среды? Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов: материал для исследования, что требуется обнаружить в этом материале. Методика постановки реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА). Какие антигены нужно взять и почему? Что представляют собой эритроцитарные диагностикумы? В какие сроки заболевания РНГА со специфическими антигенами становится положительной? Как оцениваются результаты РНГА? Перечислите методы исследования на брюшнотифозное бактерионосительство. Когда необходимо производить эти исследования? Что такое копрокультура? Что такое уринокультура?
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Написать по–латыни названия родов семейства кишечных бактерий и названия возбудителей брюшного тифа и паратифов.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Постановка реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации.
Цель: определить наличие антител и их титр к антигенам возбудителей брюшного тифа и паратифов. Каждый студент ставит реакцию с одним из 2-х диагностикумов – брюшного тифа и паратифа В. В лунках пластмассовых планшетов приготовьте последовательные двукратные разведения сыворотки больного (исходное разведение 1:50) от 1:100 до 1:1600 в объёме 0,5 мл. В последнюю (контрольную) лунку сыворотка не вносится. Затем в каждую лунку (включая контрольную) добавьте по 0,25 мл соответствующего эритроцитарного диагностикума. Планшеты поставьте в термостат на 2 часа. Сопроводительную записку перепишите в журнал. Через 2 часа проведите учёт результатов. Посмотрите планшеты РНГА, определите титр антител с каждым из диагностикумов и сделайте вывод: с каким из диагностикумов РНГА идёт до диагностического титра. Результат запишите в виде таблицы:
|
Пробирки |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
Контроль |
|
Разведения сыворотки |
1:10 |
1: 20 |
1: 40 |
1:80 |
1: 160 |
1: 320 |
1: 540 |
1: 1280 |
|
|
Диагностикум: брюшнотифозный |
|||||||||
|
паратифозный В |
|||||||||
|
Результат реакции |
Положительный результат обозначьте знаком «+», отрицательный
«-». В графе «Результат» укажите: с каким диагностикумом и до какого титра оказалась положительной РНГА.
2. Изучение морфологии возбудителей брюшного тифа и паратифов. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенные по Граму препараты из чистых культур возбудителей брюшного тифа и паратифов. Рисунки подпишите по-латыни.
3. Изучение ферментативных свойств возбудителей брюшного тифа и паратифов. Посмотрите таблицу «Ферментативные свойства бактерий кишечной группы» и демонстрационные «цветные» ряды. Найдите различия ферментативных свойств у разных видов и опишите их в дневнике.
4. Усвоение методов микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов. Разобрать устно, а затем написать в дневнике схему микробиологической диагностики брюшного тифа и паратифов в зависимости от сроков заболевания.
5. Ранняя диагностика. Посеять кровь больного на гемокультуру. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и внесите её в журнал. Сделайте посев 10 мл крови из шприца во флакон со 100 мл среды Раппопорт с соблюдением правил асептики. Флакон с посевом поместите в термостат.
В графе «Ход исследования» отметьте 1-й день и опишите проделанную работу.
6. Для исследования на бактерионосительство посеять испражнения обследуемого на копрокультуру. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и перепишите её в журнал. Произведите посев испражнений на чашку со средой Левина петлёй штрихами для получения изолированных колоний. Чашки поставьте в термостат. Запишите проделанную работу в графе «Ход исследования».
ЗАНЯТИЕ 20
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРЮШНОГО ТИФА, ПАРАТИФОВ, БАКТЕРИАЛЬНОЙ ДИЗЕНТЕРИИ, ЭШЕРИХИОЗОВ
Вы продолжаете изучение возбудителей семейства энтеробактерий. У представителей этого семейства есть общие свойства, и в то же время каждый вид возбудителя обладает особенными признаками, отличающими его от остальных. Точно так же микробиологическая диагностика вызываемых ими заболеваний и, в частности, ход исследования по дням во многом сходны, но имеют свои особенности. Поэтому рекомендуется учить материал не фрагментно, по «кусочкам», а каждый раз предварительно посмотреть и повторить пройденное. Тогда у вас сложится представление о всей группе возбудителей и вызываемых ими заболеваниях в целом и вы лучше и быстрее освоите особенности каждого возбудителя, не смешивая его с другими.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы Вы должны знать: латинские названия и характеристику возбудителей бактериальной дизентерии, эшерихиозов: классификацию последних по категориям, микробиологическую диагностику этих заболеваний, ответить на все контрольные вопросы.
Исходный уровень знаний
Антигенная структура бактериальных клеток, характеристика бактериальных антигенов, материал предыдущего занятия.
Цель занятия
1. Усвоить диагностику брюшного тифа и паратифов, брюшнотифозного бактерионосительства у человека.
2. Усвоить диагностику бактериальной дизентерии у человека.
План изучения темы
1. Ход исследования на гемокультуру (2-й день), копрокультуру
(2-й день).
2. Антигенная структура и классификация сальмонелл.
3. Характеристика и классификация шигелл.
4. Патогенез бактериальной дизентерии, материал для исследования, начало исследования.
Изучите новый материал по учебнику и конспекту лекций, начиная с общей характеристики энтеробактерий, а затем по руководству. Обратите внимание на таблицы ферментативной активности сальмонелл и шигелл, выделите особенности отдельных видов. Поскольку в основу видовой идентификации сальмонелл положена их антигенная структура, нужно запомнить антигены сальмонелл и последовательность их определения. Прочитайте в журнале записи предыдущего занятия и материал предстоящего занятия по пособию. Ответьте на контрольные вопросы, решите задачи.
После изучения темы студент должен уметь
1. Учесть и оценить результаты посева крови на среде Раппопорт или желчном бульоне.
2. Учесть и оценить результаты посева испражнений на среде Левина. Изучить морфо-тинкториальные свойства и проверить чистоту выделенной копрокультуры при диагностике брюшнотифозного бактерионосительства.
3. Учесть и оценить результаты РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом для диагностики брюшнотифозного бактерионосительства.
4. Производить посев испражнений для выделения возбудителей бактериальной дизентерии.
5. Производить посев испражнений для выделения возбудителей кишечной коли-инфекции.
Контрольные вопросы
Антигенная структура сальмонелл, локализация антигенов в бактериальной клетке. Классификация сальмонелл по антигенной структуре (схема Кауфмана–Уайта). Какие антигены являются родоспецифическими и какие являются видоспецифическими? Состав и применение желчного бульона и среды Раппопорт. Чем отличается на среде Раппопорт рост брюшнотифозной палочки от паратифозных? Среды Гисса, селенитовые среды, их состав и применение. Состав среды Олькеницкого, методика посева на среду и оценка результатов посева. Методы исследования на брюшнотифозное бактерионосительство. Схема исследования (по дням) при выделении копрокультуры. Принцип и методика постановки реакции Vi–гемагглютинации. Методика взятия материала, схема исследования для выделения возбудителей из дуоденального содержимого, мочи. Характеристика микроорганизмов рода Shigella. Перечислить названия видов (по-латыни). Классификация шигелл. Антигенная структура и токсинообразование у шигелл. Питательные среды для выделения чистой культуры шигелл. Характеристика иммунитета при бактериальной дизентерии. С какой целью материал от больного дизентерией помещают в консервант?
ЗАДАЧА 1. Через 3 месяца после выздоровления от брюшного тифа реконвалесцента пригласили в инфекционный кабинет для исследования на бактерионосительство. Какие материалы нужно взять и какие методы исследования применить?
ЗАДАЧА 2. Какие будут результаты реакции Vi-гемагглютинации (положительные или отрицательные) через 3 месяца: после выздоровления от брюшного тифа с полным освобождением от возбудителей брюшного тифа; после прививки брюшнотифозной вакциной; у носителя брюшнотифозных палочек?
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите по-латыни названия видов шигелл, классификацию шигелл и возбудителей эшерихиозов.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Продолжение исследования на гемокультуру. Отметьте изменения на среде Раппопорт: наличие роста, кислото- и газообразование. Приготовьте мазок со среды Раппопорт, окрасьте по Граму, промикроскопируйте. Сделайте пересев на чашку Петри со средой Эндо. Запишите в журнал изменения на среде Раппопорт, результаты микроскопии мазка и выполненную работу.
2. Продолжение исследования на копрокультуру. Изучите колонии, выросшие на среде Левина. Отберите подозрительную (бесцветную) колонию, приготовьте из неё мазок, окрасьте по Граму, промикроскопируйте. Остаток этой же колонии посейте на среду Олькеницкого. Наблюдения и проделанную работу запишите в журнал.
3. Изучение методов диагностики брюшнотифозного бактерионосительства. Запишите в тетради методы. Учтите результат демонстрационной реакции непрямой Vi–гемагглютинации. Ознакомьтесь с образцами эритроцитарных диагностикумов.
4. Изучение морфологии и ферментативных свойств возбудителей дизентерии. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенные по Граму мазки из чистых культур шигелл Флекснера и Зонне. Ознакомьтесь с ферментативными свойствами шигелл по «пестрым» рядам и таблицам.
5. Начало исследования испражнений больного бактериальной дизентерией. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и внесите данные в журнал. Произведите посев испражнений на чашку Петри со средой Плоскирева. Запишите в журнал проделанную работу.
6. Начало исследования испражнений больного на кишечную коли-инфекцию. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и внесите данные в журнал. Произведите посев испражнений на среду Эндо. Запишите в журнал проделанную работу.
ЗАНЯТИЕ 21
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРЮШНОГО ТИФА, ПАРАТИФОВ, ДИЗЕНТЕРИИ, ЭШЕРИХИОЗОВ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ
ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ САЛЬМОНЕЛЛЁЗНОЙ ЭТИОЛОГИИ (САЛЬМОНЕЛЛЁЗНЫХ ГАСТРОЭНТЕРИТОВ) И
ВНУТРИБОЛЬНИЧНЫХ САЛЬМОНЕЛЛЁЗОВ
На данном занятии вам предстоит продолжить начатые ранее исследования и потребуется более чёткое знание методики исследований на данном этапе, а также знание признаков, на основании которых делаются заключения о видовой принадлежности бактерий. Кроме того, вам предстоит усвоить характеристику и микробиологическую диагностику пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов). Эти заболевания связаны с употреблением в пищу продуктов, в которых в результате размножения накопились живые возбудители и эндотоксины. Также на данном занятии вы изучите характеристику и особенности микробиологической диагностики внутрибольничных сальмонеллёзов.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы Вы должны усвоить заключительную часть исследований на брюшной тиф, паратифы и бактериальную дизентерию, а также условия, способствующие возникновению пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов) и внутрибольничных сальмонеллёзов, первые этапы микробиологической диагностики этих заболеваний и характеристику возбудителей.
Исходный уровень знаний
Материал предыдущих занятий по кишечной группе.
Цель занятия
1. Усвоить диагностику пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии у человека.
2. Усвоить диагностику кишечной коли-инфекции у человека.
План изучения темы
1. Идентификация выделенных возбудителей брюшного тифа и паратифов, бактериальной дизентерии, кишечной коли–инфекции.
2. Характеристика возбудителей пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии (сальмонеллёзных гастроэнтеритов) и внутрибольничных сальмонеллёзов.
3. Механизм возникновения пищевых токсикоинфекций сальмонеллёзной этиологии.
После изучения темы студент должен уметь
1. Учесть и оценить результаты посева гемокультуры на среде Эндо.
2. Провести идентификацию исследуемой копрокультуры при диагностике брюшнотифозного бактерионосительства с учётом морфо-тинкториальных, биохимических, антигенных свойств.
3. Провести идентификацию исследуемой копрокультуры при диагностике бактериальной дизентерии с учётом морфо-тинкториальных, биохимических, антигенных свойств.
Дополнительный материал к занятию
Идентификация культур сальмонелл при помощи
монорецепторных агглютинирующих сывороток
После изучения морфологии и ферментативной активности культуры, выделенной от больного, для окончательной идентификации необходимо изучение её антигенных свойств путём постановки реакции агглютинации с монорецепторными сальмонеллёзными сыворотками. Монорецепторной агглютинирующей сывороткой называется сыворотка, содержащая антитело (рецептор) по отношению к одному антигену. О-сыворотка, рецептор «4» содержит антитело к соматическому антигену сальмонелл 4; H-сыворотка «в» содержит антитело к жгутиковому антигену «в» (см. схему Кауфмана–Уайта). Для идентификации культуры сначала ставят реакцию агглютинации на стекле со смесью нескольких О-сывороток и при положительном результате агглютинации устанавливают принадлежность культуры к роду сальмонелл. После этого ставят реакцию агглютинации отдельно с каждой О-сывороткой, входившей в смесь, чтобы установить серологическую группу. Определив групповую принадлежность культуры, ставят реакцию агглютинации с видовыми Н-сыворотками и, таким образом, определяют вид выделенной культуры сальмонелл.
Контрольные вопросы
Как используется реакция агглютинации для определения вида микроба? Что такое монорецепторные сыворотки и как их получают? Как производится идентификация сальмонелл по антигенной структуре с помощью монорецепторных сывороток? Как и с какой целью проводят фаготипирование брюшнотифозных палочек? Характеристика Vi-антигена брюшнотифозных палочек. Дать определение понятий «пищевая токсикоинфекция» и «пищевая интоксикация». Перечислите виды сальмонелл, которые чаще всего являются причиной пищевых токсикоинфекций – сальмонеллёзных гастроэнтеритов. Условия, определяющие возможность возникновения пищевых токсикоинфекций. Схема микробиологического исследования при пищевой токсикоинфекции сальмонеллезной этиологии: материалы для исследования, питательные среды, идентификация возбудителя, серологические исследования. Какие виды сальмонелл вызывают внутрибольничные инфекции? Какими свойствами обладают внутрибольничные штаммы сальмонелл? Особенности диагностики внутрибольничных сальмонеллёзов. Схемы исследования испражнений на обнаружение возбудителей бактериальной дизентерии. Принцип антигенной классификации кишечных палочек, антигены и их расположение в клетке. Категории диареегенных кишечных палочек. Характеристика представителей разных категорий. Серотипы кишечных палочек, наиболее часто вызывающие коли-инфекцию. Схема исследований на возбудителей коли–инфекции. Описать результаты по дням при выделении возбудителей коли-инфекции.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Продолжение исследования на гемокультуру. Отберите изолированную лактозоотрицательную колонию на среде Эндо и пересейте её на среду Олькеницкого (демонстрация). Запишите в журнал проделанную работу.
2. Продолжение исследования на копрокультуру. Учтите результат посева на среду Олькеницкого: сбраживание лактозы, глюкозы, газообразование, сероводород. Поставьте реакцию агглютинации на стекле выросшей культуры с монорецепторными сыворотками. Сформулируйте ответ. Опишите результаты проделанной работы в графе «Ход исследования», а окончательный ответ – в графе «Результат». Изучите демонстрационный набор агглютинирующих сывороток.
3. По таблицам разберите схему исследования при пищевой токсикоинфекции сальмонеллёзной этиологии.
4. Продолжение исследования на бактериальную дизентерию. Изучите колонии, выросшие на среде Плоскирева, отберите изолированную лактозонегативную колонию и проведите реакцию агглютинации на стекле с сыворотками Флекснер и Зонне. Запишите в журнал проделанную работу, а в графе «Результат» - предварительный результат, в графе «Примечания» - что необходимо сделать для получения окончательного ответа.
5. Продолжение исследования на коли–инфекцию. Изучите колонии, выросшие на среде Эндо. Отберите изолированные лактозоположительные колонии, поставьте реакцию агглютинации на стекле с комплексной сывороткой материала из нескольких колоний до положительного результата (до 10 колоний). Колонию, давшую положительный результат, пересейте на скошенный агар. Запишите в журнал проделанную работу. Изучите демонстрационные препараты агглютинирующих сывороток для диагностики коли–инфекции.
5. Изучите ферментативные свойства энтеробактерий по демонстрационным микротест-системам для биохимической идентификации энтеробактерий.
ЗАНЯТИЕ 22
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ БРЮШНОГО ТИФА,
ПАРАТИФОВ, КОЛИ-ИНФЕКЦИИ (ОКОНЧАНИЕ).
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ХОЛЕРЫ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗОВ И ХЕЛИКОБАКТЕРНОЙ ИНФЕКЦИИ
На предстоящем занятии вы закончите изучение микробиологической диагностики кишечных инфекций и после этого должны будете чётко представлять ход исследования (по дням) при каждой из этих инфекций. Следует ещё раз подчеркнуть, что для практического врача особенно важно знать методику забора материала для микробиологического исследования и биологические препараты для диагностики, профилактики и лечения инфекций. Поэтому на предстоящем занятии внимательно отнеситесь к изучению биологических препаратов, применяемых при кишечных инфекциях.
Но всё же, главная цель занятия – возбудители холеры – особо опасного инфекционного заболевания, которое может принимать характер обширных вспышек. Какую бы специальность вы себе не избрали, вы должны хорошо знать это заболевание, правила забора и пересылки материала для исследования, чтобы не пропустить первого случая, когда к вам обратится больной с соответствующими симптомами.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы Вы должны усвоить ход микробиологического исследования при кишечных инфекциях, знать биологические препараты для профилактики, диагностики и терапии кишечных инфекций, знать характеристику патогенных вибрионов, микробиологическую диагностику холеры и ответы на контрольные вопросы.
Исходный уровень знаний
Материалы предыдущих занятий. Из раздела «Морфология бактерий» - характеристика извитых форм микроорганизмов.
Цель занятия
1. Усвоить диагностику холеры.
2. Усвоить диагностику заболеваний, вызываемых парагемолитическими вибрионами.
3. Усвоить диагностику кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции.
4. Изучить биологические препараты для диагностики, профилактики и терапии кишечных инфекций.
План изучения темы
1. Окончание микробиологической диагностики брюшного тифа, кишечной коли–инфекции. Обобщение результатов исследований, формулировка ответов.
2. Изучение биологических препаратов для диагностики специфической профилактики и терапии кишечных инфекций.
3. Характеристика патогенных вибрионов (холерных, парагемолитических), кампилобактеров, хеликобактеров.
4. Правила забора и транспортировки материалов для диагностики холеры. Первый день исследования на холеру.
5. Характеристика парагемолитических вибрионов, кампилобактеров и хеликобактеров. Схемы исследований заболеваний, вызываемых галофильными вибрионами, кампилобактерами и хеликобактерами.
Повторите схемы исследований по дням для диагностики кишечных инфекций, диагностику которых вы заканчиваете. Прочитайте материалы по биологическим препаратам. Повторите классификацию патогенных вибрионов, особенности микробиологической диагностики кампилобактериозов, хеликобактерной инфекции, особенности работы с материалом от больных холерой, правила взятия и доставки материалов для исследования на холеру.
После изучения темы студент должен уметь
1. Провести идентификацию исследуемой гемокультуры с учётом морфо-тинкториальных, биохимических, антигенных свойств.
2. Провести идентификацию исследуемой копрокультуры при диагностике кишечной коли-инфекции с учётом морфо-тинкториальных, биохимических, антигенных свойств.
3. Проводить исследования для выделения возбудителей холеры.
4. Выбирать биологические препараты для диагностики, профилактики и терапии кишечных инфекций.
Дополнительный материал к занятию
Порядок взятия и доставки материала для исследования на холеру
Взятие материала для диагностического исследования необходимо производить до начала лечения антибиотиками. Предпочтительнее забор нативного материала, однако при отсутствии такой возможности следует пользоваться средами-консервантами.
1. Пробы нативного материала (испражнения и рвотные массы) собирают в индивидуальное отмытое от дезинфицирующего раствора судно, на дно которого помещают меньший по размерам сосуд, удобный для обеззараживания, кипячения, или листы пергаментной бумаги, целлофана и др. Выделения в объёме 10-20 мл при помощи стерильных металлических картонных или деревянных ложек переносят в стерильную широкогорлую банку, плотно закрывают её стеклянной пробкой или корковой пробкой с пергаментной бумагой. При отсутствии банки образцы можно помещать в стерильные пробирки. В этом случае для переноса материала используют стерильные трубочки. Трубочку захватывают корнцангом, зачерпывают ею выделения, помещают в пробирку, которую затем закрывают непромокаемой пробкой.
2. В ряде случаев (у реконвалесцентов) исследуют желчь, полученную при дуоденальном зондировании.
3. От трупов лиц, умерших от заболевания, похожего на холеру, берут фрагменты верхней, нижней и средней частей тонкого кишечника длиной около 10 см. Фрагменты выделяют между двумя лигатурами, наложенными на оба конца изымаемого участка кишечника. Желчный пузырь извлекают целиком после перевязки протока.
При исследовании реконвалесцентов и здоровых лиц им предварительно дают слабительное (25-30 г сернокислой магнезии), чтобы собрать жидкие испражнения из верхней части кишечника. Пробы помещают в 1% пептонную воду. При массовом исследовании на носительство вибриона можно использовать метод группового посева, когда в один посев объединяют пробы от 5-10 человек. При положительном результате пробу проводят с каждым из обследованных.
Консерванты: 1% щелочная пептонная вода с рН 9,1, пептонная вода с теллуритом калия и др.
Исследованию подвергаются также пищевые продукты, почва, вода, смывы с различных объектов, мухи, бельё, загрязнённое выделениями больного, обитатели рек (рыбы, земноводные, раки и т.д.). Материал помещают в ведро и упаковывают в деревянный ящик. Ящик обвязывают, пломбируют и пересылают с нарочным.
Контрольные вопросы
Современная классификация патогенных вибрионов, заболевания, которые они вызывают. Характеристика холерных вибрионов: морфология, культуральные свойства, тинкториальные свойства, ферментативная активность, устойчивость во внешней среде. Антигенная структура, серологические типы, токсинообразование. Биохимические группы по Хайбергу. Неагглютинирующиеся вибрионы (НАГи). Возможные материалы для исследования на холеру. Правила забора и транспортировки материала при подозрении на холеру. Режим работы с материалом от больных и носителей холерных вибрионов. Ход исследования при диагностике холеры (по часам и дням). Ускоренная диагностика холеры. Исследование воды на наличие холерного вибриона. Дифференцировка между «классическим» вибрионом и вибрионом Эль–Тор. Препараты для диагностики, лечения (в том числе солевые растворы) и специфической профилактики холеры. Кампилобактеры: классификация (основные виды), морфология, отношение к окраске по Граму, особенности биологического окисления и культивирования. Источники инфекции. Заболевания, вызываемые кампилобактерами. Особенности забора и пересылки материалов от больных. Схема исследования для диагностики кампилобактериоза. Helicobacter pylori: морфология, культуральные свойства, роль в этиологии гастрита и язвенной болезни. Препараты для лечения. Характеристика парагемолитических вибрионов: виды, морфология, физиология, постоянное место обитания, условия заражения, отношение к высоким концентрациям хлористого натрия. Заболевания, вызываемые парагемолитическими вибрионами.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите по-латыни названия возбудителей холеры, названия галофильных вибрионов, кампилобактеров (основные виды) и хеликобактеров.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Окончание исследования на гемокультуру (4-й день, демонстрация). Учтите результаты на среде Олькеницкого. Поставьте реакцию агглютинации на стекле с монорецепторными сальмонеллёзными сыворотками, сформулируйте ответ. Устно перечислите признаки, по которым вы даете ответ. Запишите проделанную работу и результат в журнал.
2. Окончание исследования на коли-инфекцию (3-й день). Повторите устно ход исследования, поставьте реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры с типоспецифическими ОВ-коли сыворотками. Учтите результат демонстрационной реакции агглютинации с живой и убитой кипячением культурой. Сформулируйте результат исследования, сделайте записи в журнале.
3. Изучение морфологии и ферментативных свойств холерного вибриона. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенный по Граму мазок из чистой культуры холерного вибриона. Изучите ферментативные свойства холерного вибриона по демонстрационным посевам, запишите в дневник.
4. Начало исследования испражнений на холерный вибрион. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской, внесите данные в журнал. Изготовьте мазок из испражнений, окрасьте водным фуксином, промикроскопируйте. Посейте испражнения в пробирку с 1% пептонной водой и на чашку Петри со щелочным агаром. Запишите в журнал проделанную работу.
5. Начало исследования воды на холерный вибрион. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской, внесите данные в журнал. Произведите посев воды: к 450 мл исследуемой воды стерильно добавьте 50 мл 10% щелочного раствора пептона; запишите проделанную работу в журнал.
6. Промикроскопируйте и зарисуйте мазок кампилобактера.
7. Разбор схемы микробиологической диагностики разных форм кампилобактериоза и хеликобактерной инфекции.
8. Изучение препаратов для диагностики, специфической профилактики и терапии кишечных инфекций. Просмотрите препараты, прочитайте этикетки, охарактеризуйте препарат: что представляет собой (сыворотка диагностическая или лечебная, диагностикум, аллерген, вакцина), как приготовлен, что содержит (антиген, антитела), для чего применяется; если препарат диагностический – что выявляется с его помощью, если препарат лечебно-профилактический – какое действие оказывает на организм; дозируется ли препарат и в каких единицах.
ЗАНЯТИЕ 23
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ХОЛЕРЫ (ОКОНЧАНИЕ)
ИТОГ ПО РАЗДЕЛУ «ВОЗБУДИТЕЛИ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ»
На предстоящем занятии будет дана оценка Вашим знаниям по одному из основных разделов клинической микробиологии – по кишечным инфекциям. Само собой понятно, насколько важно для Вас ещё раз повторить и продумать материал этого раздела.
План изучения темы
Повторите каждую тему, то есть:
а) возбудители брюшного тифа, паратифов, сальмонеллёзов;
б) возбудители бактериальной дизентерии;
в) возбудители кишечной коли-инфекции;
г) возбудители холеры, кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции.
Последовательно повторите материал по учебнику, по конспекту лекций, по «Руководству», по пособию, по своим записям в дневнике и в журнале. Ответьте на контрольные вопросы ко всем занятиям по разделу. Посмотрите биологические препараты, поупражняйтесь в разборе их.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения материала вы должны быть готовы ответить на все вопросы и выполнить практическую задачу.
Исходный уровень знаний
Материал предыдущих занятий.
Цель занятия
1. Систематизировать знания по возбудителям кишечных инфекций.
2. Продемонстрировать владение умениями, полученными при изучении возбудителей кишечных инфекций.
После изучения раздела студент должен уметь
1. Проводить исследования для диагностики брюшного тифа и паратифов.
2. Проводить исследования для диагностики бактериальной дизентерии.
3. Проводить исследования для диагностики кишечной коли-инфекции.
4. Проводить исследования для диагностики возбудителей холеры.
5. Выбирать биологические препараты для диагностики, профилактики и терапии кишечных инфекций.
Контрольные практические
задания по разделу «возбудители кишечных инфекций»
Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Эндо, и укажите последовательность дальнейшего исследования.
Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Плоскирева, и укажите последовательность дальнейшего исследования.
Дайте характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Левина, и укажите последовательность дальнейшего исследования.
Оцените результаты исследования ферментативной активности бактерий на среде Олькеницкого и укажите последовательность дальнейшего исследования.
Идентифицируйте культуру микроорганизмов по результатам определения биохимической активности на средах Гиса.
Дайте характеристику биологическим препаратам для диагностики, профилактики и терапии кишечных инфекций.
Контрольные вопросы по разделу
(расшифровку вопросов смотрите в соответствующих
занятиях (19-22))
Клиническая микробиология – определение понятия, цели и задач. Материалы для лабораторного исследования: чем определяется выбор материала; правила забора и транспортировки. Характеристика методов, применяемых в клинической микробиологии. Классификация семейства энтеробактерий. Общая характеристика бактерий кишечной группы. Род Salmonella: характеристика, классификация. Возбудители брюшного тифа и паратифов: характеристика, методы диагностики брюшного тифа и паратифов в разные сроки заболевания. Методы исследования на брюшнотифозное бактерионосительство. Определение понятий «пищевая токсикоинфекция» и «пищевая интоксикация». Виды сальмонелл, которые чаще всего являются причиной пищевых токсикоинфекций – сальмонеллёзных гастроэнтеритов. Схема микробиологического исследования при пищевой токсикоинфекции сальмонеллезной этиологии. Виды сальмонелл, вызывающих внутрибольничные инфекции. Свойства внутрибольничных штаммов сальмонелл. Особенности диагностики внутрибольничных сальмонеллёзов. Характеристика микроорганизмов рода Shigella. Характеристика иммунитета при бактериальной дизентерии. Схемы исследования испражнений на обнаружение возбудителей бактериальной дизентерии. Характеристика кишечных палочек. Категории диареегенных кишечных палочек, характеристика представителей разных категорий. Схема исследований на возбудителей коли–инфекции. Современная классификация патогенных вибрионов; заболевания, которые они вызывают. Характеристика холерных вибрионов. Возможные материалы для исследования на холеру, правила забора и транспортировки материала при подозрении на холеру. Режим работы с материалом от больных и носителей холерных вибрионов. Ход исследования при диагностике холеры. Препараты для диагностики, лечения (в том числе солевые растворы) и специфической профилактики холеры. Характеристика кампилобактерий и вызываемых ими заболеваний. Схема исследования для диагностики кампилобактериоза. Helicobacter pylori: характеристика, роль в этиологии гастрита и язвенной болезни. Характеристика парагемолитических вибрионов. Заболевания, вызываемые парагемолитическими вибрионами.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Окончание исследования испражнений на холерный вибрион. Повторите устно ход исследования. Изучите посевы на щелочной пептонной воде и на щелочном агаре, отметьте характер роста, приготовьте мазок, окрасьте водным фуксином, промикроскопируйте. Приготовьте «висячую» каплю и изучите подвижность культуры. Из колоний на щелочном агаре поставьте реакцию агглютинации с сыворотками: холерная «О», «Инаба», «Огава». По демонстрационным посевам зарегистрируйте результаты проб на чувствительность культуры и полимиксину, к бактериофагам «С» и «Эль-Тор». Все наблюдения запишите в графе «Ход исследования». Сформулируйте ответ, устно обоснуйте его, то есть перечислите признаки, на основании которых даётся ответ. Запишите предварительный ответ в графу «Результат».
2. Окончание исследования воды на холерный вибрион. Повторите устно ход исследования. Учтите результат посева воды и запишите в журнал.
3. Итог по разделу «Возбудители кишечных инфекций».
ЗАНЯТИЕ 24
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ,
ВЫЗЫВАЕМЫХ ГНОЕРОДНЫМИ КОККАМИ
Заболевания, вызываемые гноеродными кокками, относятся к числу наиболее распространённых. После начала применения антибиотиков, в связи с развитием лекарственной устойчивости и формированием госпитальных штаммов значительно увеличилась частота стафилококковых заболеваний, клиническое течение их стало более тяжёлым, нередко со смертельным исходом. В настоящее время с заболеваниями стафилококковой этиологии приходится встречаться врачам различных специальностей, но особенно часто хирургам, акушерам-гинекологам, педиатрам и терапевтам. Другие представители гноеродных кокков (стрептококки, пневмококки) могут вызвать нагноительные процессы различной локализации и специфические инфекционные процессы (гонококки, менингококки). В большинстве случаев заболевания, вызываемые гноеродными кокками, развиваются остро, и поэтому очень важна их своевременная микробиологическая диагностика. Кроме того, выделение чистой культуры возбудителя и определение его лекарственной устойчивости поможет лечащему врачу в выборе лекарственного препарата для успешного лечения.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы Вы должны знать общую характеристику гноеродных кокков и их отдельных видов, морфологию, культуральные свойства, токсинообразование, факторы патогенности, усвоить принципы забора материала от больных и схемы микробиологической диагностики.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо знать вопросы из курса общей микробиологии: основные формы бактерий, питательные среды (специальные, элективные), факторы патогенности микроорганизмов, методику определения чувствительности к антибиотикам.
Цель занятия
1. Ознакомиться с возбудителями гнойно-воспалительных заболева-
ний: стафилококками, стрептококками, гонококками, менингококками, их морфологией, культуральными свойствами и факторами патогенности.
2. Изучить принципы лабораторной диагностики стафилококковых и стрептококковых заболеваний, инфекций, вызванных нейссериями.
3. Ознакомиться с набором иммунобиологических препаратов для диагностики, лечения и профилактики заболеваний, вызванных стафилококками, стрептококками и нейссериями.
План изучения темы
1. Общая характеристика группы гноеродных кокков и отдельных видов.
2. Схемы микробиологических исследований при заболеваниях, вызываемых гноеродными кокками.
После изучения темы студент должен уметь
1. Дифференцировать стафилококки, стрептококки и нейссерии в микропрепаратах.
2. Оценить результаты микроскопии препаратов гноя из уретры, взятого от больного с острой гонореей.
3. Определять критерии патогенности стафилококков (реакция плазмокоагуляции, гемолиз на кровяном агаре, продукция лецитовителлазы), стрептококков (гемолиз на кровяном агаре).
4. Классифицировать биологические препараты по теме занятия в соответствии с их назначением.
Дополнительная литература
1. Беляев В.Д. Стрептококковая инфекция / В.Д. Беляев, А.П. Ходырев, А.А. Тотолян. - М., 1978.
2. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
3. Внутрибольничные инфекции / Р.Д. Перетц, А.Л. Хэмптон,
П.А. Ристуцциа и др.; под ред. Р.П. Венцела; пер. с англ. Б.А. Годованного. - М.: Медицина, 1990.
4. Дерябин Д.Г. Стафилококки: экология и патогенность / Д.Г. Дерябин. – М., 2000.
5. Зубков М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. – М., 2002.
6. Зуева В.Е. Стафилококки / В.Е. Зуева. - М.: Медицина, 1983.
7. Йоргенсен Дж.Х. Микробиологический справочник для клиницистов / Дж.Х. Йоргенсен, М.А. Пфаллер. - М.: Медицина, 2006.
8. Мари П.Р. Клиническая микробиология / П.Р. Марри, И.Р. Шей. - М.: Медицина, 2006.
9. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
10. Медицинская микробиология / гл. pед. В.И. Покpовский,
О.К. Поздеев. - М.: ГЭОТАР МЕДИА, 1998. - (Учеб. лит. для студентов мед. вузов и врачей).
11. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб. для студентов мед. вузов / под ред. А.А. Воробьева. - М.: МИА, 2004.
12. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
13. Поздеев О.К. Медицинская микробиология: учеб. пособие для студентов мед. вузов / О.К. Поздеев; под pед. В.И. Покpовского. - 3-е изд., стер. – М.: ГЭОТАР МЕДИА, 2006. - (XXI век).
14. Покровский В.И. Стрептококки и стрептококкозы / В.И. Покровский, Н.И. Брико, Л.А. Ряпис. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006.
15. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: учеб. пособие для студентов мед. вузов / под ред. В.В. Теца. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина,
2002. - (Учеб. лит. для студентов мед. вузов).
16. Стафилококки и стафилококковая инфекция / под ред. А.К. Акатова. - Саратов, 1980.
17. Страчунский Л.С. Современные методы клинической микробиологии / Л.С. Страчунский. - Смоленск, 2003.
18. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
19. Яфаев Р.Х. Эпидемиология внутрибольничных инфекций /
Р.Х. Яфаев, Л.П. Зуева. - Л.: Медицина, 1989.
Контрольные вопросы
Стафилококки. Название видов по-латыни; какой вид чаще всего вызывает заболевания? Морфология, среды для культивирования, элективные среды, основные признаки для дифференцировки стафилококков от микрококков и для отличия разных видов стафилококков. Факторы патогенности стафилококков. Препараты, которые используются для лечения острых и хронических стафилококковых инфекций, для диагностики и профилактики. Роль стафилококков в возникновении внутрибольничных инфекций. Стрептококки. Форма, расположение клеток, споры, жгутики, капсула, окраска по Граму, среды для культивирования, токсины, ферменты патогенности. Виды стрептококков по характеру гемолиза на кровяном агаре (написать по-латыни, русские названия и буквенное обозначение типов гемолиза). Другие виды стрептококков, способные вызывать заболевания у человека. Какой вид чаще всего вызывает заболевания? Классификация стрептококков по антигенной структуре. Группоспецифический антиген, его химическая природа, серогруппы, их обозначение. К какой группе относятся большинство патогенных стрептококков? Типоспецифические антигены: химическая природа, какой из них является фактором вирулентности, его действие в организме, сколько серотипов известно, как они обозначаются, с помощью какой реакции выявляются? Роль стрептококков в этиологии скарлатины, рожи, ревматизма. Стрептококки пневмонии: название по-латыни, морфология (форма, расположение, споры, жгутики, капсулы), окраска по Граму, среды для культивирования. Антигенная структура: локализация и химическая структура основных антигенов, серологические типы. Формы пневмококковой инфекции. Микробиологическая диагностика: материалы для исследования, методы выделения чистой культуры на питательных средах и на животных; дифференцировка от других стрептококков, серотипирование. Препараты для лечения, диагностики и профилактики. Менингококки: морфология (форма, взаимное расположение, споры, жгутики, капсула), отношение к окраске по Граму. Среды для культивирования, способ биологического окисления, отношение к пониженной температуре. Факторы патогенности. Антигенная структура, по каким антигенам проводится деление на серогруппы и серовары? Как они обозначаются? Какие серогруппы чаще всего вызывают заболевания? Перечислите формы менингококковой инфекции. Локализация менингококка у носителей. Лабораторная диагностика: материалы для исследования при различных формах менингококковой инфекции, особенности забора и транспортировки их в лабораторию. Составить раздельно схемы лабораторной диагностики в зависимости от формы инфекции. Препараты для лечения и специфической профилактики. Гонококк: название по-латыни, морфология, отношение к окраске по Граму и другие способы окраски, отношение к температуре, среды для выращивания. Лабораторная диагностика острой гонореи: материалы для исследования, бактериоскопический метод (способы окраски, особенности микроскопической картины); бактериологический метод (среды для посева, идентификация возбудителя). Методы диагностики хронической гонореи. Препараты для диагностики и лечения.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Написать по-латыни названия видов стафилококков, стрептококков (по гемолитическому признаку), менингококков и гонококков.
Самостоятельная работа студентов на практическом занятии
1. Изучение морфологии стафилококков и стрептококков. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенные по Граму препараты: чистая культура стрептококка, стафилококка, стафилококк в гное, стрептококк в гное, стрептококк пневмонии в материале от животного. Названия возбудителей под рисунками напишите по-латыни.
2. Изучение особенностей роста стафилококков и стрептококков на питательных средах. По демонстрационным посевам изучите и опишите:
а) характер роста гемолитических, зеленящих, негемолитических стрептококков, гемолитических стафилококков на кровяном агаре, стафилококка на элективной среде;
б) характер роста стрептококков и стафилококков на жидкой питательной среде.
3. Бактериоскопическое и бактериологическое исследование гноя на стафилококк (1-й день). Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и внесите данные в журнал. Из гноя приготовьте мазок. Окрасьте по Граму, микроскопируйте. Затем гной посейте петлей штрихами на чашку с кровяным агаром для получения изолированных колоний и на МПА шпателем для определения чувствительности микрофлоры гноя к антибиотикам. На засеянную чашку положите диски с антибиотиками. Запишите проделанную работу.
4. Продолжение выделения культуры из крови (стрептококковый сепсис, 2-й день). Демонстрация. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и внесите данные в журнал. Исследование 1-го дня было выполнено накануне: 10 мл крови больного с предполагаемым диагнозом «сепсис» посеяли в 90 мл сахарного бульона. 2-й день: опишите характер роста микробов в бульоне. Приготовьте мазок, окрасьте по Граму, микроскопируйте. Сделайте пересев на чашку Петри с кровяным агаром. В журнале опишите проделанную работу.
5. Посев слизи из носа для выявления носительства стафилококка. Слизь из носа возьмите стерильным тампоном друг у друга и сделайте посев на чашку с молочно-солевым агаром. В журнале запишите собственные паспортные данные и проделанную работу.
6. Бактериоскопическая диагностика гонореи. Микроскопируйте и зарисуйте мазок из гноя уретры. На основании изучения мазка сделайте вывод.
7. Бактериоскопическая диагностика эпидемического церебрального менингита. Микроскопируйте и зарисуйте мазок из спинномозговой жидкости больного.
ЗАНЯТИЕ 25
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ,
ВЫЗЫВАЕМЫХ ГНОЕРОДНЫМИ КОККАМИ (ПРОДОЛЖЕНИЕ), ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ ПАЛОЧКОВИДНЫМИ
МИКРООРГАНИЗМАМИ И АНАЭРОБНЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ
Вы продолжаете изучение гноеродных кокков и уже убедились, что микробиологическая диагностика каждого из заболеваний, вызываемых ими, имеет свои особенности. Если на предыдущем занятии Вы должны были усвоить общую характеристику и особенности отдельных видов этой группы, то сейчас вам необходимо разобраться в особенностях проведения микробиологической диагностики при заболеваниях, вызываемых отдельными представителями, научиться дифференцировать отдельные виды и усвоить методы специфической профилактики и терапии гнойных инфекций. С этой целью на данном занятии Вы будете изучать препараты, применяемые для диагностики, специфической профилактики и лечения инфекций, вызываемых патогенными кокками. Во второй части занятия Вам предстоит познакомиться с представителями новой группы – патогенными анаэробами, вызывающими очень тяжелые заболевания. Сведения о профилактике, диагностике и лечении этих заболеваний необходимы каждому врачу. Кроме того, вам предстоит познакомиться и усвоить свойства возбудителей и лабораторную диагностику гнойно-воспалительных процессов, вызываемых грамотрицательными палочковидными микроорганизмами.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы Вы должны знать микробиологическую диагностику инфекций, вызываемых гноеродными кокками, и препараты для диагностики, лечения и профилактики этих заболеваний, свойства грамотрицательных палочек – возбудителей гнойных и раневых инфекций, классификацию и свойства неспорообразующих анаэробов, а также свойства клостридий - возбудителей раневых инфекций. Необходимо также усвоить правила забора, транспортировки и методику первого дня исследования материала, содержащего анаэробные микроорганизмы.
Исходный уровень знаний
Для успешного усвоения темы необходимо повторить из общей микробиологии разделы: биологическое окисление микроорганизмов, методы выделения чистых культур анаэробов и знать материал предыдущего занятия.
Цель занятия
1. Ознакомиться с возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний: псевдомонадами, протеями, клебсиеллами, кишечной палочкой, их морфологией, культуральными свойствами и факторами патогенности.
2. Ознакомиться с возбудителями анаэробных инфекций: клостридиями и неспорообразующими анаэробами, их морфологией, культуральными свойствами и факторами патогенности.
3. Изучить принципы лабораторной диагностики инфекций, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами.
4. Ознакомиться с набором иммунобиологических препаратов для диагностики, лечения и профилактики инфекций, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами.
План изучения темы
1. Определение признаков патогенности и видовой принадлежности стафилококков.
2. Стафилококковое носительство, его диагностика и значение.
3. Стрептококковые заболевания: нагноения, сепсис, скарлатина, ревматизм и их диагностика.
4. Характеристика грамотрицательных аэробных палочек (псевдомонады, протей, клебсиеллы, кишечные палочки) и их роль в этиологии гнойно-воспалительных процессов.
5. Характеристика неспорообразующих и спорообразующих анаэробов - возбудителей раневых и гнойных инфекций.
После изучения темы студент должен уметь
1. Производить диагностику стафилококковых и стрептококковых инфекций.
2. Производить посев исследуемого материала для диагностики клостридиальных инфекций.
3. Классифицировать биологические препараты по теме занятия в соответствии с их назначением.
Дополнительная литература
1. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
2. Зубков М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. – М., 2002.
3. Йоргенсен Дж.Х. Микробиологический справочник для клиницистов / Дж.Х. Йоргенсен, М.А. Пфаллер. - М.: Медицина, 2006.
4. Колесов А.П. Анаэробные инфекции в хирургии / А.П. Колесов, А.В. Столбовой, В.И. Кочеровец. - Л., 1989.
5. Мари П.Р. Клиническая микробиология / П.Р. Марри, И.Р. Шей. - М.: Медицина, 2006.
6. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
7. Мельников В.Н. Анаэробные инфекции / В.Н. Мельников,
Н.И. Мельников. - М., 1973.
8. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
9. Протейная инфекция / Г. Лукач и др. - Киев, 1985.
10. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней / под ред. К.И. Матвеева. - М., 1973.
11. Синегнойная инфекция / под ред. А.Ф. Мороз. - М.: Медицина, 1988.
12. Страчунский Л.С. Современные методы клинической микробиологии / Л.С. Страчунский. - Смоленск, 2003.
13. Шварц С.А. Столбняк / С.А. Шварц, В.Е. Букова, С.Ф. Стовбун. - Кишинев, 1986.
14. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
Дополнительный материал к занятию
Ускоренные методы диагностики анаэробной газовой инфекции
1. Исследуемый материал засевают в 10 пробирок с полужидкой средой и затем 5 пробирок прогревают при 800С 20 минут для уничтожения вегетативных форм бактерий. После этого в пробирки добавляют различные моновалентные противогангренозные сыворотки. Обнаружение через 10-18 часов микробов в стрептобациллярной форме и роста их изолированными колониями подтверждает соответствие возбудителя типу сыворотки. Диффузный рост и беспорядочное расположение клостридий указывает на несоответствие возбудителя типу сыворотки.
2. Внутрикожная проба на морских свинках. Материал от больного (тканевая жидкость) вводят внутрикожно в область предварительно выбритой брюшной стенки морским свинкам в смеси с моновалентными противогангренозными сыворотками и одному животному без сыворотки (контроль). Наблюдение за животными ведут в течение 24 часов. При нейтрализации токсина, содержащегося в содержимом раны, специфической сывороткой реакция отсутствует. Если сыворотка оказалась неспецифической (как и в контроле), на месте введения материала кожа морских свинок окрашивается в синий или фиолетовый цвет.
Микробиологические методы идентификации микробов
рода Staphylococcus
Целью идентификации является установление рода и вида выделенной чистой культуры. Род стафилококка относится к семейству Micrococcaceae, в которое входят также роды Micrococcus и Planococcus. Общими чертами представителей этого семейства являются: морфология, положительная окраска по Граму; наличие фермента – каталазы.
Род Staphylococcus состоит из нескольких видов, наиболее важными из которых являются S.аureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Представители последних двух видов являются коагулазоотрицательными и долгое время считались непатогенными. В настоящее время доказано, что эпидермальный стафилококк может вызвать такие заболевания, как эндокардит, сепсис, конъюнктивит, инфекция ран и мочевыводящих путей, послеродовые инфекции, а сапрофитический – острый уретрит, цистит и др. На первом этапе устанавливается принадлежность выделенной культуры к семейству Micrococcaceae и роду Staphylococcus. На принадлежность культуры к семейству микрококков указывает положительная проба на каталазу, так как другие кокки (в частности стрептококки), каталазу не образуют. Для установления принадлежности культуры к роду Staphylococcus основными методами являются культуральный и биохимический.
Культуральный метод. Основным отличием стафилококков от микрококков является окраска колоний на плотной среде. Для стафилококков характерна золотистая или белая окраска колоний. У микрококков колонии окрашены в желтый или розовый цвет.
Биохимический метод. Он основан на том, что стафилококки являются факультативными анаэробами, микрококки – облигатными аэробами. В связи с этим стафилококки способны расти и ферментировать глюкозу в анаэробных условиях, а микрококки лишены этой возможности. Для определения этого признака культуру засевают петлёй в столбик полужидкой среды, содержащей 1% глюкозы и индикатор на кислые продукты. Сверху среду заливают стерильным вазелиновым маслом и ставят в термостат при 370С на 5 суток. Рост культуры и изменение цвета среды указывает на принадлежность её к роду Staphylococcus.
Видовая идентификация стафилококков. S.aureus отличается от других видов наличием золотистого или палевого пигмента (в большинстве случаев), наличием ферментов: плазмокоагулазы, лецитиназы (лецитовителлазы) и ДНК-азы. Плазмокоагулазу определяют путём посева культуры в цитратную кроличью плазму, после чего посевы помещают в термостат при 370С и регистрируют результаты через 1, 2, 4, 6 и 18 часов. Появление на дне пробирки студнеобразного сгустка любого размера считается положительным результатом реакции. Лецитиназу определяют путём посева культуры на молочно-желточный солевой агар. В составе яичного желтка имеется лецитовителлин, а наличие молока стимулирует образование пигмента. Посевы выдерживают в термостате при 370С 18-24 часа. О наличии лецитиназы свидетельствует образование вокруг колоний радужного венчика.
Определение ДНК-азы. Принцип метода: под действием ДНК-азы добавленная в плотную среду высокополимерная ДНК распадается на низкополимерные фрагменты. При этом мутная среда, содержащая высокополимерную ДНК, становится прозрачной. Ход исследования: на питательную среду в чашке Петри, включающую от 50 до 200 мг ДНК и 0,5 мл 10% раствора хлористого кальция, штрихами засевают исследуемую культуру и помещают в термостат при 370С на 18-24 часа. После этого на поверхность агара заливают 5-7 мл 3 моль/л раствора соляной кислоты. Если через 2-3 минуты вокруг посевов появляются зоны просветления, то реакция считается положительной
Если культура имеет золотистый (палевый), пигмент, коагулирует плазму и обладает хотя бы одним из двух других ферментов (лецитиназа, ДНК–аза) – её относят к виду золотистого стафилококка. При отсутствии полного набора указанных признаков (основным является наличие плазмокоагулазы) проводят идентификацию видов эпидермального и сапрофитического стафилококков по трем основным признакам, отличающим эти два вида (см. таблицу).
|
Вид стафилококка |
Устойчивость |
Фосфатаза |
Ферментация |
|
эпидермальный |
- |
+ |
- |
|
сапрофитический |
+ |
- |
+ |
Устойчивость к новобиоцину определяют путём посева культуры на среду, содержащую 2 мкг/мл новобиоцина. Ферментацию маннита проводят в аэробных условиях путём посева культуры бляшкой на поверхность среды в чашке Петри, содержащей 1% маннита и индикатор на кислые продукты. Появление окрашенных колоний (в цвет индикатора) указывает на способность культуры ферментировать маннит. Таким образом, для эпидермального стафилококка характерны:
- чувствительность к новобиоцину;
- наличие фосфатазы и неспособность окислять маннит.
Для сапрофитического стафилококка характерны противоположные свойства.
Выделенные культуры S.aureus обычно подвергают фаготипированию с международным набором фагов (22 фага). Определение фаготипа стафилококка помогает установить источник инфекции и принадлежность выделенной культуры к госпитальным штаммам.
Контрольные вопросы
Опишите по дням ход исследования и результаты при выделении золотистого стафилококка из гноя. Опишите по дням ход исследования и результаты при подозрении на сепсис: сколько крови взять, в какую питательную среду посеять, какое количество питательной среды взять, в каких условиях производится взятие крови и её посев. Дальнейший ход исследования описать отдельно при обнаружении стафилококка и стрептококка. Какие материалы исследуют при подозрении на стафилококковое пищевое отравление, что обнаруживают в исследуемых материалах, на каких животных ставится проба? Идентификация чистой культуры стафилококка: по каким признакам определяют родовую и видовую принадлежность. Методы определения факторов патогенности стафилококка: пламокоагулазы, лецитовителлазы, ДНК-азы. Фаготипирование стафилококков: с какой целью проводится, каким набором фагов, методика фаготипирования. Схема микробиологического исследования при пищевой интоксикации стафилококкового происхождения. Опишите по дням ход исследования и результаты при выделении стрептококка из гноя. Краткая характеристика основных видов из группы грамотрицательных микроорганизмов. Синегнойная палочка: название по–латыни, морфология, культивирование, пигментообразование, основные факторы вирулентности; группы больных, у которых чаще всего наблюдается синегнойная инфекция. Протей: название по-латыни, морфология и физиология, особенности культуральных свойств. Кишечные палочки: наиболее частые формы инфекции (места локализации воспалительных процессов). Характеристика возбудителей анаэробной газовой инфекции (основных трёх видов): название видов по-латыни, морфология (споры, жгутики, капсула). Окраска по Граму, способ биологического окисления, среды для культивирования, характер колоний в толще агара, изменения на среде Вильсон-Блера, изменения на молоке; свойства токсина, действие в организме, серологические типы токсина. Факторы инвазивности. Характеристика неспорообразующих (неклостридиальных) анаэробов. Классификация: семейства, роды, основные виды (названия по-латыни). Основные свойства: морфология, отношение к окраске по Граму, условия культивирования. Ассоциация микроорганизмов (смешанная инфекция) при гнойных и раневых инфекциях: наиболее частые сочетания, особенности микробиологической диагностики при ассоциациях возбудителей.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Написать по-латыни названия видов неспорообразующих анаэробов, грамотрицательных микроорганизмов – возбудителей раневых и гнойных инфекций и названия возбудителей анаэробной газовой инфекции.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Продолжение исследования гноя (2-й день). Изучите и опишите колонии стафилококка на чашках с кровяным агаром. С помощью миллиметровой бумажки определите диаметр зон задержки роста вокруг дисков с антибиотиками и сделайте вывод о чувствительности микрофлоры гноя к антибиотикам. Проведите идентификацию выделенной чистой культуры стафилококка:
а) учтите результаты посева на анаэробное сбраживании глюкозы;
б) поставьте реакцию плазмокоагуляции: в пробирку с 0,5 мл кроличьей цитратной плазмы в разведении 1:4 (опыт) и в другую пробирку с 0,5 мл раствора хлорида натрия (контроль) внесите по 1 петле исследуемой культуры стафилококка. Пробирки поставьте в термостат. В конце занятия проверьте результат и сделайте вывод, данные запишите в журнал;
в) учтите результаты посева на лецитовителлазу;
г) учтите результаты посева на ДНК-азу;
д) учтите результаты фаготипирования.
Все результаты запишите в журнал, обобщите полученные данные, сформулируйте заключение, внесите его в графу «Результат».
2. Продолжение исследования крови на сепсис (3-й день). Изучите колонии на кровяном агаре, обратите внимание на размеры колоний, зоны гемолиза, определите вид стрептококка (по гемолизу). Приготовьте мазок из колоний, окрасьте по Граму, микроскопируйте, зарисуйте. Результаты запишите в журнал, сделайте заключение по исследованию крови на данном этапе, а в графе «Примечания» отметьте какие ещё исследования следовало бы провести для определения вида стрептококка и его антигенной структуры.
3. Продолжение исследования на стафилококковое носительство. Изучите и опишите характер колоний на молочно-солевом агаре. Сделайте мазок и, после окраски по Граму, промикроскопируйте. Результаты запишите в журнал, сделайте вывод. В графе «Примечания» опишите, какие исследования надо провести, чтобы дать заключение о наличии или отсутствии стафилококкового носительства.
4. Разберите схему исследования при стафилококковой интоксикации.
5. Изучите профилактические и лечебные препараты, применяемые при стафилококковых и стрептококковых инфекциях. Посмотрите препараты, прочитайте этикетки, охарактеризуйте каждый препарат по схеме: что собой представляет (вакцина, анатоксин, сыворотка, иммуноглобулин и др.), что содержит (антиген, антитело), как приготовлен, для чего применяется. Если препарат лечебно-профилактический – какое оказывает действие на организм. Дозируется ли препарат и в каких единицах? Если диагностический – что выявляют с помощью этого препарата?
6. Исследование отделяемого раны на возбудителей анаэробной газовой инфекции. Ознакомьтесь с сопроводительной запиской и внесите данные в журнал. Приготовьте мазок из отделяемого раны, окрасьте по Граму, промикроскопируйте. Произведите посев на среду Китта–Тароцци, на среду Вильсон–Блера и на молоко. Проделанную работу и результаты запишите в журнал.
ЗАНЯТИЕ 26
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА АНАЭРОБНЫХ
ИНФЕКЦИЙ, ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ
ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ ПАЛОЧКОВИДНЫМИ
МИКРООРГАНИЗМАМИ (ПРОДОЛЖЕНИЕ), ДИФТЕРИИ
Хотя вызываемые анаэробами заболевания (столбняк, анаэробная газовая инфекция, ботулизм) встречаются сравнительно редко, лечение их представляет большие трудности, особенно при запоздалой диагностике. Поэтому важное значение приобретают профилактика и ранняя диагностика столбняка, анаэробной газовой инфекции и ботулизма.
В результате плановой специфической профилактики дифтерия в последние годы встречается в виде спорадических случаев. Однако наличие бактерионосительства и определённой прослойки неиммунизированных людей создает условия для возникновения отдельных случаев и даже вспышек дифтерии.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы вы должны знать свойства возбудителей столбняка, ботулизма и дифтерии. Составьте схемы лабораторной диагностики этих заболеваний и усвойте методы их специфической профилактики и лечения. Обратите внимание на особенности исследований для обнаружения неспорообразующих анаэробов, а также особенности лабораторных исследований при смешанных инфекциях.
Исходный уровень знаний
Восстановите в памяти методы культивирования и выделения чистых культур анаэробов, свойства экзотоксинов, особенности антитоксического иммунитета, получение и способы введения антитоксических гетерологичных сывороток для предупреждения аллергических реакций.
Цель занятия
1. Изучить принципы лабораторной диагностики инфекций, вызванных клостридиальными и неспорообразующими анаэробами.
2. Изучить принципы лабораторной диагностики инфекций, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами.
3. Ознакомиться с возбудителем ботулизма, его морфологией, культуральными свойствами и факторами патогенности.
4. Изучить принципы лабораторной диагностики ботулизма.
5. Ознакомиться с возбудителями дифтерии, их морфологией, культуральными свойствами и факторами патогенности.
6. Изучить принципы лабораторной диагностики дифтерии.
7. Ознакомиться с набором иммунобиологических препаратов для диагностики, лечения и профилактики анаэробных инфекций и дифтерии.
План изучения темы
1. Методы культивирования и выделения чистых культур анаэробов.
2. Характеристика возбудителей и лабораторная диагностика столбняка, анаэробной газовой инфекции.
3. Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых неспорообразующими анаэробами.
4. Характеристика аэробных грамотрицательных палочек и лабораторная диагностика гнойных и раневых инфекций, вызываемых этими бактериями.
5. Специфическая профилактика и лечение столбняка, анаэробной газовой инфекции.
6. Характеристика возбудителя ботулизма.
7. Характеристика возбудителей дифтерии.
Повторите по учебнику разделы: «Споры и спорообразование»; «Микробные токсины»; по руководству - методы культивирования и выделения чистых культур анаэробов. Обратите внимание на схемы микробиологических исследований при анаэробной газовой инфекции, столбняке, ботулизме.
После изучения темы студент должен уметь
1. Идентифицировать по культуральным свойствам P.aeruginosa и протей.
2. Проводить исследования при выделении возбудителя анаэробной газовой инфекции.
3. Классифицировать биологические препараты по теме занятия в соответствии с их назначением.
Контрольные вопросы
Перечислить методы культивирования анаэробов. Как создаются анаэробные условия при применении этих методов? Методы выделения чистой культуры анаэробов (назвать и описать). Какой материал нужно взять от больного с предполагаемым диагнозом «анаэробная газовая инфекция»? Опишите результаты, которые наблюдаются при посеве на соответствующие среды материала, содержащего Clostridium perfringens; через какой срок после посева нужно учитывать результаты? Какие препараты применяются для активной иммунизации против анаэробной газовой инфекции? В каких случаях проводится пассивная иммунизация против анаэробной газовой инфекции, какими препаратами, как они вводятся? Правила забора и пересылки в лабораторию материала от больного при подозрении на анаэробную инфекцию, вызванную неспорообразующими анаэробами. Культивирование неспорообразующих анаэробов: питательные среды, газовые смеси, длительность культивирования. Методы дифференцировки неспорообразующих анаэробов. Методы выделения и идентификации синегнойных палочек, протеев из гноя при раневой и гнойной инфекции. Характеристика возбудителя столбняка: название по-латыни, морфология (споры, жгутики, капсулы), отношение к окраске по Граму, способ биологического окисления, устойчивость спор, характер токсина: действие на организм, имеются ли серологические типы токсина. Столбняк у человека: механизм заражения, основной фактор патогенности. Методика обнаружения токсина в биологической пробе. Препараты для специфической профилактики и лечения. Плановая профилактика столбняка и профилактика столбняка по показаниям.
ЗАДАЧА. В больницу поступили два пациента, получившие травму (повреждение кожных покровов). При опросе выяснилось, что один из них, тракторист М., 22 лет, во время службы в армии получил плановые профилактические прививки, в том числе и против столбняка. Вторая пациентка, колхозница 50 лет, в последние 30 лет не прививалась против столбняка. Врач с целью профилактики столбняка назначил первому пациенту введение столбнячного анатоксина, второй – введение анатоксина и противостолбнячной сыворотки. Правильно ли сделал назначения врач? Почему в первом случае врач счёл возможным ограничиться введением анатоксина, а во втором назначил еще и сыворотку?
Характеристика возбудителя ботулизма: название, морфология, споры, жгутики, капсула, окраска по Граму, условия культивирования, гибнет ли при кипячении, характер токсина, серологические типы, отношение токсина к соляной кислоте и пищеварительным ферментам, к температуре 800С и к высоким концентрациям хлористого натрия. Ботулизм у человека: вследствие чего возникает заболевание, при каких условиях это может произойти; основной фактор патогенности возбудителя, действие его в организме; какие материалы берут для лабораторного исследования, что обнаруживают в исследуемом материале? Опишите методы обнаружения ботулинического токсина в крови больного, в пищевом продукте, определение типа токсина. Препараты для активной иммунизации и лечения ботулизма; что они содержат, в каких единицах дозируются?
Характеристика возбудителя дифтерии: название по-латыни, морфология (форма, взаимное расположение клеток, споры, жгутики, капсула, включения), отношение к окраске по Граму, специальные методы окраски; способ биологического окисления, среды для культивирования, характер роста на свёрнутой сыворотке и теллуритовой среде, биологические типы. Дифтерийный токсин: действие на организм, единицы измерения силы токсина, получение антитоксина. Опишите методику определения токсиногенности дифтерийной культуры (реакция преципитации в агаре); наиболее частая локализация местного процесса при дифтерии. Какие материалы берут от больных, а также при исследовании на носительство дифтерийной палочки? Опишите по дням ход исследования и результаты, которые наблюдаются при выделении токсигенного возбудителя дифтерии: как формулируется ответ на разных этапах исследования? Опишите по дням ход исследования и результаты, которые наблюдаются при выделении нетоксигенной дифтерийной палочки. Методы дифференцировки истинных дифтерийных палочек и дифтероидов: морфология, биохимическая активность, пробы на уреазу и цистиназу по антигенной структуре и вирулентности. Иммунитет при дифтерии: характер иммунитета, методы определения напряжённости иммунитета, продолжительность иммунитета после плановых прививок. Специфическая профилактика дифтерии; какие препараты применяются, с какого возраста начинают прививки? Препарат для специфической терапии дифтерии; что содержит, как получен, в каких единицах дозируется, как вводится?
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Написать в дневнике название по-латыни возбудителя столбняка и схему введения гетерологичной сыворотки (по Безредке).
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Изучение морфологии грамотрицательных палочек и патогенных анаэробов. Промикроскопируйте и зарисуйте окрашенные по Граму препараты чистых культур синегнойной палочки, протея, возбудителей анаэробной газовой инфекции, столбняка и ботулизма. Название возбудителей под рисунками напишите по-латыни.
2. Изучение культуральных свойств синегнойной палочки и протея. Просмотрите готовые посевы синегнойной палочки и протея на скошенном агаре и в чашках Петри с МПА. Обратите внимание на пигмент синегнойной палочки и характер роста протея.
3. Ознакомление с аппаратурой для выращивания анаэробов. Посмотрите аппараты Аристовского, анаэростат, эксикатор, трубки Вейон-Виньяля, посев по Фортнеру, среду Китта-Тароцци. Устно опишите, как создаются анаэробные условия в этих аппаратах и средах.
4. Продолжение исследования отделяемого раны (2-й день). Изучите характер роста микробов на средах Китта-Тароцци, Вильсон-Блера, молоке. Приготовьте мазок из среды Китта-Тароцци, окрасьте по Граму, промикроскопируйте, зарисуйте. Сделайте посев по Вейнбергу для выделения чистой культуры. Опишите проделанную работу.
5. Усвоение схемы исследования материала от больных на наличие:
а) неспорообразующих анаэробов;
б) грамотрицательных палочковидных микроорганизмов (синегнойная палочка, протей, кишечная палочка).
Расскажите устно и запишите схему исследования в дневнике.
6. Усвоение по таблицам микробиологической диагностики столбняка. Расскажите устно и запишите схему исследования в дневнике.
7. По таблицам разберите схему исследования при ботулизме. Изучите демонстрационный набор препаратов для диагностики и лечения ботулизма.
8. Изучение диагностических, профилактических и лечебных препаратов, применяемых при раневых анаэробных инфекциях. Посмотрите препараты, прочитайте этикетки, охарактеризуйте каждый препарат по схеме, приведенной на предыдущем занятии.
9. Исследование слизи зева на носительство дифтерийной палочки. Возьмите стерильным тампоном слизь из зева друг у друга и посейте на свёрнутую сыворотку. В журнале запишите паспортные данные обследуемого студента и проделанную работу (1-й день).
ЗАНЯТИЕ 27
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА АНАЭРОБНЫХ
ИНФЕКЦИЙ, ДИФТЕРИИ (ОКОНЧАНИЕ).
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА КОКЛЮША,
ГЕМОФИЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ, ЛЕГИОНЕЛЛЁЗА,
ТУБЕРКУЛЁЗА, ЛЕПРЫ, АКТИНОМИКОЗА
Заболеваемость коклюшем находится в прямой зависимости от уровня коллективного иммунитета. Клиническая диагностика коклюша в выраженной форме не представляет больших трудностей. Однако стёртые формы коклюша и паракоклюш могут быть выявлены только при использовании микробиологических методов исследования.
В последнее время всё чаще встречаются инфекционные заболевания, вызванные гемофильной палочкой. Для заболеваний, вызванных гемофильными бактериями, обязательно проводят бактериологическое исследование с определением антибиотикограммы возбудителя.
Легионеллёз относится к так называемым «новым» инфекциям, описан сравнительно недавно (1977 г.) Встречается в виде спорадических случаев или вспышек легионеллёзной пневмонии, лихорадочных заболеваний. Диагноз легионеллёза может быть подтверждён только микробиологическими и серологическими методами.
Заболеваемость туберкулёзом во многом зависит от социальных факторов, и при снижении социальной защищенности населения может увеличиваться. Однако в любых условиях уровень заболеваемости туберкулёзом различных локализаций (туберкулёз легких, костей, выделительной системы и др.) будет зависеть от того, насколько грамотно и своевременно врачами различных специальностей будет поставлен первичный диагноз туберкулёза. Решающее значение при этом имеют микробиологические исследования.
Заболевания, вызванные актиномицетами, встречаются сравнительно редко. Однако поставить диагноз актиномикоза по клиническим проявлениям бывает очень трудно. И здесь наиболее достоверные результаты можно получить с помощью микробиологических исследований.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения материала необходимо знать методы профилактики и лечения токсинемических инфекций, характеристику возбудителей коклюша, гемофильной инфекции, легионеллёза, туберкулёза, лепры и актиномикоза и лабораторные методы диагностики этих заболеваний, их профилактику и лечение.
Исходный уровень знаний
Методы окраски кислотоустойчивых бактерий, специальные среды для выращивания возбудителей туберкулёза, коклюша.
Цель занятия
1. Выработать чёткое понятие об инфекциях, вызываемых бордетеллами коклюша и паракоклюша.
2. Выработать чёткое понятие об инфекциях, вызываемых легионеллами.
3. Выработать чёткое понятие об инфекциях, вызываемых гемофильными микроорганизмами.
4. Изучить принципы лабораторной диагностики дифтерии, коклюша, паракоклюша, легионеллёзов, гемофильной инфекции.
5. Ознакомиться с набором иммунобиологических препаратов для диагностики, лечения и профилактики коклюша, паракоклюша, легионеллёзов, гемофильной инфекции.
6. Выработать представление о микобактериях как патогенных, условно-патогенных и сапрофитических микроорганизмах, широко распространённых в окружающей среде.
7. Изучить методы микробиологической диагностики туберкулёза и лепры.
8. Научиться классифицировать препараты для диагностики, лечения и специфической профилактики туберкулёза.
9. Изучить характеристику возбудителей актиномикоза у человека, методы диагностики заболевания.
План изучения темы
1. Микробиологическая диагностика, лечение и профилактика дифтерии, коклюша и гемофильной инфекции.
2. Особенности эпидемиологии, диагностики и лечения легионёллеза.
3. Микробиологическая диагностика, лечение и профилактика туберкулёза, лепры, актиномикоза.
После изучения темы студент должен уметь
1. Дифференцировать возбудителей дифтерии по морфологическим, тинкториальным, биохимическим и токсигенным свойствам.
2. Окрасить микропрепарат из мокроты больного туберкулёзом по Цилю-Нильсену и идентифицировать возбудителей туберкулёза.
3. Проводить идентификацию актиномицетов в тканях.
4. Классифицировать биологические препараты по теме занятия в соответствии с их назначением.
Дополнительная литература
1. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
2. Зубков М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. – М., 2002.
3. Йоргенсен Дж.Х. Микробиологический справочник для клиницистов / Дж.Х. Йоргенсен, М.А. Пфаллер. - М.: Медицина, 2006.
4. Мари П.Р. Клиническая микробиология / П.Р. Марри, И.Р. Шей. - М.: Медицина, 2006.
5. Маянский А.Н. Микобактерии: туберкулёз и микобактериозы / А.Н. Маянский, М.И. Заславская, Е.В. Салина. - Н-Новгород: Медицина, 2000.
6. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
7. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
8. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней / под ред. К.И. Матвеева. - М., 1973.
9. Страчунский Л.С. Современные методы клинической микробиологии / Л.С. Страчунский. - Смоленск, 2003.
10. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
Контрольные вопросы
Возбудитель коклюша. Название по-латыни. Морфология: форма, взаимное расположение, споры, жгутики, капсула, отношение к окраске по Граму. Физиология: требовательность к питательным средам, факторы роста, основные питательные среды, время образования и характер колоний, ферментативная активность. Антигенная структура; токсинообразование, характеристика токсинов. Источник инфекции, способ передачи, патогенез. Микробиологическая диагностика на ранней стадии заболевания: методы забора материала, питательные среды, выделение чистой культуры, критерии для отличия возбудителей коклюша от других бордетелл. Препараты для специфической профилактики и лечения. Гемофильные бактерии. Название возбудителей по-латыни. Морфология, отношение к окраске по Граму. Культуральные свойства, антигенная структура. Факторы патогенности. Основные формы инфекций, вызываемых гемофильными бактериями. Бактериологическое исследование при диагностике гемофильной инфекции. Специфическое лечение и профилактика. Легионеллы. Название возбудителя по-латыни. Морфология, отношение к окраске по Граму. Особенности физиологии: температурный оптимум, требовательность к питательным средам, тип биологического окисления, ферментативная активность. Антигенная структура, серологические группы, виды. Экология легионелл: постоянное место обитания, условия, способствующие их размножению и накоплению. Основные формы легионеллёза. Пути передачи. Микробиологическая диагностика. Препараты для лечения. Возбудители туберкулёза. Кем открыт первый возбудитель? Чем объясняется название «микобактерии»? Название по-латыни. Морфология: форма, морфологические варианты, зёрна Муха, споры, жгутики, капсула. Особенности химического состава туберкулёзных бактерий и связанных с этим свойств. Какой способ окраски применяется и на каких свойствах возбудителя он основан? Способ биологического окисления, среды для культивирования, скорость роста. Виды туберкулёзных палочек: различия между ними по морфологии, отношению к глицерину, по патогенности для человека и лабораторных животных. Токсические вещества туберкулёзных палочек, их действие в организме. Туберкулёз у человека: источники инфекции, пути проникновения возбудителя в организм; какие органы поражаются чаще всего? Особенности иммунитета при туберкулёзе, механизм иммунитета, аллергия; к какому типу аллергических реакций относится? Микробиологический диагноз туберкулёза: материалы для исследований, способы обогащения мокроты, схемы исследования, ускоренные методы диагностики, дифференцировка видов туберкулёзных палочек и способы дифференциации от потенциально-патогенных микобактерий, определение лекарственной устойчивости. Кожно-аллергическая проба; что вводится в организм, что образуется на месте введения при положительном результате? На какое состояние организма указывает положительный результат? Для чего ставится аллергическая проба? Специфическая профилактика: название вакцины; что содержит, как получена? С какого возраста производят вакцинацию, способ введения вакцины. Какой вид иммунитета формируется? Перечислите препараты, применяемые для лечения туберкулёза. Характеристика потенциально-патогенных микобактерий: классификация, название основных видов по-латыни. Морфология и физиология. Источники инфекции и условия возникновения заболеваний. Дифференцировка от возбудителей туберкулёза. Препараты для лечения. Характеристика возбудителя лепры: название по-латыни, морфология и физиология, абсолютный паразитизм. Распространение лепры, клинические формы, микробиологическая диагностика. Препараты для лечения. Возбудители актиномикоза: название по-латыни двух видов; наиболее часто вызывающих заболевания, морфология и физиология. Актиномикоз у человека. Какие органы поражаются чаще всего? Материалы для исследования, методы исследования. Препараты для диагностики и лечения.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Окончание исследования отделяемого раны. Изучите и опишите колонии в глубине агара в трубках Вейон–Виньяля; отберите и отметьте колонии, характерные для возбудителей анаэробной газовой инфекции; после распила трубки приготовьте мазки, окрасьте по Граму. На основании микроскопии мазков определите наличие сходства по морфологии (с учётом характера колоний) с возбудителями анаэробной газовой инфекции; сделайте вывод. Запишите предварительный диагноз в графу «Результат», в графе «Примечания» опишите, что необходимо ещё сделать для постановки окончательного диагноза.
2. Ознакомьтесь со схемами и запишите в дневник последова-
тельность исследований при диагностике коклюша, гемофильной инфек-
ции, легионеллёза.
3. Изучение посевов на носительство дифтерийной палочки. Изучите посев макроскопически, а затем приготовьте мазок со свёрнутой сыворотки, окрасьте по Нейссеру и кислым генциан-виолетом. После микроскопии приготовленного мазка и демонстрационного мазка из чистой культуры дифтерийной палочки (для сравнения) сделайте заключение: имеются ли палочки, сходные с дифтерийной, в изучаемом посеве.
4. Познакомьтесь по таблицам со схемой исследования при дифтерии, характером роста на теллуритовой среде колоний типов гравис и митис; методикой определения токсигенности дифтерийных палочек. Просмотрите и опишите «пёстрые» ряды культур дифтерийной палочки и дифтероидов, результаты проб на уреазу и цистиназу.
5. Изучение морфологии и культуральных свойств туберкулёзных палочек. Промикроскопируйте и зарисуйте демонстрационные препараты из культуры туберкулёзных палочек и микроколонии, полученные по методу Прайса. Изучите и опишите характер роста туберкулёзных палочек на питательных средах. Бактериоскопический диагноз туберкулёза: запишите в журнал данные из сопроводительной записки. Приготовьте из мокроты больного мазок, окрасьте по Цилю-Нильсену, микроскопируйте. Результаты занесите в журнал, сделайте вывод, заполните графу «Результат».
6. Изучение схемы микробиологической диагностики лепры. Микроскопируйте препарат из слизи носа больного лепрой.
7. Проведение бактериоскопической диагностики актиномикоза. Микроскопируйте и зарисуйте препарат «друза» в срезе из органа и мазок из чистой культуры актиномицетов. Изучите схему микробиологического диагноза актиномикоза.
8. Изучение диагностических, профилактических и лечебных препаратов, применяемых при коклюше, дифтерии, туберкулёзе. Посмотрите препараты, прочитайте этикетки, охарактеризуйте каждый препарат по схеме.
ЗАНЯТИЕ 28
ИТОГ ПО РАЗДЕЛУ «МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ ГНОЕРОДНЫМИ КОККАМИ,
ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ ПАЛОЧКОВИДНЫМИ И
АНАЭРОБНЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ДИФТЕРИИ, КОКЛЮША, ГЕМОФИЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ, ЛЕГИОНЕЛЛЁЗА, ТУБЕРКУЛЁЗА, ЛЕПРЫ, АКТИНОМИКОЗА»
Темы, изучение которых вы закончили, включают большую группу возбудителей и нозологических форм, имеющих общие черты и существенные различия. Поскольку на предстоящем занятии будет дана оценка вашим знаниям по этим важным разделам, необходима тщательная подготовка к итоговому занятию. Особенно важно обратить внимание на характеристику возбудителей раневых гнойных инфекций и возбудителей воздушно-капельных инфекций, так как вызываемые ими заболевания имеют широкое распространение и с ними в своей практике встречаются врачи всех специальностей. Важно также иметь в виду, что знания, которые вы получили, дадут возможность своевременной и обоснованной организации профилактических и лечебных мероприятий, а следовательно, обеспечат надежное излечение и предупреждение этих заболеваний.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения материала необходимо быть готовым ответить на контрольные вопросы по изученным разделам, хорошо ориентироваться в лабораторной диагностике, профилактике и лечении заболеваний, знать иммунобиологические препараты, их состав, приготовление и применение.
Исходный уровень знаний
Материалы занятий по данным разделам и необходимые сведения из общей части (см. занятия 24-27).
План изучения темы
Итог по разделу «Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками, грамотрицательными палочковидными и анаэробными микроорганизмами. Микробиологическая диагностика дифтерии, коклюша, гемофильной инфекции, легионеллёза, туберкулёза, лепры, актиномикоза». Последовательно повторите пройденный материал по учебнику, конспекту лекций, руководству, пособию. Знание лабораторной диагностики заболеваний проверьте по схемам в руководстве и своим записям в журнале и дневнике. Просмотрите на кафедре наборы иммунобиологических препаратов и проверьте свои знания о них. Обязательно потренируйтесь в ответах на контрольные вопросы.
После изучения раздела студент должен уметь
1. Проводить исследования для диагностики заболеваний, вызванных гноеродными кокками.
2. Проводить исследования для диагностики заболеваний, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами.
3. Проводить исследования для диагностики заболеваний, вызванных анаэробными микроорганизмами.
4. Проводить исследования для диагностики дифтерии.
5. Проводить исследования для диагностики туберкулёза, проказы.
6. Выбирать биологические препараты для диагностики, профилактики и терапии инфекций.
Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
Общая характеристика гноеродных кокков. Общая характеристика возбудителей анаэробных раневых инфекций и аэробных грамотрицательных палочек как возбудителей раневых инфекций. Характеристика стафилококков. Токсины и ферменты патогенности стафилококков, способы их обнаружения. Заболевания, вызываемые стафилококками. Схема исследования гноя при стафилококковых инфекциях. Исследование крови при подозрении на сепсис. Роль стафилококков в возникновении внутрибольничных инфекций. Препараты для лечения и профилактики стафилококковых инфекций. Характеристика стрептококков. Токсины и ферменты патогенности стрептококков. Классификация по гемолизу и антигенной структуре. Заболевания человека, вызываемые стрептококками: гнойные, негнойные, острозаразные. Роль стрептококка в этиологии скарлатины, ревматизма. Методы диагностики стрептококковых инфекций. Препараты для лечения. Характеристика пневмококков. Схема микробиологического исследования. Препараты для диагностики и лечения. Характеристика гонококков. Заболевания у человека. Лабораторная диагностика острой и хронической гонореи. Препараты для диагностики и лечения. Роль грамотрицательных палочковидных бактерий в этиологии гнойных и раневых инфекций; характеристика основных видов: синегнойная палочка, протей, кишечные палочки. Смешанные гнойные инфекции. Характеристика ассоциаций при гнойных и раневых инфекциях. Характеристика возбудителей анаэробной газовой инфекции: виды, морфология, условия культивирования, токсины и ферменты патогенности. Морфология, культуральные и биохимические особенности С.реrfringens. Схема лабораторной диагностики анаэробной газовой инфекции. Ускоренные методы диагностики. Биологические пробы для определения токсинов (составьте схему опыта). Препараты для диагностики, специфической профилактики и лечения анаэробной газовой инфекции. Характеристика неспорообразующих анаэробов: классификация, морфология, особенности культивирования, роль в этиологии раневых и гнойных инфекций. Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых неспорообразующими анаэробами. Препараты для лечения. Характеристика возбудителя столбняка, столбнячный токсин, его обнаружение с целью диагностики столбняка. Плановая профилактика столбняка и профилактика по показаниям. Препараты для специфической профилактики и терапии столбняка. Характеристика легионелл, особенности их физиологии и экологии. Заболевания (легионеллёзы), микробиологическая диагностика, препараты для лечения. Морфология, тинкториальные и культуральные свойства менингококков, резистентность по внешней среде. Классификация по антигенной структуре. Заболевания человека, вызываемые менингококками, значение носительства. Микробиологическая диагностика менингококковых заболеваний и носительства. Препараты для специфической профилактики, препараты для лечения. Возбудитель коклюша: морфология и физиология, антигенная структура, характеристика токсинов. Микробиологическая характеристика коклюша, дифференцировка возбудителей коклюша от других бордетелл. Препараты для специфической профилактики, препараты для лечения. Возбудители гемофильной инфекции: морфология, тинкториальные и культуральные свойства, факторы патогенности. Основные формы инфекций, вызываемых гемофильными бактериями. Бактериологическое исследование при диагностике гемофильной инфекции. Специфическое лечение и профилактика. Морфология, тинкториальные и культуральные свойства возбудителя дифтерии, токсинообразование. Определение токсигенности дифтерийных палочек. Микробиологическая диагностика дифтерии и дифтерийного носительства. Иммунитет при дифтерии, определение уровня иммунитета. Препараты для специфической профилактики и терапии дифтерии. Возбудители туберкулёза: виды туберкулёзных палочек, морфология, химический состав, способ окраски. Среды для культивирования, характер роста, длительность выращивания. Заболевания, вызываемые туберкулезными палочками. Особенности иммунитета. Аллергическая проба и её значение. Микробиологическая диагностика туберкулёза. Препараты для специфической профилактики, препараты для лечения туберкулёза. Потенциально-патогенные микобактерии и их роль в патологии человека. Характеристика возбудителей актиномикоза. Виды, патогенные для человека. Лабораторная диагностика актиномикоза, препараты для лечения.
ЗАДАЧА 1. При бактериологическом исследовании гноя обнаружены стафилококки. Достаточно ли этого для диагноза. Что нужно ещё сделать?
ЗАДАЧА 2. В поликлинику обратилась женщина по поводу резаной раны кисти. За последние 10 лет прививок против столбняка не получала. Как в данном случае провести профилактику столбняка?
ЗАДАЧА 3. В поликлинику обратился больной по поводу колотой раны стопы. Год назад во время службы в армии получал прививку столбнячным анатоксином. Какой препарат нужно ввести раненому? Почему? Какой вид иммунитета будет создан в данном случае?
ЗАДАЧА 4. Какими препаратами необходимо провести профилактику столбняка следующим лицам: рабочему с ожогом предплечья, иммунизированному столбнячным анатоксином год назад; ребёнку 8 лет с рваной раной голени, получившему ревакцинацию АКДС в 6 лет; строителю 50 лет с ранением бедра, получившему по поводу предыдущей травмы противостолбнячную сыворотку 10 дней тому назад.
ЗАДАЧА 5. В травматологический пункт доставлен в бессознательном состоянии водитель автомобиля с открытым переломом бедра после автомобильной катастрофы. Рана засыпана землёй. Профилактику каких заболеваний необходимо ему провести, какими препаратами, какие правила необходимо при этом соблюдать?
ЗАДАЧА 6. После вскрытия параректального абсцесса обнаружен гной со зловонным запахом, серого цвета с участками некротизированной ткани. Наличие каких микроорганизмов можно предположить? Как произвести забор и доставку материалов в лабораторию для подтверждения этого предположения?
ЗАДАЧА 7. В перевязочной хирург обнаружил, что повязка у боль-
ного окрасилась в сине-зелёный цвет. Наличие какого микроорганизма можно предположить? Как проверить это предположение?
ЗАНЯТИЕ 29
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ЗООНОЗНЫХ ИНФЕКЦИЙ - ЧУМЫ, ТУЛЯРЕМИИ, БРУЦЕЛЛЁЗА, СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
В результате широкого применения мер общей и специфической профилактики зоонозных инфекций на территории нашей страны длительное время не регистрировались случаи заболевания людей чумой, а туляремия, бруцеллёз и сибирская язва встречались в виде спорадических случаев. Однако до настоящего времени во многих регионах сохраняются природные очаги чумы и туляремии среди грызунов и заболевания бруцеллёзом и сибирской язвой среди домашних животных. В связи с этим сохраняется потенциальная возможность заболевания людей этими инфекциями, которая может реализоваться при снижении социальных условий жизни людей и внимания к профилактическим мероприятиям. Следовательно, для каждого сохраняется необходимость врача знания возбудителей, специфической профилактики и терапии зоонозных инфекций.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы Вы должны знать характеристики возбудителей чумы, туляремии, бруцеллёза, схемы микробиологических исследований при этих заболеваниях. Следует также уяснить, почему эти заболевания называются зоонозами, особо опасными, и какие меры предосторожности необходимы при работе с материалом, содержащим перечисленных возбудителей.
Исходный уровень знаний
Из курса общей микробиологии необходимо вспомнить культуральные свойства и факторы патогенности бактерий, методы и правила заражения и вскрытия животных, методы постановки реакции агглютинации.
Цель занятия
1. Ознакомить студентов с зоонозными инфекциями, обосновать высокую патогенность возбудителей для животных и человека.
2. Подчеркнуть эпидемический характер чумы, туляремии, бруцеллёза, множественность путей передачи, разнообразие клинических форм.
3. Показать особенности методов микробиологической диагностики чумы, туляремии, бруцеллёза.
4. Научить правильно подбирать биологические препараты для диагностики и профилактики изучаемых заболеваний.
План изучения темы
1. Характеристика возбудителей чумы, туляремии, бруцеллёза.
2. Правила забора, пересылки и работы с материалом, содержащим возбудителей особо опасных инфекций.
3. Схемы микробиологического диагноза чумы, туляремии, бруцеллёза.
4. Экспериментальный метод исследований: заражение животных с диагностической целью.
После изучения темы студент должен уметь
1. Дифференцировать возбудителей чумы, сибирской язвы, туляремии, бруцеллёза от сходных микроорганизмов.
2. Оценить результаты серологических реакций по определению антител в сыворотке крови больных бруцеллёзом и туляремией.
3. Классифицировать биологические препараты по теме в соответствии с их назначением.
Дополнительная литература
1. Бруцеллёз / под ред. П.А. Вершиловой. - М.: Медицина, 1972.
2. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
3. Зубков М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. – М., 2002.
4. Йоргенсен Дж.Х. Микробиологический справочник для клиницистов / Дж.Х. Йоргенсен, М.А. Пфаллер. - М.: Медицина, 2006.
5. Мари П.Р. Клиническая микробиология / П.Р. Марри, И.Р. Шей. - М.: Медицина, 2006.
6. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
7. Николаев Н.И. Чума / Н.И. Николаев. - М.: Медгиз, 1968.
8. Олсуфьев Н.Г. Таксономия, микробиология и лабораторная диагностика возбудителя туляремии / Н.Г. Олсуфьев. - М.: Медицина, 1975.
9. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней / под ред. К.И. Матвеева. - М.: Медицина, 1973.
10. Сибирская язва / П.Н. Бургасов и др. - М.: Медицина, 1970.
11. Страчунский Л.С. Современные методы клинической микробиологии / Л.С. Страчунский. - Смоленск, 2003.
12. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
Контрольные вопросы
Почему чуму, туляремию, бруцеллёз, сибирскую язву называют зоо-
нозными инфекциями, почему они относятся к особо опасным инфекциям? Возбудитель чумы: название по-латыни, морфология, споры, жгутики, капсула, особенность окраски, окраска по Граму, способ биологического
окисления, температурный оптимум роста, растёт ли на простых средах? Внешний вид колоний палочки чумы на плотной среде, какие колонии образуются вирулентными формами? Невирулентными формами? Характер роста в жидкой среде, антигенная структура, факторы вирулентности. Чума у человека: название по-латыни, источники инфекций, пути проникновения возбудителя в организм; перечислите клинические формы; наблюдается ли бактериемия? Микробиологический диагноз чумы: в каких лабораториях производится исследование, какие материалы берут от больного в зависимости от формы заболевания, какие ещё материалы исследуют; что обнаруживают в исследуемых материалах; назовите методы исследования; что необходимо сделать при обнаружении возбудителя чумы? Методы исследования при чуме: что обнаруживают при микроскопии мазка, какое значение имеет метод микроскопии; на какую среду делается посев материала, при какой температуре культивируется, по каким признакам идентифицируют культуру. С каким микробом дифференцируют палочку чумы; по каким признакам дифференцируют возбудителей чумы и псевдотуберкулёза? Каких животных заражают и каким способом? Возбудитель туляремии: название по–латыни, морфология, споры, жгутики, капсула, окраска по Граму, способ биологического окисления, среды для культивирования, образует ли экзотоксин, какие антигены содержит, с каким микробом имеет общий антиген? Туляремия у человека: источники инфекции, входные ворота; какие изменения в биологических свойствах туляремийной палочки происходят в организме человека, в чём это выражается, передаётся ли туляремия от больного человека к здоровому? Микробиологический диагноз туляремии; перечислите методы микробиологической диагностики туляремии: что мы обнаруживаем каждым из этих методов; какие материалы берут от больного; каково значение первичной микроскопии исследуемого материала, каким способом выделяют культуру микроба, в каких лабораториях производится исследование на обнаружение возбудителя? Что такое тулярин, что он содержит, для чего применяется, каким способом вводится, что наблюдается при положительной реакции? У кого наблюдается положительная реакция? Возбудители бруцеллёза: название по-латыни, у каких видов животных они встречаются; морфология, споры, жгутики, капсула, окраска по Граму; среды для культивирования, как скоро вырастает культура? Культуральная особенность Brucella abortus, как дифференцируют отдельные виды бруцелл, почему их нельзя дифференцировать по антигенной структуре? Токсинообразование. Бруцеллёз у человека: источники инфекции, как происходит заражение, ворота инфекции, пути распространения и преимущественная локализация; характер иммунитета; наблюдается ли перекрёстный иммунитет между видами бруцелл. Назовите методы микробиологической диагностики бруцеллёза, исследуемый материал, что обнаруживают с помощью каждого из этих методов; какие из методов нельзя использовать в обычной лаборатории? Реакция Райта: для чего применяется, что обнаруживают с помощью этой реакции, что служит исследуемым материалом, что, является диагностическим препаратом, техника постановки. То же о реакции Хеддльсона. То же о пробе Бюрне.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите по-латыни названия возбудителей чумы, туляремии, бруцеллёза (три вида), сибирской язвы.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Проведение серологической диагностики туляремии. Зарегистрируйте данные из сопроводительной записки в журнале. Поставьте реакцию агглютинации с сывороткой больного туляремией и туляремийным диагностикумом; после выдерживания пробирок в термостате при температуре 370С определите, до какого разведения сыворотки реакция положительная; сделайте вывод, запишите в графу «Результат».
2. Проведение серологической диагностики бруцеллёза (реакция Хеддльсона). Зарегистрируйте данные из сопроводительной записки в журнале. Поставьте реакцию агглютинации на стекле в модификации Хеддльсона. Учтите результат, сделайте вывод, запишите ход реакции и результат в журнал.
3. Изучение морфологии возбудителей чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы. Промикроскопируйте и зарисуйте готовые мазки, стрелками обозначьте особенности структуры (споры, капсулы).
4. Изучение культуральных свойств возбудителей чумы и сибирской язвы. Посмотреть макроскопически и с лупой колонии палочки чумы и сибирской язвы; зарисовать колонии в альбоме, отметить их особенности. Изучить характер роста палочек чумы и сибирской язвы на жидкой среде.
5. Начало микробиологической диагностики сибирской язвы. Зарегистрируйте данные из сопроводительной записки в журнале. Приготовьте мазок из отделяемого сибиреязвенного карбункула, окрасьте водным фуксином, микроскопируйте. Произведите посев отделяемого карбункула на МПА. Опишите ход проделанной работы и результаты микроскопии мазка в журнале.
ЗАНЯТИЕ 30
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЧУМЫ, ТУЛЯРЕМИИ, БРУЦЕЛЛЁЗА, СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ (ОКОНЧАНИЕ).
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА СПИРОХЕТОЗОВ
Заканчивая тему «Микробиологический диагноз зоонозных инфекций - чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы», обратите особое внимание на специфическую профилактику этих заболеваний, так как она занимает важное место в борьбе с зоонозными инфекциями.
Спирохеты представляют собой особую группу микроорганизмов, имеющих общие морфологические и физиологические свойства и существенные различия. Они вызывают различные заболевания, отличающиеся по клинической картине, механизму передачи, источнику инфекции и другим признакам. К группе спирохетозов относятся: зоонозные заболевания (лептоспироз), инфекции, передающиеся трансмиссионным путем (боррелиозы - болезнь Лайма и возвратные тифы) и широко распространённое венерическое заболевание - сифилис. Наиболее достоверной диагностикой спирохетозов является лабораторная диагностика, к изучению которой вы приступаете.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы Вы должны знать характеристики возбудителей сифилиса, боррелиозов, лептоспироза, схемы микробиологических исследований при этих заболеваниях.
Исходный уровень знаний
Из курса общей микробиологии необходимо вспомнить культуральные свойства и факторы патогенности бактерий, методы постановки серологических реакций.
Цель занятия
1. Усвоить характеристику возбудителя сибирской язвы.
2. Показать особенности методов микробиологической диагностики сибирской язвы.
3. Выработать чёткое понятие о спирохетозах, а именно о биологических свойствах возбудителей, эпидемиологии и патогенезе вызываемых ими заболеваний.
4. Изучить принципы лабораторной диагностики спирохетозов.
5. Научиться правильно подбирать биологические препараты для диагностики, лечения и профилактики заболеваний в соответствии с темой занятия.
План изучения темы
1. Характеристика возбудителей и схемы микробиологической диагностики сибирской язвы, лептоспирозов.
2. Специфическая профилактика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы, лептоспирозов.
3. Характеристика возбудителей боррелиозов (возвратные тифы, болезнь Лайма). Схемы микробиологической диагностики возвратных тифов; болезни Лайма.
4. Характеристика возбудителя сифилиса. Патогенез сифилиса, микробиологическая диагностика в зависимости от стадии заболевания.
После изучения темы студент должен уметь
1. Оценить результат реакции термопреципитации по Асколи и сделать заключение о выявлении сибиреязвенного антигена в исследуемом материале.
2. Дифференцировать возбудителей сифилиса, лептоспирозов, боррелиозов по морфологическим и тинкториальным признакам в микропрепаратах.
3. Интерпретировать результаты серологических реакций при обследовании на сифилис (реакции микропреципитации, теста ВДРЛ, используемых для профилактического обследования населения; РИБТ, РИФ (прямой и непрямой варианты), ИФА – как диагностические тесты).
4. Классифицировать биологические препараты по теме в соответствии с их назначением.
Дополнительная литература
1. Адаскевич В.П. Европейские стандарты диагностики и лечения заболеваний, передаваемых половым путём / В.П. Адаскевич. – М.: Медицина, 2004.
2. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
3. Зубков М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. – М., 2002.
4. Йоргенсен Дж.Х. Микробиологический справочник для клиницистов / Дж.Х. Йоргенсен, М.А. Пфаллер. - М.: Медицина, 2006.
5. Мари П.Р. Клиническая микробиология / П.Р. Марри, И.Р. Шей. - М.: Медицина, 2006.
6. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
7. Микробиологическая диагностика сибирской язвы / Л.И. Маринин, Г.Г. Онищенко, А.В. Степанов и др. – М.: ВУНМЦ МЗ РФ, 1999.
8. Онищенко Г.Г. Сибирская язва: актуальные аспекты микробиологии, эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики /
Г.Г. Онищенко Н.Т. Васильев, Н.В. Литусов. - М.: Медицина, 1999.
9. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
10. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней / под ред. К.И. Матвеева // М.: Медицина, 1973.
11. Страчунский Л.С. Современные методы клинической микробиологии / Л.С. Страчунский. - Смоленск, 2003.
12. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
Дополнительный материал к занятию
Методы диагностики сифилиса
Выявление возбудителя
Для обнаружения возбудителя в материале из сифилидов, полученном из пораженных участков наружных половых органов, заднего прохода, кожи и слизистой оболочки полости рта, а также инфицированных лимфатических узлов, применяют:
1) микроскопию в тёмном поле;
2) реакцию прямой иммунофлюоресценции (для образцов из поражений в полости рта или из других очагов, где возможна контаминация трепонемами-комменсалами);
3) полимеразную цепную реакцию (ПЦР).
Серологические тесты на сифилис подразделяются на:
а) нетрепонемные тесты: реакция микропреципитации с кардиоли-
пиновым антигеном (РМП), тест ВДРЛ (VDRL - Venerеal Disease Research Laboratory), тест быстрых плазменных реагинов (РПР) и их варианты.
б) трепонемные тесты: реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный анна-
лиз (ИФА), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ), иммуноблоттинг (Western blot).
в) специфические тесты для определения антител класса IgM к T.pallidum: 19S IgM-РИФ-абс., ИФА и иммуноблоттинг для определения IgM-антител к T. pallidum.
Для скрининговых (отборочных) обследований населения на си-
филис следует использовать:
1) реакцию микропреципитации (РМП) или РПР/ВДРЛ в сочетании с РПГА;
2) ИФА на IgG или суммарные трепонемоспецифические иммуног-
лобулины;
3) РИФ-абс. или IgM-ИФА при подозрении на первичный сифилис.
В случае если какой-либо из скрининговых тестов окажется положи-
тельным, используют любой из специфических подтверждающих трепонемных тестов:
1) РПГА, ИФА, РИФабс (или другой трепонемный тест, например, РПГА, если ИФА используется как скрининговый метод; ИФА, если в ка-
честве скринингового используется РПГА);
2) иммуноблоттинг на IgG к T.pallidum, если подозреваются ложно-
положительные результаты РПГА или РИФ.
Для контроля эффективности лечения используют РМП, РПР или ВДРЛ в количественном варианте.
Техника взятия крови для серологических реакций на сифилис
Кровь для исследования на РСК, РИФ и РИТ берут из локтевой вены натощак шприцем или одной иглой (самотёком). Шприц и игла должны быть после стерилизации промыты изотоническим раствором натрия хло-
рида (нельзя промывать водой, спиртом, кислотами, щелочами). В чистую сухую пробирку забирают 5–7 мл крови. Кровь для исследования экспресс-методом берут из пальца или из локтевой вены.
При необходимости для исследования в отдалённых лабораториях можно вместо крови пересылать сухие сыворотки. Для этого на следующий день после взятия крови сыворотку отделяют от сгустка. Затем набирают 1 мл сыворотки в шприц и выливают её в виде двух отдельных кружков на полоску писчей бумаги, вощаной бумаги или целлофана. На полоске бумаги с высушенной при комнатной температуре сывороткой надписываются фамилия, имя, отчество больного, возраст, дата взятия крови. Бумага свёртывается в виде аптечного пакетика для порошка. Пакетики вкладываются в конверт вместе с сопроводительным списком фамилий и указанием предполагаемого диагноза. Конверт немедленно отправляется почтой или нарочным в ближайшую серологическую лабораторию, занимающуюся серодиагностикой сифилиса. Срок годности сыворотки для южных окраин России не более 5 дней, для остальной части – 10 дней.
О способе взятия капель крови на бумагу
для агглютинации при лептоспирозе
Кровь из пальца в количестве 10-15 капель берут на полоску фильтровальной бумаги, высушивают при комнатной температуре и по почте отправляют в лабораторию. В лаборатории высушенные на бумаге капли крови вырезают, измельчают, заливают физиологическим раствором в отношении 1:10 с последующим разведением до титра. Высушенная кровь сохраняет антитела не менее месяца.
Контрольные вопросы
Возбудитель сибирской язвы: название по-латыни, морфология, расположение, споры, жгутики, капсула, окраска по Граму. Какими способами можно простерилизовать материал, заражённый сибиреязвенной палочкой? На каких средах культивируется, характер роста на плотной среде и в жидкой среде, отношение к желатину? Какие антигены содержит, какой из антигенов участвует в реакции Асколи; факторы вирулентности. Сибирская язва у человека: название по-латыни, источник инфекции, пути проникновения возбудителя в организм, перечислите клинические формы, наблюдается ли бактериемия. Микробиологический диагноз сибирской язвы; перечислите методы исследования, материалы для исследования. Что можно видеть при микроскопии мазка из исследуемого материала, какое значение имеет микроскопический метод? Выделение чистой культуры: ход исследования и результаты, отличие сибиреязвенных бацилл от непатогенных бацилл, какая диагностическая проба ставится на больном? Реакция Асколи: что это за реакция, что обнаруживают с помощью этой реакции, что служит исследуемым материалом; что является диагностическим препаратом, что он содержит, техника постановки. Препараты для специфической профилактики и терапии чумы, туляремии, бруцеллёза; работы отечественных ученых. Общая характеристика спирохет. Классификация спирохет: перечислите (по-латыни) названия родов, видов спирохет и заболевания, которые они вызывают. Возбудители лептоспирозов: название по-латыни рода и вида патогенных лептоспир, варианты лептоспир, циркулирующих в нашей стране; морфология лептоспир, характер движения, отношение к окраске, среды для культивирования, температурный оптимум роста. Источники и пути заражения человека. Микробиологическая диагностика: материалы для исследования, методы исследования в зависимости от сроков заболевания; особенности бактериоскопических, бактериологических исследований, серологическая диагностика. Препараты для диагностики, активной и пассивной профилактики, препараты для лечения. Какие возвратные тифы вы знаете (в зависимости от переносчика и ареала распространения)? Источники и механизм заражения. Возбудитель эпидемического возвратного тифа: морфология и физиология, отношение к окраске. Патогенез лихорадочных приступов: где находятся боррелии во время приступа; почему прекращается приступ; где сохраняется возбудитель в межприступный период; причины возникновения последующих приступов. Возбудители эндемического возвратного тифа: название по-латыни, морфология и физиология, переносчик. Микробиологическая диагностика возвратных тифов: материал для исследования, когда его нужно взять, что обнаруживают и каким способом? Препараты для лечения. Возбудитель болезни Лайма: название по-латыни, морфология и физиология, отношение к окраске. Источники и пути передачи, переносчик. Клинические проявления. Микробиологическая диагностика: материалы для исследования в разные периоды болезни, обнаружение возбудителя, серологическая диагностика. Препараты для лечения. Возбудитель сифилиса: название по-латыни, к какой группе микроорганизмов относится? Морфология, характер движения, отношение к окраске, чем оно объясняется? Отличие бледной трепонемы от сапрофитических трепонем; способы окраски препаратов; морфология трепонем в окрашенных препаратах. Способ биологического окисления, среды для культивирования; «культуральные» и «тканевые» трепонемы, различие между ними; отношение к температуре, высушиванию, дезинфицирующим веществам. Заболевание у человека: источник инфекции, входные ворота, пути заражения. Иммунитет при сифилисе, его особенности, проявления. Методы прямого выявление возбудителя сифилиса: материалы для исследования, способы обнаружения возбудителя. Серодиагностика сифилиса: в какие периоды заболевания проводится; какие серологические реакции применяются для диагностики сифилиса? Какие реакции применяются в качестве скрининговых и подтверждающих тестов? Какие тесты применяются для контроля эффективности лечения? Как забирается и пересылается материал для серодиагностики сифилиса. Препараты для диагностики и лечения сифилиса.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Напишите по-латыни названия возбудителей сифилиса, лептоспироза, эпидемического и эндемического возвратных тифов, болезни Лайма.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Окончание микробиологической диагностики сибирской язвы. Изучите колонии на чашках с посевом отделяемого сибиреязвенного карбункула, приготовьте мазки, окрасьте, промикроскопируйте. Результаты изучения колоний и микроскопии опишите в журнале.
2. Изучение препаратов для диагностики и специфической профилактики чумы, туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы, лептоспирозов. Познакомьтесь с набором препаратов и дайте характеристику каждого из них по известной вам схеме.
3. Ознакомление с микробиологической диагностикой лептоспирозов. Изучите схему микроскопической диагностики лептоспироза, промикроскопируйте культуру лептоспир в микроскопе с тёмным полем зрения.
4. Ознакомление с микробиологической диагностикой возвратных тарифов и болезни Лайма. Изучите схемы диагностики возвратных тифов и болезни Лайма. Промикроскопируйте и зарисуйте мазок из крови больного возвратным тифом, окрашенный по Романовскому-Гимза.
5. Изучение морфологии возбудителя сифилиса. Промикроскопируйте и зарисуйте мазок из отделяемого сифилитической язвы, окрашенный по Романовскому–Гимза.
6. Серологический диагноз сифилиса. Разберите методы, используемые для серологической диагностики сифилиса.
7. Ознакомление с методом пересылки высушенного препарата сыворотки для диагностики сифилиса. Повторите устно методику взятия и высушивания сыворотки для серологических реакций. Познакомьтесь с готовым препаратом для пересылки сыворотки.
ЗАНЯТИЕ 31
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА МИКОЗОВ,
РИККЕТСИОЗОВ, ХЛАМИДИОЗОВ И МИКОПЛАЗМОЗОВ
Микроскопические грибы широко распространены в природе. Большинство видов ведут сапрофитический образ жизни, но некоторые из них входят в состав нормальной микрофлоры организма человека, а другие могут вызывать заболевания. Микроскопические грибы вызывают разнообразные заболевания с поражением кожи, слизистых, а также внутренних органов. В последние годы в связи с широким применением антибиотиков широкого спектра действия и нарушением состава нормальной микрофлоры часто развиваются кандидозы за счёт дрожжеподобных грибов рода Cаndidа. Клиническая диагностика микозов затруднительна, поэтому наиболее достоверные основания для диагноза получают в результате микробиологических исследований.
На данном практическом занятии вы должны усвоить методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых микроорганизмами, относящимися к группе абсолютных паразитов (риккетсии, хламидии). На территории нашей страны встречаются различные формы риккетсиозов, но наиболее часто – Ку-лихорадка и в виде спорадических случаев – эпидемический сыпной тиф.
Особенно широкое распространение в последние годы получили заболевания, передающиеся половым путём, причиной которых являются хламидии и микоплазмы. Эти возбудители вызывают поражение слизистых мочеполовых путей и часто являются причиной бесплодия. Кроме того, микоплазмы могут вызывать поражения верхних дыхательных путей и пневмонии. Учитывая особенности этих возбудителей и непрерывно увеличивающуюся заболеваемость, врачу любой специальности важно знать методы забора и пересылки материалов от больных, а также возможности лабораторной диагностики хламидийных и микоплазменных инфекций.
Цель самоподготовки
После самостоятельной подготовки Вы должны знать: характеристику и классификацию микроскопических грибов; схемы микробиологического диагноза микозов; свойства риккетсий, хламидий, микоплазм и схемы микробиологической диагностики вызываемых ими заболеваний.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо из курса общей микробиологии повторить морфологию и физиологию микроскопических грибов, риккетсий, хламидий и микоплазм.
Цель занятия
1. Усвоить характеристику микроскопических грибов и диагностику вызываемых ими инфекций.
2. Выработать чёткое понятие о риккетсиях, хламидиях и микоплазмах, а именно о биологических свойствах возбудителей, эпидемиологии и патогенезе вызываемых ими заболеваний.
3. Изучить принципы лабораторной диагностики указанных заболеваний.
4. Научиться обосновывать выбор биопрепаратов для диагностики, лечения и профилактики сыпного тифа, Ку-лихорадки, хламидиозов и микоплазмозов.
План изучения темы
1. Характеристика микроскопических грибов и схемы микробиологической диагностики микозов.
2. Характеристика, классификация риккетсий и риккетсиозов; микробиологическая диагностика риккетсиозов.
3. Характеристика хламидий, микоплазм; микробиологическая диагностика хламидиозов и микоплазмозов.
4. Препараты для диагностики, профилактики и лечения перечисленных заболеваний.
После изучения темы студент должен уметь
1. Применить методы микробиологической диагностики микозов, риккетсиозов, хламидиозов, микоплазмозов.
2. Интерпретировать результаты различных методов диагностики этих заболеваний.
3. Классифицировать иммунобиологические препараты по теме занятия в соответствии с их назначением.
Дополнительная литература
1. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
2. Джавец Э. Руководство по медицинской микробиологии / Э. Джавец, Д.Ж. Мельник, Э. Эйдельберг. - М., 1982. - Т. 2: Медицинская микология.
3. Зубков М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. – М., 2002.
4. Ильин И.И. Негонококковые уретриты у мужчин / И.И. Ильин. - М.: Медицина, 1991.
5. Йоргенсен Дж.Х. Микробиологический справочник для клиницистов / Дж.Х. Йоргенсен, М.А. Пфаллер. - М.: Медицина, 2006.
6. Кашкин П.Н. Практическое руководство по медицинской микробиологии / П.Н. Кашкин, В.В. Лисин. - М., 1983.
7. Козлова В.И. Вирусные и микоплазменные заболевания генита-
лий / В.И. Козлова, А.Ф. Пухнер. - М., 1995.
8. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путём / Н.М. Овчинников и др. - М., 1987.
9. Мари П.Р. Клиническая микробиология / П.Р. Марри, И.Р. Шей. - М.: Медицина, 2006.
10. Маянский А.Н. Введение в медицинскую микологию / А.Н. Маянский, М.И. Заславская, Е.В. Салина. - Н-Новгород: Медицина, 2000.
11. Медицинская микробиология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб., 1999.
12. Степанова Ж.В. Грибковые заболевания / Ж.В. Степанова. - М., 1996.
13. Страчунский Л.С. Современные методы клинической микробиологии / Л.С. Страчунский. - Смоленск, 2003.
14. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
Дополнительный материал к занятию
Лабораторная диагностика кандидозов
Среди лабораторных методов диагностики кандидозов наибольшее значение придают микроскопическому, серологическому и несколько меньше – культуральному методу. Микроскопируют или нативные неокрашенные препараты, или окрашенные обычными, применяемыми в лаборатории способами. Единичные дрожжевые клетки можно встретить в мокроте, кале, моче здоровых лиц, поэтому этим находки не имеют диагностического значения. Патологической картине соответствует наличие большого числа элементов гриба в виде почкующихся клеток (2-4 микрона в диаметре) и особенно нитей мицелия. Обнаружение грибов даёт основание для диагноза кандидоза только в сочетании с клиническими проявлениями. Серологические исследования имеют большое значение при висцеральных формах кандидозов. Ставят реакцию связывания комплемента, реакцию агглютинации и др. Антигены для реакции готовят из культуры гриба, антитела обнаруживают в крови больного. Выращивание культуры из исследуемого материала имеет ограниченное значение, так как у 30-50% здоровых лиц при посеве мокроты, кала, мочи, соскобов со слизистых оболочек можно получить рост грибов рода Candida. Получение культуры, безусловно, доказательно при посеве крови, спинномозговой жидкости, пунктата лимфатических узлов, закрытых абсцессов и малоубедительно при посеве мокроты, кала, мочи, соскобов со слизистых оболочек полости рта, гениталий, если в этом материале при микроскопическом исследовании грибы не были обнаружены. Посев материала производят на среду Сабуро и выращивают при 300С. Через 2-3 суток вырастают белые сметанообразные колонии. При микроскопии обнаруживают нити мицелия и большое количество почкующихся круглых или овальных клеток. Обнаружение мицелия обязательно для отличия от истинных дрожжей. Этих морфологических данных достаточно для определения грибов рода Candida. Определение вида для практических целей не обязательно. Более чем в 80% случаев заболевание бывает обусловлено видом Candida albicans.
Контрольные вопросы
Возбудители грибковых заболеваний: классификация патогенных грибов, характеристика основных возбудителей и вызываемые ими заболевания. Кандидозы: морфология, сходство и отличие возбудителей от дрожжевых грибов, среды для культивирования; микробиологическая диагностика: значение бактериологического и бактериоскопического методов исследования; серологические методы исследования. Дерматомикозы: название возбудителей по-латыни и вызываемых ими заболеваний. Микроскопический метод диагностики; материалы для исследования; подготовка препаратов и способ микроскопии; признаки, дифференцирующие возбудителей заболевания. Риккетсии, их положение в систематике микроорганизмов. Перечислите патогенные риккетсии и вызываемые ими заболевания. Возбудитель сыпного тифа: название по–латыни, морфология и физиология, способы окраски, антигенная структура, токсинообразование. Источник инфекции при сыпном тифе, локализация возбудителя у него; переносчик, как он заражается, локализация возбудителя у него; механизм заражения человека. Серодиагностика сыпного тифа: какие реакции ставятся и какие антигены для их постановки используются? Какие серологические реакции используются для отличия текущего заболевания от перенесённого в прошлом (анамнестического)? Что такое болезнь Брилля? Как с помощью серологических методов дифференцировать болезнь Брилля от первичного сыпного тифа? Возбудитель Ку-лихорадки: название по–латыни, морфология и физиология, устойчивость во внешней среде, отличия в антигенном отношении от других риккетсий. Ку-лихорадка: источники инфекции, пути передачи, распространение. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика Ку-лихорадки. Хламидии: общая характеристика, классификация; особенности физиологии, способы культивирования. Возбудители орнитоза: название по-латыни. Источники инфекции. Лабораторная диагностика, лечение и профилактика орнитоза. Хламидии – возбудители трахомы и негонорейных уретритов: современная классификация, название по-латыни; источники инфекции; нозологические формы. Этиологическая роль в возникновении негонорейных уретритов, распространение, способы передачи, современные данные о значении хламидий, как возбудителей инфекции, передающейся половым путём. Лабораторная диагностика, профилактика и лечение урогенитального хламидиоза. Микоплазмы: общая характеристика, особенности морфологии и физиологии. Классификация микоплазм: название класса, родов, видов. Микоплазмы: нозологические формы, источники инфекции, пути передачи, факторы патогенности микоплазм. Микоплазмы – возбудители заболеваний дыхательных путей и мочеполового тракта (назовите по-латыни). Лабораторная диагностика, профилактика и лечение микоплазмозов.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
1. Напишите медицинскую классификацию микроскопических грибов с названиями по-латыни нитчатых грибов, дрожжей и дрожжеподобных грибов, возбудителей дерматомикозов и глубоких микозов.
2. Напишите современную классификацию риккетсий. Напишите названия (по-латыни) патогенных хламидий и микоплазм.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Ознакомление с микробиологической диагностикой грибковых заболеваний. Изучите схемы микробиологической диагностики микозов. По готовым посевам изучите характер роста грибов рода Candida на питательных средах; приготовьте мазки из культуры гриба рода Candida, окрасьте метиленовым синим, промикроскопируйте, зарисуйте; опишите морфологические признаки, отличающие грибы рода Candida от дрожжевых грибов.
2. Изучение морфологии риккетсий Провачека. Промикроскопируйте и зарисуйте готовый мазок, обратите внимание на морфологические формы риккетсий.
3. Серологическая диагностика сыпного тифа. Зарегистрируйте данные из сопроводительной записки в журнал. Поставьте развёрнутую реакцию агглютинации с сывороткой сыпнотифозного больного и риккетсиозным диагностикумом. Сделайте вывод и запишите в журнал результаты реакции и сформулированный вывод.
4. Ознакомление с дифференциальной диагностикой первичного сыпного тифа и болезни Брилля. Посмотрите готовую РСК в двух рядах пробирок: с нативной сывороткой больного и с сывороткой этого же больного, обработанной цистеином. Запишите результат, сделайте вывод, устно объясните результат и обоснуйте сделанный вывод.
5. Ознакомление с препаратами для диагностики и специфической профилактики риккетсиозов. Познакомьтесь с каждым препаратом в наборе и устно опишите его состав, назначение и применение.
6. Изучение схем микробиологической диагностики хламидийной и микоплазменной инфекций. Посмотрите и зарисуйте мазок из соскоба слизистой при хламидийной инфекции.
ЗАНЯТИЕ 32
МОРФОЛОГИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ ВИРУСОВ. МЕТОДЫ
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСОВ.
ВОЗБУДИТЕЛИ ГРИППА
Вирусные заболевания занимают доминирующее положение в ин-
фекционной патологии человека и, по-видимому, являются одной из причин возникновения опухолей. В последние годы описано несколько новых, ранее неизвестных нозологических форм вирусных инфекций, в том числе и такое грозное заболевание, как ВИЧ-инфекция. Поэтому вирусология в настоящее время является одним из наиболее развивающихся и имеющих практическое значение разделов медицинской микробиологии и медицины. Отсюда, для современного врача любой специальности необходимо знать биологические особенности вирусов, методы их культивирования, механизмы взаимодействия с клетками, а также методы микробиологической диагностики вирусных инфекций, которые имеют существенные особенности. Отличительной особенностью вирусов является их абсолютный паразитизм и убиквитарность: они способны поражать животные, растительные организмы и микроорганизмы.
Наиболее распространёнными вирусными инфекциями являются острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ) - грипп и острые рес-
пираторные заболевания (ОРЗ), которые могут за короткое время поражать большие контингенты людей. Среди них на первом месте по масштабу вызываемых вспышек и по тому ущербу, который наносится здоровью человека и экономике, стоят вирусы гриппа.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студенты должны знать: положение вирусов в системе живых организмов; особенности вирусов, присущие только им; строение вириона (схемы строения, типы симметрии); современную классификацию вирусов и её принципы; этапы взаимодействия вирусов с чувствительными клетками; методы культивирования вирусов, признаки репликации вирусов в клетке.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо знать структуру и функции нуклеиновых кислот, биосинтез белков (биохимия), строение клеток культуры тканей, строение куриного эмбриона (гистология), структуру, свойства и взаимодействие с клетками бактериофагов (микробиология).
Цель занятия
1. Изучить строение и культивирование вирусов.
2. Изучить принципы обнаружения и идентификации вирусов.
3. Показать разнообразие возбудителей острых респираторных вирусных инфекций.
4. Изучить строение, антигенные свойства вируса гриппа.
5. Освоить принципы лабораторной диагностики гриппа.
6. Научить классифицировать препараты для диагностики, лечения и профилактики гриппа.
План изучения темы
1. Морфология, физиология и классификация вирусов.
2. Методы культивирования вирусов.
3. Методы обнаружения и идентификации вирусов.
4. Характеристика возбудителей гриппа.
5. Методы диагностики гриппа; лечение и специфическая профилактика гриппа.
После изучения темы студент должен уметь
1. Исследовать в реакции гемагглютинации (РГА) полученную из заражённых куриных эмбрионов аллантоисную жидкость на присутствие вируса гриппа.
2. Учесть результаты идентификации выделенного вируса гриппа в реакции торможения гемагглютинации (РТГА).
Дополнительная литература
1. Авакян А.А. Атлас анатомии и онтогенеза вирусов / А.А. Авакян, А.Ф. Быковский. - М.: Медицина, 1970.
2. Букринская А.Г. Вирусология / А.Г. Букринская. - М.: Медицина, 1986.
3. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
4. Быковский А.Ф. Атлас вирусной цитопатологии / А.Ф. Быковский, Ф.И. Ершов. - М.: Медицина, 1975.
5. Грипп / Под ред. Г.И. Карпухина. - М.: Медицина, 1986.
6. Грипп / А.Ф. Фролов, Е.А. Шаблонская, Л.Ф. Шевченко и др. - Киев: Здоровье, 1985.
7. Медицинская вирусология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2002.
8. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
9. Павлович С.А. Основы вирусологии / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 2001.
10. Общая вирусология / С. Лурия, Дж. Дарнелл, Д. Балтимор,
Э. Кампбелл. - М.: Мир, 1981.
11. Общая медицинская вирусология: учеб. пособие / Н.С. Горячкина и др.; под ред. Н.С. Горячкиной, Л.И. Кафарской. – Ростов н/Д: Феникс, 2007.
12. Общая и частная вирусология: в 2 т. / под ред. В.М. Жданова. - М.: Медицина, 1982.
13. Страчунский Л.С. Современные методы клинической микробиологии / Л.С. Страчунский. - Смоленск, 2003.
14. Фролов А.Ф. Практическая вирусология / А.Ф. Фролов, П.Ф. Шевченко, В.П. Широбоков. - Киев: Здоровье, 1989.
15. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
Дополнительный материал к занятию
Методы культивирования вирусов
Для культивирования вирусов используют следующие методы:
1) заражение животных (внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, интраназально, заражение в мозг и другие);
2) на куриных эмбрионах после заражения их на хорион-аллантоисную оболочку, в аллантоисную полость, в амниотическую полость, в желточный мешок;
3) на культуре клеток различных тканей.
Культура ткани - это клетки ткани, выращенные вне организма на специальной питательной среде. Клетки ткани в искусственных условиях сохраняют присущий им обмен веществ и восприимчивость к определённым вирусам. Наиболее пригодными для культивирования вирусов являются клетки с быстрым ростом и высоким уровнем обмена веществ. По этой причине широко применяют эмбриональные ткани (фибробласты куриных эмбрионов, клетки амниона человека и др.), а также культуры тканей опухолей. Выращивание клеток культур тканей производят в специальных флаконах (колбы-матрацы, флаконы Карреля и др.) и в пробирках. Культура клеток для роста должна иметь какую-либо опору, например, пластинки стекла, стенку пробирки. В выросшую культуру ткани, которая покрывает стенку сосуда или пластинку стекла в виде однослойного клеточного пласта, засевают материал, содержащий вирус. Работу производят в стерильных условиях. Для подавления роста другой микрофлоры (кроме вирусов) вируссодержащий материал предварительно обрабатывают антибиотиками, чаще пенициллином и стрептомицином. Размножение вируса в клетках определяют по цитопатическому действию (ЦПД): в результате размножения вируса в клетках при микроскопии обнаруживаются включения, дегенеративные изменения и в конечном итоге клетки гибнут. Так как рост клеток прекращается, рН среды мало изменяется по сравнению с контролем (клетки без вируса). В связи с этим не изменяется и цвет среды. Питательной средой для культуры тканей могут быть различные растворы, состав которых приближается к составу жидкостей организма (синтетическая среда 199, солевой раствор Хенкса с сывороткой, гидролизат лактальбумина с сывороткой и другие). В настоящее время в вирусологической практике чаще всего применяют свежие культуры клеток (первичные или первично-трипсинизированные) и перевиваемые культуры (линии) клеток.
Первично-трипсинизированные культуры клеток готовят из органов взрослых животных (чаще из почек обезьян и других животных) и эмбрионов человека, куриных фибробластов путём трипсинизации кусочков тканей с последующим культивированием клеток в питательной среде. С этой целью кусочки тканей измельчают ножницами (или другим способом), а затем промывают буферным раствором Хенкса для удаления клеток крови и обрабатывают 0,25-0,3% раствором трипсина. Трипсин разрушает межклеточные мостики и разъединяет клетки. С помощью камеры Горяева подсчитывают количество клеток, разводят до концентрации 400000 клеток в 1 мл. Полученную взвесь клеток разливают в пробирки, плотно закрывают стерильными резиновыми пробками и помещают в термостат при 370С в почти горизонтальном положении (под углом 50) в специальных штативах. Через 3-4 дня на стенке пробирки образуется сплошной слой размножившихся клеток. Пробирки с хорошим ростом ткани отбирают для заражения вирусом.
Перевиваемые культуры клеток (растущие) – это стабильные линии клеток, пассируемые вне организма в течение многих лет. Их получают из злокачественных опухолей и из нормальных (эмбриональных) тканей человека и животных. К ним относятся: 1) линия Неlа - клетки карциномы шейки матки человека; 2) линия Нер-2 – клетки злокачественной опухоли гортани человека; 3) линия Детройт-6 – клетки, выделенные из костного мозга человека, больного раком лёгких; 4) линии А-0 и А-1 – клетки амниона человека; 5) линия СОЦ – клетки сердца обезьяны циномольгус и другие.
Полуперевиваемые или диплоидные культуры клеток – это клетки тканей человека, сохраняющие в процессе пассажей - до года - диплоидный набор хромосом. Диплоидные клетки человека не подвергаются злокачественному перерождению и этим выгодно отличаются от опухолевых.
Методы обнаружения вирусов в культуре ткани
Цитопатическое действие (ЦПД).
Реакция гемадсорбции.
Метод «цветных» проб.
Метод бляшек.
Иммунофлюоресцентный метод.
Реакция связывания комплемента.
Реакция гемагглютинации.
Реакция преципитации в агаре.
Заражение животных, восприимчивых к данному вирусу.
Методы определения вида и типа вирусов
Определение вида и типа вирусов в вируссодержащем материале производится путём нейтрализации вирусов специфическими сыворотками. Результат нейтрализации может быть установлен на основании следующих признаков:
1) нейтрализация ЦПД;
2) нейтрализация гемадсорбции;
3) задержка (торможение) гемагглютинации;
4) цветная проба;
5) свечение клеток, содержащих вирус, под влиянием специфических флюоресцирующих сывороток;
6) нейтрализация в опыте на животных (у опытных животных инфекция не развивается).
Возбудителями ОРВИ являются следующие вирусы:
РНК–содержащие вирусы.
1. Ортомиксовирусы (вирусы гриппа А, В, С).
2. Парамиксовирусы (парагриппозные вирусы, вирус эпидемического паротита, вирус Ньюкастла, вирус кори, респираторно-синцитиальный вирус).
3. Пикорнавирусы (более 110 серотипов риновирусов, некоторые серотипы вирусов Коксаки (А и В) и ЕСНО).
4. Реовирусы (3-й серотип).
5. Коронавирусы.
ДНК–содержащие вирусы.
6. Аденовирусы (из 41 серотипа 8 являются возбудителями ОРВИ).
Для диагностики ОРВИ применяются следующие методы:
1. Вирусологические – заражение культур клеток и куриных эмбрионов.
2. Иммунофлюоресцентный (метод ускоренной диагностики).
3. Серологические реакции – РТГА, РСК, ИФА.
4. Использование РНК–зондов.
Контрольные вопросы
Положение вирусов среди живых организмов, к какому царству они относятся? Основные особенности вирусов, присущие только им. Размеры вирусов (мелкие, средние, крупные), способы определения размеров вирусов. Как называется зрелая вирусная частица? Строение простых и сложных вирусов: типы симметрии, составные части вирусной частицы, внешняя оболочка; примеры простых и сложных вирусов. Принципы классификации вирусов. Назовите основные семейства, роды и виды РНК- и ДНК–содержащих патогенных вирусов. Методы культивирования вирусов. Виды культур тканей, их характеристика и способы получения. Питательные среды для выращивания культур тканей. Куриные эмбрионы: строение, методы и условия заражения куриных эмбрионов. Основные этапы репродукции вирусов в клетке. Методы обнаружения вирусов в культуре ткани. Что такое внутриклеточные включения? Что такое цитопатическое действие вирусов? Методы определения вида и типа вирусов. Как определить ЦПД вируса? Способы обнаружения вирусов в заражённом курином эмбрионе.
Перечислите основных возбудителей острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ). Вирус гриппа: к какому семейству вирусов относится; форма, тип симметрии, схема строения, особенности генома, антигены и серологическая реакция. По каким антигенам определяют тип и подтип вирусов гриппа? Антигенная изменчивость вируса гриппа. Методы диагностики, применяемые в первые дни заболевания и для ретроспективной диагностики. Реакция гемагглютинации, способ постановки. Реакция торможения гемагглютинации, что можно определить с помощью этой реакции (два варианта)? Какие диагностические препараты нужны для этого? Составьте схему реакции торможения гемагглютинации для определения типа и подтипа вируса гриппа. Специфическая профилактика и лечение гриппа, препараты и их характеристика.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Изучение морфологии вирусов по таблицам, электронограммам и слайдам. Усвойте строение различных вирусов, особенности и биологическую роль отдельных структур вирионов.
2. Изучение морфологии элементарных телец Пашена. При микроскопии готового препарата найдите тельца Пашена, зарисуйте их, объясните, почему в данном случае вирусы видны в световом микроскопе.
3. Микроскопия и зарисовка нормальных и заражённых вирусом культур клеток. Изучите морфологию клеток культуры ткани, убедитесь в наличии одного слоя клеток, объясните преимущества однослойных культур. Сравните нормальную культуру клеток с культурой клеток, заражённых вирусом с наличием ЦПД. Изучите препарат гемадсорбции. Зарисуйте препараты.
4. Вирусологическая диагностика гриппа:
а) зарегистрируйте данные из сопроводительной записки в журнал;
б) поставьте реакцию гемагглютинации со смывом с носоглотки больного;
в) учтите результаты серологической диагностики гриппа (демонстрация): РТГА с парными сыворотками для обнаружения противогриппозных антител; РТГА для определения типа и подтипа вируса гриппа;
г) ускоренный метод диагностики гриппа с помощью иммунофлюоресценции (разбор и демонстрация).
5. Изучение препаратов, применяемых для диагностики лечения и специфической профилактики гриппа.
ЗАНЯТИЕ 33
ВИРУСЫ - ВОЗБУДИТЕЛИ ОСТРЫХ РЕСПИРАТОРНЫХ
ЗАБОЛЕВАНИЙ (ОРЗ), ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ
Возбудители острых респираторных вирусных инфекций объединены в общую группу на основании способности проникать в организм преимущественно через слизистую оболочку верхних дыхательных путей и способности размножаться в клетках, продуцирующих муцин (миксотропность вирусов), а также общих принципов лабораторной диагностики. Кроме вирусов гриппа, к ним относятся и возбудители острых респираторных заболеваний, которые, наряду с поражением дыхательных путей могут поражать другие ткани и органы человеческого организма. Так, вирус паротита преимущественно поражает слюнные железы, ткани яичек у мальчиков, а вирус краснухи вызывает системное поражение лимфатических узлов, эмбриональных тканей плода при беременности, пикорнавирусы и герпесвирусы вызывают поражение нервной ткани. Аденовирусные инфекции широко распространены и составляют 5-10% всех вирусных патологий. В феврале 2003 года в Юго-Восточной Азии впервые зарегистрирована вспышка до сих пор неизвестного острого респираторного заболевания (severe acute respiratory syndrome - SARS). Поскольку у многих больных развивается тяжёлая пневмония, приводящая к смертельному исходу, это заболевание часто называют «атипичной вирусной пнемонией», возбудителем которой является новый вирус из семейства Coronaviridae.
Герпесвирусы вызывают самые различные поражения: слизистых глаз, гениталий, кожи, центральной нервной системы, внутренних органов (гепатиты, колиты, пневмонии), в определённых условиях – неоплазии.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студенты должны знать: характеристику, методы диагностики, лечения и профилактики возбудителей ОРЗ, краснухи, герпетической инфекции.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо знать структуру и культивирование вирусов, методы обнаружения вирусов и диагностики острых респираторных вирусных инфекций.
Цель занятия
1. Изучить строение и свойства вирусов кори, эпидемического паротита, коронавирусов, аденовирусов, краснухи.
2. Изучить принципы лабораторной диагностики кори, эпидемического паротита, SARS, аденовирусной инфекции, краснухи.
3. Изучить вирусы семейства Herpesviridae, их свойства, разнообразие клинических проявлений герпетических инфекций.
4. Изучить принципы лабораторной диагностики герпетических инфекций.
5. Научиться классифицировать препараты для диагностики, лечения и профилактики в соответствии с темой занятия.
План изучения темы
1. Характеристика возбудителей ОРЗ (парамиксовирусов, коронавирусов, аденовирусов).
2. Характеристика возбудителя краснухи.
3. Характеристика возбудителей герпетической инфекции.
4. Методы диагностики ОРЗ, краснухи, герпетической инфекции; лечение и специфическая профилактика ОРЗ, краснухи и герпеса.
После изучения темы студент должен уметь
1. Оценить результаты серодиагностики разных респираторных вирусных инфекций в РСК и РТГА.
2. Использовать методы лабораторной диагностики кори, паротита, краснухи для подтверждения клинического диагноза этих заболеваний.
3. Интерпретировать результаты серодиагностики кори, эпидемического паротита, краснухи.
4. Определить материал для лабораторной диагностики герпетических инфекций в зависимости от клинической формы заболевания и решить вопрос о методе лабораторного исследования (цитологический, ИФА, РИФ, ПЦР и другие).
5. Классифицировать иммунобиологические препараты по теме занятия в соответствии с их назначением.
Дополнительная литература
1. Авакян А.А. Атлас анатомии и онтогенеза вирусов / А.А. Авакян, А.Ф. Быковский. - М.: Медицина, 1970.
2. Букринская А.Г. Вирусология / А.Г. Букринская. - М.: Медицина, 1986.
3. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
4. Быковский А.Ф. Атлас вирусной цитопатологии / А.Ф. Быковский, Ф.И. Ершов. - М.: Медицина, 1975.
5. Зубков М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. – М., 2002.
6. Медицинская вирусология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2002.
7. Общая вирусология / С. Лурия, Дж. Дарнелл, Д. Балтимор, Э. Кампбелл. - М.: Мир, 1981.
8. Общая и частная вирусология: в 2 т. / под ред. В.М. Жданова. - М.: Медицина, 1982.
9. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
10. Павлович С.А. Основы вирусологии / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 2001.
11. Самгин М.Ф. Простой герпес / М.Ф. Самгин, А.А. Халдин. – М., 2002.
12. Сельков С.А. Современная терапия герпесвирусных инфекций / С.А. Сельков, В.А. Исаков. - М., 2004.
13. Фролов А.Ф. Практическая вирусология / А.Ф. Фролов,
П.Ф. Шевченко, В.П. Широбоков. - Киев: Здоровье, 1989.
14. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
Контрольные вопросы
Вирусы парагриппа: классификация, характеристика, вызываемые заболевания. Лабораторная диагностика и лечение. Вирус эпидемического паротита: классификация, характеристика, диагностика заболевания, специфическая профилактика. Вирус кори, его характеристика. Иммунитет. Вирусологическая диагностика кори. Профилактические препараты. Респираторно-синцитиальный вирус: классификация, характеристика, вызываемые заболевания. Лабораторная диагностика и лечение. Коронавирусы: характеристика, вызываемые заболевания и их диагностика. Аденовирусы: характеристика, вызываемые заболевания. Диагностика аденовирусных инфекций. Лечение и профилактика. Вирус краснухи, его характеристика. Иммунитет. Диагностика заболевания. Препараты для специфической профилактики. Вирусы герпеса: классификация, характеристика, вызываемые заболевания. Вирусологическая диагностика герпетических заболеваний. Профилактика и лечение.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
Потренируйтесь в написании по-латыни названий вирусов по теме занятия и заболеваний, ими вызываемых.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Изучение морфологии вирусов по таблицам, электронограммам и слайдам. Усвойте строение различных вирусов, особенности и биологическую роль отдельных структур вирионов.
2. Изучение препаратов, применяемых для диагностики, лечения и специфической профилактики ОРЗ и герпетической инфекции.
ЗАНЯТИЕ 34
ВОЗБУДИТЕЛИ ЭНТЕРОВИРУСНЫХ (ПОЛИОМЕЛИТА, КОКСАКИ, ЕСНО), НЕЙРОВИРУСНЫХ (БЕШЕНСТВА,
ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ) ИНФЕКЦИЙ
Благодаря достижениям медицинской науки, главным образом, разработке препаратов для специфической профилактики, почти полностью ликвидирован полиомиелит, в 1985 г. Всемирная организация здравоохранения объявила о полной ликвидации натуральной оспы на Земле. В то же время вирусные заболевания другой этиологии составляют более 2/3 всех случаев инфекционной патологии.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы Вы должны знать характеристику возбудителей энтеровирусных (полиомиелита, Коксаки, ЕСНО), нейровирусных (бешенства, вирусных энцефалитов) инфекций, схемы вирусологических исследований и специфическую профилактику этих заболеваний.
Исходный уровень знаний
Морфология, физиология вирусов, методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.
Цель занятия
1. Усвоить разнообразие энтеровирусов, строение и свойства полиовирусов, вирусов Коксаки и ЕСНО.
2. Выработать чёткое представление о патогенезе, лабораторной диагностике и профилактике полиомиелита и полиомиелитоподобных заболеваний.
3. Изучить свойства возбудителей бешенства и арбовирусных инфекций.
4. Выработать чёткое представление о механизмах заражения, патогенезе и лабораторной диагностике бешенства и арбовирусных инфекций.
5. Ознакомиться с препаратами для идентификации, лечения и профилактики энтеровирусных и нейровирусных инфекций.
План изучения темы
1. Характеристика возбудителей полиомиелита, бешенства, вирусных энцефалитов.
2. Схемы лабораторной диагностики полиомиелита, бешенства, вирусных энцефалитов.
3. Специфическая профилактика полиомиелита, бешенства, вирусных энцефалитов.
После изучения темы студент должен уметь
1. Интерпретировать результаты лабораторных исследований с целью диагностики полиомиелита и бешенства.
2. Классифицировать препараты по теме занятия в соответствии с их назначением
3. Применить профилактические и лечебные препараты (антирабический гамма-глобулин, антирабическую вакцину) лицам, пострадавшим от укусов животных.
4. Определить алгоритм профилактических мероприятий среди населения в очаге клещевого энцефалита.
Дополнительная литература
1. Зубков М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. – М., 2002.
2. Чудная Л.М. Полиомиелит / Л.М. Чудная, Л.А. Тришкова. - Киев: Здоровье, 1987.
3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
Дополнительный материал к занятию
Основные возбудители энтеровирусных инфекций
1. Полиовирусы (3 серотипа).
2. Вирусы ЕСНО (34 серотипа).
3. Вирусы Коксаки А (24 серотипа).
4. Вирусы Коксаки В (6 серотипов).
5. Энтеровирусы (серотипы 68-71).
6. Вирус гепатита А (72-й серотип).
7. Ротавирусы (4 серотипа).
Нозологические формы и клинические синдромы,
вызываемые энтеровирусами
|
№ |
Нозологические формы и синдромы |
Типы вирусов |
|
1 |
Полиомиелит |
Полиовирусы 1, 2, 3 |
|
2 |
Полиомиелитоподобные заболевания |
Коксаки А 4, 7, 9, 10, 14; В1-5 |
|
3 |
Гастроэнтерит |
Коксаки А 2, 9, В 1-5 ЕСНО 2, 5, 6-12, 14, 18, 22-24 |
|
4 |
Острые респираторные заболевания |
Коксаки А 21; В 3, 4 |
|
5 |
Острый серозный менингит |
Энтеровирусы 68, 69 |
|
6 |
Миокардиты, перикардиты |
Коксаки 1-6 |
|
7 |
Везикулярный стоматит с кожными проявлениями |
Коксаки А 5 |
|
8 |
ЕСНО-экзантема |
ЕСНО 2, 4, 6, 9, 14, 16, 18 |
|
9 |
Вирусный гепатит А |
Энтеровирус 72 |
Методы лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций
Материалы для исследования: испражнения, смыв с носоглотки, спинномозговая жидкость, сыворотка крови.
Вирусологический метод
Поскольку вирусы Коксаки и ЕСНО могут вызывать полиомиелитоподобные заболевания, исследование ведётся с целью возможного выделения любого из 3-х видов вируса. Поэтому материал параллельно засевают на культуры ткани и заражают однодневных мышей. Полиовирусы и вирусы ЕСНО вызывают ЦПД в культуре ткани, а вирусы Коксаки А и В вызывают параличи и смерть новорождённых мышей. Типирование выделенных вирусов производят путём реакции нейтрализации в культуре ткани типовыми сыворотками против полиовирусов, вирусов Коксаки А, В, ЕСНО (цветная проба).
Серологический метод
Обнаружение нарастания титра антител в крови больных к выделенным вирусам ЕСНО производят с помощью РТГА (вирусы обладают гемагглютинирующими свойствами), к вирусам Коксаки – по реакции нейтрализации и «цветной» пробе, к вирусам полиомиелита – по реакции нейтрализации, «цветной» пробе, РСК. Для ротавирусов исследуют фекальные массы, в которых вирус обнаруживают путём иммуноэлектронной микроскопии, а также путём заражения культур клеток. Вирусный антиген в материале обнаруживают с помощью серологических реакций: РСК, иммунофлюоресценции, РИА и ИФА.
Контрольные вопросы
Перечислите основных возбудителей энтеровирусных инфекций. Перечислите основные нозологические формы и клинические синдромы, возбудителями которых являются энтеровирусы.
Характеристика семейства пикорнавирусов: классификация, размеры вирионов, структура вирионов, способы культивирования, серотипы, вызываемые заболевания. Методы лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций. Вирусы полиомиелита: к какому семейству и роду относятся, тип нуклеиновой кислоты, размеры вирионов; антигенные свойства (серотипы); устойчивость во внешней среде, культивирование. Морфологические проявления взаимодействия вируса с клеткой; источник заражения человека, основные места локализации в организме, пути выделения. Лабораторная диагностика: какие материалы берут от больного при исследовании на носительство? Методы лабораторной диагностики. «Цветная» проба: сущность и механизм; ингредиенты реакции, учет результатов; методика постановки «цветной» пробы для определения вида и типа вируса; методика постановки реакции для определения титра противовирусных антител. Специфическая профилактика полиомиелита: что представляет собой препарат для создания активного иммунитета, в каком виде выпускается, как применяется, какой основной контингент населения подвергается вакцинации? Что представляет собой препарат для создания пассивного иммунитета? Общая характеристика вирусов Коксаки и ЕСНО: к какому семейству и роду относятся; антигенная классификация (серотипы); вызываемые заболевания; методы лабораторной диагностики. Вирус бешенства: название вируса (синонимы); к какому семейству относится? Особенности строения и культивирования. Что образуется в клетках при размножении вируса? Источники инфекции для человека, резервуары в природе. Способ заражения, патогенез, где размножается вирус у больного человека? Лабораторная диагностика: исследуемый материал, методы исследования. Что такое «фиксированный» вирус бешенства, кем и как он получен, чем отличается от «уличного» вируса бешенства, для чего применяется? Специфическая профилактика бешенства. Культуральная вакцина: что собой представляет, в каких случаях применяется? Антирабический гамма–глобулин: как получен, что содержит, для чего применяется? Возбудители клещевых энцефалитов: общая характеристика, классификация. Работы отечественных учёных. Источники и пути передачи. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и терапия.
Задания для выполнения в процессе самоподготовки
Изучите по учебнику, конспекту лекций схемы диагностики энтеровирусных и нейровирусных инфекций. Изучите дополнительный материал к этому занятию. Потренируйтесь в написании по-латыни названий вирусов и заболеваний.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Изучение вирусологической и серологической диагностики полиомиелита. Промикроскопируйте и зарисуйте препараты культуры ткани, заражённой вирусом полиомиелита (ЦПД) и незаражённой культуры ткани (контроль). Учтите результаты демонстрационной «цветной» пробы для определения типа вируса полиомиелита и для определения уровня специфических антител в парных сыворотках. Зарисуйте результаты в тетради. Сделайте выводы.
2. Ознакомление с микроскопической диагностикой бешенства. Промикроскопируйте и зарисуйте включения Бабеша–Негри в нервных клетках мозга.
3. Ознакомление с лабораторной диагностикой клещевых энцефалитов (разбор по схемам и таблицам).
4. Изучение препаратов, применяемых для диагностики, специфической профилактики и лечения полиомиелита, бешенства, клещевых энцефалитов. Просмотрите препараты, прочитайте этикетки, охарактеризуйте каждый препарат.
ЗАНЯТИЕ 35
ВОЗБУДИТЕЛИ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ. ВОЗБУДИТЕЛИ
ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ С ПОЧЕЧНЫМ СИНДРОМОМ, ЛИХОРАДКИ МАРБУРГ, ЛИХОРАДКИ ЭБОЛА
В последние годы особенно широкое распространение получили ви-
русные гепатиты, которые встречаются повсеместно, и число заболеваний ими непрерывно увеличивается. В настоящее время установлено, что этиологическими факторами вирусных гепатитов являются вирусы, отличающиеся по многим свойствам, относящиеся к различным семействам, но вызывающие заболевания, сходные по клинической картине.
Сравнительно недавно описаны возбудители лихорадок Марбург и Эбола, характеризующихся высокой летальностью. Эти вирусы вместе с возбудителем распространённой повсеместно геморрагической лихорадки с почечным синдромом в настоящее время являются объектами повышен-
ного внимания врачей.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы вы должны знать характери-
стику возбудителей вирусных гепатитов (А, В, С, D, Е, G, Т); геморрагической лихорадки, лихорадок Марбург и Эбола схемы вирусологических исследований и специфическую профилактику этих заболеваний.
Исходный уровень знаний
Морфология, физиология вирусов, методы лабораторной диагности-
ки вирусных инфекций.
Цель занятия
1. Изучить строение и свойства вирусов гепатитов А, В, С, D, E, G, T; особенности течения инфекций.
2. Знать пути и факторы передачи вирусных гепатитов.
3. Освоить методы лабораторной диагностики вирусных гепатитов.
4. Изучить характеристику вирусов геморрагической лихорадки с почечным синдромом, лихорадок Марбург и Эбола, патогенез вызываемых ими заболеваний и принципы диагностики, лечения и профилактики.
5. Научиться подбирать препараты для диагностики, профилактики и лечения вирусных гепатитов и геморрагических лихорадок.
План изучения темы
1. Характеристика возбудителей вирусных гепатитов.
2. Схемы лабораторной диагностики вирусных гепатитов.
3. Специфическая профилактика вирусных гепатитов.
4. Характеристика возбудителя геморрагической лихорадки с почечным синдромом.
5. Характеристика вирусов Марбург и Эбола.
После изучения темы студент должен уметь
1. Интерпретировать результаты вирусологических и серологических исследований с целью диагностики вирусных гепатитов.
2. Классифицировать препараты по теме занятия в соответствии с их назначением.
Дополнительная литература
1. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
2. Жданов В.М. Вирусные гепатиты / В.М. Жданов, В.А. Ананьев, В.М. Стаханова. - М.: Медицина, 1985.
3. Зубков, М.Н. Практическое руководство по клинической микробиологии и антимикробной терапии для врачей стационарной помощи / М.Н. Зубков. – М., 2002.
4. Коротяев А.И. Медицинская микpобиология, иммунология и виpусология: учеб. для мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев; под pед. А.И. Коpотяева. - 3-е изд., испр. и доп. - СПб.: СпецЛит, 2002.
5. Медицинская вирусология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2002.
6. Медицинская микробиология / гл. pед. В.И. Покpовский, О.К. Поздеев. - М.: ГЭОТАР МЕДИА, 1998. - (Учеб. лит. для студентов мед. вузов и врачей).
7. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: учеб. для студентов мед. вузов / под ред. А.А.Воробьева. - М.: МИА, 2004.
8. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
9. Павлович С.А. Основы вирусологии / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 2001.
10. Поздеев О.К. Медицинская микробиология: учеб. пособие для студентов мед. вузов / О.К. Поздеев; под pед. В.И. Покpовского. - 3-е изд., стер. – М.: ГЭОТАР МЕДИА, 2006. - (XXI век).
11. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / Е.П. Шувалова. – М.: Медицина, 2001.
Дополнительный материал к занятию
Современная классификация вирусных гепатитов и их возбудителей
|
Названия заболеваний |
Вирус |
Семейство |
Род |
Геном |
Супер-капсид |
Механизм заражения |
|
Вирусный гепатит А (ВГА) |
HAV |
Picornaviridae |
Hepatovirus |
+ РНК |
- |
Фекально-оральный |
|
Вирусный гепатит В (ВГБ) |
HBV |
Hepadnaviridae |
Orthohepadnavirus |
ДНК (де-фектная) |
+ |
Паренте-ральный |
|
Вирусный гепатит Д (дельта-инфекция) (ВГД) |
HDV |
Неклассифицированный вирус-сателлит |
+ РНК |
- |
Паренте-ральный |
|
|
Вирусный гепатит С (ВГС) |
HCV |
Flaviviridae |
Hepacivirus |
+ РНК |
+ |
Паренте-ральный |
|
Вирусный гепатит Е (ВГЕ) |
HEV |
Гепатит Е-подобные вирусы (прежде Caliciviridae) |
Hepevirus |
+ РНК |
- |
Фекально-оральный |
|
Вирусный гепатит G (ВГG) |
HGV |
Flaviviridae |
Hepacivirus |
+ РНК |
+ |
Паренте-ральный |
|
Вирусный гепатит Т (ВГТ) |
TTV |
Circinoviridae |
- ДНК |
- |
Паренте-ральный, фекально-оральный |
Контрольные вопросы
Возбудители вирусных гепатитов. Современная классификация вирусных гепатитов и их возбудителей. Вирус гепатита А: к какому семейству и роду относится, тип нуклеиновой кислоты. Источник заражения человека, устойчивость во внешней среде, пути передачи; лабораторная диагностика. Материалы для исследования, методы серологической диагностики; общая и специфическая профилактика. Вирус гепатита В: к какому семейству относится, структура вириона, антигенная структура (название антигенов). Что такое «австралийский антиген» и частицы Дейна? Источник инфекции, пути передачи, устойчивость во внешней среде, вирусоносительство. Методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики. Дельта–вирус: особенности строения, взаимодействие дельта-вируса с вирусом гепатита В; источник инфекции, пути передачи. Вирусы гепатитов С и Е: источники и пути передачи, лабораторная диагностика, лечение. Вирусы гепатитов G и Т: характеристика, источники и пути передачи, лабораторная диагностика. Возбудитель геморрагической лихорадки с почечным синдромом: морфология, источник заражения, патогенез заболевания, диагностика, принципы лечения, профилактики. Вирусы Марбург и Эбола: структура, таксономическое положение. Эпидемиология лихорадок Марбург и Эбола, клиническое течение, ранняя диагностика, лечение, профилактика.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Изучение лабораторной диагностики вирусных гепатитов. Изучите по схемам методы лабораторной диагностики вирусных гепатитов; ознакомьтесь с наборами для постановки ИФА с целью обнаружения антигенов вируса гепатита В и противовирусных антител.
2. Изучение препараты, применяемые для диагностики, специфической профилактики и лечения вирусных гепатитов. Просмотрите препараты, прочитайте этикетки, охарактеризуйте каждый препарат.
ЗАНЯТИЕ 36
ВОЗБУДИТЕЛИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ. ОНКОГЕННЫЕ ВИРУСЫ.
ВОЗБУДИТЕЛИ МЕДЛЕННЫХ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ. ПРИОНЫ
В 1981 году в США были впервые описаны случаи необычных заболеваний, основным проявлением которых является поражение иммунной системы организма. Заболевание получило название СПИД (синдром приобретённого иммунного дефицита). В дальнейшем, после выделения возбудителя этого заболевания – вируса иммунодефицита человека, принято новое название – ВИЧ–инфекция для всех форм заболевания, и СПИД – для случаев с выраженной клинической картиной и изменениями в иммунной системе. В течение короткого периода времени заболевание стали регистрировать практически во всех странах мира, и оно приобрело характер пандемии. Поскольку до настоящего времени не разработаны методы радикального лечения и специфической профилактики ВИЧ–инфекции, основными мероприятиями для предотвращения распространения этого заболевания является своевременное выявление больных и носителей, а также пропаганда способов предупреждения заражения.
Ещё в начале прошлого столетия было установлено, что этиологическим фактором многих опухолей (в том числе злокачественных) у животных являются так называемые онкогенные вирусы. В настоящее время накапливается всё больше сведений о том, что не только онкогенные, но и другие инфекционные вирусы, возможно, играют роль в развитии опухолей у человека. Поэтому возникает необходимость для врача знания свойств онкогенных вирусов и механизмов вирусиндуцированного канце-
рогенеза.
Ещё одна группа возбудителей инфекционных заболеваний – прионы, также была открыта в конце прошлого века. В 1997 году американский биохимик Стенли Прусинер получил Нобелевскую премию за разработку теории прионных заболеваний.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы вы должны знать: характеристику возбудителей ВИЧ-инфекции, их особенности, патогенез, клинику, лабораторную диагностику, лечение, общую и специфическую профи-
лактику ВИЧ–инфекции; характеристику онкогенных вирусов, теории возникновения опухолей, характеристику прионов и вызываемых ими заболеваний.
Исходный уровень знаний
Морфология, физиология вирусов, методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.
Цель занятия
1. Изучить строение, антигенные свойства, особенности культивирования вируса иммунодефицита человека.
2. Изучить принципы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.
3. Научиться подбирать препараты для диагностики, профилактики и лечения ВИЧ-инфекции.
4. Изучить характеристику возбудителей медленных инфекций и принципы их диагностики.
5. Изучить характеристику прионов.
План изучения темы
1. Характеристика вирусов иммунодефицита человека (ВИЧ) и онкогенных вирусов.
2. Лабораторная диагностика ВИЧ–инфекции.
3. Разработка способов лечения и специфической профилактики ВИЧ–инфекции.
4. Характеристика возбудителей медленных инфекций вирусной и прионной (куру, болезнь Крейцфельда-Якоба, синдром Герстнера-Штреусслера-Шейнкера, фатальная семейная инсомия) этиологии.
После изучения темы студент должен уметь
1. Интерпретировать результаты лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции, проведенной с помощью ИФА, и результаты иммуноблоттинга.
2. Классифицировать препараты по теме занятия в соответствии с их назначением
Дополнительная литература
1. Быков А.С. Атлас по медицинской микробиологии и иммуноло-
гии / А.С. Быков, А.А. Воробьев, В.В. Зверев. - М.: МИА, 2007.
2. Жданов В.М. Онкогенные вирусы типа Д / В.М. Жданов, А.Ф. Быковский, К.В. Ильин. - М.: Медицина, 1979.
3. Зуев В.А. Прионные болезни человека и животных / В.А. Зуев, И.А. Завалишин, В.М. Райхель. - М.: Медицина, 1999.
4. Медицинская вирусология: учеб. пособие / под ред. А.М. Королюка, В.Б. Сбойчакова. – СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2002.
5. Павлович С.А. Медицинская микробиология / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 1999.
6. Павлович С.А. Основы вирусологии / С.А. Павлович. – Минск: Вышэйшая школа, 2001.
7. Рытник П.Г. СПИД / П.Г. Рытник, А.Г. Коломиец, Н.Д. Коломи-
ец. - Минск, 1988.
8. Шевелев А.С. СПИД - загадка века / А.С. Шевелев. - М.: Советская Россия, 1991.
9. СПИД - синдром приобретённого иммунодефицита / В.П. Широбоков, А.И. Евтушенко и др. - Киев: Здоровье, 1988.
Контрольные вопросы
Вирус иммунодефицита человека: к какому семейству относится; особенность представителей этого семейства, тип нуклеиновой кислоты, роль фермента ревертазы (обратная транскриптаза). Структура вириона, функции отдельных структур, устойчивость по внешней среде. Виды ВИЧ, изменчивость вируса. В каких биологических жидкостях организма обнаруживается? Механизм передачи, основные пути инфицирования человека. Можно ли заразиться через кровососущих насекомых, при бытовом контакте с больным? Основные группы риска. Патогенез ВИЧ–инфекции: продолжительность инкубационного периода; какие клетки организма поражаются; какой рецептор они имеют; что является следствием этого процесса; как и почему изменяется соотношение Т-хелперы/Т-супрессоры? Причины развития иммунодефицита. Периоды развития ВИЧ-инфекции. Клиника ВИЧ-инфекции: ранние клинические проявления, проявления в разгар заболевания, какие осложнения (инфекции и опухоли) наблюдаются чаще всего? Лабораторная диагностика ВИЧ–инфекции: что нужно обнаружить для постановки диагноза? Серологическая диагностика: материал для исследования, основные методы исследования. Принципиальная схема иммуноферментного анализа и иммуноблоттинга. Предпосылки для изыскания лечебных препаратов, применяемые лечебные препараты. Как решается проблема специфической профилактики ВИЧ–инфекции? Роль медицинской пропаганды в предупреждении заболеваний. Онкогенные вирусы. История открытия онкогенных вирусов. Сущность вирусо-генетической теории Л.А. Зильбера. Характеристика вирусов семейства Retroviridae: структура вирионов, роль обратной транскриптазы, интеграция в геном клетки хозяина. Доказательства ассоциации онкогенных вирусов с некоторыми опухолями человека. Доказательства возможной роли инфекционных вирусов в развитии опухолей у человека. Характеристика возбудителей медленных инфекций вирусной и прионной этиологии. Подходы к диагностике и профилактике прионных болезней.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Ознакомление с методами лабораторной диагностики ВИЧ–инфекции. Разберите по схемам и таблицам вирусологические и серологические методы, применяемые для лабораторной диагностики ВИЧ–инфекции. Ознакомьтесь со схемами и наборами для постановки иммуноферментного анализа и иммуноблоттинга.
2. Онкогенные вирусы. По схемам, таблицам, электронограммам ознакомьтесь со структурой онкогенных вирусов. Обсудите возможные механизмы канцерогенного действия вирусов.
ЗАНЯТИЕ 37
ИТОГ ПО ПРАКТИЧЕСКИМ НАВЫКАМ И УМЕНИЯМ
На этом занятии, которое является практически этапом экзамена по предмету, Вы должны продемонстрировать навыки и умения, которыми Вы овладели на протяжении изучения курса микробиологии, вирусологии и иммунологии. Вам будут предложены задания, которые позволят преподавателям оценить уровень усвоения практической части предмета и готовности использовать полученные навыки в своей будущей работе. При подготовке используйте не только материалы пособия, но и записи в Ваших рабочих тетрадях.
Цель самоподготовки
После самостоятельной подготовки Вы должны обладать навыками и умениями, необходимыми для проведения диагностики инфекционных заболеваний.
Исходный уровень знаний
Материал занятий по предмету.
Цель занятия
1. Оценить уровень усвоения практических навыков и умений по микробиологии, вирусологии, иммунологии.
План изучения темы
Повторите практическую работу, которую вы выполняли на занятиях по микробиологии, вирусологии, иммунологии.
После изучения раздела студент должен уметь
1. Выполнять манипуляции, необходимые для диагностики инфекционных заболеваний.
Перечень вопросов к итогу по практическим навыкам
и умениям по микробиологии, вирусологии и иммунологии
1
1. Указать принципы, на которых основывается выбор материала для исследования.
2. Описать принципы, на которых основывается выбор метода диагностики заболевания.
3. Описать принципы микроскопии с использованием фазово-контрастного микроскопа.
4. Описать принципы микроскопии с использованием тёмнопольного микроскопа.
5. Описать методику обнаружения бактериофага в исследуемом материале.
6. Описать принципы определения состава и количества микроорганизмов – представителей нормальной микрофлоры человека.
7. Описать принципы определения лизоцима в биологических жидкостях.
8. Описать принципы определения бактерицидной активности кожи.
9. Описать принципы определения вида и уровня иммуноглобулинов в биологических жидкостях.
2
10. Указать порядок действий при приготовлении препарата «висячая капля».
11. Указать порядок действий при приготовлении препарата «раздавленная капля».
12. Дать классификацию микроорганизмов по отношению к окраске по Граму.
13. Перечислить виды микроорганизмов, окраску которых необходимо производить по способу Циля-Нильсена.
14. Дать характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Эндо, и указать последовательность дальнейшего исследования.
15. Дать характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Плоскирева, и указать последовательность дальнейшего исследования.
16. Дать характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Левина, и указать последовательность дальнейшего исследования.
17. Описать культуральные свойства колоний, выросших на средах Плоскирева и Эндо при подозрении на дизентерию и колиэнтерит.
18. Дать характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на желточно-солевом агаре, и указать последовательность дальнейшего исследования.
19. Дать характеристику культуральных свойств микроорганизмов, выросших на среде Китта-Тароцци и стерильном молоке, указать последовательность дальнейшего исследования.
20. Произвести посев выделенной чистой культуры бактерий на среды для изучения биохимических свойств.
21. Оценить результаты исследования ферментативной активности бактерий на среде Олькеницкого и указать последовательность дальнейшего исследования.
22. Идентифицировать культуру микроорганизмов по результатам определения биохимической активности на средах Гиса.
23. Произвести дифференцировку биовариантов холерного вибриона по биологическим свойствам (чувствительность к полимиксину, чувствительность к специфическому бактериофагу, реакция Фогес-Проскауэра, гексаминовый тест, гемолиз эритроцитов барана).
24. Учесть рост и описать культуральные свойства коринебактерий дифтерии на среде Клауберга.
25. Учесть рост и описать культуральные свойства микобактерий туберкулёза на среде Левенштейна-Йенсена.
26. Определить факторы патогенности стафилококка в предложенных тестах.
27. Учесть результаты опыта по определению фаготипа и фагогруппы штамма стафилококка.
28. Указать последовательность определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом стандартных дисков и оценить результаты.
29. Рассчитать фагоцитарные показатели и дать оценку состоянию фагоцитарного звена иммунной защиты организма.
30. Учесть результат реакции связывания комплемента.
31. Дать характеристику методике определения гиперчувствительности замедленного типа.
32. Произвести учёт развернутой реакции агглютинации в пробирках с «живой» и «гретой» культурой кишечной палочки в диагностике колиэнтеритов.
33. Учесть результаты РНГА с эритроцитарными диагностикумами из шигелл Зонне и Флекснера.
34. Учесть результаты реакции преципитации в жидкой среде.
35. Поставить и учесть реакцию агглютинации на стекле выделенной чистой культуры с противодизентерийными сыворотками.
36. Учесть результаты реакции преципитации в агаровом геле с целью выявления токсигенности дифтерийной палочки.
37. Произвести учет РТГА с целью идентификации вируса гриппа.
38. Произвести учет ретроспективной РТГА с целью серодиагностики гриппа.
39. Произвести учёт реакции нейтрализации по цветной пробе в диагностике полиомиелита.
3
40. Перечислить правила противоэпидемического режима и техники безопасности в бактериологической лаборатории.
41. Микроскопировать препарат с использованием иммерсионной системы светового микроскопа.
42. Приготовить фиксированный препарат из чистой культуры микроорганизмов, окрасить его водным фуксином, микроскопировать и дать характеристику.
43. Приготовить фиксированный препарат из чистой культуры микроорганизмов, окрасить его метиленовым синим, микроскопировать и дать характеристику.
44. Приготовить фиксированный препарат из чистой культуры микроорганизмов, окрасить его по Граму в модификации Синёва, микроскопировать и дать характеристику.
45. Приготовить фиксированный препарат из гноя, окрасить его соответствующим методом, микроскопировать и дать характеристику.
46. Приготовить фиксированный препарат из испражнений больного, окрасить его соответствующим методом, микроскопировать и дать характеристику.
47. Окрасить фиксированный препарат из мокроты больного с подозрением на туберкулёз соответствующим методом, микроскопировать и дать характеристику.
48. Окрасить готовый препарат водным фуксином, микроскопировать и дать его характеристику.
49. Окрасить готовый препарат метиленовым синим, микроскопировать и дать его характеристику.
50. Окрасить готовый препарат по методу Грама в модификации Синёва, микроскопировать.
51. Окрасить готовый препарат по методу Циля-Нильсена, микроскопировать.
52. Дать характеристику бактериям в мазке по форме и окраске.
53. Микроскопировать мазок из отделяемого уретры и дать заключение.
54. Микроскопировать мазок из осадка ликвора и дать заключение.
55. Произвести посев материала от больного на жидкую питательную среду для выделения анаэробных микроорганизмов.
56. Произвести посев материала от больного штриховым способом на плотную питательную среду для выделения чистой культуры микроорганизмов.
57. Произвести посев материала от больного по Дригальскому на плотную питательную среду для выделения чистой культуры микроорганизмов.
58. Произвести посев изолированной колонии с чашки Петри с МПА на скошенный агар и среду Олькеницкого.
59. Поставить опыт по определению чувствительности чистой культуры стафилококка к антибиотикам методом стандартных дисков.
60. Произвести учет и оценить результаты определения чувствительности стафилококка к антибиотикам методом стандартных дисков.
61. Учесть результаты определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений.
62. Постановить реакцию агглютинации на стекле.
63. Дать характеристику медицинского иммунобиологического препарата по составу и применению.
Примечание. Уровень усвоения умений: 1 – иметь представление, профессионально ориентироваться, знать показания; 2 – знать, оценить, принять участие; 3 – выполнить самостоятельно.
Самостоятельная работа студента на практическом занятии
1. Демонстрация владения практическими навыками и умениями по микробиологии, вирусологии, иммунологии.
ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЕ ВОПРОСЫ ПО МИКРОБИОЛОГИИ,
ВИРУСОЛОГИИ, ИММУНОЛОГИИ
I РАЗДЕЛ
1. Значение медицинской микробиологии в деятельности врача. Достижения микробиологии, вирусологии и иммунологии в развитии медицины и задачи в современных условиях.
2. Изобретение микроскопа и открытие микробов (А. Левенгук). Основные этапы развития микробиологии и их характеристика.
3. Луи Пастер, его открытия в области микробиологии.
4. Работы Р. Коха и их значение для микробиологии и инфекционной патологии.
5. Роль отечественных учёных в развитии микробиологической науки (И.И. Мечников, Д.И. Ивановский, Г.Н. Габричевский, С.Н. Виноградский, В.Д. Тимаков, Н.Ф. Гамалея, Л.А. Зильбер, П.Ф. Здродовский,
З.В. Ермольева).
6. Открытие вирусов Д.И. Ивановским и его значение в возникновении и развитии вирусологии. Этиологическая роль вирусов в патологии человека.
7. Предмет, задачи и разделы медицинской микробиологии. Методы, применяемые в микробиологии.
8. Методы микроскопии: с иммерсионным объективом, в тёмном поле, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная микроскопия.
9. Основные принципы систематики бактерий. Таксономические категории. Принципы классификации. Понятие о виде, критерии вида как основной таксономической единице. Подвид, инфравид (биовар, серовар, хемовар, фаговар), культура, популяция, штамм, клон (определение понятий).
10. Формы бактерий. Морфология, ультраструктура, химический состав бактериальной клетки. Основные отличия прокариотов от эукариотов. Субклеточные формы бактерий; протопласты, сферопласты, L-формы бактерий.
11. Исследование микробов в окрашенном состоянии. Простые и сложные методы окраски бактерий. Описать методику и принцип окраски бактерий по Граму в модификации Синёва. Перечислить грамположительные и грамотрицательные группы микроорганизмов.
12. Споры, капсулы, жгутики, включения бактерий – биологическая роль, методы выявления.
13. Морфология и ультраструктура актиномицетов. Патогенные представители. Актиномицеты - продуценты антибиотиков.
14. Спирохеты: классификация, морфология и физиология. Патогенные представители разных родов (названия по-латыни).
15. Микроскопические грибы. Классификация, строение разных групп грибов и патогенные представители.
16. Морфология и физиология микоплазм. Виды, патогенные для человека.
17. Риккетсии: морфология и физиология. Патогенные представители.
18. Морфология и химический состав вирусов. Отличие вирусов от других организмов. Методы культивирования вирусов. Культуры клеток и их характеристика.
19. Принципы классификации вирусов. Репродукция вирусов (фазы взаимодействия с клеткой хозяина).
20. Фаги (вирусы микробов): морфология и ультраструктура. Фазы взаимодействия вирулентного и умеренного фагов с бактериальной клеткой. Определение активности (титра). Профаг. Фаготипирование микроорганизмов, значение. Практическое использование фагов.
21. Питание бактерий. Типы питания. Механизмы переноса веществ в бактериальную клетку. Факторы роста микроорганизмов.
22. Питательные среды. Классификация их по назначению, происхождению, составу. Основные требования, предъявляемые к питательным средам.
23. Рост и размножение микробов. Определение понятий, фазы размножения (начертить кривую и охарактеризовать), причины отмирания микробов. Условия культивирования.
24. Процесс биологического окисления у микроорганизмов. Классификация микроорганизмов по способу биологического окисления. Схемы биологического окисления у аэробов и анаэробов.
25. Методы культивирования облигатных анаэробов: принципы, аппаратура.
26. Значение определения морфологических и культуральных свойств микробов в микробиологической диагностике (привести конкретные примеры).
27. Ферменты микробов. Классификация по биологической роли и субстратной специфичности; использование для идентификации микробов.
28. Методы определения протеолитической и сахаролитической способности микробов: питательные среды, продукты расщепления и способы их выявления.
29. Дифференциально-диагностические среды: перечислить основные виды, принципиальный состав, назначение и использование в практике.
30. Выделение чистых культур аэробных и анаэробных бактерий. Перечислите принципы и методы получения изолированных колоний. Методы выделения чистых культур анаэробов. Описать по дням метод Вейнберга.
31. Влияние внешней среды на микроорганизмы. Действие физических факторов: температуры, лучистой энергии, высушивания. Метод лиофильного высушивания.
32. Понятие о стерилизации, дезинфекции, асептике, антисептике. Методы стерилизации и их характеристика: аппараты, действующее начало, режим стерилизации, стерилизуемые объекты. Методы контроля процесса стерилизации.
33. Действие дезинфицирующих веществ на микробы. Перечислить группы дезинфицирующих веществ по механизму действия, назвать основные вещества каждой группы.
34. Микрофлора воды, почвы, воздуха. Санитарно-показательные микроорганизмы (определение понятия, их свойства). Выживаемость патогенных микробов во внешней среде. Некультивируемые формы бактерий, их значение для медицинской практики.
35. Бактериологическое исследование воды: показатели, методы их определения и оценка.
36. Бактериологическое исследование воздуха: показатели, методы их определения и оценка.
37. Взаимоотношение между микроорганизмами в ассоциациях, их характеристика. Микробы-антагонисты: их использование в производстве антибиотиков и других лечебных препаратов.
38. Химиотерапия. Определение понятия «химиотерапия», «химиотерапевтический препарат». Основные группы химиотерапевтических препаратов (назвать наиболее часто применяемые препараты).
39. Антибиотики. Классификация по источнику получения, химическому составу, механизму действия, антимикробному спектру. Единицы измерения активности антибиотиков. Работы отечественных учёных в этой области.
40. Побочные действия антибиотиков. Меры их предупреждения и лечения.
41. Лекарственная устойчивость микробов: определение понятия, виды и механизмы формирования, роль плазмид. Пути преодоления. Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам.
42. Генетический аппарат бактерий и его особенности у вирусов. Понятие о генотипе и фенотипе микроорганизмов. Символические обозначения генетических, фенотипических признаков.
43. Виды изменчивости (наследственная и ненаследственная). Начертить схему. Мутации, их разновидности. Мутагены физические, химические, биологические.
44. Генетический обмен у микроорганизмов (рекомбинации): виды рекомбинаций и их характеристика. Плазмиды - определение понятия, основные виды и их характеристика.
45. Роль мутаций, рекомбинаций и селекции в эволюции микроорганизмов. Генетическая инженерия и аспекты её практического использования.
46. Изменчивость микробов и её значение в диагностике, терапии и профилактике инфекционных заболеваний.
47. Микрофлора организма человека, её роль в норме (полезная) и патологии. Характеристика микрофлоры кожи и слизистых, дыхательных путей, полости рта. Возрастные изменения микрофлоры организма человека.
48. Микрофлора толстого кишечника. Основные представители аэробной и анаэробной микрофлоры, их соотношение. Дисбактериоз (дисбиоз): определение понятия, факторы, его вызывающие, способы предупреждения, препараты для восстановления микрофлоры кишечника.
II РАЗДЕЛ
49. Инфекционный процесс и инфекционное заболевание – определение понятий. Основные факторы, обусловливающие возникновение инфекционной болезни. Отличие инфекционных заболеваний от других болезней человека. Распространение и локализация микробов в организме.
50. Патогенность и вирулентность микроорганизмов – определение понятий. Основные факторы вирулентности (название и способы определения).
51. Микробные токсины: виды, единицы измерения силы токсина, свойства. Генетические детерминанты токсигенности. Получение и практическое применение токсинов и анатоксинов. Перечислите основные виды токсигенных бактерий.
52. Пути проникновения микроорганизмов в организм (ворота инфекции). Динамика развития инфекционного процесса, периоды. Антропонозы, зоонозы, сапронозы - определение понятий.
53. Формы инфекционного процесса. Персистенция возбудителей в организме. Реинфекция, суперинфекция, рецидив, вторичные инфекции, экзогенная и эндогенная, очаговая и генерализованная. Бактериемия, септицемия, токсинемия. Носительство патогенных микробов (виды).
54. Роль микроорганизма, макроорганизма, внешней среды и социальных условий в возникновении и развитии инфекционных заболеваний. Смешанные инфекции: определение понятия, типы взаимодействия микробов при смешанной инфекции. Особенности течения, диагностики, лечения.
55. Внутрибольничные инфекции: определение понятия, условия возникновения. «Госпитальные штаммы» условно-патогенных микробов: условия, способствующие их формированию, основные характеристики. Методы предупреждения внутрибольничных инфекций.
56. Особенности вирусных инфекций. Инфекционность вирусов (понятие, чем обусловлена). Виды вирусных инфекций: продуктивная, персистенция (определение, характеристика).
57. Понятие об иммунитете. Основные разделы современной иммунологии. Виды иммунитета: по происхождению, направленности действия (начертить схему форм иммунитета и дать характеристику), стерильный и нестерильный иммунитет.
58. Факторы врождённого иммунитета: определение понятия, поверхностные покровы, гуморальные и клеточные факторы; роль нормальной микрофлоры.
59. И.И. Мечников и его учение о невосприимчивости к инфекционным болезням. Фагоцитарная теория иммунитета. Фагоцитоз: фагоцитирующие клетки, стадии фагоцитоза и их характеристика. Показатели, используемые для характеристики фагоцитарного процесса, методы их определения.
60. Комплемент: химическая природа и фракции, пути активации, роль в антиинфекционной защите, источники получения и применение на практике, методы определения активности комплемента.
61. Лизоцим: его характеристика, роль в антиинфекционной защите, методы определения. Интерфероны: характеристика, основные биологически эффекты. Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК): определение понятия, методика определения.
62. Понятие об антигенах. Основные свойства антигенов. Полноценные и неполноценные антигены. Специфичность антигенов. Групповые, типовые, видовые антигены. Аутоантигены.
63. Антигенная структура бактериальной клетки: обозначение антигенов, их расположение, характеристика, получение, практическое применение. Групповые и видовые антигены микробов. Антигенная структура вирусов.
64. Иммунная система организма: определение понятия, строение, функции органов иммунной системы. Иммунокомпетентные клетки и их основные функции; субпопуляции Т- и В-лимфоцитов, их функции. Клеточный и гуморальный иммунитет.
65. Иммунный ответ: его типы и механизмы регуляции. Взаимодействие. Роль Т-, В-лимфоцитов и макрофагов в клеточном и гуморальном иммунитете.
66. Антитела (иммуноглобулины): их классификация, строение и основные свойства. Специфичность антител.
67. Местный иммунитет: определение понятия, основные механизмы; особенности структуры секреторных иммуноглобулинов, место их образования и функции.
68. Инфекционная иммунология: определение понятия. Особенности антибактериального, противогрибкового иммунитета. Механизмы распознавания инфекционных патогенов и их ускользания от факторов иммунной защиты.
69. Противовирусный иммунитет: неспецифические факторы защиты, роль фагоцитоза и антител. Интерферон: условия образования, виды, механизмы противовирусного действия; индукторы интерферона, практическое применение.
70. Механизмы соединения антитела с антигеном и реакции иммунитета. Виды антител. Моноклональные антитела: принципиальная схема получения, преимущество и практическое применение.
71. Основные группы серологических реакций. Характеристика реакций для прямого определения антител и антигенов, реакции непрямой гемагглютинации, методов с применением меченых антител и антигенов.
72. Реакция нейтрализации токсина антитоксином: механизм и ингредиенты (получение токсина и антитоксической сыворотки, единицы измерения их активности). Применение для определения уровня антитоксического иммунитета (название реакции, способ постановки), применение с диагностической целью (на примере диагностики ботулизма или столбняка).
73. Реакция преципитации: механизм и ингредиенты; получение преципитирующих сывороток, антигенов. Способы постановки реакции, практическое применение.
74. Реакция агглютинации: механизм реакции и ингредиенты; получение агглютинирующих сывороток (поли- и моновалентных) и антигенов; реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), реакция обратной непрямой гемагглютинации (РОНГА), практическое применение.
75. Реакции с применением меченых антител и антигенов: реакция иммунофлюоресценции (прямой и непрямой методы); иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммунный анализ (РИА), иммуноблоттинг - принципы постановки и практическое применение.
76. Реакции иммунного лизиса: реакции иммунного гемолиза и бактериолиза (механизмы, ингредиенты); реакция локального гемолиза в геле Йерне (ингредиенты, механизмы, назначение); реакция связывания комплемента (ингредиенты, механизмы, назначение, учёт результатов).
77. Применение реакций иммунного ответа для диагностики вирусных заболеваний (реакция нейтрализации вирусов, гемагглютинации, торможения гемагглютинации, гемадсорбции, ИФА, иммуноблоттинг).
78. Патология иммунного ответа - классификация по механизму нарушений иммунной системы. Иммунодефицитные состояния; первичные иммунодефициты, их генетические механизмы; вторичные иммунодефициты, причины возникновения; клинические проявления иммунодефицитов и принципы их лечения.
79. Понятие об аллергии, её типы. Основные особенности и механизм формирования реакций гиперчувствительности немедленного типа: анафилактических, цитотоксических, болезней иммунных комплексов.
80. Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ): основные особенности ГЗТ, механизм формирования; роль в противомикробном иммунитете, понятие об инфекционной аллергии; практическое применение (примеры).
81. Оценка иммунного статуса организма. Тесты для оценки факторов врождённого иммунитета, приобретённого гуморального и клеточного иммунитета, выявления гиперчувствительности к антигенам; тесты 1 и 2 уровней.
82. Роль медицинской микробиологии в осуществлении профилактики инфекционных заболеваний. Лечебно-профилактические и диагностические препараты (составьте схему их классификации). Основные направления прикладной иммунологии.
83. Вакцинопрофилактика, виды вакцин, их получение. Основные направления совершенствования вакцин. Вакцины 3 поколения. Адъюванты. Вакцинотерапия.
84. Живые вакцины. Методы получения вакцинных штаммов. Хранение живых вакцин, особенности их применения. Привести примеры живых бактериальных и вирусных вакцин. Инактивированные (убитые) вакцины, их изготовление, титрование, хранение, применение.
85. Анатоксины, их получение, нативные и адсорбированные анатоксины. Перечислите анатоксины, применяемые на практике, и ассоциированные вакцины, в состав которых входят анатоксины.
86. Антитоксические сыворотки, их получение, титрование, очистка, применение. Гамма–глобулины гомологичные и гетерологичные, их получение и практическое применение. Методика введения гетерологичных препаратов для предупреждения аллергических осложнений.
87. Методы профилактики и терапии токсинемических инфекций. Препараты; показания к применению.
III РАЗДЕЛ
88. Эшерихии: морфология и физиология. Антигенная структура и классификация. Физиологическая роль в организме и санитарно-показательное значение. Эшерихиозы: классификация возбудителей и заболеваний. Лабораторная диагностика. Принципы лечения и профилактики.
89. Сальмонеллы: морфология и физиология; антигенная структура и классификация. Возбудители брюшного тифа и паратифов: морфология и физиология, факторы патогенности. Патогенез брюшного тифа. Методы ранней диагностики.
90. Возбудители брюшного тифа и паратифов: морфология и физиология, факторы вирулентности. Лабораторная диагностика на разных стадиях заболевания; методика выделения гемокультуры, серологическая диагностика, диагностика бактерионосительства. Препараты для лечения и специфической профилактики.
91. Сальмонеллы - возбудители пищевых токсикоинфекций и внутрибольничных инфекций: морфология и физиология, наиболее часто встречающиеся виды. Условия возникновения пищевых отравлений, их лабораторная диагностика. Особенности эпидемиологии и клиники внутрибольничных сальмонеллёзов в современных условиях.
92. Шигеллы: морфология, физиология, классификация, факторы патогенности и патогенез заболевания. Лабораторная диагностика шигеллёзов. Препараты для лечения и профилактики.
93. Патогенные вибрионы: морфология и физиология, классификация. Возбудители холеры, их свойства. Биовары. Антигенная структура и классификация. Патогенез холеры. Лабораторная диагностика. Режим работы лаборатории. Препараты для лечения и профилактики.
94. Кампилобактерии: морфология и физиология, особенности культивирования, антигенная структура, основные виды, патогенные для человека и клинические формы заболеваний. Источники инфекции и пути передачи. Лабораторная диагностика. Препараты для лечения.
95. Стафилококки: морфология, физиология, классификация (виды), факторы вирулентности. Стафилококковые заболевания, их лабораторная диагностика. Фаготипирование. Проблема внутрибольничных стафилококковых инфекций. Препараты для профилактики и лечения.
96. Стрептококки: морфология и физиология, классификация по гемолизу и антигенной структуре, факторы вирулентности. Стрептококковые заболевания, их лабораторная диагностика. Патогенетическая роль стрептококков при ревматизме, скарлатине, других заболеваниях. Иммунитет. Препараты для лечения.
97. Стрептококки пневмонии: морфология и физиология, антигенная структура (серологические группы), роль в патологии человека. Лабораторная диагностика пневмококковых заболеваний, профилактика и лечение.
98. Менингококки: морфология и физиология, антигенная структура (серогруппы), факторы вирулентности. Менингококковые заболевания. Лабораторные исследования у больных и носителей. Препараты для лечения и специфической профилактики.
99. Гонококки: морфология и физиология, условия культивирования; факторы вирулентности, вызываемые заболевания. Лабораторная диагностика острой и хронической гонореи. Препараты для профилактики и лечения.
100. Синегнойная палочка: морфология, культивирование, пигментообразование, основные факторы вирулентности. Протей: морфология и физиология, особенности культуральных свойств. Методы выделения и идентификации синегнойных палочек и протеев из гноя при раневой и гнойной инфекции. Препараты для лечения и профилактики.
101. Возбудитель столбняка: морфология и физиология. Токсинообразование. Столбняк у человека: условия возникновения и патогенез. Специфическая профилактика (плановая, по показаниям) и терапия.
102. Возбудители анаэробной газовой инфекции, их характеристика. Токсинообразование. Условия возникновения заболевания. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
103. Возбудитель ботулизма, его характеристика. Токсинообразование. Типы токсинов. Условия возникновения заболевания. Лабораторная диагностика. Профилактические и лечебные препараты.
104. Неспорообразующие анаэробы: классификация (основные семейства, роды и виды), морфология и физиология. Основные особенности клинической картины. Лабораторная диагностика: особенности забора и транспортировки материала для исследования, особенности культивирования (состав газовой среды, питательные среды). Препараты для лечения.
105. Возбудитель дифтерии: особенности морфологии и культуральных свойств. Токсинообразование. Дифтерия у человека. Иммунитет, способы его выявления. Лабораторная диагностика дифтерии. Носительство. Специфическая профилактика и терапия. Особенности эпидемиологии и специфической профилактики дифтерии на современном этапе.
106. Микобактерии: морфология и физиология, особенности окраски и культивирования, классификация. Характеристика условно-патогенных микобактерий, микобактериозы. Возбудитель лепры, его характеристика. Лабораторная диагностика, профилактика и лечение лепры.
107. Микобактерии туберкулёза: морфология, физиология, особенности окраски и культивирования. Лабораторная диагностика заболевания. Особенности иммунитета. Аллергические пробы. Препараты для профилактики и лечения.
108. Гемофильные бактерии: морфология, физиология, антигенная структура, факторы патогенности. Основные формы инфекций, вызываемых гемофильными бактериями. Диагностика гемофильной инфекции. Специфическое лечение и профилактика.
109. Характеристика возбудителя легионеллёза, особенности его экологии, пути передачи, формы инфекции, лабораторная диагностика, лечение и профилактика.
110. Возбудители актиномикоза: название по-латыни, морфология и физиология. Актиномикоз у человека. Микробиологическая диагностика. Препараты для диагностики и лечения.
111. Возбудитель чумы, его морфологические и культуральные особенности. Источники инфекции. Клинические формы чумы. Лабораторная диагностика заболевания. Особенности работы с чумным материалом. Специфическая профилактика и терапия. Работа отечественных исследователей.
112. Возбудитель сибирской язвы: морфология, физиология, факторы вирулентности, устойчивость во внешней среде. Механизм инфицирования и клинические формы заболевания. Лабораторная диагностика сибирской язвы. Препараты для лечения и профилактики.
113. Возбудитель туляремии: морфология, физиология. Туляремия у человека. Микробиологический диагноз туляремии. Препараты для лечения и профилактики.
114. Возбудители бруцеллёза: классификация, морфология, культуральные свойства, токсинообразование. Бруцеллёз у человека. Методы диагностики бруцеллёза. Препараты для лечения и профилактики.
115. Микроскопические грибы: классификация, морфология и физиология. Микозы. Дерматомикозы. Лабораторная диагностика. Противогрибковые препараты.
116. Дрожжеподобные грибы рода Candida: морфология и физиология, отличие от дрожжей. Роль в патологии человека. Условия, способствующие возникновению кандидозов. Лабораторная диагностика, лечение.
117. Патогенные спирохеты: классификация. Характеристика возбудителя сифилиса, невенерических трепонематозов. Патогенез сифилиса, периоды заболевания, методы лабораторной диагностики. Иммунитет, лечебные препараты, предупреждение заболевания.
118. Спирохеты возвратного тифа: морфология и физиология. Эпидемиология эпидемического и эндемического возвратных тифов. Патогенез приступов. Лабораторная диагностика. Работы Н.Н. Минха, И.И. Мечникова, Г.Н. Габричевского.
119. Возбудитель болезни Лайма (клещевого боррелиоза): морфология и физиология (особенности окраски, культивирования). Клинические проявления и стадии заболевания. Лабораторная диагностика. Препараты для лечения.
120. Лептоспиры: морфология и физиология. Источники инфекции и пути распространения. Лабораторная диагностика лептоспироза. Специфическая профилактика и лечение.
121. Микоплазмы: общая характеристика, классификация, особенности морфологии и культивирования. Виды, патогенные для человека, и их роль в поражении дыхательных путей и мочеполового тракта. Лабораторная диагностика. Лечение.
122. Риккетсии: общая характеристика, классификация. Возбудитель эпидемического сыпного тифа. Механизм заражения, патогенез заболевания. Болезнь Бриля–Цинссера. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика, лечение.
123. Возбудитель Ку-лихорадки: морфология и физиология. Источники и пути передачи, устойчивость во внешней среде. Лабораторная диагностика заболевания. Лечение и профилактика.
124. Хламидии: морфология и физиология. Виды, патогенные для человека, и заболевания, которые они вызывают. Возбудитель орнитоза. Лабораторная диагностика, лечебные препараты. Профилактика.
125. Возбудитель трахомы и негонорейных уретритов: морфология и физиология. Клинические формы заболевания, пути передачи. Лабораторная диагностика. Профилактика и лечебные препараты.
126. Ортомиксовирусы: структура вирионов вируса гриппа, классификация. Изменчивость вирусов и её механизмы. Иммунитет. Лабораторная диагностика. Препараты для лечения и специфической профилактики.
127. Парамиксовирусы: морфология и физиология, классификация. Характеристика вирусов парагриппа и вызываемых ими заболеваний. Вирус эпидемического паротита. Лабораторная диагностика. Препараты для лечения и специфической профилактики.
128. Вирус кори, его характеристика. Восприимчивость людей. Иммунитет. Специфическая профилактика. Семейство Herpesviridae: вирусы герпеса, цитомегалии, Эпштейн-Барра. Характеристика заболеваний, их лабораторная диагностика, лечение и профилактика.
129. Пикорнавирусы: классификация, структура вирионов и химический состав. Вирусы полиомиелита: характеристика, типы, патогенез заболевания. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика. Вирусы Коксаки, ЕСНО, характеристика вызываемых ими заболеваний у человека.
130. Вирус бешенства, его характеристика. Источники инфекции и механизм заражения, патогенез болезни. Лабораторная диагностика. Антирабический иммуноглобулин, антирабические вакцины: виды, тактика применения, механизм действия.
131. Тогавирусы: общая характеристика и классификация. Вирусы клещевого и японского энцефалитов. Природная очаговость. Источники и пути передачи. Лабораторная диагностика. Специфическая терапия и профилактика. Работы отечественных учёных.
132. Современная классификация возбудителей вирусных гепатитов. Вирус гепатита А: характеристика, классификация. Пути заражения и патогенез вирусного гепатита А, лабораторная диагностика, профилактика.
133. Вирус гепатита В: характеристика, классификация, антигенная структура. Источник заболевания, механизм передачи и патогенез вирусного гепатита В. Вирус гепатита D (дельта–инфекции): характеристика возбудителя, особенности клиники. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
134. Вирусные гепатиты С и Е: характеристика возбудителей, источник инфекции, механизм заражения, особенности течения заболевания. Лабораторная диагностика. Специфическая терапия. Меры предупреждения заражения. Вирусные гепатиты G и Т: характеристика возбудителей, эпидемиология, принципы диагностики.
135. Вирус геморрагической лихорадки с почечным синдромом: характеристика возбудителя, лабораторная диагностика, принципы лечения и профилактики. Вирусы лихорадок Марбург и Эбола: характеристика, вызываемые заболевания, ранняя лабораторная диагностика, лечение и профилактика.
136. Онкогенные вирусы, общая характеристика, классификация. Особенности взаимодействия онкогенных вирусов с клеткой. Вирусо-генетическая теория возникновения злокачественных опухолей Л.А. Зильбера. Доказательства возможной роли вирусов в этиологии лейкозов и злокачественных опухолей у человека.
137. Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), его характеристика. Пути передачи, группы риска. Особенности взаимодействия вируса с клетками и механизм формирования иммунодефицита. Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции. Профилактика и лечение ВИЧ-инфекции. Социальные, правовые, этические аспекты ВИЧ-инфекции.
138. Медленные вирусные инфекции – определения понятия. Основные критерии, отличающие медленные инфекции от других инфекционных заболеваний человека. Перечислите возбудителей медленных вирусных инфекций и вызываемые ими заболевания.
139. Прионы, их характеристика, отличия от других возбудителей. Прионные болезни человека и животных: механизм развития, виды, их клинические проявления, микробиологическая диагностика, профилактика.
Издательство Курского государственного медицинского университета
305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г.
Тираж 280 экз.
Отпечатано в типографии КГМУ.
305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
Заказ № 144.