Если у вас возникли сложности с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой - мы готовы помочь.
Предоплата всего
Подписываем
Тема: Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.
Цель: На основе знаний особенностей биологии вирусов обосновать способы их культивирования, индикации, идентификации и методы лабораторной диагностики, вызываемых ими заболеваний.
Знать:
Уметь:
Контрольные вопросы:
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):
Методические указания к выполнению исследовательского задания:
Вирусы, имеющие очень малые размеры, можно увидеть только в электронном микроскопе. Но вирусы размером более 200 мкм можно увидеть в обычном микроскопе при специальных методах обработки. Наиболее распространенным методом является серебрение по Морозову. Выявляемые при этом вирусы называются элементарными тельцами. Они выглядят в виде темно-коричневых, почти черных частиц на светло-коричневом фоне.
К числу крупных вирусов относится вирус натуральной оспы, элементарные тельца которого были впервые описаны Пашеном (элементарные частицы Пашена). Их обнаружение в содержимом везикул имеет диагностическое значение.
Вирусы являются абсолютными внутриклеточными паразитами и поэтому могут размножаться только в живых клетках. К числу наиболее распространенных способов их культивирования относится заражение куриного эмбриона. Заражение проводят на ХАО, в амниотическую или аллантоисную полость, либо в желточный мешок или сам эмбрион.
Перед заражением на ХАО 10-12-суточные эмбрионы просмотрите в овоскопе. Простым карандашом на скорлупе отметьте локализацию воздушного мешка, а сбоку - область без сосудов. Отмеченные места смажьте 1% раствором спиртовой настойки йода, а затем – спиртом. Толстой иглой осторожно прокалите скорлупу со стороны воздушной полости и сбоку. Через отверстие сбоку на ХАО нанесите 0,1 мл исследуемого материала и залейте проколы расплавленным карболизированным парафином. Зараженные эмбрионы поместите в термостат при Т-35-37 на 48-72 ч (продолжение исследования на следующем занятии).
Культуры клеток ткани наиболее часто используются для выделения вирусов из патологического материала и их последующего культивирования. Индикация вирусов осуществляется по тем изменениям, которые наблюдаются в клетках в результате репродукции в них вирусов. Это так называемое цитопатическое действие вируса (ЦПД). Поскольку тип ЦПД зависит от вида вируса, то это имеет диагностическое значение.
Различают следующие типы ЦПД вируса: деструкция, симласто- или синцитообразование и пролиферация. При сравнении клеточного монослоя, инфицированного вирусом, с незараженными клетками контроля отмечают изменения, которые характеризуют ЦПД вируса.
Основой цветной пробы, как метода индикации вируса, является нарушение метаболизма культуры клеток ткани в результате репродукции вируса. Рост клеток сопровождается накоплением кислых продуктов метаболизма, сдвигом рН в кислую сторону и изменением цвета индикатора фенолового красного с красного на желтый. Вирусы подавляют клеточный метаболизм и среда сохраняет первоначальный цвет. Критерием достоверности полученных результатов является контрольная незараженная культура клеток ткани.
Культуры клеток ткани, используемые для культивирования вируса, получают чаще всего из эмбриональных или опухолевых тканей. Различают первичные, перевиваемые и полуперевиваемые типы культур клеток.
Приготовление первичных культур включает следующие этапы:
Состав солевых растворов и питательных сред, применяемых в вирусологии, обеспечивает сохранение, рост и размножение in vitro эукариотических клеток.
Раствор Хенкса: набор неорганических солей, глюкоза, феноловый красный (обеспечивает сохранение рН, осмотическое давление и состав необходимых неорганических веществ).
Среда 199: содержит более 60 компонентов, в том числе 20 аминокислот, 17 витаминов, составные части нуклеиновых кислот, глюкозу, 8 минеральных солей и др.
Бычья сыворотка: вводится в состав питательных сред в качестве дополнительного источника белкового питания, витаминов, факторов роста.
Вопросы для самоконтроля:
Литература:
Учебники:
Лекции по микробиологии.
Тесты программированного контроля.